JP2021121585A - 細胞傷害性ｔリンパ球を含む癌治療用医薬組成物、およびその調製方法 - Google Patents

Abstract

【課題】前立腺癌等の固形癌に有効な医薬組成物を提供する。【解決手段】（ａ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、及びＭＵＣ１６から選択される抗原に由来するエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬ、並びに、（ｂ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ及びＭＵＣ１６から選択され、（ａ）とは異なる抗原に由来するエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬとを含有する、癌治療用医薬組成物である。【選択図】図１

Description

本発明は、癌を治療するための細胞傷害性Ｔリンパ球を含む医薬組成物、およびその調製方法に関する。

細胞を治療するために、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびサイトカイン誘導キラー細胞（ＣＩＫ細胞）が開発された。ＴＩＬ法では、患者の癌細胞由来のＴ細胞を使用しており、生成には約６〜１４週間要する。注射ごとに、約１ｘ１０^１１の細胞が注射され、複数の癌抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が少なくとも２０％の割合で存在することが知られている。すなわち、ＴＩＬ細胞医薬品（ｍｅｄｉｃｉｎｅ）には様々な癌抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が様々な比率で含まれるため、ＴＩＬを使用した細胞医薬品は癌抗体に対する特異性が低く、注入された細胞の組成および比率は患者ごとに異なる。しかし、所与のＴＩＬ細胞医薬品中の癌抗原特異的細胞の種類の数および比率が高いほど、抗癌効果が高いことが確認されている。

さらに、ＣＩＫを使用した細胞医薬品は患者の血液を用いて生成され、生成には約２週間〜３週間かかる。注射ごとに、約１ｘ１０^９〜２ｘ１０^９の細胞が注射され、６０週間の間に最大１６回の注射が必要である。最終製品には、抗原特異的および抗原非特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ９、Ｔｈ１７、Ｔｆｈ、ＴｒｅｇなどのＮＫＴ細胞が含有される。ＣＩＫ生成プロセスは、癌抗原特異的および非特異的Ｔ細胞を大量に生成し、ＣＩＫ細胞を使用した細胞医薬品（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ）は、癌抗原特異性の点で低く、癌を促進するか、または抗癌免疫細胞を阻害し、免疫抑制ＮＫ／ＮＫＴ細胞を部分的に阻害するＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、Ｔｈ２）を含有しながら生成され、注射される細胞の組成は、患者ごとに異なる。

しかし、これらのＴＩＬ細胞医薬品およびＣＩＫ細胞医薬品の研究を通じて、様々な癌抗原特異的および自己細胞医薬品を注射しても安全性の問題がないことを確認することが可能であった。

本発明の目的は、複数の抗原特異的Ｔ細胞医薬品を提供することである。

本発明の別の目的は、複数の抗原特異的Ｔ細胞医薬品を生成する方法を提供することである。

１．エピトープペプチドによって直接刺激されたＰＢＭＣから生成された細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含有する、癌治療用医薬組成物であって、（ａ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される抗原に由来するエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬと、（ｂ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される、上記（ａ）において選択される抗原とは異なる抗原に由来するエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬとが、細胞数に基づいて医薬的に有効な濃度で含有されており、前述のエピトープペプチドが、８〜１２個のアミノ酸からなる、癌治療用医薬組成物。

２．前述の医薬的に有効な濃度が、前述の医薬組成物に含有される細胞の総数に基づいて、少なくとも６５％である、請求項１に記載の医薬組成物。

３．前述の医薬的に有効な濃度が、前述の医薬組成物に含有される細胞の総数に基づいて、少なくとも９０％である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

４．前述のＣＴＬが、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、およびＮＹ−ＥＳＯ−１からなる群から選択されるタンパク質を特異的に認識する、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

５．前述の癌が、固形癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

６．前述の固形癌が、結腸癌、腎臓癌、膵臓癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、乳癌、卵巣癌、神経膠腫細胞腫、胃癌、子宮頸癌、肉腫、前立腺癌、および肺癌から選択される少なくとも１つの癌型である、請求項５に記載の医薬組成物。

７．前述のタンパク質が、ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＭＡＧＥ−Ａ３であり、前述の癌が、肉腫である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

８．前述のタンパク質が、ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＯＹ−ＴＥＳ−１であり、前述の癌が、卵巣癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

９．前述のタンパク質が、ＰＳＭＡおよびＴＡＲＰであり、前述の癌が、前立腺癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

１０．前述のタンパク質が、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ１、およびＭＡＧＥ−Ａ３であり、前述の癌が、肺癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。

