JP2021176820A

JP2021176820A - Pharmaceutical composition comprising quinazoline compound as active ingredient

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Publication number: JP2021176820A
Application number: JP2018144076A
Authority: JP
Inventors: 建之長島; Takeyuki Nagashima
Original assignee: Astellas Pharma Inc
Current assignee: Astellas Pharma Inc
Priority date: 2018-07-31
Filing date: 2018-07-31
Publication date: 2021-11-11
Also published as: TW202019427A; WO2020027084A1

Abstract

To provide a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer, in particular, KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.SOLUTION: The present inventors have examined compounds having G12C mutation KRAS inhibitory effect. As a result, the present inventors have confirmed that specific quinazoline compounds have G12C mutation KRAS inhibitory effect and a pharmaceutical composition comprising such a compound as an active ingredient has a therapeutic effect on pancreatic cancer, in particular, KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer to thereby complete the present invention.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、キナゾリン化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする膵臓癌の治療用医薬組成物に関する。 The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer containing a quinazoline compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

膵管腺癌が主である膵臓癌は、5年生存率が10%以下（CA Cancer J. Clin., 66, 7, 2016）と非常に予後が悪い癌であり、世界中で年間34万人ほどが新たに症例として報告されている（GLOBOCAN 2012）。さらにアメリカ合衆国においては2030年には死亡者数が2位になると予想されている（Cancer Res., 74, 2913, 2014）。膵臓癌の治療で最も有効な手段は外科的手術だが、早期発見が難しいために転移していることが多く、外科的手術が適用できないことが多いのが現状である。手術適応とならない場合は化学療法や放射線療法が採用されるが生存率は芳しくない状況である。過去に抗vascular endothelial growth factor（VEGF）抗体、マルチキナーゼ阻害剤やRAS下流因子の阻害剤などの臨床試験が行われたが、明確な予後延長は見られていない（Nature Rev. Gastroenterol. Hepatol., 15, 333, 2018、Semin. Cancer Biol., Epub ahead of print, 2018）。 Pancreatic cancer, which is mainly pancreatic duct adenocarcinoma, has a very poor prognosis with a 5-year survival rate of 10% or less (CA Cancer J. Clin., 66, 7, 2016), and 340,000 people worldwide annually. Has been newly reported as a case (GLOBOCAN 2012). In addition, the number of deaths is expected to be second in the United States in 2030 (Cancer Res., 74, 2913, 2014). Surgical surgery is the most effective means of treating pancreatic cancer, but surgery is often not applicable due to the difficulty of early detection and metastasis. Chemotherapy and radiation therapy are used when surgery is not indicated, but the survival rate is not good. In the past, clinical trials of anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) antibodies, multikinase inhibitors and inhibitors of RAS downstream factors have been conducted, but no clear prognosis has been observed (Nature Rev. Gastroenterol. Hepatol. , 15, 333, 2018, Semin. Cancer Biol., Epub ahead of print, 2018).

RASタンパク質は188-189個のアミノ酸から成る約21kDaの低分子グアノシン三リン酸（GTP）結合タンパク質であり、KRAS遺伝子、NRAS遺伝子、HRAS遺伝子の3つの遺伝子より生じる4種類の主要なタンパク質[KRAS（KRAS4A及びKRAS4B）、NRAS、HRAS]が存在する。RASタンパク質には活性型であるGTP結合型と、不活性型であるグアノシン二リン酸（GDP）結合型が存在する。RASタンパク質は、EGFRなど細胞膜受容体へのリガンド刺激等により、GDPとGTPが交換されることにより、活性化する。活性型RASは、RAF、PI3K、RALGDSなど20種類に及ぶエフェクタータンパク質と結合し、下流のシグナルカスケードを活性化する。一方、活性型RASは内在性のGTP加水分解酵素（GTPase）活性により、GTPがGDPへと変換されることで不活性型となる。このGTPase活性はGAP（GTPase活性化タンパク質）によって増強される。このことから、RASは、EGFRなどの細胞内シグナル伝達経路における重要な「分子スイッチ」の機能を担っており、細胞の成長、増殖、血管生成などの過程において、重要な役割を果たしている（Nature rev. cancer, 11, 761, 2011、Nature rev. drug discov., 13, 828, 2014、Nature rev. drug discov., 15, 771, 2016）。 The RAS protein is a low molecular weight guanosine triphosphate (GTP) -binding protein consisting of 188-189 amino acids, and is composed of four major proteins [KRAS] derived from three genes, the KRAS gene, the NRAS gene, and the HRAS gene. (KRAS4A and KRAS4B), NRAS, HRAS] exist. There are two types of RAS proteins, the active GTP-bound type and the inactive guanosine diphosphate (GDP) -bound type. The RAS protein is activated by exchanging GDP and GTP by stimulating a ligand to a cell membrane receptor such as EGFR. Activated RAS binds to 20 effector proteins such as RAF, PI3K, and RALGDS and activates the downstream signal cascade. On the other hand, the active RAS becomes inactive by converting GTP to GDP by the endogenous GTP hydrolase (GTPase) activity. This GTPase activity is enhanced by GAP (GTPase activating protein). For this reason, RAS plays an important role as a "molecular switch" in intracellular signal transduction pathways such as EGFR, and plays an important role in processes such as cell growth, proliferation, and angiogenesis (Nature). rev. Cancer, 11, 761, 2011, Nature rev. Drug discov., 13, 828, 2014, Nature rev. Drug discov., 15, 771, 2016).

RAS遺伝子の突然変異によりアミノ酸置換が生じると、RASのGTPaseとしての機能低下やGAPに対する親和性低下により、活性型の割合が増加すると考えられている。このことに起因する過剰なシグナル伝達が、発がんや、がんの増殖亢進をもたらすとされている。膵管腺癌は膵上皮内腫瘍性病変/pancreatic intraepithelial neoplasia （PanIN）において異形の弱い段階から強い段階を経て発生するとされており、KRAS遺伝子変異は初期段階のPanINですでに認められている。その後腫瘍抑制遺伝子のINK4A、p53やSMAD4の異常が生じ、悪性化する（Nature Rev. Cancer, 10, 683, 2010）。さらに、膵管腺癌の90%以上においてKRAS遺伝子に変異が認められており、中でもKRASエクソン2に位置するコドン12の点突然変異がその大多数を占める（Cancer Cell 32, 185, 2017）。このことから、KRASは膵臓癌の発がんや発展過程において、重要な役割を担っている。 When an amino acid substitution occurs due to a mutation in the RAS gene, it is thought that the proportion of the active form increases due to a decrease in the function of RAS as a GTPase and a decrease in affinity for GAP. Excessive signal transduction resulting from this is said to lead to carcinogenesis and increased cancer growth. Pancreatic ductal adenocarcinoma is said to occur in pancreatic intraepithelial neoplasia (PanIN) from a weak stage to a strong stage of morphology, and KRAS gene mutation has already been observed in the early stage PanIN. After that, abnormalities of the tumor suppressor genes INK4A, p53 and SMAD4 occur and become malignant (Nature Rev. Cancer, 10, 683, 2010). Furthermore, mutations in the KRAS gene have been found in more than 90% of pancreatic adenocarcinomas, with point mutations at codon 12 located at KRAS exon 2 accounting for the majority (Cancer Cell 32, 185, 2017). For this reason, KRAS plays an important role in the carcinogenesis and development process of pancreatic cancer.

近年、G12C変異KRASに対し、スイッチIIと呼ばれる領域の近傍にアロステリックポケットの存在が示される（Nature, 503, 548, 2013）と共に、変異システインに対して共有結合を形成することにより、不可逆的にG12C変異KRASと結合する化合物が報告された（Cancer Discov., 6, 316, 2016、Cell, 172, 578, 2018）。G12C変異KRAS選択的な阻害剤は、G12C変異KRASに対し共有結合することにより、不活性型から活性型への変換を阻害し、下流シグナルを遮断することでがん細胞死を誘導する。膵臓癌の数%においてG12C変異KRASが認められていることから（Cancer Cell 25, 272, 2014）、本作用機序を持つ化合物は、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療に有用であると考えられる。 In recent years, G12C mutant KRAS has been shown to have an allosteric pocket near a region called switch II (Nature, 503, 548, 2013) and is irreversibly formed by forming a covalent bond to mutant cysteine. Compounds that bind the G12C mutant KRAS have been reported (Cancer Discov., 6, 316, 2016, Cell, 172, 578, 2018). G12C mutant KRAS Selective inhibitors inhibit the conversion from the inactive form to the active form by covalently binding to the G12C mutant KRAS, and induce cancer cell death by blocking downstream signals. Since G12C mutant KRAS is found in a few percent of pancreatic cancers (Cancer Cell 25, 272, 2014), compounds with this mechanism of action are considered to be useful in the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer. ..

下記の式（Ａ）及び式（Ｂ）で示される化合物が、G12C変異KRASに対して結合能を有することが報告されている（特許文献1、2及び3）。 It has been reported that the compounds represented by the following formulas (A) and (B) have a binding ability to the G12C mutant KRAS (Patent Documents 1, 2 and 3).

また非特許文献１には、特許文献１に開示された実施例353の化合物（ARS-1620ともいう）が、ヒトKRAS G12C変異陽性膵臓癌株MIA PaCa-2に対して細胞増殖阻害作用を有し、MIA PaCa-2担癌ヌードマウスモデルにおいて抗腫瘍作用を示すことが報告されている。 Further, in Non-Patent Document 1, the compound of Example 353 (also referred to as ARS-1620) disclosed in Patent Document 1 has a cell proliferation inhibitory effect on the human KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer strain MIA PaCa-2. However, it has been reported to show antitumor activity in the MIA PaCa-2 cancer-bearing nude mouse model.

国際公開第2015/054572号International Publication No. 2015/054572 国際公開第2016/164675号International Publication No. 2016/164675 国際公開第2017/087528号International Publication No. 2017/087528

Cell、2018年、第172巻、第3号、p.578−589Cell, 2018, Vol. 172, No. 3, p.578-589

膵臓癌の治療用医薬組成物、ある態様としてはKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物を提供する。 A pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer, in one embodiment, a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer positive for KRAS G12C mutation is provided.

