JP2021119781A - 微小管結合タンパク質タウに特異的に結合する抗体及び抗原結合断片 - Google Patents

Abstract

【課題】微小管結合タンパク質タウに特異的に結合する抗体または抗原結合断片、および該抗体または該抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。【解決手段】モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ヒトアルツハイマー病脳組織内のタウ沈着物に結合し、正常ヒト脳組織内のタウに結合せず且つ進行性核上性麻痺脳組織内のタウ沈着物に結合しない、モノクローナル抗体または抗原結合断片、ならびに該抗体または該抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、医薬に関する。本発明は、詳細には、微小管結合タンパク質タウに特異的に
結合する抗体及び抗原結合断片に関する。本発明はまた、抗タウ抗体を使用した診断法、
予防法及び治療法にも関する。

認知症は、記憶、思考、行動及び日常活動を行う能力に支障を来す幾つもの進行性障害
によって引き起こされ得る症候群である。現在、全世界で約３６００万人が認知症に罹患
している。認知症者数は２０３０年までに倍増し、２０５０年までには３倍を超えて１億
１５４０万人に上ることが予想されている。アルツハイマー病は最も一般的なタイプの認
知症である。現在、６５歳以上の９人に１人（１１パーセント）及び８５歳を超える人の
ほぼ半数がアルツハイマー病を患っている。国際アルツハイマー病協会（Ａｌｚｈｅｉｍ
ｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）によれば、これらの患者にか
かる医療コストは、現在では世界全体で年間６０００億ドルを超える。こうしたコストは
、特に発展途上国世界において、さらなる公的な社会医療制度の出現、及び所得の向上に
よる機会費用の高まりに伴い、疾患の罹患率を上回ってさらに急速に上昇する可能性が高
い（Ｗｉｎｂｌａｄ，Ｂ ａｎｄ Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｌ，Ｗｏｒｌｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅ
ｒ Ｒｅｐｏｒｔ ２０１０）。

ＡＤ患者の脳には２つの異常構造、アミロイド斑及び神経原線維濃縮体が豊富にある。
これは、特に脳のうちの記憶に重要な特定の領域について当てはまる。また、大脳皮質及
び特定の皮質下領域におけるニューロン及びシナプスの実質的な脱落もある。神経原線維
濃縮体及びニューロン脱落の両方が、病気の持続時間及び重症度と並行して増加し（Ｇｏ
ｍｅｚ−Ｉｓｌａ，ｔ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ １９９７；４１：１７−２
４）、神経原線維の負荷量は認知低下と相関することが示されている（Ｂｒａａｋ，Ｈ．
ａｎｄ Ｂｒａａｋ，Ｅ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ａｇｉｎｇ．１９９７ Ｊｕｌ−Ａｕｇ
；１８（４）：３５１−７。

神経原線維濃縮体は、微小管結合タンパク質タウの過剰リン酸化した不溶性の蓄積物で
構成される神経細胞内病変である。これらの蓄積物は、まとめてタウオパチーとして知ら
れる多くの神経変性疾患の病理組織学的特徴である。タウオパチーには、例えば、アルツ
ハイマー病（ＡＤ）、ピック病（ＰｉＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、皮質基底核変
性症（ＣＢＤ）、及び前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）が含まれる。ヒトタウオパチーにお
いては、病理がある脳領域から別の脳領域へと疾患特異的パターンで進行し（Ｂｒａａｋ
，Ｈ．ａｎｄ Ｂｒａａｋ，Ｅ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ａｇｉｎｇ．１９９７ Ｊｕｌ−
Ａｕｇ；１８（４）：３５１−７、Ｒａｊ ｅｔ．ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ ２０１２；７３
：１２０４−１２１５、Ｓｅｅｌｅｙ ｅｔ．ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ ２００９；６２：４
２−５２．及びＺｈｏｕ ｅｔ．ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ ２０１２；７３：１２１６−１
２２７）、その根底にある機序は未だ不明である。

タウ病理は多くのタウオパチーに関与し、それらの原因であり得る。その正常な形態で
は、タウは高度に可溶性の微小管結合タンパク質であり（Ｊｅｇａｎａｔｈａｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００８；４７：１０５２６−１０５３９．）、微
小管に結合してその重合を促進する（Ｄｒｅｃｈｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｂｉｏ
ｌ Ｃｅｌｌ １９９２；３：１１４１−１１５４．）。しかしながら、タウオパチーで
は、タウが過剰にリン酸化された状態となり、微小管からの脱離、及び最終的には異栄養
性神経突起及び細胞体内に可視化される神経原線維濃縮体としての蓄積が起こる（Ｍａｎ
ｄｅｌｋｏｗ ａｎｄ Ｍａｎｄｅｌｋｏｗ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ２，２０１２：ａ００６２４７）。ヒト及びトランスジェニ
ックマウスモデルにおいて、タウ病理の量は進行性神経機能障害、シナプス脱落、及び機
能低下と相関する（Ａｒｒｉａｇａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．１９９２
Ｍａｒ；４２（３ Ｐｔ １）：６３１−９、Ｂａｎｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕ
ｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ １９９３；１６２：１７９−１８２．、Ｐｏｌｙｄｏｒｏ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｏｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００９；２９：１０７４１−１０７４９．
及びＳｍａｌｌ ａｎｄ Ｄｕｆｆ，Ｎｅｕｒｏｎ．２００８ Ｎｏｖ ２６；６０（４
）：５３４−４２）。アルツハイマー病においてタウ突然変異は観察されていないが、タ
ウ遺伝子の突然変異がある種の前頭側頭型認知症を引き起こすものと見られ（Ｃａｉｒｎ
ｓ ｅｔ ａｌ，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２００７；１７１：２２７−４０）、タウ陽
性封入体を伴うことから、タウ機能障害が神経変性を引き起こすのに十分であることを示
している。さらに、病的タウは、細胞培養及びトランスジェニック動物モデルにおいてＡ
β誘発神経毒性の不可欠な要素と見られる（Ｒａｐｏｐｏｒｔ，Ｍ，ＰＮＡＳ，２００２
；９９：９，６３６４−６３６９．、Ｒｏｂｅｒｓｏｎ ＥＤ，ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ，２００７；３１６：７５０−７５４、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ＡＭ，ａｎｄ Ｆｅｒ
ｒｅｉｒａ Ａ，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２００９；２９：４６４０−４６５１、Ｏａｋ
ｌｅｙ Ｈ，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２００６；２６（４０）：１０１２９−１０１４０
．）。

タウに対する受動及び能動免疫化が、能動免疫化用の種々のリン酸タウペプチド及び受
動免疫療法用の抗タウ抗体を含め、幾つかの異なるマウスモデルを使用してマウスで分析
されている（Ａｓｕｎｉ ＡＡ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００７；２７（
３４）：９１１５−９１２９．、Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎ ＥＭ．Ｃｕｒｒ Ａｌｚｈｅｉ
ｍｅｒ Ｒｅｓ．２００９；６（５）：４４６−４５０．、Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ
Ａ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１０；３０（４９）：１６５５９−１６５
６６．、Ｒｏｓｅｎｍａｎｎ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏｌ．２００６；６
３（１０）：１４５９−１４６７．、Ｂｏｉｍｅｌ Ｍ，ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐ Ｎｅｕｒ
ｏｌ．２０１０；２２４（２）：４７２−４８５．）。３０アミノ酸のリン酸化タウペプ
チドによる免疫化を記載した最初の報告においては、可溶性タウと不溶性タウとの比に対
する効果、免疫マウスにおける濃縮体形成の低減、及びこれらのマウスについて行動試験
で観察される機能上の利益が示された（Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｊ
．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０；３０：１６５５９−１６５６６）。タウ上の初
期病的立体エピトープにおける過剰リン酸化タウタンパク質のリン酸化Ｓｅｒ３９６及び
Ｓｅｒ４０４と反応する十分に特徴付けられた抗タウ抗体による受動免疫化により、能動
免疫化研究で見られた結果が確認された。これらの抗体で処置されたマウスは、タウ病理
の顕著な低減（これは生化学的方法及び組織学によって計測された）、並びに行動試験で
評価された運動機能減退の喪失の有意な遅延を示した（Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ Ａ，
ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２０１１；１１８（４）：６５８−６６７．、Ｃ
ｈａｉ Ｘ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１１；２８６（３９）：３４４
５７−３４４６７．）。

タウに基づく療法は、これまでマウスモデルにおいてのみ分析されてきた。しかし、一
般にタウオパチーの重大性、具体的にはアルツハイマー病の社会的コストを考えると、タ
ウオパチーを診断、モニタリング、予防及び治療する有効な手段が常に必要とされている
。

本発明は、タウに特異的に結合する抗原結合可変領域を含む抗体を提供する。本発明は
、詳細には、正常ヒト脳組織内のタウを検出し、又はヒトアルツハイマー病（ＡＤ）及び
進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）脳組織内のタウ沈着物を検出する抗タウ抗体、及びその抗原
結合断片を提供する。特定の実施形態において、本抗タウ抗体、及びその抗原結合断片は
、ウエスタンアッセイによると組換えタウ及び／又はＰＨＦタウに結合する。

本発明はさらに、タウに特異的に結合する天然に存在するヒト抗体由来の抗原結合可変
領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常領域とを含むキメラ抗体を提供し、ここでこのキメラ抗
体の定常領域は天然に存在する抗体と異なる。特定の実施形態において、本発明は、正常
ヒト脳組織内のタウを検出するが、ヒトアルツハイマー病（ＡＤ）及び進行性核上性麻痺
（ＰＳＰ）脳組織内のタウ沈着物は検出しないキメラ抗タウ抗体、及びその抗原結合断片
を提供する。

特定の実施形態において、本（キメラ）抗タウ抗体、及びその抗原結合断片は、ウエス
タンアッセイによると組換えタウ及び／又はＰＨＦタウに結合する。特定の実施形態にお
いて、本抗タウ抗体、及びその抗原結合断片は、ＥＬＩＳＡにおいて組換えタウ又はＰＨ
Ｆタウに結合しない。本抗体及び抗原結合断片は、タウペプチドとの特異的結合能を優先
的に有する。一部の実施形態において、本抗体及び抗原結合断片は、タウリンペプチドと
の特異的結合能を優先的に有するが、このペプチドがリン酸化されていない場合にはそれ
に結合しない。特定の実施形態において、本抗タウ抗体は天然に存在しないものである。
好ましくは、本抗体はヒトである。

本発明の抗体及び抗原結合断片は、診断用、予防用及び／又は治療用薬剤として、単独
でも、他の診断用、予防用及び／又は治療用薬剤との組み合わせでも有用である。

一態様において、本発明は、配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６４の重
鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１６６の軽鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１６７の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６８の軽鎖ＣＤＲ３領域の
抗原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明の別の実施形態は、配列番号１６９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７０の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ３領域の抗
原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

一態様において、本発明は、配列番号１７５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７６の重
鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７８の軽鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１７９の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８０の軽鎖ＣＤＲ３領域の
抗原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明の別の実施形態は、配列番号１８１の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８２の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８３の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８４の軽鎖ＣＤＲ３領域の抗
原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明の別の実施形態は、配列番号１８５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８６の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１８８の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８９の軽鎖ＣＤＲ３領域の抗
原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明のさらに別の態様は、配列番号１９０の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９１の重
鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９２の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９３の軽鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１９４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲ３領域の
抗原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明のさらに別の態様は、配列番号１９６の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９７の重
鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９９の軽鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ３領域の
抗原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明のさらに別の態様は、配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重
鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域の
抗原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明のさらなる態様は、配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域の抗
原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明のさらなる態様は、配列番号２１９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２０の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号２２１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域の抗
原結合部位を含む、抗タウ抗体に関する。

本発明はさらに、上記の抗体の抗原結合断片に関する。

別の態様において、本発明は、配列番号８７、９１、９５、９９、１０３、１０７、１
１１、１２３、１２７又は１３１の重鎖可変領域（ＶＨ）の抗原結合部位と、配列番号８
８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１２４、１２８又は１３２の軽鎖可
変領域（ＶＬ）の抗原結合部位とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗原結合断片に関す
る。

さらなる態様において、本発明は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と
配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗
原結合断片に関する。さらなる態様において、本発明は、配列番号９１のアミノ酸配列を
含む重鎖可変領域と配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体
に関し、及びその抗原結合断片に関する。さらなる態様において、本発明は、配列番号９
５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗原結合断片に関する。さらなる態様において、本
発明は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１００のアミノ酸配
列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗原結合断片に関する。さら
なる態様において、本発明は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列
番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗原
結合断片に関する。さらなる態様において、本発明は、配列番号１０７のアミノ酸配列を
含む重鎖可変領域と配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗
体に関し、及びその抗原結合断片に関する。さらなる態様において、本発明は、配列番号
１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可
変領域とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗原結合断片に関する。さらなる態様におい
て、本発明は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１２４のア
ミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体に関し、及びその抗原結合断片に関す
る。さらなる態様において、本発明は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領
域と配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体に関し、及び
その抗原結合断片に関する。さらなる態様において、本発明は、配列番号１３１のアミノ
酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む
抗タウ抗体に関し、及びその抗原結合断片に関する。

一実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。別
の実施形態において、ＩｇＧ１軽鎖定常領域は配列番号８４のアミノ酸配列を含む。

本発明はまた、抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子も提供する。本発明の
別の態様は、本発明の核酸分子を含むベクターである。本発明のさらなる特徴は、本発明
のベクターを含む宿主細胞である。

本発明はまた、抗タウ抗体を作製する方法であって、本発明の宿主細胞を培養するステ
ップと、宿主細胞によって産生された抗体を回収するステップとを含む、方法も提供する
。

本発明はさらに、抗体の機能変異体及び抗体及び／又はその抗原結合断片を含むイムノ
コンジュゲートを提供する。

本発明はさらに、本発明の１つ以上の抗体及び／又はその抗原結合断片を含む組成物及
びキットを提供する。加えて本発明は、抗タウ抗体を用いる診断法、予防法及び治療法を
提供する。予防法及び治療法は、タウオパチー及び／若しくはタウ媒介性疾患若しくは病
態の予防若しくは治療、並びに／又はタウオパチーの１つ以上の症状の改善のため抗タウ
抗体及び／若しくはその抗原結合断片をヒト対象に投与するステップを含む。併用療法の
ため、複数の異なる抗タウ抗体及び／又はその抗原結合断片の組み合わせ及び／又は他の
抗タウ抗体との組み合わせを用いることができる。抗タウ抗体及び／又はその抗原結合断
片を他の予防用又は治療用薬剤と組み合わせて含む組成物も提供される。

一部の実施形態において、本発明の抗体は、可変領域が健常人由来の抗タウ特異的記憶
Ｂ細胞から回収され、且つヒトアルツハイマー脳内のタウ沈着物を検出するが、正常ヒト
脳内のタウは検出しない点でユニークであり、及びリン酸化型依存的であって、タウペプ
チドのｐタウ１９４−２１２（配列番号３１５）又はｐタウ２００−２１７（配列番号３
１９）又はｐタウ５９−７８（配列番号３２３）又はｐタウ４０６−４２９（配列番号３
２６）に結合する。他の実施形態において、本抗体は、可変領域が健常人由来の抗タウ特
異的記憶Ｂ細胞から回収され、且つヒトアルツハイマー脳内のタウ沈着物を検出し、及び
正常な（即ち健常な）ヒト脳内のタウを検出する点でユニークであり、主にリン酸化型非
依存的であって、タウペプチドのタウ２０４−２２１（配列番号３１８）又はタウ２２１
−２５３（配列番号３６７）に結合する。なおも他の実施形態において、本発明の抗体は
、可変領域がアルツハイマー病者由来の抗タウ特異的記憶Ｂ細胞から回収される点でユニ
ークであり、及びリン酸化型依存的であって、リン酸化タウペプチドのｐタウ４０６−４
２９（配列番号３２６）に結合し、非リン酸化タウペプチドのタウ３８９−４４１（配列
番号３２７）に結合しない。

図１ａ−１ｔは、対応するコグネイト及び非コグネイトペプチドに対するＣＢＴＡＵ−７．１、８．１、１６．１、１８．１、２０．１、２２．１、２４．１、２７．１、２８．１、４１．１、４１．２、４２．１、４３．１、４４．１、４５．１、４６．１、４７．１、４７．２、及び４９．１の反応性を示す。 図２ａ−２ｊは、ＥＬＩＳＡによる組換えタウ（ｒＴａｕ）、エンリッチした免疫精製対らせんフィラメント（ｅＰＨＦ）、及び免疫精製対らせんフィラメント（ｉＰＨＦ）に対するＣＢＴＡＵ−７．１、８．１、１６．１、１８．１、２０．１、２２．１、２４．１、２７．１、及び２８．１の反応性を示す。抗タウｍＡｂ、ＡＴ８を、陽性対照として使用した。 ウエスタンブロット分析によるｒｔａｕ、ｅＰＨＦ、及びｉＰＨＦに対するＣＢＴＡＵ−７．１、１８．１、２２．１、２４．１、２７．１、及び２８．１の免疫反応性を示す。 図４ａ−４ｇは、ヒトタウ４４１上の領域４２〜１０３及び２９９〜３６９に対応するオーバーラップペプチドを使用したＣＢＴＡＵ−２７．１、２８．１、４３．１、４６．１、４７．１、４７．２、及び４９．１のエピトープマッピングを示す。 図５ａ−５ｄは、本願に詳述するＣＢＴＡＵ ｍＡｂの免疫組織化学結果を示す。図５ａ〜図５ｂは、それぞれ非ＡＤ対ＡＤ海馬及び皮質組織切片上のＣＢＴＡＵ−７．１、８．１、１６．１、１８．１、２０．１、２２．１、２４．１、２７．１、及び２８．１の免疫染色を示す。図５ｃは、非ＰＳＰ及びＰＳＰ皮質組織切片上のＣＢＴＡＵ−７．１、８．１、１６．１、１８．１、２０．１、２２．１、及び２４．１の免疫染色を示す。図５ｄは、非ＡＤ及びＡＤ皮質組織切片に対するＣＢＴＡＵ−４３．１、４６．１、４７．２、及び４９．１の免疫染色を示す。 図６ａは、非ＡＤ（５４歳男性；臨床症状なし）及びＡＤ（９３歳ヒスパニック系女性）海馬組織切片に対するＣＢＴＡＵ−２８．１及び対照ｍＡｂの免疫反応性を示す。図６ｂは、仔ウシ腸ホスファターゼ処理有り及び無しのＡＤ（９３歳ヒスパニック系女性）海馬組織切片に対するＣＢＴＡＵ−２８．１及び対照ｍＡｂの反応性を示す。 ｉＰＨＦ（免疫精製対らせんフィラメント）及び仔ウシ腸ホスファターゼ処理したｉＰＨＦ試料に対するＣＢＴＡＵ−２８．１及びリン酸タウｍＡｂ、ＡＴ８の反応性を示す。 図８ａ−８ｅは、表３０〜表３４に詳細を載せるタウリンペプチドに対するＣＢＴＡＵ−２７．１、２８．１、４３．１、４６．１、４７．１、４７．２、及び４９．１の反応性を示す。

定義
本発明において使用されるとおりの用語の定義を以下に提供する。

用語「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」又は「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は
、本明細書で使用されるとき、その後に語句「限定なしに」が続くものと見なされる。

用語「タウ」は、本明細書で使用されるとき、具体的に天然の単量体形態のタウを指し
て同義的に使用される。用語「タウ」はまた、タウの他の配座異性体、例えばタウのオリ
ゴマー又は凝集体を略特定して使用される。用語「タウ」はまた、あらゆる種類及び形態
のタウをまとめて指して使用される。選択的スプライシングに起因して、ヒト脳には６つ
のタウアイソフォームが存在する。これらのアイソフォームは、カルボキシ末端部分の３
つ（Ｒ１、Ｒ３及びＲ４）か或いは４つ（Ｒ１〜Ｒ４）のリピート領域との組み合わせに
おける、アミノ末端部分のエクソン２及び３によってコードされる１つ又は２つの２９ア
ミノ酸インサートの有無が異なる。微小管結合ドメインはエクソン１０によってコードさ
れる。成人タウアイソフォームには、最も長い４４１アミノ酸成分（配列番号１）、即ち
４Ｒ／２Ｎ、４１０アミノ酸成分（配列番号２）、即ち３Ｒ／２Ｎ、４１２アミノ酸成分
（配列番号３）、即ち４Ｒ／１Ｎ、３８１アミノ酸成分（配列番号４）、即ち３Ｒ／１Ｎ
及び３８３アミノ酸成分（配列番号５）即ち４Ｒ／０Ｎが含まれる。最も短い３５２アミ
ノ酸アイソフォーム（配列番号６）、即ち３Ｒ／０Ｎは、胎児脳に見られ、従って胎児タ
ウアイソフォームと称される。

「野生型」タウアミノ酸配列は、「タウ４４１」、「４Ｒ／２Ｎ」、「ｈＴａｕ４０」
、「ＴａｕＦ」、「Ｔａｕ−４」又は「完全長タウ」とも称される４４１アミノ酸アイソ
フォーム（配列番号１）によって表される。

本明細書において用語「組換えタウ」は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させて均一又
はほぼ均一になるまで精製したヒト脳の最も長いアイソフォーム（配列番号１）を指す（
Ｂａｒｇｈｏｒｎ Ｓ．，Ｍｅｔｈ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００４ ２９９：３５−５１
）。組換えタウは可溶性であり、リン酸化されていない。

用語「神経原線維濃縮体」（ＮＦＴ）は、最初に認知症患者の脳においてアルツハイマ
ーにより記載された病理学的構造を指す。ＮＦＴは、対らせんフィラメントと呼ばれる順
序正しく並んだサブユニットで構成され、アルツハイマー病の主要なマーカーとして最も
一般的に知られている過剰リン酸化タウタンパク質の凝集体である。

