JP2021505602A - 腎外髄質カリウムチャネル阻害剤の結晶形およびその調製方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、腎外髄質カリウムチャネル阻害剤の結晶形およびその調製方法を提供する。特に、本発明は、腎外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害剤（Ｉ）のＬ−酒石酸塩の結晶形ＩＩＩおよびその調製方法を提供する。結晶形ＩＩＩは良好な化学的安定性および結晶形安定性を有し、使用される結晶化溶媒は、低い毒性および残渣を有する。したがって、本発明は、臨床治療においてより良好に使用されうる。

Description

本願は２０１７年１２月６日に出願された中国特許出願第２０１７１１２７３０９９．２号の優先権を主張し、その内容は、ここではその全文を参照して盛り込まれている。

本発明は、腎外髄質チャネル阻害剤の結晶形およびその調製方法に関する。

腎臓の塩分再吸収機能を強化することは、高血圧リスクを引き起こしうる。逆に、腎臓の再吸収機能を阻害することで、尿の***を促進し、利尿・降圧の役割を果たすことができる。一般的な利尿薬にはサイアザイド系利尿薬があり、これは米国で第一選択の降圧薬であり、主にＮａ^＋−Ｃｌ輸送キャリアに作用する。ループ利尿薬は、主にＮａ^＋−Ｋ^＋−２Ｃｌ⁻輸送体を介する腎機能障害患者により効果的である。しかし、いずれの利尿薬も低カリウム血症（症状：脱力、疲労、筋攣縮、便秘、および、不整脈などの心拍異常）を引き起こすことがあり、心血管疾患の罹病および死亡のリスクを増大させる。

腎外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）は、内向き整流カリウムチャネル１．１（ＫＩＲ １．１）とも呼ばれる。ＲＯＭＫイオンチャネルは、Ｎａ^＋−Ｋ^＋−２Ｃｌ⁻共輸送体ＮＫＣＣ２（ＮａＣｌ輸送を担当）と協調して、腎太上枝（ＴＡＬ）の頂端膜伝導性を通したＮａ^＋の再吸収を規制できる。研究により、ＲＯＭＫ遺伝子をノックアウトした後、マウスＴＡＬおよびＣＣＤの３５−ｐＳイオンチャネル、ならびにＴＡＬの他のＫ^＋イオンチャネルが欠失することにより、ＲＯＭＫが腎臓の分泌チャネルに直接的に関連することが見出された。バター症候群は、常染色体劣性遺伝性疾患で、腎臓での多量の塩分喪失、低カリウム血症および低血圧を特徴とする。傍球細胞過形成は主にＲＯＭＫまたはＮａ^＋−Ｋ^＋−２Ｃｌ⁻共輸送体の突然変異によって引き起こされるが、ＲＯＭＫ突然変異によって引き起こされる傍球細胞過形成の低カリウム血症はＮａ^＋−Ｋ^＋−２Ｃｌ⁻共輸送体の突然変異によって引き起こされるものと比較して大幅に軽減される。結論として、ＲＯＭＫ機能の阻害はＮａ^＋−Ｋ^＋−２Ｃｌ⁻共輸送体の塩再吸収機能を効果的に阻害し、尿排除を促進し、低カレミアを引き起こさずにディリゼーションと降圧効果を達成できる。

国際公開第２０１６／０９１０４２号（特許文献１、公開日２０１６年６月１６日）は、腎臓外側髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害剤を開示しており、その化学名は（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキサミドである。他のＲＯＭＫ阻害剤と比較して、この化合物はさらなる極性基を有し、これはＣｌｏｇＰを減少させ、ｈＥＲＧ選択性を改善し、そしてＲＯＭＫ阻害剤の活性を維持することに基づいて安全性を増加させ、その構造は式（ＩＩ）によって表される。

