JP2021505906A - HBsAgの定量検出のためのキット及び方法 - Google Patents
HBsAgの定量検出のためのキット及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021505906A JP2021505906A JP2020547274A JP2020547274A JP2021505906A JP 2021505906 A JP2021505906 A JP 2021505906A JP 2020547274 A JP2020547274 A JP 2020547274A JP 2020547274 A JP2020547274 A JP 2020547274A JP 2021505906 A JP2021505906 A JP 2021505906A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hbsag
- antibody
- kit
- reagent
- reagent composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 121
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 93
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 72
- PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-carboxyethyl)phosphanyl]propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 51
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims abstract description 51
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 82
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 64
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 59
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 52
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 41
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 39
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 38
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 37
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 37
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 37
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 34
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 28
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 25
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 21
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 20
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 20
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 16
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- -1 acridinium ester compound Chemical class 0.000 claims description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 12
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 11
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 10
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 10
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 10
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 7
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 claims description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 6
- 101100088247 Picea mariana RPL13A gene Proteins 0.000 claims description 5
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 claims description 3
- 241001293164 Eutrema japonicum Species 0.000 claims 2
- 235000000760 Wasabia japonica Nutrition 0.000 claims 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims 2
- 241001125046 Sardina pilchardus Species 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 27
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 19
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 18
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 14
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 14
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 12
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 12
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 9
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 8
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 8
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 7
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 7
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 7
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 4
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 208000016350 chronic hepatitis B virus infection Diseases 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 3
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- XYIPYISRNJUPBA-UHFFFAOYSA-N [3-(3'-methoxyspiro[adamantane-2,4'-dioxetane]-3'-yl)phenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound O1OC2(C3CC4CC(C3)CC2C4)C1(OC)C1=CC=CC(OP(O)(O)=O)=C1 XYIPYISRNJUPBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical class O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical group COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBDWQSHEVMSFGY-SCQFTWEKSA-N 4-hydroxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)C(O)=O HBDWQSHEVMSFGY-SCQFTWEKSA-N 0.000 description 1
- RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N Aminophenazone Chemical compound O=C1C(N(C)C)=C(C)N(C)N1C1=CC=CC=C1 RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000872931 Myoporum sandwicense Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000212 aminophenazone Drugs 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012775 microarray technology Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- REJGOFYVRVIODZ-UHFFFAOYSA-N phosphanium;chloride Chemical compound P.Cl REJGOFYVRVIODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- USRGIUJOYOXOQJ-GBXIJSLDSA-N phosphothreonine Chemical compound OP(=O)(O)O[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O USRGIUJOYOXOQJ-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N phosphotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
したがって、本発明の一態様は、HBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体と試薬組成物とを備えるキットであって、前記試薬組成物がトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)及び尿素を含む、キットを提供する。
別の態様では、本発明は、HBsAgと、HBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体と、試薬組成物とを備える反応システムであって、前記試薬組成物がトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)及び尿素を含む、反応システムを提供する。