本発明者らは、膵臓癌の治療用医薬組成物、特にKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物の創製を目的に、G12C変異KRAS阻害作用を有する化合物について鋭意検討した結果、本発明のキナゾリン化合物又はその製薬学的に許容される塩が優れたG12C変異KRAS阻害作用を有し、これらの化合物を有効成分とする医薬組成物が膵臓癌の治療用医薬組成物として有用であることを知見して本発明を完成させた。
即ち、本発明は、
(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（以下、「化合物Ａ」と記載することがある）、
(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（以下、「化合物Ｂ」と記載することがある）、
(+)-1-{7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（以下、「化合物Ｃ」と記載することがある）、及び、
(+)-1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オン（以下、「化合物Ｄ」と記載することがある）、
からなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する膵臓癌の治療用医薬組成物に関する。 The present inventors have diligently studied a compound having a G12C mutation KRAS inhibitory action for the purpose of creating a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer, particularly a pharmaceutical composition for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer. The quinazoline compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof has an excellent G12C mutation KRAS inhibitory effect, and a pharmaceutical composition containing these compounds as an active ingredient is useful as a therapeutic pharmaceutical composition for pancreatic cancer. The present invention was completed based on the findings.
That is, the present invention
(+)-1-{7-[6-Cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl] )-8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one (hereinafter, "compound" It may be described as "A"),
(+)-1-{7-[6-Cyclopropyl-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl] )-8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one (hereinafter, "compound" B ”),
(+)-1-{7-[2-{[1- (2-Methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8-( 2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one (hereinafter, "Compound C" ”) And
(+)-1-(7-{8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] -6-vinylquinazoline -4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl) propa-2-en-1-one (hereinafter sometimes referred to as "Compound D"),
The present invention relates to a therapeutic pharmaceutical composition for pancreatic cancer containing a compound selected from the group consisting of, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient.

また、本発明は、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩を含有する膵臓癌の治療剤、別の態様として、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療剤である。 Further, the present invention is a therapeutic agent for pancreatic cancer containing a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as another embodiment. A therapeutic agent for KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer containing a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

また、本発明は、膵臓癌の治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩の使用、ある態様としては、KRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩の使用；膵臓癌の治療のための、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩の使用、ある態様としてはKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療のための、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩の使用；膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩、ある態様としてはKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩；及び、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる膵臓癌の治療方法、ある態様としては、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなるKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療方法に関する。なお、「対象」とは、その治療を必要とするヒト又はその他の動物であり、ある態様としては、その治療を必要とするヒトである。 The present invention also relates to a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof for producing a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer. Use, in one embodiment, a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, or pharmaceutically its pharmaceutical. Use of acceptable salts for; use of a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the treatment of pancreatic cancer. Aspects include the use of a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer; Treatment of a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in some embodiments KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, for therapeutic use. A compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and Compound A, Compound B, Compound C and Compound D. A method for treating pancreatic cancer, comprising administering to a subject an effective amount of a compound selected from the group consisting of, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in some embodiments, Compound A, Compound B, Compound C and The present invention relates to a method for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises administering to a subject an effective amount of a compound selected from the group consisting of Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The "subject" is a human or other animal in need of the treatment, and in one embodiment, a human in need of the treatment.

本発明の医薬組成物の有効成分である化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩は、G12C変異KRAS阻害作用を有し、膵臓癌の治療用医薬組成物、ある態様としてKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療用医薬組成物の有効成分として使用できる。 A compound selected from the group consisting of compound A, compound B, compound C and compound D, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof has a G12C mutation KRAS inhibitory effect. However, it can be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer, and in some embodiments, a pharmaceutical composition for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.

以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.

「G12C変異」とは、遺伝子変異のうち、野生型タンパク質における12番目に相当する残基がグリシンからシステインに変換している変異を示す。 The "G12C mutation" refers to a mutation in which the 12th residue in a wild-type protein is converted from glycine to cysteine among gene mutations.

「G12C変異KRAS」とは、KRASをコードする遺伝子において、上記「G12C変異」を有するKRASを示す。 "G12C mutant KRAS" refers to KRAS having the above-mentioned "G12C mutation" in the gene encoding KRAS.

本発明のある態様を以下に示す。
（１−１）化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する膵臓癌の治療用医薬組成物。別の態様として、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物。
（１−２）化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩を含有する膵臓癌の治療剤。別の態様として、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療剤。
（１−３）膵臓癌の治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（１−４）膵臓癌の治療のための化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療のための化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（１−５）膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩。
（１−６）化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、膵臓癌の治療方法。別の態様として、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療方法。 An aspect of the present invention is shown below.
(1-1) A pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer containing Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient. In another embodiment, a KRAS G12C mutation-positive therapeutic pharmaceutical composition containing Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable excipient.
(1-2) A therapeutic agent for pancreatic cancer containing Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, a therapeutic agent for KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer containing Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(1-3) Use of Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(1-4) Use of Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(1-5) Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(1-6) A method for treating pancreatic cancer, which comprises administering an effective amount of Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject. In another embodiment, a method for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises administering to a subject an effective amount of Compound A or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

（２−１）化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する膵臓癌の治療用医薬組成物。別の態様として、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物。
（２−２）化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩を含有する膵臓癌の治療剤。別の態様として、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療剤。
（２−３）膵臓癌の治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（２−４）膵臓癌の治療のための化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療のための化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（２−５）膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩。
（２−６）化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、膵臓癌の治療方法。別の態様として、化合物Ｂ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療方法。 (2-1) A pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer containing Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient. In another embodiment, a pharmaceutical composition for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient.
(2-2) A therapeutic agent for pancreatic cancer containing Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, a therapeutic agent for KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer containing Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(2-3) Use of Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(2-4) Use of Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(2-5) Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(2-6) A method for treating pancreatic cancer, which comprises administering an effective amount of Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject. In another embodiment, a method for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises administering to a subject an effective amount of Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

（３−１）化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する膵臓癌の治療用医薬組成物。別の態様として、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物。
（３−２）化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩を含有する膵臓癌の治療剤。別の態様として、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療剤。
（３−３）膵臓癌の治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（３−４）膵臓癌の治療のための化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療のための化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（３−５）膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩。
（３−６）化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、膵臓癌の治療方法。別の態様として、化合物Ｃ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療方法。 (3-1) A pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer containing Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient. In another embodiment, a KRAS G12C mutation-positive therapeutic pharmaceutical composition containing Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable excipient.
(3-2) A therapeutic agent for pancreatic cancer containing Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, a therapeutic agent for KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer containing Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(3-3) Use of Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(3-4) Use of Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(3-5) Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(3-6) A method for treating pancreatic cancer, which comprises administering an effective amount of Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject. In another embodiment, a method for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises administering to a subject an effective amount of Compound C or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

（４−１）化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する膵臓癌の治療用医薬組成物。別の態様として、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物。
（４−２）化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩を含有する膵臓癌の治療剤。別の態様として、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩を含有するKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療剤。
（４−３）膵臓癌の治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌治療用医薬組成物の製造のための、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（４−４）膵臓癌の治療のための化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩の使用。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療のための化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩の使用。
（４−５）膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩。別の態様として、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療の使用のための、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩。
（４−６）化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、膵臓癌の治療方法。別の態様として、化合物Ｄ又はその製薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することからなる、KRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療方法。 (4-1) A pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer containing Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient. In another embodiment, a pharmaceutical composition for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient.
(4-2) A therapeutic agent for pancreatic cancer containing Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, a therapeutic agent for KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer containing Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(4-3) Use of Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(4-4) Use of Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, the use of Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(4-5) Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of pancreatic cancer. In another embodiment, Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.
(4-6) A method for treating pancreatic cancer, which comprises administering an effective amount of Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject. In another embodiment, a method for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer, which comprises administering to a subject an effective amount of Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

本明細書において、「化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物の製薬学的に許容される塩」とは、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ又は化合物Ｄの酸付加塩を意味し、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、マンデル酸、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸（メシル酸）、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸（トシル酸）、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩が挙げられる。
なお、「化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物」には、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ若しくは化合物Ｄの各種溶媒和物、具体的には、水和物やエタノール和物が含まれる。さらに、「製薬学的に許容される塩」にはこれらの溶媒和物の酸付加塩も含まれる。
また、「化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩」のある態様としては、塩を形成していないフリーベース、即ち、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ又は化合物Ｄが挙げられ、別の態様としては、化合物Ａであり、さらに別の態様としては、化合物Ｂであり、さらに別の態様としては、化合物Ｃであり、またさらに別の態様としては、化合物Ｄである。 In the present specification, "a pharmaceutically acceptable salt of a compound selected from the group consisting of compound A, compound B, compound C and compound D" refers to compound A, compound B, compound C or compound D. It means an acid addition salt, and specifically, inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitrate, and phosphoric acid, formic acid, acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, and succinic acid. Acids, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, mandelic acid, tartaric acid, dibenzoyl tartaric acid, ditoroil tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid (mesylic acid), ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid (tocil) Acids), acid addition salts with organic acids such as aspartic acid and glutamic acid.
The "compound selected from the group consisting of compound A, compound B, compound C and compound D" includes various solvent products of compound A, compound B, compound C or compound D, specifically, hydration. Includes compounds and Japanese ethanol. In addition, "pharmaceutically acceptable salts" also include acid addition salts of these solvates.
Further, as an embodiment of "a compound selected from the group consisting of compound A, compound B, compound C and compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof", a free base on which no salt is formed, that is, , Compound A, Compound B, Compound C or Compound D, another embodiment is Compound A, yet another embodiment is Compound B, and yet another embodiment is Compound C. In yet another embodiment, compound D.

化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物は、当分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用されている方法によって調製することができる。
投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、又は、関節内、静脈内、筋肉内等の注射剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。 Pharmaceutical compositions containing, as an active ingredient, a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, are commonly used in the art. It can be prepared by a commonly used method using a form, that is, a pharmaceutical excipient, a pharmaceutical carrier, or the like.
Administration is oral administration by tablets, rounds, capsules, granules, powders, liquids, etc., or injections such as intra-articular, intravenous, intramuscular, suppositories, eye drops, eye ointments, transdermal liquids, etc. It may be in any form of parenteral administration using an ointment, a transdermal patch, a transmucosal solution, a transmucosal patch, an inhalant or the like.

経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、1種又は2種以上の有効成分を、少なくとも1種の不活性な賦形剤と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えば滑沢剤や崩壊剤、安定化剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤又はエリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水又はエタノールを含む。当該液体組成物は不活性な希釈剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。 As the solid composition for oral administration, tablets, powders, granules and the like are used. In such solid compositions, one or more active ingredients are mixed with at least one inert excipient. The composition may contain an inert additive, such as a lubricant, a disintegrant, a stabilizer, a solubilizing agent, according to conventional methods. Tablets or pills may be coated with a sugar-coated or gastrosoluble or enteric-coated film, if desired.
Liquid compositions for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups or elixirs and the like, and are commonly used inert diluents such as purified water. Or contains ethanol. The liquid composition may contain an auxiliary agent such as a solubilizer, a wetting agent, a suspending agent, a sweetening agent, a flavoring agent, a fragrance agent, and a preservative in addition to the inert diluent.

