JP2021534154A - 脊髄性筋萎縮症のための併用療法 - Google Patents

Abstract

本出願の態様は、対象における脊髄性筋萎縮症を治療するための組成物及び方法に関する。具体的には、本出願は、生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）と、全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）（例えば、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）をコードする核酸分子を標的とし、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）と、の治療的組み合わせを提供する。

Description

関連出願
本出願は、「脊髄性筋萎縮症のための併用療法」と題する２０１８年８月１５日出願の米国仮出願第６２／７６４，８９３号、及び「脊髄性筋萎縮症のための併用療法」と題する２０１８年１２月２０日出願の米国仮出願第６２／７８３，１８９号の出願日の利益を米国特許法第１１９条（ｅ）の下で主張する。それぞれの出願の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療するための方法及び組成物に関する。

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、テロメア側に位置するＳＭＮ１が変異することによって誘発される神経筋疾患であり、ＳＭＮ１は、スプライソソームの生成に関与する遍在性発現タンパク質（生存運動ニューロン（ＳＭＮ））をコードする遺伝子である。

ＳＭＮ遺伝子産物は細胞内に存在しており、ＳＭＮが欠損すると、下位運動ニューロンに選択毒性が加わる結果、ニューロン脱落及び筋力低下が進行する。セントロメア側には重複相同遺伝子（ＳＭＮ２）が存在しているが、ＳＭＮ２は、全長ＳＭＮ転写物がごく少量しか産生しなくなるスプライス部位変異を保有しており、当該疾患の重症度はＳＭＮ２のコピー数によって変化する。ＳＭＮ２の保有コピー数が１〜２である患者は重篤な形態のＳＭＡを呈し、この形態のＳＭＡは、生後数ヶ月のうちに発症し、急速に進行して呼吸不全に至ることによって特徴付けられる。ＳＭＮ２の保有コピー数が３である患者が呈する当該疾患の形態は、一般に、軽症化したものであり、典型的には、６ヶ月齢以降に現れてくる。多くは歩行能力を得ることは決してないものの、進行して呼吸不全に至ることは稀であり、成人期まで生きることが多い。ＳＭＮ２の保有コピー数が４である患者は、筋力低下が徐々に生じるものの、成人期まで症状が現れないこともあり得る。

ＳＭＡの治療法はいくつか開発されてはいるものの、疾患重症度レベルが異なる患者を対象とする、脊髄性筋萎縮症に関与する運動ニューロン中の細胞内ＳＭＮ活性を上昇させる治療が依然として必要とされている。

いくつかの態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の治療に関し、この治療は、生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）をコードする組換え核酸と、全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるオリゴマー化合物とを、ＳＭＡを有する対象に併用投与することを伴う。いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、ウイルスベクター（例えば、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ））において提供される。いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である（この増加は、例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることが増加するようにＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングが調節されることによって生じる）。

いくつかの態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の治療に関し、この治療は、生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）をコードする組換え核酸と、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）をコードする核酸においてエクソンスキッピングを誘導するオリゴマー化合物とを、ＳＭＡを有する対象に併用投与することを伴う。いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、ウイルスベクター（例えば、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ））において提供される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２をコードする核酸においてエクソンスキッピングを誘導するオリゴマー化合物は、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡにおいてエクソンスキッピングを誘導するアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。

いくつかの態様では、組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）及びＡＳＯは、合剤化され、単一の組成物として対象に投与される。いくつかの態様では、組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）及びＡＳＯは、別々の組成物として提供されるが、対象に同時（例えば、同じ時刻または同じ期間（例えば、同じ医療訪問の間、例えば、同じ時間または同じ日の間））に投与される。いくつかの態様では、組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）及びＡＳＯは、別々の組成物として提供され、治療の過程において（例えば、１週間、２〜４週間、１ヶ月、１〜１２ヶ月、１年、２〜５年、またはそれを超える期間にわたる治療レジメンの間に）別々の医療訪問の間（例えば、異なる時刻、例えば、異なる日）に連続的に対象に投与される。いくつかの態様では、ＡＳＯは、組換え核酸の投与前及び／または投与後に投与される。いくつかの態様では、組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）及び／またはＡＳＯは、異なる頻度で投与される。いくつかの態様では、対象は、ａ）組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）及びＡＳＯの両方を含む組成物と、ｂ）組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）またはＡＳＯのいずれかを含む別の組成物と、を組み合わせて治療される。いくつかの態様では、２つ以上の異なる組換えＳＭＮ１核酸が対象に投与される。いくつかの態様では、２つ以上の異なるＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、異なる組換えＳＭＮ１核酸及び／または異なるＳＭＮ２ ＡＳＯが、異なる医療訪問の間に対象に投与される。

したがって、いくつかの態様では、ＳＭＡを有する対象（例えば、ヒト対象）におけるＳＭＡの治療方法は、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸（組換えＳＭＮ１遺伝子とも称される）と、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（ＳＭＮ２ ＡＳＯとも称される）と、を対象に投与することを伴う。いくつかの態様では、対象におけるＳＭＡの治療方法は、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯを、ＳＭＡを有する対象に有効量で投与することを含む。

いくつかの態様では、ＳＭＡを有する対象は、１つ以上のＳＭＡ症状（例えば、四肢筋萎縮、歩行困難もしくは歩行不能、呼吸困難、または他のＳＭＡ症状）を有する。いくつかの態様では、ＳＭＡを有する対象は、ゲノムＳＭＮ１遺伝子の変異アレルを２つ有する。いくつかの態様では、対象は、各ＳＭＮ１アレル中に欠失または機能喪失型点変異を有する。いくつかの態様では、対象は、ＳＭＮ１遺伝子変異についてホモ接合型である。いくつかの態様では、対象は、２つの異なるＳＭＮ１遺伝子変異についてヘテロ接合型である。

いくつかの態様では、対象は、ヒト対象である。いくつかの態様では、対象は、小児集団及び成人集団から選択される。いくつかの態様では、対象は、１８歳以上（例えば、１８歳またはそれを超える歳）である。いくつかの態様では、対象は、１８歳未満、１０歳未満、または６歳未満である。いくつかの態様では、対象は、約２週齢、約１ヶ月齢、約３ヶ月齢、約６ヶ月齢、約１歳、約２歳、約３歳、約４歳、または約５歳である。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、プロモーターに機能可能なように連結される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１遺伝子は、ヒトＳＭＮ１遺伝子である。いくつかの態様では、ＳＭＮ１遺伝子は、（例えば、ヒトにおける発現について）コドンが最適化される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸は、隣接ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む組換えＡＡＶゲノムである。いくつかの態様では、組換え核酸は、ＡＡＶ粒子内に含めて投与される。いくつかの態様では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶカプシドタンパク質（例えば、ＡＡＶ９カプシドタンパク質、ＡＡＶｒｈ１０カプシドタンパク質、ＡＡＶ８カプシドタンパク質）を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶｈｕ６８カプシドタンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングパターンを変化させる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン６またはイントロン７に相補的な配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン６に相補的な配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン７に相補的な配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１の配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヌシネルセンである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上の核酸塩基修飾または骨格修飾を含む。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター中のもの）は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ治療で以前に治療された対象に投与される（例えば、１回以上投与される）。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター中のもの）は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ治療での治療を現在受けている対象に投与される（例えば、１回以上投与される）。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター中のもの）及びＳＭＮ２ ＡＳＯの同時投与または連続投与を含む治療が、対象に対して開始される。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子を含むｒＡＡＶ（ＳＭＮ１ ｒＡＡＶとも称される）と、ＳＭＮ２ ＡＳＯとは、同じ時刻に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、同時に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、単一の組成物において一緒に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、別々に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、連続的に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、異なる頻度で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、１回投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、１年に１〜６回投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯが初回投与された後、ＳＭＮ２ ＡＳＯ単独の後続用量が２回以上投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶの追加用量が対象に１回以上投与される。いくつかの態様では、１回目の投与と２回目の投与との間を６ヶ月超または１年超開けてＳＭＮ１ ｒＡＡＶが対象に投与される。いくつかの態様では、１回目のＳＭＮ１ ｒＡＡＶ組成物及び２回目のＳＭＮ１ ｒＡＡＶ組成物は、同じｒＡＡＶカプシドタンパク質を含む。いくつかの態様では、１回目のＳＭＮ１ ｒＡＡＶ組成物及び２回目のＳＭＮ１ ｒＡＡＶ組成物は、異なるｒＡＡＶカプシドタンパク質を含む。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、１×１０^１０〜５×１０^１４ＧＣの用量で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、２×１０^１０〜２×１０^１４ＧＣの用量で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、３×１０^１３〜５×１０^１４ＧＣの用量で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、２×１０^１４ＧＣの用量で投与される。

いくつかの態様では、用量当たり合計５ｍｇ〜６０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計５ｍｇ〜２０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜５０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜４８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜３６ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計２８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量体積は、５ｍＬである。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象のくも膜下腔内に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の大槽内腔に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯの初回用量及び／または後続用量は、静脈内または筋肉内に投与される。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯの投与は、対象における細胞内ＳＭＮタンパク質レベルを上昇させる。いくつかの態様では、対象の頸髄部、胸髄部、及び腰髄部においてＳＭＮタンパク質レベルが上昇する（この上昇は、例えば、対象の脳及び／または脊髄における運動ニューロン中で生じる）。

したがって、いくつかの態様では、ＳＭＡを有する対象に対してＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯを含む組成物を有効量で投与することによって、当該対象におけるＳＭＮタンパク質の発現が増加する。いくつかの態様では、対象は、以前にＳＭＮ１ ｒＡＡＶを投与されたことがある。いくつかの態様では、対象は、以前にＳＭＮ２ ＡＳＯで治療されたことがある。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶで以前に治療された対象に対してＳＭＮ２ ＡＳＯを有効量で投与することによって、当該対象におけるＳＭＮタンパク質の発現が増加する。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯで以前に治療された対象に対してＳＭＮ１ ｒＡＡＶを有効量で投与することによって、当該対象におけるＳＭＮタンパク質の発現が増加する。いくつかの態様では、医薬組成物は、対象のＣＮＳまたはＣＳＦに投与される。いくつかの態様では、医薬組成物は、対象の静脈内に投与される。

いくつかの態様では、組成物は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯの両方を含む。いくつかの態様では、医薬組成物は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯの両方と、医薬的に許容可能な担体と、を含む。いくつかの態様では、医薬組成物は、それを必要とする対象に対して治療的に有効な量で投与される。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、単一の組成物においてそれら両方が一緒になったもの、または２つの別々の組成物としてのもの）は、くも膜下腔内経路を介して対象（例えば、ヒト対象）に１回以上併用投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、後頭下穿刺または他の適切な経路によって脊柱管、くも膜下腔、脳室、または腰椎のＣＳＦに１回以上併用投与される（この投与は、例えば、注射を介して、注入を介して、ポンプ及びカテーテルを使用して、または他の適切な手法を介して行われる）。いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、単一の組成物においてそれら両方が一緒になったもの、または２つの別々の組成物としてのもの）は、頭蓋内経路、脳室内経路、脳内経路、脳実質内経路、静脈内経路、または他の適切な経路を介して対象（例えば、ヒト対象）に１回以上併用投与される。同時または連続的に投与されるかどうかにかかわらず、当該技術分野で知られる任意の適切または妥当な手段によってＳＭＮ１ ｒＡＡｖ及びＳＭＮ２ ＡＳＯのそれぞれを投与することができ（例えば、くも膜下腔内、静脈内などに投与することができる）、同じまたは異なる手段によってＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及びＳＭＮ２ ＡＳＯを投与することができる（例えば、同じまたは異なる投与経路を介して投与することができる）。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ及び／またはＳＭＮ２ ＡＳＯは、生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）と関連する疾患または状態（脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）など）を治療するための薬剤の製造において使用される。

いくつかの態様では、本開示は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡの治療方法に関し、この方法は、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯで以前に治療された対象に対して、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶを含む組成物を有効量で投与することを含む。

いくつかの態様では、本開示は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡの治療方法に関し、この方法は、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶが以前に投与された対象に対して、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯを含む組成物を有効量で投与することを含む。

本開示の他の態様は、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶと、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる能力を有するＡＳＯと、を含む組成物に関する。いくつかの態様では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ９カプシドタンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヌシネルセンである。いくつかの態様では、組成物は、医薬組成物であり、医薬的に許容可能な担体を含む。

本発明の他の態様及び利点については、後述の本発明の詳細な説明から容易に明らかとなるであろう。

下記の図面は、本明細書の一部を形成し、本出願のある特定の態様をさらに示すために含められており、こうした態様については、こうした図面の１つ以上を、本明細書に示される特定の態様の詳細な説明と併せて参照することによって理解を深めることができる。

ＳＭＮ１をコードする組換え核酸と、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ヌシネルセン）と、を併用する治療を受けている対象では、より多くの数の運動ニューロン中のＳＭＮ活性のレベルが上昇することを示す。 ＳＭＮ１をコードする核酸の非限定的な例を模式的に表したものである。 全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチドの非限定的な例として、ヌシネルセンの化学構造を示す。 同上。 非ヒト霊長類において異なる様式の投与を行った後のｒＡＡＶの分布を示す。 ＳＭＮ１をコードする組換え核酸と、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチドとが、物理的及び生物学的な適合性を有することを示す。 ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶベクター中のもの）またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン、例えば、単回用量中のもの）のいずれかを投与すると、投薬後に、出生後日数（ＰＮＤ）８の時点で運動機能が部分的に救援され^＊＊、ＰＮＤ１６の時点で運動機能が完全に救援されることを示す。ＷＴ対照と比較したときの体重増加の遅延も示す。Ａは、ＡＳＯ（ヌシネルセン）の投与から８日後及び１６日後の４つの別々の群の立ち直り反射（ＲＲ）を示す一連のグラフである。Ｂは、ＡＳＯ（ヌシネルセン）の投与から８日後及び１６日後の４つの別々の群の体重を示す一連のグラフである。ＲＲ（ＰＮＤ７〜１６）及び体重の部分的な救援は、この前臨床モデルにおいて併用療法を行えば追加の恩恵が得られるいうきっかけを与えるものである。 ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクターにて行うもの）とＡＳＯ（ヌシネルセン）との併用治療に対するプライマリーエンドポイントとして体重及びＲＲを用いた１回目の試験の結果を示す。体重変化を（日数で）経時的に示すグラフである。 ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクターにて行うもの）とＡＳＯ（ヌシネルセン）との併用治療に対するプライマリーエンドポイントとして体重及びＲＲを用いた１回目の試験の結果を示す。ＲＲの変化を（日数で）経時的に示すグラフである。 ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクターにて行うもの）とＡＳＯ（ヌシネルセン）との併用治療に対するプライマリーエンドポイントとして体重及びＲＲを用いた１回目の試験の結果を示す。３つの試験群についての条件の概要を示すチャートである。 ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクターにて行うもの）とＡＳＯ（ヌシネルセン）との併用治療に対するプライマリーエンドポイントとして体重及びＲＲを用いた２回目の試験の結果を示す。３つの試験群についての条件の概要を示すチャートである。 ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクターにて行うもの）とＡＳＯ（ヌシネルセン）との併用治療に対するプライマリーエンドポイントとして体重及びＲＲを用いた２回目の試験の結果を示す。体重変化を（日数で）経時的に示すグラフである。 ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクターにて行うもの）とＡＳＯ（ヌシネルセン）との併用治療に対するプライマリーエンドポイントとして体重及びＲＲを用いた２回目の試験の結果を示す。ＲＲの変化を（日数で）経時的に示すグラフである。 ＰＮＤ７〜ＰＮＤ１３における体重の変化％を比較したものを示す。Ａは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇでの体重の変化％を示す。Ｂは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇでの体重の変化％を示す。 ＰＮＤ７〜ＰＮＤ１３におけるＲＲの変化％を比較したものを示す。Ａは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇでのＲＲの変化％を示す。Ｂは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇでのＲＲの変化％を示す。 併用療法に対する神経細胞及び非神経細胞における相補性を示す。

本出願は、対象（例えば、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有するヒト対象）におけるＳＭＡを治療するための組成物及び方法に関する。いくつかの態様では、治療は、ＳＭＮ１遺伝子を発現する組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中のもの）と、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）と、の両方を、ＳＭＡを有する対象に投与することを含む。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１を発現する組換え核酸と、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）と、を併用すると、いくつかの運動ニューロン中の細胞内ＳＭＮタンパク質レベルが増進し、さらには、組換え核酸またはＡＳＯのいずれかでの単独治療と比較して細胞内生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質レベルが上昇する運動ニューロンの数も増加し得る。このことは、図１及び図１１に示される。ＳＭＮ１を発現する組換え核酸と、ＳＭＮ２中の全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）と、を併用投与するための方法及び組成物は、ＳＭＡを有する対象において治療的に有効なレベルのＳＭＮタンパク質を生成させることに加えて、疾患重症度のレベルが異なる対象を治療することにも有用であり得る。

脊髄性筋萎縮症または近位性脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、脊髄運動ニューロンが脱落することによって特徴付けられる遺伝性の神経変性障害である。ＳＭＡは、早期に発症する常染色体劣性疾患であり、現在のところ、幼児における死因の第１位である。ＳＭＡの重症度は、患者によって異なることから、発症年齢及び運動発達マイルストーンに応じて異なる型に分類されている。発症が出生前であり、重度の関節性拘縮、顔面神経麻痺、及び呼吸不全を伴うことを反映するにはＳＭＡ０を指定することが提唱されている。ＳＭＡの出生後形態には、３つの型が指定されている。Ｉ型ＳＭＡ（ウェルドニッヒ・ホフマン病とも呼ばれる）は、発症時期が出生時または生後６ヶ月以内である最も重篤な形態であり、典型的には、２年以内に死に至るものである。Ｉ型ＳＭＡを有する小児は、座ることまたは歩行することができず、重篤な呼吸器障害を有する。ＩＩ型ＳＭＡは、発症が出生後２年以内である中間形態である。ＩＩ型ＳＭＡを有する小児は、座ることはできるが、立つことまたは歩くことはできない。ＩＩＩ型（クーゲルベルグ・ウェランダー病とも呼ばれる）は、１８ヶ月齢〜２歳以降に始まり（Ｌｅｆｅｂｖｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９８，７，１５３１−１５３６）、通常、慢性的に進行する。ＩＩＩ型ＳＭＡを有する小児は、少なくとも幼児期には介助がなくても立つこと及び歩行することができる。成人形態（ＩＶ型）は、最も穏やかな形態のＳＭＡであり、その発症は３０歳以降であり、症例はほとんど報告されていない。ＩＩＩ型ＳＭＡ及びＩＶ型ＳＭＡは、遅発型ＳＭＡとしても知られている。

生存運動ニューロン遺伝子１（ＳＭＮ１）の両コピーの喪失に起因して生じることがＳＭＡの分子的機序であり、ＳＭＮ１は、テロメア側ＳＭＮ（ｓｎＲＮＰの生成及び再利用に関与すると考えられる多タンパク質複合体の一部であるタンパク質）としても知られ得る。ほぼ同一の遺伝子であるＳＭＮ２（セントロメア側ＳＭＮとしても知られ得る）は、染色体５ｑ１３上の重複領域中に存在しており、ＳＭＮ２によって疾患重症度が変化する。正常なＳＭＮ１遺伝子が発現すると、それだけで生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質の発現が生じる。ＳＭＮ１及びＳＭＮ２は、同じタンパク質をコードする能力を潜在的には有するものの、ＳＭＮ２は、翻訳的にサイレントな変異をエクソン７の＋６位に含んでおり、その結果、ＳＭＮ２転写物中にエクソン７が含まれる効率が不十分なものとなる。したがって、所定形態のＳＭＮ２は、エクソン７を欠いた短縮バージョンであり、この短縮バージョンは、不安定かつ不活性である（Ｃａｒｔｅｇｎｉ ａｎｄ Ｋｒａｉｎｅｒ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，２００２，３０，３７７−３８４）。ＳＭＮ２遺伝子の発現で生じるものは、約１０〜２０％がＳＭＮタンパク質であり、８０〜９０％が不安定／非機能性のＳＭＮデルタ７タンパク質である。ＳＭＮタンパク質は、スプライソソームの構築においてよく確立された役割を果たしており、ニューロンの軸索及び神経終末におけるｍＲＮＡの輸送も媒介し得る。

ＳＭＮ１遺伝子の機能性コピーの両方をホモ接合性に喪失することによってＳＭＡが誘発されるが、ＳＭＮ２遺伝子は、ＳＭＮ１のものと同じタンパク質をコードし、それ故に、ＳＭＡ患者の遺伝子異常を克服する潜在力を有する。ＳＭＮ２は、翻訳的にサイレントな変異（Ｃ→Ｔ）をエクソン７の＋６位に含んでおり、その結果、ＳＭＮ２転写物中にエクソン７が含まれる効率が不十分なものとなる。それ故に、所定の形態のＳＭＮ２は、エクソン７を欠いたものであり、不安定かつ不活性である。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮタンパク質の細胞内発現を促進するための組換えＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸と、エクソン７を含む細胞ＳＭＮ２転写物のパーセントが上昇し、それによって細胞ＳＭＮ２転写物からの全長ＳＭＮタンパク質の発現が増加するように細胞内ＳＭＮ２スプライシングを調節するＡＳＯと、の両方と運動ニューロンを接触させることによって細胞内ＳＭＮタンパク質レベルが上昇し得る。いくつかの態様では、ＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸（本明細書では組換えＳＭＮ１遺伝子とも称される）と、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの細胞内レベルを、例えばＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進することによって、増加させるＡＳＯ）と、の両方を併用して治療が行われる。いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの細胞内レベルを上昇させることは、ＳＭＡの複数の側面を標的とする上で有用であると共に、ＳＭＡの型が異なる患者（ＳＭＮ２遺伝子のゲノムコピー数が異なる患者を含む）を含めて、疾患重症度が異なる幅広い範囲の対象の治療に有用であり得る。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶ）及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、同時に投与される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶ）及びＳＭＮ２ ＡＳＯは、連続的に投与される。