別の態様では、本発明は、HBsAgを含有するサンプル中のHBsAgの量を定量的に検出する方法であって、
(1)前記サンプルを、試薬組成物中のHBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体と接触させて、免疫複合体を得る工程と、
(2)工程(1)で得られた前記免疫複合体の量を測定する工程と、
を含み、工程(1)において、前記試薬組成物がTCEP及び尿素を含む、方法を提供する。
(1)前記血液サンプルを前記試薬組成物中の第1の抗体と接触させて、免疫複合体を得る工程と、
(2)工程(1)で得られた前記免疫複合体の量を測定する工程と、
を含む方法によって、被験体の血液サンプル中のHBsAgの量を検出し、工程(1)において、前記血液サンプルが希釈されていない。
本発明において、特に明記しない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用されるウイルス学的、生化学的、及び免疫学的な実験手順は、いずれも対応する分野で広く使用されている日常的な手順である。一方、本発明をよりよく理解するために、関連する用語の定義及び説明を以下に提示する。
処方:40mM TCEP+2M尿素+600mM NaCl+100mM CB9.6+0.1%Tween−20。
1.炭酸ナトリウム31.8g及び重炭酸ナトリウム58.6gを秤量し、脱イオン水に溶解して1000mLの容量にし、pH値が9.6の1M炭酸バッファー(CB)を調製した。
2.NaCl87.66gを秤量し、脱イオン水に溶解して500mLの容量にし、3M NaCl溶液を調製した。
3.尿素240.24gを秤量し、脱イオン水に溶解して500mLの容量にし、8M尿素溶液を調製した。
4.TCEP5.733gを秤量して100mLの脱イオン水に溶解し、次いで1M炭酸バッファー(pH9.6)50mL、8M尿素125mL、3M NaCl溶液100mL、及びTween−20 0.5mLを加えてよく混合し、脱イオン水を加えて500mLの容量にした。
1.固定化抗体の調製
(1−1)マウス抗HBsAgモノクローナル抗体(Xiamen Wantai Canghai Biotechnology Co., Ltd.から購入)をpH9.6の50mM CBバッファー(NaHCO3/Na2CO3バッファー、最終濃度50mM、pH9.6)で希釈して最終濃度を4μg/mlとし、コーティング溶液を調製した。
(1−2)化学発光反応用96穴プレートの各ウェルに先の工程(1)で調製したコーティング溶液100μLを加え、2℃〜8℃で16時間〜24時間コーティングを行った。
(1−3)PBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween20)で1回洗浄し、コーティングされていないマウス抗HBsAgモノクローナル抗体を除去した。次いで、200μlのブロッキング溶液(pH7.4であり、20%仔ウシ血清、1%BSA及び1%カゼインを含む20mM Na2HPO4/NaH2PO4バッファー溶液)を各ウェルに加え、37℃で2時間ブロッキングを行った後、ブロッキング溶液を廃棄した。乾燥後、プレートをアルミホイルの袋に入れ、後で使用するため2℃〜8℃で保存した。
抗HBsAgポリクローナル抗体のHRP標識を、改良された過ヨウ素酸ナトリウム法を使用して行った。以下の実施例を、10mgの抗HBsAgポリクローナル抗体を標識するために行った。
(2−1)ヤギ抗HBsAgポリクローナル抗体(5mL)(Xiamen Wantai Canghai Biotechnology Co., Ltd.から購入、カタログ番号G1051)を2mg/mLの濃度で透析バッグに入れ、20mM CBバッファーに対して4℃で4時間透析し、透析バッファーを2時間ごとに交換した。
(2−2)セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)(Sigma-Aldrich/77332)40mgを正確に秤量し、2mLのddH2Oに溶解した後、20mg/mLのNaIO4 2mlを加え、室温で30分間反応させた。エチレングリコール40μLを加え、4℃で30分間反応させて、HRP活性化溶液(10mg/mL、4mL)を調製した。
(2−3)工程(2−2)で調製したHRP活性化溶液を、ヤギ抗HBsAgポリクローナル抗体が入っている透析バッグに加え、よく混合し、20mM CBバッファーに対する透析を暗所にて4℃で6時間〜8時間継続し、透析バッファーをプロセス中2時間ごとに交換した。
(2−4)NaBH4溶液(20mg/mL)0.5mLを調製し、工程(2−3)で調製した標識反応溶液を加え、よく混合した。混合物を暗所にて4℃で2時間反応させ、30分ごとによく混合した。
(2−5)工程(2−4)が完了した後、標識反応溶液を新しい透析バッグに再び充填し、PBSバッファーに対して4℃で4時間透析した。
(2−6)工程(2−5)が完了した後、50%飽和硫酸アンモニウム(50%は透析バッグ内の硫酸アンモニウムの濃度を指し、主な目的はヤギポリクローナル抗体−HRP標識生成物を沈殿させることであった)を加えた。12000rpmで10分間遠心分離した後、上清を廃棄し、沈殿物を上下にピペッティングして50%グリセロール+10%NBS(最終濃度)(NBSは新生仔ウシ血清の略称)に溶解し、よく混合して、後で使用するために−20℃で保管した。
(2−7)工程(2−6)で得られたヤギポリクローナル抗体−HRP標識生成物を、酵素標識希釈バッファー(pH7.4であり、20%ウシ胎児血清、1%カゼイン、10%スクロース、及び0.05%アミノピリンを含む20mM Na2HPO4/NaH2PO4バッファー溶液)に体積基準で1/4000の希釈率で希釈し、酵素標識反応液を調製し、混合後、後で使用するために2℃〜8℃で保管した。
中濃度及び高濃度のHBsAgサンプルの定量検出のための定量標準物質は、種々の濃度のB型肝炎ウイルス表面抗原を含む一連のサンプルであった。合計8種類の標準物質が含まれ、その濃度は、それぞれチューブ1本当たり500μl容量で100000IU/mL、50000IU/mL、10000IU/mL、5000IU/mL、1000IU/mL、500IU/mL、100IU/mL、20IU/mLであった。表面抗原は、Xiamen Wantai Kairui Biotechnology Co., Ltd.によって提供され、NIBSCによって公開されたWHO標準物質(コード:00/588)まで遡ることができた。標準物質の希釈に使用する溶液は、HBsAg及びHBsAb陰性の健康な献血者の血漿若しくは血清でもよく、又は20%の新生仔ウシ血清を含むPBS溶液でもよかった。
