JP2021510162A - トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 - Google Patents
トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021510162A JP2021510162A JP2020538051A JP2020538051A JP2021510162A JP 2021510162 A JP2021510162 A JP 2021510162A JP 2020538051 A JP2020538051 A JP 2020538051A JP 2020538051 A JP2020538051 A JP 2020538051A JP 2021510162 A JP2021510162 A JP 2021510162A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- modified
- polypeptide
- seq
- tfr
- identity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 783
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 768
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 766
- 238000009739 binding Methods 0.000 title claims abstract description 479
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 473
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 title abstract description 404
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 title abstract 6
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims abstract description 292
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 200
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 200
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 84
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 8
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 584
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 claims description 435
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 362
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 240
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 222
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 48
- 108050003222 Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 claims description 44
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 41
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 33
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 6
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 claims description 6
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 233
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 223
- 230000006870 function Effects 0.000 description 209
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 57
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 52
- 102220472528 Protein ENL_T26E_mutation Human genes 0.000 description 47
- 102220132395 rs1057515456 Human genes 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 31
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 30
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 24
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 24
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 23
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical group NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 20
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 20
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 20
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical group NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 12
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 12
- 101000835093 Homo sapiens Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 11
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 10
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 10
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 9
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- -1 for example Chemical class 0.000 description 8
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 7
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 6
- 102000006471 Fucosyltransferases Human genes 0.000 description 6
- 108010019236 Fucosyltransferases Proteins 0.000 description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 5
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 5
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 4
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 4
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 3
- 102000014257 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 3
- SQTFKIKSQNCWGJ-KCDKBNATSA-N (2s,3r,4r,5s)-2-fluoro-3,4,5-trihydroxyhexanal Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](F)C=O SQTFKIKSQNCWGJ-KCDKBNATSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108010001017 CD71 antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N D-Cysteine Chemical compound SC[C@@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N D-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N D-Proline Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 229930195711 D-Serine Natural products 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 description 2
- 229930182847 D-glutamic acid Natural products 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 229930195715 D-glutamine Natural products 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- 229930195721 D-histidine Natural products 0.000 description 2
- 229930182845 D-isoleucine Natural products 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N D-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- 229930182818 D-methionine Natural products 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 2
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 2
- 229930182820 D-proline Natural products 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 2
- 229930182822 D-threonine Natural products 0.000 description 2
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 2
- 229930195709 D-tyrosine Natural products 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- 229930182831 D-valine Natural products 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 229930195710 D‐cysteine Natural products 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 101100495232 Homo sapiens MS4A1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 150000008267 fucoses Chemical class 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 1
