JP2020518284A - 細菌を保管するための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年4月28日に提出された米国仮出願第62/491,739号の優先権を主張しており、その全体は、参照によって全ての目的について本明細書に組み込まれる。
a)アシダミノコッカス(Acidaminococcus)種、またはアシダミノコッカス(Acidaminococcaceae)科の構成種である第1の細菌種を、少なくとも1つの第2の細菌種と組み合わせて細菌混合物を生成することであって、第1の細菌種は、少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で細菌混合物中に存在し、アシダミノコッカス科の構成種は、スクシニスピラ モビリス(Succinispira mobilis)である、ことと、
b)細菌混合物を培養して培養細菌混合物を生成することであって、培養は、培養細菌混合物中の少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な時間にわたる、ことと、
c)培養細菌混合物を凍結保存して凍結保存細菌培養物を生成することであって、再構成後の凍結保存細菌培養物は、第1の細菌種の不存在下で少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の凍結保存細菌培養物の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、ことと、を含む。
a)アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種を、少なくとも1つの第2の細菌種と組み合わせて細菌混合物を生成することであって、第1の細菌種は、少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で細菌混合物中に存在する、ことと、
b)細菌混合物を培養して培養細菌混合物を生成することであって、培養は、培養細菌混合物中の少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な時間にわたる、ことと、
c)培養細菌混合物を凍結保存して凍結保存細菌培養物を生成することであって、再構成後の凍結保存細菌培養物は、第1の細菌種の不存在下で少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の凍結保存細菌培養物の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、ことと、を含む。
人工凍結保存培地中の細菌種の混合物を含み、当該混合物は、
a)アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種と、
b)少なくとも1つの第2の細菌種と、
を含み、
ここで、第1の細菌種は、人工凍結保存製剤の再構成時に少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で凍結保存製剤中に存在し、
再構成後の人工凍結保存製剤は、第1の細菌種の不存在下で少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の人工凍結保存製剤の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す。
人工凍結保存培地中の細菌種の混合物であって、当該混合物は、
a)第1の細菌種であって、第1の細菌種は、アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである、第1の細菌種と、
b)少なくとも1つの第2の細菌種であって、少なくとも1つの第2の細菌種は、治療有効量で存在する、少なくとも1つの第2の細菌種と、を含み、
第1の細菌種は、人工凍結保存製剤の再構成時に少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で凍結保存製剤中に存在し、
再構成後の人工凍結保存製剤は、第1の細菌種の不存在下で少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の人工凍結保存製剤の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、混合物と、
薬学的に許容される賦形剤と、
を含む、医薬組成物が提示される。
アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種を取得することと、
第2の細菌種を取得することと、
十分な量の第1の細菌種を、十分な量の第2の細菌種と組み合わせて、細菌混合物を作製することであって、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の10%〜50%のアシダミノコッカス インテスティニを含む、ことと、
細菌混合物を一定期間培養して、培養混合物を得ることと、
培養混合物を保管して凍結保存細菌培養物を得ることと、
を含む方法であって、
凍結保存細菌培養物が再構成されると、再構成凍結保存細菌培養物は、第2の細菌種から本質的になる再構成細菌ストックと比較して、第2の細菌種のmL当たりコロニー形成単位(cfu/mL)で測定された細菌増殖が少なくとも10倍増加している。
保管細菌混合物であって、
アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである十分な量の第1の細菌種と、
十分な量の第2の細菌種と、
を含む保管細菌混合物を含んでおり、