調製例1で調製した。
1.抗体標識磁気粒子の調製
(1−1)磁気ビーズ(日本のJSR株式会社のMagnosphere MS300/カルボキシル、粒子径は3μmであった)4mgを活性化バッファー系(50mM MES5.0)1mLで2回洗浄し、上清を廃棄した。EDC試薬4mg及びNHS試薬4mg(いずれも50mM MES5.0で10mg/mLに調合)を加え、よく混合した後、室温で20分間振盪しながら活性化した。
(1−2)活性化された磁気ビーズを活性化バッファー系(50mM MES5.0)1mLで3回洗浄して、過剰なEDC及びNHSを除去し、上清を廃棄した。pH6.0の50mMリン酸バッファー1mL及びマウス抗HBsAgモノクローナル抗体160μgを加え、よく混合した後、室温で3時間振盪しながら反応させた。
(1−3)(1−2)で得られた磁気ビーズをPBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween20)1mlで3回洗浄した後、ブロッキングバッファー(20mM PB7.4、1%グリシン、0.1%BSA、0.05%Tween−20)1mlを加え、よく混合した後、室温で3時間振盪しながら反応させた。
(1−4)工程(1−3)で得られたブロッキングされた磁気粒子をPBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween20)で3回洗浄した後、貯蔵バッファー(20mM Tris−HClバッファー(pH8.0)、0.5%BSA、150mM NaCl、0.5%カゼイン、0.1%防腐剤)1mlを加え、後で使用するために2℃〜8℃で保管した。
(1−5)コーティングされた磁気粒子を貯蔵バッファー(20mM Tris−HClバッファー(pH8.0)、0.5%BSA、150mM NaCl、0.5%カゼイン、0.1%防腐剤)で10倍に希釈し、後で使用するために2℃〜8℃で保管した。
(2−1)ヤギ抗HBsAgポリクローナル抗体100μgを標識バッファー系(50mMリン酸バッファー、pH8.0)300μlに加え、アクリジニウムエステル(5mM NHS−SAE)12μLを加えて、暗所にて室温で30分間反応させた。
(2−2)工程(2−1)で調製した標識生成物を停止バッファー(100mMグリシンを含むリン酸バッファー、pH8.0)200μLに加え、暗所にて室温で30分間反応させた。
(2−3)工程(2−2)による標識生成物を透析バッグに入れ、透析バッファー(20mMリン酸バッファー、pH7.4)に対して暗所にて4℃で6時間〜8時間透析し、2時間ごとに透析バッファーを交換した。
(2−4)工程(2−3)で得られた標識生成物を保管チューブに移し、2%BSA及び50%グリセロールを加え、後で使用するために−20℃で保管した。
(2−5)工程(2−4)で調製したアクリジニウムエステル標識生成物を体積比1/3000でアクリジニウムエステル標識希釈バッファー(pH値7.4であり、0.5%BSA、0.5%カゼイン、0.05%Tween−20及び0.1%防腐剤を含む、20mM Na2HPO4/NaH2PO4バッファー溶液)への希釈に供して発光標識反応溶液を調製した後、後で使用するため混合してから2℃〜8℃で保管した。
この調製例のキットの定量標準物質は、調製例2の工程3と同じであった。
調製例1のように調製した。
1.実験試薬/キット
調製例2のキット
慢性B型肝炎の患者に由来する38例の血清サンプル(番号P1〜P38)を次の工程に従ってHBsAg定量検出に供した。
(2)酵素標識反応:工程(1)が完了した後、化学発光反応プレートをPBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween20)で5回洗浄し、反応解離溶液及び未反応のサンプルを除去した。調製例2の工程(2−7)で調製した酵素標識反応溶液100μLを各ウェルに加え、37℃のインキュベーターで30分間反応させた。
(3)発光反応及び測定:工程(2)が完了した後、化学発光反応プレートをPBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween20)で5回洗浄して、過剰な酵素標識反応溶液を除去した。Pierce Company製のPICO化学発光基質100μLを各ウェルに加え、各反応ウェルの発光値(RLU:luminescence value)をOrin II化学発光検出器で直ちに読み取った。
(4)定量のための標準曲線の作成:工程(3)が完了した後、8種類の定量標準物質の測定値及びそれらの対応する濃度に対して線形回帰を行い、標準曲線を得た。結果を図1に示した。結果は、上記検出方法の精度での定量の上限は100000IU/mL、下限は20IU/mL、その線形ダイナミックレンジは3.5桁であることを示した。RLU測定値からHBsAg濃度を計算する式は次の通りである:濃度HBsAg(IU/mL)=10(Log10(RLU)−2.7252)/×0.8668
(5)試験するサンプルのHBsAg濃度の取得:工程(1)〜工程(4)を通してサンプルP1〜サンプルP38を測定した後、サンプルの対応するRLU値を得た。測定値を、工程(4)で得られたHBsAg濃度の計算式に代入し、サンプル中のB型肝炎ウイルス表面抗原の濃度を算出した。
調製例2のキット、Rocheキット(1箱当たり100回分の検査、カタログ番号07143737190)及びAbbottキットを用いた、同じバッチに由来するサンプルの検出結果を表1に示した。
1.実験試薬:B型肝炎ウイルス表面抗原アッセイキット(化学発光微粒子免疫測定法)(Xiamen Wantai Kairui Biotechnology Co., Ltd.から購入)、調製例1の解離溶液、40mM TCEP溶液、600mM NaCl溶液、2M尿素溶液及び6M尿素。