非経口投与のための注射剤は、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤又は乳濁剤を含有する。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水又は生理食塩液が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばエタノールのようなアルコール類がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、又は溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解又は懸濁して使用することもできる。 Injections for parenteral administration contain sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions or emulsions. Examples of the aqueous solvent include distilled water for injection or physiological saline. Non-aqueous solvents include alcohols such as ethanol. Such compositions may further include tonicity agents, preservatives, wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers, or solubilizers. These are sterilized, for example, by filtration through a bacterial retention filter, formulation of fungicides or irradiation. In addition, these can also be used by producing a sterile solid composition and dissolving or suspending it in sterile water or a sterile injectable solvent before use.

通常経口投与の場合、1日の投与量は、体重当たり約0.001〜100mg/kg、好ましくは0.1〜30mg/kg、更に好ましくは0.1〜10mg/kgが適当であり、これを1回であるいは2回〜4回に分けて投与する。静脈内投与される場合は、1日の投与量は、体重当たり約0.0001〜10mg/kgが適当で、1日1回〜複数回に分けて投与する。投与量は症状、年令、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。 In the case of normal oral administration, the daily dose is about 0.001 to 100 mg / kg, preferably 0.1 to 30 mg / kg, more preferably 0.1 to 10 mg / kg per body weight, and this may be performed once or 2 times. Administer in 4 to 4 divided doses. When administered intravenously, the appropriate daily dose is approximately 0.0001 to 10 mg / kg of body weight, and the daily dose should be divided into 1 to multiple doses. The dose is appropriately determined according to each individual case in consideration of symptoms, age, gender and the like.

投与経路、剤形、投与部位、賦形剤や添加剤の種類によって異なるが、本発明の医薬組成物は0.01〜100重量%、ある態様としては0.01〜50重量%の有効成分である化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩を含有する。 Depending on the route of administration, dosage form, site of administration, excipients and types of additives, the pharmaceutical composition of the present invention is 0.01 to 100% by weight, and in some embodiments 0.01 to 50% by weight, which is the active ingredient of compound A. , A compound selected from the group consisting of Compound B, Compound C and Compound D, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

本発明の医薬組成物は、膵臓癌、殊にKRAS G12C変異陽性膵臓癌に有効性を示すと考えられる種々の治療剤と併用することができる。当該併用は、同時投与、あるいは別個に連続して、若しくは所望の時間間隔をおいて投与してもよい。同時投与の場合には、配合剤であっても別個に製剤化されていてもよい。 The pharmaceutical composition of the present invention can be used in combination with various therapeutic agents that are considered to be effective against pancreatic cancer, particularly KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer. The combination may be administered simultaneously, separately, consecutively, or at desired time intervals. In the case of co-administration, it may be a combination drug or separately formulated.

以下に化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、及び、化合物Ｄの製造法を参考例として詳細に説明する。また、それらの原料化合物の製法を製造例に示す。また、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、及び、化合物Ｄの製造法は、以下に示される具体的参考例の製造法のみに限定されるものではなく、これらの製造法の別の組み合わせ、あるいは当業者に自明である方法によっても製造されうる。 The production methods of Compound A, Compound B, Compound C, and Compound D will be described in detail below as reference examples. Moreover, the production method of those raw material compounds is shown in the production example. Further, the production methods of Compound A, Compound B, Compound C, and Compound D are not limited to the production methods of the specific reference examples shown below, and may be another combination of these production methods, or It can also be manufactured by methods that are self-evident to those skilled in the art.

本明細書において、化合物の命名にACD/Name（登録商標、Advanced Chemistry Development, Inc.）等の命名ソフトを使用している場合がある。 In this specification, naming software such as ACD / Name (registered trademark, Advanced Chemistry Development, Inc.) may be used for naming compounds.

また、便宜上、濃度mol/LをMとして表す。例えば、1M水酸化ナトリウム水溶液は1mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液であることを意味する。 For convenience, the concentration mol / L is represented as M. For example, a 1 M aqueous solution of sodium hydroxide means a 1 mol / L aqueous solution of sodium hydroxide.

製造例1
2-アミノ-4-ブロモ-3-フルオロ安息香酸（4.0 g）、N-ヨードコハク酸イミド（4.0 g）、N,N-ジメチルホルムアミド（以下、DMFと略記する）（40 mL）の混合物を、アルゴン気流下、50℃にて2時間撹拌した。反応混合物に、50℃にてN-ヨードコハク酸イミド（1.5 g）を加え、同温にて1.5時間撹拌した。反応混合物に、50℃にてN-ヨードコハク酸イミド（1.5 g）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、水を加え、室温にて5時間撹拌した。析出した固体を濾取し、室温にて通風乾燥した。得られた固体を水に懸濁し、室温にて1時間撹拌した。固体を濾取し、水にて洗浄した後、減圧下、50℃にて乾燥し、2-アミノ-4-ブロモ-3-フルオロ-5-ヨード安息香酸（5.6 g）を固体として得た。 Manufacturing example 1
A mixture of 2-amino-4-bromo-3-fluorobenzoic acid (4.0 g), N-iodosuccinate imide (4.0 g), N, N-dimethylformamide (hereinafter abbreviated as DMF) (40 mL), The mixture was stirred at 50 ° C. for 2 hours under an argon stream. N-iodosuccinate imide (1.5 g) was added to the reaction mixture at 50 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 1.5 hours. N-iodosuccinate imide (1.5 g) was added to the reaction mixture at 50 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature overnight. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature, water was added, and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The precipitated solid was collected by filtration and air-dried at room temperature. The obtained solid was suspended in water and stirred at room temperature for 1 hour. The solid was collected by filtration, washed with water, and then dried under reduced pressure at 50 ° C. to obtain 2-amino-4-bromo-3-fluoro-5-iodobenzoic acid (5.6 g) as a solid.

製造例2
2-アミノ-4-ブロモ-3-フルオロ-5-ヨード安息香酸（5.6 g）、尿素（4.7 g）の混合物を、200℃にて3時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、水を加え、室温にて15分間撹拌した。固体を濾取し、水にて洗浄した後、減圧下、50℃にて乾燥した。得られた固体をすりつぶして粉末とした後、オキシ塩化リン（80 mL）と混合して氷冷し、窒素気流下、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（以下、DIPEAと略記する）（8.0 mL）を滴下にて加えた。反応混合物を150℃にて2.5時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、減圧下、濃縮し、得られた残渣に酢酸エチルを加えた。反応混合物を氷水に注ぎ入れた後、不溶物を濾別し、濾液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-ブロモ-2,4-ジクロロ-8-フルオロ-6-ヨードキナゾリン（3.6 g）を固体として得た。 Manufacturing example 2
A mixture of 2-amino-4-bromo-3-fluoro-5-iodobenzoic acid (5.6 g) and urea (4.7 g) was stirred at 200 ° C. for 3 hours. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature, water was added, and the mixture was stirred at room temperature for 15 minutes. The solid was collected by filtration, washed with water, and then dried under reduced pressure at 50 ° C. The obtained solid is ground into a powder, mixed with phosphorus oxychloride (80 mL), ice-cooled, and N, N-diisopropylethylamine (hereinafter abbreviated as DIPEA) (8.0 mL) is added under a nitrogen stream. It was added by dropping. The reaction mixture was stirred at 150 ° C. for 2.5 hours. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature, concentrated under reduced pressure, and ethyl acetate was added to the obtained residue. The reaction mixture was poured into ice water, the insoluble material was filtered off, and the filtrate was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate) to give 7-bromo-2,4-dichloro-8-fluoro-6-iodoquinazoline (3.6 g) as a solid.

製造例3
7-ブロモ-2,4-ジクロロ-8-フルオロ-6-ヨードキナゾリン（3.6 g）、1,4-ジオキサン（35 mL）の混合物を氷冷した後、窒素気流下、DIPEA（8.0 mL）、2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（2.0 g）を加え、室温にて1.5時間撹拌した。反応混合物に水を加え、クロロホルムにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル）にて精製し、7-(7-ブロモ-2-クロロ-8-フルオロ-6-ヨードキナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（4.6 g）を固体として得た。 Manufacturing example 3
A mixture of 7-bromo-2,4-dichloro-8-fluoro-6-iodoquinazoline (3.6 g) and 1,4-dioxane (35 mL) was ice-cooled and then DIPEA (8.0 mL) under a nitrogen stream. 2,7-Diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (2.0 g) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with chloroform. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / ethyl acetate) and 7- (7-bromo-2-chloro-8-fluoro-6-iodoquinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro. [3.5] Nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (4.6 g) was obtained as a solid.

製造例4
7-(7-ブロモ-2-クロロ-8-フルオロ-6-ヨードキナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（9.5 g）、1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-オール（6.8 g）、炭酸セシウム（15 g）、1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン（以下、DABCOと略記する）（260 mg）、DMF（76 mL）、テトラヒドロフラン（以下、THFと略記する）（76 mL）の混合物を、アルゴン雰囲気下、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた固体にジイソプロピルエーテルを加え、室温にて撹拌した。固体を濾取し、減圧下、50℃にて乾燥し、7-(7-ブロモ-8-フルオロ-6-ヨード-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}キナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（9.1 g）を固体として得た。 Manufacturing example 4
7- (7-Bromo-2-chloro-8-fluoro-6-iodoquinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (9.5 g), 1- (3-methoxypropyl) piperidine-4-ol (6.8 g), cesium carbonate (15 g), 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane (hereinafter abbreviated as DABCO) (260 mg), DMF (76) A mixture of mL) and tetrahydrofuran (hereinafter abbreviated as THF) (76 mL) was stirred overnight at room temperature under an argon atmosphere. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution and then dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, diisopropyl ether was added to the obtained solid, and the mixture was stirred at room temperature. The solid was collected by filtration, dried under reduced pressure at 50 ° C., and 7- (7-bromo-8-fluoro-6-iodo-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy. } Quinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (9.1 g) was obtained as a solid.