医薬活性成分の結晶構造はしばしば、薬剤の化学的および物理的安定性に影響を及ぼす。結晶化条件および貯蔵条件の違いは化合物の結晶構造の変化につながることがあり、時には他の結晶形の生成を伴うことがある。一般的に言えば、非晶質薬物製品は規則的な結晶構造を有さず、しばしば、製品の安定性が悪く、濾過が困難であり、容易に凝集し、流動性が悪いなどの他の欠陥を有する。そのため、一般式（ＩＩ）で表される化合物の諸特性を向上させる必要がある。

国際出願第２０１６／０９１０４２号

本発明が解決しようとする技術的課題は、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキサミド酒石酸塩（式（Ｉ）で表される。）の結晶形ＩＩＩおよびその製造方法を提供することであり、その結晶形は良好な安定性を有する。

本発明の技術的解決策は以下の通りである。

本発明は、Ｃｕ−Ｋα線照射時に２θ回折角３．８８、７．５４、１４．７６、１８．６４、および２２．２１に特徴的なピークが存在する粉末Ｘ線回折スペクトルが得られる、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩを提供する。

好ましくは、結晶形ＩＩＩのＸ線粉末回折スペクトルは、３．８８、７．５４、１１．２２、１４．７６、１７．２９、１８．６４、２０．２８、２２．２１、２３．７９、２５．３４、および２７．０９に特徴的なピークを有する。

より好ましくは、結晶形ＩＩＩのＸ線粉末回折スペクトルは、３．８８、７．５４、１１．２２、１１．６１、１２．２６、１２．７３、１３．３５、１３．６４、１４．７６、１５．９８、１６．４７、１７．０７、１７．２９、１８．６４、２０．２８、２０．６２、２２．２１、２３．１６、２３．７９、２４．１４、２４．８５、２５．３４、２６．０８、２６．８５、２７．０９、２８．７７、２９．７４、３２．２２、３３．６６、３４．５０、３５．６０、３７．４２、および３９．２７に特徴的なピークを有する。

本発明はさらに、以下の方法のうちの一つで結晶形ＩＩＩを調製するための方法を提供する。

方法（１）：式（Ｉ）で表される化合物の遊離状態とＬ−酒石酸とを一溶媒または混合溶媒中で反応させた後、撹拌、晶析、濾過、乾燥させて目的の結晶形ＩＩＩを得る。溶媒は、スルホキシド溶媒、アミド溶媒、またはアルコール溶媒であり、混合溶媒は、スルホキシド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒、またはアミド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒である。スルホキシド溶媒は、好ましくはジメチルスルホキシドであり、アミド溶媒は、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドであり、アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはｎ−ブタノールである。

方法（２）：式（Ｉ）で表される化合物を溶媒または混合溶媒に溶解し、結晶化、濾過、および乾燥して目的とする結晶形ＩＩＩを得る。結晶化は室温で行うか、溶媒を冷却または揮発させながら、または結晶種を誘導しながら行い、冷却の温度は−１０〜２５℃であり、好ましくは室温で行う。溶媒は、スルホキシド溶媒、アミド溶媒、またはアルコール溶媒であり、混合溶媒は、スルホキシド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒、またはアミド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒である。スルホキシド溶媒は、好ましくはジメチルスルホキシドであり、アミド溶媒は、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドであり、アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはｎ−ブタノールである。混合溶媒は、より好ましくは、ジメチルスルホキシド／メタノール、ジメチルスルホキシド／エタノール、ジメチルスルホキシド／ｎ−プロパノール、ジメチルスルホキシド／イソプロパノール、ジメチルスルホキシド／ｎ−ブタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／エタノールまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／エタノールである。

本発明はさらに、結晶形ＩＩＩと、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と、を含む結晶形ＩＩＩの医薬組成物に関する。

本発明はさらに、上記の結晶形ＩＩＩと、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と、を混合することを含む、薬学的組成物を調製するための方法に関する。

