JP2020515256A - 改良された抗原結合受容体 - Google Patents
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- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
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- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
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- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
Abstract
Description
本発明は、概して、Fc受容体結合が低減している変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる抗原結合受容体、およびこれらの抗原結合受容体を発現するT細胞に関する。より具体的には、本発明は、治療用抗体の変異型Fcドメインと特異的に結合/相互作用することによって動員される、抗原結合受容体をトランスフェクト/形質導入したT細胞に関する。さらにまた、本発明は、本発明のT細胞および/または本発明の抗原結合受容体を発現する核酸分子、ベクター、ならびに変異型Fcドメインを含む1種または複数種の腫瘍ターゲティング抗体を含む、キットに関する。本発明は、腫瘍特異的抗体と併用される、特定の疾患の処置方法におけるT細胞の生産および使用、ならびにT細胞および/または治療用抗体を含む薬学的組成物/医薬を提供し、ここで、T細胞は、Fc受容体結合が低減している変異型Fcドメインを含む1種または複数種の治療用腫瘍ターゲティング抗体と組み合わせて投与される。
養子T細胞治療(ACT)は、がん特異的T細胞を用いる強力な処置アプローチである(Rosenberg and Restifo,Science 348(6230)(2015),62-68(非特許文献1))。ACTでは、天然の腫瘍特異的細胞を使用するか、またはT細胞受容体もしくはキメラ抗原受容体を使って遺伝子工学で特異的にしたT細胞を使用することができる(Rosenberg and Restifo,Science 348(6230)(2015),62-68(非特許文献1))。ACTは、急性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫または黒色腫などといった他の方法では処置不応性の進行疾患を患っている患者でさえ、うまく処置し、寛解させることができる(Dudley et al.,J Clin Oncol 26(32)(2008),5233-5239(非特許文献2)、Grupp et al.,N Engl J Med 368(16)(2013),1509-1518(非特許文献3)、Kochenderfer et al.,J Clin Oncol.(2015)33(6):540-549,doi:10.1200/JCO.2014.56.2025.Epub 2014 Aug 25(非特許文献4))。
(i)(a)重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列RYWMN(SEQ ID NO:1)、
(b)CDR H2アミノ酸配列
、および
(c)CDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域(VH)と、
(ii)(d)軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
(e)CDR L2アミノ酸配列GTNKRAP(SEQ ID NO:5)、および
(f)CDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域(VL)と
を含む。
a)SEQ ID NO:39およびSEQ ID NO:48からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:41およびSEQ ID NO:50からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である軽鎖ポリペプチドと
を含む。
a)SEQ ID NO:39の重鎖融合ポリペプチドと
b)SEQ ID NO:41の軽鎖ポリペプチドと
を含む。
(i)(a)重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列SYGMS(SEQ ID NO:53)、
(b)CDR H2アミノ酸配列SSGGSY(SEQ ID NO:54)、および
(c)CDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域(VH)と、
(ii)(d)軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
(e)CDR L2アミノ酸配列KVSNRFS(SEQ ID NO:57)、および
(f)CDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域(VL)と
を含む。
a)SEQ ID NO:61の重鎖可変領域(VH)と
b)SEQ ID NO:62の軽鎖可変領域(VL)と
を含む。
a)SEQ ID NO:39のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:41のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である軽鎖ポリペプチドと
を含む。
a)SEQ ID NO:39の重鎖融合ポリペプチドと
b)SEQ ID NO:41の軽鎖ポリペプチドと
を含む。
(A)本明細書に記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞と、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
抗原結合受容体は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キットが提供される。
(A)本明細書に記載の抗原結合受容体をコードする単離されたポリヌクレオチドと、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
抗原結合受容体は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キットが提供される。
(A)本明細書に記載の抗原結合受容体をコードする本明細書に記載の組成物またはベクターと、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
抗原結合受容体は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キットが提供される。
定義
本明細書において、用語は、以下に別段の定義がある場合を除き、当技術分野において一般に使用されているように使用される。
1表1におけるすべてのCDR定義のナンバリングは、Kabatらが規定したナンバリング法に従っている(下記参照)。
2表1において使用する、「b」が小文字の「AbM」は、Oxford Molecularの「AbM」抗体モデリングソフトウェアによって定義されるCDRを指す。
分率X/Y×100
ここで、Xは、配列アラインメントプログラムALIGN-2が、そのプログラムによるAとBとのアラインメントにおいて、完全一致(identical match)と記録したアミノ酸残基の数であり、YはB中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合に、Bに対するAの%アミノ酸配列同一性が、Aに対するBの%アミノ酸配列同一性と一致しなくなることは、理解されるであろう。別段の具体的言明がある場合を除き、本明細書において使用する%アミノ酸配列同一性値はすべて、すぐ上の段落で説明したように、ALIGN-2コンピュータプログラムを使って得られる。
本発明は、抗体、すなわちがん細胞を標的とする治療用抗体の変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる抗原結合受容体に関する。特に本発明は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが親非変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができない少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む、抗原結合受容体に関する。好ましい態様において、変異型Fcドメインは非変異型親Fcドメインと比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、変異型FcドメインによるFc受容体結合は、非変異型FcドメインによるFc受容体結合と比較して低減している。特定の態様において、本発明は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む抗原結合受容体に関し、前記少なくとも1つの抗原結合部分は、親非変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができず、変異型Fcドメインは、L234、L235、I253、H310、P331、P329、およびH435からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、特にアミノ酸変異は非変異型親Fcドメインと比較してL234A、L235A、I253A、N297A、H310A、P329G、および/またはH435Aであり、変異型FcドメインによるFc受容体結合は非変異型FcドメインによるFc受容体結合と比較して低減している。好ましい一態様において、アミノ酸変異はP329Gであり、Fcγ受容体への結合は、25℃におけるSPRによる測定で、低減している。さらなる好ましい態様において、アミノ酸変異はI253A、H310A、およびH435Aであり、新生児型Fc受容体(FcRn)への結合は、25℃におけるSPRによる測定で、低減している。
本発明の例示的態様では、概念実証として、アンカリング膜貫通ドメインと、少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、前記少なくとも1つの抗原結合部分は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、変異型Fcドメインは非変異型親Fcと比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、抗原結合受容体が提供される。
(a)RYWMN(SEQ ID NO:1)の重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列、
(b)
のCDR H2アミノ酸配列、および
(c)
のCDR H3アミノ酸配列
のうちの少なくとも1つを含む重鎖可変領域を含む。
(d)
の軽鎖(CDR L)1アミノ酸配列、
(e)GTNKRAP(SEQ ID NO:5)のCDR L2アミノ酸配列、および
(f)
のCDR L3アミノ酸配列
のうちの少なくとも1つを含む軽鎖可変領域を含む。
(a)RYWMN(SEQ ID NO:1)の重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列、
(b)
のCDR H2アミノ酸配列、
(c)
のCDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域と、
(d)
の軽鎖(CDR L)1アミノ酸配列、
(e)GTNKRAP(SEQ ID NO:5)のCDR L2アミノ酸配列、および
(f)
のCDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域と
を含む。
(a)SYGMS(SEQ ID NO:53)の重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列、
(b)SSGGSY(SEQ ID NO:54)のCDR H2アミノ酸配列、および
(c)
のCDR H3アミノ酸配列
のうちの少なくとも1つを含む重鎖可変領域を含む。
(d)
の軽鎖(CDR L)1アミノ酸配列、
(e)KVSNRFS(SEQ ID NO:57)のCDR L2アミノ酸配列、および
(f)
のCDR L3アミノ酸配列
のうちの少なくとも1つを含む軽鎖可変領域を含む。
(a)SYGMS(SEQ ID NO:53)の重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列、
(b)SSGGSY(SEQ ID NO:54)のCDR H2アミノ酸配列、
(c)
のCDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域と、
(d)
の軽鎖(CDR L)1アミノ酸配列、
(e)KVSNRFS(SEQ ID NO:57)のCDR L2アミノ酸配列、および
(f)
のCDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域と
を含む。