保管細菌混合物が再構成されると、再構成保存細菌混合物は、第2の細菌種から本質的になる再構成細菌ストックと比較して、mL当たりコロニー形成単位(cfu/mL)で測定された細菌増殖が、少なくとも10倍増加している。
本明細書で使用されるとき、単数形の「ある」および「その」は、文脈が明らかにそうでないと示さない限り、複数形を含む。態様または実施形態が、マーカッシュグループまたは他のグループ化代替物に関して記載される場合、それによって本発明がグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関してもまた記載されていることを、当業者は認識するであろう。
提供者は、実験室近くの専用便所で、提供された滅菌ポットに糞便を***するように求められる。ポットは、直ちに実験室に運ばれ、***から5分以内に嫌気性容器に入れられる。分離物のうちのいくつか、特にロゼブリア属の種は、酸素に対して非常に感受性であることに留意し、したがって、***試料をたとえ短期間(5分)であっても酸素への曝露から保護することが重要である。
5%脱線維素ヒツジ血液が補充された難培養性嫌気性寒天培地(Lab 90);
血液補充なしの難培養性嫌気性寒天;
難培養性嫌気性寒天+5%脱線維素ヒツジ血液+3%「水金」(以下で説明);
難培養性嫌気性寒天+3%水金;
デマン−ロゴサ−シャーぺ(MRS)培地(Oxioid Limited(英国、ハンプシャー州)から購入)、ラクトバチルス(Lactobacillus)属の種およびビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属の種に富む);
実験室内で調合されたムチン寒天(ムチンを唯一の炭素源とする最小培地。これを使用するのは、ヒト腸管微生物叢のいくつかの菌種がムチンを炭素源として利用することが既知であるためである);および
LS174 T細胞(ムチンを分泌するヒト結腸細胞株。ATCCから入手可能)のコンフルエントな培養物から採取した3%v/vの使用済み細胞培養上清を補充した寒天であるLS寒天。
ヒトの遠位腸管から細菌を分離するための例示的なプロトコルを以下に示す。本発明者らは、米国公開出願第20140342438号に記載されているように、Multifors発酵システム(Infors、スイス)を改変することにより、ヒト遠位腸管内微生物叢をモデル化する単段ケモスタット容器を開発した。発酵システムからケモスタットへの変換は、コンデンサを遮断し、培養物中に窒素ガスをバブリングすることにより達成された。圧力が蓄積すると、排出物を金属管(以前はサンプリングチューブ)の外側へ設定された高さに押し出し、400mLの作業体積を維持できるようにする。
新鮮な糞便試料は、健康な女性または男性のドナーに至るまで(例えば、既知の障害/疾患を有する個人への便の提供前の10年間に抗生物質の使用歴がない)、様々なヒトのドナーから分離することができる。これらの実験における糞便の収集および使用については、研究倫理委員会(REB)の承認が得られている。
400mLの最終作業体積を得るために、例えば、10%接種材料100mLを、それぞれの容器内の滅菌培地300mLに添加する。接種直後、pH制御がオンになり、容器のpHは、約6.9〜7.0に調整され、維持される。接種後の最初の24時間の間は、群集をバッチ培養で増殖させ、群集がin vivo条件からin vitro条件に適応し、培養物の流出を防ぐようにする。この間、継続的にpHを調整しながら、容器を加熱し、脱気し、かつ撹拌する。この24時間の後、供給ポンプがオンになり、容器がケモスタットとして動作する。新鮮な培地が継続的に追加され、排出物が継続的に除去される。
培地は、次の手順で調製してもよい(2Lの場合)。
いくつかの実施形態では、本発明は、
アシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)である第1の細菌種を取得することと、
第2の細菌種を取得することと、
十分な量の第1の細菌種を、十分な量の第2の細菌種と組み合わせて、細菌混合物を生成することであって、当該細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の10%〜50%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む、ことと、
細菌混合物をある期間にわたって培養して、培養混合物を得ることと、
培養混合物を保管して、凍結保存細菌培養物を得ることと、
を含む方法であって、
凍結保存細菌培養物が再構成されると、再構成凍結保存細菌培養物は、第2の細菌種から本質的になる再構成細菌ストックと比較して、第2の細菌種のmL当たりコロニー形成単位(cfu/mL)で測定された細菌増殖が少なくとも10倍増加している、
方法を提供する。
いくつかの実施形態では、アシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)は、生存している。
いくつかの実施形態では、少なくとも1つの第2の細菌種は、哺乳類の糞便に由来する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの第2の細菌種は、ヒトの糞便に由来する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの第2の細菌種は、健康な患者に由来する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの第2の細菌種は、米国特許出願第20140342438号に開示された方法に従って健康な患者に由来する。
いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の0.1%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の1%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の10%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の20%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の30%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の40%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の50%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の60%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の70%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の80%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。いくつかの実施形態では、細菌混合物は、細菌混合物中の細菌の総量の90%〜99.9%のアシダミノコッカス種(例えば、アシダミノコッカス インテスティニもしくはアシダミノコッカス フェルメンタンス)またはアシダミノコッカス科標準種(例えば、スクシニスピラ モビリス)を含む。
いくつかの実施形態では、培養は、少なくとも30分である。いくつかの実施形態では、培養は、30分〜2時間である。いくつかの実施形態では、培養は、1時間〜2時間である。いくつかの実施形態では、培養は、少なくとも1時間である。
いくつかの実施形態では、凍結保存細菌培養物は、リボフラビン、システイン、イヌリン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、凍結保存細菌培養物を再構成することは、凍結培養物または凍結かつ凍結乾燥(フリーズドライ)培養物について当該技術分野で既知の方法を使用して実施することができる。非限定的な例として、凍結乾燥培養物を再構成するために、好適な量の培地を使用して、ストリーキング、培養チューブでの増殖などのために細菌種を再水和することができる。更なる非限定的な例として、凍結培養物を再構成するために、凍結培養物の一部を解凍し、プレート、培養物などに接種するために使用することができる。いくつかの実施形態では、培地は、米国特許出願第20140342438号に開示された方法に従って胃腸疾患を有する患者から取得される。
一態様では、凍結保存製剤を含む組成物が提示され、
人工凍結保存培地中の細菌種の混合物を含み、当該混合物は、
a)アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種と、
b)少なくとも1つの第2の細菌種と、
を含み、
ここで、第1の細菌種は、人工凍結保存製剤の再構成時に少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で凍結保存製剤中に存在し、
再構成後の人工凍結保存製剤は、第1の細菌種の不存在下で少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の人工凍結保存製剤の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す。
本明細書で使用されるとき、人工凍結保存培地は、細胞(例えば、細菌細胞)を凍結保存するのに適した合成培地を指し、「人の手」によって作られる。
細菌細胞の生存能力および増殖能力を決定するための様々なアッセイが当技術分野で既知である。例示的な実施形態では、細菌増殖アッセイは、好適な基質(例えば、好適な細菌増殖培地を含む寒天プレート)上にストリーキング/プレーティングし、当該細菌の増殖に適した条件下でプレートをインキュベートすることを含む。特定の実施形態では、プレートは、嫌気性条件下でインキュベートされる。例えば、本明細書に提示される実施例を参照されたい。
培養された細菌について、染色緩衝液中で5×105〜9×106細菌/mLのおおよその濃度範囲に希釈する。殺傷細菌を調製するために、0.5mLのSPOR−KLENZ(商標)(Steris Corporation(St.Louis、MO)、カタログ番号6525−01)殺菌剤で希釈する前に、0.5mLの培養液を5分間混合する。
1.12×75mmポリスチレンチューブにラベルを付ける。
2.細菌懸濁液または試料をボルテックスし、染色緩衝液で少なくとも1:10に希釈する。
3.染色緩衝液で上記のように希釈した細菌懸濁液200μLを添加する。
4.5.0μLのそれぞれの色素溶液をチューブに添加する。最終染色濃度は、TOについては420nM、PIについては48μmである。
5.ボルテックスし、室温で5分間インキュベートする。
6.50μLのBD Liquid Counting Beadsを染色チューブにリバースピペッティングし、生菌、死菌、および総菌の濃度を決定する。
7.例えば、BD FACSブランドのフローサイトメータ(BD FACSCaliburフローサイトメータまたは同等品)で分析する。
・閾値−SSC
・FSC−E01、対数増幅
・SSC−375 V、対数増幅
・FL1−600 V、対数増幅
・FL3−800 V、対数増幅
・補正−使用せず
Claims (62)
- 凍結保存後の細菌の生存率を改善するための方法であって、
a)アシダミノコッカス(Acidaminococcus)種、またはアシダミノコッカス(Acidaminococcaceae)科の構成種である第1の細菌種を、少なくとも1つの第2の細菌種と組み合わせて細菌混合物を生成することであって、前記第1の細菌種は、前記少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で前記細菌混合物中に存在し、前記アシダミノコッカス科の構成種は、スクシニスピラ モビリス(Succinispira mobilis)である、ことと、