１１．複数の抗原特異的ＣＴＬを生成する方法であって、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、ＭＵＣ１６からなる群から選択される単一の抗原に由来するエピトープペプチドと、対象から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって、前述のエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが生成される、第１の段階と、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される、前述の第１の段階において選択される抗原とは異なる抗原に由来するエピトープペプチドと、前述の対象から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって、前述のエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが生成される、第２の段階と、前述の第１の段階および第２の段階において生成された前述のＣＴＬの中で、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を発現するＣＴＬを選択する、第３の段階と、を含み、前述の第１の刺激段階および前述の第２の刺激段階が、同時にまたは連続して実行される、方法。

１２．複数の抗原特異的ＣＴＬを生成する方法であって、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、ＭＵＣ１６からなる群から選択される２つ以上の抗原に由来するエピトープペプチドと、対象から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって、前述のエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが生成される、第１の段階と、前述の第１の段階において生成された前述のＣＴＬの中で、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を発現するＣＴＬを選択する、第２の段階と、を含む、方法。

本発明では、自己Ｔ細胞医薬品の治療効果を最大化することにより標準治療で治療できなかった治療困難な癌患者の利益のために、より迅速で効果的な治療機会を提供することにより癌治療の可能性を高めることができる。

ＣＴＸ３ｍｇを注射されたＢ６マウスにおけるＥＧ７の増殖速度を示すグラフである。 ＩＬ−２の有無にかかわらず、ナイーブまたは活性ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞による腫瘍増殖抑制の効果を示すグラフである。 ｒｈｌＬ−２を注射するとＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が増加することを示す。 ４−１ＢＢシグナルがＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗腫瘍反応を増強することを示す。 ４−１ＢＢにより刺激されたＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の密度に従った抗腫瘍反応を示すグラフである。 自己癌抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌効果を確認した結果である。 ＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌作用を確認した結果である。 ＷＴ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌作用を確認した結果である。 ｈＴＥＲＴ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌作用を確認した結果である。 複数の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞医薬品の臨床試験手順を示す。

本発明は、添付の図面を参照して十分に説明されるが、これらの特定の例には、本発明のすべての例が含まれてはいない。実際、本発明は様々な形態で特定することができ、したがって、本出願に提示された特定の例に限定される、またはそれによって限定されると解釈されてはならない。本明細書および添付の特許請求の範囲の項で使用されている単数形の用語には、特に明記されていない限り、複数形が含まれる。

多重特異性Ｔ細胞医薬品では、様々な癌抗原が、癌組織だけでなく単一の癌細胞においても生じる可能性があり、癌の進行、癌の転移、または回避機構によって生じる癌抗原の種類または量は変化し得る。したがって、一人の患者から様々な癌抗原特異的Ｔ細胞医薬品を生成することが可能である。上記にも関わらず、癌抗原Ｔ細胞医薬品の各臨床試験を実施する場合、１種類の癌抗原Ｔ細胞医薬品のみを使用する。所与の医薬品を多くの臨床試験に使用することが可能である場合でも、１種類の臨床試験を実施した後の予想される寿命不足のため、追加の治療機会がなく、そのため、最後の治療機会が、標準治療に失敗し、癌が再発した、または癌が進行中である癌患者にとって不十分になり得、癌治療の効果も制限され得る。したがって、治療が困難な癌患者の治療の可能性を高め、より良い治療機会を提供するためには、Ｔ細胞医薬品の癌治療効果を最大化する必要がある。

本発明の下で「癌」という用語は、異常なかつ制御されていない細胞増殖によって引き起こされる多くの疾病または疾患を指す。癌を引き起こす可能性のある細胞は癌細胞と呼ばれ、癌細胞は制御できない増殖、不滅性、転移の潜在能力、急速な成長および増殖によって特徴づけられ、独特の構造的特徴を有する。多くの場合、癌細胞は、腫瘍の形態で存在し得るが、独立的に存在し得る、または哺乳類の白血病細胞などの非腫瘍細胞であり得る。癌組織または癌細胞において様々な癌抗原が生成されることがあり得、癌の進行、癌の転移、回避機構によって生じる癌抗原の種類および量は異なり得る。

しかし、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）は、損傷した細胞（例えば、癌細胞、ウイルス感染細胞など）を攻撃して破壊する白血球の１種である。ほとんどのＣＴＬは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を有し、ＣＴＬは、ＴＣＲによって損傷を受けた細胞によって提示される抗原を認識して、細胞特異的毒性を示す。特に、損傷した細胞の抗原は、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子によって細胞表面に提示され、ＴＣＲはＴ細胞が損傷した細胞を破壊するためにＭＨＣ／抗原化合物を認識し、この過程でＣＤ８は、ＭＨＣクラスＩ分子の不変領域と結合する。

しかし、本発明者は、ＥＢＶ特異的ＣＴＬ、ＷＴ１特異的ＣＴＬ、およびｈＴＥＲＴ特異的ＣＴＬの各々について、安全性および治療効果を証明した。さらに、ＰＢＭＣと様々なサイトカインとを組み合わせることで生成される腫瘍またはサイトカイン誘導キラー細胞（ＣＩＫ細胞）から分離された、様々な癌抗原と特異的に組み合わせることができる腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は臨床試験中であるか、または市販されている。

それに応じて、本発明者は、複数の癌抗原を特異的に認識するＣＴＬの組み合わせを使用することによって癌治療の可能性を高め得ると予測し、これを証明し、それによって本発明、すなわち本発明の下での多重特異性Ｔ細胞医薬品を完成させた。

本発明の一実施形態の下では、使用可能な抗原としては、自己腫瘍抗原、ウイルス抗原、および／または組織特異的抗原が挙げられるが、この分野の通常のレベルの知識を有する人なら誰でも、多重特異性Ｔ細胞医薬品に使用できる抗原としては、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原が挙げられることを理解するであろう。

例えば、患者の遺伝子に由来する自己癌抗原としては、ｈＴＥＲＴ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＣ１１０１０．１）、ＷＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＯ６１０８８．１）、ＮＹ−ＥＳＯ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＡ０５９０８．１）、ＭＡＧＥ−Ａ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５３５３．１）など、および癌特異的変異抗原、例えば、腫瘍阻害剤または新抗原、変異Ｐ５３、ＲＡＳなどの誘導遺伝子が挙げられ得、また外部癌抗原としては、癌誘導ウイルス抗原、例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＰＶなどが挙げられ得る。

自己癌抗原としては、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ１、メソテリン、ＭＡＧＥなどが挙げられる。例えば、自己癌抗原であるｈＴＥＲＴは、染色体の末端からテロメアＤＮＡを合成する酵素であり、テロメア依存性細胞破壊を回避するために、癌細胞がこの酵素を過剰に活性化し、この抗原は、肺癌、胃癌、膵臓癌を含む様々な固形癌の標的抗原であることが知られている（Ｋｉｍ ＮＷ、ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９４；２６６：２０１１−２０１５）が、他方、ＷＴ１は、ウィルムス腫瘍に関連する遺伝子であり、亜鉛フィンガー転写因子を分類することによって臓器の増殖および分離、死、ならびに生成に関与するタンパク質であり、脳脊髄癌、肺癌などの標的抗原として知られている（ＫＭ、ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１９９０．６０：５０９−５２０；Ｎａｋａｈａｒａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｐａｔｈｏｌ．２００４．２１：１１３−６）。さらに、前述のＮＹ−ＥＳＯ１は、癌精巣抗原（ＣＴＡ）に属するタンパク質の１つであり、生殖細胞、肉腫、乳癌を含む様々な癌細胞によって生成されることが知られている（Ｇｎｊａｔｉｃ Ｓ，ｅｔ。ａｌ．，Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００６；９５：１−３０）。ＭＡＧＥ−Ａ３は、黒色腫関連抗原ファミリーに属するタンパク質であり、正常な細胞でどのような機能を果たしているかは不明であるが、肺癌、肉腫、黒色腫を含む様々な癌細胞で過剰に生成されることが知られており、したがって、ＭＡＧＥ−Ａ３は癌の免疫学的治療のための適切な標的抗原として知られている（Ｄｅｃｏｓｔｅｒ Ｌ，ｅｔ．ａｌ．，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１２ Ｊｕｎ；２３（６）：１３８７−９３）。したがって、特定の癌に関連することが知られている癌抗原は、本方法の下で個人の癌抗原ＣＤ８^＋Ｔ細胞の生成に使用することができる。

さらに、ウイルス性癌抗原には、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＭＣポリオーマウイルス、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＣＭＶなどが挙げられる。エプスタイン・バーウイルス抗原は、ホジキンリンパ腫、鼻咽頭癌、胃癌、バーキットリンパ腫、ＮＫ／Ｔリンパ腫などの標的抗原であることが知られており、ヒトパピローマウイルスのウイルス抗原は、子宮癌および頭頸部癌の標的抗原として知られており、ＭＣポリオーマウイルスは、メルケル細胞癌の標的抗原として知られている。さらに、Ｂ型肝炎ウイルスおよびＣ型肝炎ウイルスは、肝臓癌の標的細胞であることが知られている。

組織特異的癌抗原には、黒色腫の標的抗原であるチロシナーゼ、ＧＰ１００およびＭＮＲＴ−１、ならびに前立腺癌の標的抗原であるＰＳＭＡ、ＰＡＰ、およびＰＳＡが挙げられる。

さらに、大腸癌では、ＴＰ５３およびＡＰＣの変異などのドライバー変異部位、またはＴｃＦ７、ＰＳＰＨ−６、Ｄｅｐｔｏｒ １５、Ｍａｎ １Ａなどのパッセンジャー変異部位などの変異関連新抗原（ＭＡＮＡ）が本発明の下で多重特異性Ｔ細胞医薬品の抗原として使用され得る。

本発明の一実施形態では、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＷＴ１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ−１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＣＭＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＭＣポリオーマウイルス、ＨＰＶ、およびＥＢＶからなる群から選択される１つ以上の選択肢（ｉｔｅｍｓ）を使用して、癌抗原として多重特異性ＣＴＬを生成することが可能である。

本発明の別の実施形態では、（ａ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される単一の抗原由来エピトープペプチドと、（ｂ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択され、上記（ａ）で選択された抗原とは異なる、抗原由来エピトープペプチドとを抗原として使用することにより、多重特異性ＣＴＬを生成することが可能である。この点で、前述のエピトープペプチドは、８〜２０個のアミノ酸、８〜１９個のアミノ酸、８〜１８個のアミノ酸、８〜１７個のアミノ酸、８〜１６個のアミノ酸、８〜１５個のアミノ酸、８〜１４個のアミノ酸、８〜１３個のアミノ酸、８〜１２個のアミノ酸、および８〜１１個のアミノ酸からなる。

例えば、本発明による多重特異性Ｔ細胞医薬品は、抗原が癌型によって異なる速度で生成されるという事実に基づいて、抗原を組み合わせることにより使用することができる。各癌型の抗原の生成率を以下に示す。表１は、各癌型についてのＷＴ−１の生成率を示し、表２は、癌型によるｈＴＥＲＴの生成率を示す。表３は、各癌型についてのＮＹ−ＥＳＯ−１の生成率を示し、表４は、各癌型についてのＥＢＶの生成率を示す。

前述のＥＢＶ、ｈＴＥＲＴ、およびＷＴ１の特異的Ｔ細胞医薬品、ならびに複数の抗原特異的Ｔ細胞医薬品（Ｃａｓｔ）は、以下の表５に示す特性を有する。

さらに、癌抗原選択検査の結果を以下の表６に示す。

さらに、２、３、４、５、またはそれ以上の癌抗原由来ペプチドが使用される。特に、エピトープとして作用する一般に３〜４種類のペプチドがＴ細胞医薬品の生成に使用されるという事実を考慮すると、癌抗原に由来する少なくとも４、５、６、７、８または９個のペプチドを使用することができる。ペプチドの数は、本発明の方法および本分野の技術を考慮して、分野の人によって決定される必要がある。

本発明の別の実施形態では、本発明による医薬組成物は、前述の医薬組成物中の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を含有する。

本発明の別の実施形態では、本発明の下での医薬組成物は、癌の治療に使用することができる。本発明の別の実施形態では、本発明の下で医薬組成物を使用できる適応症は固形癌であり、本発明の別の実施形態では、前述の固形癌種としては、結腸癌、腎臓癌、膵臓癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、乳癌、卵巣癌、神経膠腫細胞腫、胃癌、子宮頸癌、肉腫、前立腺癌、肺癌などが挙げられる。

本発明の別の実施形態では、肉腫を治療するためのＴ細胞医薬品は、ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＭＡＧＥ−Ａ３に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する。本発明の別の実施形態では、卵巣癌を治療するためのＴ細胞医薬品は、ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＯＹ−ＴＥＳ−１に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する。本発明の別の実施形態では、前立腺癌を治療するためのＴ細胞医薬品は、ＰＳＭＡおよびＴＡＲＰに特異的なＣＤ８＋細胞を含有する。本発明の別の実施形態では、肺癌を治療するためのＴ細胞医薬品は、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ１、およびＭＡＧＥ−Ａ３に特異的なＣＤ８＋Ｔを含有する。

本発明に従って複数の抗原特異的ＣＴＬを生成する方法を以下に説明する。
この方法は、前述のエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、ＭＵＣ１６からなる群から選択される単一の抗原由来エピトープペプチドと、標的から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって生成される第１段階と、前述のエピトープペプチドが認識されるのを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される、前述の第１段階から選択される抗原とは異なる抗原に由来するエピトープペプチドと、標的から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって生成される第２の段階と、ＣＴＬが、前述の第１段階および第２段階において生成されたＣＴＬの中で、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を生じる第３段階とを含み、前述の第１の刺激段階および第２の刺激段階が、同時にまたは連続して実行される。

本発明の下で複数の抗原特異的ＣＴＬを生成する追加の方法を以下に記載する。
この方法は、前述のエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、ＭＵＣ１６からなる群から選択される２つ以上の抗原由来エピトープペプチドと、標的から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって生成される第１段階と、ＣＴＬが、前述の第１段階において生成されたＣＴＬの中で、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を生じる第２の段階と、を含む。

本発明の一実施形態では、多重特異性Ｔ細胞医薬品は、以下の方法を使用することによって生成される。腫瘍において特異的に生成される、または過剰に生成される抗原が選択され、選択された抗原の各々を使用することによって少なくとも１つのエピトープが生成される。標的から抽出したＰＢＭＣを各エピトープとともに約１４日間培養し、２日目、７日目、９日目、１１日目、１３日目、および１５日目に培養培地を交換し、１４日目に同じエピトープで再度培養物を刺激する。次いで、１５日目に、各混合物を収集し、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を生成するＣＴＬを細胞分析に基づいて分離する。

本発明の下で「組成物」という用語は、活性成分であり、本発明の下で細胞傷害性Ｔ細胞、天然担体または人工担体などの活性成分と、標識または探索的材料、アジュバント、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、脂肪親和性溶媒、および保存剤などの不活性成分との組み合わせを指す。組成物は、医薬的に許容される担体も含む。担体は、１つ以上の医薬賦形剤ならびに追加のタンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および糖質（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、アルジトール、アルドン酸、糖誘導体、例えば、糖エステル、多糖、または糖ポリマーなど）を含有することができ、これらの材料の１〜９９．９９重量％または容量％を含み得る。タンパク質賦形剤としては、ヒト血清アルブミン、組換えヒトアルブミン、ゼラチン、カゼインなどが挙げられる。代表的な緩衝アミノ酸としては、アラニン、アルギニン、グリシン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルタムなどが挙げられる。糖質賦形剤としては、単糖類、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、およびソルボース、二糖類、例えばラクトース、スクロース、トレハロース、およびセロビオース、多糖類、例えばラフィノース、マルトデキストリン、テキストラン、およびスターチ、ならびにアルジトール、例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、ソルビトール、ミオイノシトールなどが挙げられる。

既知の方法を使用して、本発明の下での医薬組成物を有する医薬を生成することが可能である。例えば、必要に応じて、水または医薬的に許容される液体滅菌溶媒、または懸濁液注射を非経口的に使用することができる。例えば、医薬的に許容される担体または媒体、具体的には滅菌水または生理食塩水、植物油、懸濁液、界面活性剤、安定剤、賦形剤、ビヒクル、保存剤、結合剤などを適切に組み合わせることができ、投薬に必要な一般に認識されている単位含有量は、医薬品を生成するために混合することができる。上記の医薬品の場合、有効な含有量は、指示された範囲内の適切な含有量である。

さらに、注射用の滅菌組成物は、注射用の蒸留水などの賦形剤を使用して、従来の医療に従って処方し得る。注射液、例えば生理食塩水には、グルコースまたは他の補助剤、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、および塩化ナトリウムを含有する等張液を使用でき、適切な溶解補助剤、例えばアルコール、特にエタノール；多価アルコール、例えば、プロピレングリコール、プロエチレングリコール；非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（商標）またはＨＣＯ−５０を使用することができる。油液には、ゴマ油および大豆油を含むことができ、溶解補助剤には、安息香酸ベンジルおよびベンジルアルコールを含み得る。

注射の種類には、例えば、静脈内注射、動脈内注射、選択的動脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脳室内注射、脳内注射、骨髄注射などが含まれるが、望ましい方法は静脈内注射である。

本発明の下での組成物は、医薬的有効量のＴ細胞を含有する。有効量は、本明細書の内容に基づいて、本分野の通常の知識を有する人なら誰でも容易に決定し得る。一般に、医薬的有効量は、最初に有効成分を低密度で注射し、次いで所望の効果まで（例えば、癌に関連する症状が軽減または解消されるまで）徐々に量を増加させることによって決定される。本発明の下で組成物の適切な投与量または投与間隔は、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，第１１版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ ２００５；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２０版および第２１版、Ｇｅｎｎａｒｏ ａｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００３ ａｎｄ ２００５）に記載されている。

本発明の下での組成物の投与方法は、癌型、年齢、体重、性別、患者の疾病の病状および重症度、投与方法、投与されている他の医薬品などの様々な要因を考慮して決定され得る。本組成物を投与する様々な方法があるが、一般的に使用される方法を使用することができる。

本発明の下で患者に投与される組成物の量は、投与方法、患者の健康状態および体重、医師の処方箋などの多くの要因に基づいて決定することができ、これらの要因はすべて、当分野の通常のレベルの知識を有する人の知識の範囲内にある。

本発明の下での癌抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞を含有する癌の予防または治療の医薬組成物は、約１×１０^６細胞／ｍＬ以上、約２×１０^６細胞／ｍＬ以上、約３×１０^６細胞／ｍＬ以上、約４×１０^６細胞／ｍＬ以上、約８×１０６細胞／ｍＬ以上、約６×１０^６細胞／ｍＬ以上、約７×１０^６細胞／ｍＬ以上、約８×１０^６細胞／ｍＬ以上、約９×１０^６細胞／ｍＬ以上、約１×１０^７細胞／ｍＬ以上、約２×１０^７細胞／ｍＬ以上、約３×１０^７細胞／ｍＬ以上、約４×１０^７細胞／ｍＬ以上、約５×１０^７細胞／ｍＬ以上、約６×１０^７細胞／ｍＬ以上、約７×１０^７細胞／ｍＬ以上、約８×１０^７細胞／ｍＬ以上、約９ｘ１０^７細胞／ｍＬ以上、約１ｘ１０^８細胞／ｍＬ以上、約２ｘ１０^８細胞／ｍＬ以上、約３ｘ１０^８細胞／ｍＬ以上、約４×１０^８細胞／ｍＬ以上、約５×１０^８細胞／ｍＬ以上、約６×１０^８細胞／ｍＬ以上、約７×１０^８細胞／ｍＬ以上、約８×１０^８細胞／ｍＬ以上、または９×１０^８／ｍＬ以上を含有するが、本分野で通常のレベルの知識を有する誰でも、同じ効果を得るために、調整可能な範囲内で組成物中の細胞傷害性Ｔ細胞の密度を調整することができる。

さらに、緩衝液、例えば、リン酸緩衝液または酢酸ナトリウム緩衝液；鎮痛剤、例えば、塩酸プロカイン；安定剤、例えば、ベンジルアルコールもしくはフェノール；または酸化防止剤を組み合わせることができる。調製された注射液は通常、適切なアンプルに充填される。

懸濁液および乳濁液は、例えば、天然ガム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロース、またはポリビニルアルコールを含有し得る担体である。筋肉内注射用の懸濁液または溶液は、活性化合物、ならびに医薬的に許容される担体、例えば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール、例えば、プロピレングリコール、および必要に応じて適切な量の塩酸リドカインを含有し得る。

本発明による細胞毒性Ｔ細胞を含有する医薬組成物は、ボーラス注射、または持続注入によって被験者に投与することができる。例えば、本発明による医薬組成物は、１時間以内、１時間以上、２時間以上、３時間以上、４時間以上、８時間以上、１２時間以上、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上、７日以上、２週間以上、３週間以上、４週間以上、１ヵ月以上、３ヵ月以上、６ヵ月以上に１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、継続的にもしくは特定の間隔で、または臨床的判断に基づいて決定された間隔で投与され得る。注射は、アンプルの形態であり得るか、または複数回の投与用の単位容積容器に含有され得る。しかし、本発明の下で医薬組成物の量は、被験者の年齢、体重、身長、性別、病状全般、および既存の治療歴などの様々な要因によって変化し得ることを、当分野の通常のレベルの知識を有する者は理解するであろう。

本明細書で使用されている「約」という用語は、適用される技術分野で通常使用されている範囲、すなわち、平均から２標準偏差内であるとして理解され得る。「約」とは、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％内であるとして理解され得る。

本発明の下で、「抗癌」という用語は、「予防」および「治療」の両方を指し、本明細書において、「予防」という用語は、本発明の下で抗体を含む組成物を投与することによって癌を抑制または遅延させるすべての活動を指し、「治療」という用語は、本発明の下で抗体を投与することによって癌症状を改善するか、または有利に影響を与えるすべての活動を指す。

実施例１．癌細胞の増殖に対するシクロホスファミド（ＣＴＸ）の効果
ＣＴＸ３ｍｇを腹腔内注射によりＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した。ＯＶＡを産生するＥＬ４（ＥＧ７）細胞をＣＴＸで投与し、次いで、２日目、４日目、６日目、８日目に皮下注射を投与し、腫瘍の増殖を３０日間調べた（図１）。

実施例２．抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化レベルおよびＩＬ−２の癌細胞増殖抑制効果
リンパ球の減少を誘発するために、ＣＴＸ３ｍｇを腹腔内注射によりＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した。２日後、ＥＧ７細胞を皮下注射により投与し、ＯＴ−Ｉマウス由来リンパ球の培養により生成された活性ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞またはナイーブＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞をＯＶＡペプチド５ｕｇ／ｍＬとともに５日間培養し、組換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）２００ＩＵ／ｍＬを５日間、腹腔内注射により投与した。活性ＣＤ８＋Ｔ細胞を投与されたマウスの一部には、２５，０００ＩＵのｒｈＩＬ−２を腹腔内注射により５日間投与し、腫瘍増殖を３０日間観察した（図２）。

実施例３．抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化レベルおよびＩＬ−２によるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の影響
リンパ球の減少を誘発するために、ＣＴＸ３ｍｇを腹腔内注射によりＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した。２日後、ＥＧ７細胞を皮下注射により投与し、ＯＴ−Ｉマウス由来リンパ球の培養により生成された活性ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞またはナイーブＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞をＯＶＡペプチド５ｕｇ／ｍＬとともに５日間培養し、組換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）２００ＩＵ／ｍＬを５日間、腹腔内注射により投与した。活性ＣＤ８＋Ｔ細胞を投与したマウスの一部には、腹腔内注射により２５，０００ＩＵのｒｈＩＬ−２を５日間投与した。腫瘍移入から３５日後、各リンパ球を各マウス群から調製し、ＰＥ統合Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＩ（ＯＶＡ）ペンタマーで染色した（図３）。

実施例４．４−１ＢＢシグナルの伝達による抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌効果の増加
リンパ球の減少を誘発するために、ＣＴＸ３ｍｇを腹腔内注射によりＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した。２日後、ＥＧ７細胞を皮下注射で投与し、ＯＴ−Ｉマウス由来リンパ球の培養により生成された活性ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞をＯＶＡペプチド５ｕｇ／ｍＬとともに５日間培養し、組換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２））２００ＩＵ／ｍＬを抗４−１ＢＢモノクローナル抗体５ｕｇ／ｍＬとともに、または抗４−１ＢＢモノクローナル抗体を含まずに、５日間、腹腔内注射により投与した。活性ＣＤ８＋Ｔ細胞を投与したマウスの一部には、腹腔内注射により２５，０００ＩＵのｒｈＩＬ−２を５日間投与し、腫瘍増殖を３０日間観察した（図４）。

実施例５．投与された抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の量に応じた抗癌効果の増加
リンパ球の減少を誘発するために、ＣＴＸ３ｍｇを腹腔内注射によりＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した。２日後、ＥＧ７細胞を皮下注射し、ＯＴ−Ｉマウス由来リンパ球の培養により生成された活性ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞をＯＶＡペプチド５ｕｇ／ｍＬとともに５日間培養し、組換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）２００ＩＵ／ｍｌを抗４−１ＢＢモノクローナル抗体５ｕｇ／ｍＬとともに５日間腹腔内注射により投与した。活性ＣＤ８＋Ｔ細胞を投与したマウスの一部には、腹腔内注射により２５，０００ＩＵのｒｈＩＬ−２を５日間投与し、腫瘍増殖を３０日間観察した（図５）。

実施例６．自己抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌効果
試験を図６と一致する様式で実施し、結果を図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃに示す。

実施例７．毒性試験
自己抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の毒性を１回および複数回試験した。毒性を観察するために、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞をＣ５７ＢＬ／６に１回および複数回投与した。

４０匹のオスおよび４０匹のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスを各々１０匹のマウス群に分け、週に１回、３週間にわたって４回静脈内投与した。

試験結果によると、試験材で死亡した動物はなく、全身症状もなかった。また、マウス由来のＣＴＬを予想される臨床量の約２０倍の量で３週間にわたり４回（１週間に１回）静脈内投与しても安全であることが試験により確認された。

実施例８．分布試験
抗癌効果を誘発するために、研究者らは、投与された抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が体内のどの器官に分布しているかを調べた。

Ｔｈｙ１．２ Ｃ５７Ｂ／６マウスに由来するＯＶＡ特異的ＴＣＲ修飾ＯＴ−１ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＥＧ７（ＯＶＡ発現ＥＬ４）を含有するＴｈｙ１．１ Ｃ５７ＢＬ／６マウスに投与し、特定の条件および結果を以下の表８に示す。

ほとんどの抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、リンパ器官に移動して蓄積および増殖し、抗癌効果を発揮することが示された。さらに、全身臓器に投与された概して抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、蓄積または増殖しないことが示された。

実施例９．ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の効果の試験
ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の効果は、マウス移植モデルで確認した。具体的な試験方法および結果を図７に示す。