本発明との関連において、本発明の抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、哺乳動物プロテアーゼのための切断部位を有しないことを特徴としうる。本発明との関連において、プロテアーゼとは、プロテアーゼのための切断部位を含む膜貫通ドメインのアミノ酸配列を加水分解することができるタンパク質分解酵素を指す。プロテアーゼという用語はエンドペプチダーゼとエキソペプチダーゼをどちらも包含する。本発明との関連において、膜貫通タンパク質、なかんずくCD命名法によって規定されるもののアンカリング膜貫通ドメインはいずれも、本明細書に定義する変異型Fcドメインに結合したときにT細胞、好ましくはCD8+T細胞を活性化する本発明の抗原結合受容体を作製するために使用しうる。
(a)C末端においてSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメインのN末端に任意でSEQ ID NO:17のペプチドリンカーを介して融合されたSEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含む重鎖と、
(b)SEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、抗原結合受容体が提供される。
(a)C末端においてSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメインのN末端に任意でSEQ ID NO:17のペプチドリンカーを介して融合されたSEQ ID NO:40およびSEQ ID NO:49から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、
(b)SEQ ID NO:41およびSEQ ID NO:50から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、抗原結合受容体が提供される。
(a)C末端においてSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメインのN末端に任意でSEQ ID NO:17のペプチドリンカーを介して融合されたSEQ ID NO:40のアミノ酸配列を含む重鎖と、
(b)SEQ ID NO:41のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、抗原結合受容体が提供される。
(a)C末端においてSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメインのN末端に任意でSEQ ID NO:17のペプチドリンカーを介して融合されたSEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む重鎖と、
(b)SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、抗原結合受容体が提供される。
好ましくは、本発明の抗原結合受容体は、少なくとも1つの刺激シグナリングドメインおよび/または少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインを含む。したがって本明細書に提供される抗原結合受容体は、好ましくは、T細胞活性化をもたらす刺激シグナリングドメインを含む。本明細書に提供される抗原結合受容体は、ネズミ/マウスまたはヒトCD3z(ヒトCD3zのUniProtエントリーはP20963(バージョン番号177、配列番号2)であり;ネズミ/マウスCD3zのUniProtエントリーはP24161(プライマリー引用可能アクセッション番号)またはQ9D3G3(セカンダリー引用可能アクセッション番号)、バージョン番号143、配列番号1である)、FCGR3A(ヒトFCGR3AのUniProtエントリーはP08637(バージョン番号178、配列番号2)である)またはNKG2D(ヒトNKG2DのUniProtエントリーはP26718(バージョン番号151、配列番号1)であり;ネズミ/マウスNKG2DのUniProtエントリーはO54709(バージョン番号132、配列番号2)である)のフラグメント/ポリペプチドパーツである刺激シグナリングドメインを含みうる。
さらにまた、本明細書に提供される抗原結合受容体は、少なくとも1つのリンカー(または「スペーサー」)を含みうる。リンカーは、通常、最大20アミノ酸の長さを有するペプチドである。したがって、本発明との関連において、リンカーは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20アミノ酸の長さを有しうる。例えば、本明細書に提供される抗原結合受容体は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン、アンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび/または刺激シグナリングドメインの間に、リンカーを含みうる。そのようなリンカーには、それらが抗原結合受容体の異なるポリペプチド(すなわち変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン、アンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび/または刺激シグナリングドメイン)が独立して折りたたまれて予想どおりに挙動する確率を増加させるという利点がある。したがって本発明との関連において、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン、哺乳動物プロテアーゼのための切断部位を有しないアンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび刺激シグナリングドメインが、単鎖多機能ポリペプチドに含まれうる。単鎖融合構築物は、例えば、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン、アンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび/または刺激シグナリングドメインを含むポリペプチドからなりうる。代替の態様において、抗原結合受容体は、単鎖融合構築物ではない抗原結合部分を含む。すなわち、抗原結合部分はFabまたはcrossFabフラグメントである。そのような態様では、抗原結合受容体は、1本のポリペプチド鎖のみを含む単鎖融合構築物ではない。好ましくは、そのような構築物は、本明細書に記載するように、免疫グロブリンの軽鎖と組み合わされた単鎖重鎖融合ポリペプチドを含むと考えられる。例えば重鎖融合ポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖、アンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび/または刺激シグナリングドメインを含み、免疫グロブリン軽鎖と組み合わされる。したがって、抗原結合部分、アンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび刺激シグナリングドメインは、本明細書に記載するとおり、1つまたは複数の同一のまたは異なるペプチドリンカーによって連結されうる。例えば、本明細書に提供される抗原結合受容体において、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる少なくとも1つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインとアンカリング膜貫通ドメインとの間のリンカーは、SEQ ID NO:17に示すアミノおよびアミノ酸配列を含むか、またはそれからなりうる。したがって、アンカリング膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインおよび/または刺激ドメインは互いに、ペプチドリンカーによって連結されるか、またはドメインの直接的融合によって連結されうる。
本明細書に記載する抗原結合受容体の構成要素を、さまざまな構成で互いに融合することで、T細胞活性化抗原結合受容体を作製することができる。
である。
のアミノ酸配列を含むか、または同配列からなる。一態様において、抗原結合受容体は共刺激シグナリングドメイン(CSD)をさらに含む。一態様において、抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、C末端において、共刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、共刺激シグナリングドメインは、前述のとおり、CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、DAP10およびDAP12の各細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より、個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。一態様において、抗原結合受容体は刺激シグナリングドメインをさらに含む。一態様において、抗原結合受容体の共刺激シグナリングドメインは、C末端において、刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、少なくとも1つの刺激シグナリングドメインは、CD3z、FCGR3AおよびNKG2Dの細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。
である。
CDR H3アミノ酸配列
軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
CDR L2アミノ酸配列GTNKRAP(SEQ ID NO:5)およびCDR L3アミノ酸配列
を含む。
(i)SEQ ID NO:1の重鎖相補性決定領域(CDR)1、SEQ ID NO:2の重鎖CDR2、SEQ ID NO:3の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域(VH)と、SEQ ID NO:4の軽鎖CDR1、SEQ ID NO:5の軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:6の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域(VH)とを含む、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFvフラグメントである、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
(i)SEQ ID NO:8およびSEQ ID NO:32から選択される重鎖可変ドメイン(VH)とSEQ ID NO:9およびSEQ ID NO:33から選択される軽鎖可変ドメイン(VL)とを含む、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFv分子である、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
(i)重鎖可変ドメイン(VH)SEQ ID NO:8と軽鎖可変ドメイン(VL)SEQ ID NO:9とを含む、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFv分子である、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
(i)SEQ ID NO:10またはSEQ ID NO:34のアミノ酸配列を含む、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFv分子である、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
である。一態様において、抗原結合受容体は共刺激シグナリングドメイン(CSD)をさらに含む。一態様において、抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、C末端において、共刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、共刺激シグナリングドメインは、前述のとおり、CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、DAP10およびDAP12の細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より、個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。一態様において、抗原結合受容体は刺激シグナリングドメインをさらに含む。一態様において、抗原結合受容体の共刺激シグナリングドメインは、C末端において、刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、少なくとも1つの刺激シグナリングドメインは、CD3z、FCGR3AおよびNKG2Dの細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。
である。
CDR H3アミノ酸配列
軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
CDR L2アミノ酸配列GTNKRAP(SEQ ID NO:5)およびCDR L3アミノ酸配列
を含む。
(i)SEQ ID NO:1の重鎖相補性決定領域(CDR)1、SEQ ID NO:2の重鎖CDR2、SEQ ID NO:3の重鎖CDR3、SEQ ID NO:4の軽鎖CDR1、SEQ ID NO:5の軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:6の軽鎖CDR3を含む、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるFab分子である抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