用語「対らせんフィラメントタウ」又は「ＰＨＦタウ」は、本明細書で使用されるとき
、最初に認知症患者の脳においてアルツハイマーにより記載された、神経原線維濃縮体（
ＮＦＴ）と呼ばれる病理学的構造を作り上げる周知のタウ凝集体を指す。その存在はまた
、タウオパチーとして知られる数々の他の疾患にも見られる。

「エンリッチＰＨＦタウ」又は「ｅＰＨＦタウ」は、実施例に詳述するとおり、Ｇｒｅ
ｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄａｖｉｅｓのプロトコルに従って調製される。ＰＨＦタウは、
０．８Ｍ ＮａＣｌを含有する２７，２００×ｇ上清から、それが両性イオン界面活性剤
に不溶性であること（Ｋｏｓｉｋ，Ｋ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（１９８６）ＰＮＡＳ ＵＳ
Ａ ８３，４０４４−４０４８、Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ（１９８６）
Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３７２，８０−８８）及びメルカプトエタノールを利用してエンリ
ッチされる。両性イオン界面活性剤で単離したＰＨＦは、ＳＤＳ不溶性神経原線維濃縮体
を単離する間に失われ得る抗原部位を維持するものと思われ、ＮＦＴのＰＨＦと同様の構
造で、多くの抗原特性を含む。「免疫精製ＰＨＦタウ」又は「ｉＰＨＦタウ」は、抗タウ
モノクローナル抗体でアフィニティー精製される。かかるプロトコルにより、電子顕微鏡
法によるときに古典的な対らせんフィラメント構造を保持した、且つ低濃度ＳＤＳに完全
に可溶性のＰＨＦタウ調製物がもたらされている（Ｊｉｃｈａ，Ｇ．，１９９７，４８（
２）：１２８−３２）。ＰＨＦタウはまた、ヘパリンによるインビトロ重合の誘導によっ
て組換えタウからも形成される（Ｍａｎｄｅｌｋｏｗ，ｅｔ ａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２９９：３５−５１（２００４）。或いは、
ＰＨＦタウは、ＡＤを有する患者の脳から他の様々な方法によって、Ｒｏｓｔａｇｎａ
ａｎｄ Ｇｈｉｓｏ（Ｒｏｓｔａｇｎａ，Ａ．ａｎｄ Ｇｈｉｓｏ，Ｊ．，Ｃｕｒｒ Ｐ
ｒｏｔｏｃ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．Ｓｅｐ ２００９；ＣＨＡＰＴＥＲ：Ｕｎｉｔ−３．
３３３３．）に記載されるなどのプロトコルを用いて単離される。単離されたＰＨＦタウ
は、その純度及び過剰リン酸化状態に関して、ＰＨＦタウと反応することが分かっている
抗体を用いて特徴付けられる。典型的なＰＨＦタウ調製物では、ウエスタンブロットにお
いて約６０、６４、６８及び７２ｋＤａに移動する過剰リン酸化バンド（Ｓｐｉｌｌａｎ
ｔｉｎｉ ａｎｄ Ｇｏｅｄｅｒｔ Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２１：４２８−
３３，１９９８）が、過剰リン酸化ＰＨＦタウに特異的に結合するが脱リン酸化ＰＨＦタ
ウには結合しないＡＴ８抗体によって検出される。

用語「抗体」とは、本明細書で使用されるとき、広義の意味であり、免疫グロブリン又
は抗体分子、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、例えばマウス、ヒト、
ヒト適合化、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体、二重特異性又は多重特異性抗体及び
抗体断片が含まれる。一般に、抗体は、決められた抗原に対して結合特異性を呈するタン
パク質又はペプチド鎖である。抗体構造は周知である。免疫グロブリンは重鎖定常ドメイ
ンアミノ酸配列に応じて５つの主要なクラス、即ち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及
びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４にさらに細分類される。いずれの脊椎動物種
も、その抗体軽鎖はその定常ドメインのアミノ酸配列に基づき２つの明確に異なるタイプ
、即ち、カッパ（Ｋ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てられ得る。

用語「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の一部分を意味する。抗体断片の例として
は、少なくとも２つのインタクトな抗体又はその断片又は（ポリ）ペプチドに抗原結合性
を付与するのに十分な免疫グロブリンの断片を少なくとも含有する（ポリ）ペプチド等か
ら形成されるＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片、ＣＤＲ、抗原結合部位、
重鎖又は軽鎖可変領域、ダイアボディ、トリアボディ、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）及び
多重特異性抗体が挙げられる。抗原結合断片は、抗体のアミノ酸配列の少なくとも２、５
、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００
、１２５、１５０、１７５、２００、又は２５０個の連続アミノ酸残基のアミノ酸配列を
含むペプチド又はポリペプチドを含み得る。抗原結合断片は、合成的に、又はインタクト
な免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的開裂によって作製されてもよく、或いは組換え
ＤＮＡ技法によって遺伝子操作されてもよい。作製方法は当該技術分野において周知であ
り、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄｉ
ｔｅｄ ｂｙ：Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ，Ｌａｎｅ（１９８８），Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（参照により本明細書に援用される）に記載される。抗体又はその
抗原結合断片は１つ以上の結合部位を有し得る。２つ以上の結合部位がある場合、それら
の結合部位は互いに同一であってもよく、又はそれらは異なってもよい。

免疫グロブリン軽鎖又は重鎖可変領域は、「抗原結合部位」によって分断された「フレ
ームワーク」領域からなる。抗原結合部位は、以下のとおり様々な用語を用いて定義付け
られる：（ｉ）相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列多様性に基づく（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂ
ａｔ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１−５０，１９７０）。概して、抗原結合部位
は各可変領域に３つのＣＤＲを有する（重鎖可変領域（ＶＨ）におけるＨＣＤＲ１、ＨＣ
ＤＲ２及びＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）におけるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬ
ＣＤＲ３）（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ ｌｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．公衆衛生局（
Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ），国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ），Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）
。（ｉｉ）用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ
Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ９６：９０１
−１７，１９８７）により定義されるとおり抗体可変ドメインのなかで構造が超可変的な
領域を指す。概して、抗原結合部位は各ＶＨ（Ｈｌ、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ（Ｌｌ、Ｌ２
、Ｌ３）に３つの超可変領域を有する。Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋは、構造的に
保存されたＨＶを「カノニカルな構造」と呼んでいる。ＣＤＲ及びＨＶの付番方式並びに
アノテーションは、近年、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ（Ａｂｈｉｎａ
ｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ４５：３８３２−９，２００
８）によって改訂されている。（ｉｉｉ）抗原結合部位を形成する領域の別の定義が、免
疫グロブリンのＶドメインとＴ細胞受容体との比較に基づきＬｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａ
ｎｃ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖ Ｃａｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ２７：５５−７７，２００３）に
よって提案されている。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（
ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：＿／／ｗｗｗ ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）が、これらの領
域の標準化された付番及び定義を提供している。ＣＤＲ、ＨＶ及びＩＭＧＴ記述の間の対
応は、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．に記載されている。抗原結合部位はまた、特異性決
定残基使用（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｓｉｄｕｅ Ｕｓ
ａｇｅ：ＳＤＲＵ）に基づき記述することもでき（Ａｌｍａｇｒｏ Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃ
ｏｇｎｉｔ １７：１３２−４３，２００４）、ここで特異性決定残基（Ｓｐｅｃｉｆｉ
ｃｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ：ＳＤＲ）とは、抗原接触に直接
関与する免疫グロブリンのアミノ酸残基を指す。

Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．もまた、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列の付番方
式を定義した。当業者は、配列それ自体を超えるいかなる実験データにも頼ることなく、
この「Ｋａｂａｔ付番」方式を任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる
。本明細書で使用されるとき、「Ｋａｂａｔ付番」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，米国
保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉ
ｃｅｓ），「免疫学的に有益なタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」（１９８３）によっ
て規定される付番方式を指す。特記されない限り、本発明の抗体又はその抗原結合断片、
変異体、若しくは誘導体における具体的なアミノ酸残基位置の付番に対する言及はＫａｂ
ａｔ付番方式に従い、しかしながら、これは理論上のものであり、本発明のあらゆる抗体
に等しく適用されるわけではないこともある。例えば、最初のＣＤＲの位置に応じて、続
くＣＤＲがいずれかの方向にシフトし得る。

「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位配列と定義されるも
のを除いた抗体の可変領域内の残りの配列である。抗原結合部位の正確な定義は上記に記
載したとおり様々な記述によって決定し得るため、正確なフレームワーク配列は抗原結合
部位の定義に依存する。

用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、本明細書で使用されるとき、実質的に均一
な抗体の集団から得られる抗体（又は抗体断片）を意味する。モノクローナル抗体は高度
に特異的であり、典型的には単一の抗原決定基を対象とする。

一態様において、本発明の抗体はキメラヒト抗体である。従って、本発明において用語
「ヒトキメラ抗体」、又は「ヒト組換え抗体」などは、その抗原結合特徴がヒト細胞を起
源とする、即ちその抗原結合部位がＢ細胞などのヒト細胞から産生された核酸に由来する
か、又はその部分的なｃＤＮＡがヒト細胞、例えばヒト記憶Ｂ細胞のｍＲＮＡからクロー
ニングされている結合分子を意味して使用される。キメラ抗体は、その抗体に例えば生物
物理学的又は薬物動態学的特性の改良のためアミノ酸置換が作られているとしても、なお
も「ヒト」である。ファージディスプレイ抗体ライブラリ又は異種マウスから人工的に作
成されたヒト様抗体、例えば一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）と比較して、本発明のキメラヒ
ト抗体は、（ｉ）抗原結合領域が代理動物よりむしろヒトの免疫反応を用いて得られる、
即ち抗原結合領域が人体におけるその関連性のあるコンホメーションの天然タウに応答し
て作成されたものであること、及び／又は（ｉｉ）個体を保護したことがあるか、又はタ
ウの存在に関して少なくとも有意であることによって特徴付けられる。

以下及び例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，９３９
，５９８号明細書に記載されるとおりの、ヒト免疫グロブリンライブラリから生じるか、
又は１つ以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな、且つ内因性免疫グロ
ブリンを発現しない動物から生じる抗体は、それらを本発明のヒト由来の抗体と区別する
ため、ヒト様抗体と称される。

例えば、典型的にファージディスプレイから単離される合成及び半合成抗体などのヒト
様抗体の重鎖及び軽鎖の対形成は、必ずしも元のヒトＢ細胞であったような元の対形成を
反映するものではない。従って先行技術で一般に用いられるとおりの組換え発現ライブラ
リから得られるＦａｂ及びｓｃＦｖ断片は、免疫原性及び安定性に対する可能な全ての関
連効果をもって人工的なものと見なされ得る。対照的に、本発明は、選択されたヒト対象
からの親和性成熟抗タウ抗体の抗原結合領域を提供し、これは特定の実施形態において、
共通のＩｇＧ１定常領域を有するキメラとして組換え発現される。

用語「機能変異体」は、本明細書で使用されるとき、基準抗体のヌクレオチド及び／又
はアミノ酸配列と比較して１つ以上のヌクレオチド及び／又はアミノ酸のみが改変されて
いるヌクレオチド及び／又はアミノ酸配列を含む抗体であって、結合パートナー、即ちタ
ウとの特異的結合について基準抗体と競合する能力を有する抗体を指す。換言すれば、基
準抗体のアミノ酸及び／又はヌクレオチド配列の修飾が、そのヌクレオチド配列によって
コードされるか又はそのアミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に重大な影響を与えたり
、又はそれを変化させたりすることはなく、即ち抗体はなおもその標的を特異的に認識し
て結合することが可能である。機能変異体は、ヌクレオチド及びアミノ酸の置換、付加及
び欠失を含め、保存された配列修飾を有し得る。機能変異体の例としては、超可変領域に
おける潜在的な翻訳後修飾による遊離システイン又はアミノ酸のデリスキング（ｄｅ−ｒ
ｉｓｋｉｎｇ）、並びにＦｃＲｎに対するＩｇＧ抗体の結合親和性を増加／低下させ、血
清中半減期を増加／低下させるためのＦｃ操作が挙げられる。機能変異体はまた、ヒトキ
メラ若しくは非キメラＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプとしての、又は異な
る種のキメラ若しくは非キメラアイソタイプとしての抗体の作成であってもよい。機能変
異体はまた、二重特異的抗体の形成を増強するための定常領域の１つ又は複数の突然変異
であってもよい。これらの修飾は、ＰＣＲ、部位特異的突然変異誘発及びランダムＰＣＲ
媒介突然変異誘発などの当該技術分野において公知の標準技法によって導入することがで
き、天然並びに非天然ヌクレオチド及びアミノ酸を含み得る。

用語「特異的に結合する」、又は「特異的に認識する」は、抗体とその結合パートナー
、例えば抗原との相互作用に言及して本明細書で使用されるとき、その相互作用が結合パ
ートナー上の特定のアミノ酸配列又は構造、例えば抗原決定基又はエピトープの存在に依
存することを意味する。換言すれば、結合パートナーが他の分子又は生物の混合物中に存
在する場合であっても、抗体はその結合パートナーを優先的に結合し、又は認識する。結
合は共有結合性又は非共有結合性相互作用又はその両方の組み合わせによって媒介され得
る。さらに言い換えれば、用語「特異的に結合する」又は「特異的に認識する」は、抗体
が、ある抗原決定基又はエピトープとの特異的な免疫反応性を有し、他の抗原決定基又は
エピトープとの免疫反応性を有しないことを意味する。抗原に（免疫）特異的に結合する
抗体は、他のペプチド又はポリペプチドに対し、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ
）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ、又は当該技術分野にお
いて公知の他のアッセイによって決定するときより低い親和性で結合し得る。抗原に特異
的に結合する抗体又はその断片は、同じエピトープを有する関連抗原との交差反応性を有
し得る。好ましくは、抗原に特異的に結合する抗体又はその断片は、他の抗原との交差反
応性を有しない。

用語「エピトープ」は、本明細書で使用されるとき、抗体のＣＤＲループが接触する抗
原の一部分を意味する。「構造的エピトープ」は抗原表面上の約１５〜２２個の接触残基
を含み、まとめて抗体のパラトープと称されるＣＤＲ上の残基の大きい群と接触する多く
のアミノ酸残基が関わる。エピトープとパラトープとの残基間の直接接触は、疎水性表面
の静電力、例えば、水素結合、塩橋、ファンデルワールス力及び形状の相補性によって確
立される。界面はまた、抗原−抗体相互作用の特異性及び親和性に寄与する結合した水分
子又は他の補因子も有する。抗原抗体複合体の結合エネルギーは主にエピトープ−パラト
ープ界面におけるごく一部の接触残基によって媒介される。これらの「エネルギー残基」
は、多くの場合にエピトープ−パラトープ界面の中心に位置して機能的エピトープを作り
上げる。界面の周辺の接触残基は、概して結合エネルギーへの寄与は小さい；それらを置
き換えても、往々にして抗原との結合にはほとんど影響がない。従って、エピトープの結
合又は機能活性には、構造的エピトープの中心に位置し、且つ特異性決定ＣＤＲが接触す
るごく一部のエネルギー残基が関わる。抗原タンパク質上の機能的エピトープの割り当て
は、アラニンスキャン突然変異誘発を含めた幾つかの方法を用いるか、又は抗体で抗原の
結晶構造を解くことによって行い得る。

エピトープは本質的に線状であってもよく、又は不連続エピトープ、例えば立体エピト
ープ（これは線状の一続きのアミノ酸よりむしろ、抗原の非連続アミノ酸の間の空間的関
係によって形成される）であってもよい。立体エピトープは、抗原の折り畳みによって生
じるエピトープを含み、ここでは抗原の線状配列の異なる部分のアミノ酸が三次元空間で
近接するようになる。不連続エピトープについては、１つ以上の線状ペプチドが、例えば
タンパク質配列の異なる領域に分散したいわゆる部分エピトープと低い親和性で結合を達
成することが可能であり得る（Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ １１８（
２）：２１９−２０．）。

本明細書で使用されるとき、用語「親和性」は、個々のエピトープ又は部分エピトープ
と結合分子、例えば免疫グロブリン分子のＣＤＲとの結合の強度の尺度を指す；例えば、
Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，２ｎｄ ｅｄ．（１９８８）ａｔ ｐａｇｅｓ ２７−２８を参照のこと。本明細書で
使用されるとき、用語「アビディティ」は、免疫グロブリンの集団と抗原との間の複合体
の全体的な安定性、即ち、抗原との免疫グロブリン混合物の機能上の組み合わせ強度を指
す；例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｔ ｐａｇｅｓ ２９−３４を参照のこと。アビディティ
は、特異的エピトープに対する集団中の個々の免疫グロブリン分子の親和性と、また免疫
グロブリン及び抗原の結合価との両方に関する。例えば、二価モノクローナル抗体と、ポ
リマーなどの非常に繰り返しの多いエピトープ構造を有する抗原との間の相互作用は、高
アビディティの１つであり得る。抗原に対する抗体の親和性又はアビディティは、任意の
好適な方法を用いて実験的に決定することができる；例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ ｅｔ
ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ”Ｉｎ Ｆ
ｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅ
ｎ Ｐｒｅｓｓ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）、Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，Ｎ Ｙ（１９９２）、及び本明細書に記載される方法を参照のこと。抗原に対する
抗体の親和性を計測する一般的な方法には、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、及び表面プラズモン共
鳴が含まれる。特定の抗体抗原相互作用の親和性計測値は、異なる条件、例えば塩濃度、
ｐＨの下で計測した場合には変わり得る。従って、親和性及び他の抗原結合パラメータ、
例えば、ＫＤ、ＩＣ５０の計測は、好ましくは抗体及び抗原の標準溶液、並びに標準緩衝
液で行われる。

本発明の抗体又はその抗原結合断片若しくは変異体はまた、抗原の存在を特異的に検出
するその能力の観点で記述又は特定し得る。用語「検出する」又は「検出している」は、
標的分子の定量的、半定量的又は定性的計測を含むように最も広義の意味で用いられる。
一態様において、本明細書に記載される抗体は、生体試料中におけるタウポリペプチドの
存在又は非存在を例えば免疫組織化学によって決定し得るに過ぎず、従ってこの方法によ
り決定するとき、試料中においてタウポリペプチドは検出可能であるか、或いは検出不能
である。

本明細書において使用される用語「リン酸化型特異的抗体」又は「リン酸化型依存的抗
体」は、エピトープの少なくとも一部又は全体がリン酸化アミノ酸残基に依存する特異的
抗体を意味する。リン酸化型特異的又はリン酸化型依存的抗体は非リン酸化抗原を検出し
ない。用語「リン酸化型選択的抗体」は、リン酸化残基に優先的に結合し、且つ非リン酸
化抗原と比較してリン酸化抗原に対してより高い親和性を有する特異的抗体を意味する。
用語「非リン酸化型選択的抗体」又は「リン酸化型非依存的」は、非リン酸化残基に優先
的に結合して、且つリン酸化抗原と比較して非リン酸化抗原に対してより高い親和性を有
する特異的抗体を意味する。特定の実施形態において、本発明の抗タウ抗体、又はその抗
原結合断片は、リン酸化型依存的である。特定の他の実施形態において、本発明の抗タウ
抗体、又はその抗原結合断片は、リン酸化型非依存的である。

用語「ポリヌクレオチド」は、単数の核酸並びに複数の核酸を包含することが意図され
、単離核酸分子又はコンストラクト、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）又はプ
ラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、従来のリン酸ジエステル結合
又は非従来的な結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を
含み得る。用語「核酸分子」は、ポリヌクレオチドに存在する任意の１つ以上の核酸セグ
メント、例えばＤＮＡ又はＲＮＡ断片を指す。「単離された」核酸又はポリヌクレオチド
とは、その天然環境から取り出されている核酸分子、ＤＮＡ又はＲＮＡが意図される。例
えば、ベクター中に含まれる抗体をコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的
上、単離されていると見なされる。

特定の実施形態において、ポリヌクレオチド又は核酸はＤＮＡである。ＤＮＡの場合、
ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは、通常、１つ以上のコード領域
に作動可能に会合したプロモーター及び／又は他の転写若しくは翻訳制御エレメントを含
み得る。作動可能な会合は、遺伝子産物、例えばポリペプチドのコード領域が、その遺伝
子産物の発現を調節配列の影響下又は制御下に置くようにして１つ以上の調節配列と会合
している場合である。従って、プロモーター領域は、プロモーターにその核酸の転写を生
じさせる能力があれば、ポリペプチドをコードする核酸と作動可能に会合しているとし得
る。プロモーターは、所定の細胞においてのみＤＮＡの実質的な転写を指図する細胞特異
的プロモーターであり得る。プロモーターに加えて、他の転写制御エレメント、例えばエ
ンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナルがポリヌクレオチドと
作動可能に会合して細胞特異的転写を指図し得る。好適なプロモーター及び他の転写制御
領域は本明細書に開示される。

本明細書で使用されるとき、用語「治療する」又は「治療」は、療法的治療及び予防的
（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置（その目的
は、パーキンソニズム又はアルツハイマー病の発症などの望ましくない生理学的変化又は
障害を予防し又は減速（減少）させることである）の両方を指す。有益な又は所望の臨床
結果としては、限定はされないが、検出可能か又は検出不能かに関わらず、症状の軽減、
疾患の程度の縮小、疾患が安定している（即ち、悪化していない）状態、疾患の進行の遅
延又は減速、病状の改善又は緩和、及び寛解（部分的か又は全面的かに関わらず）が挙げ
られる。「治療」はまた、治療を受けなかった場合に予想される生存と比較したときの生
存の延長も意味し得る。治療を必要とする者には、既に病態又は障害を有する者並びに病
態又は障害に罹り易い者又は病態又は障害の発現を予防すべき者が含まれる。「医薬」は
、本明細書で使用されるとき、望ましくない生理学的変化又は障害の治療に用いられる薬
剤である。

「対象」又は「個体」又は「動物」又は「患者」又は「哺乳動物」は、診断、予後判定
、予防、又は治療が所望される任意の対象、特に哺乳類対象、例えばヒト患者を意味する
。