製造例5
7-(7-ブロモ-8-フルオロ-6-ヨード-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}キナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（5.0 g）、2,2,2-トリフルオロエタノール（1.4 mL）、炭酸セシウム（6.5 g）、DMF（50 mL）の混合物を、室温にて5時間撹拌した。反応混合物を、50℃にて1.5時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-[7-ブロモ-6-ヨード-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（5.5 g）を得た。 Manufacturing example 5
7-(7-Bromo-8-Fluoro-6-iodo-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy} quinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] A mixture of nonan-2-carboxylic acid tert-butyl ester (5.0 g), 2,2,2-trifluoroethanol (1.4 mL), cesium carbonate (6.5 g) and DMF (50 mL) at room temperature for 5 hours. Stirred. The reaction mixture was stirred at 50 ° C. for 1.5 hours. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature, water was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with water and a saturated aqueous sodium chloride solution, and then dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- [7-bromo-6-iodo-2-{[1-]. (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert -Butyl ester (5.5 g) was obtained.

製造例6
7-[7-ブロモ-6-ヨード-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（2.7 g）、シクロプロピルボロン酸（560 mg）、リン酸三カリウム（2.5 g）、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)ジクロリドジクロロメタン付加物（以下、PdCl₂(dppf)・CH₂Cl₂と略記する）（270 mg）、1,4-ジオキサン（20 mL）、アセトニトリル（20 mL）、水（8.6 mL）の混合物を、アルゴン雰囲気下、100℃にて4時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、飽和塩化ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-[7-ブロモ-6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（1.9 g）を得た。 Manufacturing example 6
7- [7-Bromo-6-iodo-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl ] -2,7-Diazaspiro [3.5] Nonan-2-carboxylic acid tert-butyl ester (2.7 g), cyclopropylboronic acid (560 mg), tripotassium phosphate (2.5 g), [1,1'-bis (Diphenylphosphino) ferrocene] Palladium (II) dichloride dichloromethane adduct (hereinafter _{abbreviated as PdCl 2} (dppf) / CH ₂ Cl ₂ ) (270 mg), 1,4-dioxane (20 mL), acetonitrile (20) The mixture of mL) and water (8.6 mL) was stirred at 100 ° C. for 4 hours under an argon atmosphere. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature, saturated aqueous sodium chloride solution was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- [7-bromo-6-cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin- 4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (1.9 g) Obtained.

製造例7
アルゴン雰囲気下、7-[7-ブロモ-6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（1.9 g）、(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)ボロン酸（710 mg）、(1E,4E)-1,5-ジフェニルペンタ-1,4-ジエン-3-オン／パラジウム（3：2）（以下、Pd₂(dba)₃と略記する）（230 mg）、ジシクロヘキシル(2',6'-ジメトキシビフェニル-2-イル)ホスフィン（以下、SPhosと略記する）（210 mg）、リン酸三カリウム（2.2 g）、1,4-ジオキサン（15 mL）、水（2.8 mL）を混合し、マイクロ波照射下、120℃にて70分間撹拌した。反応混合物を減圧下、濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、室温にて30分間撹拌した。析出した固体を濾取し、7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（630 mg）を固体として得た。 Manufacturing example 7
Under an argon atmosphere, 7- [7-bromo-6-cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) Kinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (1.9 g), (5-methyl-1H-indazole-4-yl) boronic acid (710 mg), (1E, 4E) -1,5-diphenylpenta-1,4-diene-3-one / palladium (3: 2) (hereinafter _{abbreviated as Pd 2} (dba) ₃ ) (230 mg), dicyclohexyl (2) ', 6'-Dimethoxybiphenyl-2-yl) phosphine (hereinafter abbreviated as SPhos) (210 mg), tripotassium phosphate (2.2 g), 1,4-dioxane (15 mL), water (2.8 mL) Was mixed and stirred at 120 ° C. for 70 minutes under microwave irradiation. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate). Acetonitrile was added to the obtained purified product, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The precipitated solid was collected by filtration and 7- [6-cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-). Ill) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (630 mg) was obtained as a solid. ..

製造例8
7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（630 mg)、1M塩酸（5.5 mL）の混合物を、アルゴン雰囲気下、50℃にて1時間撹拌した。反応混合物を氷冷した後、ジクロロメタン（3.2 mL）、塩化 3-クロロプロパノイル（0.17 mL）、炭酸水素ナトリウム（670 mg）を加え、同温にて30分間撹拌した。反応混合物に、同温にてイソプロピルアルコール（以下、IPAと略記する）（9.3 mL）、4M水酸化ナトリウム水溶液（3.0 mL）を加え、室温にて3時間撹拌した。反応混合物を氷冷した後、1M塩酸（10 mL）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、酢酸エチルを加え、室温にて5分間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルにて抽出し、有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、室温にて1時間撹拌した。析出した固体を濾取し、1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（230 mg）を固体として得た。 Manufacturing example 8
7- [6-Cyclopropyl-2-{[1- (3-Methoxypropyl) Piperidine-4-yl] Oxy} -7- (5-Methyl-1H-Indazole-4-yl) -8- (2, 2,2-Trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (630 mg), 1M hydrochloric acid (5.5 mL) in an argon atmosphere Below, it was stirred at 50 ° C. for 1 hour. After ice-cooling the reaction mixture, dichloromethane (3.2 mL), 3-chloropropanol chloride (0.17 mL) and sodium hydrogen carbonate (670 mg) were added, and the mixture was stirred at the same temperature for 30 minutes. Isopropyl alcohol (hereinafter abbreviated as IPA) (9.3 mL) and 4M aqueous sodium hydroxide solution (3.0 mL) were added to the reaction mixture at the same temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. After ice-cooling the reaction mixture, 1M hydrochloric acid (10 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and ethyl acetate were added, and the mixture was stirred at room temperature for 5 minutes. The reaction mixture was extracted with ethyl acetate, and the organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol). Acetonitrile was added to the obtained purified product, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The precipitated solid was collected by filtration and 1- {7- [6-cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole). -4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one ( 230 mg) was obtained as a solid.

製造例9
7-(7-ブロモ-2-クロロ-8-フルオロ-6-ヨードキナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（8.1 g）、1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-オール（5.3 g）、炭酸セシウム（13 g）、DABCO（220 mg）、DMF（65 mL）、THF（65 mL）の混合物を、アルゴン雰囲気下、室温にて3日間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-(7-ブロモ-8-フルオロ-6-ヨード-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}キナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（7.9 g）を得た。 Manufacturing example 9
7- (7-Bromo-2-chloro-8-fluoro-6-iodoquinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (8.1 g), 1- A mixture of (2-methoxyethyl) piperidine-4-ol (5.3 g), cesium carbonate (13 g), DABCO (220 mg), DMF (65 mL) and THF (65 mL) was added to room temperature under an argon atmosphere. Stirred for 3 days. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution and then dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- (7-bromo-8-fluoro-6-iodo-2-). {[1- (2-methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} quinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (7.9 g) was obtained. ..

製造例10
7-(7-ブロモ-8-フルオロ-6-ヨード-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}キナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（3.8 g）、2,2,2-トリフルオロエタノール（0.75 mL）、炭酸セシウム（3.4 g）、DMF（40 mL）の混合物を、アルゴン雰囲気下、室温にて20時間撹拌した。反応混合物に2,2,2-トリフルオロエタノール（0.40 mL）、炭酸セシウム（1.7 g）を加え、室温にて24時間撹拌した。反応混合物に水を加え、室温にて10分間撹拌した。析出した固体を濾取した後、クロロホルム／メタノール(9：1)を加え、得られた溶液を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-[7-ブロモ-6-ヨード-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（3.1 g）を固体として得た。 Manufacturing example 10
7-(7-Bromo-8-Fluoro-6-iodo-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} quinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] A mixture of nonan-2-carboxylic acid tert-butyl ester (3.8 g), 2,2,2-trifluoroethanol (0.75 mL), cesium carbonate (3.4 g), and DMF (40 mL) was added to room temperature under an argon atmosphere. Was stirred for 20 hours. 2,2,2-Trifluoroethanol (0.40 mL) and cesium carbonate (1.7 g) were added to the reaction mixture, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. After the precipitated solid was collected by filtration, chloroform / methanol (9: 1) was added, and the obtained solution was dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- [7-bromo-6-iodo-2-{[1-]. (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert -Butyl ester (3.1 g) was obtained as a solid.

製造例13
7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（800 mg）、ジクロロメタン（4.0 mL）の混合物を氷冷した後、トリフルオロ酢酸（以下、TFAと略記する）（1.2 mL）を加え、室温にて6時間撹拌した。反応混合物にクロロホルム／IPA(4：1)、2M炭酸カリウム水溶液（11 mL）を加えた。水層をクロロホルム／IPA(4：1)にて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した（残渣Ａ）。DIPEA（0.45 mL）、THF（16 mL）の混合物を氷-メタノール浴にて冷却した後、塩化アクリロイル（0.20 mL）を加えた。この混合物に、残渣ＡのTHF（12 mL）溶液を滴下にて加え、同温にて20分間撹拌した。反応混合物に、同温にて1M水酸化ナトリウム水溶液（5.0 mL）を滴下にて加え、室温にて4時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、ソニケーションした。析出した固体を濾取し、1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（410 mg）を固体として得た。 Production example 13
7- [6-Cyclopropyl-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2, After ice-cooling a mixture of 2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (800 mg) and dichloromethane (4.0 mL) , Trifluoroacetic acid (hereinafter abbreviated as TFA) (1.2 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours. Chloroform / IPA (4: 1) and 2M aqueous potassium carbonate solution (11 mL) were added to the reaction mixture. The aqueous layer was extracted with chloroform / IPA (4: 1), the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure (residue A). The mixture of DIPEA (0.45 mL) and THF (16 mL) was cooled in an ice-methanol bath, and then acryloyl chloride (0.20 mL) was added. A solution of residue A in THF (12 mL) was added dropwise to this mixture, and the mixture was stirred at the same temperature for 20 minutes. A 1 M aqueous sodium hydroxide solution (5.0 mL) was added dropwise to the reaction mixture at the same temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours. A saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia). Acetonitrile was added to the obtained purified product and sonicated. The precipitated solid was collected by filtration and 1- {7- [6-cyclopropyl-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole). -4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one ( 410 mg) was obtained as a solid.