(1)サンプル反応:サンプル20μLを反応チューブに加えた後、100μLの調製例1で調製した解離溶液、2M尿素、6M尿素、600mM NaCl、40mM TCEPの溶液をそれぞれ加えた。Xiamen Wantai Kairui Biotechnology Co., Ltd.製のB型肝炎ウイルス表面抗原測定キット(化学発光微粒子免疫測定法)の磁気粒子試薬50μlを加え、よく振盪混合した後、37℃のインキュベーターで15分間反応させた。
(2)発光標識反応:工程(1)が完了した後、化学発光反応チューブをPBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween−20)で2回洗浄し、Xiamen Wantai Kairui Biotechnology Co., Ltd.製のB型肝炎ウイルス表面抗原アッセイキット(化学発光微粒子免疫測定法)のアクリジニウムエステル標識試薬50μLを各ウェルに加え、37℃のインキュベーターで10分間反応させた。
(3)発光反応の測定:工程(2)が完了した後、化学発光反応チューブをPBST洗浄溶液(20mM PB7.4、150mM NaCl、0.1%Tween−20)で4回洗浄した。Sirius−L single−tube化学発光検出器を使用し、励起溶液をin−situ注入によって加え、同時に光強度の検出を行った。
(4)定量のための標準曲線の作成:工程(3)が完了した後、100000IU/mLのHBsAgサンプルの3倍勾配希釈によって得られた一連のサンプルの測定値及び対応する濃度に対して線形回帰を行い、定量用の標準曲線を得た。
Claims (20)
- HBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体と試薬組成物とを備えるキットであって、前記試薬組成物がトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)及び尿素を含む、キット。
- 前記試薬組成物が、非イオン性界面活性剤、無機塩、及びバッファーからなる群から選択される1つ以上の試薬を更に含む、請求項1に記載のキット。
- 前記試薬組成物が、以下:
(i)前記非イオン性界面活性剤が、Chaps、スルホベタイン型界面活性剤、Triton型洗浄剤、Tween型洗浄剤、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、好ましくは、前記非イオン性界面活性剤が、SB14、SB16、Tween−20、Tween−40、Triton X−100、及びそれらの任意の組み合わせから選択され、より好ましくは、前記非イオン性界面活性剤が、Triton X−100及び/又はTween−20である;
(ii)前記無機塩が、NH4SO4及びNaClから選択される;
(iii)前記バッファーが炭酸バッファーである;
の1つ以上の特徴を有する、請求項2に記載のキット。 - 前記試薬組成物が、
(1)TCEP、尿素、及び残部は水、
(2)TCEP、尿素、無機塩(例えば、NaCl)、及び残部は水、
(3)TCEP、尿素、無機塩(例えば、NaCl)、非イオン性界面活性剤(例えば、Tween−20)、及び残部は水、又は、
(4)TCEP、尿素、無機塩(例えば、NaCl)、非イオン性界面活性剤(例えば、Tween−20)、バッファー(例えば、炭酸バッファー)、及び残部は水、
を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載のキット。 - TCEPが1mM〜100mM(例えば、1mM〜50mM、10mM〜50mM、20mM〜50mM、又は30mM〜50mM、例えば40mM)の量で存在し、
尿素が、0.5M〜8M(例えば、1M〜8M、1M〜6M、又は2M〜6M、例えば2M)の量で存在し、
前記非イオン性界面活性剤が、0%〜10%(体積/体積)(例えば、0.1%〜1%、例えば0.1%)の量で存在し、
前記無機塩が、0.5M〜8M(例えば、0.5M〜1M、例えば0.6mM)の量で存在し、
前記バッファーが、0mM〜200mM(例えば、50mM〜200mM、又は50mM〜150mM、例えば100mM)の量で存在する、
請求項1〜4のいずれか一項に記載のキット。 - 前記試薬組成物が40mM TCEP及び2M尿素を含み、
好ましくは、前記試薬組成物が以下の成分:40mM TCEP、2M尿素、600mM NaCl、100mM炭酸バッファー(pH9.6)、0.1%Tween−20(体積/体積)、及び残部は水(例えば、脱イオン水)からなる、請求項1〜5のいずれか一項に記載のキット。 - 前記キットが、HBsAgを認識してそれに結合することができる検出試薬、例えば、HBsAgに特異的に結合することができる第2の抗体を更に備え、
好ましくは、前記検出試薬が、酵素(例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ)、化学発光試薬(例えば、アクリジニウムエステル化合物)、又は蛍光色素等の検出可能な標識を担持する、請求項1〜6のいずれか一項に記載のキット。 - 前記キットが、マイクロタイタープレート(例えば、マイクロウェルプレート又はELISAプレート)又は磁気ビーズ等の固体支持体を更に備え、
好ましくは、前記キットが、表面が前記第1の抗体でコーティングされている固体支持体を備える、請求項1〜7のいずれか一項に記載のキット。 - 前記キットが、標準物質(例えば、異なる既知量のHBsAgを含有する一連のサンプル);陽性対照サンプル(例えば、既知量のHBsAgを含有するサンプル);陰性対照サンプル(例えば、HBsAgを含まないサンプル);酵素により触媒される基質の呈色反応を停止するための停止溶液(例えば、硫酸、塩酸又は水酸化ナトリウムの溶液);非特異的結合を阻害するためのブロッキング溶液;及び採血デバイス(例えば、発熱物質を含まない真空採血管)からなる群から選択される1つ以上の試薬又はデバイスを更に備える、請求項1〜8のいずれか一項に記載のキット。
- HBsAgと、HBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体と、試薬組成物とを含む反応システムであって、前記試薬組成物が請求項1〜6のいずれか一項に規定される通りである、反応システム。
- HBsAgを含有するサンプル中のHBsAgの量を定量的に検出する方法であって、