説明
タウは、複数の周知のアイソフォームを有する豊富にある中枢及び末梢神経系タンパク
質である。ヒトＣＮＳにおいては、選択的スプライシングに起因して３５２〜４４１の範
囲のサイズの６つの主要なタウアイソフォームが存在する（Ｈａｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．
Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ １５：１１２−９，２００９）。これらのアイソフォー
ムは、０〜２個のＮ末端インサート、及び３個又は４個のタンデムに並んだ微小管結合リ
ピートを規定された形式で含む点が互いに異なり、ＯＮ３Ｒ（配列番号６）、１Ｎ３Ｒ（
配列番号４）、２Ｎ３Ｒ（配列番号２）、ＯＮ４Ｒ（配列番号５）、１Ｎ４Ｒ（配列番号
３）及び２Ｎ４Ｒ（配列番号１）と称される。用語「組換えタウ」は、本明細書で使用さ
れるとき、リン酸化及び他の翻訳後修飾を欠いている配列番号１のタウアイソフォームを
指す。タウタンパク質は、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、バキュロウイルス、哺乳類
又は無細胞系において多量に組換え発現させることができる。「組換えタウ」は、標準方
法を用いて組換え発現させて、精製し得る。（Ｂａｒｇｈｏｒｎ，ｅｔ ａｌ ２００４
，Ｍｅｔｈ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３５−５１）。

タウは微小管に結合して細胞を通じたカーゴの輸送を調節し、これは、７９個の潜在的
なセリン（Ｓｅｒ）及びスレオニン（Ｔｈｒ）リン酸化部位の多くで起こるタウリン酸化
によって調節され得るプロセスである。タウは、脳の発達中に高度にリン酸化される。リ
ン酸化の程度は成人期に減少する。リン酸化部位の一部はタウの微小管結合ドメイン内に
位置し、タウリン酸化の増加が微小管の結合を負に調節することが示されている。例えば
、微小管結合モチーフ内又はそれに隣接して位置するＳｅｒ２６２及びＳｅｒ３９６が、
ＡＤ患者の脳における神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）の主要な成分である異常な対らせんフ
ィラメント（ＰＨＦ）のタウタンパク質において過剰リン酸化される。ＰＨＦは、異常に
過剰リン酸化されるタウタンパク質の線維状の凝集体であり、特定の抗タウ抗体で染色し
て光学顕微鏡法によって検出し得る。同じことが、いわゆる直線状タウフィラメントにも
当てはまる。ＰＨＦは、２本のフィラメントが約８０ｎｍの周期性で互いにねじり合わさ
れたものからなるねじれたリボンを形成する。これらの病理学的特徴は、一般に「タウ病
理」、「タウオパトロジー（ｔａｕｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ）」又は「タウ関連病理」と称
される。タウオパチーの神経病理学的特徴のさらに詳細な説明については、Ｌｅｅ ｅｔ
ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４（２００１），１１２１−１１５
９及びＧｏｅｔｚ，Ｂｒａｉｎ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．３５（２００１），２６６−２８６（
その開示内容は参照により本明細書に援用される）を参照のこと。生理学上のタウタンパ
ク質はニューロンの微小管を安定化させる。病的リン酸化が異常なタウ局在化及び凝集を
もたらし、それによって微小管の不安定化及び細胞輸送障害が起こる。凝集したタウはイ
ンビトロで神経毒性を示す（Ｋｈｌｉｓｔｕｎｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２８１（２００６），１２０５−１２１４）。しかしながら、正確な神経毒種は
未だ明らかになっておらず、それらがニューロン死をもたらす機構も不明である。タウの
凝集体は、アルツハイマー病（ＡＤ）、前頭側頭型認知症、核上性麻痺、ピック病、嗜銀
顆粒性疾患（ＡＧＤ）、皮質基底核変性症、ＦＴＤＰ−１７、パーキンソン病、ボクサー
痴呆などの多くのタウオパチーにおける神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）の主要な成分として
観察することができる（Ｇｅｎｄｒｏｎ ａｎｄ Ｐｅｔｒｕｃｅｌｌｉ，Ｍｏｌ．Ｎｅ
ｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ．４：１３（２００９）にレビューされている）。これらの観察に
加えて、濃縮体の形成がない場合であってもタウ媒介性ニューロン死が起こり得るという
エビデンスが出現している。ＣＳＦには可溶性リン酸タウ種が存在する（Ａｌｕｉｓｅ
ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７８２（２００８），５
４９−５５８）。タウ凝集体は誤って折り畳まれた状態を細胞の外部から内部へと伝達し
、共培養細胞間で転移させ得る（Ｆｒｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２８４（２００９），１２８４５−１２８５２）。

神経変性タウオパチーにおける病変に加えて、虚血／再灌流中及びその後並びに震盪性
頭部外傷後のタウリン酸化において観察される変化は、虚血性脳卒中などの神経血管障害
の神経損傷及び臨床病態生理（Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１０９（２０１０），２６−２９）、並びに外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を有する震盪を
起こした運動選手及び退役軍人におけるタウオパチーである慢性外傷性脳症に見られるタ
ウの変化においてタウが重要な役割を担うことを示唆している。

本発明はモノクローナル抗体を提供し、ここで本抗体は、ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着
物に結合する。

特定の実施形態において、本抗体は、ａ）ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物に結合し、且
つｂ）正常脳組織内のタウに結合しない。

特定の実施形態において、本抗体は、ａ）ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物に結合し、ｂ
）正常ヒト脳組織内のタウに結合せず、且つｃ）進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）脳組織内の
タウ沈着物に結合しない。

特定の実施形態において、本抗体は、ａ）ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物と免疫複合体
を形成し、且つｂ）正常ヒト脳組織内のタウと免疫複合体を形成しない。

特定の実施形態において、本抗体はキメラ抗体である。

特定の実施形態において、本抗体は、タウに特異的に結合するヒト抗体由来の抗原結合
可変領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常領域とを含むキメラ抗体であり、ここでこのキメラ
抗体はヒト抗体と異なる。

特定の実施形態において、本抗体は、タウに特異的に結合するヒト抗体由来の抗原結合
可変領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常領域とを含むキメラ抗体であり、ここでこのキメラ
抗体の定常領域はヒト抗体の定常領域と異なる。

特定の実施形態において、本抗体は、タウに特異的に結合する天然に存在するヒト抗原
結合可変領域とヒトＩｇＧ１抗体の組換え定常領域とを含むキメラ抗体である。

特定の実施形態において、本抗体は、ヒト抗体由来の天然に存在するヒト軽鎖及び重鎖
可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である。

特定の実施形態において、本抗体は、天然に存在するヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変
領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である。

特定の実施形態において、本抗体は、ヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域と組換えヒ
トＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である。

特定の実施形態において、本抗体は天然に存在しないものである。

本明細書に開示されるヒト抗タウ抗体は、タウ及びそのエピトープ並びにタウ及びその
エピトープの種々のコンホメーションに特異的に結合する。例えば、本明細書には、病的
に修飾されたタウアイソフォーム及びタウ凝集体に特異的に結合する抗体が開示される。
一例において、本明細書に開示されるタウ抗体はタウ又はそのエピトープに結合し、他の
タンパク質に対してはバックグラウンドの約３倍を上回る結合を示すことはない。タウ配
座異性体に「特異的に結合する」又は「選択的に結合する」抗体とは、タウの全てのコン
ホメーションに結合するわけではない抗体、即ち組換えタウなどの少なくとも１つの他の
タウ配座異性体には結合しない抗体を指す。

本発明のキメラ抗タウモノクローナル抗体の可変ドメインは、タウ特異的免疫反応を呈
する健常ヒト対象のプール又はアルツハイマー病に罹患している対象に由来していてもよ
い。本発明のタウ抗体はまた、それらの抗体抗原結合領域が実に対象によって発現された
ものであって、例えばこれまでヒト様抗体を提供しようとする際の１つの一般的方法に相
当した、ヒト免疫グロブリンを発現するファージライブラリから単離されたものではない
ことを強調するため、「ヒト由来抗体」とも呼ばれ得る。例えば、本発明の抗体は、それ
らがヒト由来抗体である点でｍＡｂ ＡＴ８、ＭＣ１、及びＡＴ１００とは異なる。

本発明の抗タウ抗体は、ＥＬＩＳＡにおける組換えタウに対するその結合特性によって
特徴付けることができる。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から精製された組換えタウは、その親
水特性に起因して高可溶性である。この組換えタウは、タウオパチーに見られるタウに特
有のＳｅｒ、Ｔｈｒ及びＴｙｒ残基のリン酸化を欠いている。本発明の一実施形態におい
て、本明細書に開示される抗タウモノクローナル抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて組換えタウ
に特異的に結合しない。本発明の別の実施形態において、本抗タウモノクローナル抗体は
ＥＬＩＳＡにおいて組換えタウに結合する。

ある実施形態では、本発明の抗タウ抗体は、配列番号３１５又は配列番号３６５のリン
酸化タウペプチドに特異的に結合することが示されている。別の実施形態において、本発
明の抗タウ抗体は、配列番号３１７のリン酸化タウペプチド及びタウ配列番号３１８の非
リン酸化ペプチド又は配列番号３２９のリン酸化ペプチド及び配列番号３６７の非リン酸
化タウペプチドの両方に結合することが示されている。

特定の実施形態において本明細書に開示される抗タウ抗体は、ペプチドＥＬＩＳＡにお
いてタウペプチドに特異的に結合する。一実施形態において、抗タウ抗体は、タウ４４１
のアミノ酸２０４〜２２１に対応するタウペプチド、例えばＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰ
ＴＰＰＴＲ（配列番号３１８）に結合する。別の実施形態において、抗タウ抗体は、タウ
４４１のアミノ酸２２１〜２５３に対応するタウペプチド、例えばＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳ
ＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳ
ＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬ（配列番号３６７）に結合する。本発明の抗タウ
抗体は、種々のタウペプチドに結合することが報告されている以前開示されたヒト抗タウ
モノクローナル抗体（米国特許出願公開第２０１３０２９５０２１号明細書）とは異なる
。モノクローナル抗体ＮＩ−１０５．４Ｅ４、ＮＩ−１０５．４Ａ３及びＮＩ−１０５．
４Ｅ４は、タウ４４１のそれぞれペプチド３２９〜３５１＋３８７〜３９７、３３７〜３
４３、及び３５〜４９に結合する。

本発明の抗タウ抗体は、ＥＬＩＳＡにおけるＰＨＦタウに対するその結合特性によって
特徴付けることができる。抗ＰＨＦタウ抗体クローンＡＴ８はＰＨＦタウに結合し、アル
ツハイマー患者からの試料中の神経原線維濃縮体におけるＰＨＦタウを検出するため広範
に用いられている。ＡＴ８はリン酸化型特異的モノクローナル抗体であり、ＰＨＦタウの
リン酸化したＳｅｒ２０２及びＴｈｒ２０５に結合し、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、イム
ノブロット、ウエスタンブロット、及び関連する適用における使用について十分に発表さ
れている。クローンＡＴ８はＥＬＩＳＡによるとアルツハイマー病タウ、並びにＰＨＦタ
ウを認識し、且つ健常人由来の非リン酸化タウ又は組換えタウに結合しない。一例におい
て、本発明の抗タウ抗体はＥＬＩＳＡによるとＰＨＦタウに結合しない。別の例において
、本発明の抗タウ抗体はＥＬＩＳＡによるとＰＨＦタウに結合する。

本発明の抗タウ抗体は、ウエスタンブロットによるＰＨＦタウ及び組換えタウに対する
その結合特性によって特徴付けることができる。神経変性障害では、タウタンパク質が凝
集してＰＨＦとなるにおいて幾つかの機構（リン酸化、ユビキチン化、酸化、糖化）が関
わる。これらの病的タウタンパク質は、ウエスタンブロッティングによって５５〜６９ｋ
Ｄａの３つの主バンド、及び７４ｋＤａの副バンドとして可視化される。タウ５５は最も
短いアイソフォーム（配列番号６）のリン酸化によって生じ、タウ６４は１つのカセット
エクソンを含むタウ変異体（配列番号４及び／又は配列番号５）のリン酸化によって生じ
、タウ６９は２つのカセットエクソンを含むタウ変異体（配列番号２及び／又は配列番号
３）のリン酸化によって生じる。最も長いタウアイソフォーム（配列番号１）のリン酸化
は、さらなる過剰リン酸化タウ７４変異体の形成を誘導する。特定の実施形態において、
抗タウ抗体はウエスタン分析によるとＰＨＦタウに結合する。

抗タウ抗体は、正常脳又はＡＤ脳由来の組織切片の免疫組織化学（ＩＨＣ）において利
用し、及びそれによって特徴付けることができる。リン酸タウ抗体は、詳細には、高い感
度及び特異性で神経原線維病理を強調する一方、正常な健常脳内のタウの検出は観察され
ない。臨床病理学的研究では、リン酸タウ沈着又は蓄積がアミロイド−β蓄積と比較して
臨床徴候に一層密接に対応し、経嗅内野から辺縁野、等皮質野へと段階的に進行するため
ＡＤ病期分類の基礎を成すことが実証されている［Ｒ．Ｊ．Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ，ｅｔ
ａｌ，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（Ｂｅｒｌ）１１１，５０３（２００６）；
Ｈ．Ｂｒａａｋ ａｎｄ Ｅ．Ｂｒａａｋ，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（Ｂｅｒ
ｌ）８２，２３９（１９９１。免疫組織化学で一般的に用いられるタウモノクローナル抗
体には、ＡＴ８（ｐ２０２／ｐ２０５タウ）、ＡＴ１８０（ｐ２３１タウ）、ＡＴ２７０
（ｐ１８１タウ）、ＡＴ１００（ｐＴ２１２及びＳ２１４）、及びＭＣ−１が含まれる（
Ｍｅｒｃｋｅｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ，１９９２ Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏ ８４：
２６５−２７２、Ｚｈｅｎｇ−Ｆｉｓｃｈｈｏｆｅｒ １９９８ Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ ２５２：５４２−５５２、Ｇｏｅｄｅｒｔ Ｍ，ｅｔ．Ａｌ．１９９４ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ Ｊ ３０１：８７１−８７７）。一実施形態において、本発明の抗タウモノク
ローナル抗体は正常な（即ち健常な）ヒト脳組織内のタウを検出し、且つヒトＡＤ脳組織
内のタウ沈着物を検出する。別の例において、本発明の抗タウ抗体はヒトＡＤ脳内のタウ
沈着物を検出するが、正常ヒト脳内のタウは検出しない。

本発明の抗タウ抗体はまた、進行性核上性麻痺、ピック病などを含めたさらなるタウオ
パチーの免疫組織化学において利用し、及びそれによって特徴付けることもできる。ＰＳ
Ｐにおける病的線維状タウ封入体は、異常にリン酸化されたタウタンパク質で構成される
が、異常な４Ｒタウアイソフォームの優先的な蓄積がある。Ａｌｚ５０、Ｔａｕ−２、Ｔ
４６、ＰＨＦ−１、ＰＨＦ−６、１２Ｅ８、ＰＨＦ−１、ＲＤ４及びＡＴ８を含む抗タウ
モノクローナル抗体のパネルを使用してＰＳＰ沈着物が特徴付けられている（Ｊ Ｎｅｕ
ｒｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ．１９９８（６）：５８８−６０１．）。これ
らのモノクローナル抗体はいずれも神経細胞内封入体及びグリア封入体を染色したが、し
かしながら、１２Ｅ８及びＰＨＦ−６は染色強度が弱かった。これらの抗体はタウの種々
のエピトープ（例えば、リン酸化型特異的、アイソフォーム特異的）を検出し、またＡＤ
脳内のタウ沈着物も検出する。３リピートタウアイソフォームを特異的に検出する抗タウ
モノクローナル抗体、ＲＤ３は、ＰＳＰのＩＨＣ検出については限られたものしか示さな
いが、ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物を強く染色する。この抗体によるＰＳＰの検出が限
られている原因は、ＰＳＰにおいて３リピートタウアイソフォームのレベルが低いことに
ある（Ｄｅ Ｓｉｌｖａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ ａｎｄ Ａｐｐｌ Ｎ
ｅｕｒｏｂｉｏ（２００３）２９（３）２８８−３０２）。一実施形態において、本発明
の抗タウ抗体はヒトＡＤ脳内のタウ沈着物を検出するが、正常ヒト脳内のタウを検出せず
、且つヒトＰＳＰ脳内のタウ沈着物を検出しない。

特定の実施形態において、本抗体は、ａ）配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番
号１６４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ３領域、ｂ）配列番号１
６９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７１の重
鎖ＣＤＲ３領域、ｃ）配列番号１７５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７６の重鎖ＣＤＲ
２領域、及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ３領域、ｄ）配列番号１８１の重鎖ＣＤＲ１領
域、配列番号１８２の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８３の重鎖ＣＤＲ３領域、ｅ）
配列番号１８５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号
１８７の重鎖ＣＤＲ３領域、ｆ）配列番号１９０の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９１の
重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９２の重鎖ＣＤＲ３領域、ｇ）配列番号１９６の重鎖
ＣＤＲ１領域、配列番号１９７の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ３
領域、ｈ）配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及
び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、ｉ）配列番号２１９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番
号２２０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２２１の重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖を含む
。特定の実施形態において、本抗体は、ａ）配列番号１６６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番
号１６７の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６８の軽鎖ＣＤＲ３領域、ｂ）配列番号１
７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７４の軽
鎖ＣＤＲ３領域、ｃ）配列番号１７８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７９の軽鎖ＣＤＲ
２領域、及び配列番号１８０の軽鎖ＣＤＲ３領域、ｄ）配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１領
域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８４の軽鎖ＣＤＲ３領域、ｅ）
配列番号１８８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号
１８９の軽鎖ＣＤＲ３領域、ｆ）配列番号１９３の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９４の
軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲ３領域、ｇ）配列番号１９９の軽鎖
ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ３
領域、ｈ）配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及
び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域、及びｉ）配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配
列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖を
含む。

特定の実施形態において、本抗体は、ａ）配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番
号１６４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１６６
の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６７の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６８の軽鎖Ｃ
ＤＲ３領域を含む抗体、ｂ）配列番号１６９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７０の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ３領域を含
む抗体、ｃ）配列番号１７５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７６の重鎖ＣＤＲ２領域、
及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号
１７９の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８０の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｄ）配
列番号１８１の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８２の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１
８３の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖Ｃ
ＤＲ２領域、及び配列番号１８４の軽鎖ＣＤＲ３領域、ｅ）配列番号１８５の重鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１８６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８７の重鎖ＣＤＲ３領域、
配列番号１８８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号
１８９の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｆ）配列番号１９０の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番
号１９１の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９２の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９３
の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９５の軽鎖Ｃ
ＤＲ３領域を含む抗体、ｇ）配列番号１９６の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９７の重鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９９の軽鎖ＣＤＲ１
領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ３領域を含
む抗体、ｈ）配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、
及び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号
１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｉ）配
列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２
１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７４の軽鎖Ｃ
ＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｊ）配列番号２１９の
重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２２１の重鎖ＣＤ
Ｒ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及
び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体からなる群から選択される。

特定の実施形態において、本抗体は、配列番号８７、９１、９５、９９、１０３、１０
７、１１１、１２３、１２７及び１３１のアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖可
変領域を含む。特定の実施形態において、本抗体は、配列番号８８、９２、９６、１００
、１０４、１０８、１１２、１２４、１２８、１３２のアミノ酸配列からなる群から選択
される軽鎖可変領域を含む。

特定の実施形態において、上述の抗体の抗原結合断片が提供される。これらの抗原結合
断片は、好ましくは同じエピトープに結合する。本発明の抗タウモノクローナル抗体及び
抗原結合断片は、既知のヒト抗タウ抗体、例えば、ＮＩ−１０５．４Ｅ４、及びＮＩ−１
０５．４Ａ３などのエピトープと比較したときに異なるエピトープに結合する。異なるエ
ピトープに結合するとは、即ち、既知の抗体と比較したときにその抗体が異なる必須アミ
ノ酸残基に結合することを意味する。

特定の実施形態において、本抗体は、タウタンパク質に結合する他の抗体と併用すると
きに相乗的に作用する。本明細書で使用されるとき、用語「相乗的」は、抗体又は抗原結
合断片を併用したときの組み合わせの効果が、それらを個々に使用したときの相加効果よ
り高いことを意味する。相乗作用の計算方法には、コンビネーションインデックスを用い
る。コンビネーションインデックス（ＣＩ）の概念は、Ｃｈｏｕ ａｎｄ Ｔａｌａｌａ
ｙ（Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．，２２：２７−５５，１９８４）によって記載
されている。

特定の実施形態において、本抗体及び抗原結合断片は医薬として使用されるものであり
、好ましくは神経変性疾患の診断的、療法的及び／又は予防的治療において使用されるも
のである。本発明のヒト抗タウ抗体又はＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、ｓｃＦｖ断片を含めた
その断片、又は本発明の抗体の抗原結合部位を含む抗体を使用して、ＡＤ並びに任意の他
のタウオパチー又はタウが過剰発現し得る他のタウ関連病理に罹患している患者などの、
脳内におけるタウの蓄積又は病的タウ又はタウ凝集が関わる神経変性疾患を有する患者に
おける症状を治療し、低減し、又は予防することができる。いかなる特定の理論によって
も拘束されることは望まないが、本発明の抗体は、病的タウ又はタウ凝集、従って脳内の
ＰＨＦタウの量を低減し、又は消失させることにより、その有益な効果を発揮し得る。本
発明の抗体を使用して、任意の分類に属する動物患者を治療し得る。かかる動物の例とし
ては、哺乳動物、例えば、ヒト、げっ歯類、イヌ、ネコ及び家畜が挙げられる。例えば、
本発明の抗体は、ＡＤの治療用医薬の調製において有用であり、ここでこの医薬は、本明
細書で定義される投薬量で投与するように調製される。