本発明はさらに、腎外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害剤に関連する疾患または状態を治療および／または予防するための医薬の製造における、結晶形ＩＩＩまたは結晶形ＩＩＩの医薬組成物の使用に関し、ここで、疾患または状態は、好ましくは高血圧または心不全である。研究によれば、遊離塩基形態と比較して、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩのバイオアベイラビリティおよび吸湿性が改善される。マウス実験における結晶形ＩＩＩのバイオアベイラビリティ（５ｍｇ／ｋｇ）は、遊離塩基の９２８３ｎｇ／ｍＬ・ｈから１２６１８ｎｇ／ｍＬ・ｈに上昇し、結晶形ＩＩＩのｉｎ ｖｉｖｏバイオアベイラビリティは、遊離塩基のバイオアベイラビリティよりも明らかに良好であることがわかる。一方、結晶形ＩＩＩは遊離塩基と比較して、０％ＲＨ〜８０％ＲＨでわずか０．９３％の重量変化しか示さず、これは明らかな利点を有する。

Ｘ線粉末回折スペクトル（ＸＲＰＤ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて構造を決定し、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩを研究した。

結晶形ＩＩＩの再結晶方法は、特に限定されず、従来の再結晶操作を参照して行うことができる。たとえば、一般式（Ｉ）で表される化合物の原料を有機溶媒に溶解させた後、アンチソルベントを添加して結晶化させ、結晶化が完了した後、ろ過、乾燥することにより、必要な結晶を得ることができる。

本発明における結晶化は溶媒を揮発させながら、または室温で、または冷却しながら、または結晶種などにより誘起して行うことができる。

本発明の結晶形を調製するための方法において使用される出発物質は、非晶質または任意の結晶形などを含むが、これらに限定されない、式（Ｉ）で表される化合物の任意の形態でありうる。

本出願の説明および特許請求の範囲では、特に指定のない限り、本明細書で使用される科学用語および技術用語は当業者によって一般に理解される意味を有する。しかし、本発明をより良く理解するために、いくつかの関連する用語の定義および説明を以下に提供する。さらに、本出願において提供される用語の定義および解釈が、当業者によって一般に理解される意味と一致しない場合、本出願において提供される用語の定義および解釈が優先されるものとする。

本発明において使用される用語「Ｃ_１−６アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル基を表し、具体例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、１，２−ジメチルプロピル、などが含まれる。

本発明で使用される「アルコール溶媒」という用語は「Ｃ_１−６アルキル」上の一つ以上の水素原子を一つ以上の「ヒドロキシル（−ＯＨ）」で置換することから誘導される溶媒を指す。「Ｃ_１−６アルキル」は上記で定義される通りであり、特定の例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソペンタノールまたはトリフルオロエタノールが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明において使用される「スルホキシド溶媒」はチオニル（−ＳＯ−）とヒドロカルビルとを結合させることによって形成される化合物を指し、特定の例としてはジメチルスルホキシド、ジエチルスルホキシド、またはベンジルスルホキシドが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明で用いる「アミド溶剤」とはカルボン酸分子に含まれるカルボキシル基のヒドロキシル基がアミノ基または炭化水素アミノ基（−ＮＨＲまたは−ＮＲ_２）で置換された液状化合物をいい、アンモニアまたはアミン分子に含まれる窒素原子上の水素をアシルで置換した液状化合物とみなすこともできる。具体例としてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明で用いられる「混合溶媒」とは１種以上の異なる有機溶媒を所定の割合で混合した溶媒である。混合溶媒は、好ましくはスルホキシド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒、または、アミド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒である。スルホキシド溶媒は、好ましくはジメチルスルホキシドである。アミド溶媒は、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである。アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールまたはｎ−ブタノールである。混合溶媒は、より好ましくは、ジメチルスルホキシド／メタノール、ジメチルスルホキシド／エタノール、ジメチルスルホキシド／ｎ−プロパノール、ジメチルスルホキシド／イソプロパノール、ジメチルスルホキシド／ｎ−ブタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／エタノール、またはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／エタノールであり、その体積比は、０．０５：１〜０．０５、好ましくは、１：１、１：２、２：１、４：１、５：１、または１０：１であり、質量比は１０：１〜１：１０、好ましくは５：１、２：１、１：２または１．６：１である。