いくつかの態様では、併用治療は、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの両方を合剤化して一緒に含めた組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、併用治療は、組換えＳＭＮ１遺伝子を含む第１の組成物と、ＳＭＮ２ ＡＳＯを含む別の第２の組成物と、を投与することを含む。いくつかの態様では、第１の組成物及び第２の組成物は、同時（同じ医療訪問（例えば、対象が治療を受ける病院、診療所、または他の医療施設への同じ訪問）の間の同じ時刻または異なる時刻）に投与される。いくつかの態様では、第１の組成物及び第２の組成物は、対象に連続的に投与され、この連続投与は、例えば、第１の組成物または第２の組成物のいずれかが対象に投与される連続的な医療訪問の間に行われる。

したがって、いくつかの態様では、第１の組成物及び第２の組成物は、異なる時刻（例えば、１日の異なる時刻、同じ週の異なる日、または異なる週）に別々に対象に投与される。いくつかの態様では、第１の組成物及び第２の組成物は、異なる頻度で投与される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子を含む組成物の投与頻度は、ＳＭＮ２ ＡＳＯを含む組成物のものと比較して低い。

したがって、いくつかの態様では、対象がＳＭＮ２ ＡＳＯで治療される前に組換えＳＭＮ１遺伝子が対象に投与される。一方で、他の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子の投与前に対象がＳＭＮ２ ＡＳＯで治療される。

いくつかの態様では、対象は、ｉ）組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯを合剤化して一緒に含めた医薬組成物と、ｉｉ）組換えＳＭＮ１遺伝子またはＳＭＮ２ ＡＳＯのいずれかを含む別の医薬組成物と、の両方で治療され得る。例えば、いくつかの態様では、対象は、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの両方を含む組成物で最初に治療され、その後に、組換えＳＭＮ１遺伝子またはＳＭＮ２ ＡＳＯのいずれかを含む組成物で治療される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの両方を含む組成物の２回以上の用量と、組換えＳＭＮ１遺伝子またはＳＭＮ２ ＡＳＯのいずれかを含む組成物の２回以上の別用量と、が対象に投与され得る。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが初回投与された後、ＳＭＮ２ ＡＳＯ単独の後続用量が１回、２回、またはそれを超える回数投与される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが初回投与された後、組換えＳＭＮ１遺伝子の後続用量が１回、２回、またはそれを超える回数投与される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子またはＳＭＮ２ ＡＳＯのいずれかが単独で初回投与された後、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが投与される。

組換え核酸及びＡＳＯの両方を含む組成物と、組換え核酸またはＡＳＯのいずれかを含む組成物と、の投与順序及び投与頻度は、個々の治療に合うように調節され得る。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター中のもの）及びＳＭＮ２ ＡＳＯの両方を含む医薬組成物、または異なる用量の組換えＳＭＮ１遺伝子またはＳＭＮ２ ＡＳＯを含む医薬組成物が提供される。

インビトロでＳＭＮの発現レベル及び活性レベルを測定するためのアッセイは、さまざまなものが存在する。例えば、上で引用したＴａｎｇｕｙ ｅｔ ａｌ，２０１５を参照のこと。本明細書に記載の方法は、ＳＭＡまたはその症状を治療するための任意の他の治療とも併用され得る。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｃａｒｅ ｉｎ Ｓｐｉｎａｌ Ｍｕｓｃｕｌａｒ Ａｔｒｏｐｙ（この文献では、ＳＭＡの現在の標準治療について考察されている）及びｈｔｔｐ：／／ｗｗ ｖ．ｎｃｂｉ．ｎｉｍ．ｎｉｈ．ｇ ｖ／３／４ｏｃ ＾ｓ／ ＩＢ １３５２／も併せて参照のこと。例えば、ＳＭＡにおいて栄養摂取が懸案事項である場合、胃瘻管を留置することが適切である。呼吸機能の悪化に伴って、気管切開術または非侵襲的な呼吸補助が提供される。睡眠呼吸障害は、連続的な陽性気道圧を夜間に適用することで治療され得る。ＩＩ型ＳＭＡを有する個体及びＩＩＩ型ＳＭＡを有する個体における脊柱側弯の手術については、努力性肺活量が３０％〜４０％を超えるのであれば、安全に実施することができる。電動車椅子及び他の機器によって生活の質が改善することもあり得る。米国特許第８，２１１，６３１号（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）も併せて参照のこと。

ＳＭＮ１をコードする組換え核酸
いくつかの態様では、ＳＭＡを治療するための併用療法は、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ウイルスベクター（ｒＡＡＶなど）において投与されるもの）を含む。いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸（本明細書では、組換えＳＭＮ１遺伝子とも称される）は、プロモーター（例えば、運動ニューロン中で活性なプロモーター）に機能可能なように連結されたＳＭＮ１遺伝子を含む。いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、非ウイルスベクター（例えば、非ウイルスプラスミド）において提供される。一方で、いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、組換えウイルスベクター（例えば、ウイルスカプシド内にパッケージングされた組換えウイルスゲノム）において提供される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ゲノムにおいて提供され、ＡＡＶカプシド粒子内にパッケージングされる。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、ウイルスベクターにおいて対象に投与される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、隣接ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む組換えＡＡＶゲノムにおいて投与される。したがって、いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする遺伝子を含む組換えウイルス粒子（例えば、ｒＡＡＶ粒子）が、ＳＭＮ２ ＡＳＯと共に対象に投与される。

図２は、プロモーターに機能可能なように連結されたＳＭＮ１遺伝子を含む組換えウイルスゲノムの非限定的な例を提供する。図２は、ＡＡＶ ＩＴＲと隣接するＳＭＮ１遺伝子を示す。このＳＭＮ１遺伝子は、ヒトＳＭＮ１コドン最適化ＳＭＮ１オープンリーディングフレームを含み、ＣＢ７プロモーター（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと一緒になったニワトリベータアクチンプロモーター）に機能可能なように連結されている。この組換えＡＡＶゲノムは、ニワトリベータ−アクチンイントロン及びウサギベータ−グロビンポリＡシグナルも含む。図２に示されるｒＡＡＶゲノムは、非限定的なものであり、代替のＳＭＮ１コード配列、プロモーター、及び他の調節エレメントも使用され得る。

いくつかの態様では、ｒＡＡＶゲノムは、ウイルスカプシド内にパッケージングされる。いくつかの態様では、カプシドタンパク質は、ｈｕ６８血清型カプシドタンパク質である。一方で、他の血清型の他のカプシドタンパク質も使用され得る。

組換えＳＭＮ１遺伝子のこうした態様及び他の態様については、後続のパラグラフにより詳細に記載される。

ＳＭＮ１コード配列：
いくつかの態様では、野生型ヒトＳＭＮタンパク質をコードするコード配列（例えば、ＳＭＮ１ ｃＤＮＡ配列）が提供される。ヒトＳＭＮ１をコードする核酸配列は、当該技術分野で知られている。例えば、ヒトＳＭＮ１の核酸配列の非限定的な例については、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１２９７７１５．１、同ＮＭ＿０００３４４．３、同ＮＭ＿０２２８７４．２、同ＤＱ８９４０９５、同ＮＭ−０００３４４、同ＮＭ−０２２８７４、及び同ＢＣ０６２７２３を参照のこと。野生型ヒトＳＭＮタンパク質のアミノ酸配列の非限定的な例は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｑ１６６３７．１にて提供される。ＳＭＮ１コード配列が記載されている他の刊行物については、例えば、ＷＯ２０１０１２９０２１Ａ１及びＷＯ２００９１５１５４６Ａ２（これらの文献の内容は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。

いくつかの態様では、機能性ＳＭＮタンパク質をコードするコード配列が提供される。いくつかの態様では、機能性ＳＭＮ１のアミノ酸配列は、ヒトＳＭＮ１タンパク質のものであるか、またはそれと９５％の同一性を共有する配列である。

いくつかの態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列が提供される。いくつかの態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、全長天然ｈＳＭＮ１コード配列との同一性が約８０％未満であり、好ましくは、約７５％またはそれ未満である。いくつかの態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、ＡＡＶ介在性の送達（例えば、ｒＡＡＶ粒子を使用する送達）が行われた後、天然ｈＳＭＮ１と比較して翻訳率が改善することによって特徴付けられる。いくつかの態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列が全長天然ｈＳＭＮ１コード配列と共有する同一性は、約８０％未満、約７９％未満、約７８％未満、約７７％未満、約７６％未満、約７５％未満、約７４％未満、約７３％未満、約７２％未満、約７１％未満、約７０％未満、約６９％未満、約６８％未満、約６７％未満、約６６％未満、約６５％未満、約６４％未満、約６３％未満、約６２％未満、約６１％、またはそれ未満である。

「同一性パーセント（％）」、「配列同一性」、「配列同一性パーセント」、または「パーセント同一」という用語は、核酸配列との関連では、対応するようにアライメントされると２つの配列中に一致する残基が存在することを指す。配列同一性が比較される長さは、ゲノムの全長にわたり得、遺伝子コード配列の全長、または少なくとも約５００〜５０００ヌクレオチドの断片であることが望まれる。一方で、より小さな断片（例えば、少なくとも約９ヌクレオチドのもの、通常、少なくとも約２０〜２４ヌクレオチドのもの、少なくとも約２８〜３２ヌクレオチドのもの、少なくとも約３６ヌクレオチドのもの、またはそれを超えるヌクレオチド数のもの）の間での同一性も望まれ得る。

「アライメントされた」配列または「アライメント」は、複数の核酸配列またはタンパク質（アミノ酸）配列を参照配列と比較して、多くの場合、塩基またはアミノ酸の欠失または追加に対する補正を含めることを指す。

アライメントは、さまざまな公的または商業的に利用可能な複数の配列アライメントプログラムのいずれかを使用して実施され得る。配列アライメントプログラムは、アミノ酸配列に対して利用可能であり、例えば、「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ」プログラム、「ＭＡＰ」プログラム、「ＰＩＭＡ」プログラム、「ＭＳＡ」プログラム、「ＢＬＯＣＫＭＡＫＥＲ」プログラム、「ＭＥＭＥ」プログラム、及び「Ｍａｔｃｈ−Ｂｏｘ」プログラムが利用可能である。一般に、こうしたプログラムのいずれもデフォルト設定で使用されるが、当業者なら必要に応じてこうした設定を変更することができる。あるいは、当業者なら、こうした参照アルゴリズム及び参照プログラムによって提供されるものと同じレベルの同一性またはアライメントを少なくとも提供する別のアルゴリズムまたはコンピュータープログラムを利用することができる。例えば、Ｊ．Ｄ．Ｔｈｏｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，“Ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”，２７（１３）：２６８２−２６９０（１９９９）を参照のこと。

核酸配列に対しても複数の配列アライメントプログラムが利用可能である。そのようなプログラムの例としては、「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ」、「ＣＡＰ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｓｓｅｍｂｌｙ」、「ＢＬＡＳＴ」、「ＭＡＰ」、及び「ＭＥＭＥ」が挙げられ、これらのプログラムは、インターネット上のウェブサーバーを介してアクセス可能である。そのようなプログラムの供給元は、他にも当業者に知られている。あるいは、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩユーティリティも使用される。ヌクレオチド配列同一性の測定に使用し得るアルゴリズムも当該技術分野では多く知られており、そうしたアルゴリズムには、上記のプログラムに含まれるものが含まれる。別の例として、Ｆａｓｔａ（商標）（ＧＣＧバージョン６．１に含まれるプログラム）を使用してポリヌクレオチド配列が比較され得る。Ｆａｓｔａ（商標）では、問い合わせ配列と検索配列との間で最良のオーバーラップが得られる領域のアライメント及び配列同一性パーセントが提供される。例えば、核酸配列間の配列同一性パーセントは、Ｆａｓｔａ（商標）を使用して決定され、この決定では、ＧＣＧバージョン６．１（参照によって本明細書に組み込まれる）において提供されるＦａｓｔａ（商標）のデフォルトパラメーター（文字列長６、及びスコア付け行例のためのＮＯＰ ＡＭ係数）が用いられ得る。

いくつかの態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、対象種における発現について最適化されたコドン最適化配列である。本明細書で使用される「対象」は哺乳類であり、こうした哺乳類は、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、雌ウシ、ブタ、または非ヒト霊長類（サル、チンパンジー、ヒヒ、もしくはゴリラなど）である。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。したがって、いくつかの態様では、ＳＭＮ１コード配列は、ヒトにおける発現についてコドンが最適化されたものである。

コドン最適化コード領域は、さまざまな異なる方法によって設計され得る。この最適化は、オンラインで利用可能な方法（例えば、ＧｅｎｅＡｒｔ）、公開された方法、またはコドン最適化サービスを提供する企業（例えば、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ））を使用して実施され得る。コドン最適化方法の１つは、例えば、米国国際特許公開公報第ＷＯ２０１５／０１２９２４号に記載されており、当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。例えば、米国特許公開公報第２０１４／００３２１８６号及び米国特許公開公報第２００６／０１３６１８４号も併せて参照のこと。

いくつかの態様では、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の全長が改変される。一方で、いくつかの態様では、ＯＲＦの断片のみが改変される。こうした方法のうちの１つを使用することによって、任意の所与のポリペプチド配列に頻度を適用し、ポリペプチドをコードするコドン最適化コード領域の核酸断片を得ることができる。したがって、いくつかの態様では、コドン最適化ＳＭＮ１コード配列（例えば、コドン最適化ｈＳＭＮ１ ＯＲＦ）が使用される。いくつかの態様では、ＳＭＮ１コード配列の１つ以上の部分（例えば、最大でＯＲＦ全体）のコドンが、ヒトにおける発現について最適化される。

コドンに対する実際の変更の実施、または本明細書に記載されるように設計されるコドン最適化コード領域の合成については、多くの選択肢が利用可能である。そのような改変または合成は、当業者によく知られる標準的及び日常的な分子生物学的操作を使用して実施され得る。１つの手法では、長さが各８０〜９０ヌクレオチドであり、所望の配列の長さをカバーする一連の相補的オリゴヌクレオチド対が標準的な方法によって合成される。こうしたオリゴヌクレオチド対は、突出末端を含む８０〜９０塩基対の二本鎖断片をアニーリング時に形成するように合成される。例えば、対になる各オリゴヌクレオチドは、対になるもう一方のオリゴヌクレオチドに相補的な領域を超えて３塩基、４塩基、５塩基、６塩基、７塩基、８塩基、９塩基、１０塩基、またはそれを超える数の塩基分伸長するように合成される。各オリゴヌクレオチド対の一本鎖末端は、別のオリゴヌクレオチド対の一本鎖末端とアニーリングするように設計される。こうしたオリゴヌクレオチド対はアニーリング可能であり、次に、こうした二本鎖断片のうちの約５〜６つが、突出一本鎖末端を介して一緒にアニーリング可能であり、その後、それらの二本鎖断片は一緒にライゲーションされ、標準的な細菌クローニングベクター（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆから利用可能なＴＯＰＯ（登録商標）ベクター）にクローニングされる。次に、標準的な方法によってコンストラクトの配列決定が行われる。塩基対数８０〜９０の断片である断片５〜６つが一緒にライゲーションされたもの（すなわち、約５００塩基対の断片）からなるこうしたコンストラクトがいくつか調製され、その結果、所望の配列全体が一連のプラスミドコンストラクト中に存在することになる。次に、こうしたプラスミドの挿入断片が適切な制限酵素で切断され、一緒にライゲーションされることで最終コンストラクトが形成される。次に、この最終コンストラクトは、標準的な細菌クローニングベクターにクローニングされ、配列決定される。追加または代替の方法（例えば、商業的に利用可能な遺伝子合成サービスを含む）も使用され得る。

いくつかの態様では、ＳＭＮｌ ｃＤＮＡ配列は、当該技術分野で知られる手法を使用してインビトロで合成的に生成され得る。例えば、長鎖ＤＮＡ配列のＰＣＲベースの精密合成（ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）（ＰＡＳ）法を利用することができ、この方法については、Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ，ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌｏｎｇ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １，７９１−７９７（２００６）によって記載されている。二重非対称ＰＣＲ法とオーバーラップ伸長ＰＣＲ法とを組み合わせた方法については、Ｙｏｕｎｇ ａｎｄ Ｄｏｎｇ，Ｔｗｏ−ｓｔｅｐ ｔｏｔａｌ ｇｅｎｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００４；３２（７）：ｅ５９によって記載されている。Ｇｏｒｄｅｅｖａ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ｇｅｎｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｃｏｄｏｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．２０１０ Ｍａｙ；８１（２）：１４７−５２．Ｅｐｕｂ ２０１０ Ｍａｒ １０も併せて参照のこと。オリゴヌクレオチド合成及び遺伝子合成に関する下記の特許も併せて参照のこと。Ｇｅｎｅ Ｓｅｑ．２０１２ Ａｐｒ；６（ｌ）：１０−２１、ＵＳ８００８００５、及びＵＳ７９８５５６５。これらの文書はそれぞれ、参照によって本明細書に組み込まれる。さらに、ＰＣＲを介してＤＮＡを生成させるためのキット及びプロトコールが商業的に利用可能である。こうしたものには、ポリメラーゼを使用するものが含まれ、こうしたポリメラーゼには、限定されないが、Ｔａｑポリメラーゼ、ＯｎｅＴａｑ（登録商標）（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、Ｑ５（登録商標）Ｈｉｇｈ−Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、及びＧｏＴａｑ（登録商標）Ｇ２ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）が含まれる。本明細書に記載のｈＳＭＮ配列を含むプラスミドをトランスフェクションした細胞からもＤＮＡを得ることができる。キット及びプロトコールは知られており、商業的にも利用可能であり、こうしたキット及びプロトコールには、限定されないが、ＱＩＡＧＥＮプラスミドキット、Ｃｈａｒｇｅｓｗｉｔｃｈ（登録商標）Ｐｒｏ Ｆｉｌｔｅｒ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及びＧｅｎＥｌｕｔｅ（商標）Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔｓ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）が含まれる。本明細書で有用な他の手法には、熱サイクルが不要になる配列特異的等温増幅法が含まれる。こうした方法では、典型的には、Ｂｓｔ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，Ｌａｒｇｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）のような鎖置換ＤＮＡポリメラーゼを熱の代わりに用いて二本鎖ＤＮＡが分離される。逆転写酵素（ＲＴ）（ＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ）を使用する増幅によってＲＮＡ分子からＤＮＡを生成させることもできる。ＲＴは、元のＲＮＡテンプレートに相補的なＤＮＡの鎖を重合生成させ、こうして生じるＤＮＡの鎖はｃＤＮＡと称される。次に、このｃＤＮＡは、上に概要が示されるＰＣＲ法または等温法によってさらに増幅され得る。限定されないが、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、ＧＥＮＥＷＩＺ（登録商標）、ＧｅｎｅＡｒｔ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及びＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを含めて、企業から商業的にカスタムＤＮＡを得ることもできる。

「機能性ＳＭＮ１」は、天然ＳＭＮタンパク質をコードする遺伝子が意図されるか、あるいは天然生存運動ニューロンタンパク質の生物学的活性レベルの少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、もしくは約１００％、または１００％超を与える別のＳＭＮタンパク質をコードする遺伝子が意図されるか、あるいは疾患と関連しないその天然バリアントまたは多型含有体をコードする遺伝子が意図される。さらに、ＳＭＮｌホモログであるＳＭＮ２もＳＭＮタンパク質をコードするが、プロセシングによって機能性タンパク質を生成させる効率が低い。機能性ｈＳＭＮｌ遺伝子を有さない対象が示すＳＭＡの程度は、ＳＭＮ２のコピー数によって異なる。したがって、対象によっては、ＳＭＮタンパク質が示す生物学的活性が、天然ＳＭＮタンパク質の生物学的活性の１００％未満となり得る。

いくつかの態様では、そのような機能性ＳＭＮは、アミノ酸レベルでの天然タンパク質との同一性が約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％である配列を有する。そのような機能性ＳＭＮタンパク質は、天然の多型も含み得る。同一性は、配列のアライメントをとり、当該技術分野で知られるか、または商業的に利用可能なさまざまなアルゴリズム及び／またはコンピュータープログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＥｘＰＡＳｙ、ＣｌｕｓｔａｌＯ、ＦＡＳＴＡ（例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが使用される））を使用することによって決定され得る。

同一性パーセントは、タンパク質の全長、ポリペプチドの全長、約３２アミノ酸、約３３０アミノ酸、もしくはそのペプチド断片、にわたるアミノ酸配列、または対応する核酸配列コード配列について容易に決定され得る。適切なアミノ酸断片は、少なくともアミノ酸数約８の長さのものであり得、最大でアミノ酸数約７００のものであり得る。一般に、２つの異なる配列の間の「同一性」、「相同性」、または「類似性」について言及される場合、「同一性」、「相同性」、または「類似性」は、「アライメントされた」配列に関して決定される。

いくつかの態様では、本明細書に記載の改変ＳＭＮ１（例えば、ｈＳＭＮ１）遺伝子は、ウイルスベクターの生成に有用であり、及び／または宿主細胞への送達に有用な適切な遺伝エレメント（例えば、ベクター）（例えば、ネイキッドＤＮＡ、ファージ、トランスポゾン、コスミド、エピソームなど）へと操作導入され、この遺伝エレメントによって、その保有ＳＭＮ１配列が導入される。選択されるベクターは、トランスフェクション、電気穿孔、リポソーム送達、膜融合手法、ＤＮＡ被覆ペレットの高速射出、ウイルス感染、及び原形質融合を含めて、任意の適切な方法によって送達され得る。そのようなコンストラクトの調製に使用される方法は、核酸操作の分野の当業者に知られており、そうした方法には、遺伝子操作、組換え操作、及び合成手法が含まれる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと。