本発明の別の実施形態は、それを必要としている患者におけるタウの凝集を低減する方
法であり、この方法は、タウの凝集を低減するのに十分な時間にわたって本発明の単離抗
体の治療有効量を患者に投与するステップを含む。本発明の別の実施形態は、患者におけ
るタウの凝集が関わる神経変性疾患の症状を治療又は低減する方法であり、この方法は、
神経変性疾患の症状を治療又は低減するのに十分な時間にわたって本発明の単離抗体の治
療有効量を患者に投与するステップを含む。本発明の別の実施形態は、それを必要として
いる患者においてタウを低減する方法であり、この方法は、タウを低減するのに十分な時
間にわたって本発明の単離抗体の治療有効量を患者に投与するステップを含む。

上記の実施形態のいずれにおいても、タウの凝集が関わる神経変性疾患はタウオパチー
である。本明細書で使用されるとき、「タウオパチー」は、脳内におけるタウの病的な凝
集が関わる任意の神経変性疾患を包含する。家族性及び孤発性ＡＤに加えて、他の例示的
なタウオパチーは、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（Ｆ
ＴＤＰ−１７）、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠
症、神経原線維変化型老年期認知症（ｔａｎｇｌｅ ｏｎｌｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、石
灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキ
ンソニズム認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病
、ハレルフォルデン・スパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルトヤコブ病、多系統萎縮
症、ニーマン・ピック病Ｃ型、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、亜急性
硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロ
ン疾患、脳炎後パーキンソニズム、及び慢性外傷性脳症、例えば、拳闘家認知症（ボクサ
ー病）である（Ｍｏｒｒｉｓ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ ７０：４１０−２６，２０１
１）。

タウオパチー関連行動表現型としては、認知障害、初期人格変化及び脱抑制、無関心、
無為症、無言症、失行症、保続症、常同運動／行動、口愛過度、無秩序、逐次的な課題を
計画したり又は取りまとめたりできないこと、利己的／冷淡、***的特性、共感の欠如
、もたつき、高頻度の錯語的誤りを伴うが理解力は比較的保たれている失文法発話、理解
力低下及び喚語困難、緩徐進行性歩行不安定性、後方突進、すくみ、頻繁な転倒、レボド
パ不応性軸性硬直、核上性注視麻痺、矩形波眼球運動（ｓｑｕａｒｅ ｗａｖｅ ｊｅｒ
ｋｓ）、緩徐な垂直性サッケード、仮性球麻痺、四肢の失行、ジストニー、皮質性感覚消
失、及び振戦が挙げられる。

治療に適した患者には、ＡＤ又は他のタウオパチーのリスクがある無症候者、並びに現
在症状を示している患者が含まれる。治療に適した患者には、ＡＤの家族歴又はゲノムに
おける遺伝的リスク要因の存在など、ＡＤの既知の遺伝的リスクを有する者が含まれる。
例示的リスク要因は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の、特に７１７位並びに６
７０位及び６７１位における突然変異（それぞれハーディ型及びスウェーデン型突然変異
）である。他のリスク要因は、プレセニリン遺伝子ＰＳ１及びＰＳ２、及びＡｐｏＥ４の
突然変異、高コレステロール血症又はアテローム性動脈硬化症の家族歴である。現在ＡＤ
に罹患している者は、上記に記載したリスク要因の存在による特徴的な認知症から認める
ことができる。加えて、ＡＤを有する者を特定するための幾つもの診断検査が利用可能で
ある。それらには、脳脊髄液タウ及びＡβ４２レベルの計測が含まれる。タウレベルの上
昇及びＡΒ４２レベルの低下はＡＤの存在を意味する。ＡＤ罹患者はまた、アルツハイマ
ー病・関連障害協会（ＡＤ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｓｓｏｃ
ｉａｔｉｏｎ）の基準によって診断することもできる。

本発明の別の実施形態は、それを必要としている患者においてタウを低減する方法であ
り、この方法は、タウを低減するのに十分な時間にわたって本発明の単離抗タウ抗体の治
療有効量を患者に投与するステップを含む。治療に適した患者は、タウの過剰発現に関連
する病気に罹患していてもよい。一部の突然変異は、イントロン１０における突然変異を
含め、機能的に正常な４リピートタウタンパク質アイソフォームのレベル増加を誘導し、
それにより神経変性がもたらされる。トランスジェニックマウスの特にニューロンにおけ
る４リピートヒトタウタンパク質アイソフォームの過剰発現は、脳及び脊髄における軸索
変性の発生を引き起こした。このモデルでは、神経フィラメント、ミトコンドリア、及び
小胞の蓄積による軸索の膨張が記録された。軸索障害及び付随する感覚運動能力の機能不
全はトランス遺伝子投薬量と関係があった。これらの知見から、神経細胞内の神経原線維
濃縮体の形成がなくとも、単に４リピートタウタンパク質アイソフォームの濃度が増加す
るのみで中枢神経系のニューロンに傷害を与えるには十分であることが分かった（Ｓｐｉ
ｔｔａｅｌｓ，ｅｔ ａｌ，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １５５（６）２１５３−２
１６５，１９９９）。

投与／医薬組成物
本発明の抗タウ抗体は、タウの蓄積、及び／又はタウの病的凝集が関わる神経変性疾患
、例えばＡＤ又は他のタウオパチー又はタウ関連の病気を治療又は予防するための治療用
薬剤及び予防用薬剤のいずれとしても好適である。無症候患者では、治療は任意の年齢（
例えば、約１０歳、１５歳、２０歳、２５歳、３０歳）で開始し得る。しかしながら、通
常は、患者が約４０歳、５０歳、６０歳、又は７０歳に達するまで治療を開始する必要は
ない。治療は、典型的には、ある期間にわたる複数回の投薬を伴う。治療は、時間の経過
に伴う治療用薬剤に対する抗体又は活性化Ｔ細胞若しくはＢ細胞応答をアッセイすること
によってモニタし得る。応答が低下する場合、ブースター投薬が適応となる。

予防的適用においては、医薬組成物又は医薬は、ＡＤ又はタウが関わる他の病気に罹り
易い、又はその他そのリスクがある患者に対し、疾患の生化学的、組織学的な及び／又は
行動上の症状、その合併症及び疾患の発症中に現れる中間的な病的表現型を含めた疾患の
リスクを解消又は低減し、その重症度を軽減し、又はその発生を遅延させるのに十分な量
で投与される。療法的適用においては、組成物又は医薬は、かかる疾患の疑いがあるか、
又は既にそれに罹患している患者に対し、疾患の症状（生化学的、組織学的な及び／又は
行動上の）のいずれかを低減し、抑え、又は遅延させるのに十分な量で投与される。療法
薬の投与により、特徴的なアルツハイマー病理を未だ発症していない患者における軽度認
知障害が低減され、又は消失し得る。療法的又は予防的治療を達成するのに十分な量は、
療法上又は予防上有効な用量として定義される。予防的及び療法的レジームの両方におい
て、組成物又は医薬は、通常、十分な免疫応答が得られるまで数回の投薬で投与される。

本発明の抗タウ抗体又はその断片は、関連する神経変性疾患の治療に有効な他の薬剤と
併用して投与され得る。ＡＤの場合、本発明の抗体は、アミロイドβ（Ａβ）の沈着を低
減し又は予防する薬剤と併用して投与され得る。ＰＨＦタウ及びＡβ病理は相乗的である
可能性がある。従って、ＰＨＦタウ及びＡβ関連病理の両方の除去を同時に標的化する併
用療法は、各々を個別に標的化するより有効であり得る。

パーキンソン病及び関連する神経変性疾患の場合、凝集形態のａ−シヌクレインタンパ
ク質を除去するための免疫調節もまた、新たに現れつつある療法である。タウ及びα−シ
ヌクレインタンパク質の両方の除去を同時に標的化する併用療法は、いずれかのタンパク
質を個別に標的化するより有効であり得る。本発明の方法において、タウオパチーの症状
の治療又は改善における抗体の「治療有効量」は、標準的な研究技術によって決定し得る
。例えば、抗体の投薬量は、当該技術分野において周知の関連性のある動物モデルにその
薬剤を投与することによって決定し得る。

加えて、任意選択でインビトロアッセイを用いて最適投薬量範囲の特定を補助し得る。
特定の有効用量の選択は、当業者が（例えば臨床試験によって）幾つかの要因を考慮して
決定し得る。かかる要因には、治療又は予防しようとする疾患、関わる症状、患者の体重
、患者の免疫状態及び当業者に公知の他の要因が含まれる。製剤中に用いられる正確な用
量はまた、投与経路、及び疾患の重症度にも依存することになり、医師の判断及び各患者
の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系か
ら得られる用量反応曲線から推定することができる。本発明の抗体の療法的使用に対する
投与方法は、その薬剤を宿主に送達する任意の好適な経路であってよい。これらの抗体の
医薬組成物は、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内又は
頭蓋内投与に有用であり、或いは脳又は脊椎の脳脊髄液に投与することもできる。

本発明の抗体は、薬学的に許容可能な担体中に有効量の抗体を活性成分として含有する
医薬組成物として調製し得る。用語「担体」は、抗体がそれと共に投与される希釈剤、補
助剤、賦形剤、又は媒体を指す。かかる医薬媒体は、液体、例えば水及び油、例えば、石
油、動物、植物又は合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油な
どであり得る。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを使用することができ
る。これらの溶液は無菌であり、粒子状物質を略含まない。溶液は従来の周知の滅菌技術
（例えばろ過）によって滅菌し得る。組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘
剤、潤滑剤及び着色剤等、生理的条件を近似するため必要に応じて薬学的に許容可能な補
助物質を含有し得る。かかる医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は幅広く異なり、即ち、重
量基準で約０．５％未満、通常は約１％又は少なくとも約１％から１５又は２０％に上る
まで異なり得ると共に、主として、選択された特定の投与方法に従い、必要な用量、流体
の容積、粘度等に基づき選択されることになる。

治療は、単回投与スケジュールで与えられても、又は複数回投与スケジュールとして与
えられてもよく、複数回投与スケジュールでは、主要な治療コースは１〜１０回の別個の
投与と、続いて応答の維持及び／又は強化に必要な時間間隔後に、例えば２回目の用量に
ついて１〜４ヵ月の時点で与えられる他の投与、及び必要であれば数ヵ月後のその後の投
与とを含むものであり得る。好適な治療スケジュールの例としては、以下が挙げられる：
（ｉ）０、１ヵ月及び６ヵ月、（ｉｉ）０、７日及び１ヵ月、（ｉｉｉ）０及び１ヵ月、
（ｉｖ）０及び６ヵ月、又は疾患症状を低減し、若しくは疾患の重症度を低減するものと
予想される所望の応答を誘発するのに十分な他のスケジュール。従って、筋肉内注射用の
本発明の医薬組成物は、１ｍｌ滅菌緩衝用水と、約１ｎｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｎｇ〜
約３０ｍｇ又は約５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明の抗体とを含有するように調製し得る。同
様に、静脈内注入用の本発明の医薬組成物は、約２５０ｍｌの滅菌リンゲル溶液と、約１
ｍｇ〜約３０ｍｇ又は約５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明の抗体とを含有するように構成し得
る。非経口的に投与可能な組成物を調製するための実際の方法は周知であり、例えば、“
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ”，１５ｔｈ
ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにさ
らに詳細に記載される。

本発明の抗体は、保存のため凍結乾燥し、使用前に好適な担体中に再構成することがで
きる。この技法は、抗体及び他のタンパク質製剤で有効であることが示されており、当該
技術分野において公知の凍結乾燥及び再構成技法を用いることができる。

診断方法及びキット
本発明の抗体は、対象におけるＡＤ又は他のタウオパチーを診断する方法において用い
られ得る。この方法には、本発明の抗体又はその断片などの診断用試薬を使用してタウの
存在を対象において検出するステップが関わる。タウは、対象からの生体試料（例えば、
血液、尿、脳脊髄液）において、その生体試料を診断用抗体試薬と接触させて、対象から
の試料中のＰＨＦタウに対する診断用抗体試薬の結合を検出することにより検出し得る。
検出を実施するためのアッセイには、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、ウエスタンブロット、
又は生体内イメージングなどの周知の方法が含まれる。例示的な診断用抗体は、本発明の
抗体ＣＢＴＡＵ−７．１、ＣＢＴＡＵ−８．１、ＣＢＴＡＵ−１６．１、ＣＢＴＡＵ−１
８．１、ＣＢＴＡＵ−２０．１、ＣＢＴＡＵ−２２．１、ＣＢＴＡＵ−２４．１、ＣＢＴ
ＡＵ−４１．１、ＣＢＴＡＵ−４１．２及びＣＢＴＡＵ−４２．１であり、ＩｇＧ ｌ、
Ｋ型のものである。

診断用抗体又は同様の試薬は、静脈内注射によって患者の体内に投与してもよく、或い
は上記に例示したとおりの、その薬剤を宿主に送達する任意の好適な経路によって脳に直
接投与してもよい。抗体の投薬量は、治療方法の投薬量と同じ範囲内でなければならない
。典型的には、抗体は標識されるが、方法によっては、タウに対して親和性を有する一次
抗体は標識されず、一次抗体に結合させるため二次標識剤が使用される。標識の選択は検
出手段に依存する。例えば、光学的検出には蛍光標識が好適である。外科的介入のない断
層撮影法による検出には、常磁性標識の使用が好適である。ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを使用
して放射性標識を検出することもできる。

診断は、対象からの試料又は対象における標識されたタウの数、サイズ、及び／又は強
度、タウの蓄積、タウの凝集、及び／又は神経原線維濃縮体を対応するベースライン値と
比較することによって行われる。ベースライン値は、無疾患者の集団の平均レベルに相当
し得る。ベースライン値はまた、同じ対象で測定された以前のレベルに相当してもよい。

上記に記載する診断方法はまた、対象における治療前、治療中又は治療後のタウの存在
を検出することにより、療法に対する対象の反応のモニタリングにも用いることができる
。ベースラインと比較した値の変化が治療反応性を示す。値はまた、病的タウが脳から除
去されていくにつれ、生体液中で一時的に変化することもある。

本発明は、さらに、上述の診断及びモニタリング方法を実施するためのキットに関する
。典型的には、かかるキットは、本発明の抗体などの診断用試薬と、任意選択で検出可能
標識とを含む。診断用抗体それ自体が、直接検出可能な、又は二次的反応（例えば、スト
レプトアビジンとの反応）を介して検出可能な検出可能標識（例えば、蛍光分子、ビオチ
ン等）を含んでもよい。或いは、検出可能標識を含有する第２の試薬を利用してもよく、
ここでこの第２の試薬は一次抗体に対して結合特異性を有する。生体試料中のタウの計測
に好適な診断キットにおいて、キットの抗体は、マイクロタイターディッシュのウェルな
どの固相に予め結合して供給されてもよい。

本願全体を通じて引用される全ての引用文献（著作文献、交付済み特許、特許出願公開
、及び同時係属中の特許出願を含む）の内容は、本明細書によって参照により明示的に援
用される。

実施例１
タウペプチド設計及び標識
微小管からの遊離をもたらし、且つ解重合につながるタウタンパク質の過剰リン酸化は
、アルツハイマー病（ＡＤ）及び他の関連タウオパチーに現れる病理学的特徴である。遊
離タウと微小管結合タウとの平衡が前者に有利となるようにシフトするにつれ、会合して
いないタウタンパク質が誤って折り畳まれて凝集した状態で蓄積すると考えられている。
疾患過程においてタウは種々のコンホメーションをとり、可溶性ダイマー及びオリゴマー
形態から高次の不溶性凝集体、例えば対らせんフィラメント（ＰＨＦ）及び神経原線維濃
縮体（ＮＦＴ）に進行すると考えられている。しかしながら、病理に寄与する、従って治
療の標的とするのに最適なタウの正確な形態は未だ分かっていない。結果的に、疾患を促
進するタウを標的化しようとする試みは、多くの場合に標的の選択によって制限される。
新規抗タウ結合分子を調製するため、単一細胞ベースの手法を用いてリン酸化及び非リン
酸化タウペプチドをベイト抗原として使用してヒト記憶Ｂ細胞からタウに対する抗体可変
領域を回収した。

タウに対するヒト記憶Ｂ細胞は、ヒトレパートリーにおいてはまれである可能性が高い
；従って、本発明者らは、タウベイトを最も明るいフルオロフォアで標識することにした
。タウペプチドは全てアミノ末端ビオチン基と合成して、２つの明るいフルオロフォア、
ストレプトアビジン−ＡＰＣ又はストレプトアビジン−ＰＥによる標識を補助した（別名
タウペプチド四量体）。各タウペプチドを両方のフルオロフォアで標識して、ドナー試料
からのヒト記憶Ｂ細胞のスクリーニング（実施例２に詳述する）における信号対雑音比を
増加させた。標識タウペプチド四量体は、ビオチン化ペプチドを３５：１モル比のペプチ
ド対ストレプトアビジン標識で穏やかに撹拌しながら４℃で一晩混合することにより調製
した。ＢｉｏＳｐｉｎ ３０カラム（Ｂｉｏｒａｄ）で分離することによって遊離ペプチ
ドを取り除いた。全てのタウペプチド四量体は４℃で最長２ヵ月間保存した。

実施例２
標識ペプチド四量体を用いたＦＡＣソーティングによる抗タウ特異的記憶Ｂ細胞の回収
サンディエゴ血液バンク（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ）及びＴＳＲＩ
健常供血者サービス（ＴＳＲＩ Ｎｏｒｍａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｄｏｎｏｒ Ｓｅｒｖｉｃ
ｅｓ）から入手した推定無症候（非ＡＤ）ヒト供血者から採取した末梢血単核細胞（ＰＢ
ＭＣ）から単離した記憶Ｂ細胞（ＣＤ２２＋ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋ＩｇＧ＋）から、タウ
に対するモノクローナル抗体を回収した。加えて、ＣＲＯ、Ｑｕｉｎｔｉｌｅｓを介して
ＡＤ患者血液試料を入手し、そこから本明細書に詳述する３つの抗体を回収した。Ｆｉｃ
ｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でＰＢＭＣを単離し、９
０％ＦＢＳ及び１０％ＤＭＳＯ中に５０００万細胞／ｍｌで凍結保存した。血漿のアリコ
ートを５６℃で熱失活させて、血漿反応性の下流評価のため−２０℃で保存した。

ソーティング実験毎に、３〜４人のドナーのＰＢＭＣを解凍し、予め加温したＲＰＭＩ
コンプリート（ＲＰＭＩ、１０％熱失活ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン
）が入ったチューブに移し、洗浄し、個別に３７℃で１６時間インキュベートした。ＣＤ
２２＋磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用したポジティブ選択によっ
て、プールしたＰＢＭＣを成熟Ｂ細胞に関してエンリッチした。２ｍＭ ＥＤＴＡ及び０
．２５％ウシ血清アルブミン画分Ｖ（ＴＢＳ緩衝液）を含有するトリス緩衝生理食塩水ｐ
Ｈ７．４に細胞を再懸濁した。細胞を細胞外マーカーＩｇＧ−ＦＩＴＣ、ＣＤ１９−Ｐｅ
ｒＣＰＣｙ５．５及びＣＤ２７−ＰＥＣｙ７（全てＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから）
で染色してＢ細胞を標識した。１０００万個の細胞を取り出し、及び陰性対照として、ビ
オチンストレプトアビジン標識コンジュゲートを使用した。残りの細胞は各１６．８ｎＭ
の１０個の二重標識タウペプチド四量体（ＳＡ−ＡＰＣ及びＳＡ−ＰＥ）のプールと共に
インキュベートした。細胞を穏やかに撹拌しながら４℃で６０分間インキュベートし、２
回洗浄し、ＴＢＳ緩衝液中に２０００万細胞／ｍｌで再懸濁した。ソーティングに先立ち
、生細胞マーカーとしてＤＡＰＩ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を添加し、Ｂｅｃｋｍ
ａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＭｏＦｌｏ ＸＤＰで細胞をソートした。陰性対照試料を使用し
て非特異的結合及び信号対雑音比を決定した。ＣＤ１９＋、ＩｇＧ＋、ＣＤ２７ｈｉ、及
び抗原ダブルポジティブ細胞を収集し、９６ウェルＰＣＲプレートの個々のウェルに入れ
、−８０℃で保存した。

実施例３
タウ特異的単一Ｂ細胞からの重鎖及び軽鎖遺伝子の回収
実施例２に詳述したとおり、タウペプチド四量体に反応性を示す記憶Ｂ細胞を同定し、
単離し、及び個々のマイクロタイターウェルにソートした。次に、個々のＢ細胞から二段
階ＰＣＲ手法によって重鎖及び軽鎖ｃＤＮＡを回収し、可変ドメイン配列をクローニング
して、完全長組換えＩｇＧ１抗体としてインビトロで発現させており、従ってこれはヒト
キメラ抗体である。

第１鎖ｃＤＮＡ合成
シングルソートした細胞から、以下の変更を加えた製造者のプロトコル（Ｓｕｐｅｒｓ
ｃｒｉｐｔ ＩＩＩ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）に従って第１鎖相補ＤＮＡ（
ｃＤＮＡ）を作成した：単一Ｂ細胞が入った各ウェルに、０．５μｌの１０％ＮＰ−４０
、１．０μｌのオリゴｄＴ、１．０μｌのｄＮＴＰを添加し、試料を６５℃で５分間イン
キュベートした。インキュベーション後、試料を氷上に１分間置いた。次に、各ウェルに
以下を添加した：２．０μｌのＤＴＴ、４．０μｌのＭｇＣｌ_２、１．０μｌのＳｕｐｅ
ｒＳｃｒｉｐｔ ＲＴ、及び０．５μｌのＲＮａｓｅＯｕｔ。試料を５０℃で５０分間イ
ンキュベートし、続いて８５℃で５分間インキュベートした。