b)前記細菌混合物を培養して培養細菌混合物を生成することであって、前記培養は、前記培養細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に前記凍結保護を与えるのに十分な時間にわたる、ことと、
c)前記培養細菌混合物を凍結保存して、凍結保存細菌培養物を生成することと、
を含んでおり、
再構成後の前記凍結保存細菌培養物は、前記第1の細菌種の不存在下で前記少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の凍結保存細菌培養物の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて前記少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、方法。 - 前記アシダミノコッカス種は、アシダミノコッカス インテスティニ(Acidaminococcus intestini)またはアシダミノコッカス フェルメンタンス(Acidaminococcus fermentans)である、請求項1に記載の方法。
- 前記細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な前記第1の細菌種の量は、前記細菌混合物中の細菌の総量の10%〜50%である、請求項1に記載の方法。
- 前記細菌増殖アッセイは、細菌プレーティングアッセイである、請求項1記載の方法。
- 前記細菌プレーティングアッセイは、mL当たりコロニー形成単位(cfu/mL)を測定する、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、凍結保護屈折性である、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、哺乳動物の糞便に由来する、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、ヒトの糞便に由来する、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、コプロコッカス コメス(Coprococcus comes)、ドレア フォルミシゲネランス(Dorea formicigenerans)、ユウバクテリウム コントルタム(Eubacterium contortum)、ルミノコッカス ラクタリス(Ruminococcus lactaris)、ユウバクテリウム レクターレ(Eubacterium rectale)、フィーカリバクテリウム プラウスニッツィイ(Faecalibacterium prausnitzii)、ユウバクテリウム エリゲンス(Eubacterium eligens)、ルミノコッカス トルキース(Ruminococcus torques)、ロゼブリア インテスティナーリス(Roseburia intestinalis)、アナエロスティペス ハドルス(Anaerostipes hadrus)、ブラウティア ルティ(Blautia luti)、ルミノコッカス オベウム(Ruminococcus obeum)、ブラウティア スターコリス(Blautia stercoris)、ドレア ロンギカテナ(Dorea longicatena)、クロストリジウム スパイロフォルメ(Clostridium spiroforme)、ユウバクテリウム デスモランス(Eubacterium desmolans)、クロストリジウム アエロトレランス(Clostridium aerotolerans)、クロストリジウム ラクタティフェルメンタンス(Clostridium lactatifermentans)、ユウバクテリウム ハリイ(Eubacterium hallii)、クロストリジウム ハイレモンアエ(Clostridium hylemonae)、ロゼブリア イヌリニボランス(Roseburia inulinivorans)、ロゼブリア ホミニス(Roseburia hominis)、およびロゼブリア ファエシス(Roseburia faecis)のうちの少なくとも1つである、請求項1に記載の方法。
- 前記凍結保存は、凍結および凍結乾燥を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記再構成は、再構成培地による前記凍結保存細菌培養物の希釈を含んでおり、前記凍結保存細菌培養物と前記再構成培地の比は1:1である、請求項1に記載の方法。
- 前記凍結保存細菌培養物は、凍結乾燥保護培地を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記凍結乾燥保護培地は、スクロース、フィコール70、およびポリビニルピロリドンのうちの少なくとも1つを含む、請求項12に記載の方法。
- 前記凍結保存細菌培養物は、リボフラビン、システイン、およびイヌリンのうちの少なくとも1つを含む、請求項1記載の方法。
- 前記凍結保存細菌培養物は、凍結保護培地を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記凍結保護培地は、グリセロール、ポリエチレングリコール(PEG)、およびジメチルスルホキシド(DMSO)のうちの少なくとも1つを含む、請求項15に記載の方法。
- 前記培養細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に前記凍結保護を与えるのに十分な前記期間は、少なくとも30分または少なくとも1時間である、請求項1に記載の方法。