(1)前記サンプルを、試薬組成物中のHBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体と接触させて、免疫複合体を得る工程と、
(2)工程(1)で得られた前記免疫複合体の量を測定する工程と、
を含み、工程(1)において、前記試薬組成物が請求項1〜6のいずれか一項に規定される通りである、方法。 - 前記方法が、以下:
(i)前記サンプルが、全血、血漿、又は血清等の血液サンプルである;
(ii)前記血液サンプルが希釈されていない;
(iii)前記第1の抗体が固体支持体の表面にコーティングされ、好ましくは、前記第1の抗体が、マイクロタイタープレート(例えば、マイクロウェルプレート又はELISAプレート)又は磁気ビーズの表面にコーティングされている;
(iv)工程(2)の前に、前記免疫複合体を洗浄して未反応物質を除去する工程を更に含む、
の1つ以上の特徴を有する、請求項11に記載の方法。 - 工程(2)において、前記免疫複合体の量が免疫学的検出によって決定され、
好ましくは、前記免疫学的検出が、酵素イムノアッセイ又は化学発光イムノアッセイであり、好ましくは、前記免疫学的検出が、CLEIA法及びCLIA法から選択され、
好ましくは、工程(2)において、前記免疫複合体の量が、HBsAgに特異的に結合することができる第2の抗体を使用して検出され、前記第2の抗体が、酵素(例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ)、化学発光試薬(例えば、アクリジニウムエステル化合物)又は蛍光色素等の検出可能な標識を担持する、請求項11又は12に記載の方法。 - 被験体の血液サンプル中のHBsAgの量を検出するキットの製造における試薬組成物の使用であって、前記試薬組成物が請求項1〜6のいずれか一項に規定される通りである、使用。
- 前記キットが、HBsAgに特異的に結合することができる第1の抗体を更に備える、請求項14に記載の使用。
- 前記キットが、HBsAgに特異的に結合することができる第2の抗体等の、HBsAgを認識してそれに結合することができる検出試薬を更に備え、
好ましくは、前記検出試薬が、酵素(例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ)、化学発光試薬(例えば、アクリジニウムエステル化合物)、又は蛍光色素等の検出可能な標識を担持する、請求項14又は15に記載の使用。 - 前記キットが、マイクロタイタープレート(例えば、マイクロウェルプレート又はELISAプレート)又は磁気ビーズ等の固体支持体を更に備え、
好ましくは、前記第1の抗体が前記固体支持体の表面にコーティングされている、請求項14〜16のいずれか一項に記載の使用。 - 前記キットが、
(1)前記血液サンプルを前記試薬組成物中の第1の抗体と接触させて、免疫複合体を得る工程と、
(2)工程(1)で得られた前記免疫複合体の量を測定する工程と、
を含む方法によって、被験体の血液サンプル中のHBsAgの量を検出し、工程(1)において、前記血液サンプルが希釈されていない、請求項14〜17のいずれか一項に記載の使用。 - 工程(2)において、前記免疫複合体の量が免疫学的検出(例えば、酵素イムノアッセイ又は化学発光イムノアッセイ)によって決定され、
好ましくは、工程(2)において、前記免疫複合体の量が、HBsAgに特異的に結合することができる第2の抗体を使用して検出され、前記第2の抗体が、酵素(例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ)、化学発光試薬(例えば、アクリジニウムエステル化合物)又は蛍光色素等の検出可能な標識を担持する、請求項18に記載の使用。 - 以下:
(i)工程(2)の前に、前記免疫複合体を洗浄して未反応物質を除去する工程を更に含む;
(ii)前記被験体がHBV感染症又はHBV感染に関連する疾患(例えば、B型肝炎)を有する;
(iii)前記血液サンプルが、全血、血漿、及び血清からなる群から選択される;
の1つ以上を特徴とする、請求項18又は19に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711258416.3A CN109870581B (zh) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | 一种定量检测HBsAg的试剂盒及方法 |
CN201711258416.3 | 2017-12-04 | ||
PCT/CN2018/118494 WO2019109864A1 (zh) | 2017-12-04 | 2018-11-30 | 一种定量检测HBsAg的试剂盒及方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021505906A true JP2021505906A (ja) | 2021-02-18 |
JP7194746B2 JP7194746B2 (ja) | 2022-12-22 |
Family
ID=66750800
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020547274A Active JP7194746B2 (ja) | 2017-12-04 | 2018-11-30 | HBsAgの定量検出のためのキット及び方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11543413B2 (ja) |
EP (1) | EP3722811A4 (ja) |
JP (1) | JP7194746B2 (ja) |
KR (1) | KR102390761B1 (ja) |
CN (1) | CN109870581B (ja) |
AU (1) | AU2018378517B2 (ja) |
CA (1) | CA3084683C (ja) |
WO (1) | WO2019109864A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110954692A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-04-03 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种还原剂缓冲液及其制备方法和应用 |