- LQEBEXMHBLQMDB-UHFFFAOYSA-N GDP-L-fucose Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C3=C(C(N=C(N)N3)=O)N=C2)O1 LQEBEXMHBLQMDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQEBEXMHBLQMDB-JGQUBWHWSA-N GDP-beta-L-fucose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O1 LQEBEXMHBLQMDB-JGQUBWHWSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical group NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical class O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101000835089 Mus musculus Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- HOZBSSWDEKVXNO-QRLADXQJSA-N N[C@@H](C(=O)O)CC(=O)O.N[C@H](CC(=O)O)C(=O)O Chemical compound N[C@@H](C(=O)O)CC(=O)O.N[C@H](CC(=O)O)C(=O)O HOZBSSWDEKVXNO-QRLADXQJSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- ZVQOOHYFBIDMTQ-UHFFFAOYSA-N [methyl(oxido){1-[6-(trifluoromethyl)pyridin-3-yl]ethyl}-lambda(6)-sulfanylidene]cyanamide Chemical compound N#CN=S(C)(=O)C(C)C1=CC=C(C(F)(F)F)N=C1 ZVQOOHYFBIDMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Chemical class OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000267 glycino group Chemical group [H]N([*])C([H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O methylsulfide anion Chemical compound [SH2+]C LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 102220225985 rs1064796529 Human genes 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Chemical class ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001393 triammonium citrate Substances 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
Abstract
Description
本出願は、2018年1月10日出願の米国特許仮出願第62/615,914号、2018年2月15日出願の米国特許仮出願第62/631,281号、2018年6月8日出願の米国特許仮出願第62/682,639号、及び、2018年8月22日出願の米国特許仮出願第62/721,275号に基づく優先権を主張するものであり、当該各出願の開示内容をあらゆる目的でそれらの全容にわたって本明細書に参照により援用するものである。
本開示は、トランスフェリン受容体(TfR)に結合し、少なくとも1つのエフェクター機能活性(例えば、抗体依存性細胞傷害性(ADCC))を誘導することができるが、網状赤血球の大きな減少をもたらさない改変Fcポリペプチド二量体に関する。
(a)抗原に結合することが可能な抗体可変領域、またはその抗原結合フラグメントと、
(b)(i)TfR結合部位と、例えば、TfRに結合した時にFcγR結合を低減する1つ以上のアミノ酸改変(ただし、例えば、TfRに結合しない場合、FcγR結合の低減は限定されるか、または低減されない)とを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(ii)TfR結合部位もFcγR結合を低減させるいかなる改変も含まない第2のFcポリペプチドと
を含む改変Fcポリペプチド二量体と
を含む、BBBを通過して能動的に輸送されることが可能なFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質を特徴とする。
I.序論
TfR結合部位を含む改変Fcポリペプチド二量体はBBBを通過することができるだけでなく、BBBを通過して治療薬を輸送することができる。本明細書に記載されるように、網状赤血球もTfRを発現することから、これらのFcポリペプチド二量体は、エフェクター機能を低減させるように操作されなければ、インビボで網状赤血球も減少させ得る。網状赤血球の減少は、Fcポリペプチド二量体のFcポリペプチドのエフェクター機能をなくすような改変、すなわち、Fcγ受容体(FcγR)の結合をなくすかまたは低減するような改変(例えば、EU番号付けスキームを基準として番号付けした場合のL234A及びL235A(LALA)置換)を導入することによって回避することが可能である。しかしながら、このアプローチは、分子のFab部分がその標的に結合する際にエフェクター機能が望ましい場合(例えば、治療標的タンパク質)では不利となる。
本明細書で使用される単数形「a」、「an」、及び「the」には、内容によってそうでない旨が明確に示されない限り、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「ポリペプチド」と言った場合、2つ以上のそのような分子を含み得る、といった具合である。
このセクションでは、トランスフェリン受容体に結合し、血液脳関門(BBB)を通過して輸送されることが可能な改変Fcポリペプチドの作製について述べる。
いくつかの実施形態では、改変Fcポリペプチドは、IgGのCH3ドメインのような改変されたヒトIgのCH3ドメインを含む。CH3ドメインは、いずれのIgGのサブタイプ、すなわち、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のものであってもよい。IgG抗体との関連において、CH3ドメインとは、EU番号付けスキームにしたがって番号付けした場合に、約341位〜約447位までのアミノ酸のセグメントのことを指す。TfR結合のための対応するアミノ酸位置のセットを特定する目的でのCH3ドメイン内の位置は、特に指定されない限り、EU番号付けスキーム、SEQ ID NO:3、またはSEQ ID NO:1のアミノ酸111〜217を基準として決められる。置換もまた、EU番号付けスキームまたはSEQ ID NO:1を基準として決められ、すなわち、あるアミノ酸は、EU番号付けスキームまたはSEQ ID NO:1の対応する位置のアミノ酸に対して置換であるとみなされる。
いくつかの実施形態では、改変CH3ドメインポリペプチドは、EU番号付けスキームに従って380位、384位、386位、387位、388位、389位、390位、413位、415位、416位、及び421位を含むアミノ酸位置のセット(セットCH3C)に1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、または11個の置換を含む。これらの位置に導入することができる例示的な置換を表3に示す。更なる置換を表4に示す。いくつかの実施形態では、388及び/または421位のアミノ酸は芳香族アミノ酸(例えば、Trp、Phe、またはTyr)である。いくつかの実施形態では、388位のアミノ酸はTrpである。いくつかの実施形態では、388位のアミノ酸はGlyである。いくつかの実施形態では、421位の芳香族アミノ酸はTrpまたはPheである。
BBBを通過して輸送されることが可能な本明細書に記載されるポリペプチドは、FcRn結合部位を更に有してもよい。いくつかの実施形態では、FcRn結合部位は、改変Fcポリペプチドまたはそのフラグメント内にある。
TfRに結合し、BBBを通過する輸送を開始する本明細書で提供されるFcポリペプチドは、エフェクター機能を低下させる更なる変異を含むこともできる。本明細書に記載されるように、TfR結合部位と、FcγRの結合を低減する変異の両方をFcポリペプチド二量体の同じFcポリペプチドに導入することにより、TfRに結合した時のエフェクター機能を低下させ、網状赤血球を大きく減少させることなくTfRとの結合をもたらす一方で、Fcポリペプチド二量体が治療用Fabに融合されてFabの標的抗原に結合する場合にはエフェクター機能(例えば、ADCC及びCDC)を依然維持することが可能であった。
特定の態様では、本開示は、TfRに結合し、TfRに結合する場合のFcγRの結合が低減されるが、TfRに結合しない場合にはFcγRの結合の低減が限定的であるかまたは低減されないように改変されたエフェクター機能陽性のTfR結合Fcポリペプチド二量体を提供する。これらの改変Fcポリペプチド二量体を治療用Fabに融合することでFabをBBBを通過して輸送することができる。これらの改変Fcポリペプチド二量体は、TfRに結合した時のエフェクター機能が低減されることが示されている。改変Fcポリペプチド二量体がFabに融合される場合、Fcポリペプチド二量体は、Fabがその標的(例えば、がん細胞上の標的)に結合した時のエフェクター機能を維持する。このように、本明細書に記載されるエフェクター機能陽性のTfR結合Fcポリペプチド二量体は、網状赤血球(やはり細胞表面にTfRを有する)を大きく減少させることなくFabをBBBを通過して輸送することができ、また、Fabがその標的に結合した時に脳内の細胞外凝集体(例えば、プラーク)または特定の疾患細胞(例えば、がん細胞)に狙いを絞って破壊することができるエフェクター機能を示すことによりその治療目的を果たすことができる。
Fcポリペプチド二量体とFcγRとの間の結合親和性、結合速度論、及び交差反応性を分析するための方法は当該技術分野では周知のものである。これらの方法としては、これらに限定されるものではないが、固相結合アッセイ(例えば、ELISAアッセイ)、免疫沈降法、表面プラズモン共鳴(例えば、Biacore(商標)(GE Healthcare,Piscataway,NJ))、速度論的排除アッセイ(kinetic exclusion assay)(例えば、KinExA(登録商標))、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法(FACS)、バイオレイヤー干渉法(例えば、Octet(登録商標)(ForteBio,Inc.,Menlo Park,CA))、及びウェスタンブロット分析が挙げられる。いくつかの実施形態では、結合親和性及び/または交差反応性を調べるためにELISAが用いられる。ELISAアッセイを行うための方法は当該技術分野では周知のものである。いくつかの実施形態では、結合親和性、結合速度論、及び/または交差反応性を調べるために表面プラズモン共鳴(SPR)が用いられる。いくつかの実施形態では、結合親和性、結合速度論、及び/または交差反応性を調べるために速度論的排除アッセイが用いられる。いくつかの実施形態では、結合親和性、結合速度論、及び/または交差反応性を調べるためにバイオレイヤー干渉法が用いられる。
TfRに結合してBBBを通過する輸送を開始するように改変された、本明細書で提供されるFcポリペプチドは、例えば、血清中安定性または血清中半減期を増大させるため、エフェクター機能を調節するため、グリコシル化に影響を及ぼすため、ヒトにおける免疫原性を低下させるため、及び/または、Fcポリペプチドのノブ・アンド・ホール型のヘテロ二量化を可能とするための更なる変異を含んでもよい。
本明細書に記載される改変Fcポリペプチド(例えば、クローンCH3C.35.20.1、CH3C.35.23.2、CH3C.35.23.3、CH3C.35.23.4、CH3C.35.21.17.2、CH3C.35.23、CH3C.35.21、CH3C.35.20.1.1、CH3C.35.23.2.1、及びCH3C.35.23.1.1のうちのいずれか1つ)は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、ホール変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136S、L138A、及びY177V)、エフェクター機能を調節する変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のL4A、L5A、及び/またはP99G(例えば、L4A及びL5A))、及び/または血清中安定性または血清中半減期を増大させる変異(例えば、(i)SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のM22Y、S24T、及びT26E、あるいは(ii)SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合の、M198Lを伴うかまたは伴わないN204S)を含む更なる変異を含むことができる。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.20.1は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:177の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.20.1は、SEQ ID NO:177の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.23.2は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:189の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.23.2は、SEQ ID NO:189の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.23.3は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:201の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.23.3は、SEQ ID NO:201の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.23.4は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:213の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.23.4は、SEQ ID NO:213の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.21.17.2は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:225の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.21.17.2は、SEQ ID NO:225の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.23は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:237の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.23は、SEQ ID NO:237の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.21は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:250の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.21は、SEQ ID NO:250の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.20.1.1は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:285の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.20.1.1は、SEQ ID NO:285の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.23.2.1は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:297の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.23.2.1は、SEQ ID NO:297の配列を有する。