a)N末端からC末端に向かって順に、
(i)SEQ ID NO:1の重鎖相補性決定領域(CDR)1、SEQ ID NO:2の重鎖CDR2、SEQ ID NO:3の重鎖CDR3を含む重鎖、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:4の軽鎖CDR1、SEQ ID NO:5の軽鎖CDR2、およびSEQ ID NO:6の軽鎖CDR3を含む軽鎖と
を含む、抗原結合受容体を提供する。
a)N末端からC末端に向かって順に、
(i)SEQ ID NO:8の重鎖可変ドメイン(VH)、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:9の軽鎖可変ドメイン(VL)と
を含む、抗原結合受容体を提供する。
のアミノ酸配列を含むか、または同配列からなる。一態様において、抗原結合受容体は共刺激シグナリングドメイン(CSD)をさらに含む。一態様において、抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、C末端において、共刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、共刺激シグナリングドメインは、前述のとおり、CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、DAP10およびDAP12の各細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より、個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。一態様において、抗原結合受容体は刺激シグナリングドメインをさらに含む。一態様において、抗原結合受容体の共刺激シグナリングドメインは、C末端において、刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、少なくとも1つの刺激シグナリングドメインは、CD3z、FCGR3AおよびNKG2Dの細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。
である。
軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
CDR L2アミノ酸配列KVSNRFS(SEQ ID NO:57)およびCDR L3アミノ酸配列
を含む。
(i)SEQ ID NO:53の重鎖相補性決定領域(CDR)1、SEQ ID NO:54の重鎖CDR2、SEQ ID NO:55の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域(VH)と、SEQ ID NO:56の軽鎖CDR1、SEQ ID NO:57の軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:58の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域(VH)とを含む、I253A、H310A、およびH435A変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFvフラグメントである、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
(i)SEQ ID NO:61の重鎖可変ドメイン(VH)とSEQ ID NO:62の軽鎖可変ドメイン(VL)とを含む、I253A、H310A、およびH435A変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFv分子である、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
(i)SEQ ID NO:60のアミノ酸配列を含む、I253A、H310A、およびH435A変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるscFv分子である、抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
である。一態様において、抗原結合受容体は共刺激シグナリングドメイン(CSD)をさらに含む。一態様において、抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、C末端において、共刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、共刺激シグナリングドメインは、前述のとおり、CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、DAP10およびDAP12の細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より、個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。一態様において、抗原結合受容体は刺激シグナリングドメインをさらに含む。一態様において、抗原結合受容体の共刺激シグナリングドメインは、C末端において、刺激シグナリングドメインのN末端に融合される。一態様において、少なくとも1つの刺激シグナリングドメインは、CD3z、FCGR3AおよびNKG2Dの細胞内ドメインまたはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。好ましい態様において、共刺激シグナリングドメインはCD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントである。特定の態様において、共刺激シグナリングドメインは、配列
を含むか、または同配列からなる。
である。
軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
CDR L2アミノ酸配列KVSNRFS(SEQ ID NO:57)およびCDR L3アミノ酸配列
を含む。
(i)SEQ ID NO:53の重鎖相補性決定領域(CDR)1、SEQ ID NO:54の重鎖CDR2、SEQ ID NO:55の重鎖CDR3、SEQ ID NO:56の軽鎖CDR1、SEQ ID NO:57の軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:58の軽鎖CDR3を含む、I253A、H310A、およびH435A変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるFab分子である抗原結合部分、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む、抗原結合受容体を提供する。
a)N末端からC末端に向かって順に、
(i)SEQ ID NO:53の重鎖相補性決定領域(CDR)1、SEQ ID NO:54の重鎖CDR2、SEQ ID NO:55の重鎖CDR3を含む重鎖、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:56の軽鎖CDR1、SEQ ID NO:57の軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:58の軽鎖CDR3を含む軽鎖と
を含む、抗原結合受容体を提供する。
a)N末端からC末端に向かって順に、
(i)SEQ ID NO:61の重鎖可変ドメイン(VH)、
(ii)ペプチドリンカー、特にSEQ ID NO:17のペプチドリンカー、
(iii)アンカリング膜貫通ドメイン、特にSEQ ID NO:11のアンカリング膜貫通ドメイン、
(iii)共刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:12の共刺激シグナリングドメイン、および
(iv)刺激シグナリングドメイン、特にSEQ ID NO:13の刺激シグナリングドメイン
を含む重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:62の軽鎖可変ドメイン(VL)と
を含む、抗原結合受容体を提供する。
添付の実施例および図1Aに例示するように、本発明の概念実証として、FcドメインにP329G変異を含む抗体に結合し/同抗体を指向し/同抗体とまたは同抗体において相互作用する安定化scFv抗原結合部分を1つ含む抗原結合受容体「抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD pETR17096」(SEQ ID NO:7)を構築した。この構築物は、CD28膜貫通ドメイン、共刺激シグナリングドメインとしてのCD28のフラグメントおよび刺激シグナリングドメインとしてのCD3zのフラグメントをさらに含む。抗体結合分子「抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD pETR17096」の配列(アミノ酸およびcDNA)を表2および表3に示す。
本発明のさらなる局面は、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸および/または本発明の抗原結合受容体が形質導入された細胞、好ましくはT細胞、ならびに任意で、変異型Fcドメインを含む1種または複数種の抗体を含むか、それらからなるキットであって、抗原結合受容体が変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができる、キットである。
(A)本発明の抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞と、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
抗原結合受容体は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キットが提供される。
(A)本発明の抗原結合受容体をコードする単離されたポリヌクレオチドおよび/またはベクターと、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
抗原結合受容体は、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キットが提供される。
本発明のさらなる局面は、本発明の抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞である。本明細書に記載の抗原結合受容体は、本来はT細胞の中および/または表面に含まれず、正常な(非形質導入)T細胞の中または上に(内在性には)発現しない分子に関する。したがって、T細胞の中および/または上の本発明の抗原結合受容体は、T細胞に人工的に導入される。本発明との関連において、T細胞、好ましくはCD8+T細胞は、本明細書に定義する処置されるべき対象から単離/取得されうる。したがって、T細胞の中および/または表面上に人工的に導入され、次いで提示される本明細書記載の抗原結合受容体は、(Ig由来)免疫グロブリン、好ましくは抗体、特に抗体のFcドメインに(インビトロまたはインビボで)アクセスできる1つまたは複数の抗原結合部分を含むドメインを含む。本発明との関連において、人工的に導入されるこれらの分子は、後述する(レトロウイルスまたはレンチウイルス)形質導入後に、T細胞の中および/または表面上に提示される。したがって、形質導入後の本発明のT細胞は、免疫グロブリン、好ましくは本明細書に記載のFcドメインに特定の変異を含む(治療用)抗体によって、活性化することができる。
本発明のさらなる局面は、1つまたは数個の本発明の抗原結合受容体をコードする核酸およびベクターである。本発明の抗原結合受容体をコードする例示的核酸分子をSEQ ID NO:19、30、35、38、44、47、51および52に示す。本発明の核酸分子は調節配列の制御を受けうる。例えばプロモーター、転写エンハンサーおよび/または本発明の抗原結合受容体の誘導発現を可能にする配列を使用しうる。本発明との関連において、核酸分子は恒常性プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下で発現する。適切なプロモーターは、例えばCMVプロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、UBCプロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、PGK(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、EF1Aプロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、CAGGプロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、SV40プロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、COPIAプロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、ACT5Cプロモーター(Qin et al.,PLoS One 5(5)(2010),e10611)、TREプロモーター(Qin et al.,PLoS One.5(5)(2010),e10611)、Oct3/4プロモーター(Chang et al.,Molecular Therapy 9(2004),S367-S367(doi:10.1016/j.ymthe.2004.06.904))、またはNanogプロモーター(Wu et al.,Cell Res.15(5)(2005),317-24)である。それゆえに本発明は、本発明に記載の核酸分子を含むベクターにも関係する。本明細書においてベクターという用語は、それが導入された宿主細胞において(すなわち形質導入細胞において)自律的に複製することができる環状または線状の核酸分子に関する。多くの適切なベクターが分子生物学の当業者には公知であって、その選択は所望する機能に依存し、これには、遺伝子工学において従来使用されてきたプラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージおよび他のベクターが含まれる。当業者に周知の方法を使ってさまざまなプラスミドおよびベクターを構築することができる。例えば、Sambrook et al.(前掲書)およびAusubel,Current Protocols in Molecular Biology,Green Publishing Associates and Wiley Interscience,N.Y.(1989),(1994)に記載の技法を参照されたい。あるいは、本発明のポリヌクレオチドおよびベクターを、標的細胞への送達のために、リポソーム中に再構成することもできる。以下にさらに詳述するように、クローニングベクターを使って個々のDNA配列を単離した。特定ポリペプチドの発現が必要な場合は、関連する配列を発現ベクターに移入することができる。典型的クローニングベクターには、pBluescript SK、pGEM、pUC9、pBR322、pGA18およびpGBT9がある。典型的発現ベクターには、pTRE、pCAL-n-EK、pESP-1、pOP13CATがある。