本発明で用いられる「Ｘ線粉末回折スペクトル（またはＸＲＰＤ）」とは、ブラッグ式２ｄｓｉｎθ＝ｎλ（式中、λはＸ線の波長、λ＝１．５４０５６Å、回折次数ｎは任意の正の整数であり、一般に一次回折ピークをとり、ｎ＝１である。）に従う。Ｘ線が結晶または結晶試料の一部のＤ格子面間隔を有する原子面にグレージング角θ（入射角の残留角、ブラッグ角としても知られる。）で入射する場合、ブラッグ式を満たすことができ、したがって、このＸ線粉末回折パターン群を測定することができることを意味する。

本発明で使用される「示差走査熱量測定分析（またはＤＳＣ）」は、熱効果に関連するすべての物理的および化学的変化を特徴付け、試料の相変化情報を得るために、試料の加熱または一定温度のプロセスにおける試料と参照物質との間の温度差および熱流差を測定することを指す。

ここで、「２θまたは２θ角」とは、回折角をいい、θはブラッグ角、単位は°（または度）、２θの誤差幅は±０．１〜±０．５、好ましくは±０．１〜±０．３、より好ましくは±０．２である。

本発明で用いる「結晶面間隔（または結晶面間隔（ｄ値））」とは、平行ではなく、隣接する二つの格子点を結ぶ空間格子から選択され、格子を並置された平行六面体単位に分割する三つの単位ベクトルａ、ｂ、ｃ、いわゆる結晶面間隔をいう。空間格子は、決定された並列パイプライン単位ラインに従って、空間格子または格子と呼ばれる一組の線形格子に分割される。ドットマトリックスおよび格子は幾何学的点および線をそれぞれ有する結晶構造の周期性を反映し、異なる結晶面は異なる表面間隔（すなわち、二つの隣接する平行な結晶面の間の距離）を有する。単位は、Åまたはオングストロームである。

本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩ、ならびに場合により一つ以上の医薬担体および／または希釈剤を含む医薬組成物に関する。医薬組成物は、任意の薬学的に許容される投薬形態に処方されうる。たとえば、本発明の結晶形ＩＩＩまたは式（Ｉ）で表される化合物の医薬製剤は、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、注射剤（注射剤、注射用滅菌粉末および注射用濃縮溶液を含む。）、坐剤、吸入剤またはスプレー剤に製剤化することができる。

さらに、本発明の医薬組成物はまた、経口、非経口、直腸投与、肺投与、または局所投与などの任意の適切な投与において、このような処置を必要とする患者または被験体に供されうる。経口投与に使用される場合、医薬組成物は、錠剤、カプセル、丸剤、顆粒剤などの経口固形製剤などの経口製剤、または経口溶液、経口懸濁液、シロップ剤などの経口液体製剤にすることができる。経口製剤に製剤化される場合、医薬製剤はまた、適切な充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤などを含有する可能性がある。非経口投与のために使用される場合、医薬調製物は、注射液、注射のための滅菌粉末、および注射のための濃縮溶液を含む、注射に作製されうる。注射製剤に調製される場合、医薬組成物は、既存の医薬分野における従来の方法に従って製造されうる。注射剤中に調製される場合、医薬調製物に添加される添加剤は存在しえず、そして適切な添加剤もまた、薬物の性質に従って添加されうる。直腸投与のために使用される場合、医薬調製物は、坐剤などに製剤化されうる。肺投与のために使用される場合、医薬製剤は、吸入剤またはスプレーなどにすることができる。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の式（Ｉ）によって表される化合物の結晶形ＩＩＩは、医薬組成物または薬物中に、治療的および／または予防的に有効な量で存在する。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩは、医薬組成物または薬物中に単位用量形態で存在する。

式（Ｉ）の化合物およびその結晶形ＩＩＩは、腎外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害に関連する疾患または状態を治療するための薬剤の製造に使用することができる。したがって、本出願はまた、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩの医薬の製造における使用に関し、この医薬は、腎臓外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害に関連する疾患を治療するために使用される。さらに、本出願はまた、腎外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害に関連する疾患を阻害するための方法であって、それを必要とする被験体に、治療的および／または予防的に有効な量の本発明の式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩまたは本発明の医薬組成物を投与することを含む方法に関する。