いくつかの態様では、ＳＭＮ１（例えば、ｈＳＭＮ１）核酸配列（複数可）を含む発現カセットが提供される。本明細書で使用される「発現カセット」は、プロモーターに機能可能なように連結されたＳＭＮ１配列を含み、さらに他の調節配列も含み得る核酸分子を指す。いくつかの態様では、発現カセットは、ウイルスベクターのカプシド（例えば、ウイルス粒子）内にパッケージングされる。典型的には、ウイルスベクターを生成させるためのそのような発現カセットは、本明細書に記載のＳＭＮ１（例えば、ｈＳＭＮ１）配列を含み、この配列は、ウイルスゲノムのパッケージングシグナル及び他の発現制御配列（本明細書に記載のものなど）と隣接する。例えば、ＡＡＶウイルスベクターについては、パッケージングシグナルは、５’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）及び３’ＩＴＲである。ＩＴＲが発現カセットと一緒になったものは、ＡＡＶカプシドにパッケージングされると、ｒＡＡＶ粒子またはカプシド内に含まれる「組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ゲノム」または「ベクターゲノム」と本明細書で称される。

「発現」という用語は、その広い意味において本明細書で使用され、ＲＮＡの産生またはＲＮＡ及びタンパク質の産生を含む。ＲＮＡに関しては、「発現」または「翻訳」という用語は、具体的には、ペプチドまたはタンパク質の産生に関する。発現は、一過性のものであり得るか、または安定的なものであり得る。

「翻訳」という用語は、本発明との関連では、ｍＲＮＡ鎖がアミノ酸配列の構築を制御してタンパク質またはペプチドを生成させるリボソームでのプロセスに関する。

プロモーター及び調節エレメント：
いくつかの態様では、発現コンストラクトは、ＳＭＮ１遺伝子のコード配列の発現を促進する配列（例えば、コード配列に機能可能なように連結された発現制御配列）を含む１つ以上の領域を含む。発現制御配列の例としては、限定されないが、プロモーター、インスレーター、サイレンサー、応答エレメント、イントロン、エンハンサー、開始部位、終結シグナル、及びポリ（Ａ）尾部が挙げられる。本明細書では、そのような制御配列の任意の組み合わせ（例えば、プロモーター及びエンハンサー）が企図される。

いくつかの態様では、発現カセットは、発現制御配列の一部としてプロモーター配列を含み、このプロモーター配列は、例えば、５’ＩＴＲ配列とＳＭＮ１コード配列との間に位置する。本明細書に記載の例示のプラスミド及びベクターでは、ＣＭＶ前初期エンハンサー（ＣＭＶ ＩＥ）と一緒になったユビキタスニワトリβ−アクチンプロモーター（ＣＢ）が使用される。あるいは、他のニューロン特異的プロモーターが使用され得る（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｃｈｉｎｏｏｋ．ｕｏｒｅｇｏｎ．ｅｄｕ／ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ．ｈｔｍｌにてアクセス可能なＬｏｃｋｅｒｙ Ｌａｂニューロン特異的プロモーターデータベースを参照のこと）。そのようなニューロン特異的プロモーターには、限定されないが、シナプシンＩ（ＳＹＮ）、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ、チューブリンアルファＩ、ニューロン特異的エノラーゼ、及び血小板由来増殖因子ベータ鎖プロモーターが含まれる。Ｈｉｏｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｊｕｎｅ ２００７，１４（ｌ ｌ）：８７２−８２（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。他のニューロン特異的プロモーターには、６７ｋＤａグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６７）プロモーター、ホメオボックスＤｌｘ５／６プロモーター、グルタミン酸受容体１（ＧｌｕＲｌ）プロモーター、プレプロタキキニン１（Ｔａｃｌ）プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、及びドーパミン作動性受容体１（Ｄｒｄｌａ）プロモーターが含まれる。例えば、Ｄｅｌｚｏｒ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｕｇｕｓｔ ２０１２，２３（４）：２４２−２５４を参照のこと。別の態様では、プロモーターは、ＧＵＳｂプロモーターである（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃｉ．Ｏｒｇ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｖｉｅｗ／４１６１５＃Ｂ３０）。

他のプロモーター（構成的プロモーター、調節可能型プロモーターなど）（例えば、ＷＯ２０１１／１２６８０８及びＷＯ２０１３／０４９４３）または生理学的な合図に応答性のプロモーターも使用され得る。プロモーター（複数可）は、異なる供給源から選択することができ、例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期エンハンサー／プロモーター、ＳＶ４０初期エンハンサー／プロモーター、ＪＣポリオーマウイルスプロモーター、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１）潜伏関連プロモーター（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ニューロン特異的プロモーター（ＮＳＥ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、ｈＳＹＮ、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）プロモーター、ニワトリベータ−アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、及びマトリックスメタロタンパク質（ＭＰＰ）プロモーターから選択することができる。

プロモーターに加えて、発現カセット及び／またはベクターは、他の適切な転写開始配列、終結配列、エンハンサー配列、有効なＲＮＡプロセシングシグナル（スプライシングシグナル及びポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなど）、細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列（例えばＷＰＲＥ）、翻訳効率を増進する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）、タンパク質安定性を増進する配列、ならびに必要に応じて、コードされる産物の分泌を増進する配列、を１つ以上含み得る。適切なポリＡ配列の例としては、例えば、ＳＶ４０、ＳＶ５０、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）、ヒト成長ホルモン、及び合成のポリＡが挙げられる。適切なエンハンサーの一例はＣＭＶエンハンサーである。他の適切なエンハンサーには、ＣＮＳ徴候に適したものが含まれる。いくつかの態様では、発現カセットは、１つ以上の発現エンハンサーを含む。いくつかの態様では、発現カセットは、２つ以上の発現エンハンサーを含む。これらのエンハンサーは、互いに同じであり得るか、または互いに異なり得る。例えば、エンハンサーは、ＣＭＶ前初期エンハンサーを含み得る。このエンハンサーは、互いに隣接して位置する２つのコピー中に存在し得る。あるいは、このエンハンサーの当該二重コピーは、１つ以上の配列によって分断されたものであり得る。さらに別の態様では、発現カセットは、イントロン（例えば、ニワトリベータ−アクチンイントロン）をさらに含む。他の適切なイントロンには、当該技術分野で知られるものが含まれ、こうしたイントロンは、例えば、ＷＯ２０１１／１２６８０８に記載のものなどである。いくつかの態様では、コード配列の上流にイントロンが組み込まれることでｍＲＮＡの５’キャッピング及び安定性が改善される。任意選択で、ｍＲＮＡが安定化するように１つ以上の他の配列が選択され得る。そのような配列の一例は、改変ＷＰＲＥ配列であり、この改変ＷＰＲＥ配列は、ポリＡ配列の上流かつ、コード配列の下流の位置に操作導入され得る（例えば、ＭＡ Ｚａｎｔａ−Ｂｏｕｓｓｉｆ，ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００９）１６：６０５−６１９を参照のこと）。

いくつかの態様では、こうした制御配列は、ＳＭＮ１遺伝子配列に「機能可能なように連結される」。本明細書で使用される「機能可能なように連結される」という用語は、発現制御配列が目的遺伝子と隣接することも、発現制御配列がトランスで作用して目的遺伝子を制御するか、または発現制御配列が離れて作用して目的遺伝子を制御することも指す。

組換えウイルスベクター：
いくつかの態様では、ＡＡＶカプシド及び少なくとも１つの発現カセットを含むアデノ随伴ウイルスベクターが提供される。いくつかの態様では、少なくとも１つの発現カセットは、ＳＭＮ１をコードする核酸配列と、宿主細胞においてＳＭＮ１配列が発現するように導く発現制御配列と、を含む。ｒＡＡＶベクター遺伝子は、ＡＡＶ ＩＴＲ配列も含み得る。いくつかの態様では、ＩＴＲは、ｒＡＡＶゲノムのパッケージングに使用されるカプシドタンパク質の血清型とは異なるＡＡＶ血清型に由来するものである。いくつかの態様では、ＩＴＲ配列は、ＡＡＶ２に由来するものであるか、またはその欠失バージョン（ＡＩＴＲ）に由来するものであり、ＡＩＴＲは、簡便化目的に加えて、規制当局の承認を得やすくするためも使用され得る。一方で、他のＡＡＶ源に由来するＩＴＲも選択され得る。ＩＴＲの由来元がＡＡＶ２であり、ＡＡＶカプシドの由来元が別のＡＡＶである場合、得られるベクターは、シュードタイプ化されたものと呼ばれ得る。典型的には、ｒＡＡＶベクターゲノムは、ＡＡＶ ５’ＩＴＲ、ＳＭＮ１コード配列、及び任意の調節配列、ならびにＡＡＶ ３’ＩＴＲを含む。一方で、こうしたエレメントの他の配置も適切であり得る。５’ＩＴＲは、その短縮バージョンが報告されており、この短縮バージョンは、ＡＩＴＲと呼ばれ、ＡＩＴＲでは、Ｄ−配列及び末端分解部位（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｉｔｅ）（ｔｒｓ）が欠失している。他の態様では、全長のＡＡＶ ５’ＩＴＲ及びＡＡＶ ３’ＩＴＲが使用される。

本明細書に記載の核酸または核酸ベクターのＩＴＲ配列は、任意のＡＡＶ血清型（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０）に由来するものであり得るか、または複数の血清型に由来するものであり得る。いくつかの態様では、ＩＴＲ配列、及びＩＴＲ配列を含むプラスミドは、当該技術分野で知られており、商業的に利用可能なものである（例えば、Ｖｅｃｔｏｒ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ、Ｃｅｌｌｂｉｏｌａｂｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，Ｃａ、及びＡｄｄｇｅｎｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡから利用可能な製品及びサービス、ならびにＧｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｋｅｓｓｌｅｒ ＰＤ，Ｐｏｄｓａｋｏｆｆ ＧＭ，Ｃｈｅｎ Ｘ，ＭｃＱｕｉｓｔｏｎ ＳＡ，Ｃｏｌｏｓｉ ＰＣ，Ｍａｔｅｌｉｓ ＬＡ，Ｋｕｒｔｚｍａｎ ＧＪ，Ｂｙｒｎｅ ＢＪ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１９９６ Ｎｏｖ ２６；９３（２４）：１４０８２−７、及びＣｕｒｔｉｓ Ａ．Ｍａｃｈｉｄａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（商標）．Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．１０．１３８５／１−５９２５９−３０４−６：２０１（著作権）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．２００３．Ｃｈａｐｔｅｒ １０．Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｂｙ Ａｄｅｎｏ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ．Ｍａｔｔｈｅｗ Ｄ．Ｗｅｉｔｚｍａｎ，Ｓａｍｕｅｌ Ｍ．Ｙｏｕｎｇ Ｊｒ．，Ｔｏｎｉ Ｃａｔｈｏｍｅｎ ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄ Ｊｕｄｅ Ｓａｍｕｌｓｋｉ、米国特許第５，１３９，９４１号及び同第５，９６２，３１３号（これらの文献はすべて、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。

いくつかの態様では、ｒＡＡＶ核酸またはｒＡＡＶゲノムは、一本鎖（ｓｓ）であり得る。一方で、いくつかの態様では、ｒＡＡＶ核酸またはｒＡＡＶゲノムは、自己相補型（ｓｃ）ＡＡＶ核酸ベクターであり得る。いくつかの態様では、組換えＡＡＶ粒子は、核酸ベクター（一本鎖（ｓｓ）または自己相補型（ｓｃ）のＡＡＶ核酸ベクターなど）を含む。いくつかの態様では、核酸ベクターは、ＳＭＮ１遺伝子と、発現コンストラクトと隣接する逆位末端反復（ＩＴＲ）配列（例えば、野生型ＩＴＲ配列または操作されたＩＴＲ配列）を含む１つ以上の領域と、を含む。いくつかの態様では、核酸は、ウイルスカプシドによってカプシド封入される。

したがって、いくつかの態様では、ＡＡＶ粒子は、ウイルスカプシドと、本明細書に記載の核酸ベクターと、を含み、この核酸ベクターは、ウイルスカプシドによってカプシド封入されている。いくつかの態様では、ウイルスカプシドは、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３を含む６０個のカプシドタンパク質サブユニットを含む。いくつかの態様では、ＶＰ１サブユニット、ＶＰ２サブユニット、及びＶＰ３サブユニットは、それぞれ約１：１：１０の比でカプシド中に存在する。

いくつかの態様では、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）は、標的細胞に送達するための核酸配列がパッケージングされたＡＡＶタンパク質カプシドを有するＡＡＶ ＤＮａｓｅ抵抗性粒子である。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、選択されるＡＡＶに応じて約１：１：１０〜１：１：２０の比で正二十面体対称となるように配置された６０個のカプシド（ｃａｐ）タンパク質サブユニット（ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３）から構成される。ＡＡＶカプシドは、当業者に知られるもの（そのバリアントを含む）から選択され得る。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、神経細胞への形質導入を効率的に生じさせるものから選択される。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ５、ＡＡＶｈｕ１１、ＡＡＶ８ＤＪ、ＡＡＶｈｕ３２、ＡＡＶｈｕ３７、ＡＡＶｐｉ２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｈｕ４８Ｒ３、ＡＡＶｈｕ６８、及びそれらのバリアントから選択される。ＷＯ２０１８１６０５８５Ａ２、ＷＯ２０１８１６０５８２Ａ１、Ｒｏｙｏ，ｅｔ ａｌ，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，２００８ Ｊａｎ，１１９０：１５−２２、Ｐｅｔｒｏｓｙａｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１４ Ｄｅｃ，２１（１２）：９９１−１０００、Ｈｏｌｅｈｏｎｎｕｒ ｅｔ ａｌ，ＢＭＣ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，１５：２８、及びＣｅａｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００８ Ｏｃｔ；１６（１０）：１７１０−１７１８（これらの文献はそれぞれ、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。本明細書で有用な他のＡＡＶカプシドには、ＡＡＶｒｈ３９、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ２５、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｂｂ１、及びＡＡＶｂｂ２、ならびにそれらのバリアントが含まれる。ＡＡＶウイルスベクター（ＤＮａｓｅ抵抗性ウイルス粒子）のカプシドの供給源として他のＡＡＶ血清型を選択することもでき、こうしたＡＡＶ血清型には、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ６４Ｒｌ、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ２、ＡＡＶｒｈ８、及び既知もしくは本明細書に記載のＡＡＶまたは未発見のＡＡＶのいずれかのバリアントが含まれる。例えば、米国公開特許出願第２００７−００３６７６０−Ａ１号、米国公開特許出願第２００９−０１９７３３８−Ａ１号、ＥＰ１３１０５７１を参照のこと。ＷＯ２００３／０４２３９７（ＡＡＶ７及び他のサルＡＡＶ）、米国特許７７９０４４９及び米国特許７２８２１９９（ＡＡＶ８）、ＷＯ２００５／０３３３２１及びＵＳ７，９０６，１１１（ＡＡＶ９）、ならびにＷＯ２００６／１１０６８９、ならびにＷＯ２００３／０４２３９７（ｒｈ１０）も併せて参照のこと。あるいは、記載のＡＡＶのいずれかに基づく組換えＡＡＶが、ＡＡＶカプシドの供給源として使用され得る。こうした文書では、ＡＡＶを生成させるために選択され得る他のＡＡＶについても記載されており、こうした文書は、参照によって組み込まれる。いくつかの態様では、ウイルスベクターにおいて使用するためのＡＡＶカプシドは、前述のＡＡＶカプシドうちの１つまたはそのコード核酸への変異導入（例えば、挿入、欠失、または置換によるもの）によって生成され得る。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、前述のＡＡＶカプシドタンパク質のうちの２つまたは３つまたは４つまたはそれを超える数に由来するドメインを含むキメラである。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、２つまたは３つの異なるＡＡＶまたは組換えＡＡＶに由来するＶｐ１モノマー、Ｖｐ２モノマー、及びＶｐ３モノマーのモザイクである。いくつかの態様では、ｒＡＡＶ組成物は、前述のカプシドのうちの１つ以上を含む。ＡＡＶに関して本明細書で使用されるバリアントという用語は、既知のＡＡＶ配列に由来する任意のＡＡＶ配列を意味し、こうしたＡＡＶ配列には、アミノ酸配列または核酸配列にわたって少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、またはそれを超える％の配列同一性を共有するものが含まれる。別の態様では、ＡＡＶカプシドには、記載または既知のＡＡＶカプシド配列のいずれかとの差異が最大約１０％であり得るバリアントが含まれ得る。すなわち、ＡＡＶカプシドは、本明細書で提供され、及び／または当該技術分野で知られるＡＡＶカプシドと約９０％の同一性〜約９９．９％の同一性、約９５％〜約９９％の同一性、または約９７％〜約９８％の同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、あるＡＡＶカプシドと少なくとも９５％の同一性を共有する。ＡＡＶカプシドの同一性パーセントを決定する場合、可変タンパク質（例えば、ｖｐ１、ｖｐ２、またはｖｐ３）のいずれかにわたって比較がなされ得る。いくつかの態様では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶ８ ｖｐ３と少なくとも９５％の同一性を共有する。

いくつかの態様では、自己相補型ＡＡＶが提供される。これと関連する「ｓｃ」という略語は、自己相補型を指す。「自己相補型ＡＡＶ」は、組換えＡＡＶ核酸配列が保有するコード領域が分子内二本鎖ＤＮＡテンプレートを形成するように設計されているコンストラクトを指す。感染時に、第２の鎖の合成を細胞が媒介することを待つのではなく、ｓｃＡＡＶの２つの相補的半分鎖が結び付くことで、迅速な複製及び転写の準備が整った１つの二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）単位が形成されることになる。例えば、Ｄ Ｍ ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，“Ｓｅｌｆ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ（ｓｃＡＡＶ）ｖｅｃｔｏｒｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，（Ａｕｇｕｓｔ ２００１），Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６，Ｐａｇｅｓ １２４８−１２５４を参照のこと。自己相補型ＡＡＶについては、例えば、米国特許第６，５９６，５３５号、同第７，１２５，７１７号、及び同第７，４５６，６８３号に記載されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

当該技術分野では、対象への送達に適したＡＡＶウイルスベクターを生成及び単離するための方法が知られている。例えば、米国公開特許出願第２００７／００３６７６０号（２００７年２月１５日）、米国特許７７９０４４９、米国特許７２８２１９９、ＷＯ２００３／０４２３９７、ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２００６／１１０６８９、及びＵＳ７５８８７７２Ｂ２を参照のこと。ある１つの系では、ＩＴＲと隣接する導入遺伝子をコードするコンストラクトと、ｒｅｐ及びｃａｐをコードするコンストラクト（複数可）とが、産生細胞株に一過性にトランスフェクションされる。第２の系では、ｒｅｐ及びｃａｐを安定的に供給するパッケージング細胞株に対して、ＩＴＲと隣接する導入遺伝子をコードするコンストラクトが一過性にトランスフェクションされる。これらの系のそれぞれにおいて、ヘルパーアデノウイルスまたはヘルペスウイルスの感染に応じてＡＡＶビリオンが産生することから、混入ウイルスからｒＡＡＶを分離することが必要になる。ＡＡＶを回復させるためのヘルパーウイルスの感染が必要のない系も開発されており、こうした系では、必要なヘルパー機能（例えば、アデノウイルスのＥｌ、Ｅ２ａ、ＶＡ、及びＥ４、またはヘルペスウイルスのＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２、及びＵＬ２９、ならびにヘルペスウイルスポリメラーゼ）も系によってトランスで供給される。こうした系では、必要なヘルパー機能をコードするコンストラクトを細胞に一過性にトランスフェクションすることによってヘルパー機能が供給される得るか、またはヘルパー機能をコードする遺伝子（その発現が転写レベルもしくは転写後レベルで制御され得るもの）を安定的に含むように細胞が操作され得る。さらに別の系では、ＩＴＲと隣接する導入遺伝子、及びｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子は、バキュロウイルスベースのベクターを感染させることによって昆虫細胞に導入される。こうした産生系に関する総説については、一般に、例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，２００９，“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｈｙｂｒｉｄ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ−ｓｃａｌｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０：９２２−９２９（当該文献のそれぞれの内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。こうしたＡＡＶ産生系及び他のＡＡＶ産生系の調製方法及び使用方法については、下記の米国特許（これらの文献のそれぞれの内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）にも記載されている：５，１３９，９４１、５，７４１，６８３、６，０５７，１５２、６，２０４，０５９、６，２６８，２１３、６，４９１，９０７、６，６６０，５１４、６，９５１，７５３、７，０９４，６０４、７，１７２，８９３、７，２０１，８９８、７，２２９，８２３、及び７，４３９，０６５。

任意選択で、本明細書に記載のＳＭＮ１遺伝子を使用してｒＡＡＶ以外のウイルスベクターを生成させることができ、こうしたウイルスベクターもまた、ＳＭＮ２ ＡＳＯとの併用療法において使用することができる。そのような他のウイルスベクターには、利用され得る遺伝子治療に適した任意のウイルスが含まれ得、こうしたウイルスには、限定されないが、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルスなどが含まれる。適切には、こうした他のベクターのうちの１つが生成される場合、そのベクターは、複製欠陥ウイルスベクターとして生成される。

「複製欠陥ウイルス」または「複製欠陥ウイルスベクター」は、目的遺伝子を含む発現カセットがウイルスカプシドまたはエンベロープ内にパッケージングされた合成ウイルス粒子または人工ウイルス粒子を指し、この場合、ウイルスカプシドまたはエンベロープ内に併せてパッケージングされるウイルスゲノム配列はいずれも複製欠損であり、すなわち、それらのウイルスゲノム配列は、子孫ビリオンを生成させることはできないが、標的細胞に感染する能力は保持する。いくつかの態様では、ウイルスベクターのゲノム（このゲノムは、「弱体化」するように操作されたものであり得、当該人工ゲノムの増幅及びパッケージングに必要なシグナルと隣接する目的導入遺伝子のみを含む）は、複製に必要な酵素をコードする遺伝子を含まないが、こうした遺伝子は産生の間に供給され得る。したがって、こうしたウイルスベクターは、複製に必要なウイルス酵素が存在しない限り子孫ビリオンによる複製及び感染が生じ得ないため、遺伝子治療において使用する上で安全なものと見なされる。そのような複製欠陥ウイルスは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス（組み込み型もしくは非組み込み型）、または別の適切なウイルス源のものであり得る。

開示のＡＡＶ粒子、発現コンストラクト、または核酸ベクターのうちの少なくとも１つを含む宿主細胞も提供される。そのような宿主細胞には、哺乳類宿主細胞（例えば、ヒト宿主細胞）が含まれ、そのような宿主細胞は、細胞培養または組織培養のいずれかにおいて単離され得る。遺伝子改変動物モデル（例えば、マウス）の場合、形質転換される宿主細胞は、非ヒト動物自体の体内に含まれるものであり得る。

全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの産生を増加させるオリゴマー化合物
いくつかの態様では、ＳＭＡを治療するための併用療法は、ＳＭＮ２をコードするｐｒｅ−ｍＲＮＡに相補的なＡＳＯ（本出願ではＳＭＮ２ ＡＳＯとも称される）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングを変化させる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する。ＳＭＮ２のスプライシングを変化させる上で有用ないくつかの配列及び領域については、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２４４６９（ＷＯ／２００７／００２３９０として公開されている）及びＷＯ２０１８０１４０４１Ａ２において見つけることができ、これらの文献は、それらの全体があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２のスプライシングを効率的に調節する結果、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることが増え、最終的に、エクソン７に対応するアミノ酸を含むＳＭＮ２タンパク質が増加する。そのような代替ＳＭＮ２タンパク質は、野生型ＳＭＮタンパク質と１００％同一である。

ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの発現を効率的に調節して機能性ＳＭＮタンパク質を生成させるＡＳＯは、活性なＡＳＯであると考えられる。ＳＭＮ２の発現の調節は、体液において測定することができ、こうした体液は、動物の細胞、組織、または器官を含むことも含まないこともあり得る。分析のための試料（体液（例えば、痰、血清、ＣＳＦ）、組織（例えば、生検試料）、または器官など）の取得方法、及び分析を可能にするための試料の調製方法は当業者によく知られている。治療の効果は、本出願に記載の組成物の１つ以上と接触させた動物から採取される１つ以上の生体液、組織、または器官における標的遺伝子発現と関連するバイオマーカーを測定することによって評価され得る。

いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡが増加することは、参照レベル（対照（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯが投与されていない対象）における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルなど）と比較して全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの細胞内レベルが高いことを意味する。細胞内全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、ＳＭＮ２遺伝子から産生する全長タンパク質及び／またはｍＲＮＡのレベルの上昇として測定され得る。いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、細胞もしくは生物体の外面的特性を調べることによって決定するか（例えば、実施例に後述されるように行われる）、またはアッセイ手法によって決定することができ、こうしたアッセイ手法は、ＲＮＡ溶液ハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼ保護、ノーザンハイブリダイゼーション、逆転写、マイクロアレイでの遺伝子発現の監視、抗体結合、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、核酸配列決定、ウエスタンブロット、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、他の免疫アッセイ、蛍光活性化細胞分析（ＦＡＣＳ）、または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡもしくはタンパク質（例えば、対象中もしくは対象から得られる試料中のもの）の存在を検出し得る任意の他の手法もしくはそうした手法の組み合わせなどである。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ治療を受けている対象から得られる試料における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを、ＳＭＮ２ ＡＳＯで治療されていない対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルと比較することによって、ＳＭＮ２ ＡＳＯによる全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加度が決定され得る。いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの参照レベルは、ＳＭＮ２ ＡＳＯが投与される前の同じ対象から得られる。いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの参照レベルは、ＳＭＮ２ ＡＳＯを投与されていない対象の集団によって決定される範囲である。

いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベル上昇は、例えば、参照値と比較して１倍超、１．５〜５倍超、５〜１０倍超、１０〜５０倍超、５０〜１００倍超、約１．１倍超、約１．２倍超、約１．５倍超、約２倍超、約３倍超、約４倍超、約５倍超、約６倍超、約７倍超、約８倍超、約９倍超、約１０倍超、約１５倍超、約２０倍超、約３０倍超、約４０倍超、約５０倍超、約６０倍超、約７０倍超、約８０倍超、約９０倍超、約１００倍超、またはそれを超える倍率である。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯが投与されている対象において、より短鎖のＳＭＮ２ ｍＲＮＡ（例えば、エクソン７を含まないＳＭＮ２ ｍＲＮＡ）に対する全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの比を参照比と比較することによって、ＳＭＮ２ ＡＳＯが全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させたかどうかが決定され得る。いくつかの態様では、参照比は、ＳＭＮ２ ＡＳＯの投与前の短鎖のＳＭＮ２ ｍＲＮＡ（例えば、エクソン７を含まないＳＭＮ２ ｍＲＮＡ）に対する全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの比である。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯを投与されている対象における短鎖のＳＭＮ２ ｍＲＮＡ（例えば、エクソン７を含まないＳＭＮ２ ｍＲＮＡ）に対する全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの比は、例えば、参照比と比較して１倍超、１．５〜５倍超、５〜１０倍超、１０〜５０倍超、５０〜１００倍超、約１．１倍超、約１．２倍超、約１．５倍超、約２倍超、約３倍超、約４倍超、約５倍超、約６倍超、約７倍超、約８倍超、約９倍超、約１０倍超、約１５倍超、約２０倍超、約３０倍超、約４０倍超、約５０倍超、約６０倍超、約７０倍超、約８０倍超、約９０倍超、約１００倍超、またはそれを超える倍率である。

いくつかの態様では、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、参照レベルと比較したときの全長ＳＭＮタンパク質の増加によって示され得る。いくつかの態様では、全長ＳＭＮタンパク質の参照レベルは、ＳＭＡを有する対象またはＳＭＡを有するリスクのある対象から治療前に得られる全長ＳＭＮタンパク質のレベルである。いくつかの態様では、エクソン７含有ＳＭＮタンパク質の産生は、ＳＭＮ２ ＡＳＯが投与されている対象において増加し、この増加には、エクソン７含有ＳＭＮタンパク質レベルの増進が伴い、この増進は、例えば、参照値と比較して少なくとも約１倍超、少なくとも約１．５〜５倍超、少なくとも約５〜１０倍超、少なくとも約１０〜５０倍超、少なくとも約５０〜１００倍超、少なくとも約１．１倍超、少なくとも約１．２倍超、少なくとも約１．５倍超、少なくとも約２倍超、少なくとも約３倍超、少なくとも約４倍超、少なくとも約５倍超、少なくとも約６倍超、少なくとも約７倍超、少なくとも約８倍超、少なくとも約９倍超、少なくとも約１０倍超、少なくとも約１５倍超、少なくとも約２０倍超、少なくとも約３０倍超、少なくとも約４０倍超、少なくとも約５０倍超、少なくとも約６０倍超、少なくとも約７０倍超、少なくとも約８０倍超、少なくとも約９０倍超、少なくとも約１００倍超、またはそれを超える倍率のものである。本出願に記載の組成物の１つ以上を有効量で体液、器官、または組織と接触させる方法も企図される。体液、器官、または組織を１つ以上の組成物と接触させると体液、器官、または組織の細胞においてＳＭＮ１が発現すると共に、ＳＭＮ２の発現が調節され得る。組成物の有効量は、対象に投与されるか、または細胞と接触される組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯによる機能性ＳＭＮタンパク質の発現に対する効果を監視することによって決定され得る。

１．アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
いくつかの態様では、ヒトＳＭＮ２をコードする核酸に相補的な配列を含むＡＳＯが、生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）と関連する疾患または状態（脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）など）の治療（この治療は、例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子を併用して行われる）において使用するために提供される。いくつかの態様では、ヒトＳＭＮ２をコードする核酸に相補的な配列を含むＡＳＯが、中枢神経系（ＣＮＳ）またはＣＳＦにＡＳＯを直接的に投与することによる生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）と関連する疾患または状態の治療（この治療は、例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子を併用して行われる）において使用するために提供される。

本明細書で使用される「オリゴマー化合物」という用語は、オリゴヌクレオチドを含む化合物を指す。いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドからなる。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」という用語は、リン酸連結基、ヘテロ環式塩基部分、及び糖部分を含む化合物を指す。いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、１つ以上の複合基及び／または末端基をさらに含む。いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。本明細書で使用される「アンチセンスオリゴヌクレオチド」または「ＡＳＯ」は、そのハイブリダイゼーション先の標的核酸に少なくとも一部が少なくとも部分的に相補的であり、そのようなハイブリダイゼーションの結果、少なくとも１つのアンチセンス活性を生じさせるオリゴマー化合物を指す。

場合によっては、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、対象における全長ＳＭＮタンパク質を増加させる。場合によっては、ＡＳＯは、対象における全長ＳＭＮ ２ ｍＲＮＡを増加させる。いくつかの態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯは、ＳＭＮ２をコードする核酸に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングパターンを変化させることによって全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングの間のエクソンスキッピングを促進する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン６、イントロン７、またはエクソン７と隣接イントロンとの間の境界を標的としてＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するように設計される。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン６に相補的な核酸塩基配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのエクソン６に相補的な核酸塩基配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン７に相補的な核酸塩基配列を含む。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン７を標的とするＡＳＯは、配列番号１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン７を標的とするＡＳＯは、ヌシネルセンである。いくつかの態様では、全長ＳＭＮタンパク質及び／または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを上昇させるために、本明細書に記載のＡＳＯのうちの１つ以上が対象に投与され得る。ＳＭＮ２のスプライシングを変化させる上で有用な配列及び領域の例については、限定されないが、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２４４６９において見つけることができ、当該文献は、その全体があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＭＮ２のイントロン７に相補的な核酸塩基配列を有する。そのような核酸塩基配列の例としては、限定されないが、以下の表に記載のものが挙げられる。

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン７を標的とする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧという配列（配列番号１）のうちの少なくとも１０個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１１個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１２個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１３個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１４個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１５個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１６個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１のうちの少なくとも１７個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１の全核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１の全核酸塩基からなる核酸塩基配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１０〜１８個の連結ヌクレオシドからなり、ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧという配列（配列番号１）の等しい長さの部分と１００％同一の核酸塩基配列を有する。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子に相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン６、エクソン７（もしくはエクソン７と隣接イントロンとの境界）、またはイントロン７に相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン７を標的とする。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン７を標的とするＳＭＮ２ ＡＳＯは、ヌシネルセンである。ヌシネルセンのヌクレオチド配列の例は、ＵＣＡＣＵＵＵＣＡＵＡＡＵＧＣＵＧＧ−３’（配列番号２６）である。活性物質（ヌシネルセン（ＩＳＩＳ３９６４４３とも称される））は、５’−^ＭｅＵ^ＭｅＣＡ^ＭｅＣ^ＭｅＵ^ＭｅＵ^ＭｅＵ^ＭｅＣＡ^ＭｅＵＡＡ^ＭｅＵＧ^ＭｅＣ^ＭｅＵＧＧ−３’という配列（配列番号２５）を有する１８個のヌクレオチド残基からなる一様に修飾された２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドである。

ヌシネルセンナトリウムという化学名は、Ｃ２３４Ｈ３２３Ｎ６１Ｏ１２８Ｐ１７Ｓ１７Ｎａ１７という分子式に対応する２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオシチジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｐ−チオアデニリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオシチジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオシチジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｐ−チオアデニリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｐ−チオアデニリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｐ−チオアデニリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｐ−チオグアニリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオシチジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチル−Ｐ−チオウリジリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｐ−チオグアニリル−（３’−Ｏ→５’−Ｏ）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）グアノシンであり、相対分子質量が７５０１．０ｇ／ｍｏｌであり、図３に示される構造を有する。

アンチセンスは、１つ以上の特定の遺伝子産物の発現調節に有効な手段であり、多くの治療的用途、診断的用途、及び研究的用途において比類なく有用である。本明細書では、標的を占有することを基礎とするアンチセンス機構を含めて、アンチセンス作用機構を介する遺伝子発現の調節に有用なアンチセンス化合物が提供される。一態様では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、標的遺伝子のスプライシングを調節する。そのような調節には、エクソンが含まれることを促進または抑制することが含まれる。本明細書では、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ分子中に存在するシススプライシング調節エレメントを標的とするアンチセンス化合物がさらに提供され、こうしたシススプライシング調節エレメントには、エクソン内スプライシングエンハンサー、エクソン内スプライシングサイレンサー、イントロン内スプライシングエンハンサー、及びイントロン内スプライシングサイレンサーが含まれる。シススプライシング調節エレメントを乱すと、スプライス部位の選択が変化すると考えられており、これによってスプライス産物の組成が変化し得る。

真核生物のｐｒｅ−ｍＲＮＡのプロセシングは、適切なｍＲＮＡスプライシングの達成に多数のシグナル及びタンパク質因子を必要とする複雑なプロセスである。スプライソソームによるエクソンの規定に必要なものは、イントロンとエクソンとの境界を規定する標準的なスプライシングシグナルにとどまらない。そのような追加のシグナルの１つは、シス作用性の調節エンハンサー配列及び調節サイレンサー配列によって与えられる。エクソン内スプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソン内スプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、イントロン内スプライシングエンハンサー（ＩＳＥ）、及びイントロン内スプライシングサイレンサー（ＩＳＳ）は、その作用部位及び作用様式に応じてスプライスドナー部位またはスプライスアクセプター部位の利用を抑制または増進するものとして同定されている（Ｙｅｏ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１（４４）：１５７００−１５７０５）。こうした調節配列に特異的なタンパク質（トランス因子）が結合すると、スプライシングプロセスが導かれ、特定のスプライス部位の利用が促進または抑制されることで、スプライシング産物の比が調節される（Ｓｃａｍｂｏｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２４（５）：１８５５−１８６９：Ｈｏｖｈａｎｎｉｓｙａｎ ａｎｄ Ｃａｒｓｔｅｎｓ，２００５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２５（１）：２５０−２６３、Ｍｉｎｏｖｉｔｓｋｙ ｅｔ ａｌ．２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３（２）：７１４−７２４）。

いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、天然起源のオリゴマーであるオリゴヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡなど）と比較して１つ以上の修飾を含む。そのような修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の望ましい特性を有し得る。いくつかの態様では、修飾は、アンチセンスオリゴヌクレオチドのアンチセンス活性を変化させ、この変化は、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの標的核酸に対するその親和性の増加、１つ以上のヌクレアーゼに対するその抵抗性の増加、及び／またはオリゴヌクレオチドの薬物動態もしくは組織分布の変化によって生じる。いくつかの態様では、修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシド、及び／または１つ以上の修飾ヌクレオシド結合、及び／または１つ以上の複合基を含む。

ａ．修飾ヌクレオシド
いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。そのような修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び／または修飾核酸塩基を含み得る。いくつかの態様では、そのような修飾ヌクレオシドをオリゴヌクレオチド中に含めることで、限定されないが、ヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性の向上、及びまたは修飾オリゴヌクレオチドの毒性及び／または取り込み特性の改善を含めて、標的核酸に対する親和性の増加及び／または安定性の向上が得られる。

ｉ．核酸塩基
ヌクレオシドの天然起源の塩基部分は、ヘテロ環式塩基であり、典型的には、プリン及びピリミジンである。「非修飾」核酸塩基または「天然」核酸塩基（プリン核酸塩基（アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ））、ならびにピリミジン核酸塩基（チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）））に加えて、当業者に知られる修飾核酸塩基または核酸塩基模倣体の多くが、本明細書に記載の化合物への組み込みに適している。いくつかの態様では、修飾核酸塩基は、構造が親核酸塩基にかなり類似した核酸塩基であり、こうした核酸塩基は、例えば、７−デアザプリン、５−メチルシトシン、またはＧ−クランプなどである。いくつかの態様では、核酸塩基模倣体は、より複雑な構造を含む（例えば、三環式フェノキサジン核酸塩基模倣体など）。修飾核酸塩基を調製するための方法は当業者によく知られている。

ｉｉ．修飾糖及び糖代替物
本出願のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、天然の糖と比較して糖部分が修飾されたヌクレオシドを任意選択で１つ以上含み得る。糖修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼに対する安定性が増進しているか、結合親和性が増加しているか、または何らかの他の有益な生物学的特性を有し得る。そのような修飾には、限定されないが、置換基を付加するもの、非ジェミナル環原子を架橋して二環式核酸（ＢＮＡ）を形成させるもの、リボシル環酸素原子をＳ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ_１）（Ｒ）_２（Ｒ＝Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、または保護基）で置き換えるもの、及びこうした修飾の組み合わせが含まれ、こうした修飾の組み合わせは、例えば、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示の５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについては２００８年８月２１日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照のこと）、またはリボシル環酸素原子をＳで置き換えたものに対してさらに２’位の置換を行うもの（２００５年６月１６日公開の公開米国特許出願ＵＳ２００５０１３０９２３を参照のこと）、あるいはＢＮＡの５’位を置換するもの（２００７年１１月２２日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１（この文献では、ＬＮＡが、例えば、５’−メチル基または５’−ビニル基で置換されている）を参照のこと）などである。

修飾糖部分を有するヌクレオシドの例としては、限定されないが、５’−ビニル置換基を含むヌクレオシド、５’−メチル（ＲまたはＳ）置換基を含むヌクレオシド、４’−Ｓ置換基を含むヌクレオシド、２’−Ｆ置換基を含むヌクレオシド、２’−ＯＣＨ置換基を含むヌクレオシド、及び２’−Ｏ（ＣＨ_２）_２ＯＣＨ_３置換基を含むヌクレオシドが挙げられる。２’位の置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、ＯＣＦ_３、Ｏ（ＣＨ_２）ＳＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）、及びＯ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）（式中、それぞれのＲ_ｍ及びＲ_ｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換のＣ_１−Ｃ_１０アルキルである）からも選択され得る。

二環式核酸（ＢＮＡ）の例としては、限定されないが、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子との間に架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。いくつかの態様では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、架橋が下記の式のうちの１つを含む１つ以上のＢＮＡヌクレオシドを含む：４’−ベータ−Ｄ−（ＣＨ_２）−Ｏ−２’（ベータ−Ｄ−ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ_２）−Ｓ−２、４’−アルファ−Ｌ−（ＣＨ_２）−Ｏ−２’（アルファ−Ｌ−ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、４’−Ｃ（ＣＨ_３）_２−Ｏ−２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２を参照のこと）、４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’及び４’−Ｃ−Ｈ（ＣＨ_２ＯＣＨ_３）−Ｏ−２’（２００８年７月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５号を参照のこと）、４’−ＣＨ_２−Ｎ（ＯＣＨ_３）−２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１を参照のこと）、４’−ＣＨ_２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ_３）−２’（２００４年９月２日公開の公開米国特許出願ＵＳ２００４−０１７１５７０を参照のこと）、４’−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（２００８年９月２３日発行の米国特許第７，４２７，６７２号を参照のこと）、４’−ＣＨ_２−Ｃ（ＣＨ_３）−２’及び４’−ＣＨ_２−Ｃ（＝ＣＨ_２）−２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４を参照のこと）（Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、または保護基である）。

いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドを構成する修飾糖部分は、二環式糖部分ではない。いくつかの態様では、ヌクレオシドの糖環は、任意の位置が修飾され得る。有用な糖修飾の例としては、限定されないが、ＯＨ、Ｆ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ−アルキル、またはＯ−アルキル−Ｏ−アルキルから選択される糖置換基を化合物に含めるものが挙げられ、こうしたアルキル、アルケニル、及びアルキニルは、置換または非置換のＣ_１−Ｃ_１０アルキルまたはＣ_２−Ｃ_１０アルケニル及びＣ_２−Ｃ_１０アルキニルであり得る。いくつかの態様では、そのような置換基は、糖の２’位に位置する。

いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドは、糖の２’位に置換基を含む。いくつかの態様では、そのような置換基は、ハロゲン化物（限定されないがＦを含む）、アリル、アミノ、アジド、チオ．Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、−ＯＣＦ_３、Ｏ−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−ＣＨ_３、２’−Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、Ｏ−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）、またはＯ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）（式中、それぞれのＲ_ｍ及びＲ_ｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換のＣ_１−Ｃ_１０アルキルである）から選択される。

いくつかの態様では、本発明における使用に適した修飾ヌクレオシドは、２−メトキシエトキシ、２’−Ｏメチル（２’−ＯＣＨ_３）、２’−フルオロ（２’−Ｆ）である。

いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドが２’位に有する置換基は、Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、ＯＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ_３、及びＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ３］_２（式中、ｎ及びｍは、１〜約１０である）から選択される。他の２’−糖置換基には、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリルまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴマー化合物の薬物動態特性を改善するための基またはオリゴマー化合物の薬力学的特性を改善するための基、及び同様の特性を有する他の置換基が含まれる。

いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００）。そのような２’−ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシド及び他の修飾ヌクレオシド（２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、及びＯ−アミノプロピルなど）と比較して結合親和性を改善するものである説明されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボでの使用に有望な特徴を有する遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることも示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｐ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４、Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６、Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７、及びＡｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６）。