上述のように、変異型Fcドメインを含む本明細書に記載の抗体の(Ig由来)ドメインは、腫瘍細胞の表面に天然に存在する細胞表面分子、すなわち腫瘍特異的抗原に対する特異性を持つ抗原相互作用部位を含みうる。本発明との関連において、そのような抗体は、本発明の抗原結合受容体を含む本明細書に記載の形質導入T細胞を腫瘍細胞と物理的に接触させることになり、そこでは形質導入T細胞が活性型になる。本発明の形質導入T細胞の活性化は、本明細書に記載するように、腫瘍細胞の溶解をもたらすことができる。
本明細書に提供される分子または構築物(すなわち抗原結合受容体、形質導入T細胞およびキット)は、医療の場で、とりわけ悪性疾患の処置に、特に有用である。例えば、腫瘍細胞に特異的でありかつ変異型Fcドメインを含む治療用抗体と併用して、本発明の抗原結合受容体を発現する形質導入T細胞を用いて、腫瘍を処置することができる。したがって一定の態様では、抗原結合受容体、形質導入T細胞またはキットが、悪性疾患の処置において使用され、特に悪性疾患は、上皮、内皮、または中皮起源のがんおよび血液のがんから選択される。
(a)T細胞、好ましくはCD8+T細胞を、対象から単離する工程、
(b)単離されたT細胞、好ましくはCD8+T細胞に、本明細書に記載の抗原結合受容体を形質導入する工程、および
(c)形質導入されたT細胞、好ましくはCD8+T細胞を、該対象に投与する工程。
(a)T細胞、好ましくはCD8+T細胞を、対象から単離する工程、
(b)単離されたT細胞、好ましくはCD8+T細胞に、本明細書に記載の抗原結合受容体を形質導入する工程、
(c)任意で、該単離されたT細胞、好ましくはCD8+T細胞に、T細胞受容体を共形質導入する工程、
(d)抗CD3抗体および抗CD28抗体によって、前記T細胞、好ましくはCD8+T細胞を増殖させる工程、および
(e)形質導入された前記T細胞、好ましくはCD8+T細胞を、該対象に投与する工程。
さらにまた、本発明は、変異型Fcドメインを持つ抗体分子、本発明の抗原結合受容体を含む形質導入T細胞、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子およびベクターを含む、組成物(医薬)、ならびに/または該組成物のうちの1つまたは複数を含むキットを提供する。本発明との関連において、組成物は、任意で担体、安定剤および/または賦形剤の適切な製剤をさらに含む、薬学的組成物である。したがって、本発明との関連において、本明細書に記載の抗原結合受容体を含む形質導入T細胞および/または該形質導入T細胞を含む組成物と組み合わせて投与される、本明細書において定義する変異型Fcドメインを含む抗体分子を含む薬学的組成物(医薬)が提供され、該抗体分子は、本発明の抗原結合受容体を含む形質導入T細胞の投与の前、該投与と同時、または該投与の後に投与される。
1.アンカリング膜貫通ドメインと、抗原結合部分を含む細胞外ドメインとを含む、抗原結合受容体であって、該抗原結合部分が、変異型結晶性フラグメント(fragment crystallizable)(Fc)ドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該変異型Fcドメインが、非変異型親Fcドメインと比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、抗原結合受容体。
2. 変異型FcドメインのFc受容体結合が、非変異型親FcドメインのFc受容体結合と比較して低減しており、特にFc受容体がFcγ受容体または新生児型Fc受容体(FcRn)である、態様1の抗原結合受容体。
3. Fc受容体結合が25℃における表面プラズモン共鳴(SPR)によって測定される、態様1または態様2のいずれか一つの抗原結合受容体。
4. 抗原結合部分がscFv、Fab、crossFab、またはscFabである、態様1〜3のいずれか一つの抗原結合受容体。
5. アンカリング膜貫通ドメインが、CD8、CD3z、FCGR3A、NKG2D、CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、DAP10、もしくはDAP12膜貫通ドメイン、またはそれらのフラグメントからなる群より選択される膜貫通ドメインである、態様1〜4のいずれか一つの抗原結合受容体。
6. アンカリング膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインであり、特にアンカリング膜貫通ドメインがSEQ ID NO:11のアミノ酸配列を含む、態様1〜5のいずれか一つの抗原結合受容体。
7. 少なくとも1つの刺激シグナリングドメインおよび/または少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインをさらに含む、態様1〜6のいずれか一つの抗原結合受容体。
8. 少なくとも1つの刺激シグナリングドメインが、CD3zの細胞内ドメイン、FCGR3Aの細胞内ドメイン、およびNKG2Dの細胞内ドメイン、またはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される、態様1〜7のいずれか一つの抗原結合受容体。
9. 少なくとも1つの刺激シグナリングドメインが、CD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントであり、特に少なくとも1つの刺激シグナリングドメインがSEQ ID NO:13のアミノ酸配列を含む、態様1〜8のいずれか一つの抗原結合受容体。
10. 少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインが、CD27の細胞内ドメイン、CD28の細胞内ドメイン、CD137の細胞内ドメイン、OX40の細胞内ドメイン、ICOSの細胞内ドメイン、DAP10の細胞内ドメイン、およびDAP12の細胞内ドメイン、またはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される、態様1〜9のいずれか一つの抗原結合受容体。
11. 少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインが、CD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントであり、特に少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインがSEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む、態様1〜10のいずれか一つの抗原結合受容体。
12. CD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントを含む1つの刺激シグナリングドメインを含み、かつCD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントを含む1つの共刺激シグナリングドメインを含む、態様1〜11のいずれか一つの抗原結合受容体。
13. 刺激シグナリングドメインがSEQ ID NO:13のアミノ酸配列を含み、かつ共刺激シグナリングドメインがSEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む、態様12の抗原結合受容体。
14. 細胞外ドメインが、アンカリング膜貫通ドメインへと、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、態様1〜13のいずれか一つの抗原結合受容体。
15. ペプチドリンカーがアミノ酸配列GGGGS(SEQ ID NO:17)を含む、態様14の抗原結合受容体。
16. アンカリング膜貫通ドメインが、共シグナリングドメインまたはシグナリングドメインへと、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、態様1〜15のいずれか一つの抗原結合受容体。
17. シグナリングドメインおよび/または共シグナリングドメインが、任意で少なくとも1つのペプチドリンカーを介して連結されている、態様1〜16のいずれか一つの抗原結合受容体。
18. 抗原結合部分がscFvフラグメントであり、該scFvフラグメントが、C末端において、アンカリング膜貫通ドメインのN末端へと、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、態様1〜17のいずれか一つの抗原結合受容体。
19. 抗原結合部分がFabフラグメントまたはcrossFabフラグメントであり、該FabフラグメントまたはcrossFabフラグメントが、重鎖のC末端において、アンカリング膜貫通ドメインのN末端へと、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、態様1〜17のいずれか一つの抗原結合受容体。
20. 抗原結合受容体が1つの共シグナリングドメインを含み、共シグナリングドメインが、N末端において、アンカリング膜貫通ドメインのC末端へと連結されている、態様7〜19のいずれか一つの抗原結合受容体。
21. 共刺激シグナリングドメインのC末端へとN末端において連結されている1つの刺激シグナリングドメインをさらに含む、態様20の抗原結合受容体。
22. 非変異型親FcドメインがIgG1 FcドメインまたはIgG4 Fcドメイン、特にヒトIgG1 Fcドメインである、態様1〜21のいずれか一つの抗原結合受容体。
23. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うL234、L235、I253、H310、P331、P329、およびH435からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異を含み、特に該アミノ酸変異がL234A、L235A、I253A、N297A、H310A、P329G、および/またはH435Aである、態様1〜22のいずれか一つの抗原結合受容体。
24. 変異種Fcドメインが、ヒトIgG1 Fc(SEQ ID NO:130)の117、118、136、180、193、212、214、および318番目の残基からなる群より選択される位置にアミノ酸置換を含み、特に該アミノ酸変異がL117A、L118A、I136A、N180A、H193A、P212G、P214G、および/またはH318Aである、態様1〜23のいずれか一つの抗原結合受容体。
25. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うL234、L235、およびP329からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異、特にL234A、L235A、およびP329G(「PGLALA」)のアミノ酸変異を含む、態様1〜24のいずれか一つの抗原結合受容体。
26. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うP329Gのアミノ酸変異を含み、変異型FcドメインのFcγ受容体結合が、非変異型親FcドメインのFcγ受容体結合と比較して低減しており、特にFcγ受容体がヒトFcγRIIIaおよび/またはFcγRIIaである、態様1〜25のいずれか一つの抗原結合受容体。
27. 変異種FcドメインがヒトIgG1 Fc(SEQ ID NO:130)の212番目にアミノ酸置換を含み、特に該アミノ酸変異がP212Gである、態様1〜26のいずれか一つの抗原結合受容体。
28. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うI253、H310、およびH435からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異、特にI253A、H310A、およびH435A(「AAA」)のアミノ酸変異を含み、変異型FcドメインのFcRn結合が、非変異型親FcドメインのFcRn結合と比較して低減している、態様1〜24のいずれか一つの抗原結合受容体。