いくつかの実施形態では、クローンCH3C.35.23.1.1は、ノブ変異(例えば、SEQ ID NO:1を基準として番号付けした場合のT136W)、及びSEQ ID NO:309の配列と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ノブ変異を有するクローンCH3C.35.23.1.1は、SEQ ID NO:309の配列を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される改変TfR結合ポリペプチドは、タンパク質二量体のサブユニットである。いくつかの実施形態では、二量体はヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、二量体はホモ二量体である。いくつかの実施形態では、二量体は、TfR受容体に結合する1個のFcポリペプチドを含む(すなわちTfR受容体との結合について一価である)。いくつかの実施形態では、二量体は、TfR受容体に結合する第2のポリペプチドを含む。第2のポリペプチドは二価のホモ二量体タンパク質を与えるように同じ改変Fcポリペプチドを含んでもよく、または本明細書に記載される第2の改変Fcポリペプチドが第2のTfR受容体結合部位を与えてもよい。
いくつかの実施形態では、TfRに結合してBBBを通過する輸送を開始する改変ポリペプチドは、本明細書に記載される改変Fcポリペプチドを含み、部分的または完全なヒンジ領域を更に含む。ヒンジ領域は、いずれの免疫グロブリンサブクラスまたはアイソタイプからのものであってもよい。例示的な免疫グロブリンのヒンジの1つとして、IgG1のヒンジ領域(例えば、ヒトIgG1のヒンジのアミノ酸配列EPKSCDKTHTCPPCP(SEQ ID NO:62))などのIgGヒンジ領域がある。更なる実施形態では、ヒンジまたは部分的なヒンジ領域を含んでもよいポリペプチドを、別の部分、例えば免疫グロブリンの可変領域と更に融合することにより、TfR結合ポリペプチド−可変領域融合ポリペプチドが作製される。可変領域は、対象となる任意の抗原、例えば治療用の神経学的標的、または診断用の神経学的標的と結合することができる。
特定の用途では、本明細書に記載される改変Fcポリペプチドまたは改変Fcポリペプチド二量体にエフェクター機能(例えば、ADCC)を高める改変を導入することが望ましい。エフェクター機能を高める1つの方法は、低フコース化またはフコース欠損させた改変Fcポリペプチドまたは改変Fcポリペプチド二量体を生成することを含む。
本明細書に記載される改変TfR結合ポリペプチドは、通常は組換え法を用いて調製される。したがって、本発明は、本明細書に記載される改変Fcポリペプチドを含むポリペプチドのいずれかをコードする核酸配列を含む単離核酸、及び該ポリペプチドをコードする核酸を複製し、及び/または該ポリペプチドを発現させるために使用される核酸が導入された宿主細胞を提供するものである。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えばヒト細胞である。
以下の実施例は、本開示の具体的な実施形態を示すために含まれるものである。当業者によれば、以下の実施例に開示される技術は、本開示を実施するうえで効果的に機能する技術を代表するものであり、したがって、その実施の具体的な態様を構成するものとみなし得る点は認識されるはずである。しかしながら、当業者は、本開示を考慮することで、開示される具体的な実施形態に多くの変更を行うことが可能であり、それでもなお、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく同様または同等の結果を得ることができる点は認識されるはずである。
TfRに結合するFcポリペプチドを、CH3領域内の特定の位置としてコンビナトリアルライブラリーを用い、これらのライブラリーをヒトTfRに対する結合について選択することにより作製した。初期のTfR結合配列のアフィニティー成熟により、例えば、SEQ ID NO:66の配列を有するFcポリペプチドなどの特異的なTfR結合Fcポリペプチドが同定された。ヘテロ二量体のFcポリペプチド二量体を含むFcポリペプチド二量体−Fab融合体を、以下の3種類のポリペプチドをそれぞれ1:1:2の比で同時発現させることによって構築した。得られた四量体のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質をBACE1−3C.35.21と称する。
ノックイン/ノックアウトマウスの作製方法は文献に公開されており、当業者には周知のものである。要約すると、CRISPR/Cas9技術を用いてマウスTfrc遺伝子内でヒトTfrcアピカルドメインを発現するTfRms/huKIマウスを作製し、得られたキメラTfRを内因性プロモーターの制御下でインビボで発現させた。本明細書にその全容を参照により援用するところの国際出願第PCT/US2018/018302号に記載されるように、C57Bl6マウスを使用して単一細胞胚に前核マイクロインジェクションした後、偽妊娠雌に胚移植することにより、ヒトアピカルTfRマウス系統のノックインを作製した。具体的には、Cas9、SEQ ID NO:264及び265の配列を有するシングルガイドRNA、ならびにSEQ ID NO:267を有するドナーDNAを胚に導入する。ドナーDNAは、ヒトアピカルドメインのコーディング配列(マウスで発現させるためにコドン最適化したSEQ ID NO:266)を含むものとした。アピカルドメインのコーディング配列は、左側(SEQ ID NO:267のヌクレオチド1〜817)と右側のホモロジーアーム(SEQ ID NO:267のヌクレオチド1523〜2329)とによって挟まれたものとした。このように、アピカルドメインが4番目のマウスエクソンの後に挿入され、3’末端に9番目のエクソンが直接隣接するようにドナー配列を設計した。胚を移植した雌の子孫からのファウンダー雄を野生型の雌と交配してF1ヘテロ接合体マウスを作出した。次に、F1世代のヘテロ接合体マウスの交配によってホモ接合体マウスを作出した。
TfRに結合する抗体は、マウスに投与されると循環網状赤血球及び骨髄網状赤血球の両方を減少させることが示されている(例えば、Couch et al.,Sci Transl Med,5:183ra57,1−12,2013を参照)。実施例1に記載されるBACE1−3C.35.21に類似したFcポリペプチド二量体−Fab融合体を作製した。この、Fcポリペプチド二量体−Fab融合体を「BACE1−3C.35.212XLALA」と称し、以下を含む。(1)BACE1結合抗体の重鎖可変領域を有するFab領域と、ヒンジ領域と、「ノブ」変異(EU番号付けスキームに従ってT366W)、エフェクター機能を低減する変異(EU番号付けスキームに従ってL234A及びL235A)、及びTfR結合変異を有する改変Fcポリペプチドと、を有する重鎖(ヒンジ領域(SEQ ID NO:62)及びSEQ ID NO:252(ノブ及びLALA変異を有するクローンCH3C.35.21)に融合された抗BACE1 Fab領域);(2)BACE1結合抗体の重鎖可変領域を有するFab領域と、ヒンジ領域と、「ホール」変異(EU番号付けスキームに従ってT366S、L368A、及びY407V)及びエフェクター機能を低減する変異(EU番号付けスキームに従ってL234A及びL235A)を有する改変Fcポリペプチド(ヒンジ領域(SEQ ID NO:62)及びSEQ ID NO:253(ホール変異及びLALA変異を有するヒトFc配列)に融合された抗BACE1 Fab領域);及び(3)BACE1結合抗体の軽鎖可変領域をそれぞれ含む2本の軽鎖。
TfRは、骨髄中及び循環中の両方に存在する未成熟赤血球である網状赤血球で高度に発現する。完全なエフェクター機能を有するTfR抗体は、血中及び骨髄中の両方の網状赤血球を急速に減少させ得ることがこれまでに示されている。したがって、網状赤血球の減少は、TfRを用いた抗体治療における主要な安全性の問題である。しかしながら、TfRを用いた抗体のエフェクター機能の完全な除去は、特定の場合において、Fabの結合時にエフェクター機能が誘発されるが、治療用Fabに融合された操作されたTfR結合Fc領域のTfRへの結合時にはエフェクター機能が誘発されないことが望ましいことから、適当な解決策とは言えない。EU番号付けスキームに従ったL234A及びL235A(LALA)のようなFc変異は、Fcポリペプチド二量体へのFcγRの結合を減少させることから、Fcポリペプチド二量体の両方のFcポリペプチドにかかる変異を有する、Fabに融合された操作されたTfR結合Fcポリペプチド二量体は、TfRの結合または標的へのFabの結合のいずれによってもエフェクター機能を誘発することはできない。
シス形態またはトランス形態を有するFcポリペプチド二量体のどちらが網状赤血球の減少を減弱させることができるかを判定するため、本発明者らは、ホモ接合体のヒトTfRノックイン(TfRms/huKI)マウスを、これらのFcポリペプチド、及び対応する野生型ヒトIgG(hIgG)で処理し、これらの動物の末梢血及び骨髄の両方からの網状赤血球を分析した。循環網状赤血球を、Advia 120 Hematology Systemを使用して末梢血から定量した。要約すると、細胞をADVIA autoRETIC試薬で染色し、網状赤血球をRNA含量及び吸光度差に基づいて同定した。骨髄網状赤血球については、骨髄細胞を各動物の大腿骨から採取し、Fcブロッカー(抗マウスCD16/CD32)でブロックし、抗mTer119及び抗hCD71で染色し、蛍光活性化細胞分取法(FACS)により分析した。網状赤血球をFlowJo解析ソフトウェアを使用して、mTer119+、hCD71高、及びFSC低集団としてゲーティングした。分析の結果、シス形態(すなわち、一方のみのFcポリペプチドがTfR結合部位及びLALA変異の両方を含み、他方のFcポリペプチドはTfR結合部位もLALA変異も含まない)を有するFcポリペプチド二量体は、野生型hIgGコントロール及びトランス形態(すなわち、一方のFcポリペプチドがTfR結合部位を含み、他方のFcポリペプチドがLALA変異を含む)を有するFcポリペプチド二量体でみられた網状赤血球の減少を血中及び骨髄中の両方で低減した。驚くべきことに、シス形態を有するFcポリペプチドは25mg/kgでは、エフェクター機能を有するTfR結合ポリペプチドで通常みられる主要な安全性の問題を生じていない(図2A及び2B)。更に、この系に、TfR親和性の低いTfR結合ポリペプチドを使用して、50mg/kgの高用量でストレスをかけた。シス形態は、血中網状赤血球の減少を部分的に減弱したが、臨床上の安全性をより反映した骨髄網状赤血球の減少には影響しなかった(図2C及び2D)。これに対して、トランス形態を有するFcポリペプチド二量体は、血中及び骨髄網状赤血球を野生型IgGコントロールと同程度に減少させた。これらの結果は、シス形態を有するFcポリペプチド二量体は、インビボで網状赤血球の減少を低減することができることを示すものである。
シス形態を有するFcポリペプチド二量体によるインビボの網状赤血球の減少がみられないのはそれがTfR介在型ADCCを誘発できないことによるものであると示された。ヒトTfRを高レベルで発現するRamos細胞をインビトロADCCアッセイで標的細胞として使用した。標的細胞を10,000細胞/ウェルで播種し、(1)TfR結合部位を有するhIgG1、(2)両方のFcポリペプチドにTfR結合部位及びLALA変異を有するhIgG1、及び(3)シス形態を有するFcポリペプチド二量体を有するhIgG1で、30分間オプソニン化した。エフェクターナチュラルキラー(NK)細胞をヒト末梢血から単離し、IL−21(20ng/ml)と一晩インキュベートし、25:1のエフェクター:標的細胞の比(250,000細胞/ウェル)で標的細胞と4時間インキュベートした。細胞傷害性をLDH発現によって評価し、ポリペプチドを含まないコントロールに対して正規化し、標的細胞中の最大溶解率(%)として計算した。エフェクター免疫細胞(この場合、ナチュラルキラー細胞)はFcγRを発現するため、野生型IgG1のFc部分はFcγRに結合し、ADCC応答を誘発する。実際、TfR結合部位を有するhIgG1が強いADCC反応を誘発したのに対して、両方のFcポリペプチドにLALA変異を有するhIgG1、及びシス形態を有するFcポリペプチド二量体を有するhIgG1はいずれもADCC反応を誘発しなかった。このデータは、インビボの網状赤血球のデータと一致していた。すなわち、シス形態を有するFcポリペプチド二量体、ならびに、両方のFcポリペプチドに(2つの異なるTfR親和性で(図3A: CH3C.35.21、図3B:CH3C.35.23))TfR結合部位及びLALA変異を有するFcポリペプチド二量体は、TfR介在型ADCCを妨げ、これにより網状赤血球の減少を低減させた。