いくつかの態様では、２’−糖置換基は、アラビノ（上向き）位またはリボ（下向き）位のいずれかに位置する。いくつかの態様では、２’−アラビノ修飾は、２’−Ｆアラビノ（ＦＡＮＡ）である。同様の修飾を、糖の他の位置に施すこともでき、具体的には、３’末端ヌクレオシドまたは２’−５’連結オリゴヌクレオチドの糖の３’位、及び５’末端ヌクレオチドの５’位に施すことができる。

いくつかの態様では、適切なヌクレオシドは、リボフラノシル糖の代わりに糖代替物（シクロブチルなど）を有する。そのような修飾糖構造の調製について教示する代表的な米国特許には、限定されないが、米国４，９８１，９５７、米国５，１１８，８００、米国５，３１９，０８０、米国５，３５９，０４４、米国５，３９３，８７８、米国５，４４６，１３７、米国５，４６６，７８６、米国５，５１４，７８５、米国５，５１９，１３４号、米国５，５６７，８１１、米国５，５７６．４２７、米国５，５９１，７２２、米国５，５９７，９０９、米国５，６１０，３００、米国５，６２７，０５３、米国５，６３９，８７３、米国５，６４６，２６５、米国５，６５８，８７３、米国５，６７０，６３３、米国５，７９２，７４７、及び米国５，７００，９２０が含まれ、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

いくつかの態様では、ヌクレオシドは、糖の２’位に修飾を含む。いくつかの態様では、ヌクレオシドは、糖の５’位に修飾を含む。いくつかの態様では、ヌクレオシドは、糖の２’位及び５’位に修飾を含む。いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドへの組み込みに有用であり得る。いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの５’末端の位置でオリゴヌクレオシドに組み込まれる。

ｂ．ヌクレオシド間結合
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を任意選択で含み得る。連結基の２つの主要クラスは、リン原子の存在有無によって規定される。代表的なリン含有結合には、限定されないが、ホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、及びホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）が含まれる。代表的な非リン含有連結基には、限定されないが、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−Ｏ−ＣＨ２）、チオジエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−）、チオノカルバメート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）、シロキサン（−Ｏ−Ｓｉ（Ｈ）_２−Ｏ−）、及びＮ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−Ｎ（ＣＨ_３）−）が含まれる。非リン連結基を有するオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオシドと称される。天然のホスホジエステル結合と比較して改変されている結合は、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ抵抗性を変化させるために使用され得る（典型的には、向上させるために使用され得る）。いくつかの態様では、キラル原子を有する結合がラセミ混合物（別々のエナンチオマー）として調製され得る。代表的なキラル結合には、限定されないが、アルキルホスホネート及びホスホロチオエートが含まれる。リン含有結合及び非リン含有結合の調製方法は、当業者によく知られている。

本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の不斉中心を含み得るため、エナンチオマー、ジアステレオマー、及び絶対立体化学に関して、糖アノマーなどについては（Ｒ）もしくは（Ｓ）、またはアミノ酸などについては（Ｄ）もしくは（Ｌ）として規定され得る他の立体異性配置が生じ得る。本明細書で提供されるアンチセンス化合物には、そのような可能な異性体ならびにそのラセミ形態及び光学的に純粋な形態がすべて含まれ得る。

いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を有する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも２つの修飾ヌクレオシド間結合を有する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つの修飾ヌクレオシド間結合を有する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の修飾ヌクレオシド間結合を有する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。いくつかの態様では、そのような修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。

ｃ．長さ
いくつかの態様では、本発明は、さまざまな範囲の長さのいずれのアンチセンスオリゴヌクレオチドも提供する。いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｘ〜Ｙ個の連結ヌクレオシドを含むか、またはＸ〜Ｙ個の連結ヌクレオシドからなり、Ｘ及びＹはそれぞれ、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０から独立して選択される（但し、Ｘ〜Ｙとなることが条件である）。例えば、いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、８〜９つ、８〜１０個、８〜１１個、８〜１２個、８〜１３個、８〜１４個、８〜１５個、８〜１６個、８〜１７個、８〜１８個、８〜１９個、８〜２０個、８〜２１個、８〜２２個、８〜２３個、８〜２４個、８〜２５個、８〜２６個、８〜２７個、８〜２８個、８〜２９個、８〜３０個、９〜１０個、９〜１１個、９〜１２個、９〜１３個、９〜１４個、９〜１５個、９〜１６個、９〜１７個、９〜１８個、９〜１９個、９〜２０個、９〜２１個、９〜２２個、９〜２３個、９〜２４個、９〜２５個、９〜２６個、９〜２７個、９〜２８個、９〜２９個、９〜３０個、１０〜１１個、１０〜１２個、１０〜１３個、１０〜１４個、１０〜１５個、１０〜１６個、１０〜１７個、１０〜１８個、１０〜１９個、１０〜２０個、１０〜２１個、１０〜２２個、１０〜２３個、１０〜２４個、１０〜２５個、１０〜２６個、１０〜２７個、１０〜２８個、１０〜２９個、１０〜３０個、１１〜１２個、１１〜１３個、１１〜１４個、１１〜１５個、１１〜１６個、１１〜１７個、１１〜１８個、１１〜１９個、１１〜２０個、１１〜２１個、１１〜２２個、１１〜２３個、１１〜２４個、１１〜２５個、１１〜２６個、１１〜２７個、１１〜２８個、１１〜２９個、１１〜３０個、１２〜１３個、１２〜１４個、１２〜１５個、１２〜１６個、１２〜１７個、１２〜１８個、１２〜１９個、１２〜２０個、１２〜２１個、１２〜２２個、１２〜２３個、１２〜２４個、１２〜２５個、１２〜２６個、１２〜２７個、１２〜２８個、１２〜２９個、１２〜３０個、１３〜１４個、１３〜１５個、１３〜１６個、１３〜１７個、１３〜１８個、１３〜１９個、１３〜２０個、１３〜２１個、１３〜２２個、１３〜２３個、１３〜２４個、１３〜２５個、１３〜２６個、１３〜２７個、１３〜２８個、１３〜２９個、１３〜３０個、１４〜１５個、１４〜１６個、１４〜１７個、１４〜１８個、１４〜１９個、１４〜２０個、１４〜２１個、１４〜２２個、１４〜２３個、１４〜２４個、１４〜２５個、１４〜２６個、１４〜２７個、１４〜２８個、１４〜２９個、１４〜３０個、１５〜１６個、１５〜１７個、１５〜１８個、１５〜１９個、１５〜２０個、１５〜２１個、１５〜２２個、１５〜２３個、１５〜２４個、１５〜２５個、１５〜２６個、１５〜２７個、１５〜２８個、１５〜２９個、１５〜３０個、１６〜１７個、１６〜１８個、１６〜１９個、１６〜２０個、１６〜２１個、１６〜２２個、１６〜２３個、１６〜２４個、１６〜２５個、１６〜２６個、１６〜２７個、１６〜２８個、１６〜２９個、１６〜３０個、１７〜１８個、１７〜１９個、１７〜２０個、１７〜２１個、１７〜２２個、１７〜２３個、１７〜２４個、１７〜２５個、１７〜２６個、１７〜２７個、１７〜２８個、１７〜２９個、１７〜３０個、１８〜１９個、１８〜２０個、１８〜２１個、１８〜２２個、１８〜２３個、１８〜２４個、１８〜２５個、１８〜２６個、１８〜２７個、１８〜２８個、１８〜２９個、１８〜３０個、１９〜２０個、１９〜２１個、１９〜２２個、１９〜２３個、１９〜２４個、１９〜２５個、１９〜２６個、１９〜２９個、１９〜２８個、１９〜２９個、１９〜３０個、２０〜２１個、２０〜２２個、２０〜２３個、２０〜２４個、２０〜２５個、２０〜２６個、２０〜２７個、２０〜２８個、２０〜２９個、２０〜３０個、２１〜２２個、２１〜２３個、２１〜２４個、２１〜２５個、２１〜２６個、２１〜２７個、２１〜２８個、２１〜２９個、２１〜３０個、２２〜２３個、２２〜２４個、２２〜２５個、２２〜２６個、２２〜２７個、２２〜２８個、２２〜２９個、２２〜３０個、２３〜２４個、２３〜２５個、２３〜２６個、２３〜２７個、２３〜２８個、２３〜２９個、２３〜３０個、２４〜２５個、２４〜２６個、２４〜２７個、２４〜２８個、２４〜２９個、２４〜３０個、２５〜２６個、２５〜２７個、２５〜２８個、２５〜２９個、２５〜３０個、２６〜２７個、２６〜２８個、２６〜２９個、２６〜３０個、２７〜２８個、２７〜２９個、２７〜３０個、２８〜２９個、２８〜３０個、または２９〜３０個の連結ヌクレオシドを含むか、またはその個数の連結ヌクレオシドからなる。

いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド数１５の長さを有する。いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド数１６の長さを有する。いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド数１７の長さを有する。いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド数１８の長さを有する。いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド数１９の長さを有する。いくつかの態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド数２０の長さを有する。

ｄ．オリゴヌクレオチドモチーフ
いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その長さに沿って特定の向きで配置された化学的に修飾されたサブユニットを有する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、完全に修飾される。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一様に修飾される。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一様に修飾され、各ヌクレオシドは、２−ＭＯＥ糖部分を含む。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一様に修飾され、各ヌクレオシドは、２’−ＯＭｅ糖部分を含む。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一様に修飾され、各ヌクレオシドは、モルホリノ糖部分を含む。

いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、交互モチーフを含む。いくつかの態様では、交互修飾型は、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、二環式糖修飾ヌクレオシド、及びＤＮＡ（非修飾２’−デオキシ）の中から選択される。いくつかの態様では、各交互領域は、単一のヌクレオシドを含む。

いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、第１の型のヌクレオシドのブロックを１つ以上含むと共に、第２の型のヌクレオシドのブロックを１つ以上含む。

いくつかの態様では、交互モチーフ中の１つ以上の交互領域は、ある１つ型のヌクレオシドを１つ含むにとどまらない。例えば、オリゴマー化合物は、下記のヌクレオシドモチーフのいずれかの１つ以上の領域を含み得る：
Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１、
Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２、
Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２、
Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２、
Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１、
Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ ＮＵ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２、
Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１、
Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１、
Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１、または
Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ２ Ｎｕ１ Ｎｕ１、
配列中、Ｎｕ１は、第１の型のヌクレオシドであり、Ｎｕ２は、第２の型のヌクレオシドである。いくつかの態様では、Ｎｕ１及びＮｕ２の一方は、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、Ｎｕ１及びＮｕ２のもう一方は、２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシド、ＢＮＡ、及び非修飾ＤＮＡヌクレオシドまたは非修飾ＲＮＡヌクレオシドから選択される。

２．オリゴマー化合物
いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドのみから構成される。いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドと、１つ以上の複合基及び／または末端基と、を含む。そのような複合基及び／または末端基は、本出願に記載の化学モチーフのいずれかを有するオリゴヌクレオチドに付加され得る。したがって、例えば、交互ヌクレオシドの領域を１つ以上有するオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物は、末端基を含み得る。

ａ．複合基
いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の複合基を付加することによって修飾される。一般に、複合基は、付加を受けるオリゴマー化合物の特性を１つ以上改変するものであり、改変される特性には、限定されないが、薬力学、薬物動態、安定性、結合、吸収、細胞分布、細胞への取り込み、電荷、及びクリアランスが含まれる。複合基は、化学的分野で日常的に使用されており、親化合物（オリゴマー化合物（オリゴヌクレオチドなど）など）に対して、直接的に連結されるか、または任意選択の複合連結部分もしくは複合連結基を介して連結される。複合基には、限定されないが、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び色素が含まれ得る。ある特定の複合基については、これまでに報告されており、こうした複合基は、例えば、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３−６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４，１０５３−１０６０）、チオエーテル（例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール）（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６−３０９、Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５−２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３−５３８）、脂肪族鎖（例えば、ド−デカン−ジオール残基もしくはウンデシル残基）（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ．Ｊ．，１９９１，１０，１１１１−１１１８、Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７−３３０、Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９−５４）、リン脂質（例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールもしくはトリエチル−アンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート）（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１−３６５４、Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７−３７８３）、ポリアミン鎖もしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９−９７３）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１−３６５４）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４．２２９−２３７）、あるいはオクタデシルアミン部分またはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３−９３７）である。

いくつかの態様では、複合基は、活性原薬を含み、こうした活性原薬は、例えば、アスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェン−ブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）−（＋）−プラノプロフェン、カプロフェン、ダンシルサルコシン、２，３，５−トリヨード安息香酸、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾサイアジアザイド、クロロチアジド、ジアゼピン、インド−メチシン（ｉｎｄｏ−ｍｅｔｈｉｃｉｎ）、バルビツール酸、セファロスポリン、サルファ剤、抗糖尿病剤、抗細菌剤、または抗生物質である。オリゴヌクレオチド−薬物複合体及びその調製については、米国特許出願第０９／３３４，１３０号に記載されている。

オリゴヌクレオチド複合体の調製を教示する代表的な米国特許については、限定されないが、米国４，８２８，９７９、米国４，９４８，８８２、米国５，２１８，１０５、米国５，５２５，４６５、米国５，５４１，３１３、米国５，５４５，７３０、米国５，５５２，５３８、米国５，５７８，７１７、米国５，５８０，７３１、米国５，５８０，７３１、米国５，５９１，５８４、米国５，１０９，１２４、米国５，１１８，８０２、米国５，１３８，０４５、米国５，４１４，０７７、米国５，４８６，６０３、米国５，５１２．４３９、米国５，５７８，７１８、米国５，６０８，０４６、米国４，５８７，０４４、米国４，６０５，７３５、米国４，６６７，０２５、米国４，７６２，７７９、米国４，７８９，７３７、米国４，８２４，９４１、米国４，８３５，２６３、米国４，８７６，３３５、米国４，９０４，５８２、米国４，９５８，０１３、米国５，０８２，８３０、米国５，１１２，９６３、米国５，２１４，１３６、米国５，０８２，８３０、米国５，１１２，９６３、米国５，２１４，１３６、米国５，２４５，０２２、米国５，２５４，４６９、米国５，２５８，５０６、米国５，２６２，５３６、米国５，２７２，２５０、米国５，２９２，８７３、米国５，３１７，０９８、米国５，３７１，２４１、米国５，３９１，７２３、米国５，４１６，２０３、米国５，４５１，４６３、米国５，５１０，４７５、米国５，５１２，６６７、米国５，５１４，７８５、米国５，５６５，５５２、米国５，５６７，８１０、米国５，５７４，１４２、米国５，５８５，４８１、米国５，５８７，３７１、米国５，５９５，７２６、米国５，５９７．６９６、米国５，５９９，９２３、米国５，５９９，９２８、及び米国５，６８８，９４１が含まれる。複合基は、オリゴヌクレオチドの一方もしくは両方の末端（末端複合基）、及び／または任意の内部位置に付加され得る。

ｂ．末端基
いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、一方または両方の末端に末端基を含む。いくつかの態様では、末端基は、本出願に記載の複合基のいずれかを含み得る。いくつかの態様では、末端基は、追加のヌクレオシド及び／または反転脱塩基ヌクレオシド（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ａｂａｓｉｃ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）を含み得る。いくつかの態様では、末端基は、安定化基である。

いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、特性（例えば、ヌクレアーゼ安定性など）を増進する末端安定化基を１つ以上含む。安定化基には、キャップ構造が含まれる。本明細書で使用される「キャップ構造」または「末端キャップ部分」という用語は、オリゴマー化合物の末端の両方または一方に付加され得る化学修飾を指す。ある特定の末端修飾は、末端核酸部分を有するオリゴマー化合物をエキソヌクレアーゼによる分解から保護し、細胞内への送達及び／または細胞内での局在化を支援し得る。キャップは、５’末端（５’キャップ）もしくは３’末端（３’キャップ）に存在し得るか、または両末端に存在し得る（より詳細な情報については、限定されないが、Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，国際ＰＣＴ公開公報第ＷＯ９７／２６２７０号、Ｂｅａｕｃａｇｅ ａｎｄ Ｔｙｅｒ，１９９３，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９，１９２５：米国特許出願公開公報第ＵＳ２００５／００２０５２５号、及びＷＯ０３／００４６０２を参照のこと）。

いくつかの態様では、オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に対して１つ以上の追加のヌクレオシドが付加される。そのような追加の末端ヌクレオシドは、末端基ヌクレオシドと本明細書で称される。二本鎖化合物では、そのような末端基ヌクレオシドは、末端（３’及び／または５’）オーバーハングである。二本鎖アンチセンス化合物との関連では、そのような末端基ヌクレオシドは、標的核酸に相補的であることもないこともあり得る。いくつかの態様では、末端基は、非ヌクレオシド末端基である。そのような非末端基は、ヌクレオシド以外の任意の末端基であり得る。

ｃ．オリゴマー化合物モチーフ
いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、Ｔ−（Ｎｕ_１）_ｎ１，−（Ｎｕ_２）_ｎ２−（Ｎｕ_１）_ｎ３−（Ｎｕ_２）_ｎ４−（Ｎｕ_１）_ｎ５−Ｔ２というモチーフを含み、モチーフ中：
Ｎｕ_１は、第１の型のヌクレオシドであり、
Ｎｕ_２は、第２の型のヌクレオシドであり、
ｎ１及びｎ５はそれぞれ、独立して０〜３であり、
ｎ２とｎ４との合計は、１０〜２５であり、
ｎ３は、０〜５であり、
それぞれのＴ_１及びＴ_２は、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、任意選択で連結された複合基、またはキャッピング基である。

いくつかの態様では、ｎ２とｎ４との合計は、１３または１４であり、ｎ１は、２であり、ｎ３は、２または３であり、ｎ５は、２である。いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、表Ａから選択されるモチーフを含む。

３．アンチセンス
いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。したがって、いくつかの態様では、オリゴマー化合物は、標的核酸（例えば、標的ｐｒｅ−ｍＲＮＡまたは標的ｍＲＮＡ）とハイブリダイゼーションしてアンチセンス活性を示す。

ａ．ハイブリダイゼーション
いくつかの態様では、特異的結合が望まれる条件（例えば、インビボアッセイまたは治療的治療の場合は生理学的条件、インビトロアッセイの場合はアッセイが実施される条件）の下で非標的核酸配列にアンチセンス化合物が非特異的に結合することを回避する上で十分な度合いの相補性が存在する場合、アンチセンス化合物は、標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする。

したがって、「厳密なハイブリダイゼーション条件」または「厳密な条件」は、アンチセンス化合物が標的配列にハイブリダイゼーションするが、アンチセンス化合物によるハイブリダイゼーションを受ける他の配列の数は最小限にとどまる条件を意味する。厳密な条件は、配列依存性であると共に、状況が異なれば異なることになり、アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的配列にハイブリダイゼーションする「厳密な条件」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの性質及び組成、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチドが調べられるアッセイによって決定される。

当該技術分野では、ヌクレオチドに親和性修飾を施すことで、非修飾化合物と比較して許容ミスマッチ数が増え得ることが知られている。同様に、ある特定の核酸塩基配列は、他の核酸塩基配列と比較してミスマッチに対する寛容性が高くあり得る。当業者なら、オリゴヌクレオチド間、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間の適切なミスマッチ数を決定する能力を有し、この決定は、融解温度（Ｔｍ）の決定などによって行われる。ＴｍまたはＡＴｍは、当業者に知られる手法によって計算され得る。例えば、当業者なら、Ｆｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５，２２：４４２９−４４４３）に記載の手法を用いれば、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖の融解温度を上昇させる能力についてヌクレオチド修飾を評価することが可能である。

ｂ．ｐｒｅ−ｍＲＮＡプロセシング
いくつかの態様では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、ｐｒｅ−ｍＲＮＡに相補的である。いくつかの態様では、そのようなアンチセンス化合物は、ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングを変化させる。いくつかの態様では、標的ｐｒｅ−ｍＲＮＡに対応する成熟ｍＲＮＡのあるバリアントと、その成熟ｍＲＮＡの別のバリアントとの比が変化する。いくつかの態様では、標的ｐｒｅ−ｍＲＮＡから発現するタンパク質のあるバリアントと、タンパク質の別のバリアントとの比が変化する。ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングを変化させるために使用され得るある特定のオリゴマー化合物及び核酸塩基配列は、例えば、米国特許第６，２１０，８９２号、米国特許第５，６２７，２７４号、米国特許第５，６６５，５９３号、米国特許第５，９１６，８０８号、米国特許第５，９７６，８７９号、ＵＳ２００６／０１７２９６２、ＵＳ２００７／００２３９０、ＵＳ２００５／００７４８０１、ＵＳ２００７／０１０５８０７、ＵＳ２００５／００５４８３６、ＷＯ２００７／０９００７３、ＷＯ２００７／０４７９１３、Ｈｕａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ ５（４）：ｅ７３、Ｖｉｃｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ Ｍａｒ．１５；１７６（６）：３６５２−６１、及びＨｕａ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊ．ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ａｐｒｉｌ ２００８）８２，１−１５（これらの文献はそれぞれ、その全体があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる）において見つけることができる。いくつかの態様では、スプライシングを変化させるアンチセンス配列は、本出願に記載のモチーフに従って修飾される。

いくつかの態様では、ＡＳＯまたはオリゴマー化合物は、ＷＯ／２０１８／０１４０４３（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２４６５）、ＷＯ／２０１８／０１４０４２（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２４６４）、ＷＯ／２０１８／０１４０４１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２４６３）に記載の修飾を１つ以上含み得、これらの文献の内容は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