製造例14
7-[7-ブロモ-6-ヨード-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（3.0 g）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（640 mg）、1,4-ジオキサン（30 mL）、水（3.0 mL）の混合物に炭酸カリウム（1.5 g）、PdCl₂(dppf)・CH₂Cl₂（30 mg）を加え、窒素雰囲気下、50℃にて2時間撹拌した。反応混合物にPdCl₂(dppf)・CH₂Cl₂（150 mg）を加え、窒素雰囲気下、60℃にて4時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、酢酸エチル、水を加えた。不溶物を濾別した後、濾液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-[7-ブロモ-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（2.2 g）を得た。 Production example 14
7- [7-Bromo-6-iodo-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl ] -2,7-Diazaspiro [3.5] Nonan-2-carboxylic acid tert-butyl ester (3.0 g), potassium vinyltrifluoroborate (640 mg), 1,4-dioxane (30 mL), water (3.0 mL) ), Potassium carbonate (1.5 g), PdCl ₂ (dppf) and CH ₂ Cl ₂ (30 mg) were added, and the mixture was stirred at 50 ° C. for 2 hours under a nitrogen atmosphere. _{PdCl 2} (dppf) and CH ₂ Cl ₂ (150 mg) were added to the reaction mixture, and the mixture was stirred at 60 ° C. for 4 hours under a nitrogen atmosphere. After allowing the reaction mixture to cool to room temperature, ethyl acetate and water were added. The insoluble material was filtered off, and the filtrate was extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- [7-bromo-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy. }-8- (2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] Nonan-2-carboxylic acid tert-butyl ester (2.2 g) obtained rice field.

製造例15
7-[7-ブロモ-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（1.0 g）、リン酸三カリウム（900 mg）、1,4-ジオキサン（10 mL）、水（2.0 mL）の混合物に(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)ボロン酸（490 mg）、Pd₂(dba)₃（130 mg）、SPhos（120 mg）を加え、アルゴン雰囲気下、130℃にて4時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、酢酸エチル、水を加えた。不溶物を濾別した後、濾液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製した。得られた精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製した。得られた固体にアセトニトリルを加え、室温にて撹拌した。析出した固体を濾取し、7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（630 mg）を固体として得た。 Production example 15
7- [7-Bromo-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl ] -2,7-Diazaspiro [3.5] Nonan-2-carboxylic acid tert-butyl ester (1.0 g), tripotassium phosphate (900 mg), 1,4-dioxane (10 mL), water (2.0 mL) Add (5-methyl-1H-indazole-4-yl) boronic acid (490 mg), Pd ₂ (dba) ₃ (130 mg) and SPhos (120 mg) to the mixture, and add 4 at 130 ° C. under an argon atmosphere. Stirred for hours. After allowing the reaction mixture to cool to room temperature, ethyl acetate and water were added. The insoluble material was filtered off, and the filtrate was extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia). The obtained purified product was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate). Acetonitrile was added to the obtained solid, and the mixture was stirred at room temperature. The precipitated solid was collected by filtration and 7- [2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (630 mg) was obtained as a solid.

製造例16
7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（470 mg)、1M塩酸（4.1 mL）の混合物を、50℃にて1時間撹拌した。反応混合物を氷冷した後、ジクロロメタン（2.3 mL）、塩化 3-クロロプロパノイル（0.13 mL）、炭酸水素ナトリウム（520 mg）を加え、同温にて1時間撹拌した。反応混合物に、同温にてIPA（4.7 mL）、4M水酸化ナトリウム水溶液（2.3 mL）を加え、室温にて2時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、室温にて5分間撹拌した。析出した固体を濾取した後、減圧下、30℃にて乾燥し、1-{7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（320 mg）を固体として得た。 Manufacturing example 16
7- [2-{[1- (2-Methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2,2-tri) Fluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (470 mg), 1M hydrochloric acid (4.1 mL) mixture at 50 ° C. Stirred for 1 hour. After ice-cooling the reaction mixture, dichloromethane (2.3 mL), 3-chloropropanol chloride (0.13 mL) and sodium hydrogen carbonate (520 mg) were added, and the mixture was stirred at the same temperature for 1 hr. IPA (4.7 mL) and 4M aqueous sodium hydroxide solution (2.3 mL) were added to the reaction mixture at the same temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solution was concentrated under reduced pressure, and the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia). Acetonitrile was added to the obtained purified product, and the mixture was stirred at room temperature for 5 minutes. After the precipitated solid was collected by filtration, it was dried at 30 ° C. under reduced pressure to 1-{7- [2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5). -Methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} Propa-2-en-1-one (320 mg) was obtained as a solid.

製造例17
7-(7-ブロモ-2-クロロ-8-フルオロ-6-ヨードキナゾリン-4-イル)-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（6.0 g）、DMF（60 mL）、THF（60 mL）の混合物に、アルゴン雰囲気下、1-メチルピペリジン-4-オール（3.5 mL）、炭酸セシウム（9.6 g）、DABCO（220 mg）を加え、室温にて14時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製し、7-{7-ブロモ-8-フルオロ-6-ヨード-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]キナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（6.3 g）を得た。 Production example 17
7- (7-Bromo-2-chloro-8-fluoro-6-iodoquinazoline-4-yl) -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (6.0 g), DMF ( To a mixture of 60 mL) and THF (60 mL), 1-methylpiperidine-4-ol (3.5 mL), cesium carbonate (9.6 g) and DABCO (220 mg) were added under an argon atmosphere, and the mixture was added at room temperature for 14 hours. Stirred. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution and then dried over anhydrous sodium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia) and 7- {7-bromo-8-fluoro-6-iodo-2-. [(1-Methylpiperidin-4-yl) oxy] quinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (6.3 g) was obtained.

製造例18
7-{7-ブロモ-8-フルオロ-6-ヨード-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]キナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（3.3 g）、THF（65 mL）の混合物にナトリウムエトキシド（390 mg）を加え、40℃にて終夜撹拌した。反応混合物にナトリウムエトキシド（390 mg）を加え、40℃にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-{7-ブロモ-8-エトキシ-6-ヨード-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]キナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（1.3 g）を固体として得た。 Production example 18
7- {7-Bromo-8-Fluoro-6-iodo-2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] quinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid Sodium ethoxydo (390 mg) was added to a mixture of acid tert-butyl ester (3.3 g) and THF (65 mL), and the mixture was stirred overnight at 40 ° C. Sodium ethoxide (390 mg) was added to the reaction mixture, and the mixture was stirred at 40 ° C. overnight. A saturated aqueous ammonium chloride solution was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium chloride solution and then dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- {7-bromo-8-ethoxy-6-iodo-2-. [(1-Methylpiperidin-4-yl) oxy] quinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (1.3 g) was obtained as a solid.

製造例19
7-{7-ブロモ-8-エトキシ-6-ヨード-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]キナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（9.5 g）、4,4,5,5-テトラメチル-2-ビニル-1,3,2-ジオキサボロラン（4.5 mL）、1,4-ジオキサン（100 mL）、水（10 mL）の混合物に炭酸カリウム（5.5 g）、PdCl₂(dppf)・CH₂Cl₂（1.1 g）を加え、アルゴン雰囲気下、80℃にて1時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、酢酸エチル、飽和塩化ナトリウム水溶液、セライトを加え、室温にて10分間撹拌した。不溶物を濾別した後、濾液を酢酸エチルにて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、7-{7-ブロモ-8-エトキシ-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（6.8 g）を固体として得た。 Manufacturing example 19
7- {7-Bromo-8-ethoxy-6-iodo-2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] quinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid Acid tert-butyl ester (9.5 g), 4,4,5,5-tetramethyl-2-vinyl-1,3,2-dioxaborolane (4.5 mL), 1,4-dioxane (100 mL), water (10) _{Potassium carbonate (5.5 g), PdCl 2} (dppf) and CH ₂ Cl ₂ (1.1 g) were added to the mixture of mL), and the mixture was stirred at 80 ° C. for 1 hour under an argon atmosphere. After allowing the reaction mixture to cool to room temperature, ethyl acetate, saturated aqueous sodium chloride solution and Celite were added, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. After filtering the insoluble matter, the filtrate was extracted with ethyl acetate, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (basic silica gel, hexane / ethyl acetate) and 7- {7-bromo-8-ethoxy-2-[(1-1-). Methylpiperidin-4-yl) oxy] -6-vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (6.8 g) was obtained as a solid.

製造例20
7-{7-ブロモ-8-エトキシ-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（5.7 g）、(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)ボロン酸（2.4 g）、Pd₂(dba)₃（850 mg）、SPhos（760 mg）、1,4-ジオキサン（60 mL）、リン酸三カリウム（10 g）、水（12 mL）の混合物を、アルゴン雰囲気下、120℃にて4時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷した後、酢酸エチル、飽和塩化ナトリウム水溶液を加え、不溶物を濾別した。濾液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧下、溶液を濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、室温にて6時間撹拌した。析出した固体を濾取し、7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（2.2 g)を固体として得た。 Production example 20
7- {7-Bromo-8-ethoxy-2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy]-6-vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid Acid tert-butyl ester (5.7 g), (5-methyl-1H-indazole-4-yl) boronic acid (2.4 g), Pd ₂ (dba) ₃ (850 mg), SPhos (760 mg), 1,4 -A mixture of dioxane (60 mL), tripotassium phosphate (10 g) and water (12 mL) was stirred at 120 ° C. for 4 hours under an argon atmosphere. After allowing the reaction mixture to cool to room temperature, ethyl acetate and saturated aqueous sodium chloride solution were added, and the insoluble material was filtered off. The filtrate was extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. After concentrating the solution under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia). Acetonitrile was added to the obtained purified product, and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours. The precipitated solid was collected by filtration and 7- {8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] -6-vinyl. Kinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (2.2 g) was obtained as a solid.