29. 変異種FcドメインがヒトIgG1 Fc(SEQ ID NO:130)の136、193、および318番目にアミノ酸置換を含み、特に該アミノ酸変異がI136A、H193A、およびH318A(「AAA」)である、態様1〜24または態様28のいずれか一つの抗原結合受容体。
30. 少なくとも1つの抗原結合部分が、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該抗原結合部分が、
(i)(a)重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列RYWMN(SEQ ID NO:1)、
(b)CDR H2アミノ酸配列
、および
(c)CDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域(VH)と、
(ii)(d)軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
(e)CDR L2アミノ酸配列GTNKRAP(SEQ ID NO:5)、および
(f)CDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域(VL)と
を含む、態様1〜27のいずれか一つの抗原結合受容体。
31. 少なくとも1つの抗原結合部分が、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該抗原結合部分が、SEQ ID NO:8およびSEQ ID NO:32からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)と、SEQ ID NO:9およびSEQ ID NO:33からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)とを含む、態様1〜27または態様30のいずれか一つの抗原結合受容体。
32. 少なくとも1つの抗原結合部分がSEQ ID NO:8の重鎖可変領域(VH)とSEQ ID NO:9の軽鎖可変領域(VL)とを含む、態様1〜27、態様30、または態様31のいずれか一つの抗原結合受容体。
33. 少なくとも1つの抗原結合部分が、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができないscFvであり、抗原結合受容体が、SEQ ID NO:7およびSEQ ID NO:31からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一であるアミノ酸配列を含む、態様1〜27または態様30〜32のいずれか一つの抗原結合受容体。
34. SEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含む、態様33の抗原結合受容体。
35. 少なくとも1つの抗原結合部分が、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができないFabフラグメントであり、抗原結合受容体が、
a)SEQ ID NO:39およびSEQ ID NO:48からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:41およびSEQ ID NO:50からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である軽鎖ポリペプチドと
を含む、態様1〜27または態様30〜32のいずれか一つの抗原結合受容体。
36. a)SEQ ID NO:39の重鎖融合ポリペプチドと
b)SEQ ID NO:41の軽鎖ポリペプチドと
を含む、態様35の抗原結合受容体。
37. 少なくとも1つの抗原結合部分が、I253A、H310A、およびH435A(「AAA」)変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該抗原結合部分が、
(i)(a)重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列SYGMS(SEQ ID NO:53)、
(b)CDR H2アミノ酸配列SSGGSY(SEQ ID NO:54)、および
(c)CDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域(VH)と、
(ii)(d)軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
(e)CDR L2アミノ酸配列KVSNRFS(SEQ ID NO:57)、および
(f)CDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域(VL)と
を含む、態様1〜24または態様28〜29のいずれか一つの抗原結合受容体。
38. 少なくとも1つの抗原結合部分が、I253A、H310A、およびH435A(「AAA」)変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該抗原結合部分が、SEQ ID NO:61のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)と、SEQ ID NO:62のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)とを含む、態様1〜24、態様28、態様29、または態様37のいずれか一つの抗原結合受容体。
39. 少なくとも1つの抗原結合部分が、
a)SEQ ID NO:61の重鎖可変領域(VH)と
b)SEQ ID NO:62の軽鎖可変領域(VL)と
を含む、態様1〜24、態様28、態様29、または態様37〜38のいずれか一つの抗原結合受容体。
40. 少なくとも1つの抗原結合部分が、I253A、H310A、およびH435A(「AAA」)変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができないscFvであり、抗原結合受容体が、SEQ ID NO:59のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一であるアミノ酸配列を含む、態様1〜24、態様28、態様29、または態様37〜39のいずれか一つの抗原結合受容体。
41. SEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含む、態様40の抗原結合受容体。
42. 少なくとも1つの抗原結合部分が、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができないFabフラグメントであり、抗原結合受容体が
a)SEQ ID NO:39のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である重鎖融合ポリペプチドと、
b)SEQ ID NO:41のアミノ酸配列と少なくとも約95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一である軽鎖ポリペプチドと
を含む、態様1〜27または態様30〜32のいずれか一つの抗原結合受容体。
43. a)SEQ ID NO:39の重鎖融合ポリペプチドと
b)SEQ ID NO:41の軽鎖ポリペプチドと
を含む、態様42の抗原結合受容体。
44. 態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
45. 態様1〜32、態様35〜39、および態様42〜43のいずれか一つの抗原結合受容体の重鎖融合ポリペプチドまたは軽鎖ポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
46. 重鎖融合ポリペプチドをコードする第1の単離されたポリヌクレオチドと、軽鎖ポリペプチドをコードする第2の単離されたポリヌクレオチドとを含む、態様1〜32、態様35〜39、および態様42〜43のいずれか一つの抗原結合受容体をコードする組成物。
47. 態様44または態様45のいずれか一つのポリヌクレオチドまたは態様46の組成物によってコードされる、ポリペプチド。
48. 態様44のポリヌクレオチドまたは態様45のポリヌクレオチドを含む、ベクター、特に発現ベクター。
49. 態様44のポリヌクレオチド、態様46の組成物、または態様48のベクターを含む、形質導入T細胞。
50. 態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体を発現することができる、形質導入T細胞。
51. 標的抗原について特異的に結合することができるT細胞受容体(TCR)が共形質導入されている、態様49または態様50のいずれか一つの形質導入T細胞。
52. (A)態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞と、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キット。
53. (A)態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体をコードする単離されたポリヌクレオチドと、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キット。
54. (A)態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体をコードする、態様46の組成物または態様48のベクターと、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キット。
55. 非変異型親FcドメインがIgG1 FcドメインまたはIgG4 Fcドメイン、特にヒトIgG1 Fcドメインである、態様52〜54のいずれか一つのキット。
56. 変異型FcドメインのFc受容体結合が、非変異型親FcドメインのFc受容体結合と比較して低減しており、特にFc受容体がFcγ受容体または新生児型Fc受容体(FcRn)である、態様52〜55のいずれか一つのキット。
57. Fc受容体結合が25℃における表面プラズモン共鳴(SPR)によって測定される、態様56のキット。
58. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うL234、L235、I253、H310、P331、P329、およびH435からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異を含み、特に該アミノ酸変異がL234A、L235A、I253A、N297A、H310A、P329G、および/またはH435Aである、態様52〜57のいずれか一つのキット。
59. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うL234、L235、およびP329からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異、特にL234A、L235A、およびP329G(「PGLALA」)のアミノ酸変異を含む、態様52〜58のいずれか一つのキット。
60. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うP329Gのアミノ酸変異を含む、態様52〜59のいずれか一つのキット。
61. 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うI253、H310、およびH435からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異、特にI253A、H310A、およびH435A(「AAA」)のアミノ酸変異を含む、態様52〜60のいずれか一つのキット。
62. 変異型Fcドメインを含む抗体が、腫瘍細胞の表面にある抗原に対して、特にFAP、CEA、p95、BCMA、EpCAM、MSLN、MCSP、HER-1、HER-2、HER-3、CD19、CD20、CD22、CD33、CD38、CD52Flt3、FOLR1、Trop-2、CA-12-5、HLA-DR、MUC-1(ムチン)、A33抗原、PSMA、PSCA、トランスフェリン受容体、TNC(テネイシン)、およびCA-IXからなる群より選択される抗原に対して、および/またはヒト主要組織適合遺伝子複合体(MHC)の分子に結合したペプチドに対して、特異的に結合することができる、態様52〜61のいずれか一つのキット。
63. 変異型Fcドメインを含む抗体が、線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)、がん胎児性抗原(CEA)、メソテリン(MSLN)、CD20、葉酸受容体1(FOLR1)、およびテネイシン(TNC)からなる群より選択される抗原に対して特異的に結合することができる、態様52〜62のいずれか一つのキット。
64. 医薬としての使用のための、態様52〜63のいずれか一つのキット。
65. 変異型Fcドメインを含む抗体の投与の前、該投与と同時、または該投与の後に、
変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない抗原結合受容体
を発現する形質導入T細胞が、投与される、
医薬としての使用のための、態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体または態様49〜51のいずれか一つの形質導入T細胞。
66. 疾患の処置における使用のための、特に悪性疾患の処置における使用のための、態様52〜63のいずれか一つのキット。
67. 変異型Fcドメインを含む抗体の投与の前、該投与と同時、または該投与の後での、
変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない抗原結合受容体