- 前記培養細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に前記凍結保護を与えるのに十分な期間は、30分〜2時間または1〜2時間の範囲である、請求項1に記載の方法。
- 前記第1の細菌種は、生存している、請求項1または2に記載の方法。
- 凍結保存後の細菌の生存率を改善するための方法であって、
a)アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種を、少なくとも1つの第2の細菌種と組み合わせて細菌混合物を生成することであって、前記第1の細菌種は、前記少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で前記細菌混合物中に存在する、ことと、
b)前記細菌混合物を培養して培養細菌混合物を生成することであって、前記培養は、前記培養細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に前記凍結保護を与えるのに十分な時間にわたる、ことと、
c)前記培養細菌混合物を凍結保存して、凍結保存細菌培養物を生成することと、
を含んでおり、
再構成後の前記凍結保存細菌培養物は、前記第1の細菌種の不存在下で前記少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の凍結保存細菌培養物の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて前記少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、方法。 - 前記細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な前記第1の細菌種の量は、前記細菌混合物中の細菌の総量の10%〜50%である、請求項20に記載の方法。
- 前記細菌増殖アッセイは、細菌プレーティングアッセイである、請求項20に記載の方法。
- 前記細菌プレーティングアッセイは、mL当たりコロニー形成単位(cfu/mL)を測定する、請求項20に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、凍結保護屈折性である、請求項20に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、哺乳動物の糞便に由来する、請求項20に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、ヒトの糞便に由来する、請求項20に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、コプロコッカス コメス、ドレア フォルミシゲネランス、ユウバクテリウム コントルタム、ルミノコッカス ラクタリス、ユウバクテリウム レクターレ、フィーカリバクテリウム プラウスニッツィイ、ユウバクテリウム エリゲンス、ルミノコッカス トルキース、ロゼブリア インテスティナーリス、アナエロスティペス ハドルス、ブラウティア ルティ、ルミノコッカス オベウム、ブラウティア スターコリス、ドレア ロンギカテナ、クロストリジウム スパイロフォルメ、ユウバクテリウム デスモランス、クロストリジウム アエロトレランス、クロストリジウム ラクタティフェルメンタンス、ユウバクテリウム ハリイ、クロストリジウム ハイレモンアエ、ロゼブリア イヌリニボランス、ロゼブリア ホミニス、およびロゼブリア ファエシスのうちの少なくとも1つである、請求項20に記載の方法。
- 前記凍結保存は、凍結および凍結乾燥を含む、請求項20に記載の方法。
- 前記再構成は、再構成培地による前記凍結保存細菌培養物の希釈を含んでおり、前記凍結保存細菌培養物と前記再構成培地の比は1:1である、請求項20に記載の方法。
- 前記凍結保存細菌培養物は、凍結乾燥保護培地を含む、請求項20に記載の方法。
- 前記凍結乾燥保護培地は、スクロース、フィコール70、およびポリビニルピロリドンのうちの少なくとも1つを含む、請求項30に記載の方法。
- 前記凍結保存細菌培養物は、リボフラビン、システイン、およびイヌリンのうちの少なくとも1つを含む、請求項20に記載の方法。
- 前記凍結保存細菌培養物は、凍結保護培地を含む、請求項20に記載の方法。
- 前記凍結保護培地は、グリセロール、ポリエチレングリコール(PEG)、およびジメチルスルホキシド(DMSO)のうちの少なくとも1つを含む、請求項33に記載の方法。
- 前記培養細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に前記凍結保護を与えるのに十分な期間は、少なくとも30分または少なくとも1時間である、請求項20に記載の方法。
- 前記培養細菌混合物中の前記少なくとも1つの第2の細菌種に前記凍結保護を与えるのに十分な期間は、30分〜2時間または1〜2時間の範囲である、請求項20に記載の方法。
- 前記第1の細菌種は、生存している、請求項20に記載の方法。
- 前記細菌混合物中の前記第1の細菌種と前記少なくとも1つの第2の細菌種との比は、少なくとも1:10である、請求項1に記載の方法。
- 前記細菌混合物中の前記第1の細菌種と前記少なくとも1つの第2の細菌種との比は、少なくとも1:10である、請求項20に記載の方法。
- 凍結保存製剤で使用するためのアシダミノコッカス種であって、再構成後の前記凍結保存製剤中に存在している他の細菌種の細菌生存率を向上させる、アシダミノコッカス種。
- 凍結保存製剤を含む組成物であって、
人工凍結保存培地中の細菌種の混合物を含み、前記混合物は、
a)アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種と、