TfRに結合する抗体によるインビボの網状赤血球の減少には、TfR介在型CDC活性も寄与していると考えられる。興味深い点として、TfRに結合するFcポリペプチド二量体は、CDCを誘発することはできず、これはおそらくは、補体応答を誘発するポリペプチド六量体を立体的に形成することができないことによる。TfRを過剰発現するように操作したCHO細胞(CHO−hTfR)を無血清培地中、200,000細胞/ウェルで播種した。細胞を(1)コントロールhIgG1、(2)Ab204(抗TfR陽性コントロール抗体)、及び(3)TfR結合部位を有するhIgG1で、30分間オプソニン化した。50μLの希釈したウサギ幼体血清を各ウェルに加え、細胞を4時間インキュベートした。細胞傷害性をLDH発現によって評価し、ポリペプチドを含まないコントロールに対して正規化し、標的細胞中の最大溶解率(%)として計算した。実際、抗TfR Ab204がCHO−hTfR細胞にCDCを誘導できなかったのに対して、Fc領域にTfR結合部位を有するhIgG1はCDCに影響を及ぼさなかった(図4)。
改変Fcポリペプチド二量体は、初代ヒトミクログリア細胞を用いて、FcγR誘導リン酸化脾臓チロシンキナーゼ(pSYK)によって測定される機能性Fcを有することが確認されている。エフェクター免疫細胞上のFcγRは、通常、抗体のFc領域に結合して自然免疫で重要な多くの反応を誘発する。これらの反応の1つにSykチロシンキナーゼシグナル伝達経路があり、食作用、サイトカイン放出、及びADCCなどの免疫細胞活性化に重要な役割を担っている(DeFranco et al., J.of Exp Med.,1997,186(7):1027−39)。免疫細胞のFcγRが免疫複合体に結合すると、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ(immmunoreceptor tyrosine−based activation motif)(ITAM)により、Sykキナーゼが動員されてSrcファミリーのキナーゼによってリン酸化され、これにより、下流のシグナル伝達経路が免疫細胞の活性化を誘発する(Hirose et al.,J of Biol Chem,2004,279:32308−15)。このため、pSykは、FcγR誘導型免疫細胞活性化のリードアウトとして用いられる。ヒト胚組織由来の混合グリア培養から得られたミクログリア細胞を回収し、TfR結合ポリペプチドと結合した際のpSyk活性を評価するために用いた。次いで、ミクログリアをTfR結合ポリペプチドでコートした96ウェルプレートに加え、37℃で10分間インキュベートし、溶解し、pSykサンドウィッチイムノアッセイを用いてpSykのレベルを定量した。シスLALA変異は、TfR介在型ADCCを誘発しなかったものの、野生型IgGペプチドと同様、ヒトミクログリア細胞にpSyk応答を誘発することができた(LALA変異コントロールから約3倍の増加、図5)。この結果は、シス形態を有する改変Fcポリペプチド二量体がそのFc機能を保持し、エフェクター機能を有し得ることを示すものである。
pSYK活性の誘導以外に、シス形態を有するTfR結合ポリペプチドがFab介在型のADCC及びCDCを誘発する能力を評価した。マウスCD20(A20細胞株)を発現する標的細胞を使用してFab介在型ADCCを評価した。実施例8に記載したTfR介在型ADCCと同様、標的細胞を10,000細胞/ウェルで播種し、オプソニン化し、25:1のエフェクター:標的細胞の比でNK細胞とインキュベートし、LDH発現により細胞傷害性について評価した。標的細胞を、(1)コントロールhIgG、(2)抗mCD20抗体、(3)TfR結合部位及びmCD20のFab結合部位を含むhIgG1(CH3C.35.21 hIgG1:α−mCD20(WT))、ならびに(4)シス形態及びmCD20のFab結合部位を有するFcポリペプチド二量体を含むhIgG1(CH3C.35.21 hIgG1:α−mCD20(シスLALA))でオプソニン化した。標的細胞はヒトTfRを発現しないため、Fab結合のみを評価するようにアッセイを設計する。pSYK活性の誘導と一致して、シス形態及びmCD20のFab結合部位を有するFcポリペプチド二量体を含むhIgG1は、抗mCD20抗体、及びTfR結合部位とmCD20のFab結合部位とを有するhIgG1と同様、ADCCを誘発した(図6A)。
インビボの安全性分析で示されたように、シス形態を有するFcポリペプチド二量体を含むhIgG1は、TfRに結合した時の網状赤血球の減少を低減した。次に、本発明者らは、この形態が、治療反応の誘導に不可欠であるFab介在型エフェクター機能をインビボで誘発するかどうかを試験した。mCD20に対する抗体はインビボで末梢血及び脾臓のB細胞を著しく減少させることがこれまでに証明されていることから、Fab介在型エフェクター機能を評価するために用いられている。シス形態及びmCD20のFab結合部位を有するFcポリペプチド二量体を含むhIgG1が血中及び脾臓B細胞を減少させる能力を、野生型(WT)マウスで評価し、抗mCD20抗体、及びTfR結合部位及びmCD20のFab結合部位を含むhIgG1で観察された反応と比較した。WTマウスを、25mg/kgの(1)コントロールIgG、(2)抗mCD20抗体、(3)TfR結合部位及びmCD20のFab結合部位を含むhIgG1(CH3C.35.21 hIgG1:α−mCD20(WT))、(4)TfR結合部位を含み、両方のFcポリペプチドにLALA変異を有し、mCD20のFab結合部位を含むhIgG1(CH3C.35.21 hIgG1:α−mCD20(LALA))、ならびに(5)シス形態及びmCD20のFab結合部位を有するFcポリペプチド二量体を含むhIgG1(CH3C.35.21 hIgG1:α−mCD20(シスLALA))で処理した。成熟した末梢血B細胞及び脾臓B細胞をそれぞれ1日目及び5日目に評価した。要約すると、末梢血及び脾臓を採取した。末梢血及び脾臓細胞からの細胞をACK溶解バッファーで処理し、Fcブロッカーとインキュベートし、抗B220及び抗IgMで染色した。成熟B細胞は、FACS分析により、B220高IgM高集団として同定された。Fab媒介性インビトロADCC及びCDCアッセイと一致して、シス形態及びmCD20のFab結合部位を有するFcポリペプチド二量体を含むhIgG1は、抗mCD20抗体、及びTfR結合部位とmCD20のFab結合部位とを有するhIgG1と同様、安定的なB細胞の減少を誘発した(図7A及び7B)。これらの結果は、シス形態を有する改変Fcポリペプチド二量体がそのFc機能を保持し、インビボでFab介在型エフェクター機能を有することを示すものである。
本実施例では、TfRへの結合性を与え、BBBを通過するためのFcポリペプチドの改変について記載する。
384位、386位、387位、388位、389位、390位、413位、416位、及び421位のアミノ酸位置を含む位置に改変が導入されたFc領域を含む酵母ライブラリーを以下に述べるようにして作製した。TfRに結合する例示的なクローンを表3及び4に示す。
DNAオリゴを作製して最初の4つのヒットのそれぞれに基づいてソフト変異誘発を導入するソフトランダム化アプローチを用いてヒトTfRに対する初期のヒットの親和性を高めるために更なるライブラリーを作製した。TfRに結合する更なるクローンを特定し、選択した。選択されたクローンは2つの大きな配列グループに分類された。グループ1のクローン(すなわち、クローンCH3C.18、CH3C.21、CH3C.25、及びCH3C.34)は、384位に半保存的Leuを、386位にLeuまたはHisを、387及び389位にそれぞれ保存的及び半保存的Valを、413、416、及び421位にそれぞれ半保存的P−T−Wモチーフを有していた。グループ2のクローンは、384位に保存的Tyrを、386〜390位にモチーフTXWSXを、413、416、及び421位にそれぞれ保存的モチーフS/T−E−Fを有していた。クローンCH3C.18及びCH3C.35を、それぞれの配列グループの代表的な配列として更なる実験で使用した。
操作されたFc領域がTfRのアピカルドメインに結合するかを調べるため、TfRアピカルドメインをファージの表面で発現させた。アピカルドメインを適切に折り畳ませてディスプレイさせるには、ループのうちの1つを切り詰め、配列の順序を環状に並べ替える必要がある。クローンCH3C.18及びCH3C.35をELISAプレートにコーティングし、ファージELISAプレートに従った。要約すると、1%PBSAによる洗浄及びブロッキング後、ファージディスプレイの各希釈液を加え、室温で1時間インキュベートした。次いで各プレートを洗浄し、抗M13−HRPを加え、更なる洗浄後、各プレートをTMB基質で発色させ、2NのH2SO4でクエンチした。このアッセイではクローンCH3C.18及びCH3C.35の両方ともアピカルドメインに結合した。
Fcドメイン内のどの残基がTfRへの結合に最も重要であるかを理解するため、各変異体のTfR結合レジスター内の1個の位置を野生型に復帰変異させた一連の変異体クローンCH3C.18及びクローンCH3C.35のFc領域を作製した。得られた変異体を組換えによりFab−Fc融合体として発現させ、ヒトまたはカニクイザルTfRに対する結合について試験した クローンCH3C.35では、388及び421位は結合に重要であり、これらのいずれかの野生型への復帰変異はヒトTfRに対する結合を完全に消失させた。
上記に述べたようにして、精製したFab−Fc融合変異体と、プレートにコーティングしたヒトまたはカニクイザルTfRとの結合ELISAを行った。クローンCH3C.18成熟ライブラリーからの変異体であるクローンCH3C.3.2−1、クローンCH3C.3.2−5、及びクローンCH3C.3.2−19がヒト及びカニクイザルTfRと概ね等しいEC50値で結合したのに対して、親クローンのCH3C.18及びCH3C.35は、カニクイザルTfRに対してヒトTfRに10倍よりも高い結合を示した。
更なる親和性成熟クローンであるCH3C.18及びCH3C.35に対する更なる操作では、直接的相互作用、第2水和殻相互作用、または構造的安定化によって結合を向上させた位置にさらなる変異を加えた。これは、「NNKウォーク」または「NNKパッチ」ライブラリーの作製、及びこれらのライブラリーからの選択を行うことによって行った。NNKウォークライブラリーでは、パラトープの近傍の残基に1つずつNNK変異を導入することを行った。FcγRIに結合したFc(PDB ID:4W4O)の構造をみることにより、元の改変位置の近くの44個の残基が試験の候補として特定された。詳細には、以下の残基、すなわち、K248、R255、Q342、R344、E345、Q347、T359、K360、N361、Q362、S364、K370、E380、E382、S383、G385、Y391、K392、T393、D399、S400、D401、S403、K409、L410、T411、V412、K414、S415、Q418、Q419、G420、V422、F423、S424、S426、Q438、S440、S442、L443、S444、P4458、G446、及びK447をNNK突然変異誘発の標的とした。Kunkel突然変異誘発を用いてこれらの44種類のシングルポイントNNKライブラリーを作製し、他の酵母ライブラリーについて上記に述べたように各産物をプールして電気穿孔法により酵母に導入した。
NNKウォークライブラリーから変異の組み合わせを特定する一方でこれらの周辺にいくつかの更なる位置を追加するための更なるライブラリーを、上記の酵母ライブラリーについて述べたようにして作製した。このライブラリーでは、YxTEWSS(SEQ ID NO:414)及びTxxExxxxF(SEQ ID NO:415)モチーフを一定に保ち、以下の6つの位置、すなわちE380、K392、K414、S415、S424、及びS426を完全にランダム化した。位置E380及びS415は、これらの位置がNNKウォークライブラリーにおいて「ホットスポット」であったことから含めた。位置K392、S424、及びS426は、これらの位置が結合領域の位置を決定しうるコアの部分を構成することから含め、K414は、415位に隣接していることから選択した。
380位:Trp、Leu、またはGlu;
384位:TyrまたはPhe;
386位:Thrのみ;
387位:Gluのみ;
388位:Trpのみ;
389位:Ser、Ala、またはVal(野生型のAsn残基は若干の結合を維持するようにみえたが、その後のライブラリー分取ではそのようにみえなかった);
390位:SerまたはAsn;
413位:ThrまたはSer;
415位:GluまたはSer;
416位:Gluのみ;及び
421位:Pheのみ。
ファージディスプレイライブラリーの作製
野生型ヒトFc配列)をコードする鋳型DNAを合成し、ファージミドベクターに組み込んだ。ファージミドベクターは、ompAまたはpelBリーダー配列、c−Myc及び6xHis(SEQ ID NO:421)エピトープタグに融合されたFcインサート、ならびにアンバー終止コドンに続くM13コートタンパク質pIIIを含むものであった。
野生型ヒトFc配列をコードする鋳型DNAを合成し、酵母ディスプレイベクターに組み込んだ。CH2及びCH3ライブラリーについて、FcポリペプチドをAga2p細胞壁タンパク質上にディスプレイさせた。いずれのベクターも、Kex2切断配列を有するプレプロリーダーペプチド、及びFcの末端に融合されたc−Mycエピトープタグを含んでいた。
ファージ法は、Phage Display:A Laboratory Manual(Barbas,2001)より採用した。更なるプロトコールの詳細は、この参照文献より入手することができる。
ヒトTfR標的をMaxiSorp(登録商標)マイクロタイタープレート(通常、1〜10μg/mLのPBS溶液を200μL)に4℃で一晩コーティングした。特に断らない限り、すべての結合は室温で行った。ファージライブラリーを各ウェルに加え、一晩インキュベートして結合を行った。マイクロタイターウェルを0.05%のTween(登録商標)20(PBST)を含むPBSでよく洗い、各ウェルを酸(通常、500mM KCl、または100mMグリシン、pH2.7を含む50mM HCl)と30分間インキュベートとすることにより結合したファージを溶出した。溶出されたファージを1M Tris(pH8)で中和し、TG1細胞及びM13/KO7ヘルパーファージを用いて増幅し、50μg/mLのカルベニシリン及び50μg/mLのカナマイシンを含んだ2YT培地中、37℃で一晩増殖させた。標的の入ったウェルから溶出されたファージの力価を、標的の入っていないウェルから回収されたファージの力価と比較して濃縮度を評価した。次に結合の際のインキュベーション時間を短縮し、洗浄時間及び洗浄の回数を増やすことによって選択のストリンジェンシーを高めた。