併用投与及び併用治療
いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター（例えば、ｒＡＡＶ）中のもの）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ、またはそれらの組み合わせが、「治療的に有効な」量で本明細書に記載の対象に送達されることで（この送達は、例えば、同時投与または連続投与を介して行われる）、所望の結果（例えば、ＳＭＡまたはその１つ以上の症状の治療）が達成される。いくつかの態様では、所望の結果には、筋力低下の低減、筋力及び筋緊張の増加、脊柱側弯の阻止もしくは低減、または呼吸器の健康の維持もしくは向上、または振戦もしくは単収縮の低減が含まれる。他の所望のエンドポイントは、医師によって決定され得る。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて体重が増加する。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて筋力低下が阻止または低減される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて筋力が増加する。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて筋緊張が増加する。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて脊柱側弯が阻止または低減される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて振戦または単収縮が低減される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて呼吸器の健康が維持されるか、または向上する。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されてニューロンの脱落が阻止または低減される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが対象に送達されて運動ニューロンの脱落が阻止または低減される。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせが投与されることで相乗作用が得られる。いくつかの態様では、組み合わせによって、組換えＳＭＮ１遺伝子の作用が増強され、対象への送達用量を低減すること（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの用量を低減すること）が可能になる。いくつかの態様では、組み合わせによって、ＳＭＮ２ ＡＳＯの作用が増強され、対象へのＡＳＯの投与用量を低減することが可能になる。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの低減用量は、１×１０^１０ＧＣ未満である。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの低減用量は、１．０×１０^８〜１．０×１０^１０ＧＣである。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの低減用量は、１．０×１０^９〜１．０×１０^１０ＧＣである。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの低減用量は、１．０×１０^１０〜１．０×１０^１３ＧＣである。いくつかの態様では、ヒト対象に投与される組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの低減用量は、３×１０^１３ＧＣである。いくつかの態様では、ヒト対象に投与される組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶの低減用量は、１×１０^１４ＧＣ未満であり、例えば、ヒト対象に投与される用量当たり１×１０^１３〜１×１０^１４ＧＣ、１×１０^１２〜１×１０^１３ＧＣ、１×１０^１１〜１×１０^１２ＧＣ、１×１０^１０〜１×１０^１１ＧＣ、もしくは１×１０^９〜１×１０^１０ＧＣ、またはそれ未満である。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯの低減用量は、１２ｍｇである。用量当たり合計５ｍｇ〜６０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜４８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜３６ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。

場合によっては、ＳＭＡは、妊娠の３０〜３６週辺りの胎児において検出される。この状況では、分娩後、可能な限り早急に新生児を治療することが望ましくあり得る。子宮内の胎児を治療することも望ましくあり得る。したがって、ＳＭＡを有する新生児対象を救援及び／または治療する方法が提供され、この方法は、組換えＳＮＭ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせを胎児及び／または新生児対象（例えば、ヒト胎児及び／または新生児）の神経細胞に送達するステップを含む。いくつかの態様では、ＳＭＡを有する胎児を救援及び／または治療する方法が提供され、この方法は、組換えＳＮＭ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせを子宮内の胎児の神経細胞に送達するステップを含む。いくつかの態様では、組み合わせは、くも膜下腔内注射を介して本明細書に記載の組成物の１つ以上において送達される。いくつかの態様では、子宮内治療は、胎児におけるＳＭＡの検出後に本明細書に記載の組換えＳＮＭ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの組み合わせを投与するものと定義される。例えば、Ｄａｖｉｄ ｅｔ ａｌ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎ ｕｔｅｒｏ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｇｉｖｅｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｓｈｅｅｐ，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１１ Ａｐｒ；２２（４）：４１９−２６．ｄｏｉ：１０．１０８９／ｈｕｍ．２０１０．００７．Ｅｐｕｂ ２０１１ Ｆｅｂ ２（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。

いくつかの態様では、新生児治療は、組換えＳＮＭ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの一方または両方の少なくとも１回の用量を、分娩から８時間以内、最初の１２時間以内、最初の２４時間以内、または最初の４８時間以内に送達することを伴う。別の態様では、特に霊長類（ヒトまたは非ヒト）については、新生児送達は、約１２時間〜約１週間、約２週間、約３週間、もしくは約１ヶ月の期間内、または約２４時間〜約４８時間後に行われる。

いくつかの態様では、遅発性のＳＭＡについては、組換えＳＮＭ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの一方または両方が、症状の発症後に送達される。いくつかの態様では、患者の治療（例えば、１回目の注射）は、１歳を迎える前に開始される。別の態様では、１歳以降、または２〜３歳以降、５歳以降、１１歳以降、またはそれを超える年齢で治療が開始される。

いくつかの態様では、組換えＳＮＭ１遺伝子及びＳＭＮ２ ＡＳＯの一方または両方が、後日に再投与される。

いくつかの態様では、複数回の再投与が行われる。そのような再投与は、同じ型のウイルスベクターにおける組換えＳＭＮ１遺伝子の再投与、異なるウイルスベクターにおける組換えＳＭＮ１遺伝子の再投与（例えば、異なる血清型のＡＡＶカプシドタンパク質を使用するもの）、または非ウイルス送達を介する組換えＳＭＮ１遺伝子の再投与を伴い得る。例えば、ＳＭＮ１をコードする第１のｒＡＡＶ（例えば、ｒＡＡＶ９）で患者が治療され、（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯの投与に加えて）組換えＳＭＮ１遺伝子での２回目の治療が患者に必要な場合、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードする第２の異なるｒＡＡＶ（例えば、ｒＡＡＶｈｕ６８）をその後に投与することができ、逆もまた同様である。同様に、第１のｒＡＡＶ血清型に対する中和抗体を患者が有する場合、第２の異なるｒＡＡＶ血清型を使用して第２の用量の組換えＳＭＮ１遺伝子を対象に送達することができる。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター（ｒＡＡＶなど）中のもの）を併用して行うＳＭＡ患者の治療では、さらなる治療（本出願に記載の組成物での治療の前、間、及び／または後に行う免疫抑制剤での一過性の同時治療など）が必要であり得る。そのような同時治療のための免疫抑制剤には、限定されないが、ステロイド、代謝拮抗剤、Ｔ細胞抑制剤、及びアルキル化剤、または循環抗体を除去するための手順（プラスマフェレーシスなど）が含まれる。例えば、そのような一過性の治療には、約６０ｍｇを開始用量として用量を１０ｍｇ／日減らして７日間（７日目は投与なし）行う１日１回のステロイド（例えば、プレドニゾンまたはプレドニゾロン）の投与が含まれ得る。他の用量及び免疫抑制剤も選択され得る。

いくつかの態様では、対象は、ＳＭＡの指標を１つ以上有する。いくつかの態様では、対象においては、１つ以上の筋肉の電気的活動が低下している。いくつかの態様では、対象は、変異ＳＭＮ１遺伝子を有する（例えば、ＳＭＮ１遺伝子の変異アレルを２つ有する）。いくつかの態様では、対象のＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１遺伝子の両アレル）は、存在しないか、または機能性ＳＭＮタンパク質の産生能力を有さない。いくつかの態様では、対象は、各ＳＭＮ１アレル中に欠失または機能喪失型点変異を有する。いくつかの態様では、対象は、ＳＭＮ１遺伝子変異についてホモ接合型である。いくつかの態様では、対象は、遺伝子検査によって診断される。いくつかの態様では、対象は、筋肉生検によって同定される。いくつかの態様では、対象は、背筋を伸ばして座ることができない。いくつかの態様では、対象は、立つことまたは歩くことができない。いくつかの態様では、対象は、呼吸及び／または摂食に介助を必要とする。いくつかの態様では、対象は、筋肉の電気生理学的測定及び／または筋肉生検によって同定される。

いくつかの態様では、対象は、Ｉ型ＳＭＡを有する。いくつかの態様では、対象は、ＩＩ型ＳＭＡを有する。いくつかの態様では、対象は、ＩＩＩ型ＳＭＡを有する。いくつかの態様では、対象は、子宮内でＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、出生後１週間以内にＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、出生後１ヶ月以内にＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、３ヶ月齢までにＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、６ヶ月齢までにＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、１歳までにＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、１〜２歳の間にＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、１〜１５歳の間にＳＭＡを有すると診断される。いくつかの態様では、対象は、対象が１５歳超のときにＳＭＡを有すると診断される。

いくつかの態様では、医薬組成物（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯ、または両方の組み合わせ、の医薬組成物）の第１の用量は、子宮内に投与される。いくつかのそのような態様では、第１の用量は、血液脳関門が完全に発達する前に投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、子宮内の対象に全身性に投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、血液脳関門の形成後に子宮内に投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、ＣＳＦに投与される。

いくつかの態様では、医薬組成物（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯ、または両方の組み合わせ、の医薬組成物）の第１の用量は、対象が１週齢未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が１ヶ月齢未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が３ヶ月齢未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が６ヶ月齢未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が１歳未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が２歳未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が１５歳未満のときに投与される。いくつかの態様では、第１の用量は、対象が１５歳超のときに投与される。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、１年に１〜６回投与され、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）は、最初に１回投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換えＳＭＮ１遺伝子が初回投与された後、ＳＭＮ２ ＡＳＯ単独の後続用量が２回以上投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、１ヶ月に２回投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、１ヶ月ごとに投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、２ヶ月ごとに投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、６ヶ月ごとに投与される。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）は、初回投与から、例えば１年以上（例えば、２〜５年、５〜１０年、１０〜１５年、１５〜２０年、またはそれを超える期間）後に再投与される。

いくつかの態様では、医薬組成物（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯ、または両方の組み合わせ、の医薬組成物）が少なくとも１つ投与されると、対象の表現型が変化する。いくつかの態様では、そのような表現型変化には、限定されないが、組換えＳＭＮ ｍＲＮＡ及び／またはエクソン７を含む細胞ＳＭＮ ｍＲＮＡの絶対量の増加、エクソン７を含まないＳＭＮ ｍＲＮＡに対するエクソン７を含むＳＭＮ ｍＲＮＡの比の増加、ＳＭＮタンパク質の絶対量の増加、筋力の改善、少なくとも１つの筋肉における電気的活動の改善、呼吸の改善、体重増加の改善、疲労の減少、ならびに生存期間の長期化が含まれる。いくつかの態様では、対象の運動ニューロンにおいて少なくとも１つの表現型変化が検出される。いくつかの態様では、本出願に記載の医薬組成物が少なくとも１つ投与されると、対象は、背筋を伸ばして座ること、立つこと、及び／または歩くことができるようになる。いくつかの態様では、少なくとも１つの医薬組成物が投与されると、対象は、介助なしに摂食すること、飲むこと、及び／または呼吸することができるようになる。いくつかの態様では、治療の有効性は、筋肉の電気生理学的評価によって評価される。いくつかの態様では、医薬組成物が投与されると、ＳＭＡの症状の少なくとも１つが改善される。いくつかの態様では、医薬組成物が投与されると、ＳＭＡの症状の少なくとも１つが改善され、炎症作用はほとんど生じないか、または全く生じない。いくつかの態様では、炎症作用が存在しないことは、治療時にＡｉｆ１レベルが顕著に上昇しないことによって決定される。

いくつかの態様では、少なくとも１つの医薬組成物が投与されると、ＳＭＡの症状の少なくとも１つの発症が遅延する。いくつかの態様では、少なくとも１つの医薬組成物が投与されると、ＳＭＡの症状の少なくとも１つの進行が鈍化する。いくつかの態様では、少なくとも１つの医薬組成物が投与されると、ＳＭＡの症状の少なくとも１つの重症度が低減される。いくつかの態様では、少なくとも１つの医薬組成物が投与されると、望ましくない副作用が生じる。いくつかの態様では、望ましくない副作用を回避しつつ症状が望ましく軽快する治療レジメンが同定される。

用量及び製剤
したがって、いくつかの態様では、治療的に有効な量のＳＭＮ２ ＡＳＯが、ＳＭＡを有する対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、単独で対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、他の化合物及び／または医薬組成物と共に対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）が対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）とが、同時（例えば、同じ時刻もしくは同じ医療訪問の間）または連続的（例えば、異なる医療訪問の間）に対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸は、単一の組成物において一緒に対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸は、別々に対象に投与される。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸とは、同時（例えば、病院、診療所、または他の医療施設への訪問の間の同じ時刻または異なる時刻、例えば、同じ医療訪問日の間の異なる時刻）に対象に投与される。したがって、いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸とを同時に投与することは、同じ医療訪問の間（例えば、同じ診療日の間）の投与を意味する。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸とを同時に投与することは、同じ訪問の間（例えば、同じ診療日の間）の異なる時刻の投与を意味する。いくつかの態様では、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶ）及びＳＭＮ２ ＡＳＯの同時投与は、新たな治療の開始にあたる。他の態様では、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶ）及びＳＭＮ２ ＡＳＯの同時投与は、異なる組成物または単一の組成物（例えば、ＳＭＮ１遺伝子治療単独またはＳＭＮ２ ＡＳＯ治療単独）で現在治療されている対象に対する追加の治療にあたる。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸とは、異なる訪問の間（例えば、異なる診療日）に連続的に対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸とを連続的に投与することは、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸を最初の訪問の間に投与した後、異なる訪問の間（例えば、異なる診療日）にＳＭＮ２ ＡＳＯを投与することを意味する。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯと、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸とを連続的に投与することは、最初の訪問の間にＳＭＮ２ ＡＳＯを投与した後、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸を異なる訪問の間（例えば、異なる診療日）に投与することを意味する。いくつかの態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸と、ＳＭＮ２ ＡＳＯとは、異なる頻度で投与される。本明細書で使用される連続投与は、医療訪問の間の第１の治療剤（例えば、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸）の投与前または投与後に、１回以上の異なる医療訪問の間に第２の治療剤（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）が１回以上投与され得る投与プロトコールを含み得る。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸は、異なる頻度で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象に１年当たり１〜６回投与される。いくつかの態様では、組換え核酸は、１回投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸が初回投与された後、ＳＭＮ２ ＡＳＯ単独の後続用量が２回以上投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与された後、同じ組成物においてＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸を組み合わせたものが投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の体重キログラム当たり０．０１〜２５ミリグラム（例えば、０．０１〜１０ミリグラム、０．０５〜５ミリグラム、０．１〜２ミリグラム、または０．５〜１ミリグラム）の用量で対象に投与され、組換え核酸は、２×１０^１０〜２×１０^１４ＧＣ（例えば、１．０×１０^１３〜１．０×１０^１４ＧＣ、または例えばＩＴ投薬については、約１．０×１０^１３〜５．０×１０^１４ＧＣ）の用量でｒＡＡＶにおいて投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の体重キログラム当たり０．００１〜２５ミリグラム（例えば、０．００１〜１０ミリグラム、０．００５〜５ミリグラム、０．０１〜２ミリグラム、または０．０５〜１ミリグラム）の用量で対象に投与され、組換え核酸は、１×１０^１０〜２×１０^１４ＧＣ（例えば、１．０×１０^１３〜１．０×１０^１４ＧＣ、または例えばＩＴ投薬については、約１．０×１０^１３〜５．０×１０^１４ＧＣ、または例えばＩＶ投薬については、約３×１０^１３〜５×１０^１４ＧＣ）の用量でｒＡＡＶにおいて投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の体重キログラム当たり０．０１〜１０ミリグラムの用量で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の体重キログラム当たり０．００１〜１０ミリグラムの用量で投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の体重キログラム当たり０．００１ミリグラム未満の用量で投与される。

いくつかの態様では、用量当たり合計５ｍｇ〜６０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計５ｍｇ〜２０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜４８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇ〜３６ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計２８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、用量当たり合計１２ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが対象に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象の静脈内または筋肉内に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象のくも膜下腔内に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象の大槽内腔に投与される。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸の投与は、対象における細胞内ＳＭＮタンパク質レベルを上昇させる。いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ及び組換え核酸の投与は、対象の運動ニューロンの頸髄部、胸髄部、及び腰髄部における細胞内ＳＭＮタンパク質レベルを上昇させる。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）の用量及びＳＭＮ２ ＡＳＯの用量は、ＣＳＦへのボーラス注射によって投与される。いくつかの態様では、用量は、ＬＰ及び／またはＩＣＭボーラス注射によって投与される。いくつかの態様では、用量は、ボーラス全身注射（例えば、皮下注射、筋肉内注射、または静脈内注射）によって投与される。いくつかの態様では、ＣＳＦへのボーラス注射及びボーラス全身注射が対象に施される。いくつかの態様では、ＣＳＦボーラスの用量と全身ボーラスの用量とは、互いに同じまたは異なり得る。いくつかの態様では、ＣＳＦ用量及び全身用量は、異なる頻度で投与される。

いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物が提供される。医薬組成物は、それを必要とする対象に対して、任意の適切な経路または異なる経路の組み合わせによって送達されるように設計され得る。例えば、１つ以上の組成物は、脳室内（ＩＣＶ）、静脈内（ＩＶ）、及びくも膜下腔内（ＩＴ）（例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）送達及び／または大槽内（ＩＣＭ）送達を介するもの）を含む経路を使用してヒト対象に投与され得る。

いくつかの態様では、ＣＮＳへの直接的な送達が望まれ、この送達は、くも膜下腔内注射を介して実施され得る。「くも膜下腔内投与」という用語は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を標的とする送達を指す。これは、脳室ＣＳＦまたは腰椎ＣＳＦへの直接的な注射、後頭下穿刺、または他の適切な手段によって実施され得る。Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（３１ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１４）では、直接的なＣＳＦ注射を行うと、ＩＶ適用と比較して１０倍低い用量を使用した場合でもマウス及び非ヒト霊長類の脊髄を通じて幅広い導入遺伝子発現を生じさせる効力が得られることが実証された。この文書は、参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、脳室内へのウイルス注射を介して送達される（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ．２０１４ Ｓｅｐ １５；（９１）：５１８６３（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。Ｐａｓｓｉｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１４ Ｊｕｌ；２５（７）：６１９−３０（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）も併せて参照のこと。いくつかの態様では、組成物は、腰椎注射を介して送達される。

いくつかの態様では、送達手段及び製剤は、本出願に記載のＡＡＶ組成物（複数可）を含む懸濁液の直接的な全身性送達が回避されるように設計される。適切には、このことは、全身投与と比較して全身曝露を低減し、毒性を低減し、及び／またはＡＡＶ及び／または導入遺伝子産物に対する望ましくない免疫応答を低減するという利点を有し得る。

組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）及び／またはＳＭＮ２ ＡＳＯを含む組成物は、任意の適切な投与経路（例えば、経口経路、吸入経路、鼻腔内経路、気管内経路、動脈内経路、眼内経路、静脈内経路、筋肉内経路、及び他の非経口経路）向けに製剤化され得る。

いくつかの態様では、本出願に記載の組換えＳＭＮ１遺伝子送達コンストラクトは、単一の組成物または複数の組成物において送達され得る。いくつかの態様では、２つ以上の異なるＡＡＶが送達され得る（例えば、ＷＯ２０１１／１２６８０８及びＷＯ２０１３／０４９４９３を参照のこと）。いくつかの態様では、そのような複数のウイルスは、異なる複製欠陥ウイルス（例えば、ＡＡＶ、アデノウイルス、及び／またはレンチウイルス）を含み得る。あるいは、さまざまな送達組成物及びナノ粒子（例えば、ミセル、リポソーム、カチオン性脂質−核酸組成物、ポリ−グリカン組成物及び他のポリマー、脂質及び／またはコレステロールベースの核酸複合体を含む）と組み合わさった非ウイルスコンストラクト（例えば、「ネイキッドＤＮＡ」、「ネイキッドプラスミドＤＮＡ」、ＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）、ならびに他のコンストラクト（本出願に記載のものまたは当該技術分野で知られるものなど）によって送達が媒介され得る。例えば、Ｘ．Ｓｕ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１１，８（３），ｐｐ ７７４−７８７；ｗｅｂ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ：Ｍａｒｃｈ ２１，２０１１、ＷＯ２０１３／１８２６８３、ＷＯ２０１０／０５３５７２、及びＷＯ２０１２／１７０９３０（これらの文献は両方共、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。非ウイルスＳＭＮ１送達コンストラクトもまた、任意の適切な適切な投与経路向けに製剤化され得る。

ウイルスベクター、または非ウイルスＤＮＡ導入部分もしくは非ウイルスＲＮＡ導入部分は、遺伝子導入用途及び遺伝子治療用途で使用するための生理学的に許容可能な担体を用いて製剤化され得る。多くの適切な精製方法を選択することができる。ベクター粒子からの空カプシドの分離に適した精製方法の例については説明されており、例えば、「ＡＡＶ８のための拡張可能な精製方法」と題する２０１６年１２月９日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６５９７６号ならびにその優先権文書（２０１６年４月１３日出願の米国特許出願第６２／３２２，０９８号及び２０１５年１２月１１日出願の米国特許出願第６２／２６６，３４１号）（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）に記載のプロセスが挙げられる。２０１６年１２月９日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６５９７４号ならびにその優先権文書（２０１６年４月１３日出願の米国特許出願第６２／３２２，０８３号及び２０１５年１２月１１出願の同第６２／２６６，３５１号）（ＡＡＶ１）、２０１６年１２月９日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６６０１３号ならびにその優先権文書（２０１６年４月１３日出願の米国仮出願第６２／３２２，０５５号及び２０１５年１２月１１日出願の同第６２／２６６，３４７号）（ＡＡＶｒｈｌＯ）、ならびに２０１６年１２月９日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６５９７０号ならびにその優先出願（米国仮出願第６２／２６６，３５７号及び同第６２／２６６，３５７号）（ＡＡＶ９）（これらの文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の精製方法も併せて参照のこと。簡潔に記載すると、ｒＡＡＶ産生細胞培養物の清澄化濃縮上清からゲノム含有ｒＡＡＶベクター粒子を選択的に捕捉及び単離する２段階精製スキームについて記載されている。このプロセスでは、高塩濃度で親和性捕捉法が実施され、その後、高ｐＨでアニオン交換樹脂法が実施されることで、ｒＡＡＶ中間体を実質的に含まないｒＡＡＶベクター粒子が得られる。