いくつかの好ましい実施形態では、疾患が腎臓外側髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害に関連し、これは高血圧または心不全を指す。

従来技術と比較して、本発明の技術的解決策は、以下の利点を有する。

研究により、本発明により調製された式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩは、良好な溶解性およびより高い純度を有し、ＸＲＰＤにより検出された結晶形は高温、高湿度、および照明の条件下で同じままであり、良好な結晶形安定性を示し、本発明の技術的解決策により得られた式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩは製造、輸送および貯蔵の医学的要件を満たすことができ、安定で、反復可能で、制御可能な製造プロセスを有し、工業生産に適していることが示されている。

式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩのＸＲＰＤスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩのＤＳＣパターンである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩのＸＲＰＤスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩのＸＲＰＤスペクトルである。

以下、実施例を参照して本発明をより詳細に説明する。以下の実施例は、本発明の技術的解決策を説明するためにのみ使用され、本発明の本質および範囲を限定するものではない。

実験用試験装置
１． ＤＳＣパターン
装置モデル：ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ ＤＳＣ １ Ｓｔａｒｅｅ Ｓｙｓｔｅｍ
パージガス：窒素
加熱速度：１０．０℃／分
温度領域：４０〜３５０℃

２． Ｘ線回折スペクトル
装置モデル：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｆｏｃｕｓ Ｘ線粉末回折装置
光線：単色Ｃｕ−Ｋα線（λ＝１．５４０６）
スキャンモード：θ／２θ、スキャンレンジ：２〜４０°
電圧：４０ＫＶ、電流：４０ｍＡ

式（ＩＩ）で表される化合物（遊離状態）は、特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載されている方法を参照して調製される。

比較例１：結晶形Ｉの調製
５０ｍｌの反応フラスコにＬ−酒石酸（０．４ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）を加え、３０ｍｌのメタノールを加え、溶解するまで７０℃に加熱した。（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキシアミド（１．０ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）（特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載された方法に従って調製した。）を加え、次いで混合物を７０℃で２４時間反応させ、室温まで冷却し、続いて吸引ろ過し、乾燥させて、１．２２ｇの固形物を９１．７％の収率で得た。Ｘ線粉末回折スペクトルを図３に示し、結晶形を結晶形Ｉと特定した。

比較例２：結晶形ＩＩの調製
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキシアミド（１．０ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）（特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載された方法に従って調製した。）、Ｌ−酒石酸（０．４ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）を５０ｍｌの反応フラスコに加え、３０ｍｌのイソプロパノール／テトラヒドロフラン／水（体積比２０：１０：１）を加え、７０℃で２４時間加熱した後、室温まで還元し、吸引ろ過、乾固し、収率８６．５％、１．１５ｇの固形物を得た。Ｘ線粉末回折スペクトルを図４に示し、結晶形を結晶形ＩＩと特定した。

実施例１：結晶形ＩＩＩの調製
Ｌ−酒石酸（０．４ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）を反応フラスコに加え、２５ｍＬのエタノールを加え、溶解するまで７０℃に加熱し、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキシアミド（１．０ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）（特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載された方法に従って調製した。）を加え、混合物を７０℃で２４時間反応させ、次いで室温まで冷却し、吸引ろ過して、９２．３％の収率で１．２３ｇの固形物を得た。結晶試料のＸ線粉末回析スペクトル（ＸＲＰＤスペクトル）を図１に示し、ＤＳＣスペクトルを図２に示す。２２７．６０℃に鋭い融解吸熱ピークを示した。この結晶形を結晶形ＩＩＩと特定した。特徴２θピーク位置は以下の通りである。