WO2023057823A1 (en) * | 2021-10-10 | 2023-04-13 | Alipour Elias | Detecting an antigen of a virus using electrochemical analysis |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005185285A (ja) * | 1998-04-17 | 2005-07-14 | Innogenetics Nv | 還元剤を用いる改良された免疫診断アッセイ |
WO2005111620A1 (ja) * | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Advanced Life Science Institute, Inc. | B型肝炎ウィルスの検出方法 |
WO2006033368A1 (ja) * | 2004-09-22 | 2006-03-30 | Advanced Life Science Institute, Inc. | B型肝炎ウイルスs抗原の検出法 |
US20090280474A1 (en) * | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Abbott Laboratories | Method for detecting a virus |
JP2015185285A (ja) * | 2014-03-22 | 2015-10-22 | 日本特殊陶業株式会社 | スパークプラグ、および、点火システム |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
US4847080A (en) * | 1984-03-07 | 1989-07-11 | New York Blood Center, Inc. | Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipide vesicle carriers |
CN1197927A (zh) * | 1997-04-25 | 1998-11-04 | 武汉市第七医院 | 一种直接检测血清乙肝病毒核心抗原试剂 |
GB0224688D0 (en) | 2002-10-23 | 2002-12-04 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
GB0428394D0 (en) | 2004-12-24 | 2005-02-02 | Chiron Srl | Saccharide conjugate vaccines |
JP4913587B2 (ja) * | 2006-12-28 | 2012-04-11 | 雪印メグミルク株式会社 | ペプチドおよびタンパク質定量法 |
US20090098531A1 (en) | 2007-09-13 | 2009-04-16 | Abbott Laboratories | Detecting hepatitis b virus |
WO2011013034A1 (en) | 2009-07-30 | 2011-02-03 | Pfizer Vaccines Llc | Antigenic tau peptides and uses thereof |
CN102081018A (zh) | 2009-11-30 | 2011-06-01 | 希森美康株式会社 | 样品的预处理方法及hcv的免疫测定方法 |
WO2014115878A1 (ja) * | 2013-01-28 | 2014-07-31 | シスメックス株式会社 | HBs抗原を検出するための試料の前処理方法およびその利用 |
JOP20200096A1 (ar) * | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
CN106153935B (zh) * | 2015-03-26 | 2018-05-08 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 一种定量检测CD79α的酶联免疫试剂盒 |
US11454632B2 (en) | 2017-11-30 | 2022-09-27 | Fujirebio Inc. | Assay method and assay kit for hepatitis B virus S antigen |
-
2017
- 2017-12-04 CN CN201711258416.3A patent/CN109870581B/zh active Active
-
2018
- 2018-11-30 AU AU2018378517A patent/AU2018378517B2/en active Active
- 2018-11-30 US US16/768,848 patent/US11543413B2/en active Active
- 2018-11-30 WO PCT/CN2018/118494 patent/WO2019109864A1/zh unknown
- 2018-11-30 CA CA3084683A patent/CA3084683C/en active Active
- 2018-11-30 EP EP18886935.8A patent/EP3722811A4/en not_active Withdrawn
- 2018-11-30 KR KR1020207018464A patent/KR102390761B1/ko active IP Right Grant
- 2018-11-30 JP JP2020547274A patent/JP7194746B2/ja active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005185285A (ja) * | 1998-04-17 | 2005-07-14 | Innogenetics Nv | 還元剤を用いる改良された免疫診断アッセイ |