ＡＡＶウイルスベクターの場合、製剤中に含まれる用量の尺度として、ゲノムコピー（「ＧＣ」）の定量化が行われ得る。本発明の複製欠陥ウイルス組成物のゲノムコピー（ＧＣ）数の決定には、当該技術分野で知られる任意の方法が使用され得る。ＡＡＶ ＧＣ数の決定を実施するための方法の１つは下記のものである：精製したＡＡＶベクター試料をＤＮａｓｅで最初に処理して産生プロセス由来の混入宿主ＤＮＡを除去する。次に、ＤＮａｓｅ抵抗性粒子を熱処理に供してカプシドからゲノムを遊離させる。次に、遊離したゲノムを、ウイルスゲノムの特定の領域（例えば、ポリＡシグナル）を標的とするプライマー／プローブセットを使用するリアルタイムＰＣＲによって定量化する。ゲノムコピー数を決定するための別の適切な方法は、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）であり、具体的には、最適化ｑＰＣＲまたはｄｉｇｉｔａｌ ｄｒｏｐｌｅｔ ＰＣＲ（Ｌｏｃｋ Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｐｒｉｌ ２０１４，２５（２）：１１５−１２５．ｄｏｉ：１０．１０８９／ｈｇｔｂ．２０１３．１３１（２０１３年１２月１３日にオンライン公開された編集前のもの））である。

いくつかの態様では、複製欠陥ウイルス組成物は、用量単位で、単独で製剤化するか、またはＡＳＯと合剤化することができ、この製剤化または合剤化は、約１．０×１０^９ＧＣ〜約１．０×１０^１５ＧＣの範囲の量（範囲内の整数または分数量をすべて含む）の複製欠陥ウイルスを含むように行われ（これによって、例えば、体重７０ｋｇの平均的な対象が治療される）、この含量は、ヒト患者については、好ましくは１．０×１０^１２ＧＣ〜１．０×１０^１４ＧＣである。対象に投与される総用量は、投与経路に依存し得る。いくつかの態様では、組成物は、用量当たり少なくとも１×１０^９ＧＣ、少なくとも２×１０^９ＧＣ、少なくとも３×１０^９ＧＣ、少なくとも４×１０^９ＧＣ、少なくとも５×１０^９ＧＣ、少なくとも６×１０^９ＧＣ、少なくとも７×１０^９ＧＣ、少なくとも８×１０^９ＧＣ、または少なくとも９×１０^９ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。別の態様では、組成物は、用量当たり少なくともｌ×１０^１０ＧＣ、少なくとも２×１０^１０ＧＣ、少なくとも３×１０^１０ＧＣ、少なくとも４×１０^１０ＧＣ、少なくとも５×１０^１０ＧＣ、少なくとも６×１０^１０ＧＣ、少なくとも７×１０^１０ＧＣ、少なくとも８×１０^１０ＧＣ、または少なくとも９×１０^１０ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。別の態様では、組成物は、用量当たり少なくともｌ×１０^１１ＧＣ、少なくとも２×１０^１１ＧＣ、少なくとも３×１０^１１ＧＣ、少なくとも４×１０^１１ＧＣ、少なくとも５×１０^１１ＧＣ、少なくとも６×１０^１１ＧＣ、少なくとも７×１０^１１ＧＣ、少なくとも８×１０^１１ＧＣ、または少なくとも９×１０^１１ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。別の態様では、組成物は、用量当たり少なくとも１×１０^１２ＧＣ、少なくとも２×１０^１２ＧＣ、少なくとも３×１０^１２ＧＣ、少なくとも４×１０^１２ＧＣ、少なくとも５×１０^１２ＧＣ、少なくとも６×１０^１２ＧＣ、少なくとも７×１０^１２ＧＣ、少なくとも８×１０^１２ＧＣ、または少なくとも９×１０^１２ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。別の態様では、組成物は、用量当たり少なくともｌ×１０^１３ＧＣ、少なくとも２×１０^１３ＧＣ、少なくとも３×１０^１３ＧＣ、少なくとも４×１０^１３ＧＣ、少なくとも５×１０^１３ＧＣ、少なくとも６×１０^１３ＧＣ、少なくとも７×１０^１３ＧＣ、少なくとも８×１０^１３ＧＣ、または少なくとも９×１０^１３ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。別の態様では、組成物は、用量当たり少なくともｌ×１０^１４ＧＣ、少なくとも２×１０^１４ＧＣ、少なくとも３×１０^１４ＧＣ、少なくとも４×１０^１４ＧＣ、少なくとも５×１０^１４ＧＣ、少なくとも６×１０^１４ＧＣ、少なくとも７×１０^１４ＧＣ、少なくとも８×１０^１４ＧＣ、または少なくとも９×１０^１４ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。別の態様では、組成物は、用量当たり少なくともｌ×１０^１５ＧＣ、少なくとも２×１０^１５ＧＣ、少なくとも３×１０^１５ＧＣ、少なくとも４×１０^１５ＧＣ、少なくとも５×１０^１５ＧＣ、少なくとも６×１０^１５ＧＣ、少なくとも７×１０^１５ＧＣ、少なくとも８×１０^１５ＧＣ、または少なくとも９×１０^１５ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）を含むように製剤化される。いくつかの態様では、ヒト用途については、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）の用量の範囲は、用量当たりｌ×１０^１０〜約ｌ×１０^１２ＧＣ（範囲内の整数または分数量をすべて含む）であり得る。

こうした上記用量は、治療すべき領域のサイズ、使用されるウイルス力価、投与経路、及び方法の所望の効果に応じて、約２５マイクロリットル〜約１，０００マイクロリットルまたは〜約１０ミリリットルまたは〜最大２０ミリリットルの範囲（範囲内の数をすべて含む）のさまざまな体積の担体、医薬品添加物、または緩衝製剤において投与され得る。いくつかの態様では、担体、医薬品添加物、または緩衝剤の体積は、少なくとも約２５μｌである。いくつかの態様では、体積は、約５０μｌである。別の態様では、体積は、約７５μｌである。別の態様では、体積は、約１００μｌである。別の態様では、体積は、約１２５μｌである。別の態様では、体積は、約１５０μｌである。別の態様では、体積は、約１７５μｌである。さらに別の態様では、体積は、約２００μｌである。別の態様では、体積は、約２２５μｌである。さらに別の態様では、体積は、約２５０μｌである。さらに別の態様では、体積は、約２７５μｌである。さらに別の態様では、体積は、約３００μｌである。さらに別の態様では、体積は、約３２５μｌである。別の態様では、体積は、約３５０μｌである。別の態様では、体積は、約３７５μｌである。別の態様では、体積は、約４００μｌである。別の態様では、体積は、約４５０μｌである。別の態様では、体積は、約５００μｌである。別の態様では、体積は、約５５０μｌである。別の態様では、体積は、約６００μｌである。別の態様では、体積は、約６５０μｌである。別の態様では、体積は、約７００μｌである。別の態様では、体積は、約７００〜１０００μｌである。

他の態様では、約１μｌ〜１５０ｍＬの体積を選択することができ、成人については大きめの体積が選択される。典型的には、新生幼児については、適切な体積は、約０．５ｍＬ〜約１０ｍＬである。少し年齢が進んだ幼児については、約０．５ｍＬ〜約１５ｍＬが選択され得る。ちょうど歩き始める年代の幼児については、約０．５ｍＬ〜約２０ｍＬの体積が選択され得る。小児については、最大約３０ｍＬの体積が選択され得る。約１１〜１２歳の小児及び約１３歳〜１９歳の若年者については、最大約５０ｍＬの体積が選択され得る。さらに他の態様では、患者へのくも膜下腔内投与の体積として、約５ｍＬ〜約１５ｍＬまたは約７．５ｍＬ〜約１０ｍＬが選択され得る。他の適切な体積及び用量も決定され得る。用量は、任意の副作用に対する治療効果のバランスがとれるように調節されることになり、そのような用量は、組換えベクターが用いられる治療用途に応じて変わり得る。

組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター（例えば、ｒＡＡＶ内にパッケージングされたもの）中のもの）は、適切な方法を使用して宿主細胞に送達され得る。ｒＡＡＶは、好ましくは、生理学的に適合性の担体に懸濁され、ヒト患者または非ヒト哺乳類患者に投与され得る。いくつかの態様では、組成物は、担体、希釈剤、医薬品添加物、及び／または補助剤を含む。適切な担体は、投与経路に合うように選択され得る。例えば、適切な担体の１つには生理食塩水が含まれ、こうした生理食塩水は、さまざまな緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）を用いて製剤化され得る。他の担体の例としては、滅菌生理食塩水、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストラン、寒天、ペクチン、ピーナッツ油、ゴマ油、及び水が挙げられる。

いくつかの態様では、組成物は、ｒＡＡＶ及び／またはＡＳＯならびに担体（複数可）に加えて、他の従来の医薬成分（保存剤または化学安定化剤など）も含み得る。適切な保存剤の例としては、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、及びパラクロロフェノールが挙げられる。適切な化学安定化剤には、ゼラチン及びアルブミンが含まれる。

いくつかの態様では、ｒＡＡＶ及び／またはＡＳＯを含む組成物は、医薬的に許容可能な担体を含み、及び／または注射、浸透圧ポンプ、くも膜下腔内カテーテルを介して対象に送達されるように設計された適切な医薬品添加物、または別の機器もしくは経路によって送達されるように設計された適切な医薬品添加物、と混合され得る。一例では、組成物は、くも膜下腔内送達向けに製剤化される。いくつかの態様では、くも膜下腔内送達は、脊柱管（例えば、くも膜下腔）への注射を含む。

本出願に記載のウイルスベクターは、ＳＭＮ１を、それを必要とする対象（例えば、ヒト患者）に送達し、機能性ＳＭＮを対象に供給し、及び／または１つ以上のＳＭＮ２ ＡＳＯとの併用療法において脊髄性筋萎縮症を治療するための薬剤の調製において使用され得る。

いくつかの態様では、ｒＡＡＶを含む医薬製剤の緩衝剤、担体、及び／または他の成分は、注入管へのｒＡＡＶの付着は阻止するが、インビボでのｒＡＡＶの結合活性は妨害しない１つ以上の成分を含むように選択される。ＡＳＯと合剤化する場合についても、ＡＳＯとの望ましくない相互作用が回避されるように緩衝剤、担体、及び／または他の成分が選択され得る。

いくつかの態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、単独送達向けに製剤化されるか、または組換えＳＭＮ１遺伝子と合剤化される（例えば、ＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸を含むｒＡＡＶと合剤化される）。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり５ｍｇ〜６０ｍｇの範囲のＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり５ｍｇ〜２０ｍｇの範囲のＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇ〜５０ｍｇの範囲のＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇ〜４８ｍｇの範囲のＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇ〜３６ｍｇの範囲のＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり２８ｍｇのＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇのＡＳＯ量での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかのそのような態様では、用量体積は、５ｍＬである。

いくつかのそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ（ＡＳＯ／患者体重）の範囲での送達（例えば、全身投与）向けに（単独で、または組換えＳＭＮ１遺伝子と一緒に）製剤化される。いくつかの態様では、用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、０．５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである。

いくつかの態様では、対象へのＡＳＯの投薬は、誘導期及び維持期に分けられる。いくつかのそのような態様では、誘導期の間の投与用量は、維持期の間の投与用量と比較して多い。いくつかの態様では、誘導期の間の投与用量は、維持期の間の投与用量と比較して少ない。いくつかの態様では、誘導期は、ボーラス注射によって達成され、維持期は、持続注入によって達成される。いくつかの態様では、誘導期の間は複合製剤が使用される。

いくつかの態様では、医薬組成物は、ボーラス注射として投与される。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計５ｍｇ〜６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計５ｍｇ〜２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇ〜５０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇ〜４８ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇ〜３６ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計２８ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含む。いくつかのそのような態様では、用量体積は、５ｍＬである。

いくつかの態様では、医薬組成物は、ボーラス注射として投与される。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．０１〜２５ミリグラムである。いくつかのそのような態様では、ボーラス注射の用量は、対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．０１〜１０ミリグラムである。いくつかの態様では、用量は、対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．０５〜５ミリグラムである。いくつかの態様では、用量は、対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．１〜２ミリグラムである。いくつかの態様では、用量は、対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．５〜１ミリグラムである。

いくつかの態様では、そのような用量は、１ヶ月に２回投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、１ヶ月ごとに投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、２ヶ月ごとに投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、６ヶ月ごとに投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、ＣＳＦへのボーラス注射によって投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、くも膜下腔内ボーラス注射によって投与される。いくつかの態様では、そのような用量は、ボーラス全身注射（例えば、皮下注射、筋肉内注射、または静脈内注射）によって投与される。いくつかの態様では、ＣＳＦへのボーラス注射及びボーラス全身注射が対象に施される。そのような態様では、ＣＳＦボーラスの用量と全身ボーラスの用量とは、互いに同じまたは異なり得る。いくつかの態様では、ＣＳＦ用量及び全身用量は、異なる頻度で投与される。いくつかの態様では、本発明は、少なくとも１回のボーラスくも膜下腔内注射及び少なくとも１回のボーラス皮下注射を含む投薬レジメンを提供する。

いくつかの態様では、医薬組成物は、持続注入によって投与される（例えば、一定期間（例えば、２４時間）にわたって用量が投与され得る）。そのような持続注入は、ＣＳＦに医薬組成物を送達する注入ポンプによって達成され得る。いくつかの態様では、そのような注入ポンプは、医薬組成物をＩＴまたはＩＣＶに送達する。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）５ｍｇ〜６０ｍｇである。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）５ｍｇ〜２０ｍｇである。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）１２ｍｇ〜５０ｍｇである。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）１２ｍｇ〜４８ｍｇである。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）１２ｍｇ〜３６ｍｇである。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）２８ｍｇである。いくつかのそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たりアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）１２ｍｇである。いくつかのそのような態様では、用量体積は、５ｍＬである。

他の態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．０５〜２５ミリグラムである。いくつかの態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．１〜１０ミリグラムである。いくつかの態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．５〜１０ミリグラムである。いくつかの態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物０．５〜５ミリグラムである。いくつかの態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重キログラム当たりアンチセンス化合物１〜５ミリグラムである。いくつかの態様では、本発明は、ＣＮＳへの注入及び少なくとも１回のボーラス全身注射を含む投薬レジメンを提供する。いくつかの態様では、本発明は、ＣＮＳへの注入及び少なくとも１回のボーラス皮下注射を含む投薬レジメンを提供する。いくつかの態様では、用量は、ボーラスまたは注入を問わず、アンチセンス化合物の濃度がＣＮＳ組織グラム当たり０．１〜１００マイクログラムを達成または維持するように調節される。いくつかの態様では、用量は、ボーラスまたは注入を問わず、アンチセンス化合物の濃度がＣＮＳ組織グラム当たり１〜１０マイクログラムを達成または維持するように調節される。いくつかの態様では、用量は、ボーラスまたは注入を問わず、アンチセンス化合物の濃度がＣＮＳ組織グラム当たり０．１〜１マイクログラムを達成または維持するように調節される。

いくつかの態様では、本発明は、ＣＮＳへの注入及び少なくとも１回のボーラス全身注射を含む投薬レジメンを提供する。いくつかの態様では、本発明は、ＣＮＳへの注入及び少なくとも１回のボーラス皮下注射を含む投薬レジメンを提供する。いくつかの態様では、用量は、ボーラスまたは注入を問わず、アンチセンス化合物の濃度がＣＮＳ組織グラム当たり０．１〜１００マイクログラムを達成または維持するように調節される。いくつかの態様では、用量は、ボーラスまたは注入を問わず、アンチセンス化合物の濃度がＣＮＳ組織グラム当たり１〜１０マイクログラムを達成または維持するように調節される。いくつかの態様では、用量は、ボーラスまたは注入を問わず、アンチセンス化合物の濃度がＣＮＳ組織グラム当たり０．１〜１マイクログラムを達成または維持するように調節される。

したがって、いくつかの態様では、本発明は、１つ以上の治療用分子（例えば、１つ以上の組換え核酸（例えば、ウイルスベクター（例えば、ｒＡＡＶ内にパッケージングされたもの）中のもの））及び／またはアンチセンス化合物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、そのような医薬組成物は、滅菌生理食塩水及び１つ以上の治療用分子を含む。いくつかの態様では、そのような医薬組成物は、滅菌生理食塩水及び１つ以上の治療用分子からなる。いくつかの態様では、治療用分子は、医薬組成物または製剤を調製するための医薬的に許容可能な活性物質及び／または不活性物質と混合され得る。医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法は、多くの基準に依存し、こうした基準には、限定されないが、投与経路、疾患度合い、または投与用量が含まれる。いくつかの態様では、治療用分子は、そのような治療用分子を適切な医薬的に許容可能な希釈剤または担体と組み合わせることによって医薬組成物において利用され得る。いくつかの態様では、医薬的に許容可能な希釈剤には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。ＰＢＳは、非経口的に送達すべき組成物における使用に適した希釈剤である。したがって、いくつかの態様では、１つ以上の治療用分子と、医薬的に許容可能な希釈剤と、を含む医薬組成物が、本明細書に記載の方法において用いられる。いくつかの態様では、医薬的に許容可能な希釈剤は、ＰＢＳである。本出願に記載の治療用分子を１つ以上含む医薬組成物は、任意の医薬的に許容可能な塩、エステル、またはそのようなエステルの塩を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯを含む医薬組成物は、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含み、この１つ以上のオリゴヌクレオチドは、ヒトを含む動物に投与されると、その生物学的に活性な代謝物または残留物を（直接的または間接的に）生成する能力を有する。したがって、いくつかの態様では、ＡＳＯの医薬的に許容可能な塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの医薬的に許容可能な塩、及び他の生物学的均等物が提供される。適切な医薬的に許容可能な塩には、限定されないが、ナトリウム塩及びカリウム塩が含まれる。

いくつかの態様では、プロドラッグには、オリゴマー化合物の一方または両方の末端に追加のヌクレオシドを含めたものが含まれ得、当該追加のヌクレオシドが体内の内在性ヌクレアーゼによって切断されると、活性なアンチセンスオリゴマー化合物が形成される。さまざまな方法の核酸治療において、脂質ベースのベクターが使用されている。例えば、１つの方法では、カチオン性脂質と中性脂質との混合物から構成される事前に形成されたリポソームまたはリポプレックスに核酸が導入される。別の方法では、中性脂質の非存在下でモノ−カチオン性またはポリ−カチオン性の脂質とのＤＮＡ複合体が形成される。Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２６，５６１−５６９（１ Ｍａｙ ２００８）（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）では、いくつかの調製物について記載されている。

キット
いくつかの態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中のもの）及び／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（これらは、例えば、医薬組成物中に含まれる）を含むキットが提供される。いくつかの態様では、そのようなキットは、追加の治療剤（１つ以上の免疫抑制剤など）をさらに含む。いくつかの態様では、そのようなキットは、送達手段（例えば、シリンジまたは注入ポンプ）をさらに含む。

下記の実施例は例示にすぎず、本発明の限定を意図するものではない。

実施例１：ｈＳＭＮ１遺伝子を含むｒＡＡＶベクター
コドン最適化ヒトＳＭＮ１ ｃＤＮＡを保有する組換え向神経性ＡＡＶウイルスを構築した。

実施例２：（例えば、ｈＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進することによって）全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ
全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）を調製した（図３）。

実施例３：ｈＳＭＮ１遺伝子を含むＡＡＶベクターと、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）と、の投与及び生体内分布。
実施例１に記載のｒＡＡＶと、実施例２に記載のＡＳＯとが、動物ＳＭＡ疾患モデル及び対照動物（マウス、ブタ、及び非ヒト霊長類（例えば、マカク）のＳＭＡ疾患モデル及び対照動物モデルを含む）に投与される。

ｒＡＡＶ及びＡＳＯは、くも膜下腔内経路及び全身経路（例えば、腰椎穿刺送達、大槽内送達、及び静脈内送達を介するもの）を含めて、異なる経路を介して投与される。

動物モデルにおいてｒＡＡＶ及びＡＳＯの分布が評価される。具体的には、脊髄内での分布が評価されることで、例えば、脊髄の頸部、胸部、及び腰部におけるｒＡＡＶ及び／またはＡＳＯの相対量が決定される。

図４は、腰椎穿刺送達または大槽内送達を介して３×１０^１３ＧＣのｒＡＡＶを投与した結果と、２×１０^１４ＧＣを静脈内に投与した結果とを示す。

実施例４：ｈＳＭＮ１遺伝子を含むｒＡＡＶベクターと、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）と、の合剤
図５は、ｒＡＡＶベクター（ｈＳＭＮ１遺伝子）と、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進するＡＳＯ）との両方を含む組成物を物理的及び生物学的に特徴付けた非限定的な例を示す。

図５Ａは、ｒＡＡＶベクター単独のＳＥＣ−ＨＰＬＣプロファイルを示す。図５Ｂは、ＡＳＯ単独のＳＥＣ−ＨＰＬＣプロファイルを示す。図５Ｃは、ｒＡＡＶベクター及びＡＳＯを同じ製剤中に一緒に配合したときのそれらのＳＥＣ−ＨＰＬＣプロファイルを示す。ｒＡＡＶベクターのＨＰＬＣプロファイル及びＡＳＯのＨＰＬＣプロファイルは、図５Ｃにおいて変化しておらず、このことは、ｒＡＡＶとＡＳＯとを合剤化しても顕著な不適合性は生じないことを示している。