を発現する形質導入T細胞の投与を含む、悪性疾患の処置
における使用のための、態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体または態様49〜51のいずれか一つの形質導入T細胞。
68. 悪性疾患が、上皮、内皮、または中皮起源のがんおよび血液のがんから選択される、態様66または態様67に記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入T細胞、またはキット。
69. 変異型Fcドメインを含む抗体が、腫瘍細胞の表面にある抗原に対して、特にFAP、CEA、p95、BCMA、EpCAM、MSLN、MCSP、HER-1、HER-2、HER-3、CD19、CD20、CD22、CD33、CD38、CD52Flt3、FOLR1、Trop-2、CA-12-5、HLA-DR、MUC-1(ムチン)、A33抗原、PSMA、PSCA、トランスフェリン受容体、TNC(テネイシン)、およびCA-IXからなる群より選択される抗原に対して、および/またはヒト主要組織適合遺伝子複合体(MHC)の分子に結合したペプチドに対して、特異的に結合することができる、態様66〜68に記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入T細胞、またはキット。
70. 変異型Fcドメインを含む抗体が、線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)、がん胎児性抗原(CEA)、メソテリン(MSLN)、CD20、葉酸受容体1(FOLR1)、およびテネイシン(TNC)からなる群より選択される抗原に対して特異的に結合することができる、態様66〜69に記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入T細胞、またはキット。
71. 形質導入T細胞が、処置される対象から単離された細胞に由来する、態様66〜70のいずれか一つに記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入T細胞、またはキット。
72. 形質導入T細胞が、処置される対象から単離された細胞に由来しない、態様66〜70のいずれか一つに記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入T細胞、またはキット。
73. 態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞を対象に投与する工程と、
前記形質導入T細胞の投与の前、該投与と同時、または該投与の後に、変異型Fcドメインを含む抗体の治療有効量を投与する工程と
を含む、対象における疾患を処置する方法であって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
方法。
74. 対象からT細胞を単離する工程、および単離されたT細胞に態様44のポリヌクレオチド、態様の組成物、または態様48のベクターを形質導入することによって、形質導入T細胞を生成する工程をさらに含む、態様73の方法。
75. T細胞が、レトロウイルスベクターもしくはレンチウイルスベクター構築物で、または非ウイルスベクター構築物で、形質導入される、態様74の方法。
76. 非ウイルスベクター構築物がスリーピング・ビューティーミニサークルベクターである、態様75の方法。
77. 形質導入T細胞が静脈内注入によって対象に投与される、態様73〜76のいずれか一つの方法。
78. 対象への投与に先だって、形質導入T細胞を抗CD3抗体および/または抗CD28抗体と接触させる、態様73〜77のいずれか一つの方法。
79. 対象への投与に先だって、形質導入T細胞を、少なくとも1つのサイトカイン、好ましくはインターロイキン-2(IL-2)、インターロイキン-7(IL-7)、インターロイキン-15(IL-15)、および/もしくはインターロイキン-21、またはそれらの変異体と接触させる、態様73〜78のいずれか一つの方法。
80. 疾患が悪性疾患である、態様73〜79のいずれか一つの方法。
81. 疾患が上皮、内皮、または中皮起源のがんおよび血液のがんから選択される、態様73〜79のいずれか一つの方法。
82. 標的細胞を、態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞と、変異型Fcドメインを含む抗体の存在下で接触させる工程を含む、標的細胞の溶解を誘導するための方法であって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
方法。
83. 標的細胞ががん細胞である、態様82の方法。
84. 標的細胞が、FAP、CEA、p95、BCMA、EpCAM、MSLN、MCSP、HER-1、HER-2、HER-3、CD19、CD20、CD22、CD33、CD38、CD52Flt3、FOLR1、Trop-2、CA-12-5、HLA-DR、MUC-1(ムチン)、A33抗原、PSMA、PSCA、トランスフェリン受容体、TNC(テネイシン)、およびCA-IXからなる群より選択される抗原を発現する、態様82または態様83のいずれか一つの方法。
85. 標的細胞が、線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)、がん胎児性抗原(CEA)、メソテリン(MSLN)、CD20、葉酸受容体1(FOLR1)、およびテネイシン(TNC)からなる群より選択される抗原を発現する、態様82〜84のいずれか一つの方法。
86. 医薬の製造のための、
態様1〜43のいずれか一つの抗原結合受容体、態様44および態様45のいずれか一つのポリヌクレオチド、または態様49〜51のいずれか一つの形質導入T細胞
の使用。
87. 医薬が悪性疾患の処置のためのものである、態様86の使用。
88. 医薬が疾患の処置のためのものである、態様86の使用。
89. 悪性疾患が上皮、内皮、または中皮起源のがんおよび血液のがんから選択されることを特徴とする、態様87の使用。
90. 疾患が上皮、内皮、または中皮起源のがんおよび血液のがんから選択されることを特徴とする、態様88の使用。
Sambrook et al,Molecular cloning:A laboratory manual;Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1989に記載されているように、標準的方法を使ってDNAを操作した。分子生物学的試薬は製造者の説明書に従って使用した。ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖のヌクレオチド配列に関する一般的情報は、Kabat,E.A.,et al.,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Ed.,NIH Publication No 91-3242に与えられている。
DNA配列は両鎖シークエンシングによって決定した。
所望の遺伝子セグメントは適当なテンプレートを使ってPCRで作製するか、または合成オリゴヌクレオチドおよびPCR産物から自動遺伝子合成により、Geneart AG(ドイツ・レーゲンスブルク)によって合成された。特異な制限エンドヌクレアーゼ切断部位に挟まれた遺伝子セグメントを標準的なクローニング/シークエンシングベクターにクローニングした。形質転換された細菌からプラスミドDNAを精製し、濃度をUV分光法によって決定した。サブクローニングされた遺伝子フラグメントのDNA配列はDNAシークエンシングによって確認した。遺伝子セグメントは、各発現ベクターへのサブクローニングを可能にする適切な制限部位を持つように設計した。構築物はすべて、真核細胞における分泌のためにタンパク質を対象にするリーダーペプチドをコードする5’末端DNAを持つように設計した。
標準的プロトコールを参照して、濾過した細胞培養上清からタンパク質を精製した。簡単に述べると、抗体をプロテインA Sepharoseカラム(GE healthcare)に適用し、PBSで洗浄した。抗体の溶出をpH2.8で達成した後は直ちに試料を中和した。凝集したタンパク質は、PBSにおける、または20mMヒスチジン、150mM NaCl、pH6.0における、サイズ排除クロマトグラフィー(Superdex 200、GE Healthcare)によって、単量体型抗体から分離した。単量体型抗体画分をプールし、(必要であれば)例えばMILLIPORE Amicon Ultra(30MWCO)遠心濃縮器を使って濃縮し、凍結し、-20℃または-80℃で保存した。試料の一部を、例えばSDS-PAGEおよびサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)などによる、後続のタンパク質分析および分析的特徴づけに供した。
NuPAGE(登録商標)Pre-Castゲルシステム(Invitrogen)を製造者の指示に従って使用した。具体的には、10%または4-12%NuPAGE(登録商標)Novex(登録商標)Bis-TRIS Pre-Castゲル(pH6.4)およびNuPAGE(登録商標)MES(還元ゲル、NuPAGE(登録商標)酸化防止ランニング緩衝液添加剤入り)ランニング緩衝液またはMOPS(非還元ゲル)ランニング緩衝液を使用した。
抗体の凝集およびオリゴマー状態を決定するためのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)はHPLCクロマトグラフィーによって行った。簡単に述べると、プロテインA精製した抗体を、Agilent HPLC 1100システムで、300mM NaCl、50mM KH2PO4/K2HPO4、pH7.5中のTosoh TSKgel G3000SWカラムに適用するか、Dionex HPLCシステムで、2×PBS中のSuperdex 200カラム(GE Healthcare)に適用した。溶出したタンパク質をUV吸光度およびピーク面積の積分によって定量した。BioRadゲル濾過標準151-1901を標準とした。
国際特許出願公開番号WO2012/130831A1に記載の方法に従って、Fcガンマ受容体への結合を消失させるために、Pro329Gly、Leu234AlaおよびLeu235Ala変異を定常領域に導入した。同様に、FcRnへの結合を消失させるために、I253A、H310A、およびH435A(「AAA」)変異を定常領域に導入した。各抗体は、ポリエチレンイミンを使ってHEK293-EBNA細胞に哺乳類発現ベクターを共トランスフェクトすることによって生産した。細胞には、重鎖用および軽鎖用の対応する発現ベクターを1:1の比でトランスフェクトした。
レンチウイルスベクターを生産するために、抗原結合受容体の正しいアセンブリのための各DNA配列を、レンチウイルスポリヌクレオチドベクターの恒常的に活性なヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター(CMV)の下に、インフレームでクローニングした。レトロウイルスベクターはウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素(WPRE)、セントラルポリプリントラクト(cPPT)要素、pUC複製起点ならびに細菌における増殖および選択を容易にする抗生物質耐性をコードする遺伝子を含有した。
ここでは、CD20発現SUDHDL4腫瘍細胞を標的細胞として使用し、抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞の選別されたプール(図6A)または抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞のプール(図6B)を標的細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。P329G LALA変異を持つGA101 IgGを、IgGとして使用した。このIgGは、一方では腫瘍抗原を認識し、他方では形質導入Jurkat NFAT T細胞によって認識される。陽性対照として、96ウェルプレート(Cellstar Greiner-bio-one、カタログ番号655185)を、10μg/ml CD3抗体(Biolegend(登録商標)製)により、リン酸緩衝食塩水(PBS)中、4℃で一晩または37℃で少なくとも1時間、コーティングした。CD3コートウェル(CD3 coated well)をPBSで2回洗浄し、最終洗浄工程後に、PBSを完全に除去した。Cedex HiResを使って、エフェクター細胞またはJurkat NFAT野生型細胞を計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を生細胞1×106個/mlに調整した。それゆえに、細胞懸濁液の適当なアリコートを室温(RT)において210gで5分間ペレット化し、新鮮なRPMI-160+10%FCS+1%Glutamax(成長培地)に再懸濁した。関心対象の抗原を発現する標的細胞も、同様に計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を、エフェクター細胞について記述したように、成長培地中、生細胞1×106個/mlに調整した。96ウェル浮遊培養プレート(Greiner-bio one)に、標的細胞およびエフェクター細胞を5:1または1:1のE:T比(1ウェルあたり合計110,000細胞)で、3つ組でプレーティングした。次の工程として、関心対象の抗原を標的とするP329G LALA変異を持つGA101の段階希釈液を、2ml深底プレート(Axygen(登録商標))を使って、成長培地中に調製した。1ウェルあたり200ulの最終体積で1μg/ml〜0.0001μg/mlの範囲の最終濃度を得るために、異なる希釈液を50μlずつ各ウェルにピペッティングした。96ウェルプレートを、190g、室温で2分間遠心分離した。Parafilm(登録商標)で封止したプレートを、恒湿雰囲気下、37℃および5%CO2でインキュベートした。20時間のインキュベーション後に、マルチチャンネルピペットを使って上下に10回ピペッティングすることによって各ウェルの内容物を混合した。100μlの細胞懸濁液を新しい白色透明平底96ウェルプレート(Greiner-bio-one)に移し、100ulのONE-Glo(商標)ルシフェラーゼアッセイ(Promega)を加えた。300rpmのロータリーシェーカー上、室温、暗所で、15分間のインキュベーション後に、Tecan(登録商標)Spark10Mプレートリーダーを使って、1秒/ウェルの検出時間で、発光を測定した。