実施例９．ＷＴ１特異的Ｔ細胞の効果の試験
ＷＴ１特異的Ｔ細胞の効果は、マウス移植モデルで確認した。具体的な試験方法および結果を図８に示す。

実施例１０．ｈＴＥＲＴ特異的Ｔ細胞の効果の試験
ｈＴＥＲＴ特異的Ｔ細胞の効果は、マウス移植モデルで確認した。具体的な試験方法および結果を図９に示す。

実施例１１．第２相臨床試験手順
図１０に示す方法で臨床試験を実施した。

より具体的には、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、およびＥＢＶ抗原で活性化された４−１ＢＢ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を医薬品の活性成分として使用し、７ｘ１０^８〜２．８ｘ１０^９細胞／２００ｍＬを標準治療に反応しなかった、再発した固形癌患者に投与した。

例えば、特許請求の範囲を構成する目的で、以下に述べる請求項は、文字通りよりも狭く解釈されてはならず、したがって、明細書の例示的な実施形態は、請求項として読まれてはならない。したがって、本発明は例として述べられており、これらの例は、特許請求の範囲を限定しないことが理解されなければならない。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ制限される。本出願で引用されたすべての刊行物、公開された特許、特許出願、書籍およびジャーナル論文は、全体において参考文献として本出願に含まれている。

Claims (12)

1. エピトープペプチドによって直接刺激されたＰＢＭＣから生成された細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含有する、癌治療用医薬組成物であって、
   （ａ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される抗原に由来するエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬと、
   （ｂ）ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される、上記（ａ）において選択される抗原とは異なる抗原に由来するエピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬとが、細胞数に基づいて医薬的に有効な濃度で含有されており、
   前記エピトープペプチドが、８〜１２個のアミノ酸からなる、
   癌治療用医薬組成物。
2. 前記医薬的に有効な濃度が、前記医薬組成物に含有される細胞の総数に基づいて、少なくとも６５％である、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記医薬的に有効な濃度が、前記医薬組成物に含有される細胞の総数に基づいて、少なくとも９０％である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
4. 前記ＣＴＬが、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、およびＮＹ−ＥＳＯ−１からなる群から選択されるタンパク質を特異的に認識する、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
5. 前記癌が、固形癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
6. 前記固形癌が、結腸癌、腎臓癌、膵臓癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、乳癌、卵巣癌、神経膠腫細胞腫、胃癌、子宮頸癌、肉腫、前立腺癌、および肺癌から選択される少なくとも１つの癌型である、請求項５に記載の医薬組成物。
7. 前記タンパク質が、ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＭＡＧＥ−Ａ３であり、前記癌が、肉腫である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
8. 前記タンパク質が、ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＯＹ−ＴＥＳ−１であり、前記癌が、卵巣癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
9. 前記タンパク質が、ＰＳＭＡおよびＴＡＲＰであり、前記癌が、前立腺癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
10. 前記タンパク質が、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ１、およびＭＡＧＥ−Ａ３であり、前記癌が、肺癌である、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
11. 複数の抗原特異的ＣＴＬを生成する方法であって、
    ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、ＭＵＣ１６からなる群から選択される単一の抗原に由来するエピトープペプチドと、対象から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって、前記エピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが生成される、第１の段階と、
    ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、およびＭＵＣ１６からなる群から選択される、前記第１の段階において選択される抗原とは異なる抗原に由来するエピトープペプチドと、前記対象から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって、前記エピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが生成される、第２の段階と、
    前記第１の段階および第２の段階において生成された前記ＣＴＬの中で、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を発現するＣＴＬを選択する、第３の段階と
    を含み、前記第１の刺激段階および前記第２の刺激段階が、同時にまたは連続して実行される、方法。
12. 複数の抗原特異的ＣＴＬを生成する方法であって、
    ＷＴ１、ｈＴＥＲＴ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、メソテリン、チロシナーゼ、ＧＰ１００、ＭＮＲＴ−１、ＰＡＰ（ＡＣＰＰ）、ＰＳＡ（ＫＬＫ３）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＰＳＭＡ、ＴＡＲＰ、ＰＲＡＭＥ、ＭＵＣ１６からなる群から選択される２つ以上の抗原に由来するエピトープペプチドと、対象から得られるＰＢＭＣとを接触させることによって、前記エピトープペプチドを認識するＣＤ８＋ＣＴＬが生成される、第１の段階と、
    前記第１の段階において生成された前記ＣＴＬの中で、ＣＤ８および４−１ＢＢの両方を発現するＣＴＬを選択する、第２の段階と
    を含む、方法。

Images