図５Ｄは、ｒＡＡＶベクター単独での送達、またはｒＡＡＶベクターとＡＳＯとを組み合わせての送達を行った際の、インビトロでの細胞へのｒＡＡＶの感染力についてのデータを提供する。この結果は、合剤中にＡＳＯが存在していてもｒＡＡＶの感染力が顕著な影響を受けないことを示す。

図５Ｅは、ｒＡＡＶ、ＡＳＯ、または両方での処理後の細胞における細胞内ＳＭＮタンパク質発現レベル及びＧＥＭ形成を示す。

実施例５：ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の脳室内（ＩＣＶ）投与
マイクロ浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴ Ｏｓｍｏｔｉｃ Ｐｕｍｐｓ，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）を使用することで、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子を有する新生仔（Ｐ０〜Ｐ１）ＳＭＡマウスの脳脊髄液（ＣＳＦ）に右側脳室を介してヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１が送達される。低用量または高用量のヌシネルセン（それぞれ１μｇ及び４μｇ）が、低用量または高用量のＡＡＶ−ＳＭＮ１（それぞれ１×１０^１０ＧＣまたは８×１０^１０ＧＣ）と共に出生時点（Ｐ０〜Ｐ１）のマウスに投与される。マウスの体重及び立ち直り反射が測定され、ヌシネルセンまたはＡＡＶ−ＳＭＮ１のいずれかが単独投与されている同じ遺伝子型の対照マウスの体重及び立ち直り反射と比較される。

ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の両方が投与されたマウスは、対照と比較して体重が有意に重くなり、立ち直り反射が有意に早くなる。

ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１を脳室内（ＩＣＶ）投与すると、脊髄中にＳＭＮ２エクソン７が含まれることが増加することが試験によって明らかにされることになる。対照と比較して、ＳＭＮ発現が増加している脊髄運動ニューロンの数が増加することが、さらなる試験によって示されることになる。

実施例６：ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物の投与
マイクロ浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴ Ｏｓｍｏｔｉｃ Ｐｕｍｐｓ，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）を使用することで、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子を有する新生仔（Ｐ０〜Ｐ１）ＳＭＡマウスの脳脊髄液（ＣＳＦ）に右側脳室を介してヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物が送達される。低用量のヌシネルセン（１μｇ）及び低用量のＡＡＶ−ＳＭＮ１（１×１０^１０ＧＣ）の組成物、または低用量のヌシネルセン（１μｇ）及び高用量のＡＡＶ−ＳＭＮ１（８×１０^１０ＧＣ）の組成物、または高用量のヌシネルセン（４μｇ）及び低用量のＡＡＶ−ＳＭＮ１（１×１０^１０ＧＣ）の組成物、または高用量のヌシネルセン（４μｇ）及び高用量のＡＡＶ−ＳＭＮ１（８×１０^１０ＧＣ）の組成物が、出生時点（Ｐ０〜Ｐ１）のマウスに投与される。マウスの体重及び立ち直り反射が測定され、ヌシネルセンまたはＡＡＶ−ＳＭＮ１のいずれかが単独投与されている同じ遺伝子型の対照マウスの体重及び立ち直り反射と比較される。

ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物が投与されたマウスは、対照と比較して体重が有意に重くなり、立ち直り反射が有意に早くなる。

ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物を脳室内（ＩＣＶ）投与すると、脊髄中にＳＭＮ２エクソン７が含まれることが増加することが試験によって明らかにされることになる。対照と比較して、ＳＭＮ発現が増加している脊髄運動ニューロンの数が増加することが、さらなる試験によって示されることになる。

実施例７：非ヒト哺乳類におけるヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の投与及び分布分析
ＳＭＡマウス、ＳＭＡアカゲザル、及びＳＭＡカニクイザルを使用することで、異なる用量及び投与経路でのヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物の分布が評価される。ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物は、脳室内（ＩＣＶ）注入またはくも膜下腔内（ＩＴ）注入によって約１ｍｇ／ｋｇの用量で何匹かのマウス及び何匹かのサルに２４時間にわたって投与される。注入時間の終了から９６時間後に動物が屠殺され、組織が回収される。脊髄の頸部、胸部、及び腰部に由来する試料中のヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の濃度が測定される。

上記のものと同じ遺伝子型の追加のマウス、アカゲザル、及びカニクイザルに対して、ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１組成物がＩＣＶ注入またはＩＴ注入によって同じ用量（約１ｍｇ／ｋｇ）で投与される。これらの動物は、ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の組成物を３日間、７日間、または１４日間にわたって投与された後、注入期間の終了から５日後に屠殺される。

実施例８：ヒト対象に対するヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の投与
脳室内（ＩＣＶ）、静脈内（ＩＶ）、及びくも膜下腔内（ＩＰ）（例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）送達及び／または大槽内（ＩＣＭ）送達を介するもの）を含む経路を使用してヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１がヒト対象に投与される。組成物は、小児及び成人の両方において試験される。

いくつかの態様では、ｒＡＡＶ−ＳＭＮ１組成物が、約１×１０^１４ＧＣの用量で小児（例えば、ＳＭＡを有する小児）に投与され、この投与は、例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）注入によって（例えば、２４時間にわたって）行われる。いくつかの態様では、ｒＡＡＶ−ＳＭＮ１組成物が、約１．５×１０^１４ＧＣの用量で成人（例えば、ＳＭＡを有する成人）に投与され、この投与は、例えば、大槽内（ＩＣＭ）注入によって（例えば、２４時間にわたって）行われる。

いくつかの態様では、他のｒＡＡＶ−ＳＭＮ１用量を使用することができ、こうした用量は、例えば、約５〜６×１０^１３ＧＣ以上、例えば、約１．２×１０^１４ＧＣ、または１．５〜１．８×１０^１４ＧＣである。任意の適切な投与経路を使用することができ、こうした投与経路は、例えば、ＩＴ送達を介するもの（例えば、２４時間にわたる注入）、例えば、ＬＰ送達またはＩＣＭ送達を介するものである。

実施例９：ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の脳室内（ＩＣＶ）投与
ヒトＳＭＮ２導入遺伝子を有する新生仔（Ｐ０〜Ｐ１）ＳＭＡマウスにヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１を投与した。低用量または高用量のヌシネルセン（それぞれ１μｇ及び３μｇ）を、低用量または高用量のＡＡＶ−ＳＭＮ１（それぞれ１×１０^１０ＧＣまたは３×１０^１０ＧＣ）と共に、出生時点（Ｐ０〜Ｐ１）のマウスに投与した。マウスの体重及び立ち直り反射を測定し、ヌシネルセンまたはＡＡＶ−ＳＭＮ１のいずれかが単独投与されている同じ遺伝子型の対照マウスの体重及び立ち直り反射と比較した。

ヌシネルセン及びＡＡＶ−ＳＭＮ１の両方が投与されたマウスは、対照と比較して体重が有意に重く、立ち直り反射が有意に早い。

図６Ａ〜６Ｂは、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶベクター中のもの）またはＡＳＯ（ヌシネルセンなど）（例えば、単回用量中のもの）のいずれかを用いたものを示す。この実験は、投薬後に、出生後日数（ＰＮＤ）８の時点で運動機能が部分的に救援され^＊＊、ＰＮＤ１６の時点で運動機能が完全に救援されたことを示す。図６Ａは、ヌシネルセンの投与から８日後及び１６日後の４つの別々の群のマウスの立ち直り反射（ＲＲ）を示す。図６Ｂは、ヌシネルセンの投与から８日後及び１６日後の４つの別々の群のマウスの体重を示す。併用療法を用いれば、単剤療法で見られたＲＲ（ＰＮＤ７〜１６）及び体重の部分的な救援に改善が加わる可能性がある。

図７Ａ〜７Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療とヌシネルセンとを組み合わせたときの体重及びＲＲに対する効果を示す１回目の併用療法試験の結果を示す。図７Ａは、体重変化を経時的に示す。図７Ｂは、ＲＲの変化を経時的に示す。図７Ｃは、試験した３つの動物群について条件の概要を示すチャートである。

図８Ａ〜８Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療とヌシネルセンとを組み合わせたときの体重及びＲＲに対する効果を示す２回目の併用療法の結果を示す。図８Ａは、試験した３つの動物群について条件の概要を示すチャートである。図８Ｂは、体重変化を経時的に示し、図８Ｃは、ＲＲの変化を（日数で）経時的に示す。

図９Ａ〜９Ｂは、ＰＮＤ７〜ＰＮＤ１３における体重の変化％を比較したものを示す。図９Ａは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇでの体重の変化％を示す。図９Ｂは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇでの体重の変化％を示す。図１０Ａ〜１０Ｂは、ＰＮＤ７〜ＰＮＤ１３におけるＲＲの変化％を比較したものを示す。図１０Ａは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇでのＲＲの変化％を示す。図１０Ｂは、一定用量の遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇでのＲＲの変化％を示す。

他の態様
本明細書に開示の特徴はすべて、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示の各特徴は、同じ、同等、または同様の目的を果たす代替の特徴によって置き換えることができる。したがって、別段の明確な記載がない限り、開示の各特徴は、一般的な一連の同等または同様の特徴の一例にすぎない。

上記の説明から、当業者なら、本開示の必要不可欠な特徴を容易に確かめることができ、その趣旨及び範囲を逸脱することなく、本開示に対してさまざまな変更及び改変を加えてそれをさまざまな用法及び条件に適応させることができる。したがって、他の態様のまた、特許請求の範囲に含まれる。

均等物
本明細書には発明の態様がいくつか記載及び例示されているが、本明細書に記載の機能を実施し、及び／または本明細書に記載の結果を得、及び／または本明細書に記載の利点の１つ以上を得るためのさまざまな他の手段及び／または構造を当業者なら容易に構想するであろうし、そのような変形及び／または改変はそれぞれ、本明細書に記載の発明の態様の範囲に含まれるものと見なされる。より一般には、本明細書に記載のパラメーター、寸法、材料、及び配置はすべて、例示を意図するものであり、実際のパラメーター、寸法、材料、及び／または配置は、本発明の教示事項の使用目的である特定の用途（複数可）に依存することになることを当業者なら容易に理解するであろう。当業者なら、日常的な実験手法を使用するだけで、本明細書に記載の特定の発明の態様の均等物を多く認識または確かめることができるであろう。したがって、前述の態様が例示にすぎないものであり、添付の特許請求の範囲及びそれに対する均等物の範囲内で、具体的に記載及び請求される以外の様式で発明の態様を実施できることが理解されよう。本開示の発明の態様は、本明細書に記載のそれぞれの特徴、系、物品、材料、キット、及び／または方法を個別に対象とする。さらに、２つ以上のそのような特徴、系、物品、材料、キット、及び／または方法の組み合わせはいずれも、そのような特徴、系、物品、材料、キット、及び／または方法が互いに不整合でないならば、本開示の発明の範囲に含まれる。

本明細書で規定及び使用される定義はすべて、辞書の定義、参照によって組み込まれる文書における定義、及び／または定義される用語の通常の意味に優先することを理解されたい。

本明細書に開示の参考文献、特許、及び特許出願はすべて、それぞれの引用目的の対象に関して参照によって組み込まれ、そうした対象は、場合によっては、文書の全体を包含し得るものである。

本明細書及び特許請求の範囲で使用される「ａ」及び「ａｎ」という不定冠詞は、異なる定義が明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味することを理解されたい。

本明細書及び特許請求の範囲で使用される「及び／または」という語句は、そのように等位接続される要素、すなわち、接続的に存在することもあれば、離接的に存在することもある要素の「いずれかまたは両方」を意味することを理解されたい。「及び／または」を用いて列挙される複数の要素は、同じ様式で解釈すべきであり、すなわち、そのように等位接続される要素のうちの「１つ以上」であると解釈すべきである。「及び／または」節によって具体的に特定される要素以外にも、具体的に特定されるそうした要素との関連の有無にかかわらず、他の要素が任意選択で存在し得る。したがって、非限定的な例として、「Ａ及び／またはＢ」に対する参照は、非限定型の言葉（「含む」など）と併用される場合、一実施形態では、Ａのみ（Ｂ以外の要素を任意選択で含む）を指し、別の実施形態では、Ｂのみ（Ａ以外の要素を任意選択で含む）を指し、さらに別の実施形態では、Ａ及びＢの両方（他の要素を任意選択で含む）を指すなどし得る。

本明細書及び特許請求の範囲で使用される「または」は、上に定義される「及び／または」と同じ意味を有することを理解されたい。例えば、リストの項目が「または」あるいは「及び／または」によって分離されている場合、そうした「または」あるいは「及び／または」は包含的であり、すなわち、いくつかの要素または一連の要素のうちの少なくとも１つを含むだけなく、そのうちの複数も含み、さらには、任意選択で、列挙されていない項目も追加で含むと解釈されるものとする。これと異なることを明確に示す用語（「のうちの１つのみ」もしくは「のうちの厳密に１つ」、または特許請求の範囲で使用される場合は、「からなる」など）のみが、いくつかの要素または一連の要素のうちの厳密に１つの要素を含むことを指すことになる。一般に、本明細書で使用される「または」という用語は、排他性の用語（「いずれか」、「のうちの１つ」、「のうちの１つのみ」、または「のうちの厳密に１つ」など）に先行する場合、排他的選択肢を指すもの（すなわち、「一方またはもう一方であるが、両方ではない」）としてのみ解釈されるものとする。「から本質的になる」は、特許請求の範囲で使用される場合、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有するものとする。

１つ以上の要素のリストに関して本明細書及び特許請求の範囲で使用される「少なくとも１つ」という語句は、要素のリスト中の要素のうちの任意の１つ以上から要素が少なくとも１つ選択されることを意味するが、要素のリスト中に具体的に列挙されるありとあらゆる要素のうちの少なくとも１つを含むことは必ずしも必要なく、さらには、要素のリスト中の要素の任意の組み合わせを除外しないことを理解されたい。この定義では、「少なくとも１つ」という語句が指す要素のリスト中で具体的に特定される要素以外の要素が、具体的に特定されるそうした要素との関連の有無にかかわらず、任意選択で存在し得ることも許容される。したがって、非限定的な例として、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」（あるいは同等の「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、あるいは同等の「Ａ及び／またはＢのうちの少なくとも１つ」）は、一実施形態では、Ｂが存在しない少なくとも１つのＡ（任意選択で複数のＡを含む）（加えて任意選択でＢ以外の要素を含む）を指し、別の実施形態では、Ａが存在しない少なくとも１つのＢ（任意選択で複数のＢを含む）（加えて任意選択でＡ以外の要素を含む）を指し、さらに別の実施形態では、少なくとも１つのＡ（任意選択で複数のＡを含む）及び少なくとも１つのＢ（任意選択で複数のＢを含む）（加えて任意選択で他の要素を含む）を指すなどし得る。

異なる定義が明確に示されない限り、本明細書で請求される方法が複数のステップまたは行為を含む場合、そうした方法のいずれにおいても、そうした方法のそうしたステップまたは行為の順序は、そうした方法のそうしたステップまたは行為が記載される順序に必ずしも限定されないことも理解されたい。

特許請求の範囲ならびに本明細書の上部では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「保有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「から構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆ）」、及び同様のものなどの移行句はすべて、非限定的であり、すなわち、含むが、限定されないという意味を有することが理解されよう。「からなる」及び「から本質的になる」という移行句のみが、それぞれ限定的または半限定的な移行句となるものとし、このことは、米国特許庁特許審査便覧のセクション２１１１．０３に記載されている。非限定型の移行句（例えば、「含む」）を使用して本文書中に記載される態様は、代替の態様では、そうした非限定型の移行句によって記載される特徴「からなる」及び当該特徴「から本質的になる」も企図するものであることを理解されたい。例えば、本開示において「Ａ及びＢを含む組成物」と記載される場合、本開示は、「Ａ及びＢからなる組成物」及び「Ａ及びＢから本質的になる組成物」という代替の態様も企図する。

本出願に添付される配列表は、必要に応じて各配列を「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして特定するものであるが、実際には、そうした配列は、化学修飾の任意の組み合わせで修飾され得る。修飾オリゴヌクレオチドを説明するためになされる「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」としてのそのような指定は、場合によっては、任意であることを当業者なら容易に理解するであろう。例えば、２’−ＯＨ糖部分及びチミン塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾糖（ＤＮＡの天然の２’−Ｈが２’−ＯＨとなっている）を有するＤＮＡ、または修飾塩基（ＲＮＡの天然のウラシルがチミンとなっている（ウラシルがメチル化されている））を有するＲＮＡとして説明され得る。

したがって、本明細書で提供される核酸配列は、限定されないが、配列表に記載のものを含めて、天然のＲＮＡ及び／またはＤＮＡあるいは修飾されたＲＮＡ及び／またはＤＮＡを任意の組み合わせで含む核酸（限定されないが、修飾核酸塩基を有するそのような核酸を含む）を包含することが意図される。限定されないが、追加例として、「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」という核酸塩基配列を有するオリゴマー化合物は、修飾の有無にかかわらず、そのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴマー化合物を包含し、こうしたオリゴマー化合物には、限定されないが、ＲＮＡ塩基を含むそのような化合物（「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」という配列を有するものなど）、ならびにいくつかのＤＮＡ塩基及びいくつかのＲＮＡ塩基を有するもの（「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」など）、ならびに他の修飾核酸塩基を有するオリゴマー化合物（「ＡＴ“ＣＧＡＵＣＧ」（配列中、“Ｃは、５位にメチル基を含むシトシン塩基を示す）など）が含まれる。

Claims (44)

1. 脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡの治療方法であって、前記方法が、
   ａ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸と、
   ｂ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）と、
   を前記対象に投与することを含む、前記方法。
2. 前記対象が、ＳＭＡの症状を１つ以上有する、請求項１に記載の方法。
3. 前記症状が、四肢筋萎縮、歩行困難もしくは歩行不能、または呼吸困難を含む、請求項２に記載の方法。
4. 前記対象が、小児集団及び成人集団から選択されるヒト対象である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記対象が、１８歳以上である、請求項４に記載の方法。
6. 前記対象が、１８歳未満である、請求項５に記載の方法。
7. 前記対象が、約２週齢、約１ヶ月齢、約３ヶ月齢、約６ヶ月齢、約１歳、約２歳、約３歳、約４歳、または約５歳である、請求項６に記載の方法。
8. 前記ＡＳＯが、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングパターンを変化させる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記ＡＳＯが、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡ中にエクソン７が含まれることを促進する、請求項８に記載の方法。
10. 前記ＡＳＯが、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン６またはイントロン７に相補的な配列を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記ＡＳＯが、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン６に相補的な配列を含む、請求項１０に記載の方法。
12. 前記ＡＳＯが、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン７に相補的な配列を含む、請求項１０に記載の方法。
13. 前記ＡＳＯが、配列番号１の核酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記ＡＳＯが、ヌシネルセンである、請求項１３に記載の方法。
15. 前記ＡＳＯが、１つ以上の核酸塩基修飾または骨格修飾を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記組換え核酸が、前記ＳＭＮ１遺伝子に機能可能なように連結されたプロモーターを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
17. 前記組換え核酸が、隣接ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ゲノムである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 前記組換え核酸がｒＡＡＶ粒子内にパッケージングされ、前記ｒＡＡＶ粒子が前記対象に投与される、請求項１７に記載の方法。
19. 前記ｒＡＡＶ粒子が、ＡＡＶ９カプシドタンパク質を含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、同じ時刻に投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、同時に投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
22. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、単一の組成物において一緒に投与される、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
23. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、別々の組成物において投与される、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
24. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、異なる頻度で投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、連続的に投与される、請求項１〜１９または請求項２４のいずれか１項に記載の方法。
26. 前記ＡＳＯが、１年に１〜６回投与される、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
27. 前記ｒＡＡＶが、１回投与される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが初回投与された後、前記ＡＳＯ単独の後続用量が２回以上投与される、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記ＳＭＮ１ ｒＡＡＶが、２×１０^１０〜２×１０^１４ＧＣの用量で投与され、前記ＡＳＯが、前記対象の体重キログラム当たり０．０１〜１０ミリグラムの用量で投与される、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 用量当たり合計５ｍｇ〜２０ｍｇのＡＳＯが前記対象に投与される、請求項２９に記載の方法。
31. 用量当たり１２ｍｇのＡＳＯが前記対象に投与される、請求項３０に記載の方法。
32. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、前記対象のくも膜下腔内に投与される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯが、前記対象の大槽内腔に投与される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
34. 前記ＡＳＯの初回用量及び／または後続用量が、静脈内または筋肉内に投与される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
35. 前記ｒＡＡＶ及び前記ＡＳＯの投与によって、前記対象の運動ニューロン中の細胞内ＳＭＮタンパク質レベルが上昇する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
36. 前記対象の頸髄部、胸髄部、及び腰髄部においてＳＭＮタンパク質レベルが上昇する、請求項３５に記載の方法。
37. 前記対象が、各ＳＭＮ１アレル中に欠失または機能喪失型点変異を有する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
38. 前記対象が、ＳＭＮ１遺伝子変異についてホモ接合型である、請求項３７に記載の方法。
39. 脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡの治療方法であって、前記方法が、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯで以前に治療された対象に対して、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶを含む組成物を有効量で投与することを含む、前記方法。
40. 脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡの治療方法であって、前記方法が、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶが以前に投与された対象に対して、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯを含む組成物を有効量で投与することを含む、前記方法。
41. ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶと、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる能力を有するＡＳＯと、を含む、組成物。
42. 前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ９カプシドタンパク質を含む、請求項４１に記載の組成物。
43. 前記ＡＳＯが、ヌシネルセンである、請求項４１または請求項４２に記載の組成物。
44. 請求項４１〜４３のいずれかに記載の組成物と、医薬的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物。

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