ここでは、CD20を発現するSUDHDL4腫瘍細胞(図7Cおよび図7D)またはWSUDLCL2腫瘍細胞(図7Aおよび図7B)を標的細胞として使用し、抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSDを発現する単一クローンJurkat NFAT細胞を標的細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。P329G LALA変異を持つGA101 IgGをIgGとして使用した。このIgGは、一方では腫瘍抗原を認識し、他方では、Jurkat NFAT T細胞によって認識される。Cedex HiResを使って、エフェクター細胞またはJurkat NFAT野生型細胞を計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を生細胞1×106個/mlに調整した。それゆえに、細胞懸濁液の適当なアリコートを室温(RT)において210gで5分間ペレット化し、新鮮なRPMI-160+10%FCS+1%Glutamax(成長培地)に再懸濁した。関心対象の抗原を発現する標的細胞も、同様に計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を、エフェクター細胞について記述したように、成長培地中、生細胞1×106個/mlに調整した。96ウェル浮遊培養プレート(Greiner-bio one)に、標的細胞およびエフェクター細胞を10:1、5:1または1:1のE:T比(1ウェルあたり合計110,000細胞)で、3つ組でプレーティングした。次の工程として、関心対象の抗原を標的とするP329G LALA変異を持つGA101の段階希釈液を、2ml深底プレート(Axygen(登録商標))を使って、成長培地中に調製した。1ウェルあたり200ulの最終体積で1μg/ml〜0.0001μg/mlの範囲の最終濃度を得るために、異なる希釈液を50μlずつ各ウェルにピペッティングした。96ウェルプレートを、190g、室温で2分間遠心分離した。Parafilm(登録商標)で封止したプレートを、恒湿雰囲気下、37℃および5%CO2でインキュベートした。20時間のインキュベーション後に、マルチチャンネルピペットを使って上下に10回ピペッティングすることによって各ウェルの内容物を混合した。100μlの細胞懸濁液を新しい白色透明平底96ウェルプレート(Greiner-bio-one)に移し、100ulのONE-Glo(商標)ルシフェラーゼアッセイ(Promega)を加えた。300rpmのロータリーシェーカー上、室温、暗所で、15分間のインキュベーション後に、Tecan(登録商標)Spark10Mプレートリーダーを使って、1秒/ウェルの検出時間で、発光を測定した。
ここでは、標的細胞として付着性FAP発現NIH/3T3-huFAP cl 19腫瘍細胞を使って行われるJurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。エフェクター細胞としては、抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図8A)または抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図8C)の選別されたプールを使用した。P329G LALA変異を持つFAP 4B9 IgGをIgGとして使用した。このIgGは、一方では腫瘍抗原を認識し、他方では、Jurkat NFAT T細胞によって認識される。P329G LALA変異を有するIgG DP47/vk3をアイソタイプ対照として含めた。陽性対照として、96ウェルプレート(Greiner-bio-one、カタログ番号655185)のウェルを、10μg/ml CD3抗体(Biolegend(登録商標)製)により、リン酸緩衝食塩水(PBS)中、37℃で少なくとも1時間、コーティングした。CD3コートウェルをPBSで2回洗浄し、最終洗浄工程後に、PBSを完全に除去した。付着性NIH/3T3-huFAP cl 19標的細胞をPBSで1回洗浄し、トリプシンを使って剥離した。剥離した細胞を、DMEM+4.5g LD-グルコース+L-グルタミン+25mM HEPES+10%FCSおよび1%Glutamaxに再懸濁した。Cedex HiResを使って、エフェクター細胞またはJurkat NFAT野生型T細胞を計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を生細胞1×106個/mlに調整した。それゆえに、細胞懸濁液の適当なアリコートを室温(RT)において210gで5分間ペレット化し、新鮮なRPMI-160+10%FCS+1%Glutamax(成長培地)に再懸濁した。関心対象の抗原を発現する標的細胞も、同様に計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を、エフェクター細胞について記述したように、成長培地中、生細胞1×106個/mlに調整した。96ウェル浮遊培養プレート(Greiner-bio one)に、標的細胞およびエフェクター細胞を5:1のE:T比(1ウェルあたり合計110,000細胞)で、3つ組でプレーティングした。次の工程として、関心対象の抗原を標的とするP329G LALA変異を持つ抗体の段階希釈液を、2ml深底プレート(Axygen(登録商標))を使って、成長培地中に調製した。1ウェルあたり200ulの最終体積で1μg/ml〜0.0001μg/mlの範囲の最終濃度を得るために、異なる希釈液を50μlずつ各ウェルにピペッティングした。96ウェルプレートを、190g、室温で2分間遠心分離した。Parafilm(登録商標)で封止したプレートを、恒湿雰囲気下、37℃および5%CO2でインキュベートした。20時間のインキュベーション後に、マルチチャンネルピペットを使って上下に10回ピペッティングすることによって各ウェルの内容物を混合した。100μlの細胞懸濁液を新しい白色透明平底96ウェルプレート(Greiner-bio-one)に移し、100ulのONE-Glo(商標)ルシフェラーゼアッセイ(Promega)を加えた。300rpmのロータリーシェーカー上、室温、暗所で、15分間のインキュベーション後に、Tecan(登録商標)Spark10Mプレートリーダーを使って、1秒/ウェルの検出時間で、発光を測定した。
ここでは、付着性CEA発現MKN45腫瘍細胞を標的細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。エフェクター細胞としては、抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図9A)または抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図9C)の選別されたプールを使用した。どちらもP329G LALA変異を持つCEA A5B7 IgGまたはCEA T84 LCHA IgGのいずれかを使用した。さらにP329G LALA変異を有するIgG DP47/vk3をアイソタイプ対照として含めた。
ここでは、付着性CEA発現MKN45腫瘍細胞を標的細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。エフェクター細胞としては、抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jukat NFAT T細胞(図10C)または抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図10A)の選別されたプールを使用した。どちらもP329G LALA変異を持つCH1A1A 98 99 IgGまたはCEA hMN14 IgGのいずれかを使用した。さらにP329G LALA変異を有するIgG DP47/vk3をアイソタイプ対照として含めた。
ここでは、付着性TNC発現CT26TNC cl 19腫瘍細胞を標的細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。エフェクター細胞としては、抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図11C)または抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図11A)の選別されたプールを使用した。P329G LALA変異を持つTNCA2B10をIgGとして使用した。さらにP329G LALA変異を有するIgG DP47/vk3をアイソタイプ対照として含めた。
ここでは、付着性TNC発現CT26TNC cl 19腫瘍細胞を標的細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。エフェクター細胞としては、抗P329G-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD発現Jurkat NFAT T細胞(図12A)の選別されたプールを使用した。P329G LALA変異を持つTNCA2B10をIgGとして使用した。さらにP329G LALA変異を有するIgG DP47/vk3をアイソタイプ対照として含めた。
ここでは、CD20発現SUDHDL4腫瘍細胞を標的細胞として使用し、抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD(図13A)または抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD(図13B)を発現するJurkat NFAT細胞のプールをエフェクター細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。P329G LALA変異を持つ、D265A P329G変異を持つ、もしくはLALA変異のみを持つ、または変異を全く持たない、GA101 IgGを、IgGとして使用した。このIgGは、一方では腫瘍抗原を認識し、他方では、Jurkat NFAT T細胞によって認識される。Cedex HiResを使って、エフェクター細胞を計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を生細胞1×106個/mlに調整した。細胞懸濁液の適当なアリコートを室温(RT)において210gで5分間ペレット化し、新鮮なRPMI-160+10%FCS+1%Glutamaxに再懸濁した。関心対象の抗原を発現する標的細胞も、同様に計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を、エフェクター細胞について記述したように、成長培地中、生細胞1×106個/mlに調整した。96ウェル浮遊培養プレート(Greiner-bio one)に、標的細胞およびエフェクター細胞を5:1のE:T比(1ウェルあたり合計110,000細胞)で、3つ組でプレーティングした。次の工程として、関心対象の抗原を標的とするさまざまな抗体の段階希釈液を、2ml深底プレート(Axygen(登録商標))を使って、成長培地中に調製した。1ウェルあたり200μlの最終体積で1μg/ml〜10pg/mlの範囲の最終濃度を得るために、異なる希釈液を50μlずつ各ウェルにピペッティングした。96ウェルプレートを、190g、室温で2分間遠心分離した。Parafilm(登録商標)で封止したプレートを、恒湿雰囲気下、37℃および5%CO2でインキュベートした。20時間のインキュベーション後に、マルチチャンネルピペットを使って上下に10回ピペッティングすることによって各ウェルの内容物を混合した。100μlの細胞懸濁液を新しい白色透明平底96ウェルプレート(Greiner-bio-one)に移し、100μlのONE-Glo(商標)ルシフェラーゼアッセイ(Promega)を加えた。300rpmのロータリーシェーカー上、室温、暗所で、15分間のインキュベーション後に、Tecan(登録商標)Spark10Mプレートリーダーを使って、1秒/ウェルの検出時間で、発光を測定した。グラフは、P329G変異を有するかP329G変異とLALA変異とを有する抗体を使用した場合にのみ、標的細胞の用量依存的活性化を示し、LALA変異のみの場合は、そのような活性化を示さない。さらに、GA101野生型抗体を使用した場合には、エフェクター細胞の活性化は検出できない。
ここでは、CD20発現SUDHDL4腫瘍細胞を標的細胞として使用し、抗P329G-ds-scFv-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD(図14A)または抗P329G-ds-Fab-CD28ATD-CD28CSD-CD3zSSD(図14B)を発現するJurkat NFAT細胞のプールをエフェクター細胞として使用する、Jurkat NFAT T細胞レポーターアッセイについて述べる。P329G LALA変異を持つ、P329G変異のみを持つ、もしくはLALA変異のみを持つ、または変異を全く持たない、GA101 IgGを、IgGとして使用した。このIgGは、一方では腫瘍抗原を認識し、他方では、Jurkat NFAT T細胞によって認識される。Cedex HiResを使って、エフェクター細胞を計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を生細胞1×106個/mlに調整した。細胞懸濁液の適当なアリコートを室温(RT)において210gで5分間ペレット化し、新鮮なRPMI-160+10%FCS+1%Glutamaxに再懸濁した。関心対象の抗原を発現する標的細胞も、同様に計数し、それらの生存率についてチェックした。細胞数を、エフェクター細胞について記述したように、成長培地中、生細胞1×106個/mlに調整した。384ウェルプレートに、標的細胞およびエフェクター細胞を5:1のE:T比(1ウェルあたり合計110,000細胞)で、3つ組でプレーティングした。次の工程として、関心対象の抗原を標的とするさまざまな抗体の段階希釈液を、96ウェルプレートを使って、成長培地中に調製した。1ウェルあたり30μlの最終体積で1μg/ml〜10pg/mlの範囲の最終濃度を得るために、異なる希釈液を10μlずつ各ウェルにピペッティングした。384ウェルプレートを、190g、室温で2分間遠心分離した。Parafilm(登録商標)で封止したプレートを、恒湿雰囲気下、37℃および5%CO2でインキュベートした。20時間のインキュベーション後に、6μlのONE-Glo(商標)ルシフェラーゼアッセイ(Promega)を加え、Tecan(登録商標)Spark10Mプレートリーダーを使って、1秒/ウェルの検出時間で、直ちに読出しを行った。グラフは、P329G変異を有するかP329G変異とLALA変異とを有する抗体を使用した場合にのみ、標的細胞の用量依存的活性化を示し、LALA変異のみの場合は、そのような活性化を示さない。さらに、GA101野生型抗体を使用した場合には、エフェクター細胞の活性化は検出できない。
Claims (30)
- アンカリング膜貫通ドメインと、抗原結合部分を含む細胞外ドメインとを含む、抗原結合受容体であって、該抗原結合部分が、変異型結晶性フラグメント(fragment crystallizable)(Fc)ドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該変異型Fcドメインが、非変異型親Fcドメインと比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、抗原結合受容体。
- 変異型FcドメインのFc受容体結合が、非変異型親FcドメインのFc受容体結合と比較して低減しており、特にFc受容体がFcγ受容体または新生児型Fc受容体(FcRn)である、請求項1記載の抗原結合受容体。
- 抗原結合部分がscFv、Fab、crossFab、またはscFabである、請求項1または請求項2のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- アンカリング膜貫通ドメインが、CD8、CD3z、FCGR3A、NKG2D、CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、DAP10、もしくはDAP12膜貫通ドメイン、またはそれらのフラグメントからなる群より選択される膜貫通ドメインであり、特にアンカリング膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインまたはそのフラグメントである、請求項1〜3のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 少なくとも1つの刺激シグナリングドメインおよび/または少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインをさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 少なくとも1つの刺激シグナリングドメインが、CD3zの細胞内ドメイン、FCGR3Aの細胞内ドメイン、およびNKG2Dの細胞内ドメイン、またはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択され、特に少なくとも1つの刺激シグナリングドメインがCD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントである、請求項1〜5のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインが、CD27の細胞内ドメイン、CD28の細胞内ドメイン、CD137の細胞内ドメイン、OX40の細胞内ドメイン、ICOSの細胞内ドメイン、DAP10の細胞内ドメイン、およびDAP12の細胞内ドメイン、またはそれらのフラグメントからなる群より個別に選択され、特に少なくとも1つの共刺激シグナリングドメインがCD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントである、請求項1〜6のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- CD28の細胞内ドメインまたはそのフラグメントを含む1つの刺激シグナリングドメインを含み、かつCD3zの細胞内ドメインまたはそのフラグメントを含む1つの共刺激シグナリングドメインを含む、請求項1〜7のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 抗原結合部分がscFvフラグメントであり、該scFvフラグメントが、C末端において、アンカリング膜貫通ドメインのN末端へと、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、請求項1〜8のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 抗原結合部分がFabフラグメントまたはcrossFabフラグメントであり、該FabフラグメントまたはcrossFabフラグメントが、重鎖のC末端において、アンカリング膜貫通ドメインのN末端へと、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、請求項1〜9のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うL234、L235、I253、H310、P331、P329、およびH435からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異を含み、特に該アミノ酸変異がL234A、L235A、I253A、N297A、H310A、P329G、および/またはH435Aである、請求項1〜10のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うP329Gのアミノ酸変異を含み、変異型FcドメインのFcγ受容体結合が、非変異型親FcドメインのFcγ受容体結合と比較して低減している、請求項1〜11のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 変異型Fcドメインが、EUナンバリングに従うI253、H310、およびH435からなる群より選択される位置に少なくとも1つのアミノ酸変異、特にI253A、H310A、およびH435A(「AAA」)のアミノ酸変異を含み、変異型FcドメインのFcRn結合が、非変異型親FcドメインのFcRn結合と比較して低減している、請求項1〜11のいずれか一項記載の抗原結合受容体。
- 少なくとも1つの抗原結合部分が、P329G変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該抗原結合部分が、
(i)(a)重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列RYWMN(SEQ ID NO:1)、
(b)CDR H2アミノ酸配列
、および
(c)CDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域(VH)と、
(ii)(d)軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
(e)CDR L2アミノ酸配列GTNKRAP(SEQ ID NO:5)、および
(f)CDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域(VL)と
を含む、請求項1〜12のいずれか一項記載の抗原結合受容体。 - 少なくとも1つの抗原結合部分が、I253A、H310A、およびH435A(「AAA」)変異を含む変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができず、該抗原結合部分が、
(i)(a)重鎖相補性決定領域(CDR H)1アミノ酸配列SYGMS(SEQ ID NO:53)、
(b)CDR H2アミノ酸配列SSGGSY(SEQ ID NO:54)、および
(c)CDR H3アミノ酸配列
を含む重鎖可変領域(VH)と、
(ii)(d)軽鎖相補性決定領域(CDR L)1アミノ酸配列
(e)CDR L2アミノ酸配列KVSNRFS(SEQ ID NO:57)、および
(f)CDR L3アミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域(VL)と
を含む、請求項1〜11または請求項13のいずれか一項記載の抗原結合受容体。 - 請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入T細胞。
- 請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
- 請求項17記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター、特に発現ベクター。
- 請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入T細胞。
- (A)請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞と、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キット。 - (A)請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体をコードする単離されたポリヌクレオチドと、
(B)変異型Fcドメインを含む抗体と
を含む、キットであって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
キット。 - 変異型Fcドメインを含む抗体が、線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)、がん胎児性抗原(CEA)、メソテリン(MSLN)、CD20、葉酸受容体1(FOLR1)、およびテネイシン(TNC)からなる群より選択される抗原に対して特異的に結合することができる、請求項20または請求項21のいずれか一項記載のキット。
- 医薬としての使用のための、請求項20〜22のいずれか一項記載のキット。
- 疾患の処置における使用のための、特に悪性疾患の処置における使用のための、請求項20〜22のいずれか一項記載のキット。
- 変異型Fcドメインを含む抗体の投与の前、該投与と同時、または該投与の後に、
変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない抗原結合受容体
を発現する形質導入T細胞が、投与される、
医薬としての使用のための、請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体または請求項19記載の形質導入T細胞。 - 変異型Fcドメインを含む抗体の投与の前、該投与と同時、または該投与の後での、
変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない抗原結合受容体
を発現する形質導入T細胞の投与を含む、悪性疾患の処置
における使用のための、請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体または請求項19記載の形質導入T細胞。 - 請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞を対象に投与する工程と、
該形質導入T細胞の投与の前、該投与と同時、または該投与の後に、変異型Fcドメインを含む抗体の治療有効量を投与する工程と
を含む、対象における疾患を処置する方法であって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
方法。 - 標的細胞を、請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入T細胞と、変異型Fcドメインを含む抗体の存在下で接触させる工程を含む、標的細胞の溶解を誘導するための方法であって、
該抗原結合受容体が、変異型Fcドメインに対して特異的に結合することができるが、非変異型親Fcドメインに対して特異的に結合することができない、
方法。 - 悪性疾患の処置のための医薬の製造のための、
請求項1〜15のいずれか一項記載の抗原結合受容体、請求項17記載のポリヌクレオチド、または請求項19記載の形質導入T細胞
の使用。 - 実質的に実施例のいずれか一つまたは添付の図面のいずれか一つを参照して上述した抗原結合受容体。
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