抗原を、NHS−PEG4−ビオチン(Pierce(商標)より入手したもの)を用いて遊離アミンを介してビオチン化した。ビオチン化反応には、3〜5倍モル過剰のビオチン試薬をPBS中で用いた。反応をTrisで停止した後、PBS中に重点的に透析した。ビオチン化された抗原をストレプトアビジンでコーティングした磁気ビーズ(すなわち、Thermo Fisherより入手したM280ストレプトアビジンビーズ)上に固定した。ファージディスプレイライブラリーを、抗原をコーティングしたビーズと室温で1時間インキュベートした。この後、結合しなかったファージを除去し、ビーズをPBSTで洗浄した。結合したファージを、500mM KCl(または0.1Mグリシン、pH2.7)を含む50mM HClと30分間インキュベートすることにより溶出した後、プレート分取について上記に述べたように中和して、増殖させた。
ビーズ分取(磁気細胞分離(MACS))法
Ackerman,et al.2009 Biotechnol.Prog.25(3),774に記載されるのと同様にしてMACS及びFACS選択を行った。ストレプトアビジン磁気ビーズ(例えば、Thermo Fisherより販売されるM−280ストレプトアビジンビーズ)を、ビオチン化抗原で標識し、酵母とインキュベートした(通常5〜10xのライブラリー多様性)。結合しなかった酵母を除去し、ビーズを洗浄し、結合した酵母を選択培地中で増殖させ、後の選択のラウンド用に誘導した。
酵母を抗c−Myc抗体で標識して発現及びビオチン化抗原(分取ラウンドに応じて濃度が変化する)を監視した。一部の実験では、抗原をストレプトアビジン−Alexa Fluor(登録商標)647と予め混合して相互作用のアビディティーを高めた。他の実験では、結合後のビオチン化抗原を検出し、ストレプトアビジン−Alexa Fluor(登録商標)647で洗浄した。結合を有するシングレットの酵母をFACS Aria III細胞分取装置を使用して分取した。分取した酵母を選択培地中で増殖させた後、後の選択ラウンド用に誘導した。
ELISAによるスクリーニング
クローンをパニングの結果産物から選択し、96ウェルディープウェルプレートの個々のウェル中で増殖させた。各クローンに自己誘導培地(EMD Milliporeより入手したもの)を用いてペリプラズムでの発現を誘導するか、またはファージ上に個々のFc変異体をファージディスプレイするためにヘルパーファージを感染させた。培地を一晩増殖させ、遠心して大腸菌をペレット化した。ファージELISAでは、ファージを含む上清を直接使用した。ペリプラズムでの発現では、ペレットを20%スクロースに再懸濁した後、水で4:1に希釈し、4℃で1時間振盪した。プレートを遠心して固形物をペレット化し、上清をELISAに使用した。
Fc変異体ポリペプチド(ファージ上で、ペリプラズム抽出物中で、またはFabフラグメントとの可溶性の融合体として発現させたもの)を、96ウェルV底プレート中で細胞に加え(PBS+1%BSA(PBSA)中、ウェル当たり約100,000細胞)、4℃で1時間インキュベートした。この後、各プレートを遠心し、培地を除去してから細胞をPBSAで1回洗浄した。二次抗体(通常、ヤギ抗ヒトIgG−Alexa Fluor(登録商標)647(Thermo Fisherより入手したもの))を含むPBSA中に細胞を再懸濁した。30分後、プレートを遠心し、培地を除去し、細胞をPBSAで1〜2回洗浄した後、プレートをフローサイトメーター(すなわち、FACSCanto(商標)IIフローサイトメーター)で読み取った。FlowJoソフトウェアを使用して各条件について蛍光の中央値を計算し、結合曲線をPrismソフトウェアを用いてプロットした。
本実施例では、CH3C.18変異体のライブラリーの構築について述べる。
シス形態を有するTfR結合ポリペプチドを、治療上関連する疾患モデルにおいて用いることができることの更なる根拠を与えるため、本発明者らは、Aβプラーク沈着マウスモデルにおいてAβに結合するFabを有する、シス形態を有するTfR結合Fcポリペプチドの評価を行った。詳細には、これらのポリペプチドを、Aβプラークにミクログリアを動員する能力について評価した。要約すると、動物(生後3.5ヶ月)を以下の各群で、0、3、6、及び9日目に50mg/kgで腹腔内処理した。すなわち、1)コントロールIgGで処理したTfRms/huKIマウス(n=6)、2)コントロールIgGで処理した5XFAD×TfRms/huKIマウス(n=11)、3)抗Aβ(α−Aβ)で処理した5XFAD×TfRms/huKIマウス(n=12)、4)シス形態及びAβ Fab結合部位を有するTfR結合Fcポリペプチドで処理した5XFAD×TfRms/huKIマウス(n=12)、ならびに5)両方のFcポリペプチドにLALA変異を有するTfR結合Fcポリペプチドで処理した5XFAD×TfRms/huKIマウス(n=12)。表6に、各Fcポリペプチド二量体−Fab融合体の重鎖及び軽鎖のそれぞれのSEQ ID NOを示す。
Claims (92)
- (a)TfRに特異的に結合し、
(b)Fcγ受容体(FcγR)に結合することが可能であり、かつ
(c)インビボで網状赤血球を実質的に減少させない
、改変Fcポリペプチド二量体、またはその二量体フラグメント。 - (a)(i)TfR結合部位と、(ii)TfRに結合した場合にFcγR結合を低減する1つ以上のアミノ酸改変とを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)TfR結合部位もFcγR結合を低減するいかなる改変も含まない第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体、またはその二量体フラグメント。 - 前記TfR結合部位が、改変CH3ドメインを含む、請求項1または2に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のCH3ドメインに由来する、請求項3に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、EU番号付けに従って、384位、386位、387位、388位、389位、390位、413位、416位、及び421位からなるアミノ酸位置のセットにおいて5個、6個、7個、8個、または9個の置換を含む、請求項3または4に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、380位、391位、392位、及び415位を含む位置に1個、2個、3個、または4個の置換を更に含む、請求項5に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、414位、424位、及び426位を含む位置に1個、2個、または3個の置換を更に含む、請求項5または6に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- TfRのアピカルドメインに結合する、請求項1〜7のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- トランスフェリンのTfRへの結合を阻害することなくTfRに結合する、請求項8に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- TfRのアミノ酸208を含むエピトープに結合する、請求項8または9に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが388位にTrpを含む、請求項5〜10のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが421位に芳香族アミノ酸を含む、請求項5〜11のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記421位の芳香族アミノ酸がTrpまたはPheである、請求項12に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、以下から選択される少なくとも1つの位置を含む、請求項5〜10のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
384位がLeu、Tyr、Met、またはVal、386位がLeu、Thr、His、またはPro、387位がVal、Pro、または酸性アミノ酸、388位がTrp、389位がVal、Ser、またはAla、413位がGlu、Ala、Ser、Leu、Thr、またはPro、416位がThr、または酸性アミノ酸、及び、421位がTrp、Tyr、His、またはPhe。 - 前記改変CH3ドメインが、以下から選択される2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、または8つの位置を含む、請求項14に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
384位がLeu、Tyr、Met、またはVal、386位がLeu、Thr、His、またはPro、387位がVal、Pro、または酸性アミノ酸、388位がTrp、389位がVal、Ser、またはAla、413位がGlu、Ala、Ser、Leu、Thr、またはPro、416位がThr、または酸性アミノ酸、及び、421位がTrp、Tyr、His、またはPhe。 - 前記改変CH3ドメインが、384位にLeuまたはMetを、386位にLeu、His、またはProを、387位にValを、388位にTrpを、389位にValまたはAlaを、413位にProを、416位にThrを、及び/あるいは421位にTrpを含む、請求項5〜15のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、391位にSer、Thr、Gln、またはPheを更に含む、請求項16に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、380位にTrp、Tyr、Leu、またはGlnを更に含む、請求項16または17に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、392位にGln、Phe、またはHisを更に含む、請求項16〜18のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、380位にTrpを、及び/または392位にGlnを更に含む、請求項16または17に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、以下から選択される1つ、2つ、または3つの位置を更に含む、請求項14〜20のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
414位がLys、Arg、Gly、またはPro、424位がSer、Thr、Glu、またはLys、及び426位がSer、Trp、またはGly。 - 前記改変CH3ドメインが、384位にTyrを、386位にThrを、387位にGluまたはValを、388位にTrpを、389位にSerを、413位にSerまたはThrを、416位にGluを、及び/あるいは421位にPheを含む、請求項5〜15のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、380位にTrp、Tyr、Leu、またはGlnを更に含む、請求項22に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、415位にGluを更に含む、請求項22または23に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、380位にTrpを、及び/または415位にGluを更に含む、請求項22に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが390位にAsnを含む、請求項22〜25のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、以下の置換のうちの1つ以上を含む、請求項6〜10のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
380位にTrp、386位にThr、388位にTrp、389位にVal、413位にSerまたはThr、415位にGlu、及び/あるいは421位にPhe。 - 前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:4〜29、及び64〜127のうちのいずれか1つのアミノ酸111〜217と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有する、請求項5〜27のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:66、68、94、107〜109、119、及び268〜270のうちのいずれか1つのアミノ酸111〜217と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有する、請求項28に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- パーセント同一性がEU番号付けに従って384位、386位、387位、388位、389位、390位、413位、416位、及び421位のセットを含まないことを条件として、前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:1のアミノ酸111〜217と少なくとも85%の同一性を有する、請求項5〜27のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:4〜29、及び125〜127のうちのいずれか1つのアミノ酸154〜160及び/または183〜191を含む、請求項5〜30のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、以下から選択される少なくとも1つの位置を含む、請求項6〜10のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
380位がTrp、Leu、またはGlu、384位がTyrまたはPhe、386位がThr、387位がGlu、388位がTrp、389位がSer、Ala、Val、またはAsn、390位がSerまたはAsn、413位がThrまたはSer、415位がGluまたはSer、416位がGlu、及び421位がPhe。 - 前記改変CH3ドメインが、以下から選択される、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ、10個、または11個の位置を含む、請求項32に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
380位がTrp、Leu、またはGlu、384位がTyrまたはPhe、386位がThr、387位がGlu、388位がTrp、389位がSer、Ala、Val、またはAsn、390位がSerまたはAsn、413位がThrまたはSer、415位がGluまたはSer、416位がGlu、及び421位がPhe。 - 前記改変CH3ドメインが、以下の11個の位置を含む、請求項33に記載の改変Fcポリペプチド二量体:
380位がTrp、Leu、またはGlu、384位がTyrまたはPhe、386位がThr、387位がGlu、388位がTrp、389位がSer、Ala、Val、またはAsn、390位がSerまたはAsn、413位がThrまたはSer、415位がGluまたはSer、416位がGlu、及び421位がPhe。 - 前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:4〜29、及び64〜127のうちのいずれか1つのアミノ酸111〜217と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有する、請求項33または34に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:66、68、94、107〜109、119、及び268〜270のうちのいずれか1つのアミノ酸111〜217と少なくとも85%の同一性、少なくとも90%の同一性、または少なくとも95%の同一性を有する、請求項35に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- EU番号付けスキームに従って380位、384位、386位、384位、388位、389位、390位、391位、392位、413位、414位、415位、416位、421位、424位、及び426位に対応する位置のうちの少なくとも5つ、6つ、7つ、8つ、9つ、10個、11個、12個、13個、14個、15個、または16個における残基が、欠失も置換もされていない、請求項35に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、SEQ ID NO:38〜61及び131〜173のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項3に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変CH3ドメインが、EU番号付けスキームに従って(i)366位にTrpを、または(ii)366位にSerを、368位にAlaを、及び407位にValを更に含む、請求項5〜37のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記対応する未改変のCH3ドメインが、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のCH3ドメインである、請求項5〜39のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- TfRと結合した時にFcγRの結合を低減する前記アミノ酸改変が、EU番号付けスキームに従って234位及び235位のAlaを含む、請求項2〜40のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第1のFcポリペプチド及び/または前記第2のFcポリペプチドが、血清中半減期を増大させるアミノ酸改変を含む、請求項2〜41のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 血清中半減期を増大させる前記アミノ酸改変が、EU番号付けスキームに従って、(i)428位のLeu及び434位のSer、あるいは(ii)434位のSerまたはAlaを含む、請求項42に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第1のFcポリペプチド及び/または前記第2のFcポリペプチドが更にFabに融合されている、請求項1〜43のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- EU番号付けスキームに従って、前記第1のFcポリペプチドがノブ変異T366Wを含み、前記第2のFcポリペプチドがホール変異T366S、L368A、及びY407Vを含む、請求項2〜44のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- EU番号付けスキームに従って、前記第1のFcポリペプチドがホール変異T366S、L368A、及びY407Vを含み、前記第2のFcポリペプチドがノブ変異T366Wを含む、請求項2〜44のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ノブ変異T366Wとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってホール変異T366S、L368A、及びY407Vを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:178、190、202、214、226、238、252、286、298、及び310のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項47に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:397の配列を含む、請求項47または48に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ノブ変異T366Wと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってホール変異T366S、L368A、及びY407Vを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:323、330、337、344、351、358、365、372、379、及び386のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項50に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:397の配列を含む、請求項50または51に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ノブ変異T366Wとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってホール変異T366S、L368A、及びY407Vと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:178、190、202、214、226、238、252、286、298、及び310のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項53に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:407の配列を含む、請求項53または54に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ノブ変異T366Wと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってホール変異T366S、L368A、及びY407Vと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:323、330、337、344、351、358、365、372、379、及び386のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項56に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:407の配列を含む、請求項56または57に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ホール変異T366S、L368A、及びY407Vとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってノブ変異T366Wを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:184、196、208、220、232、244、280、292、304、及び316のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項59に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:391の配列を含む、請求項59または60に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ホール変異T366S、L368A、及びY407Vと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってノブ変異T366Wを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:326、333、340、347、354、361、368、375、382、及び389のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項62に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:391の配列を含む、請求項62または63に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ホール変異T366S、L368A、及びY407Vとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってノブ変異T366Wと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:184、196、208、220、232、244、280、292、304、及び316のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項65に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:404の配列を含む、請求項65または66に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)TfR結合部位と、EU番号付けスキームに従ってアミノ酸改変L234A及びL235Aと、ホール変異T366S、L368A、及びY407Vと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(b)EU番号付けスキームに従ってノブ変異T366Wと、M428Lを伴うかまたは伴わないアミノ酸改変N434Sとを含み、TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない、第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体。 - 前記第1のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:326、333、340、347、354、361、368、375、382、及び389のうちのいずれか1つの配列を含む、請求項68に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記第2のFcポリペプチドが、SEQ ID NO:404の配列を含む、請求項68または69に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 網状赤血球を実質的に減少させない、請求項1〜70のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に減少する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に減少する網状赤血球の量よりも少ない、請求項71に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に減少する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に減少する網状赤血球の量の50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、8%、5%、3%、2%、または1%よりも少ない、請求項72に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に残留する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に残留する網状赤血球の量よりも多い、請求項71に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に残留する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に残留する網状赤血球の量よりも少なくとも1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、または50%多い、請求項74に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 骨髄中の網状赤血球を実質的に減少させない、請求項1〜70のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に骨髄中で減少する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に骨髄中で減少する網状赤血球の量よりも少ない、請求項76に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に骨髄中で減少する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に骨髄中で減少する網状赤血球の量の50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、8%、5%、3%、2%、または1%よりも少ない、請求項77に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に骨髄中に残留する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に骨髄中に残留する網状赤血球の量よりも多い、請求項76に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記改変Fcポリペプチド二量体の投与後に骨髄中に残留する網状赤血球の量が、コントロールの投与後に骨髄中に残留する網状赤血球の量よりも少なくとも1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、または50%多い、請求項79に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- 前記コントロールが、完全なエフェクター機能を有する対応するTfR結合Fc二量体であり、及び/またはFcγRの結合を低減する変異を含まない、請求項72〜75及び請求項77〜80のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体。
- (a)抗原に結合することが可能な抗体可変領域、またはその抗原結合フラグメントと、
(b)(i)TfR結合部位と、TfRに結合した時にFcγRの結合を低減する1つ以上のアミノ酸改変とを含む、TfRに特異的に結合する第1のFcポリペプチドと、
(ii)TfR結合部位もFcγRの結合を低減するいかなる改変も含まない第2のFcポリペプチドと
を含む、改変Fcポリペプチド二量体と
を含む、BBBを通過して能動的に輸送されることが可能なFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質。 - TfRと結合した時にFcγRの結合を低減する前記アミノ酸改変が、EU番号付けスキームに従って234位及び235位のAlaを含む、請求項82に記載のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質。
- 前記第1のFcポリペプチド及び/または前記第2のFcポリペプチドが、血清中半減期を増大させるアミノ酸改変を含む、請求項82または83に記載のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質。
- 血清中半減期を増大させる前記アミノ酸改変が、EU番号付けスキームに従って、(i)428位のLeu及び434位のSer、あるいは(ii)434位のSerまたはAlaを含む、請求項84に記載のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質。
- 前記抗体可変領域配列がFabドメインを含む、請求項82〜85のいずれか1項に記載のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質。
- 前記抗体可変領域配列が、2個の抗体可変領域重鎖及び2個の抗体可変領域軽鎖、またはそれらのそれぞれのフラグメントを含む、請求項82〜86のいずれか1項に記載のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質。
- 請求項1〜81のいずれか1項に記載の前記改変Fcポリペプチド二量体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
- 請求項82〜87のいずれか1項に記載の前記Fcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
- 内皮を通過して組成物をトランスサイトーシスするための方法であって、前記内皮を、請求項1〜81のいずれか1項に記載の改変Fcポリペプチド二量体を含む組成物と接触させることを含む、前記方法。
- 内皮を通過して組成物をトランスサイトーシスするための方法であって、前記内皮を、請求項82〜87のいずれか1項に記載のFcポリペプチド二量体−Fab融合タンパク質を含む組成物と接触させることを含む、前記方法。
- 前記内皮がBBBである、請求項90または91に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023190569A JP2024016195A (ja) | 2018-01-10 | 2023-11-08 | トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 |
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862615914P | 2018-01-10 | 2018-01-10 | |
US62/615,914 | 2018-01-10 | ||
US201862631281P | 2018-02-15 | 2018-02-15 | |
US62/631,281 | 2018-02-15 | ||
US201862682639P | 2018-06-08 | 2018-06-08 | |
US62/682,639 | 2018-06-08 | ||
US201862721275P | 2018-08-22 | 2018-08-22 | |
US62/721,275 | 2018-08-22 | ||
PCT/US2019/012990 WO2019140050A1 (en) | 2018-01-10 | 2019-01-10 | Transferrin receptor-binding polypeptides and uses thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023190569A Division JP2024016195A (ja) | 2018-01-10 | 2023-11-08 | トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021510162A true JP2021510162A (ja) | 2021-04-15 |
JPWO2019140050A5 JPWO2019140050A5 (ja) | 2022-02-07 |
Family
ID=65441044
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020538051A Pending JP2021510162A (ja) | 2018-01-10 | 2019-01-10 | トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 |
JP2023190569A Pending JP2024016195A (ja) | 2018-01-10 | 2023-11-08 | トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023190569A Pending JP2024016195A (ja) | 2018-01-10 | 2023-11-08 | トランスフェリン受容体結合ポリペプチド及びその使用 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210130485A1 (ja) |
EP (1) | EP3737701A1 (ja) |
JP (2) | JP2021510162A (ja) |
KR (1) | KR20200119251A (ja) |
CN (1) | CN111741977A (ja) |
AR (1) | AR114077A1 (ja) |
AU (1) | AU2019207735A1 (ja) |
BR (1) | BR112020013921A2 (ja) |
CA (1) | CA3088157A1 (ja) |
CO (1) | CO2020009827A2 (ja) |
IL (1) | IL275969A (ja) |
MX (1) | MX2020007389A (ja) |
SG (1) | SG11202006420TA (ja) |
TW (1) | TW201934573A (ja) |
WO (1) | WO2019140050A1 (ja) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2018221731C1 (en) | 2017-02-17 | 2021-11-18 | Denali Therapeutics Inc. | Engineered transferrin receptor binding polypeptides |
MX2020002918A (es) | 2017-10-02 | 2020-07-22 | Denali Therapeutics Inc | Proteinas de fusion que comprenden enzimas de terapia de reemplazo de enzimas. |
MX2021001711A (es) * | 2018-08-16 | 2021-05-27 | Denali Therapeutics Inc | Proteínas biespecíficas modificadas. |
CN114981297A (zh) | 2019-12-23 | 2022-08-30 | 戴纳立制药公司 | 颗粒蛋白前体变体 |
KR20220131246A (ko) | 2020-01-13 | 2022-09-27 | 데날리 테라퓨틱스 인크. | 항-trem2 항체 및 이의 사용 방법 |
IL302029A (en) | 2020-10-14 | 2023-06-01 | Denali Therapeutics Inc | Fusion proteins containing sulfoglucosamine sulfohydrolase enzymes and methods thereof |
CN112341538A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-02-09 | 苏州复融生物技术有限公司 | 一种Fc单体多肽及其应用 |
AU2022271333A1 (en) * | 2021-05-05 | 2023-11-09 | Attralus, Inc. | Peptide-fc fusions for treating amyloid disorders |
IL309346A (en) * | 2021-07-01 | 2024-02-01 | Denali Therapeutics Inc | Transferrin receptor-targeted oligonucleotide conjugates |
CN115873127A (zh) * | 2021-11-26 | 2023-03-31 | 深圳科兴药业有限公司 | 重组长效人生长激素融合蛋白及其制备方法和用途 |
WO2023114499A1 (en) * | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Denali Therapeutics Inc. | Polypeptide engineering, libraries, and engineered cd98 heavy chain and transferrin receptor binding polypeptides |
WO2024006976A2 (en) * | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Denali Therapeutics Inc. | Transferrin receptor binding molecule conjugates for delivery of oligonucleotides to cells |
WO2024026494A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Viral particles retargeted to transferrin receptor 1 |
WO2024026488A2 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals comprising a modified transferrin receptor locus |
US20240052051A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-tfr:payload fusions and methods of use thereof |
WO2024026474A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006503588A (ja) * | 2002-08-30 | 2006-02-02 | バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレイション | 改変トランスフェリン融合タンパク質 |
JP2009544301A (ja) * | 2006-07-24 | 2009-12-17 | バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレーション | エキセンディン融合タンパク質 |
JP2014030427A (ja) * | 2000-09-06 | 2014-02-20 | Aventis Pharma Sa | アミロイドーシスと関連する疾患のための方法及び組成物 |
JP2015523336A (ja) * | 2012-05-21 | 2015-08-13 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 血液脳関門輸送の安全性を改善するための方法 |
WO2016081643A1 (en) * | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use |
JP2016526878A (ja) * | 2013-05-20 | 2016-09-08 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗トランスフェリン受容体抗体及び使用方法 |
WO2016208695A1 (ja) * | 2015-06-24 | 2016-12-29 | Jcrファーマ株式会社 | 血液脳関門を通過する抗ヒトトランスフェリン受容体抗体 |
WO2017055540A1 (en) * | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific anti-human a-beta/human transferrin receptor antibodies and methods of use |
JP2020520909A (ja) * | 2017-05-18 | 2020-07-16 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 治療抗体の適用関連副反応の低減 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5981217A (en) * | 1995-12-11 | 1999-11-09 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | DNA encoding TGF-β inducible early factor-1 (TIEF-1), a gene expressed by osteoblasts |
EP2368578A1 (en) * | 2003-01-09 | 2011-09-28 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
WO2005077981A2 (en) * | 2003-12-22 | 2005-08-25 | Xencor, Inc. | Fc POLYPEPTIDES WITH NOVEL Fc LIGAND BINDING SITES |
US20160137712A1 (en) * | 2014-11-13 | 2016-05-19 | AskGene Pharma, Inc. | Fusion Proteins With Dual Receptor Agonist Activities |
US10457717B2 (en) * | 2017-02-17 | 2019-10-29 | Denali Therapeutics Inc. | Engineered polypeptides |
-
2019
- 2019-01-10 JP JP2020538051A patent/JP2021510162A/ja active Pending
- 2019-01-10 WO PCT/US2019/012990 patent/WO2019140050A1/en unknown
- 2019-01-10 MX MX2020007389A patent/MX2020007389A/es unknown
- 2019-01-10 EP EP19705597.3A patent/EP3737701A1/en active Pending
- 2019-01-10 CN CN201980014365.0A patent/CN111741977A/zh active Pending
- 2019-01-10 AU AU2019207735A patent/AU2019207735A1/en active Pending
- 2019-01-10 AR ARP190100045A patent/AR114077A1/es unknown
- 2019-01-10 BR BR112020013921-1A patent/BR112020013921A2/pt unknown
- 2019-01-10 CA CA3088157A patent/CA3088157A1/en active Pending
- 2019-01-10 KR KR1020207023090A patent/KR20200119251A/ko not_active Application Discontinuation
- 2019-01-10 TW TW108101028A patent/TW201934573A/zh unknown
- 2019-01-10 SG SG11202006420TA patent/SG11202006420TA/en unknown
-
2020
- 2020-07-06 US US16/921,506 patent/US20210130485A1/en active Pending
- 2020-07-09 IL IL275969A patent/IL275969A/en unknown
- 2020-08-10 CO CONC2020/0009827A patent/CO2020009827A2/es unknown
-
2023
- 2023-11-08 JP JP2023190569A patent/JP2024016195A/ja active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014030427A (ja) * | 2000-09-06 | 2014-02-20 | Aventis Pharma Sa | アミロイドーシスと関連する疾患のための方法及び組成物 |
JP2006503588A (ja) * | 2002-08-30 | 2006-02-02 | バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレイション | 改変トランスフェリン融合タンパク質 |
JP2009544301A (ja) * | 2006-07-24 | 2009-12-17 | バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレーション | エキセンディン融合タンパク質 |
JP2015523336A (ja) * | 2012-05-21 | 2015-08-13 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 血液脳関門輸送の安全性を改善するための方法 |
JP2016526878A (ja) * | 2013-05-20 | 2016-09-08 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗トランスフェリン受容体抗体及び使用方法 |
WO2016081643A1 (en) * | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use |
WO2016208695A1 (ja) * | 2015-06-24 | 2016-12-29 | Jcrファーマ株式会社 | 血液脳関門を通過する抗ヒトトランスフェリン受容体抗体 |
WO2017055540A1 (en) * | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific anti-human a-beta/human transferrin receptor antibodies and methods of use |
JP2020520909A (ja) * | 2017-05-18 | 2020-07-16 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 治療抗体の適用関連副反応の低減 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
ELISABETH LOBNER; ET AL: "ENGINEERED IGG1-FC - ONE FRAGMENT TO BIND THEM ALL", IMMUNOLOGICAL REVIEWS, vol. VOL:270, NR:1, JPN5020005650, March 2016 (2016-03-01), pages 113 - 131, ISSN: 0004967585 * |
FELIX WEBER ET AL., CELL REPORTS, vol. 22, JPN6023001478, 2 January 2018 (2018-01-02), pages 149 - 162, ISSN: 0004967588 * |
GUSTAVO HELGUERA ET AL., J. VIROL., vol. 86, no. 7, JPN7022000332, 2012, pages 4024 - 4028, ISSN: 0004967586 * |
TAKETOSHI MIZUTANI ET AL., J. BIOL. CHEM., vol. 291, no. 6, JPN6022002871, 5 February 2016 (2016-02-05), pages 2829 - 2836, ISSN: 0004967587 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3737701A1 (en) | 2020-11-18 |
SG11202006420TA (en) | 2020-08-28 |
US20210130485A1 (en) | 2021-05-06 |
AU2019207735A1 (en) | 2020-07-23 |
WO2019140050A1 (en) | 2019-07-18 |
CO2020009827A2 (es) | 2020-10-30 |
MX2020007389A (es) | 2020-10-14 |
JP2024016195A (ja) | 2024-02-06 |
BR112020013921A2 (pt) | 2020-12-01 |
IL275969A (en) | 2020-08-31 |
CA3088157A1 (en) | 2019-07-18 |
CN111741977A (zh) | 2020-10-02 |
KR20200119251A (ko) | 2020-10-19 |
TW201934573A (zh) | 2019-09-01 |
AR114077A1 (es) | 2020-07-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210130485A1 (en) | Transferrin receptor-binding polypeptides and uses thereof | |
TWI797106B (zh) | 經工程改造之轉鐵蛋白受體結合多肽 | |
JP7397063B2 (ja) | 操作された二重特異性タンパク質 | |
US20220002436A1 (en) | Anti-her2 polypeptides and methods of use thereof | |
CN104892762A (zh) | 优化的Fc变体 | |
KR20150052085A (ko) | 2개 이상의 상이한 단위를 포함하는 분자의 제조 및 선별 방법, 및 이의 용도 | |
JP2020530293A (ja) | 操作されたトランスフェリン受容体結合ポリペプチド | |
US11492415B2 (en) | Antibody Fc variants for increased blood half-life | |
KR20220116585A (ko) | Cd40l 특이적 tn3 유래 스카폴드 및 이의 사용 방법 | |
CN114828965A (zh) | 与hla-a2/mage-a4结合的抗体 | |
WO2023114510A2 (en) | Polypeptide engineering, libraries, and engineered cd98 heavy chain and transferrin receptor binding polypeptides | |
KR20230025665A (ko) | Cd3에 결합하는 항체 | |
JP2023545707A (ja) | スルホグルコサミンスルホヒドロラーゼ酵素を含む融合タンパク質及びその方法 | |
JP2020508053A (ja) | 操作されたポリペプチド | |
CN110494452A (zh) | 结合steap-1的抗体 | |
JP6675329B2 (ja) | FcRn相互作用が変更された抗体を選択するための方法 | |
TW202340459A (zh) | 包含α—L—艾杜糖醛酸酶之融合蛋白及其方法 | |
TW202208416A (zh) | Fc變體及其製備 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200909 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220106 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220106 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230118 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230404 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230712 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230913 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231108 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20231113 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20240119 |