ステップＩ増幅
最初のＰＣＲ（ステップＩ）については、２．５μｌのｃＤＮＡ調製物を鋳型として使
用して重鎖及びκ又はλ軽鎖を増幅した。抗体重鎖（ＣＢ−５’ＬＶＨプライマー、表１
）、κ軽鎖（ＣＢ−５’ＬＶｋプライマー、表２）、及びλ軽鎖（ＣＢ−５’ＬＶｌａｍ
プライマー、表３）のリーダー領域に特異的なプライマープールを使用した。ステップＩ
ＰＣＲ反応においては、重鎖、κ軽鎖及びλ軽鎖のそれぞれＣＨ１領域、ＣＫ、及びＣ
Ｌ領域に特異的な単一リバースプライマーを使用した。

ステップＩＩ増幅
ステップＩＩについては、２．５μｌのステップＩ ＰＣＲ産物を鋳型として使用して
、重鎖、及びκ又はλ軽鎖可変領域を増幅した。抗体重鎖（ｐＣＢ−ＩｇＧ−ＶＨ及び３
’ＳａｌＩＪＨプライマー、表４）、κ軽鎖（ｐＣＢ−ＩｇＧ−ＶＫ及び３’Ｊｋプライ
マー、表５）、及びλ軽鎖（ＣＢ−ＶＬ及び３’Ｃｌａｍ−ステップＩＩプライマー、表
６）のフレームワーク１領域に特異的に設計したフォワード及びリバースプライマーのプ
ールを使用して、可変領域からＤＮＡを調製した。さらに、ステップＩＩプライマーは、
下流クローニングのためＸｂａＩ（ＶＫ及びＶＬフォワードプライマー）及びＸｈｏＩ（
３’ＳａｌＩＪＨプライマー）制限部位が導入されるように設計した。ステップＩＩ増幅
反応の後、重鎖及び軽鎖可変ドメインＰＣＲ産物を１％アガロースゲル上で泳動させた。
重鎖及び軽鎖可変領域断片を製造者のプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ）に従って精製し、ステ
ップＩＩＩ ＰＣＲ反応に使用した。

ステップＩＩＩ増幅：オーバーラップ伸長ＰＣＲ
ステップＩＩＩについては、ステップＩＩで作製した重鎖及び軽鎖可変領域ＤＮＡ断片
を、以下を用いたオーバーラップ伸長ＰＣＲによって単一カセットに連結した：１）κリ
ンカー又はλリンカー（以下のリンカー調製方法を参照）（軽鎖ステップＩＩ断片の３’
末端及び重鎖ステップＩＩ断片の５’末端にアニールするもので、κ又はλ定常領域のい
ずれかを含有する）、２）ＸｂａＩ制限部位を含有するフォワードオーバーラッププライ
マー、及び３）ＸｈｏＩ制限部位を含有するリバースプライマー。この反応により、軽鎖
可変領域とリンカーと重鎖可変領域とからなる、それぞれκ鎖又はλ鎖について約２４０
０ｂｐ又は２２００ｂｐのアンプリコン（即ち、カセット）が得られる。増幅後、オーバ
ーラップ伸長ＰＣＲ反応産物を製造者の指示（Ｑｉａｇｅｎ ＰＣＲ精製キット）に従っ
てＰＣＲ精製した。

リンカー調製
鋳型としての、インハウスで作成した且つ重鎖及び軽鎖遺伝子の両方を発現させるため
に用いられる二重ＣＭＶプロモーターベクターであるｐＣＢ−ＩｇＧ及び表７に掲載する
プライマーを使用してリンカー断片を増幅した。リンカー断片は、κ又はλリンカーにつ
いてそれぞれ１７６５又は１５３６塩基対長さである。κリンカーは、５’から３’に、
イントロン配列と、続くκ定常領域、ポリ（Ａ）終結配列、及び組換え抗体の１つのベク
ター発現を可能にするサイトメガロウイルスプロモーター配列を含有する。λリンカーは
、λ定常領域、ポリ（Ａ）終結配列、及びサイトメガロウイルスプロモーター配列を含有
する。共通リバースプライマー（リンカー＿ＶＨ＿ＨＡＶＴ２０＿ｐＣＢ−ＩｇＧ−Ｒ）
及びκ特異的フォワードプライマー（リンカー＿ＣＫ＿イントロン＿ｐＣＢ−ＩｇＧ−Ｆ
）を使用した（表７）。増幅断片は１％アガロースゲル上で分離し、製造者のプロトコル
（Ｑｉａｇｅｎゲル抽出キット）に従って精製した。

哺乳類発現ベクターへのクローニング
オーバーラップ伸長ＰＣＲ産物の精製後、断片をＸｈｏＩ及びＸｂａＩで消化し、続い
て１％アガロースゲル上で分離した。オーバーラップカセット（約２．４ｋｂ）に対応す
るバンドを精製し、ＩｇＧ１発現ベクター、ｐＣＢ−ＩｇＧにライゲートした。このベク
ターに抗体可変遺伝子をサブクローニングし、その元の（天然）アイソタイプに関わらず
、抗体をＩｇＧ１として組換え発現させた。（ＩｇＧ１重鎖定常領域アミノ酸配列の例は
配列番号８３に示し、軽鎖κ定常領域アミノ酸配列は配列番号８４に示す）。形質転換は
全て、ＤＨ５ａ Ｍａｘ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ
．）を使用して実施し、２５０μｌのＳＯＣにおいて３７℃で１時間回復させた。約１０
０μｌの回復させた細胞を、２０ｍＭグルコースを補足したカルベニシリンプレートにプ
レーティングした。プレートを３７℃で一晩インキュベートしてコロニーを成長させた。
回復させた細胞混合物の残りは、５０μｇ／ｍｌカルベニシリンを補足した４ｍｌのスー
パーブロス（ＳＢ）培地で培養し、２５０ｒｐｍで振盪しながら３７℃で一晩インキュベ
ートした。翌日、１プレートにつき５つのコロニーをピッキングし、５０μｇ／ｍｌカル
ベニシリンを補足した３ｍｌのＳＢ培地において３７℃で一晩成長させた。一晩培養物を
ＤＮＡプラスミド調製（Ｑｉａｇｅｎ）に使用した。

実施例４
抗体シーケンシング、生殖細胞系列同定及びトランスフェクション上清における抗タウペ
プチド反応性の確認
ＩｇＧ１を発現させるため、前述の４ｍｌ培養物のＤＮＡプラスミドミニプレップを調
製し（Ｑｉａｇｅｎ）、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅを製造者の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ，Ｃｏｒｐ．）に従って使用して２９３Ｅｘｐｉ細胞のトランスフェクションに使用
した。トランスフェクションは、１０ｍｌ培養物において最低でも７２時間にわたり実施
して、十分なＩｇ１Ｇ発現を可能にした。トランスフェクション後に細胞培地を回収し、
遠心によって細胞及び残屑を取り除いた。Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄシステム（ＦｏｒｔｅＢｉ
ｏ）のプロテインＡセンサー先端を使用して上清を定量化した。続いて各上清をベイトペ
プチドによるＥＬＩＳＡによって試験し、それにより抗タウ反応性抗体の存在を確認した
。実施例３における４つの個別にピッキングした培養物からのプラスミドミニプレップＤ
ＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ）を調製し、プライマーｐＣ９＿ｓｅｑ＿ＨＣ−Ｒ（５’ＣＡＴＧＴ
ＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＴＧＧ ３’）（配列番号８５）及びｐＣ９＿ｓｅｑ＿ＬＣ−Ｒ（
５’ＴＣＡＣＡＧＧＧＧＡＴＧＴＴＡＧＧＧＡＣＡ３’）（配列番号８６）で重鎖及び軽
鎖をシーケンシングした。これらの４つのクローンのうちの１つを続く実験用に選択した
。

抗体クローンＣＢＴＡＵ−７．１（配列番号８７、８８、８９、９０）、ＣＢＴＡＵ−
８．１（配列番号９１、９２、９３、９４）、ＣＢＴＡＵ−１６．１（配列番号９５、９
６、９７、９８）、ＣＢＴＡＵ−１８．１（配列番号９９、１００、１０１、１０２）、
ＣＢＴＡＵ−２０．１（配列番号１０３、１０４、１０５、１０６）、ＣＢＴＡＵ−２２
．１（配列番号１０７、１０８、１０９、１１０）、ＣＢＴＡＵ−２４．１（配列番号１
１１、１１２、１１３、１１４）、ＣＢＴＡＵ−２７．１（配列番号１１５、１１６、１
１７、１１８）、ＣＢＴＡＵ−２８．１（配列番号１１９、１２０、１２１、１２２）、
ＣＢＴＡＵ−４１．１（配列番号１２３、１２４、１２５、１２６）、ＣＢＴＡＵ−４１
．２（配列番号１２７、１２８、１２９、１３０）、ＣＢＴＡＵ−４２．１（配列番号１
３１、１３２、１３３、１３４）、ＣＢＴＡＵ−４３．１（配列番号１３５、１３６、１
３７、１３８）、ＣＢＴＡＵ−４４．１（配列番号１３９、１４０、１４１、１４２）、
ＣＢＴＡＵ−４５．１（配列番号１４３、１４４、１４５、１４６）、ＣＢＴＡＵ−４６
．１（配列番号１４７、１４８、１４９、１５０）、ＣＢＴＡＵ−４７．１（配列番号１
５１、１５２、１５３、１５４）、ＣＢＴＡＵ−４７．２（配列番号１５５、１５６、１
５７、１５８）及びＣＢＴＡＵ−４９．１（配列番号１５９、１６０、１６１、１６２）
の重鎖及び軽鎖可変領域タンパク質及び核酸配列が、選択の抗タウ抗体の新規ＣＤＲを定
義する（表８）。

配列番号８７のＶＨと配列番号８８のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体
ＣＢＴＡＵ−７．１が作成された。配列番号９１のＶＨと配列番号９２のＶＬとヒトＩｇ
Ｇ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−８．１が作成された。配列番号９５のＶＨ
と配列番号９６のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−１６．１
が作成された。配列番号９９のＶＨと配列番号１００のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを
含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−１８．１が作成された。配列番号１０３のＶＨと配列番号１
０４のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−２０．１が作成され
た。配列番号１０７のＶＨと配列番号１０８のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タ
ウ抗体ＣＢＴＡＵ−２２．１が作成された。配列番号１１１のＶＨと配列番号１１２のＶ
ＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−２４．１が作成された。配列
番号１１５のＶＨと配列番号１１６のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体Ｃ
ＢＴＡＵ−２７．１が作成された。配列番号１１９のＶＨと配列番号１２０のＶＬとヒト
ＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ２８．１が作成された。配列番号１２３
のＶＨと配列番号１２４のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−
４１．１が作成された。配列番号１２７のＶＨと配列番号１２８のＶＬとヒトＩｇＧ１定
常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−４１．２が作成された。配列番号１３１のＶＨと
配列番号１３２のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ−４２．１
が作成された。配列番号１３５のＶＨと配列番号１３６のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域と
を含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ４３．１が作成された。配列番号１３９のＶＨと配列番号１
４０のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ４４．１が作成された
。配列番号１４３のＶＨと配列番号１４４のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ
抗体ＣＢＴＡＵ４５．１が作成された。配列番号１４７のＶＨと配列番号１４８のＶＬと
ヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ４６．１が作成された。配列番号１
５１のＶＨと配列番号１５２のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡ
Ｕ４７．１が作成された。配列番号１５５のＶＨと配列番号１５６のＶＬとヒトＩｇＧ１
定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ４７．２が作成された。配列番号１５９のＶＨと
配列番号１６０のＶＬとヒトＩｇＧ１定常領域とを含む抗タウ抗体ＣＢＴＡＵ４９．１が
作成された。

ＣＢＴＡＵ−７．１抗体は、配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６４の重
鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１６６の軽鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号１６７の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６８の軽鎖ＣＤＲ３領域を
含む。ＣＢＴＡＵ−８．１抗体は、配列番号１６９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７０
の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖Ｃ
ＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ３領
域を含む。ＣＢＴＡＵ−１６．１抗体は、配列番号１７５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号
１７６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７８の
軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７９の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８０の軽鎖ＣＤ
Ｒ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−１８．１抗体は、配列番号１８１の重鎖ＣＤＲ１領域、配
列番号１８２の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８３の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１
７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８４の軽
鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−２０．１抗体は、配列番号１８５の重鎖ＣＤＲ１領
域、配列番号１８６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列
番号１８８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８
９の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−２２．１抗体は、配列番号１９０の重鎖ＣＤ
Ｒ１領域、配列番号１９１の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９２の重鎖ＣＤＲ３領域
、配列番号１９３の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番
号１９５の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−２４．１抗体は、配列番号１９６の重
鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９７の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ
３領域、配列番号１９９の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び
配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−２７．１抗体は、配列番号２０
１の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２０２の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２０３の重鎖
ＣＤＲ３領域、配列番号２０４の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２０５の軽鎖ＣＤＲ２領域
、及び配列番号２０６の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−２８．１抗体は、配列番
号２０７の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２０８の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２０９
の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１０の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１１の軽鎖ＣＤＲ
２領域、及び配列番号２１２の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−４１．１抗体は、
配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号
２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖
ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−４１．２抗
体は、配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配
列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７４
の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−４２
．１抗体は、配列番号２１９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２０の重鎖ＣＤＲ２領域、
及び配列番号２２１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号
１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ
−４３．１抗体は、配列番号２２２の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２３の重鎖ＣＤＲ２
領域、及び配列番号２２４の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２２５の軽鎖ＣＤＲ１領域、配
列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２２６の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢ
ＴＡＵ−４４．１抗体は、配列番号２２７の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２８の重鎖Ｃ
ＤＲ２領域、及び配列番号２２９の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２３０の軽鎖ＣＤＲ１領
域、配列番号１６７の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２３１の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む
。ＣＢＴＡＵ−４５．１抗体は、配列番号２３２の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２３３の
重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２３４の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２３５の軽鎖ＣＤ
Ｒ１領域、配列番号２３６の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２３７の軽鎖ＣＤＲ３領域
を含む。ＣＢＴＡＵ−４６．１抗体は、配列番号２３８の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２
３９の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２４０の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２４１の軽
鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２４２の軽鎖ＣＤＲ
３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−４７．１抗体は、配列番号２４３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列
番号２４４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２４５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２４
６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１２の軽鎖
ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−４７．２抗体は、配列番号２４３の重鎖ＣＤＲ１領域
、配列番号２４７の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２４８の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番
号２４９の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１２
の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。ＣＢＴＡＵ−４９．１抗体は、配列番号２５０の重鎖ＣＤＲ
１領域、配列番号２５１の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２５２の重鎖ＣＤＲ３領域、
配列番号２５４の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２５４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号
２５５の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む。

ＮＣＢＩで利用可能な免疫グロブリン可変ドメイン配列解析ツールのＩｇＢＬＡＳＴを
使用して（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１３ Ｊｕｌ；４１（Ｗｅｂ Ｓ
ｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）：Ｗ３４−４０）、抗タウモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖
可変領域の核酸配列を既知の生殖細胞系列配列と比較した。そのそれぞれの提案される生
殖細胞系列配列及びＰＣＲプライマーとアラインメントした重鎖及び軽鎖フレームワーク
Ｈ１及びＬ１領域の配列アラインメントを表９に示す。確認された配列は発現及び精製用
にスケールアップした（実施例５に詳述する）。選択されたクローンを５０ｍｌ培養物に
拡大し、プラスミドミディプレップＤＮＡを調製した（Ｍａｃｈｅｒｙ Ｎａｇｅｌ Ｍ
ｉｄｉ Ｐｒｅｐキット）。次に、実施例５に詳述するとおり、プラスミドＤＮＡを使用
して２９３Ｅｘｐｉ細胞の３０ｍｌ培養物をトランスフェクトした。

トランスフェクトしたＩｇＧ１上清をタウペプチドに対する反応性についてＥＬＩＳＡ
によりアッセイした。初めに、９６ハーフウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ）を
陰性対照としての５０μｌのウシアクチン（１μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）及びＡｆｆｉｎ
ｉｐｕｒｅヤギ抗ヒトＦ（ａｂ）_２（２μｇ／ｍｌ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅ
ｓｅａｒｃｈ）で被覆して、抗体産生を確認した。プレートはＴＢＳ中において４℃で一
晩被覆した。翌日、プレートをＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ（ＴＢＳ−Ｔ）で５回洗浄
し、１５０μｌのＴＢＳ−Ｔ＋２．５％ＢＳＡ（ブロッキング緩衝液）で２時間ブロック
した。１００μｌのＴＢＳ中０．４３μＭの濃度のストレプトアビジンで被覆されたプレ
ート（Ｐｉｅｒｃｅ）上でタウペプチドを捕捉した。ＥＬＩＳＡアッセイのセットアップ
に使用したタウペプチドは、対応するソーティング実験でベイトとして使用したものと同
じであった。次にタウペプチド被覆プレートを室温で１．５時間インキュベートした。次
に全てのプレートをＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎで５回洗浄し、１５０μｌ及び３００
μｌ（タウペプチドプレートのみ）のブロッキング緩衝液でブロックし、室温で２時間イ
ンキュベートした。ＩｇＧトランスフェクション上清を５μｇ／ｍｌに希釈し（Ｏｃｔｅ
ｔ Ｒｅｄによる定量化に基づく）、ＴＢＳ／０．２５％ＢＳＡ中において５倍タイトレ
ートした。ウシアクチン被覆プレートの陽性対照としてマウス抗アクチン（Ｓｉｇｍａ、
カタログ番号Ａ３８５３）を１．２５μｇ／ｍｌで使用した。ＥＬＩＳＡアッセイの陽性
対照として、ＡＴ８モノクローナル抗体（Ｔｈｅｒｍｏ、ＭＮ１０２０）、ＡＴ１００モ
ノクローナル抗体（Ｔｈｅｒｍｏ、ＭＮ１０６０）及びＡＴ１８０モノクローナル抗体（
Ｔｈｅｒｍｏ、ＭＮ１０４０）を含め、商用グレードの抗体を１μｇ／ｍｌで使用した。
一次抗体を室温で２時間インキュベートし、ＴＢＳ−Ｔで５回洗浄した。最後に、ヤギ抗
ヒトＩｇＧ Ｆａｂ又はヤギ抗マウスＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）をそれぞれ１
：２０００及び１：４０００で使用し、室温で１時間インキュベートした。プレートをＴ
ＢＳ−Ｔで５回洗浄し、ＳｕｒｅＢｌｕｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ＴＭＢマイクロウェルペル
オキシダーゼ基質（ＫＰＬ）で発色させた。５０μｌ及び１００μｌ（ペプチドプレート
）のＴＭＢ停止液（ＫＰＬ）を添加することにより反応を停止させ、ＥＬＩＳＡプレート
リーダーを使用して４５０ｎｍの吸光度を計測した。続いて前述の結合活性を有する上清
を独立したＥＬＩＳＡ実験で再確認した。再確認されたところで、下流ＩｇＧ発現及び精
製（実施例５）用にクローンを選択した。

実施例５
クローニングされた抗タウキメラｍＡｂのＩｇＧ１発現及び精製
ＥＬＩＳＡスクリーニング及び抗体反応性の確認後、実施例４に示すとおり、選択され
たクローンをＩｇＧ１として発現させた。最低７２時間後及び最高１６８時間後までに細
胞培養培地を回収し、遠心によって細胞を取り除いた。続いて清澄化した上清をプロテイ
ンＡセファロースカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）
に２回通過させ、５０ｍｌのＰＢＳで洗浄した。続いて１０ｍｌのＩｇＧ溶出緩衝液（Ｐ
ｉｅｒｃｅ）でＩｇＧを溶出させて、トリスｐＨ８．０で中和し、続いてＰＢＳで一晩透
析した。透析した試料を約１ｍＬの最終容積となるまで１０，０００ＭＷＣＯ超遠心ユニ
ット（Ａｍｉｃｏｎ）を使用して濃縮し、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ３８４（ＦｏｒｔｅＢｉｏ
）のヒトＩｇＧ標準を使用してプロテインＡセンサー先端で抗体濃度を決定した。非還元
及び還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥを実施することにより、及びサイズ排除クロマトグラ
フィーにより、精製抗体のさらなる品質管理を行った。

実施例６
ＩｇＧ結合
タウペプチドに対する反応性
上記に記載したとおり作成し品質管理を行ったＩｇＧ１を、特定のコグネイトペプチド
、並びに非コグネイトペプチドと結合するその能力に関してＥＬＩＳＡによって試験した
（表１０）。９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ）又はストレプトアビジン被
覆プレート（Ｐｉｅｒｃｅ）を、実施例４に詳述するとおり、それぞれ抗原（ウシアクチ
ン及びａｆｆｉｎｉｐｕｒｅヤギ抗ヒトＦ（ａｂ）_２）又はタウペプチドで被覆した。精
製抗タウＩｇＧを０．２５％ＢＳＡ含有ＴＢＳ中５μｇ／ｍｌに希釈し、５倍タイトレー
トした。抗体対照及び二次抗体は実施例４に詳述するとおり使用した。１μｇ／ｍＬにお
ける抗体反応性をＥＬＩＳＡによって決定し、結合なし（−）、弱い（−／＋）、中程度
（＋）、又は強い（＋＋）としてスコア化した。（−）、２つのＯ．Ｄ．４５０ｎｍ読み
取りの平均が＜０．３；（−／＋）、＞０．５且つ＜１．０；（＋）、＞１．０且つ＜１
．５；（＋＋）、＞１．５。

結果は図１ａ〜図１ｔに示す。本明細書に記載される抗タウｍＡｂは、２つの主な群に
分類することができる：リン酸化ペプチドのみに反応するもの（リン酸化型依存的ｍＡｂ
）及びリン酸化ペプチド及び非リン酸化ペプチドの両方に反応するもの（リン酸化型非依
存的ｍＡｂ）。抗タウｍＡｂ ＣＢＴＡＵ−７．１、ＣＢＴＡＵ−８．１、ＣＢＴＡＵ−
１８．１、及びＣＢＴＡＵ−２２．１は、実施例３に詳述する手法を用いて非ＡＤ者から
回収された。これらのｍＡｂはリン酸化型依存的であり、ＥＬＩＳＡによって示されると
おり（図１）、リン酸化ペプチドとのみ反応し、その領域にわたる非リン酸化ペプチド又
は非リン酸化型のペプチドのいずれとも反応しない。抗タウｍＡｂ ＣＢＴＡＵ−７．１
及びＣＢＴＡＵ−８．１は、ＡＴ８結合エピトープを含有するリン酸化ペプチドに特異的
に反応する。このペプチドはアミノ酸１９４〜２１２にわたり、２０２位及び２０５位に
リン酸化残基を含有する。ＣＢＴＡＵ−１８．１は、２１０位にリン酸化セリン残基を有
するアミノ酸２００〜２１７にわたるリン酸化ペプチドに反応する。最後に、ＣＢＴＡＵ
−２２．１は、４１６位及び４２２位に２つのリン酸化セリンを有するアミノ酸４０６〜
４２９にわたるペプチドに反応する。

同様に、非ＡＤ者からＣＢＴＡＵ−２０．１が同定されており、これは、アミノ酸５９
〜７７にわたる３つの異なるリン酸化ペプチドに反応するため、優勢にリン酸化型依存的
である。これらのペプチドのうちの２つは、１つは６８位及び６９位で、及び２つ目は６
９位及び７１位で二重リン酸化されている。ＣＢＴＡＵ−２０．１はまた、７１位で単リ
ン酸化されている第３のペプチドにも反応することから、スレオニン７１におけるリン酸
化がＣＢＴＡＵ−２０．１反応性に十分であり、重要であることが示唆される。ＣＢＴＡ
Ｕ−２０．１は、領域４２〜１０３にわたる非リン酸化ペプチドに対して弱い反応性を示
す。

前述のｍＡｂと同様に、非ＡＤ者からＣＢＴＡＵ−１６．１及びＣＢＴＡＵ−２４．１
も回収された；しかしながら、両方のｍＡｂともリン酸化型非依存的であり、ＥＬＩＳＡ
によって観察されたとおり、特定の領域にわたるリン酸化ペプチド及び非リン酸化ペプチ
ドの両方に反応する。ＣＢＴＡＵ−１６．１はアミノ酸領域２０４〜２２１に反応し、一
方、ＣＡＢＴＡＵ−２４．１は、アミノ酸２２１〜２４５にわたる３つの異なるペプチド
に反応する。加えて、それぞれアミノ酸領域４２〜１０３及び２９９〜３６９に対応する
６０〜７０アミノ酸長の非リン酸化ペプチドを使用して非ＡＤドナー試料で実施したスク
リーニングから、２つの追加的な抗タウｍＡｂ（ＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−
２８．１）が同定された；従って、両方のｍＡｂとも非リン酸化タウに特異的である。

最後に、２５人の若年非ＡＤ者（１８〜２７歳）、２５人の非ＡＤ者（５５歳超）、及
び２５人のＡＤ者（５５歳超）をスクリーニングした小規模研究から、ＣＢＴＡＵ ｍＡ
ｂ ４１．１、４１．２、４２．１、４３．１、４４．１、４５．１、４６．１、４７．
１、４７．２、及び４９．１が同定された。この試験に使用したペプチドセットには、８
つのリン酸化ペプチド（ＣＢＴＡＵ−２２．１コグネイトペプチドを含む）及び２つの非
リン酸化ペプチド（ＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−２８．１コグネイトペプチド
）が含まれた。ＣＢＴＡＵ ｍＡｂ ４１．１、４１．２、及び４２．１がＡＤドナーか
ら回収され、これらはＣＢＴＡＵ−２２．１コグネイトペプチドに反応する。ＣＢＴＡＵ
−２２．１と同様に、これらのｍＡｂは、図１ｊ〜図１ｌに示されるとおりリン酸化型依
存的である。非ＡＤ者（５５歳超）から、ＣＢＴＡＵ−２２．１コグネイトペプチドに反
応性を有する２つの追加的なｍＡｂ（ＣＢＴＡＵ−４４．１及びＣＢＴＡＵ−４５．１）
が同定された。予想どおり、これらの２つもリン酸化型依存的であった（図１ｎ〜図１ｏ
）。ＣＢＴＡＵ−４３．１もまた、非ＡＤ者（５５歳超）で実施したスクリーニングから
同定された；しかしながら、このｍＡｂはＣＢＴＡＵ−２７．１コグネイトペプチドで回
収されており、非リン酸化タウに特異的である（図１ｍ）。最後に、非ＡＤ者（１８〜２
７歳）から、ＣＢＴＡＵ−２８．１ペプチドに対して反応性を有するＣＢＴＡＵ−４６．
１、４７．１、４７．２、及び４９．１が回収されており、これは、ＣＢＴＡＵ−２８．
１と同様に、非リン酸化タウに特異的である（図１ｐ〜図１ｓ）。

実施例７
ＥＬＩＳＡによる対らせんフィラメント及び組換えタウに対する反応性
キメラ抗体の一部の特異性をさらに特徴付けるため、組換えタウ、エンリッチ及び免疫
精製対らせんフィラメントに対するそれらの反応性をＥＬＩＳＡによって試験した。

Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄａｖｉｅｓのプロトコルに従ってＰＨＦタウを免疫精
製した。簡潔に言えば、アルツハイマー病者に対応する皮質組織を１０容積の冷緩衝液（
１０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．８Ｍ ＮａＣＬ及び１０％スクロ
ース）と共にホモジナイズし、２７，２００×ｇ、４℃で２０分間遠心した。上清にＮ−
ラウロイルザルコシン及び２−メルカプトエタノールを、それぞれ１％（ｗｔ／ｖｏｌ）
及び１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の終濃度に達するように添加した。この混合物を常に揺らし
ながら３７℃で２〜２．５時間インキュベートし、続いて１０８，０００×ｇで室温で３
０分間遠心した。ＰＨＦタウを含有するペレットをＰＢＳで３回洗浄し、タンパク質阻害
薬を含まないＰＢＳ中に溶解し、１２，０００×ｇで５分間さらに遠心した。エンリッチ
ＰＨＦタウ（ｅＰＨＦタウ）を含有する回収された上清をｈＴａｕ１０アフィニティーカ
ラムでイムノアフィニティー精製し、３Ｍ又は４Ｍ ＫＳＣＮによって４℃で一晩溶出さ
せて、続いて４℃の１Ｌ ＰＢＳで緩衝液を３回交換して透析した。ｈＴａｕ１０は、組
換えタウで免疫化することによってインハウスで作成した抗体である。ｈＴａｕ１０はア
ミノ末端エピトープで組換えタウ及びＰＨＦタウの両方に結合する。免疫精製ＰＨＦタウ
（ｉＰＨＦタウ）はＳａｒｔｏｒｉｕｓ遠心ろ過装置でエンリッチした。

ＥＬＩＳＡについては、ハーフエリア９６ウェル結合プレート（Ｃｏｓｔａｒ）をＴＢ
Ｓ（２μｇ／ｍｌ組換えタウ、２μｇ／ｍｌウシアクチンａｆｆｉｎｉｐｕｒｅヤギ抗ヒ
トＦ（ａｂ）_２、１μｇ／ｍｌのアフィニティー精製対らせんフィラメント、及び１μｇ
／ｍｌのモノクローナル抗タウ抗体、ＨＴ７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍ
Ｎ１０００）中５０μｌの抗原で被覆した。翌日、プレートをＴＢＳ−Ｔで洗浄し、続い
て１５０μｌのＴＢＳ＋２．５％ＢＳＡによって室温で２時間ブロックした。ブロック後
、抗タウ抗体被覆プレート上においてｅＰＨＦタウを室温で２時間捕捉した。精製抗タウ
ＩｇＧをＴＢＳ＋０．２５％ＢＳＡ中１０μｇ／ｍｌに希釈し、ＩｇＧを室温で２時間５
倍タイトレートした。ｉＰＨＦタウ及び捕捉されたｅＰＨＦタウの陽性対照としてＡＴ８
（１０μｇ／ｍｌ）を使用した。プレートをＴＢＳ−Ｔで５回洗浄し、ＴＢＳ＋０．２５
％ＢＳＡ中に希釈した二次抗体を添加して、室温で１時間インキュベートした。ヤギ抗ヒ
トＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）_２（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）は１：２０００希釈で使用し、
ヤギ抗マウスＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）は１：４０００で使用した（抗アクチ
ン対照に使用）。インキュベーション後、プレートをＴＢＳ−Ｔで４回洗浄し、Ｓｕｒｅ
Ｂｌｕｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ）で約
２分間発色させた。ＴＭＢ停止液（ＫＰＬ）を添加することによって反応を直ちに停止さ
せ、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４５０ｎｍの吸光度を計測した。

結果は図２ａ〜図２ｊに示す。予想どおり、リン酸化型依存的ｍＡｂ ＣＢＴＡＵ−７
．１、ＣＢＴＡＵ−８．１、及びＣＢＴＡＵ−１８．１はＥＬＩＳＡによると組換えタウ
と反応しない（図２ａ、図２ｂ、図２ｄ）。ＣＢＴＡＵ−２０．１は、領域４２〜１０３
にわたる非リン酸化ペプチドに対するその弱い反応性と一致して、組換えタウに僅かな反
応性を示す。興味深いことに、これらのリン酸化型依存的ｍＡｂは、ＣＢＴＡＵ−７．１
を除き（これは高い抗体濃度でｅＰＨＦタウに対して僅かな反応性を示す）、対らせんフ
ィラメント（即ち、ｅＰＨＦタウ及びｉＰＨＦタウ）にいかなる反応性も示さない。最後
に、リン酸化型依存的ＣＢＴＡＵ−２２．１は、組換えタウには反応性を示さないが、ｉ
ＰＨＦタウ及びｅＰＨＦタウの両方に実際に反応する（図２ｆ）。

リン酸化型非依存的抗タウｍＡｂ、ＣＢＴＡＵ−１６．１及びＣＢＴＡＵ−２４．１は
、組換えタウ及び対らせんフィラメントの両フォーマット（即ち、ｉＰＨＦタウ及びｅＰ
ＨＦタウ；図２ｃ及び図２ｇ）の両方に反応する。ＣＢＴＡＵ−２８．１は組換えタウに
強力な結合を示し、両方のＰＨＦタウフォーマットに対する免疫反応性が弱い（図２ｉ）
。最後に、ＣＢＴＡＵ−２７．１は、組換えタウ及びＰＨＦタウの両方に対して弱い免疫
反応性を示す（図１ｈ）。

実施例８
ウエスタンブロット分析による対らせんフィラメント及び組換えタウに対する反応性
ｒＴａｕ及びＰＨＦ結合ＥＬＩＳＡの観察を拡張し、二次構造が反応性において役割を
担っているかどうかを調べるため、組換えタウ、エンリッチ及び免疫精製対らせんフィラ
メントをウエスタンブロット分析によって試験した。１×ＮｕＰＡＧＥ ＬＤＳ試料緩衝
液（０．５％ＬＤＳ最終）（Ｎｏｖｅｘ、ＮＰ０００７）の終濃度における約０．５μｇ
のｉＰＨＦ、ｅＰＨＦ、及び１μｇのｒＴａｕを７０℃で１０分間加熱した。試料を２６
ウェル、４〜１２％ビストリスＮｏｖｅｘ ＮｕＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎを
ＭＯＰＳ ＳＤＳ泳動緩衝液（Ｎｏｖａｇｅｎ、ＮＰ０００１）と共にロードし、続いて
ニトロセルロース膜に転写した。膜は、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０及び４％脱脂粉乳含有
１×トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）で一晩ブロックした。ＣＢＴＡＵ ｍＡｂを、０．
０５％Ｔｗｅｅｎ２０及び４％脱脂粉乳含有１×ＴＢＳ中２５μｇ／ｍＬで一次として使
用し、室温で２時間インキュベートした。次に膜を３回、各５分間０．０５％Ｔｗｅｅｎ
２０含有１×ＴＢＳで洗浄した。次にペルオキシダーゼＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒト
ＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を０．０
５％Ｔｗｅｅｎ２０及び４％脱脂粉乳含有１×ＴＢＳ中１：２０００希釈で二次として使
用し、室温で４５分間インキュベートした。膜を３回、各５分間洗浄し、Ｓｕｐｅｒｓｉ
ｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して発色させた。

ウエスタンブロット分析の結果を図３に示す。この図は、３つの対照抗体ＡＴ８、ＡＴ
１００、及びＨＴ７（それぞれ２リン酸タウ特異的及び全タウ特異的）の反応性を示す。
ＡＴ８及びＡＴ１００の両方が、ＰＨＦタウに特徴的なトリプルバンドを示し、これは約
６８、６４、及び６０ｋＤａに対応する。ＥＬＩＳＡの結果に反して、リン酸化型依存的
ｍＡｂのＣＢＴＡＵ−７．１及びＣＢＴＡＵ−１８．１は、ウエスタンブロットによると
ｉＰＨＦタウ及びｅＰＨＦタウの両方に反応し、タウがＰＨＦタウに存在する高次のコン
ホメーションを取るとき、これらのｍＡｂに対するエピトープは到達可能でないことが示
唆される。しかしながら、これらのエピトープはＳＤＳ−ＰＡＧＥの強力な変性条件下で
は到達可能になる。ＣＢＴＡＵ−２７．１は、ウエスタンブロットによると組換えタウ及
びＰＨＦとの結合を示すが、ＥＬＩＳＡによると各々に対して弱い反応性を示し、この抗
体に対するエピトープが強力な変性条件下においてのみ露出することが示唆される。ＣＢ
ＴＡＵ−２８．１は、ウエスタンブロット及びＥＬＩＳＡの両方によって組換えタウと強
く反応し、両方のアッセイによってＰＨＦタウに対する反応性も示す。ＣＢＴＡＵ−２８
．１は、全てのタウアイソフォームに存在するわけではない、タウのＥ１／Ｅ２領域（ア
ミノ酸４２〜１０３）に反応する；従って、ＣＢＴＡＵ−２８．１によってはＰＨＦタウ
の６８及び６４ｋＤａバンドのみが検出される。最後に、ＣＢＴＡＵ−２２．１及びＣＢ
ＴＡＵ−２４．１はＥＬＩＳＡアッセイに対して同様の結果を示し、それぞれ、いずれの
ＰＨＦタウにも反応するが組換えタウには反応せず、及びＰＨＦタウ及び組換えタウの両
方に反応する。

実施例９
ＥＬＩＳＡによるタウ断片ペプチドに対する反応性
回収された抗体の特異性を特徴付けるため、タウリン酸化及び非リン酸化ペプチドに対
するそれらの反応性（表１１〜表２１、図４ａ〜図４ｇ）をＥＬＩＳＡによって試験した
。ビオチン化タウペプチドを商業的に合成し、１ｍｇ／ｍｌで水に溶解し、−８０℃で凍
結した。簡潔に言えば、９６ウェルストレプトアビジン結合プレート（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆ
ｉｓｈｅｒ）を、ＴＢＳ中に希釈した２μｇ／ｍｌのタウペプチドで被覆し、４℃で一晩
インキュベートした。翌日、プレートをＴＢＳ−Ｔで洗浄し、続いてＴＢＳ中２．５％Ｂ
ＳＡによって室温で２時間ブロックした。ブロック後、精製抗タウＩｇＧをＴＢＳ＋０．
２５％ＢＳＡ中２μｇ／ｍｌに希釈し（又は表１５〜表２０におけるペプチド配列を使用
したＣＢＴＡＵ−２７．１、２８．１、４３．１、４６．１、４７．１、４７．２、及び
４９．１のより詳細なマッピングのため、５μｇ／ｍｌに希釈して５倍タイトレートする
）、室温で２時間インキュベートする。マッピング実験の各々では、実施例１１に記載す
るヒトキメラ化型のＡＴ８ ＩｇＧ（２μｇ／ｍｌ）を陽性対照として使用した。プレー
トをＴＢＳ−Ｔで５回洗浄し、続いてＴＢＳ＋０．２５％ＢＳＡに希釈した二次抗体［１
：２０００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）_２（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）］を
添加し、室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートをＴＢＳ−
Ｔで４回洗浄し、ＳｕｒｅＢｌｕｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシ
ダーゼ基質（ＫＰＬ）で約９０秒間発色させた。ＴＭＢ停止液（ＫＰＬ）を添加すること
によって反応を直ちに停止させ、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４５０ｎｍの吸
光度を計測した。各実験は３つの別々の日にトリプリケートで実施した。反応性は、ＥＬ
ＩＳＡアッセイにおいて値が０．４のＯＤ以上であった場合に陽性と見なした。タウリン
酸化及び非リン酸化ペプチドに対する各ｍＡｂの反応性を決定するため、２μｇ／ｍＬに
おける抗体反応性をＥＬＩＳＡによって決定し、結合なし（−）、弱い（−／＋）、中程
度（＋）、又は強い（＋＋）としてスコア化した。（−）、２つのＯ．Ｄ．４５０ｎｍ読
み取りの平均が＜０．３；（−／＋）、＞０．５且つ＜１．０；（＋）、＞１．０且つ＜
１．５；（＋＋）、＞１．５。ＣＢＴＡＵ−２７．１、２８．１、４３．１、４６．１、
４７．１、４７．２、及び４９．１（表１５〜表２０に詳述する）のより細かいマッピン
グのため、１μｇ／ｍＬにおける抗体反応性をＥＬＩＳＡによって決定し、結合なし（−
）、弱い（−／＋）、中程度（＋）、又は強い（＋＋）としてスコア化した。（−）、３
つのＯ．Ｄ．４５０ｎｍ読み取りの平均が＜０．３；（−／＋）、＞０．５且つ＜１．０
；（＋）、＞１．０且つ＜１．５；（＋＋）、＞１．５。

ＡＴ８エピトープを含有するペプチド（表２１；１９２−２１２；ｐＳ２０２、ｐＴ２
０５）を使用してＣＢＴＡＵ−７．１が回収されたが、ＣＢＴＡＵ−７．１に対する結合
に寄与するリン酸化型残基は、位置Ｓ２０２＋Ｔ２０５が関わるものの、Ｓ１９８＋Ｓ２
０２、Ｓ１９８＋Ｔ２０５、Ｓ１９９＋Ｔ２０５及び恐らくはＹ１９７＋Ｔ２０５の組み
合わせも関わり、手当たり次第であるように見えた。非リン酸化ペプチドはＣＢＴＡＵ−
７．１に対して反応性を示さなかった。ＣＢＴＡＵ−１８．１については、最小限のエピ
トープがアミノ酸１９８〜２１７からなり、ｐＳ２１０に依存するが、Ｔ２１２、Ｓ２１
４又はＴ２１７もリン酸化された場合にはそうでないことが見出された。ＣＢＴＡＵ−２
２．１の反応性はｐＳ４２２に依存的であることが見出されたが、一方、抗体ＣＢＴＡＵ
−２４．１は、その対応する非リン酸化ペプチドに対する強力な結合を示し、従ってリン
酸化による影響を受けなかった。

ＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−４３．１は、アミノ酸２９９〜３６９にわたる
非リン酸化ペプチドを使用して回収された。興味深いことに、この領域内にあるオーバー
ラップペプチドは、両方のｍＡｂに対して同様の結合要件を示した（即ち、ＣＢＴＡＵ−
２７．１及びＣＢＴＡＵ−４３．１はそれぞれアミノ酸２９９〜３１８及び３０９〜３２
８にわたるペプチドに反応した）ことから、両方のｍＡｂに対するエピトープがタウ４４
１の領域２９９〜３２８内にあることが示唆される（図４ａ及び図４ｃ）。

ＣＢＴＡＵ−２８．１、４６．１、４７．１、４７．２、及び４９．１は、ヒトドナー
試料から、タウ４４１の領域４２〜１０３にわたるペプチドを使用して回収された。より
小さいオーバーラップ群のペプチドに対する各ｍＡｂの反応性を試験したところ、ＣＢＴ
ＡＵ−４７．１、４７．２、及び４９．１に対してＣＢＴＡＵ−２８．１（即ち、領域５
２〜７１にわたるペプチドに対する反応性）と同様の結合性が示されたことから、同等の
結合要件が示唆される；しかしながら、ＣＢＴＡＵ−４６．１は前述のｍＡｂのＣ末端側
の領域に結合した（即ち、８２〜１０３ｌ；図４ｂ及び図４ｄ〜図４ｇ）。

実施例１０
ペプチドエピトープのアラニンスキャニング
回収ｍＡｂの各々の特異性及びその結合に対するアミノ酸の寄与をさらに特徴付けるた
め、各位置をアラニンに置き換えたタウペプチドに対するそれらの反応性をＥＬＩＳＡに
よって試験した。全ての実験プロトコルは実施例９と同じであった。１μｇ／ｍＬにおけ
る抗体反応性をＥＬＩＳＡによって決定し、結合なし（−）、弱い（−／＋）、中程度（
＋）、又は強い（＋＋）としてスコア化した。（−）、２つのＯ．Ｄ．４５０ｎｍ読み取
りの平均が＜０．３；（−／＋）、＞０．５且つ＜１．０；（＋）、＞１．０且つ＜１．
５；（＋＋）、＞１．５。各抗体の結果を表２２〜表２９に示す。