表１：結晶形ＩＩＩの特徴的なピーク

実施例２：結晶形ＩＩＩの調製
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキシアミド（１．０ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）（特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載された方法に従って調製した。）を反応フラスコＡに添加し、１０ｍＬのジメチルスルホキシドを添加して溶解するまで７０℃に加熱し、反応フラスコＢにＬ−酒石酸（０．４ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）を添加し、２０ｍＬの無水エタノールを添加し、溶解するまで７０℃に加熱した後、反応フラスコＢ内の透明溶液を反応フラスコＡに添加し、７０℃で４時間反応させ、室温まで冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、１．１３ｇの固体が得られ、収率は８５．０％であった。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例３：結晶形ＩＩＩの調製
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキシアミド（１．０ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）（特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載された方法に従って調製した。）を反応フラスコＡに加え、１０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加えて溶解するまで７０℃に加熱した後、反応フラスコＢにＬ−酒石酸（０．４ｇ，２．６６ｍｍｏｌ）を加え、２０ｍＬの無水エタノールを加え、溶解するまで７０℃に加熱し、反応フラスコＢ内の透明溶液を反応フラスコＡに加え、７０℃で４時間反応させ、室温まで冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、１．１０ｇの固体が得られ、収率は８２．７％であった。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例４：結晶形ＩＩＩの調製
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−カルボニル−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピリジンカルボキシアミド（１．０ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）（特許文献１（公開日２０１６年６月１６日）に記載された方法に従って調製した。）を反応フラスコＡに添加し、１０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを添加し、溶解するまで７０℃に加熱し、反応フラスコＢにＬ−酒石酸（０．４ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）を添加し、２０ｍＬの無水エタノールを添加し、溶解するまで混合物を７０℃に加熱し、反応フラスコＢ中の透明溶液を反応フラスコＡに添加し、７０℃で４時間反応させ、次いで室温に冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、１．１２ｇの固体が得られ、収率は８４．２％であった。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例５：結晶形ＩＩＩの調製
式（Ｉ）で表される化合物（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）（実施例１に従って調製した。）を反応フラスコに添加し、６ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを添加し、混合物を撹拌し、７０℃で溶解し、次に１２ｍＬの予熱した無水エタノールを添加し、７０℃で４時間反応させ、次いで室温に冷却し、そして一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、８１６ｍｇの固体が８１．６％の収率で得られた。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例６：結晶形ＩＩＩの調製
式（Ｉ）で表される化合物（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）（実施例１に従って調製した。）を反応フラスコに添加し、６ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを添加し、混合物を撹拌し、７０℃で溶解し、次に１２ｍＬの予熱した無水エタノールを添加し、７０℃で４時間反応させ、次いで室温に冷却し、そして一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、８２８ｍｇの固体を収率８２．８％で得た。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例７：結晶形ＩＩＩの調製
式（Ｉ）で表される化合物（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）（実施例１に従って調製した。）を反応フラスコに添加し、５ｍＬのジメチルスルホキシドを添加し、混合物を撹拌し、７０℃で溶解し、次いで、１０ｍＬの予熱したメタノールを添加し、７０℃で４時間反応させ、次いで、室温に冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、７９４ｍｇの固体が７９．４％の収率で得られた。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例８：結晶形ＩＩＩの調製
式（Ｉ）で表される化合物（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）（実施例１に従って調製した。）を反応フラスコに添加し、５ｍＬのジメチルスルホキシドを添加し、混合物を撹拌し、７０℃で溶解し、次いで、１０ｍＬの予熱した無水エタノールを添加し、７０℃で４時間反応させ、次いで、室温に冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、８６４ｍｇの固体が８６．４％の収率で得られた。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例９：結晶形ＩＩＩの調製
式（Ｉ）で表される化合物（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）（実施例１に従って調製した。）を反応フラスコに添加し、５ｍＬのジメチルスルホキシドを添加し、混合物を撹拌し、７０℃で溶解し、次いで、１０ｍＬの予熱したイソプロパノールを添加し、７０℃で４時間反応させ、次いで、室温に冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、９０６ｍｇの固体が９０．６％の収率で得られた。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例１０：結晶形ＩＩＩの調製
一般式（Ｉ）で表される化合物（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）（実施例１に従って調製した。）を反応フラスコに添加し、５ｍＬのジメチルスルホキシドを添加し、混合物を撹拌し、７０℃で溶解し、次いで、１０ｍＬの予熱したｎ−ブタノールを添加し、反応を７０℃で４時間実施し、次いで、室温に冷却し、一晩撹拌した。吸引濾過および乾燥後、８９６ｍｇの固体が８９．６％の収率で得られた。生成物のＸ線粉末回折スペクトルおよびＤＳＣパターンを研究、比較し、生成物が結晶形ＩＩＩであることを確認した。