製造例21
7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナン-2-カルボン酸tert-ブチルエステル（1.3 g)、1M塩酸（13 mL）の混合物を、室温にて18時間撹拌した。反応混合物を氷冷した後、ジクロロメタン（6.5 mL）、塩化 3-クロロプロパノイル（0.41 mL）、炭酸水素ナトリウム（1.6 g）を加え、同温にて30分間撹拌した。反応混合物に、同温にてIPA（13 mL）、4M水酸化ナトリウム水溶液（4.9 mL）を加え、室温にて4時間撹拌した。反応混合物を氷冷した後、1M塩酸（6.4 mL）、5%炭酸水素ナトリウム水溶液（26 mL）、クロロホルム（39 mL）を加え、室温にて10分間撹拌した。反応混合物をセライト濾過し、濾液をクロロホルムにて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥した後、減圧下、溶液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、析出した固体を濾取した。得られた固体を減圧下、50℃にて乾燥し、1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オン（980 mg）を固体として得た。 Production example 21
7- {8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] -6-vinylquinazoline-4-yl} -2 A mixture of tert-butyl ester (1.3 g) of 7-diazaspiro [3.5] nonane-2-carboxylic acid and 1 M hydrochloric acid (13 mL) was stirred at room temperature for 18 hours. After ice-cooling the reaction mixture, dichloromethane (6.5 mL), 3-chloropropanol chloride (0.41 mL) and sodium hydrogen carbonate (1.6 g) were added, and the mixture was stirred at the same temperature for 30 minutes. IPA (13 mL) and 4M aqueous sodium hydroxide solution (4.9 mL) were added to the reaction mixture at the same temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours. After ice-cooling the reaction mixture, 1M hydrochloric acid (6.4 mL), 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution (26 mL) and chloroform (39 mL) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was filtered through cerite, and the filtrate was extracted with chloroform. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solution was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia). Acetonitrile was added to the obtained purified product, and the precipitated solid was collected by filtration. The obtained solid was dried under reduced pressure at 50 ° C. to 1-(7- {8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-). 4-Il) oxy] -6-vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl) propa-2-en-1-one (980 mg) was obtained as a solid.

上記に示した製造例の製造方法、及び同様の方法にて、後記表5〜表11に示す化合物を製造した。また、各製造例化合物の製造法、構造及び物理化学的データを表5〜表11に示す。 The compounds shown in Tables 5 to 11 below were produced by the production method of the production example shown above and the same method. Tables 5 to 11 show the production method, structure, and physicochemical data of each production example compound.

参考例1
1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（2.2 g）を超臨界流体クロマトグラフィー（CHIRALPAK AS-H(ダイセル社製)、二酸化炭素／エタノール／トリエチルアミン）にて分取した。得られた分取物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）にて精製し、(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン(化合物A)（1.1 g）を得た。 Reference example 1
1- {7- [6-Cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one (2.2 g) supercritical fluid chromatography It was separated by chromatography (CHIRALPAK AS-H (manufactured by Daicel), carbon dioxide / ethanol / triethylamine). The obtained fraction was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol) and (+)-1- {7- [6-cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidine- 4-Il] Oxy} -7- (5-Methyl-1H-Indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-Diazaspiro [3.5 ] Nona-2-yl} propa-2-en-1-one (Compound A) (1.1 g) was obtained.

参考例3
1-{7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン（2.0 g）を超臨界流体クロマトグラフィー（CHIRALPAK AS-H(ダイセル社製)、二酸化炭素／メタノール／トリエチルアミン、二酸化炭素／エタノール／トリエチルアミン）にて分取した。得られた分取物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／28%アンモニア水）にて精製し、(+)-1-{7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン(化合物C)（810 mg）を得た。 Reference example 3
1-{7-[2-{[1- (2-Methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2, 2-Trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one (2.0 g) supercritical fluid chromatography (CHIRALPAK AS-H (manufactured by Daicel), carbon dioxide / methanol / triethylamine, carbon dioxide / ethanol / triethylamine) was used for fractionation. The obtained fraction was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol / 28% aqueous ammonia), and (+)-1- {7- [2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidine-). 4-Il] Oxy} -7- (5-Methyl-1H-Indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7 -Diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one (Compound C) (810 mg) was obtained.

参考例4
1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オン（1.5 g）を超臨界流体クロマトグラフィー（CHIRALPAK AS-H(ダイセル社製)、二酸化炭素／エタノール／トリエチルアミン）にて分取した。得られた分取物にヘキサン、酢酸エチルを加え、トリチュレーションした。析出した固体を濾取し、(+)-1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オン（670 mg）を固体として得た。
上記方法を複数回行うことにより得た固体（3.0 g）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ODSシリカゲル、水／メタノール）にて精製した。得られた精製物にアセトニトリルを加え、室温にて撹拌した。析出した固体を濾取し、得られた固体を減圧下、40℃にて乾燥し、(+)-1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オン（化合物Ｄ）（2.0 g）を結晶として得た。 Reference example 4
1-(7-{8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] -6-vinylquinazoline-4-yl) } -2,7-Diazaspiro [3.5] nona-2-yl) propa-2-en-1-one (1.5 g) supercritical fluid chromatography (CHIRALPAK AS-H (manufactured by Daicel), carbon dioxide / ethanol / Triethylamine). Hexane and ethyl acetate were added to the obtained fraction and trituration was performed. The precipitated solid was collected by filtration, and (+)-1-(7- {8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) ) Oxy] -6-vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl) propa-2-en-1-one (670 mg) was obtained as a solid.
The solid (3.0 g) obtained by performing the above method multiple times was purified by silica gel column chromatography (ODS silica gel, water / methanol). Acetonitrile was added to the obtained purified product, and the mixture was stirred at room temperature. The precipitated solid was collected by filtration, and the obtained solid was dried at 40 ° C. under reduced pressure to (+)-1-(7- {8-ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-)). Il) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy]-6-vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl) propa-2-en-1 -On (Compound D) (2.0 g) was obtained as crystals.

上記に示した参考例4の製造方法と同様の方法にて、参考例2（化合物Ｂ）を製造した。また、各参考例化合物の構造を後記表12〜表13に、各参考例化合物の製造法及び物理化学的データを表14に示す。 Reference Example 2 (Compound B) was produced by the same method as that of Reference Example 4 shown above. The structure of each reference example compound is shown in Tables 12 to 13 below, and the production method and physicochemical data of each reference example compound are shown in Table 14.

また、後記表中において、以下の略号を用いることがある。
PEx：製造例番号、REx：参考例番号、PSyn：同様の方法で製造した製造例番号、Syn：同様の方法で製造した参考例番号（例えば、R1は参考例1を示す。）、Str：化学構造式（Me：メチル、Et：エチル、Boc：tert-ブトキシカルボニルを示す。なお、化学構造式中に「＃」が付された化合物は、軸不斉に基づく単一の光学異性体であることを示す。）、Dat：物理化学的データ、ESI+:質量分析におけるm/z値（イオン化法ESI、断りのない場合[M+H]⁺）、ESI-:質量分析におけるm/z値（イオン化法ESI、断りのない場合[M-H]^-）、CI+:質量分析におけるm/z値（イオン化法CI、断りのない場合[M+H]⁺）、NMR：DMSO-d6中の¹H-NMRにおけるシグナルのδ値(ppm)、s:一重線(スペクトル)、d:二重線(スペクトル)、t:三重線(スペクトル)、m:多重線（スペクトル）、[α]_D ²⁰：20℃における比旋光度、c：比旋光度を測定した際の濃度(g/100 mL)。 In addition, the following abbreviations may be used in the table below.
PEx: Production example number, REx: Reference example number, PSyn: Production example number manufactured by the same method, Syn: Reference example number manufactured by the same method (for example, R1 indicates Reference Example 1), Str: The chemical structural formulas (Me: methyl, Et: ethyl, Boc: tert-butoxycarbonyl are shown. The compounds with "#" in the chemical structural formula are single optical isomers based on axial asymmetry. ), Dat: Physicochemical data, ESI +: m / z value in mass analysis (ionization method ESI, unless otherwise noted [M + H] ⁺ ), ESI-: m / z value in mass analysis (Ionization method ESI, without notice [MH] ^- ), CI +: m / z value in mass analysis (ionization method CI, without notice [M + H] ⁺ ), NMR: ¹ H in DMSO-d6 -Δ value (ppm) of signal in NMR, s: single line (spectrum), d: double line (spectrum), t: triple line (spectrum), m: multiple line (spectrum), [α] _D ²⁰ : Specific rotation lightness at 20 ° C, c: Concentration when the specific rotation lightness was measured (g / 100 mL).

本発明の医薬組成物の薬理的効果は、以下の実施例により確認した。 The pharmacological effect of the pharmaceutical composition of the present invention was confirmed by the following examples.

実施例１ KRAS G12C/SOS/c-Raf複合体形成阻害作用の評価
ヒトリコンビナントKRAS G12C、SOSおよびc-Rafタンパク質を用いてこれらタンパク質の複合体形成に対する被験化合物の阻害作用を検討した。
384ウェルプレート（Corning社）へ、assay buffer（50mM HEPES, 150mM NaCl, 5mM MgCl₂, 0.05% Tween 20, pH7.4）に溶解したビオチン化AviTag -KRAS G12C（1-185, GDP）（2.5μL; 400nM）に被験化合物をジメチルスルホキシド（DMSO）で希釈し終濃度1,000nMから1nMまで2.5μLの液量で添加した。これにSon of Sevenless（SOS）（2.5μL; 1.3μM）、c-Raf GSTおよびGTP（SIGMA社、2.5μL; それぞれ130nMおよび4μM）を加え1時間室温にて静置した。その後Ulight-anti-GST（終濃度60nM、Perkin Elmer社）およびLANCE Eu-W1024 labeled Streptoavidin（終濃度50ng/mL、Perkin Elmer社）の混合液（10μL）を加え、EnVision 2103 Multilabel Reader（Perkin Elmer社）を用いて励起波長337nm、620nm及び665nmでの蛍光強度を測定した。参照波長620nmによる蛍光強度で値を標準化した後、DMSO処理でのシグナル値を0%阻害、GTP無添加でのシグナル値を100%阻害とし、50%阻害濃度（IC₅₀）をSigmoid-Emaxモデル非線形回帰分析にて算出した。被験化合物として化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄを用いた試験結果を表１に示す。 Example 1 Evaluation of KRAS G12C / SOS / c-Raf complex formation inhibitory effect Human recombinant KRAS G12C, SOS and c-Raf proteins were used to examine the inhibitory effect of the test compound on complex formation of these proteins.
Biotized AviTag-KRAS G12C (1-185, GDP) (2.5 μL) dissolved in assay buffer (50 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM MgCl _{2, 0.05% Tween 20, pH 7.4) in a 384-well plate (Corning).} The test compound was diluted with dimethyl sulfoxide (DMSO) to 400 nM) and added in a liquid volume of 2.5 μL from a final concentration of 1,000 nM to 1 nM. To this, Son of Sevenless (SOS) (2.5 μL; 1.3 μM), c-Raf GST and GTP (SIGMA, 2.5 μL; 130 nM and 4 μM, respectively) were added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 1 hour. Then add a mixture (10 μL) of Ulight-anti-GST (final concentration 60 nM, Perkin Elmer) and LANCE Eu-W1024 labeled Streptoavidin (final concentration 50 ng / mL, Perkin Elmer), and add EnVision 2103 Multilabel Reader (Perkin Elmer). ) Was used to measure the fluorescence intensity at excitation wavelengths of 337 nm, 620 nm and 665 nm. After standardizing the value by the fluorescence intensity at the reference wavelength of 620 nm, the signal value in DMSO treatment is 0% inhibitory, the signal value without GTP addition is 100% inhibitory, and the 50% inhibitory concentration (IC ₅₀ ) is the Sigmoid-Emax model. Calculated by non-linear regression analysis. Table 1 shows the test results using Compound A, Compound B, Compound C and Compound D as the test compounds.