ＣＢＴＡＵ−７．１及びＣＢＴＡＵ−８．１は、ＡＴ８エピトープ（即ち、ｐＳ２０２
、ｐＴ２０５）を含有するタウリンペプチドを使用して回収されたが、アラニンスキャン
結果によれば、両方のｍＡｂとも異なるエピトープ要件を呈した（表２２）。Ｓ２０２及
びＴ２０５に加え、Ｇ２０４位及びＰ２０６位の置換により、ＣＢＴＡＵ−７．１に対す
る結合性の低下がもたらされた。対照的に、Ｇ２０４位、Ｔ２０５位、Ｐ２０６位、及び
Ｒ２０９位におけるアラニン置換はペプチドに対するＣＢＴＡＵ−８．１の反応性を低下
させたが、Ｓ２０２Ａ置換は何ら効果を有しなかった。ＡＴ８と同様に、両方のｍＡｂと
もリン酸化型依存的であるが、しかし、結合には追加的なもの（非リン酸化残基）が必要
である。ＣＢＴＡＵ−２２．１のアラニンスキャン結果は、Ｓ４２２におけるリン酸化に
対する依存性を示しており（表２３）、これは、この位置での置換が結合を完全に阻害し
たことに伴う。Ｄ４２１での置換は結合の低下をもたらしたが、完全な阻害はもたらさな
かった。最後に、ＣＢＴＡＵ−２４．１のアラニンスキャン結果は、Ｐ２３６が結合に唯
一必須の残基であることを示した（表２４）。

ＣＢＴＡＵ−２７．１及び４３．１についての必須接触残基をマッピングするため、ア
ラニンスキャニングをまた、タウの領域２９９〜３２３内においても実施した（それぞれ
表２５及び表２７）。ＣＢＴＡＵ−２７．１結合の必須接触残基はＤ３１４、Ｌ３１５、
及びＫ３１７であることが示された。この結果は、残基Ｄ３１４及びＫ３１７がエピトー
プとｍＡｂのＣＤＲ残基との間に塩橋相互作用を形成し得ることを示唆している。ＣＢＴ
ＡＵ−４３．１はＣＢＡＵ−２７．１のコグネイトペプチドを使用して回収されたが、ア
ラニンスキャンによるときの必須残基は異なった。Ｌ３１５及びＫ３１７に加えて、３１
２位のプロリンがＣＢＴＡＵ−４３．１結合に重要な接触であることが示された。最後に
、ＣＢＴＡＵ−２８．１並びにＣＢＴＡＵ−４７．１、４７．１、及び４９．１について
もアラニンスキャニングを実施した（表２６、表２８、表２９）。実施例９に示すとおり
、ＣＢＴＡＵ ｍＡｂ ４７．１、４７．２、４９．１は、ＣＢＴＡＵ−２８．１と同じ
ペプチド領域（即ち、５２〜７１）にマッピングされた。興味深いことに、全てのｍＡｂ
がＣＢＴＡＵ−２８．１と同じ結合要件を共有した。必須接触残基はＰ５９、Ｓ６１、Ｅ
６２、Ｔ６３、Ｄ６５、及びＫ６７であることが示された。これらの残基のうちの幾つか
は荷電していることが見出されており、エピトープとｍＡｂとの間の重要な塩橋相互作用
が示唆される。

実施例１１
免疫組織化学
タウ病理は、嗅内皮質（ＥＣ）内で始まり、海馬における接続されたニューロン経路に
沿って広がった後、皮質内に進行すると考えられている。これらのニューロン経路に沿っ
たタウの病原性沈着物に対する回収されたＩｇＧの反応性を決定するため、８２歳の非疾
患（非ＡＤ；Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ４３０５）男性及び８８歳のアルツハイマー
病（ＡＤ；Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ４５８３）男性から海馬組織を入手した（Ａｂ
ｃａｍ）。７１歳の非罹患（非ＡＤ）者及び７１歳のアルツハイマー病（ＡＤ）者から皮
質組織を入手した（Ｂａｎｎｅｒ Ｓｕｎ Ｈｅａｌｔｈ）。ＡＤに加えて、タウオパチ
ーとしても知られる、タウ病理によって特徴付けられる神経障害は多くある。本発明者ら
は、その知見の範囲で、それぞれ７３歳男性及び８１歳女性から得られた進行性核上性麻
痺（ＰＳＰ）及び非進行性核上性麻痺（非ＰＳＰ）前頭葉から得た組織（Ｂｉｏｃｈａｉ
ｎ）において、回収されたｍＡｂを試験した。脳組織を、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ（登録商
標）スライド染色セット（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用してキシレン（
ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）で１０分間２回洗浄し、続いて１００％エタノー
ルで３分間２回、９５％エタノールで３分間２回、７０％エタノールで３分間２回、及び
蒸留Ｈ_２Ｏで３０秒間１回洗浄することにより、脱パラフィン化して再水和した。クエン
酸塩緩衝液（１０ｍＭクエン酸、ｐＨ．６．０）を使用して組織切片を熱媒介性抗原回復
に供し、抗原部位を露出させた。次に切片をブロッキング緩衝液［ＰＢＳ中１０％正常ヤ
ギ血清（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）、１％ＢＳＡ及び
０．３％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００）］と共に室温で１時間インキュベートした。過剰な水
を取り除き、ＩｍｍＥｄｇｅ疎水性バリアペン（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）を用いて組織
切片の周りを囲んだ。染色トレイの底をＨ_２Ｏで被覆することにより加湿チャンバを調製
し、次に切片をＰＢＳで吸引によって５分間、３回洗浄した。内因性ペルオキシダーゼ活
性を１０％Ｈ_２Ｏ_２で室温で３０分間でクエンチした。クエンチ後、スライドをＰＢＳで
吸引によって５分間、３回洗浄した。次に、１×ＰＢＳ中１０％正常ヤギ血清、０．３％
ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１％ＢＳＡの溶液によってスライドを室温で１時間ブロックし
た。ＺｅｎｏｎヒトＩｇＧ標識キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造者
の指示に従って使用して、一次抗体をビオチンで標識した。陰性対照としてヒト抗ＲＳＶ
特異的抗体を使用した。Ｆｃ領域ヒトキメラ化型のＡＴ８ ＩｇＧを陽性対照として使用
した。標識後、一次抗体をブロッキング緩衝液中に５μｇ／ｍｌ及び２０μｇ／ｍｌの濃
度に別個に希釈した。ペプチド競合実験のため、組織切片とのインキュベーションに先立
ち、１３．３μＭのコグネイトペプチド（即ち、ソーティング実験においてｍＡｂの回収
に用いるペプチド）を一次抗体と共に室温で３０分間プレインキュベートした。組織切片
を１００μｌの希釈ビオチン標識一次抗体又はペプチド競合抗体と共に室温で２時間イン
キュベートした。吸引によって抗体を取り除いた後、ＰＢＳ中４％ホルムアルデヒドにお
いて組織切片の２回目の固定化を行い、室温で１５分間インキュベートした。切片をＰＢ
Ｓで吸引によって５分間、３回洗浄した。次に切片をストレプトアビジン基質Ｖｅｃｔａ
ｓｔａｉｎ ＡＢＣ試薬（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）と共にプレ３０分間インキュベート
した後、ＰＢＳで洗浄した。次に組織をニッケルの存在下でＤＡＢ基質（Ｖｅｃｔｏｒ
Ｌａｂｓ）によって発色させた。次に切片をｄｄＨ_２Ｏで２回洗浄し、室温で完全に乾燥
させた後、５０μｌのＶｅｃｔａＭｏｕｎｔ永久封入剤（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）でマ
ウントした。最後に、組織切片をヘマトキシリン（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）で対比染色
した。Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ−４１正立顕微鏡でＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウェアを使用
して代表的な画像を取得した。

免疫組織化学の結果を図５ａ〜図５ｄに示す。ＣＢＴＡＵ−７．１及びＣＢＴＡＵ−８
．１は、特にＡＤ脳組織に対する陽性免疫反応性を示し、健常脳組織に対しては示さず、
これは、罹患脳組織に存在する病原性タウ沈着物に対する結合を示唆している。これらの
抗体は、海馬の小領域（図５ａ；嗅内皮質）及び大脳皮質（図５ｂ）におけるＡＴ８陽性
タウ濃縮体及び糸屑状構造物を認識する。さらに、陽性免疫反応性は、神経細胞質及び神
経突起に複数の実験にわたって一貫して見られた。加えて、ＣＢＴＡＵ−１８．１、２２
．１、及び２４．１も海馬及び皮質組織切片に対して試験した（図５ａ〜図５ｂ）。ＣＢ
ＴＡＵ−７．１及びＣＢＴＡＵ−８．１と同様に、全てのｍＡｂがＡＤ組織切片上のタウ
に特異的に反応したが、非ＡＤ組織切片上のタウには反応しなかった。興味深いことに、
リン酸化タウに特異的でないＣＢＴＡＵ−２４．１はＡＤ組織切片上の罹患タウに特異的
に反応するが、非ＡＤ切片上のタウには反応しない。最後に、ＣＢＴＡＵ−１６．１及び
ＣＢＴＡＵ−２０．１は非ＡＤ及びＡＤの両方の組織切片上のタウに反応性を示す。

加えて、進行性核上性麻痺に対応する皮質組織切片においてＣＢＴＡＵ−７．１、８．
１、１６．１、１８．１、２０．１、２２．１、及び２４．１を試験した（図５ｃ）。Ａ
Ｔ８と異なり、ＣＢＴＡＵ−７．１及びＣＢＴＡＵ−８．１はヒトＰＳＰ脳におけるタウ
濃縮体を検出できなかったことから、両方のｍＡｂに対するエピトープがＰＳＰに存在し
ないことが示唆される。ＣＢＴＡＵ−１６．１及びＣＢＴＡＵ−２０．１は非ＰＳＰ及び
ＰＳＰ皮質脳切片上のタウに対して陽性免疫反応性を示したことから、正常タウ及び病原
性形態のタウの両方に結合することが示唆される。非ＡＤ脳切片では、これらの抗体は神
経細胞質及び神経突起におけるタウの陽性免疫染色を示し（図５ａ及び図５ｂ）、さらに
両方のｍＡｂとも、ＡＴ８と同様に、ＡＤ脳切片における濃縮体及び糸屑状構造物を検出
した。ＰＳＰ脳組織切片においてタウ濃縮体に対するＡＴ８と同様の免疫反応性も検出さ
れたことから、ＣＢＴＡＵ−１６．１及びＣＢＴＡＵ−２０．１の両方が他の非ＡＤタウ
オパチーにおける共通の病原性タウ形態を認識することが示唆される。さらに、ＣＢＴＡ
Ｕ−２２．１及びＣＢＴＡＵ−２４．１はＡＤ脳組織においてのみ免疫反応性を示し、濃
縮体及び糸屑状構造物に陽性免疫反応性を有した。ＣＢＴＡＵ−１８．１は非ＡＤ脳組織
において弱い免疫反応性を示したが、ＡＤ組織試料により強く反応した。ＣＢＴＡＵ−１
８．１、ＣＢＴＡＵ−２２．１及びＣＢＴＡＵ−２４．１もまた、ＰＳＰ脳組織切片にお
けるタウ濃縮体に関して陽性であった（図５ｃ）。

ＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−２８．１は非ＡＤ組織切片において選択的な免
疫染色を示し、神経細胞質及び神経突起に拡散した免疫染色を有した。興味深いことに、
両方の抗体とも、ＡＤ組織切片（海馬及び皮質の両方）においては免疫反応性を示さなか
ったことから、疾患の進行中に失われる新規エピトープが定義される。本発明者らが同定
したヒト抗タウｍＡｂの大多数と異なり、ＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−２８．
１は、ヒトタウ４４１の全領域にわたる非リン酸化ペプチドセットを使用したドナー試料
のスクリーニングによって回収された。これらの抗体は結合にリン酸化を必要とせず（図
１）、図２に示されるとおり、ＥＬＩＳＡによるときにＰＨＦと反応しない。従って、こ
れらの２つのｍＡｂについて観察された拡散した免疫染色パターンが予想された。加えて
、当初ＣＢＴＡＵ−２７．１コグネイトペプチドを使用して回収されたＣＢＴＡＵ−４３
．１を皮質組織切片に対して試験した。ＣＢＴＡＵ−４３．１はＣＢＴＡＵ−２７．１と
同様に反応し、非ＡＤ組織切片上のタウを染色したがＡＤ組織切片上のタウは染色しなか
った。同様に、ＣＢＴＡＵ−２８．１コグネイトペプチドを使用して回収されたＣＢＴＡ
Ｕ−４６．１、４７．２（１つの変異体のみを試験した）、及び４９．１は、非ＡＤ組織
切片上のタウに特異的に反応したが、ＡＤ組織切片上のタウには反応しなかった（図５ｄ
）。これらのｍＡｂは全てが共通の重鎖及び軽鎖生殖細胞系列（即ち、ＶＨ５−５１及び
ＶＫ４−１）を共有し、タウの同じ領域に結合し、且つ、図５ｄに示されるとおり、類似
した免疫組織化学的特性を共有することが指摘される点は興味深い。

ＣＢＴＡＵ−７．１、８．１、１８．１、２２．１、２４．１、２７．１、及び２８．
１についてここに提示する免疫組織化学結果は、数人の非ＡＤ者及びＡＤ者に対応する脳
及び組織試料の複数の領域で確認されている。ＣＢＴＡＵ ｍＡｂ ４３．１、４６．１
、４７．２、及び４９．１の免疫反応性は同じ組織試料を使用して一度確認されたもので
あり、他のＡＤ者及び非ＡＤ者に対応する試料に関しては未確認である。

実施例１２
脱リン酸化ＩＨＣ
ＣＢＴＡＵ−２８．１のＩＨＣの結果が、非ＡＤ組織切片上のタウに免疫反応性を示し
たが、ＡＤ組織切片上のタウには示さなかったことを所与として、本発明者らは、疾患の
進行中におけるこのエピトープの喪失が、修飾（即ちリン酸化）の結果であったという仮
説を立てた。この仮説を検証するため、ＣＢＴＡＵ−２８．１の免疫反応性を評価する前
にヒト脳組織切片を脱リン酸化した。パラフィン包埋ヒト脳組織切片（Ａｂｃａｍ、カタ
ログ番号：ａｂ４３０５、５４歳男性、臨床症状無しと、Ａｂｃａｍ、カタログ番号：ａ
ｂ４５８３、９３歳ヒスパニック系女性、アルツハイマー病）を、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ
（登録商標）スライド染色セット（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用してキ
シレン（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）で１０分間２回洗浄し、続いて１００％
エタノールで３分間２回、９５％エタノールで３分間２回、７０％エタノールで３分間２
回、及び蒸留Ｈ_２Ｏで３０秒間１回洗浄することにより、脱パラフィン化して再水和した
。非特異的抗体結合を最小限に抑えるため、洗浄中に組織を絶対に乾燥させなかった。ク
エン酸塩緩衝液（クエン酸、ｐＨ．６．０）を使用して組織切片を熱媒介性抗原回復に供
し、抗原部位を露出させた。過剰な水を取り除き、ＩｍｍＥｄｇｅ疎水性バリアペン（Ｖ
ｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）を用いて組織切片の周りを囲んだ。染色トレイの底をＨ_２Ｏで被
覆することにより加湿チャンバを調製し、次に切片をＰＢＳで吸引によって５分間、３回
洗浄した。内因性ペルオキシダーゼ活性をＨ_２Ｏ_２で室温で１５分間クエンチした。クエ
ンチ後、スライドをＰＢＳで吸引によって５分間、３回洗浄した。続いて切片を１３０単
位／ｍＬの仔ウシ腸アルカリホスファターゼ（ＣＩＡＰ）によって３２℃で２．５時間処
理した。次に、１×ＰＢＳ中１０％正常ヤギ血清、０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１
％ＢＳＡの溶液でスライドを室温で１時間ブロックした。マウス化ＣＢＴＡＵ−２８．１
（Ｆｃ領域マウス化）、及び対照ｍＡｂ ＡＴ８及びアイソタイプ対照（抗ＲＳＶ ｍＡ
ｂ ４．１）を海馬切片上において１ｕｇ／ｍＬの終濃度で一晩インキュベートした。切
片を洗浄し、抗マウスＦｃｙ断片特異的抗体と共に室温で２時間インキュベートした。ニ
ッケルの存在下でペルオキシダーゼ基質溶液ＤＡＢによって試料を発色させた。試料をヘ
マトキシリン（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）で対比染色した。Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ−４１
正立顕微鏡でＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウェアを使用して代表的な画像を取得した。

結果は図６ａ及び図６ｂに示す。予想どおり、ＣＢＴＡＵ−２８．１は非ＡＤ海馬組織
切片に存在するタウに反応するが、ＡＤ組織切片におけるタウには反応しない。対照的に
、対照ｍＡｂ、ＡＴ８は、非ＡＤ切片におけるタウに反応しないが、ＡＤ切片に存在する
病原性タウ沈着物には明らかに反応する（図６ａ）。しかしながら、ＡＤ組織切片をホス
ファターゼで前処理するとＣＢＴＡＵ−２８．１の反応性が回復し、これらの切片に存在
する病原性タウ沈着物をＣＢＴＡＵ−２８．１によって染色することが可能になる。予想
どおり、ＡＴ８の反応性は、ＡＤ組織切片をホスファターゼで前処理すると低下した（図
６ｂ）。

実施例１３
脱リン酸化ＥＬＩＳＡ
実施例１２の結果を確認するため、対らせんフィラメントの脱リン酸化に関してＣＢＴ
ＡＵ−２８．１に対する反応性をＥＬＩＳＡによって試験した。ハーフエリア９６ウェル
結合プレート（Ｃｏｓｔａｒ）をＴＢＳ（２μｇ／ｍｌウシアクチンａｆｆｉｎｉｐｕｒ
ｅヤギ抗ヒトＦ（ａｂ）_２、及び仔ウシ腸ホスファターゼ、ＣＩＰによる前処理を伴う及
び伴わない１μｇ／ｍｌのアフィニティー精製対らせんフィラメント、ｉＰＨＦ）中５０
μｌの抗原で被覆した。ホスファターゼ処理したｉＰＨＦは以下のとおり調製した。ｉＰ
ＨＦ試料を１×ＮＥＢ緩衝液４（５０ｍＭ酢酸カリウム、２０ｍＭトリス酢酸塩、１０ｍ
Ｍ酢酸マグネシウム、及び１ｍＭ ＤＴＴ）に０．０５μｇ／ｍｌの終濃度で再懸濁した
。ｉＰＨＦ１μｇ当たり１単位のＣＩＰを添加した（ＣＩＰ、ＮＥＢカタログ番号Ｍ０２
９０Ｓ）。ｉＰＨＦ試料をＣＩＰと共に３７℃で９０分間インキュベートした後、それで
ＥＬＩＳＡ結合プレートを被覆した。一晩の抗原結合後、プレートをＴＢＳ−Ｔで洗浄し
、続いて１５０μｌのＴＢＳ＋２．５％ＢＳＡによって室温で２時間ブロックした。精製
した対照及び抗タウＩｇＧ、ＣＢＴＡＵ−２８．１）をＴＢＳ／０．２５％ＢＳＡ中２５
μｇ／ｍｌ及びＩｇＧで開始して５倍希釈でタイトレートし、１．５時間インキュベート
した。プレートをＴＢＳ−Ｔで４回洗浄し、二次抗体（抗ヒトＦａｂ ＨＲＰ、Ｊａｃｋ
ｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−０３６−０９７）を添加
し、室温で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、プレートをＴＢＳ−Ｔ
で４回洗浄し、ＳｕｒｅＢｌｕｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダ
ーゼ基質（ＫＰＬ）で約２分間発色させた。ＴＭＢ停止液（ＫＰＬ）を添加することによ
って反応を直ちに停止させ、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４５０ｎｍの吸光度
を計測した。各実験点につきトリプリケートで実施した。

結果を図７に示す。以前実施例７に示したとおり、ＣＢＴＡＵ−２８．１は、ＡＴ８と
対照的に、ＥＬＩＳＡによるとｉＰＨＦとの反応が弱い。しかしながら、ＣＩＰによって
ｉＰＨＦを脱リン酸化すると、フィラメント状試料に対するＣＢＴＡＵ−２８．１の反応
性が回復する。予想どおり、リン酸タウ対照ｍＡｂ、ＡＴ８の反応性は、ＣＩＰによるｉ
ＰＨＦの脱リン酸化後に消失する。

実施例１４
リンペプチドに対するＣＢＴＡＵ−２７．１、２８．１、４３．１、４７．１、４７．２
及び４９．１の反応性
ＣＢＴＡＵ−２７．１（及びＣＢＴＡＵ−４３．１）及びＣＢＴＡＵ−２８．１（及び
ＣＢＴＡＵ−４６．１、４７．２、４９．１）の免疫組織化学結果から、これらのｍＡｂ
が、正常な非ＡＤ組織切片に存在するタウ上のエピトープと反応するが、このエピトープ
は疾患状況の間に失われるか又はマスクされることが示唆される（図５）。本発明者らは
、これが、エピトープのマスキングをもたらす領域内におけるリン酸化イベントの結果で
あったという仮説を立てた。実施例１２及び１３で強調される実験は、これが実際に２８
．１について正しいことを示した。従って、本発明者らは、潜在的にリン酸化の標的とな
り得る部位を具体的に同定して、ＣＢＴＡＵ−２８．１の反応性の喪失を説明しようと考
えた。４７．１、４７．２、及び４９．１はＣＢＴＡＵ−２８．１と同じタウ上の領域（
即ち、５２〜７１）に結合したため、本発明者らは、これらのｍＡｂ並びにこれらの実験
を試験することにした。加えて、本発明者らはまた、ＣＢＴＡＵ−４３．１及びＣＢＴＡ
Ｕ−２７．１についても、これらはＩＨＣによるとＣＢＴＡＵ−２８．１と類似した挙動
を示すため、同じ課題を実施した。