実施例１１：結晶形安定性の調査
実施例１で得られた式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩ、および比較例１、２で得られた結晶形Ｉ、ＩＩの試料をそれぞれ開封して均等に広げ、照明（４５００ルクス）、加熱（４０℃、６０℃）、高湿（７５％ＲＨ、９０％ＲＨ）条件下での試料の安定性を調べた。サンプリング時間は５日間と１０日間であり、純度はＨＰＬＣで検出した。

実験結果
表２：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの試料の安定性比較

実験的結論
安定性調査の結果、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩのサンプルをそれぞれ開放条件下に置いた場合、結晶形ＩＩＩのＨＰＬＣ純度は、照明、高湿度および高温の条件下で結晶形ＩおよびＩＩのＨＰＬＣ純度よりも高く、本発明の結晶形ＩＩＩの安定性が結晶形ＩおよびＩＩよりも良好であることが示された。

実施例１３：結晶形の特殊安定性の検討
実施例１で得られた結晶形ＩＩＩを粉砕し、加熱し、錠剤化して、試料の安定性を調べた。

実験結果
表３：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩの特殊安定性に関する検討

実験的結論
表３のデータによれば、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩは粉砕、高温加熱、および打錠処理の条件下で変化しなかった。このことは本発明の結晶形ＩＩＩの安定性が比較的高いことを示している。

実施例１４：本発明の結晶形ＩＩＩの吸湿性研究
ＴＡＱ５０００ＶＳＡを適用し、２５℃時の湿度は１０〜９０％、１０％刻みとした。評価基準は、１００００分以内の質量変化が０．０１％未満であることとし、２サイクル実施した。

実験結果
表４：本発明の結晶形ＩＩＩ型の吸湿性の試験結果

実験的結論
表４に示されるように、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩの試料の吸水率は２５℃における湿度１０．０〜８０．０％ＲＨの間で上昇することにつれて増加した。重量変化は０．９３３２％であり、１５％未満２％以上だった。試料はわずかに吸湿性であった。試料の脱離過程は、湿度変化が０〜８５％の間の吸着過程と一致する。

実施例１５：本発明の結晶形ＩＩＩおよび遊離状態のラットにおける薬物動態実験
試験動物としてＳＤラットを用い、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて、ＳＤラットに式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩおよび遊離状態を強制経口投与した後の異なる時点における血漿中薬物濃度を測定し、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩおよび遊離状態のＳＤラットにおける薬物動態挙動を研究し、その薬物動態特性を評価した。

試験試料：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩ（その調製方法については実施例１を参照のこと。）および遊離状態（特許文献１に記載の方法に従って調製された。）。

実験動物：動物生産許可番号ＳＣＸＫ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）２００８−００１６を有するSippr-BK Experimental Animal Co.,Ltd.から購入した８匹の健康なＳＤラット（半分は雄であり半分は雌である。）を二群に分けた。

薬剤調製：０．５％ ＣＭＣ−Ｎａ、経口剤０．５ｍｇ／ｍｌの調製濃度で超音波により均一分散液を調製した。

投与：健常ＳＤラット８匹（雌雄半数ずつ）に１０ｍＬ／ｋｇの量で一晩絶食させた後、強制経口投与した。

方法
８匹の健常ＳＤラット（雌雄半数ずつ）に、一晩絶食後に強制経口投与した。投与前および投与の０．５、１、２、４、６、８、１２、２４時間後に頚静脈穿刺により０．１ｍＬ採血し、抗凝固剤としてヘパリンナトリウムを用い、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離して血漿を分離し、−２０℃で保存した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて、化合物の強制経口投与後のＳＤラットの血漿中で検出される化合物の含量を決定した。