b)少なくとも1つの第2の細菌種と、
を含み、
前記第1の細菌種は、前記人工凍結保存製剤の再構成時に前記少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で前記凍結保存製剤中に存在し、
再構成後の前記人工凍結保存製剤は、前記第1の細菌種の不存在下で前記少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の人工凍結保存製剤の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて前記少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、組成物。 - 前記細菌混合物中の前記第2の細菌のうちの前記少なくとも1つに凍結保護を与えるのに十分な前記第1の細菌種の量は、前記人工凍結保存製剤中の細菌の総量の10%〜50%である、請求項41に記載の組成物。
- 前記細菌増殖アッセイは、細菌プレーティングアッセイである、請求項41に記載の組成物。
- 前記細菌プレーティングアッセイは、mL当たりコロニー形成単位(cfu/mL)を測定する、請求項41に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、凍結保護屈折性である、請求項41に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、哺乳類の糞便に由来する、請求項41に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、ヒトの糞便に由来する、請求項41に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、コプロコッカス コメス、ドレア フォルミシゲネランス、ユウバクテリウム コントルタム、ルミノコッカス ラクタリス、ユウバクテリウム レクターレ、フィーカリバクテリウム プラウスニッツィイ、ユウバクテリウム エリゲンス、ルミノコッカス トルキース、ロゼブリア インテスティナーリス、アナエロスティペス ハドルス、ブラウティア ルティ、ルミノコッカス オベウム、ブラウティア スターコリス、ドレア ロンギカテナ、クロストリジウム スパイロフォルメ、ユウバクテリウム デスモランス、クロストリジウム アエロトレランス、クロストリジウム ラクタティフェルメンタンス、ユウバクテリウム ハリイ、クロストリジウム ハイレモンアエ、ロゼブリア イヌリニボランス、ロゼブリア ホミニス、およびロゼブリア ファエシスのうちの少なくとも1つである、請求項41に記載の組成物。
- 前記人工凍結保存培地は、凍結保存剤を含む、請求項41に記載の組成物。
- 前記再構成は、再構成培地による前記凍結保存細菌培養物の希釈を含んでおり、前記凍結保存細菌培養物と前記再構成培地の比は1:1である、請求項41に記載の組成物。
- 前記人工凍結保存培地は、凍結乾燥保護培地を含む、請求項41に記載の組成物。
- 前記凍結乾燥保護培地は、スクロース、フィコール70、およびポリビニルピロリドンのうちの少なくとも1つを含む、請求項51に記載の組成物。
- 前記人工凍結保存培地は、リボフラビン、システイン、およびイヌリンのうちの少なくとも1つを含む、請求項51に記載の組成物。
- 前記人工凍結保存細菌培養物は、凍結保護培地を含む、請求項41に記載の組成物。
- 前記凍結保護培地は、グリセロール、ポリエチレングリコール(PEG)、およびジメチルスルホキシド(DMSO)のうちの少なくとも1つを含む、請求項54に記載の組成物。
- 前記第1の細菌種は、生存している、請求項41に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの第2の細菌種は、治療有効量で存在する、請求項41に記載の組成物。
- 薬学的に許容される賦形剤を更に含む、請求項41に記載の組成物。
- 凍結保存製剤を含む医薬組成物において、
人工凍結保存培地中の細菌種の混合物であって、
a)アシダミノコッカス インテスティニまたはアシダミノコッカス フェルメンタンスである第1の細菌種と、
b)治療有効量で存在する少なくとも1つの第2の細菌種と、
を含み、
前記第1の細菌種は、前記人工凍結保存製剤の再構成時に前記少なくとも1つの第2の細菌種に凍結保護を与えるのに十分な量で前記凍結保存製剤中に存在し、
再構成後の前記人工凍結保存製剤は、前記第1の細菌種の不存在下で前記少なくとも1つの第2の細菌種を含む再構成後の人工凍結保存製剤の細菌増殖と比較して、細菌増殖アッセイにおいて前記少なくとも1つの第2の細菌種について少なくとも10倍増加した細菌増殖を示す、
混合物と、
薬学的に許容される賦形剤と、
を含む、医薬組成物。 - 胃腸疾患に苦しむ患者において前記胃腸疾患の症状を改善するための方法であって、請求項59に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
- 前記胃腸疾患は、消化管のディスバイオシス、クロストリジウム ディフィシル(Clostridium difficile)(クロストリディオイデス ディフィシル(Clostridioides difficile))感染症、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、および憩室性疾患のうちの少なくとも1つを含む、請求項60に記載の方法。
- 前記炎症性腸疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎のうちの少なくとも1つである、請求項61に記載の方法。
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