実施例２ヒトKRAS G12C変異陽性膵臓癌株MIA PaCa-2に対するERKリン酸化阻害作用の評価
KRASシグナルの下流にあるERKの202番目のスレオニン（Thr202）および204番目のチロシン（Tyr204）のリン酸化をCell ELISAにより測定することで、被験化合物によるERKリン酸化阻害作用を評価した。
MIA PaCa-2細胞（RIKEN, RCB2094）を1ウェルあたり2.0x10⁴細胞となるように、36μL/ウェルずつ384ウェルプレート（Greiner bio-one社）に播種した。細胞培養条件は、10% 牛胎児血清（GE Life Sciences社）を含むRPMI1640培地（Sigma-Aldrich社）を用いて、5%CO₂存在下37℃で行った。
翌日、被験化合物（終濃度100nMから0.3nMの範囲で6点）、陽性対照として終濃度1μMのトラメチニブ（グラクソ・スミスクライン社；MEK阻害剤）、及び陰性対照として被験化合物の溶媒であるDMSOを新鮮な培地で100倍希釈し、4μLずつ各ウェルに添加後、2時間培養した。培養後速やかに、各ウェルに30%グリオキサール液[Wako社；40%グリオキサールをPhosphate Buffered Saline（PBS；Wako社）で希釈]を30μL添加し、1時間室温で静置することで細胞を固定した。その後、プレートを遠心（110xg, 7秒間、以下特記しない限り遠心は同条件で行った）することで上清を除き、0.1% Triton X-100（Amersham Biosciences社）含有PBSを20μLずつ各ウェルに添加した。10分間室温静置後、遠心により上清を除き、さらに同じ操作を繰り返した。次に、0.5% SDS（Invitrogen社）含有PBSを20μLずつ各ウェルに添加し、室温で30分間静置後、遠心することで上清を除去した。続いて、ブロッキング溶液（ODYSSEY Blocking Buffer；LI-COR Biosciences社）を20μLずつ各ウェルに添加して1時間室温で静置した。遠心により上清を除き、1次抗体としてERK(Thr202/Tyr204)のリン酸化抗体（Cell Signaling Technology社）を原液に対して1/2,500量となるように希釈したブロッキング溶液を10μLずつ各ウェルに添加して、4℃にて一晩静置した。
翌日、プレートを遠心して反応液を除き、0.05% Tween-20含有PBS（Thermo Scientific社；20x PBS Tween-20をイオン交換水で20倍希釈して使用）を20μLずつ各ウェルに添加し、遠心により上清を除去することで各ウェルを洗浄した。洗浄は計3回行った。洗浄後、2次抗体としてIRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG（LI-COR Biosciences社）を原液に対して1/1,000量となるように希釈したブロッキング溶液を10μLずつ各ウェルに添加して、1時間室温で静置した。プレートを遠心することにより反応液を除き、0.05% Tween-20含有PBSで1次抗体反応後と同様にして、各ウェルを3回洗浄した。3回目の洗浄後の遠心は、171xg, 17秒間行った。洗浄液を除いた後に、そのままプレートを室温で3時間以上風乾させ、Aerius（LI-COR Biosciences社）にて800nmの蛍光シグナルを測定した。
DMSO添加時のシグナル値を0%阻害、1μMのトラメチニブ添加時のシグナル値を100%阻害とし、50%阻害値（IC₅₀）をSigmoid-Emaxモデル非線形回帰分析にて算出した。被験化合物として化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄを用いた試験結果を表2に示す。 Example 2 Evaluation of ERK phosphorylation inhibitory effect on human KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer strain MIA PaCa-2
The phosphorylation of ERK at position 202 threonine (Thr202) and position 204 tyrosine (Tyr204) downstream of the KRAS signal was measured by Cell ELISA to evaluate the ERK phosphorylation inhibitory effect of the test compound.
MIA PaCa-2 cells (RIKEN, RCB2094) were seeded in 384-well plates (Greiner bio-one) at 36 μL / well so as to be ^{2.0x10 4 cells per well.} Cell culture conditions were carried out using RPMI1640 medium (Sigma-Aldrich) containing 10% fetal bovine serum (GE Life Sciences) at 37 ° C in the presence of _{5% CO 2.}
The next day, the test compound (6 points in the range of 100 nM to 0.3 nM final concentration), trametinib (Graxo Smith Klein; MEK inhibitor) with a final concentration of 1 μM as a positive control, and DMSO, which is a solvent of the test compound, as a negative control. The mixture was diluted 100-fold with fresh medium, added to each well in an amount of 4 μL, and then cultured for 2 hours. Immediately after culturing, 30 μL of 30% glyoxal solution [Wako; 40% glyoxal diluted with Phosphate Buffered Saline (PBS; Wako)] was added to each well, and the cells were allowed to stand at room temperature for 1 hour to fix the cells. .. Then, centrifuge the plate (110xg, 7 seconds, centrifugation was performed under the same conditions unless otherwise specified) to remove the supernatant, and add 20 μL of PBS containing 0.1% Triton X-100 (Amersham Biosciences) to each well. Added. After allowing to stand at room temperature for 10 minutes, the supernatant was removed by centrifugation, and the same operation was repeated. Next, 20 μL of PBS containing 0.5% SDS (Invitrogen) was added to each well, allowed to stand at room temperature for 30 minutes, and then centrifuged to remove the supernatant. Subsequently, 20 μL of a blocking solution (ODYSSEY Blocking Buffer; LI-COR Biosciences) was added to each well and allowed to stand at room temperature for 1 hour. The supernatant is removed by centrifugation, and 10 μL of a blocking solution diluted with ERK (Thr202 / Tyr204) phosphorylated antibody (Cell Signaling Technology) as the primary antibody to 1 / 2,500 of the stock solution is added to each well. It was added and allowed to stand overnight at 4 ° C.
The next day, the plate was centrifuged to remove the reaction solution, and 20 μL of PBS containing 0.05% Tween-20 (Thermo Scientific; 20x PBS Tween-20 diluted 20-fold with ion-exchanged water) was added to each well and centrifuged. Each well was washed by removing the supernatant with. Washing was performed a total of 3 times. After washing, 10 μL of a blocking solution diluted with IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG (LI-COR Biosciences) as a secondary antibody so as to be 1/1000 of the stock solution was added to each well for 1 hour. It was allowed to stand at room temperature. The reaction mixture was removed by centrifuging the plate, and each well was washed 3 times with PBS containing 0.05% Tween-20 in the same manner as after the primary antibody reaction. Centrifugation after the third wash was performed at 171 xg for 17 seconds. After removing the washing liquid, the plate was air-dried at room temperature for 3 hours or more, and the fluorescence signal at 800 nm was measured with Aerius (LI-COR Biosciences).
The signal value when DMSO was added was 0% inhibition, the signal value when 1 μM trametinib was added was 100% inhibition, and the 50% inhibition value (IC ₅₀ ) was calculated by Sigmoid-Emax model nonlinear regression analysis. Table 2 shows the test results using Compound A, Compound B, Compound C and Compound D as the test compounds.

実施例３腫瘍内pERK阻害作用の評価
被験化合物投与後の腫瘍サンプル中のERKのリン酸化量を、pERK測定キット（Advanced ERK phospho-T202/Y204 kit, Cisbio社）を用いてTR-FRET法にて検討した。
MIA PaCa2細胞 3.0x10⁶個をPBSに等量のマトリゲル（ベクトン・ディッキンソン社）を添加した溶液を用いて調製し、4-5週齡の雄性ヌードマウス（CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj (nu/nu), 日本チャールス・リバー社）皮下に100μLの用量で注射して植え付け、17日後に試験に用いた。試験は溶媒群および被験化合物投与群各3匹で行い、被験化合物を表3に記載した投与量となるように溶媒を用いて調製した。被験化合物は経口投与し、6% 2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（Sigma-Aldrich社）を溶媒として用いた。投与6時間後にイソフルラン麻酔下で頸椎脱臼したマウスより腫瘍を摘出し、一部を2mLエッペンチューブに入れ、液体窒素を用いて凍結した。腫瘍サンプルはpERK測定試験に供するまで、-80℃のディープフリーザー内で保存した。
腫瘍サンプルに、lysis buffer1（Phospho lysis buffer [Cisbio社], Complete EDTA free [Roche社], Phosphatase inhibitor cocktail2 [Sigma-Aldrich社]）500μLとビーズ1個（YTZボール 5mm [ニッカトー社]）を添加し、Tissue Lyser II（QIAGEN社）を用いて破砕（frequency 25/s, 3分間）した。全量を新しいチューブに移し、微量高速冷却遠心機を用いて遠心（20,400xg, 10分間, 4℃）し、上清である腫瘍lysateを得た。蛋白定量キット（Pierce 660 nm Protein Assay Kit [Thermo Fisher社]）を用いて腫瘍lysateの蛋白定量を行い、各サンプルを最終0.5μg/μLの濃度になるようにlysis buffer 2（Phospho lysis buffer [Cisbio社], Blocking Agent [pERK測定キット付属]）を用いて希釈した。
p-ERK1/2 Cryptate抗体及びp-ERK1/2 d2抗体（pERK測定キットに付属）をdetection buffer（pERK測定キットに付属）で40倍希釈し、これら2種の抗体の混合溶液を作製した。抗体の混合溶液を384ウェルプレートに4μL/ウェルの液量で添加した。更に、0.5μg/μLに希釈した腫瘍lysateを16μL/ウェルの液量で添加した。約17時間、湿箱内にて室温で静置した後、EnVision 2103 Multilabel Reader（PerkinElmer社）を用いて、励起波長337nmの条件で、620nm及び665nmにおける蛍光強度を測定した。参照波長620nmによる蛍光強度で値を標準化した後、溶媒群のカウントを0％阻害、lysate添加無しのカウントを100％阻害とし、被験化合物投与サンプルの阻害値を％阻害率で算出した。被験化合物として化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄを用いた試験結果を表3に示す。 Example 3 Evaluation of intratumoral pERK inhibitory effect The amount of ERK phosphorylation in the tumor sample after administration of the test compound was measured by the TR-FRET method using a pERK measurement kit (Advanced ERK phospho-T202 / Y204 kit, Cisbio). I examined it.
MIA PaCa2 cells 3.0x10 ⁶ cells were prepared using a solution prepared by adding an equal volume of matrigel (Becton Dickinson) in PBS, 4-5 week old male nude mice (CAnN.Cg-Foxn1nu / CrlCrlj (nu / nu), Charles River Japan, Inc.) Subcutaneously injected at a dose of 100 μL and planted, and used for the test 17 days later. The test was carried out with 3 animals each in the solvent group and the test compound administration group, and the test compounds were prepared using the solvent so as to have the doses shown in Table 3. The test compound was orally administered, and 6% 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (Sigma-Aldrich) was used as a solvent. Six hours after administration, the tumor was excised from mice with dislocated cervical spine under isoflurane anesthesia, and a part of the tumor was placed in a 2 mL Eppen tube and frozen using liquid nitrogen. Tumor samples were stored in a deep freezer at -80 ° C until they were subjected to the pERK measurement test.
To the tumor sample, add 500 μL of lysis buffer1 (Phosphatase buffer [Cisbio], Complete EDTA free [Roche], Phosphatase inhibitor cocktail2 [Sigma-Aldrich]) and 1 bead (YTZ ball 5 mm [Nikkatto]). , Tissue Lyser II (QIAGEN) was used for crushing (frequency 25 / s, 3 minutes). The whole volume was transferred to a new tube and centrifuged (20,400 xg, 10 minutes, 4 ° C.) using a micro high-speed cooling centrifuge to obtain a supernatant tumor lysate. Protein quantification of tumor lysate was performed using a protein quantification kit (Pierce 660 nm Protein Assay Kit [Thermo Fisher]), and each sample was lysis buffer 2 (Phospho lysis buffer [Cisbio] to a final concentration of 0.5 μg / μL. , Blocking Agent [included with pERK measurement kit]).
The p-ERK1 / 2 Cryptate antibody and the p-ERK1 / 2 d2 antibody (included in the pERK measurement kit) were diluted 40-fold with detection buffer (included in the pERK measurement kit) to prepare a mixed solution of these two antibodies. A mixture of antibodies was added to a 384-well plate at a volume of 4 μL / well. Further, tumor lysate diluted to 0.5 μg / μL was added at a liquid volume of 16 μL / well. After allowing to stand in a wet box at room temperature for about 17 hours, the fluorescence intensities at 620 nm and 665 nm were measured using an EnVision 2103 Multilabel Reader (PerkinElmer) under the condition of an excitation wavelength of 337 nm. After standardizing the value by the fluorescence intensity at the reference wavelength of 620 nm, the count of the solvent group was defined as 0% inhibition, the count without addition of lysate was defined as 100% inhibition, and the inhibition value of the test compound-administered sample was calculated by the% inhibition rate. Table 3 shows the test results using Compound A, Compound B, Compound C and Compound D as the test compounds.

実施例4 ヒトKRAS G12C変異陽性膵臓癌株MIA PaCa担癌マウスにおける抗腫瘍作用の評価
MIA PaCa2細胞 3.0x10⁶個をPBSに等量のマトリゲル（ベクトン・ディッキンソン社）を添加した溶液を用いて調製し、4-5週齡の雄性ヌードマウス（CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj (nu/nu), 日本チャールス・リバー社）皮下に100μLの用量で注射して植え付けた。植え付け約1週間後、各群間の腫瘍体積および体重がほぼ同等となるよう群分けを行い、翌日より被験化合物の投与を開始した。試験は溶媒群および被験化合物投与群各5匹で行い、溶媒群には6% 2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（Sigma-Aldrich社）水溶液を、被験化合物投与群には6% 2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン水溶液に被験化合物（10または40 mg/kg）を混合して経口投与した。投与は14日間1日1回行い、腫瘍径および体重を1週間に2回測定した。腫瘍体積の算出には以下の式を用いた。
[腫瘍体積(mm³)] = [腫瘍の長径(mm)] x [腫瘍の短径(mm)]² x 0.5
被験化合物による腫瘍増殖阻害率(%)は、投与開始前日の被験化合物投与群の腫瘍体積を100%阻害、投与終了日の溶媒群の腫瘍体積を0%阻害として算出した。また、被験化合物投与群の腫瘍体積が投与開始前日の腫瘍体積を下回った場合、投与開始前日の腫瘍体積を0%退縮、腫瘍体積0を100%退縮として、被験化合物の腫瘍退縮率(%)を算出した。被験化合物として化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄを用いた試験結果を表4に示す。 Example 4 Evaluation of antitumor effect in human KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer strain MIA PaCa cancer-bearing mouse
MIA PaCa2 cells 3.0x10 ⁶ cells were prepared using a solution prepared by adding an equal volume of matrigel (Becton Dickinson) in PBS, 4-5 week old male nude mice (CAnN.Cg-Foxn1nu / CrlCrlj (nu / nu), Charles River, Japan) Subcutaneously injected at a dose of 100 μL and planted. Approximately 1 week after planting, the tumors were divided into groups so that the tumor volume and body weight were almost the same, and administration of the test compound was started the next day. The test was conducted with 5 animals each in the solvent group and the test compound administration group, with a 6% 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (Sigma-Aldrich) aqueous solution in the solvent group and 6% 2-hydroxy in the test compound administration group. The test compound (10 or 40 mg / kg) was mixed with an aqueous solution of propyl-β-cyclodextrin and orally administered. The administration was performed once a day for 14 days, and the tumor diameter and body weight were measured twice a week. The following formula was used to calculate the tumor volume.
[Tumor volume (mm ³ )] = [Tumor major axis (mm)] x [Tumor minor axis (mm)] ² x 0.5
The tumor growth inhibition rate (%) by the test compound was calculated assuming that the tumor volume of the test compound administration group on the day before the start of administration was 100% inhibited and the tumor volume of the solvent group on the end day of administration was 0% inhibition. When the tumor volume of the test compound administration group is lower than the tumor volume on the day before the start of administration, the tumor volume on the day before the start of administration is assumed to be 0% retraction and the tumor volume 0 is 100% retraction, and the tumor regression rate (%) of the test compound is defined as 100%. Was calculated. Table 4 shows the test results using Compound A, Compound B, Compound C and Compound D as the test compounds.

以上の結果から、本発明の医薬組成物の有効成分である、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物ＤがG12C変異KRASを阻害することが確認された。また、これらの化合物がKRAS G12C変異陽性膵臓癌細胞移植担癌マウスに対して抗腫瘍作用を有することが確認された。 From the above results, it was confirmed that the active ingredients of the pharmaceutical composition of the present invention, compound A, compound B, compound C and compound D, inhibit the G12C mutant KRAS. In addition, it was confirmed that these compounds have an antitumor effect on KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer cell transplant-bearing cancer mice.

従って、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物又はその製薬学的に許容される塩は、膵臓癌、特にKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療に使用できる。

Therefore, a compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used for the treatment of pancreatic cancer, particularly KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.

本発明の医薬組成物の有効成分である、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩は、G12C変異KRAS阻害作用を有し、膵臓癌の治療用医薬組成物、ある態様としてKRAS G12C変異陽性膵臓癌の治療用医薬組成物の有効成分として使用できる。 A compound selected from the group consisting of Compound A, Compound B, Compound C and Compound D, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof has a G12C mutation KRAS inhibitory effect. It can be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer, and in some embodiments, a pharmaceutical composition for treating KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.

Claims

(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン、(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン、(+)-1-{7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オン、及び、(+)-1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オンからなる群から選択される化合物、又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する膵臓癌の治療用医薬組成物。 (+)-1-{7-[6-Cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl] )-8-(2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one, (+)- 1- {7- [6-Cyclopropyl-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one, (+)-1- {7 -[2-{[1- (2-Methoxyethyl) piperidin-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -8- (2,2,2-trifluoro) Ethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one and (+)-1- (7- {8 -Ethoxy-7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] -6-vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] Nona-2-yl) A compound selected from the group consisting of propa-2-en-1-one, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient. A pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer.

化合物が、(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(3-メトキシプロピル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オンである請求項１に記載の医薬組成物。 The compound is (+)-1- {7- [6-cyclopropyl-2-{[1- (3-methoxypropyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole- 4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one. The pharmaceutical composition according to claim 1.

化合物が、(+)-1-{7-[6-シクロプロピル-2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)キナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オンである請求項１に記載の医薬組成物。 The compound is (+)-1-{7-[6-cyclopropyl-2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-) 4-yl) -8- (2,2,2-trifluoroethoxy) quinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one. The pharmaceutical composition according to claim 1.

化合物が、(+)-1-{7-[2-{[1-(2-メトキシエチル)ピペリジン-4-イル]オキシ}-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-8-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-6-ビニルキナゾリン-4-イル]-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル}プロパ-2-エン-1-オンである請求項１に記載の医薬組成物。 The compound is (+)-1- {7- [2-{[1- (2-methoxyethyl) piperidine-4-yl] oxy} -7- (5-methyl-1H-indazole-4-yl)- 8- (2,2,2-trifluoroethoxy) -6-vinylquinazoline-4-yl] -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl} propa-2-en-1-one claims Item 3. The pharmaceutical composition according to Item 1.

化合物が、(+)-1-(7-{8-エトキシ-7-(5-メチル-1H-インダゾール-4-イル)-2-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-6-ビニルキナゾリン-4-イル}-2,7-ジアザスピロ[3.5]ノナ-2-イル)プロパ-2-エン-1-オンである請求項１に記載の医薬組成物。 The compound is (+)-1-(7-{8-ethoxy-7-(5-methyl-1H-indazole-4-yl) -2-[(1-methylpiperidin-4-yl) oxy] -6. The pharmaceutical composition according to claim 1, which is -vinylquinazoline-4-yl} -2,7-diazaspiro [3.5] nona-2-yl) propa-2-en-1-one.

膵臓癌がKRAS G12C変異陽性膵臓癌である、請求項1〜請求項５のいずれか１項に記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the pancreatic cancer is KRAS G12C mutation-positive pancreatic cancer.