領域５２〜７１及び２９９〜３２３（それぞれＣＢＴＡＵ−２８．１及びＣＢＴＡＵ−
２７．１結合領域）を含む全ての可能性のあるリン酸化部位を網羅するように単リン酸化
及び二重リン酸化タウペプチドを設計した。表３０及び表３２に掲載するペプチドに対し
てＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−４３．１ ｍＡｂを試験した。実施例９に詳述
するとおり、９６ウェルストレプトアビジン被覆ＥＬＩＳＡプレート（Ｐｉｅｒｃｅ）を
リン酸化タウペプチドで被覆した。精製抗タウＩｇＧを０．２５％ＢＳＡ含有ＴＢＳ中５
μｇ／ｍｌに希釈し、５倍タイトレートした。抗体対照及び二次抗体は実施例９に詳述す
るとおり使用した。１μｇ／ｍＬにおける抗体反応性をＥＬＩＳＡによって決定し、結合
なし（−）、弱い（−／＋）、中程度（＋）、又は強い（＋＋）としてスコア化した。（
−）、２つのＯ．Ｄ．４５０ｎｍ読み取りの平均が＜０．３；（−／＋）、＞０．５且つ
＜１．０；（＋）、＞１．０且つ＜１．５；（＋＋）、＞１．５。各抗体の結果は表３０
〜表３４及び図８に示す。

ＣＢＴＡＵ−２７．１及びＣＢＴＡＵ−４３．１の結果は、Ｓ３１６におけるリン酸化
が反応性を完全に阻害するのに十分であることを示している（表３０及び表３２）。これ
は、ＡＤ組織切片のタウに対する反応性の喪失（実施例１１）が、疾患の経過初期に起こ
り得るイベントであるＳ３１６のリン酸化に起因し得ることを示唆している。ＣＢＴＡＵ
−２８．１、４７．１、４７．２、４９．１については、Ｓ６１又はＴ６３のいずれかの
リン酸化が反応性を完全に阻害するのに十分である。まとめると、ＣＢＴＡＵ−２８．１
、４７．１、４７．２、及び４９．１の結果は、Ｓ６１及び／又はＴ６３におけるリン酸
化が、疾患の経過中におけるこのエピトープの喪失を説明する機構であることを示唆して
いる。

実施例１５
抗タウｍＡｂマウス−ヒトキメラ及びヒトアイソタイプの作成
マウスタウオパチーモデルにおけるヒト抗タウｍＡｂの有効性を試験するため、ヒトＦ
ｃ領域をマウスＩｇＧ１ Ｆｃに置き換えることによってマウス−ヒト抗体キメラを作成
した。簡潔に言えば、ｐＣＢ−ＩｇＧベクターからプライマーＳｔｅｐ１ＨＭｃｈｉｍ−
Ｆｗｄ及びＳｔｅｐ１ＨＭｃｈｉｍ−Ｒｅｖ（表３５）を使用してヒトＩｇＧ１ ＣＨ１
領域を増幅して、５’−ＸｈｏＩ部位を含む０．９５ｋｂ断片（フラグメント１）を作成
した。遺伝子合成コンストラクトからプライマーＳｔｅｐ２ＨＭｃｈｉｍ−Ｆｗｄ及びＳ
ｔｅｐ２ＨＭｃｈｉｍ−Ｒｅｖ（表３０）を使用してマウスＩｇＧ１ ＣＨ２及びＣＨ３
ドメイン（Ｆｃ領域）を増幅して、０．８２ｋｂ断片（フラグメント２）を作成した。プ
ライマーＳｔｅｐ３ＨＭｃｈｉｍ−Ｆｗｄ及びＳｔｅｐ３ＨＭｃｈｉｍ−Ｒｅｖ（表３０
）を使用してｐＣＢ−ＩｇＧベクターのポリＡ領域を増幅することにより第３の断片（フ
ラグメント３）（これは３’−ＤｒａＩＩＩ部位を含む）を作成した。これらの３つの断
片をオーバーラップ伸長ＰＣＲによって単一のカセットに連結して、ヒトＣＨ１にマウス
ＣＨ２−ＣＨ３ドメインが続く２．３ｋｂオーバーラップ断片を作成した。続いてこのオ
ーバーラップ断片をＸｈｏＩ及びＤｒａＩＩＩ部位を介してｐＣＢ−ＩｇＧ ＣＢＴＡＵ
−７．１ベクターにクローニングして、ヒト可変、ＣＨ１、ヒンジ及びＣｋ領域と、それ
に続いてマウスＣＨ２及びＣＨ３領域を含有するＣＢＴＡＵ−７．１のマウス−ヒトキメ
ラを作成した。次に、ＣＢＴＡＵ−７．１キメラコンストラクト及びｐＣＢ−ＩｇＧ Ｃ
ＢＴＡＵヒトｍＡｂコンストラクトをＸｈｏＩ及びＸｂａＩで消化することによってＣＢ
ＴＡＵ−２２．１、２４．１、２７．１、２８．１、４７．１、４７．２、４６．１、４
９．１、及び４３．１キメラを作成し、対応する断片をサブクローニングした。全てのコ
ンストラクトのヌクレオチド配列は、当業者に公知の標準的な技法により確認する。続い
てキメラ抗体を発現させて、実施例５に詳述するとおり、プロテインＡの代わりにプロテ
インＧアガロースを使用して精製した。

実施例１６：
ＩｇＧ２、３及び４アイソタイプの調製
実施例３に記載したとおり、全てのＣＢＴＡＵ ｍＡｂはクローニングし、その天然ア
イソタイプと無関係にキメラヒトＩｇＧ１として発現させた。さらなるヒトアイソタイプ
型（即ち、ＩｇＧ２／３／４）を作成するため、対応する定常領域、ヒンジ、及びイント
ロン配列を含む遺伝子合成コンストラクトから、ヒトＩｇＧアイソタイプの各々に対応す
るＣＨ１〜ＣＨ３領域をＰＣＲ増幅する。ＰＣＲアンプリコンは５’−ＸｈｏＩ及び３’
−ＤｒａＩＩＩ部位を含み、これらの部位を使用して断片を対応するｐＣＢ−ＩｇＧ Ｃ
ＢＴＡＵ抗体コンストラクトにサブクローニングする。このようにして、抗タウｍＡｂの
各々についてヒトＩｇＧ２、３及び４アイソタイプ型を作成する。

実施例１７
デリスキングし且つＦｃ操作した抗タウキメラモノクローナル抗体変異体の作成
実施例３で単離した各抗タウ抗体クローンの重鎖及び軽鎖可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を
、遊離システインの存在並びにグリコシル化部位、アミド分解部位及び酸化部位を含めた
潜在的翻訳後修飾部位に関して分析する。構造的に保存された及び／又は生殖細胞系列ベ
ースの置換からなるアミノ酸突然変異を使用してこれらの部位を変更する。可変領域にお
ける非保存システインはセリンに突然変異させる。グリコシル化部位については、アスパ
ラギンによる保存されたグルタミンの置換又は生殖細胞系列突然変異を含めた幾つかの突
然変異が用いられる。アミド分解部位の修飾には、アスパラギン酸によるアスパラギンの
置換及びセリン又はアラニンによるグリシンの置換が含まれる。潜在的な酸化部位は修飾
されない。ＦｃＲｎに対する結合親和性を増加させ、従ってＩｇＧ１ ｍＡｂのインビボ
半減期を増加させるため、ＣＨ２及びＣＨ３領域間の境界に位置する幾つかの突然変異を
作成する。これらの突然変異には、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／
Ｎ４３４Ｆ（Ｖａｃｃａｒｏ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，２００５）又はＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８
Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎ ＰＲ．ｅｔ ａｌ．，２００４）が含まれた（これらはＦｃＲｎに対
するＩｇＧ１結合性を増加させることが示されている）。全ての置換は、部位特異的突然
変異誘発によって製造者の指示（ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ ＩＩ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号２００５２１）に従って作成される。全てのコンス
トラクトのヌクレオチド配列は、当業者に公知の標準的な技法により確認する。

実施例１７
デリスキングし且つＦｃ操作した抗タウキメラモノクローナル抗体変異体の作成
実施例３で単離した各抗タウ抗体クローンの重鎖及び軽鎖可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を
、遊離システインの存在並びにグリコシル化部位、アミド分解部位及び酸化部位を含めた
潜在的翻訳後修飾部位に関して分析する。構造的に保存された及び／又は生殖細胞系列ベ
ースの置換からなるアミノ酸突然変異を使用してこれらの部位を変更する。可変領域にお
ける非保存システインはセリンに突然変異させる。グリコシル化部位については、アスパ
ラギンによる保存されたグルタミンの置換又は生殖細胞系列突然変異を含めた幾つかの突
然変異が用いられる。アミド分解部位の修飾には、アスパラギン酸によるアスパラギンの
置換及びセリン又はアラニンによるグリシンの置換が含まれる。潜在的な酸化部位は修飾
されない。ＦｃＲｎに対する結合親和性を増加させ、従ってＩｇＧ１ ｍＡｂのインビボ
半減期を増加させるため、ＣＨ２及びＣＨ３領域間の境界に位置する幾つかの突然変異を
作成する。これらの突然変異には、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／
Ｎ４３４Ｆ（Ｖａｃｃａｒｏ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，２００５）又はＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８
Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎ ＰＲ．ｅｔ ａｌ．，２００４）が含まれた（これらはＦｃＲｎに対
するＩｇＧ１結合性を増加させることが示されている）。全ての置換は、部位特異的突然
変異誘発によって製造者の指示（ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ ＩＩ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号２００５２１）に従って作成される。全てのコンス
トラクトのヌクレオチド配列は、当業者に公知の標準的な技法により確認する。

以下の態様を包含し得る。
［１］ モノクローナル抗体であって、ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物に結合する、モノクローナル抗体。
［２］ タウに特異的に結合するヒト抗体由来の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常領域とを含むキメラ抗体であり、前記キメラ抗体が前記ヒト抗体と異なる、上記［１］に記載の抗体。
［３］ タウに特異的に結合するヒト抗体由来の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常領域とを含むキメラ抗体であり、前記キメラ抗体の定常領域が前記ヒト抗体の定常領域と異なる、上記［１］に記載の抗体。
［４］ タウに特異的に結合する天然に存在するヒト抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１抗体の組換え定常領域とを含むキメラ抗体である、上記［１］に記載の抗体。
［５］ ヒト抗体由来の天然に存在するヒト軽鎖及び重鎖可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である、上記［１］に記載の抗体。
［６］ 天然に存在するヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である、上記［１］に記載の抗体。
［７］ ヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である、上記［１］に記載の抗体。
［８］ ａ）ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物に結合し、ｂ）正常ヒト脳組織内のタウに結合せず、且つｃ）進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）脳組織内のタウ沈着物に結合しない、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［９］ リン酸化型特異的である、上記［８］に記載の抗体。
［１０］ 配列番号３１５又は配列番号３５３のアミノ酸配列を含むペプチドに結合し、且つ配列番号３１６又は配列番号３５６のアミノ酸配列を含むペプチドに結合しない、上記［８］又は［９］に記載の抗体。
［１１］ ａ）配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１６６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６７の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６８の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｂ）配列番号１６９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体からなる群から選択される、上記［８］〜［１０］のいずれか一項に記載の抗体。
［１２］ 配列番号８７のＶＨの抗原結合部位と配列番号８８のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［８］〜［１１］のいずれか一項に記載の抗体。
［１３］ 配列番号９１のＶＨの抗原結合部位と配列番号９２のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［８］〜［１１］のいずれか一項に記載の抗体。
［１４］ ａ）配列番号１７５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７９の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８０の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｂ）配列番号１８１の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８２の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８３の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８４の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｃ）配列番号１８５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１８８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８９の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｄ）配列番号１９０の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９１の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９２の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９３の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｅ）配列番号１９６の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９７の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９９の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｆ）配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｇ）配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｈ）配列番号２１９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２２１の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体からなる群から選択される、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［１５］ 配列番号９５のＶＨの抗原結合部位と配列番号９６のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［１６］ 配列番号９９のＶＨの抗原結合部位と配列番号１００のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［１７］ 配列番号１０３のＶＨの抗原結合部位と配列番号１０４のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［１８］ 配列番号１０７のＶＨの抗原結合部位と配列番号１０８のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［１９］ 配列番号１１１のＶＨの抗原結合部位と配列番号１１２のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［２０］ 配列番号１２３のＶＨの抗原結合部位と配列番号１２４のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［２１］ 配列番号１２７のＶＨの抗原結合部位と配列番号１２８のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［２２］ 配列番号１３１のＶＨの抗原結合部位と配列番号１３２のＶＬの抗原結合部位とを含む、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体。
［２３］ 上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載の抗体の抗原結合断片。
［２４］ 上記［１］〜［２３］のいずれか一項に記載の抗体の機能変異体。
［２５］ 上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載の抗体、及び／又は上記［２３］に記載の抗原結合断片、及び／又は上記［２４］に記載の機能変異体を含むイムノコンジュゲートであって、少なくとも１つの治療用薬剤及び／又は検出可能薬剤をさらに含む、イムノコンジュゲート。
［２６］ 上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載の抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、及び／又は上記［２４］に記載の機能変異体をコードする単離核酸。
［２７］ 上記［２６］に記載の核酸を含むベクター。
［２８］ 上記［２７］に記載のベクターを含む宿主細胞。
［２９］ 上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載の抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、及び／又は上記［２４］に記載の機能変異体を作製する方法であって、上記［２８］に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記宿主細胞によって産生された前記抗体又はその断片を回収するステップとを含む、方法。
［３０］ 上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載の抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、上記［２４］に記載の機能変異体、及び／又は上記［２５］に記載のイムノコンジュゲートを含む医薬組成物であって、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、医薬組成物。
［３１］ 医薬として使用される、上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載の抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、上記［２４］に記載の機能変異体、上記［２５］に記載のイムノコンジュゲート、又は上記［３０］に記載の医薬組成物。
［３２］ アルツハイマー病、又はタウに関連する記憶及び／若しくは認知障害の予防若しくは治療、又はそれらの組み合わせに使用される、上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載のキメラ抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、上記［２４］に記載の機能変異体、上記［２５］に記載のイムノコンジュゲート、又は上記［３０］に記載の医薬組成物。
［３３］ 少なくとも１つの上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載のキメラ抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、上記［２４］に記載の機能変異体、上記［２５］に記載のイムノコンジュゲート、若しくは上記［３０］に記載の医薬組成物、又はそれらの組み合わせを含む、キット。
［３４］ アルツハイマー病、又はタウに関連する記憶及び／若しくは認知障害を検出又は診断する方法であって、ａ）上記［１］〜［２２］のいずれか一項に記載のキメラ抗体、上記［２３］に記載の抗原結合断片、上記［２４］に記載の機能変異体、又は上記［２５］に記載のイムノコンジュゲートを使用して試料中のタウ抗原のレベルをアッセイするステップと、ｂ）ヒト生体試料を使用してアルツハイマー病、又は記憶及び／若しくは認知障害を検出又は診断するステップとを含む、方法。
［３５］ 前記ヒト生体試料が、末梢血、血清、血漿、尿、脳脊髄液、組織生検、手術標本、細針吸引物、剖検材料、細胞培養上清、単離細胞、発酵上清、又は組織ホモジネートである、上記［３４］に記載の方法。

Claims (35)

1. モノクローナル抗体であって、ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物に結合する、モノクロー
   ナル抗体。
2. タウに特異的に結合するヒト抗体由来の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常
   領域とを含むキメラ抗体であり、前記キメラ抗体が前記ヒト抗体と異なる、請求項１に記
   載の抗体。
3. タウに特異的に結合するヒト抗体由来の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１の組換え定常
   領域とを含むキメラ抗体であり、前記キメラ抗体の定常領域が前記ヒト抗体の定常領域と
   異なる、請求項１に記載の抗体。
4. タウに特異的に結合する天然に存在するヒト抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１抗体の組
   換え定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項１に記載の抗体。
5. ヒト抗体由来の天然に存在するヒト軽鎖及び重鎖可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及
   び軽鎖定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項１に記載の抗体。
6. 天然に存在するヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽
   鎖定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項１に記載の抗体。
7. ヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域と組換えヒトＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域とを
   含むキメラ抗体である、請求項１に記載の抗体。
8. ａ）ヒトＡＤ脳組織内のタウ沈着物に結合し、ｂ）正常ヒト脳組織内のタウに結合せず
   、且つｃ）進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）脳組織内のタウ沈着物に結合しない、請求項１〜
   ７のいずれか一項に記載の抗体。
9. リン酸化型特異的である、請求項８に記載の抗体。
10. 配列番号３１５又は配列番号３５３のアミノ酸配列を含むペプチドに結合し、且つ配列
    番号３１６又は配列番号３５６のアミノ酸配列を含むペプチドに結合しない、請求項８又
    は９に記載の抗体。
11. ａ）配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配
    列番号１６５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１６６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１６７
    の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１６８の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｂ）配列番号
    １６９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１７１の
    重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２
    領域、及び配列番号１７４の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体からなる群から選択される、請
    求項８〜１０のいずれか一項に記載の抗体。
12. 配列番号８７のＶＨの抗原結合部位と配列番号８８のＶＬの抗原結合部位とを含む、請
    求項８〜１１のいずれか一項に記載の抗体。
13. 配列番号９１のＶＨの抗原結合部位と配列番号９２のＶＬの抗原結合部位とを含む、請
    求項８〜１１のいずれか一項に記載の抗体。
14. ａ）配列番号１７５の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配
    列番号１７７の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７９
    の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８０の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｂ）配列番号
    １８１の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１８２の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８３の
    重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１７２の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２
    領域、及び配列番号１８４の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｃ）配列番号１８５の重鎖Ｃ
    ＤＲ１領域、配列番号１８６の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１８７の重鎖ＣＤＲ３領
    域、配列番号１８８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列
    番号１８９の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｄ）配列番号１９０の重鎖ＣＤＲ１領域、配
    列番号１９１の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９２の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１
    ９３の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９４の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９５の軽
    鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｅ）配列番号１９６の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１９７の
    重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号１９９の軽鎖ＣＤ
    Ｒ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ３領域
    を含む抗体、ｆ）配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領
    域、及び配列番号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列
    番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｇ
    ）配列番号２１３の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１４の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番
    号２１５の重鎖ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７４の軽
    鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体、ｈ）配列番号２１
    ９の重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２２０の重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２２１の重鎖
    ＣＤＲ３領域、配列番号２１８の軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１７３の軽鎖ＣＤＲ２領域
    、及び配列番号２１７の軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗体からなる群から選択される、請求項
    １〜７のいずれか一項に記載の抗体。
15. 配列番号９５のＶＨの抗原結合部位と配列番号９６のＶＬの抗原結合部位とを含む、請
    求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
16. 配列番号９９のＶＨの抗原結合部位と配列番号１００のＶＬの抗原結合部位とを含む、
    請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
17. 配列番号１０３のＶＨの抗原結合部位と配列番号１０４のＶＬの抗原結合部位とを含む
    、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
18. 配列番号１０７のＶＨの抗原結合部位と配列番号１０８のＶＬの抗原結合部位とを含む
    、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
19. 配列番号１１１のＶＨの抗原結合部位と配列番号１１２のＶＬの抗原結合部位とを含む
    、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
20. 配列番号１２３のＶＨの抗原結合部位と配列番号１２４のＶＬの抗原結合部位とを含む
    、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
21. 配列番号１２７のＶＨの抗原結合部位と配列番号１２８のＶＬの抗原結合部位とを含む
    、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
22. 配列番号１３１のＶＨの抗原結合部位と配列番号１３２のＶＬの抗原結合部位とを含む
    、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
23. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体の抗原結合断片。
24. 請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体の機能変異体。
25. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、及び／又は請求項２３に記載の抗原結合
    断片、及び／又は請求項２４に記載の機能変異体を含むイムノコンジュゲートであって、
    少なくとも１つの治療用薬剤及び／又は検出可能薬剤をさらに含む、イムノコンジュゲー
    ト。
26. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、請求項２３に記載の抗原結合断片、及び
    ／又は請求項２４に記載の機能変異体をコードする単離核酸。
27. 請求項２６に記載の核酸を含むベクター。
28. 請求項２７に記載のベクターを含む宿主細胞。
29. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、請求項２３に記載の抗原結合断片、及び
    ／又は請求項２４に記載の機能変異体を作製する方法であって、請求項２８に記載の宿主
    細胞を培養するステップと、前記宿主細胞によって産生された前記抗体又はその断片を回
    収するステップとを含む、方法。
30. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、請求項２３に記載の抗原結合断片、請求
    項２４に記載の機能変異体、及び／又は請求項２５に記載のイムノコンジュゲートを含む
    医薬組成物であって、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、医薬組
    成物。
31. 医薬として使用される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、請求項２３に記
    載の抗原結合断片、請求項２４に記載の機能変異体、請求項２５に記載のイムノコンジュ
    ゲート、又は請求項３０に記載の医薬組成物。
32. アルツハイマー病、又はタウに関連する記憶及び／若しくは認知障害の予防若しくは治
    療、又はそれらの組み合わせに使用される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のキメ
    ラ抗体、請求項２３に記載の抗原結合断片、請求項２４に記載の機能変異体、請求項２５
    に記載のイムノコンジュゲート、又は請求項３０に記載の医薬組成物。
33. 少なくとも１つの請求項１〜２２のいずれか一項に記載のキメラ抗体、請求項２３に記
    載の抗原結合断片、請求項２４に記載の機能変異体、請求項２５に記載のイムノコンジュ
    ゲート、若しくは請求項３０に記載の医薬組成物、又はそれらの組み合わせを含む、キッ
    ト。
34. アルツハイマー病、又はタウに関連する記憶及び／若しくは認知障害を検出又は診断す
    る方法であって、ａ）請求項１〜２２のいずれか一項に記載のキメラ抗体、請求項２３に
    記載の抗原結合断片、請求項２４に記載の機能変異体、又は請求項２５に記載のイムノコ
    ンジュゲートを使用して試料中のタウ抗原のレベルをアッセイするステップと、ｂ）ヒト
    生体試料を使用してアルツハイマー病、又は記憶及び／若しくは認知障害を検出又は診断
    するステップとを含む、方法。
35. 前記ヒト生体試料が、末梢血、血清、血漿、尿、脳脊髄液、組織生検、手術標本、細針
    吸引物、剖検材料、細胞培養上清、単離細胞、発酵上清、又は組織ホモジネートである、
    請求項３４に記載の方法。

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