実験結果
表５：ＳＤ ラットにおける薬物動態評価結果（経口：５．０ｍｇ／ｋｇ）

ここで、Ｔ_１／２は半減期、ＡＵＣ_ｌａｓｔは投与時の曲線０→ｔ以下の面積、Ｃｌ／Ｆはクリアランス率、Ｖｚ／Ｆは見かけ上の分布量である。

実験的結論
表５に示されているように、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩは、遊離状態と比較して、半減期が長く、クリアランス率が低く、暴露量が多いことから、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩが良好な薬物動態特性を有することが示される。

Claims (8)

1. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩであって、Ｃｕ−Ｋα線照射時に２θ回折角３．８８、７．５４、１４．７６、１８．６４、および２２．２１に特徴的なピークが存在する粉末Ｘ線回折スペクトルが得られる、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＩＩＩ。
   

   
2. ３．８８、７．５４、１１．２２、１４．７６、１７．２９、１８．６４、２０．２８、２２．２１、２３．７９、２５．３４、および２７．０９に特徴的なピークを有する請求項１に記載の結晶形ＩＩＩ。
3. ３．８８、７．５４、１１．２２、１１．６１、１２．２６、１２．７３、１３．３５、１３．６４、１４．７６、１５．９８、１６．４７、１７．０７、１７．２９、１８．６４、２０．２８、２０．６２、２２．２１、２３．１６、２３．７９、２４．１４、２４．８５、２５．３４、２６．０８、２６．８５、２７．０９、２８．７７、２９．７４、３２．２２、３３．６６、３４．５０、３５．６０、３７．４２、および３９．２７に特徴的なピークを有する請求項１に記載の結晶形ＩＩＩ。
4. ２θ角の誤差範囲が±０．２である請求項１〜３のいずれか一項に記載の結晶形ＩＩＩ。
5. 以下の方法の一つである請求項１〜４のいずれか一項に記載の結晶形ＩＩＩを調製するための方法。
   方法（１）：式（Ｉ）で表される化合物の遊離状態とＬ−酒石酸とを単一溶媒または混合溶媒中で反応させた後、撹拌、晶析、濾過、乾燥させて目的の結晶形ＩＩＩを得る。前記単一溶媒は、スルホキシド溶媒、アミド溶媒、またはアルコール溶媒であり、前記混合溶媒は、スルホキシド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒、またはアミド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒であり、前記スルホキシド溶媒は、好ましくはジメチルスルホキシドであり、前記アミド溶媒は、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドであり、前記アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはｎ−ブタノールである。
   方法（２）：式（Ｉ）で表される化合物を単一溶媒または混合溶媒に溶解し、結晶化、濾過、および乾燥して目的とする結晶形ＩＩＩを得る。前記結晶化は室温で行うか、溶媒を冷却または揮発させながら、または結晶種を誘導しながら行い、冷却の温度は−１０〜２５℃であり、好ましくは室温で行う。前記単一溶媒は、スルホキシド溶媒、アミド溶媒、またはアルコール溶媒であり、前記混合溶媒は、スルホキシド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒、またはアミド溶媒とアルコール溶媒との混合溶媒である。前記スルホキシド溶媒は、好ましくはジメチルスルホキシドであり、前記アミド溶媒は、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドであり、前記アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはｎ−ブタノールである。前記混合溶媒は、より好ましくは、ジメチルスルホキシド／メタノール、ジメチルスルホキシド／エタノール、ジメチルスルホキシド／ｎ−プロパノール、ジメチルスルホキシド／イソプロパノール、ジメチルスルホキシド／ｎ−ブタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／エタノールまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／エタノールである。
6. 請求項１〜４のいずれか一項に記載の結晶形ＩＩＩと、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物。
7. 前記医薬組成物を調製するための方法であって、前記方法が、請求項１〜４のいずれか一項に記載の結晶形ＩＩＩを、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む方法。
8. 腎外髄質カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害に関連する疾患または状態を治療および／または予防するための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の結晶形ＩＩＩ、または、請求項６に記載の医薬組成物、の使用であって、前記疾患または状態は、好ましくは高血圧または心不全である使用。

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