JP2020534826A5 - - Google Patents
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Claims (35)
- 真核細胞において標的RNAに対するRNAサイレンシング分子をコードするか又はそれにプロセシングされる遺伝子を改変する方法であって、ただし前記真核細胞は植物細胞ではなく、前記方法は、前記RNAサイレンシング分子のサイレンシング特異性を第2の標的RNAに向けてリダイレクトするDNA編集剤を前記真核細胞に導入し、それによって前記RNAサイレンシング分子をコードする前記遺伝子を改変する工程を含み、前記標的RNA及び前記第2の標的RNAは異なる方法。
- 真核細胞においてRNAサイレンシング活性を有さない非コードRNA分子をコードするか又はそれにプロセシングされる遺伝子を改変する方法であって、ただし前記真核細胞は植物細胞ではなく、前記方法は、目的の標的RNAに対する前記非コードRNA分子のサイレンシング特異性を付与するDNA編集剤を前記真核細胞に導入し、それによって前記非コードRNA分子をコードするか又はそれにプロセシングされる前記遺伝子を改変する工程を含む方法。
- 前記RNAサイレンシング分子をコードする前記遺伝子が、前記真核細胞に対して内在性である請求項1に記載の方法。
- 前記非コードRNA分子をコードするか又はそれにプロセシングされる前記遺伝子が、前記真核細胞に対して内在性である請求項2に記載の方法。
- 前記標的RNAと前記第2の標的RNAとが異なる遺伝子にコードされている、請求項1に記載の方法。
- 前記RNAサイレンシング分子をコードする前記遺伝子を前記改変することが、前記RNAサイレンシング分子に、前記第2の標的RNAに対して少なくとも45%の相補性を付与することを含む請求項1、3又は5に記載の方法。
- 前記非コードRNA分子をコードするか又はそれにプロセシングされる前記遺伝子を前記改変することが、前記非コードRNA分子に、前記目的の標的RNAに対して少なくとも45%の相補性を付与することを含む請求項2又は4に記載の方法。
- 前記RNAサイレンシング分子の前記サイレンシング特異性が、前記第2の標的RNAのRNAレベル又はタンパク質レベルを測定することによって決定される請求項1、3、5又は6に記載の方法。
- 前記非コードRNA分子の前記サイレンシング特異性が、前記目的の標的RNAのRNAレベル又はタンパク質レベルを測定することによって決定される請求項2、4又は請求項7に記載の方法。
- 前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子の前記サイレンシング特異性が表現型的に決定される請求項1から9のいずれか一項に記載の方法であって、前記表現型的に決定されることは、任意で、細胞サイズ、成長速度/阻害、細胞形状、細胞膜完全性、腫瘍サイズ、腫瘍形状、生物の色素沈着、感染パラメータ及び炎症パラメータからなる群から選択される少なくとも1つの表現型の決定によってもたらされる、方法。
- 前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子の前記サイレンシング特異性が遺伝子型的に決定される請求項1から10のいずれか一項に記載の方法であって、任意で、表現型が遺伝子型の前に決定されるか、あるいは、遺伝子型が表現型の前に決定される、方法。
- 前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子が、
(a)前駆体からプロセシングされる;及び/又は
(b)RNA干渉(RNAi)分子であり、任意で、前記RNAi)分子は、低分子干渉RNA(siRNA)、短鎖ヘアピンRNA(shRNA)、マイクロRNA(miRNA)、Piwi相互作用RNA(piRNA)及びトランス作用性siRNA(tasiRNA)からなる群から選択される
請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。 - 前記非コードRNA分子が、核内小分子RNA(snRNA)、核小体小分子RNA(snoRNA)、長鎖非コードRNA(lncRNA)、リボソームRNA(rRNA)、転移RNA(tRNA)、リピート由来RNA、及び転移因子RNAからなる群から選択される請求項2、4、7および9から11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子がRNAi分子であり、前記RNAi分子が、二次RNA構造を保存し、細胞RNAi因子によって認識されるように改変される請求項12に記載の方法。
- 前記遺伝子の前記改変は、欠失、挿入、点突然変異及びそれらの組み合わせからなる群から選択される改変によって行われる請求項1から14のいずれか一項に記載の方法であって、前記改変は、任意で、
(a)前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子のステム領域にある;
(b)前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子のループ領域にある;
(c)前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子の非構造化領域にある;
(d)前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子のステム領域及びループ領域にある;又は
(e)前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子のステム領域及びループ領域、並びに非構造化領域にある
方法。 - 前記改変が最大200ヌクレオチドの改変を含む、及び/又は、前記方法は前記真核細胞にドナーオリゴヌクレオチド配列を導入することをさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 前記DNA編集剤が、
(a)植物発現性プロモーターに作動可能に連結された少なくとも1つのgRNAを含む;及び/又は
(b)(i)エンドヌクレアーゼを含まない;もしくは
(ii)エンドヌクレアーゼを含み、任意で、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ(TALEN)及びCRISPRからなる群から選択されるDNA編集を含む
請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。 - 前記DNA編集剤がエンドヌクレアーゼを含み、前記エンドヌクレアーゼがCas9を含む請求項17に記載の方法。
- 前記DNA編集剤が、
(a)DNA、RNA又はRNPとして前記細胞に適用される;及び/又は
(b)真核細胞における発現を監視するためのレポーターに連結され、任意で、前記レポーターは蛍光タンパク質である
請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。 - 前記目的の標的RNA又は前記第2の標的RNAが、
(a)前記真核細胞に対して内在性であり、任意で、癌に関連するか、又は
(b)前記真核細胞に対して外来性であり、任意で感染症に関連する
請求項1から19のいずれか一項に記載の方法。 - 前記真核細胞が、
(a)哺乳動物、昆虫、線虫、鳥類、爬虫類、魚類、甲殻類、真菌及び藻類からなる群から選択される真核生物から得られる;及び/又は
(b)哺乳動物細胞であり、任意で、前記哺乳動物細胞は(i)ヒト細胞もしくは(ii)非ヒト生物の細胞を含む;及び/又は
(c)全能性幹細胞である
請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。 - 前記真核細胞が自然環境から単離される、請求項1から21のいずれか一項に記載の方法。
- 必要とする対象において感染症を処置する方法であって、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、非コードRNA分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされるか又はRNAサイレンシング分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされる遺伝子を改変し、それによって前記対象において前記感染症を処置する工程を含み、前記目的の標的RNAは、前記感染症の発症又は進行と関連する方法。
- 必要とする対象において単一遺伝子劣性遺伝疾患を処置する方法であって、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、非コードRNA分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされるか又はRNAサイレンシング分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされる遺伝子を改変し、それによって前記対象において前記単一遺伝子劣性遺伝疾患を処置する工程を含み、前記目的の標的RNAは前記単一遺伝子劣性遺伝疾患と関連する方法。
- 必要とする対象において自己免疫疾患を処置する方法であって、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、非コードRNA分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされるか又はRNAサイレンシング分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされる遺伝子を改変し、それによって前記対象において前記自己免疫疾患を処置する工程を含み、前記目的の標的RNAは前記自己免疫疾患と関連する方法。
- 必要とする対象において癌性疾患を処置する方法であって、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、非コードRNA分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされるか又はRNAサイレンシング分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされる遺伝子を改変し、それによって前記対象において前記癌性疾患を処置する工程を含み、前記目的の標的RNAは前記癌性疾患と関連する方法。
- 必要とする対象において化学療法剤の有効性及び/又は特異性を増強する方法であって、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、非コードRNA分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされるか又はRNAサイレンシング分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされる遺伝子を改変し、それによって前記対象において化学療法剤の有効性及び/又は特異性を増強する工程を含み、前記目的の標的RNAは前記化学療法剤の有効性及び/又は特異性の増強と関連する方法。
- 必要とする対象において細胞アポトーシスを誘導する方法であって、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、非コードRNA分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされるか又はRNAサイレンシング分子をコードするか若しくはそれにプロセシングされる遺伝子を改変し、それによって前記対象において細胞アポトーシスを誘導する工程を含み、前記目的の標的RNAは前記アポトーシスと関連する方法。
- 真核性非ヒト生物を生成する方法であって、ただし前記生物は植物ではなく、前記生物の細胞の少なくともいくつかは、目的の標的RNAに対するサイレンシング特異性を含む非コードRNA分子をコードするか又はそれにプロセシングされる改変遺伝子を含み、前記方法は、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法に従って、遺伝子を改変し、それによって前記真核性非ヒト生物を生成する工程を含む方法。
- 前記RNAサイレンシング分子が、前記第2の標的RNAからのmRNA及び/又はタンパク質産物のレベルにおける観察可能な減少を提供する、請求項1、3、5、6、8、10から12、及び14から29のいずれか一項に記載の方法。
- 前記RNAサイレンシング分子の元の特異性が破壊される、請求項1から30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記改変が、ネイティブなRNAサイレンシング分子と比較して10から250ヌクレオチドの改変である、請求項1から31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記改変が、少なくとも5塩基の連続する核酸配列における改変である、請求項1から32のいずれか一項に記載の方法。
- 改変前の前記非コードRNA分子又は前記RNAサイレンシング分子が、前記第2の標的RNA又は前記目的の標的RNAに対して、少なくとも約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%又は98%の相補性、かつ99%までの相補性を有するものである、請求項1から33のいずれか一項に記載の方法。
- RNAサイレンシング分子をコードするか又はそれにプロセシングされる遺伝子の標的RNAに対するサイレンシング特異性を第2の標的RNAに向けてリダイレクトするDNA編集剤であって、前記標的RNAと前記第2の標的RNAとは異なり、前記第2の標的RNAは感染症、単一遺伝子劣性遺伝疾患、自己免疫疾患又は癌性疾患と関連し、それを必要とする対象における、前記感染症、前記単一遺伝子劣性遺伝疾患、前記自己免疫疾患又は前記癌性疾患の治療に使用するための、剤。
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