WO2005111620A1 (ja) * | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Advanced Life Science Institute, Inc. | B型肝炎ウィルスの検出方法 |
WO2006033368A1 (ja) * | 2004-09-22 | 2006-03-30 | Advanced Life Science Institute, Inc. | B型肝炎ウイルスs抗原の検出法 |
US20090280474A1 (en) * | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Abbott Laboratories | Method for detecting a virus |
JP2015185285A (ja) * | 2014-03-22 | 2015-10-22 | 日本特殊陶業株式会社 | スパークプラグ、および、点火システム |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102390761B1 (ko) | 2022-04-25 |
AU2018378517B2 (en) | 2022-07-14 |
KR20200094761A (ko) | 2020-08-07 |
CA3084683C (en) | 2023-08-01 |
CA3084683A1 (en) | 2019-06-13 |
JP7194746B2 (ja) | 2022-12-22 |
AU2018378517A1 (en) | 2020-06-25 |
US11543413B2 (en) | 2023-01-03 |
US20210164981A1 (en) | 2021-06-03 |
EP3722811A4 (en) | 2021-07-21 |
EP3722811A1 (en) | 2020-10-14 |
CN109870581B (zh) | 2021-05-04 |
WO2019109864A1 (zh) | 2019-06-13 |
CN109870581A (zh) | 2019-06-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6779293B2 (ja) | イムノアッセイにおける干渉を低減するための方法 | |
CN107817232A (zh) | 用于进行过敏症和自身免疫性疾病的诊断测定的自动化免疫分析*** | |
JP7060510B2 (ja) | 腫瘍マーカーの測定方法及び測定試薬 | |
JP2021182010A (ja) | Peg化分析物特異的結合剤を用いた粒子に基づくイムノアッセイ | |
JP6850254B2 (ja) | 干渉を減少させるための方法 | |
JP2023017986A (ja) | 自己抗体の直接イムノアッセイ測定法 | |
JP7194746B2 (ja) | HBsAgの定量検出のためのキット及び方法 | |
JP7209498B2 (ja) | B型肝炎ウイルスコア抗体の免疫測定方法 | |
US11768209B2 (en) | Method and reagent for measuring thyroglobulin | |
JP2017509897A (ja) | 多重分析法を実行するための対照 | |
WO2009084369A1 (ja) | Hiv-1抗原の検出用試薬及び検出方法 | |
JP4975601B2 (ja) | Hcv抗体測定用試薬キット及びhcv抗体測定方法 | |
JP7315965B2 (ja) | ウィルス性肝癌の検出方法 | |
JP2015184125A (ja) | 非特異的反応を抑制した免疫学的測定方法 | |
JP2020506386A (ja) | 少なくとも2種のペグ化された分析物特異的結合剤を使用する免疫アッセイ | |
JP4975600B2 (ja) | Hcv抗体測定用試薬キット及びhcv抗体測定方法 | |
CN116621930A (zh) | 检测基孔肯雅病毒的多肽、试剂盒和方法 | |
JPWO2003060519A1 (ja) | 凝集反応の測定方法 | |
KR20170123465A (ko) | 항-b형 간염 바이러스 항체 융합체를 포함하는 면역크로마토그래피용 테스트 스트립 및 이를 포함하는 진단용 키트 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200727 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200730 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20200722 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210629 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210706 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211006 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211214 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220311 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220524 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220822 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221115 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221212 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7194746 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |