JP2020514368A - Xviii型コラーゲンアッセイ - Google Patents
Xviii型コラーゲンアッセイ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020514368A JP2020514368A JP2019550764A JP2019550764A JP2020514368A JP 2020514368 A JP2020514368 A JP 2020514368A JP 2019550764 A JP2019550764 A JP 2019550764A JP 2019550764 A JP2019550764 A JP 2019550764A JP 2020514368 A JP2020514368 A JP 2020514368A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- time point
- collagen
- xviii collagen
- disease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims description 20
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title description 15
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title description 15
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title description 15
- 108010001463 Collagen Type XVIII Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000047200 Collagen Type XVIII Human genes 0.000 claims abstract description 69
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 21
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 12
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Natural products N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 3
- 208000031209 hemophilic arthropathy Diseases 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 claims description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 claims description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 claims description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 9
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 8
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 8
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 8
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 7
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 5
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 5
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 5
- 208000005424 Knobloch syndrome Diseases 0.000 description 4
- 102000007614 Thrombospondin 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 102400001047 Endostatin Human genes 0.000 description 3
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 3
- 102000018152 Frizzled domains Human genes 0.000 description 3
- 108050007261 Frizzled domains Proteins 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 101150099550 COL18A1 gene Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 238000003646 Spearman's rank correlation coefficient Methods 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 206010053649 Vascular rupture Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 2
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- -1 DUF Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010062713 Haemorrhagic diathesis Diseases 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 1
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011504 assay standardization Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000004349 growth plate Anatomy 0.000 description 1
- 208000002085 hemarthrosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 210000001210 retinal vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
Abstract
Description
a.ヒト患者から試料を得ることと、
b.試料を抗体(上に記載)と接触させ、短アイソフォームXVIII型コラーゲンと抗体との間の結合を検出することによって、その短アイソフォームXVIII型コラーゲンが試料中に存在するかを検出することと、を含む。
−ストレプトアビジン被覆96ウェルプレート
−その抗体と反応性であり、ビオチン化ペプチドH2N−EPERISEEVG−L−ビオチン(配列番号5)であり得、Lが、任意のリンカーである、ペプチド
−サンドイッチイムノアッセイにおける使用のための任意にビオチン化された二次抗体
−N末端配列H2N−EPERISEEVG...(配列番号6)を含むキャリブレータペプチド
−抗体HRP標識キット
−抗体放射性標識キット
−アッセイ可視化キットのうちの少なくとも1つと、を含む。
本明細書で使用されるとき、「N末端エピトープ」という用語は、ポリペプチドの末端にある、すなわち、ポリペプチドのN末端にある、N末端ペプチド配列を指し、その一般的な方向における意味として解釈されるものではない。
血清を、35人の26歳以上の男性HF患者から収集した。このカットオフ年齢は、コラーゲンターンオーバーが約25歳の年齢での成長板の閉鎖で徐々に減少するため、選択された[21]。患者は、出血エピソード時の必要に応じた投薬、または5〜10IU/kgの組換えFVIII、2〜3回/週の低用量の予防薬の摂取のいずれかの治療歴を有した。患者は、世界血友病連盟身体検査スコア(Gilbertスコア)によって、およびPetterssonスコアに従った放射線学的評価によって定義される様々な程度のHF関節症を有した。患者の平均ABRは18.1であり、2〜46の範囲であった。除外基準は、血友病以外の出血障害、ヒト免疫不全ウイルス感染、慢性閉塞性肺疾患、関節疾患または肝線維症の病歴、および抗炎症性生物学的製剤またはステロイドでの治療であった。研究参加者は、Department of Haematology,Peking Union Medical College Hospital,Beijing,Chinaに登録された。研究は、Peking Union Medical College Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences,Ethics Review Boardによって整理番号S−720で承認された。署名されたインフォームドコンセントを全ての対象から得た。
ヒトXVIII型コラーゲンα1鎖の短アイソフォームのN末端エピトープの最初の10個のアミノ酸に対応するペプチド(シグナルペプチド、34’EPERISEEVG’43を除く)を用いて、モノクローナルネオエピトープ特異的抗体を産生した。Beijing Administration Office of Laboratory AnimalおよびNordic Bioscienceの動物倫理委員会が動物実験を承認した。モノクローナル抗体の産生を、60μgのキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)に結合したペプチドを含む200μLの乳化したフロイント完全アジュバントを用いる6〜8週齢Balb/Cマウスの皮下免疫化によって開始した。連続免疫化を、安定な力価レベルに到達するまで、フロイント不完全アジュバントにおいて2週間間隔で行った。マウスに100μLの0.9%塩化ナトリウム溶液中の50μgの免疫原を追加で静脈内投与し、3日後、脾臓細胞をSP2/0骨髄腫細胞(LGC Standards AB,Boras,Sweden)と融合した。ハイブリドーマを、96ウェルプレートにおいて成長させ、モノクローナル成長を、限界希釈によって確認した。クローンを、特異的エピトープ(EPERISEEVG、配列番号1)、伸長エピトープ(AEPERISEEVG、配列番号3)、および切断エピトープ(PERISEEVG、配列番号4)に対してスクリーニングした。mAb産生クローン、NB632−13H11/G5を、上記ペプチドに対する反応性に基づいて選択し、抗体を、Protein Gカラム(GE Healthcare,Hilleroed,Denmark)を用いて精製した。
競合COL−18N ELISAを次の通り行った。96ウェルストレプトアビジン被覆プレート(Roche cat.:11940279)を、100μl/ウェルのコーティングバッファー(20mM Na2HPO4、3.7mM KH2PO4、137mM NaCl、2.7mM KCL、0.1%Tween20、1%BSA、pH7.4)に溶解した1.25ng/mLのビオチン化合成ペプチドEPERISEEVG−K−ビオチン(配列番号7)で被覆し、30分間20℃でインキュベートした。プレートを、洗浄バッファー(20mM Tris、50mM NaCl、pH7.2)で5回洗浄した。インキュベーションバッファー(20mM Na2HPO4、3.7mM KH2PO4、137mM NaCl、2.7mM KCL、0.1%Tween20、1%BSA、5%Liquid II pH7.4)に希釈した20μLの標準ペプチド(EPERISEEVG、配列番号6)または試料を、適切なウェルに添加し、続いて100μL/ウェルのモノクローナル抗体NB632−13H11/G5を添加し、1時間20℃でインキュベートした。洗浄後、100μlのウサギ抗マウス抗体(Jackson、315−035−045)を添加し、コーティングバッファーに1:3000で溶解し、1時間20℃、300rpmでインキュベートした。最後の5回の洗浄後、ウェルを100μLのテトラメチルベンジジン(TMB)(Kem−En−Tec cat.438OH)と暗所で15分間20℃、300rpmでインキュベートし、続いて100μL/ウェルの停止溶液(1%H2SO4)を添加した。比色反応を、650nmを参照として450nmで測定し、検量線を、4パラメトリック数理あてはめモデルを用いてプロットした。
技術的アッセイ検証を国際的ガイドラインに従って行った。検出下限(LLOD)を、21個のゼロ試料(すなわち、アッセイバッファー)から決定される平均+3×標準偏差(SD)として計算した。検出上限(ULOD)を、標準A(1000ng/ml)の10個の測定値の平均−3×SDとして決定した。定量下限(LLOQ)を、30%未満の不正確性で可能な最低濃度によって決定した。アッセイ内およびアッセイ間変動を、2通りの10の独立したランによる7つのヒト試料の変動の平均として計算した。希釈回収を、2つのヒト血清および3つのヒトクエン酸血漿の2倍希釈物において決定し、未希釈物と比較した希釈マトリックスの回収パーセンテージとして計算した。添加回収を、測定範囲全体を網羅する濃度で標準ペプチドが添加されたヒト血清およびクエン酸血漿において、または濃度を2倍にするために同様の濃度の2つの試料を組み合わせることによって評価した。添加回収を、理論量の測定量回収パーセンテージとして計算した。ヘモグロビン、血清脂質、ビオチン、およびヒト抗マウス抗体(HAMA)によるマウス抗原に対するヒト抗体による干渉を、2倍希釈物を既知の濃度の血清試料に添加することによって決定した。濃度は、0.500mmol/lのヘモグロビン、0.56mmol/lの血清脂質、160μg/lのビオチン、および2010ng/mlのHAMAで開始した。回収パーセンテージを、正常血清試料を参照値として計算した。分析物安定性を、4つの凍結−融解サイクルにわたる2つの健康なヒト血清試料および1つの健康なクエン酸血漿試料について決定し、第1の凍結−融解サイクルの回収パーセンテージとして計算した。同じ試料を、非ストレス分析物に対して4℃および20℃で2時間、4時間、および24時間で試験した。最後に、抗体特異性を、標準(EPERISEEVG、配列番号1)、伸長(AEPERISEEVG、配列番号3)、切断(PERISEEVG、配列番号4)、および選択解除ペプチド(EPQIDEKKK(配列番号8)およびCPERALERR(配列番号9))に対する反応性を試験するサニティーチェックによって評価した。
血清COL18−N濃度とABRとの間の相関は、GraphPad Prism v6(GraphPad Software,La Jolla,CA,USA)でSpearman順位相関係数を用いて分析した。差は、p<0.05である場合に統計的に有意とみなした。
ヒト血清および血漿(クエン酸、EDTA、ヘパリン)中のCOL−18Nを検出するためにモノクローナル抗体を用いる新規競合ELISAを開発および評価した。
●血清COL−18Nレベルは、HF患者においてABRと相関した。
●許容可能なアッセイ内−アッセイ間変動ならびに許容可能な希釈および添加回収を有するヒト血清およびヒト血漿中のCOL−18Nを検出するための技術的に安定なアッセイ。
内皮BM分解を評価することができる競合COL−18N ELISAを開発した。ELISAの技術的性能を表1にまとめ、4.8〜671ng/mlの測定範囲、それぞれ7%および13%のアッセイ内およびアッセイ間変動性、100±20%以内の希釈および添加回収、ならびにイムノアッセイ干渉なしの分析安定性を提供する。血清(16.6ng/ml)、クエン酸血漿(12.5ng/ml)、EDTA血漿(13.2ng/ml)、およびヘパリン血漿(15.8ng/ml)中のCOL−18Nの正常濃度は、マトリックスにかかわらず一貫していた。
表1.COL−18N ELISAの技術的性能
要約すると、組み合わされたデータは、技術的にロバストなCOL−18Nバイオマーカーが、XVIII型コラーゲンの短アイソフォームの分解に影響を及ぼす、血管BM分解およびリモデリングを含む病理に関連し得ることを示す。加えて、データは、COL−18Nバイオマーカーが、関節症の発症を予防するために患者の最適な治療および監視のためにABRを評価することを可能にする。
参考文献
1 Funk MB,Schmidt H,Becker S,Escuriola C,Klarmann D,Klingebiel T,Kreuz W.Modified magnetic resonance imaging score compared with orthopaedic and radiological scores for the evaluation of haemophilic arthropathy.Haemophilia 2002;8:98−103.
2 Fischer K,Steen Carlsson K,Petrini P,Holmstrom M,Ljung R,van den Berg HM,Berntorp E.Intermediate−dose versus high−dose prophylaxis for severe hemophilia:comparing outcome and costs since the 1970s.Blood 2013;122:1129−36.
3 Gringeri a,Lundin B,von Mackensen S,Mantovani L,Mannucci PM.A randomized clinical trial of prophylaxis in children with hemophilia A(the ESPRIT Study).J Thromb Haemost 2011;9:700−10.
4 Lundin B,Ljung R,Pettersson H.MRI scores of ankle joints in children with haemophilia−comparison with clinical data.Haemophilia 2005;11:116−22.
5 Tomono Y,Naito I,Ando K,Yonezawa T,Sado Y,Hirakawa S,Arata J,Okigaki T,Ninomiya Y.Epitope−defined monoclonal antibodies against multiplexin collagens demonstrate that type XV and XVIII collagens are expressed in specialized basement membranes.Cell Struct Funct 2002;27:9−20.
6 Ricard−Blum S,Ruggiero F.The collagen superfamily:from the extracellular matrix to the cell membrane.Pathol Biol 2005;53:430−42.
7 Manon−Jensen T,Kjeld NG,Karsdal MA.Collagen−mediated hemostasis.J Thromb Haemost 2016;14:438−48.
8 Elamaa H,Snellman A,Rehn M,Autio−Harmainen H,Pihlajaniemi T.Characterization of the human type XVIII collagen gene and proteolytic processing and tissue location of the variant containing a frizzled motif.Matrix Biol 2003;22:427−42.
9 Saarela J,Rehn M,Oikarinen a,Autio−Harmainen H,Pihlajaniemi T.The short and long forms of type XVIII collagen show clear tissue specificities in their expression and location in basement membrane zones in humans.Am J Pathol American Society for Investigative Pathology;1998;153:611−26.
10 Seppinen L,Pihlajaniemi T.The multiple functions of collagen XVIII in development and disease.Matrix Biol International Society of Matrix Biology;2011;30:83−92.
11 Marneros AG,Olsen BR.Physiological role of collagen XVIII and endostatin.FASEB J 2005;19:716−28.
12 Passos−Bueno MR,Suzuki OT,Armelin−Correa LM,Sertie AL,Errera FI V,Bagatini K,Kok F,Leite KRM.Mutations in collagen 18A1(COL18A1) and their relevance to the human phenotype.An Acad Bras Cienc 2006;78:123−31.
13 Marneros AG,Keene DR,Hansen U,Fukai N,Moulton K,Goletz PL,Moiseyev G,Pawlyk BS,Halfter W,Dong S,Shibata M,Li T,Crouch RK,Bruckner P,Olsen BR.Collagen XVIII/endostatin is essential for vision and retinal pigment epithelial function.EMBO J 2004;23:89−99.
14 Utriainen A,Eklund L,Pihlajaniemi and T.Structurally altered basement membranes and hydrocephalus in a type XVIII collagen deficient mouse line.Hum Mol Genet 2004;13:2089−99.
15 Marneros AG,Olsen BR.Age−Dependent Iris Abnormalities in Collagen XVIII/Endostatin Deficient Mice with Similarities to Human Pigment Dispersion Syndrome.Investig Opthalmology Vis Sci 2003;44:2367.
16 Fukai N.Lack of collagen XVIII/endostatin results in eye abnormalities.EMBO J 2002;21:1535−44.
17 Aikio M,Elamaa H,Vicente D,Izzi V,Kaur I,Seppinen L,Speedy HE,Kaminska D,Kuusisto S,Sormunen R,Heljasvaara R,Jones EL,Muilu M,Jauhiainen M,Pihlajamaki J,Savolainen MJ,Shoulders CC,Pihlajaniemi T.Specific collagen XVIII isoforms promote adipose tissue accrual via mechanisms determining adipocyte number and affect fat deposition.Proc Natl Acad Sci U S A 2014;111:E3043−52.
18 Carmeliet P,Collen D.Molecular Analysis of Blood Vessel Formation and Disease.Am J Physiol 1997;273:2091−104.
19 Karsdal MA,Bay−Jensen AC,Leeming DJ,Henriksen K,Christiansen C.Quantification of “end products” of tissue destruction in inflammation may reflect convergence of cytokine and signaling pathways − implications for modern clinical chemistry.Biomarkers 2013;18:375−8.
20 Karsdal MA,Nielsen MJ,Sand JM,Henriksen K,Genovese F,Bay−Jensen A−C,Smith V,Adamkewicz JI,Christiansen C,Leeming DJ.Extracellular Matrix Remodeling:The Common Denominator in Connective Tissue Diseases Possibilities for Evaluation and Current Understanding of the Matrix as More Than a Passive Architecture,but a Key Player in Tissue Failure.Assay Drug Dev Technol 2013;11:70−92.
21 Iki M,Akiba T,Matsumoto T,Nishino H,Kagamimori S,Kagawa Y,Yoneshima H.Reference database of biochemical markers of bone turnover for the Japanese female population.Japanese Population−based Osteoporosis(JPOS)Study.Osteoporos Int 2004;15:981−91.
22 Gefter ML,Margulies DH,Scharff MD.A simple method for polyethylene glycol−promoted hybridization of mouse myeloma cells.Somatic Cell Genet 1977;3:231−6.
23 Aledort LM,Haschmeyer RH,Pettersson H.A longitudinal study of orthopaedic outcomes for severe factor−VIII−deficient haemophiliacs.The Orthopaedic Outcome Study Group.J Intern Med 1994;236:391−9.
24 Aznar JA,Magallon M,Querol F,Gorina E,Tusell JM.The orthopaedic status of severe haemophiliacs in Spain.Haemophilia 2000;6:170−6.
25 van Velzen AS,Eckhardt CL,Streefkerk N,Peters M,Hart DP,Hamulyak K,Klamroth R,Meijer K,Nijziel M,Schinco P,Yee TT,van der Bom JG,Fijnvandraat K.The incidence and treatment of bleeding episodes in non−severe haemophilia A patients with inhibitors.Thromb Haemost 2015;115:543−50.
26 Barrowcliffe TW,Raut S,Sands D,Hubbard AR.Coagulation and Chromogenic Assays of Factor VIII Activity:General Aspects,Standardization,and Recommendations.Semin Thromb Hemost 2002;28:247−56.
27 Mikaelsson M.Influence of phospholipids on the assessment of factor VIII activity.Haemophilia 1998;4.
28 Mikaelsson M,Oswaldsson U.Assaying the Circulating Factor VIII Activity in Hemophilia A Patients Treated with Recombinant Factor VIII Products.Semin Thromb Hemost 2002;28:257−64.
29 Brummel−Ziedins KE,Branda RF,Butenas S,Mann KG.Discordant fibrin formation in hemophilia.J Thromb Haemost 2009;7:825−32.
30 Ragni M V.,DiMichele DM,Hay CM,Malec LM,Seaman CD,Li J,Yabes JG,Butenas S,Brummel−Ziedins K.Thrombin generation and bleeding in haemophilia inhibitor patients during immune tolerance induction.Haemophilia 2016;22:240−7.
Claims (20)
- 短アイソフォームXVIII型コラーゲンと特異的に反応性である抗体であって、前記抗体が、中アイソフォームXVIII型コラーゲンと、または長アイソフォームXVIII型コラーゲンとは反応しない、抗体。
- 前記抗体が、短アイソフォームXVIII型コラーゲンのN末端エピトープと特異的に反応性である、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体が、H2N−EPERISEEVG...(配列番号1)のN末端アミノ酸配列に含まれるN末端エピトープと特異的に反応性である、請求項2に記載の抗体。
- 前記抗体が、N末端アミノ酸配列H2N−EPERIS...(配列番号2)を含むN末端エピトープと特異的に反応性である、請求項2に記載の抗体。
- 前記抗体が、H2N−AEPERISEEVG(配列番号3)である前記N末端アミノ酸配列のN拡張伸長バージョンを特異的に認識もしくは結合しない、かつ/またはH2N−PERISEEVG(配列番号4)である前記N末端アミノ酸配列のN切断バージョンを特異的に認識もしくは結合しない、請求項3または4に記載の抗体。
- 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項1〜5のいずれかに記載の抗体。
- 試料において短アイソフォームXVIII型コラーゲンを検出または定量化するためのイムノアッセイの方法であって、前記方法が、前記短アイソフォームXVIII型コラーゲンを含む試料を請求項1〜6に記載の抗体と接触させることと、前記抗体の結合の量を決定することと、を含む、方法。
- 前記方法が、短アイソフォームXVIII型コラーゲンのN末端エピトープを検出または定量化することを含む、請求項7に記載の方法。
- 前記N末端エピトープが、前記N末端アミノ酸配列H2N−EPERISEEVG...(配列番号1)に含まれる、請求項8に記載の方法。
- 前記N末端エピトープが、前記N末端アミノ酸配列H2N−EPERIS...(配列番号2)を含む、請求項8または9に記載の方法。
- 前記試料が、生物流体である、請求項7〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物流体が、血清、血漿、尿、脳脊髄液、または羊水である、請求項11に記載の方法。
- 前記イムノアッセイが、競合アッセイまたはサンドイッチアッセイである、請求項7〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記イムノアッセイが、ラジオイムノアッセイまたは酵素結合免疫吸着アッセイである、請求項7〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が、前記方法によって決定される前記短アイソフォームXVIII型コラーゲンの量を、既知の疾患重症度の標準血友病性疾患試料と相関させて、血友病性疾患の重症度を評価することをさらに含む、請求項7〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が、前記方法によって決定される前記短アイソフォームXVIII型コラーゲンの量を、健康な対象と関連した標準値と比較して、血友病性疾患の存在および/または重症度を評価することをさらに含む、請求項7〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が、対象から第1の時点および少なくとも1つのその後の時点で得られる少なくとも2つの試料中のXVIII型コラーゲンの量を定量化することをさらに含み、
前記第1の時点から前記少なくとも1つのその後の時点までのXVIII型コラーゲンの量の増加が、前記第1の時点から前記少なくとも1つのその後の時点までの血友病性疾患の悪化を示し、
前記第1の時点から前記少なくとも1つのその後の時点までのXVIII型コラーゲンの量の減少が、前記第1の時点から前記少なくとも1つのその後の時点までの血友病性疾患の改善を示す、請求項7〜14のいずれか一項に記載の方法。 - 前記血友病性疾患が、血友病性関節症であり得る、請求項15〜17に記載の方法。
- 血友病性疾患を治療するための薬物の有効性を評価するための方法であって、前記方法が、請求項7〜14のいずれか一項に記載の方法を使用して、対象から第1の時点、および前記対象への前記薬物の投与の期間中の少なくとも1つのその後の時点で得られる少なくとも2つの試料中のXVIII型コラーゲンの量を定量化することを含み、
前記第1の時点から前記薬物の投与の期間中の前記少なくとも1つのその後の時点までのXVIII型コラーゲンの量の低減が、血友病性疾患を治療するための有効な薬物であることを示す、方法。 - 短アイソフォームXVIII型コラーゲンの量を決定するためのアッセイキットであって、前記キットが、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体と、
−ストレプトアビジン被覆96ウェルプレート
−前記抗体と反応性であり、ビオチン化ペプチドH2N−EPERISEEVG−L−ビオチン(配列番号5)であり得、Lが、任意のリンカーである、ペプチド
−サンドイッチイムノアッセイにおける使用のための任意にビオチン化された二次抗体
−N末端配列H2N−EPERISEEVG・・・(配列番号6)を含むキャリブレータペプチド
−抗体HRP標識キット
−抗体放射性標識キット
−アッセイ可視化キットのうちの少なくとも1つと、を含む、キット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB1704182.3A GB201704182D0 (en) | 2017-03-16 | 2017-03-16 | Collagen tye XVIII assay |
GB1704182.3 | 2017-03-16 | ||
PCT/EP2018/056320 WO2018167111A1 (en) | 2017-03-16 | 2018-03-14 | Collagen type xviii assay |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020514368A true JP2020514368A (ja) | 2020-05-21 |
JP2020514368A5 JP2020514368A5 (ja) | 2021-04-30 |
JP7275040B2 JP7275040B2 (ja) | 2023-05-17 |
Family
ID=58688412
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019550764A Active JP7275040B2 (ja) | 2017-03-16 | 2018-03-14 | Xviii型コラーゲンアッセイ |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20200087385A1 (ja) |
EP (1) | EP3596120B1 (ja) |
JP (1) | JP7275040B2 (ja) |
ES (1) | ES2969042T3 (ja) |
GB (1) | GB201704182D0 (ja) |
WO (1) | WO2018167111A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201901710D0 (en) * | 2019-02-07 | 2019-03-27 | Nordic Bioscience As | Collagen type 23 assay |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007049749A1 (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-03 | Dnavec Corporation | 血液凝固異常の治療方法 |
-
2017
- 2017-03-16 GB GBGB1704182.3A patent/GB201704182D0/en not_active Ceased
-
2018
- 2018-03-14 ES ES18713147T patent/ES2969042T3/es active Active
- 2018-03-14 EP EP18713147.9A patent/EP3596120B1/en active Active
- 2018-03-14 JP JP2019550764A patent/JP7275040B2/ja active Active
- 2018-03-14 US US16/494,441 patent/US20200087385A1/en not_active Abandoned
- 2018-03-14 WO PCT/EP2018/056320 patent/WO2018167111A1/en unknown
-
2022
- 2022-12-22 US US18/145,767 patent/US20230340092A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007049749A1 (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-03 | Dnavec Corporation | 血液凝固異常の治療方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
AM. J. PATHOL., vol. 153, JPN6021051639, 1998, pages 611 - 626, ISSN: 0004881572 * |
J. THROMB. HAEMOST., vol. 14, JPN6021051635, 2016, pages 438 - 448, ISSN: 0004881576 * |
MATRIX BIOL., vol. 16, JPN6021051637, 1998, pages 319 - 328, ISSN: 0004881574 * |
MATRIX BIOL., vol. 22, JPN6021051636, 2003, pages 427 - 442, ISSN: 0004881575 * |
MATRIX BIOL., vol. 30, JPN6021051638, 2011, pages 83 - 92, ISSN: 0004881573 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018167111A1 (en) | 2018-09-20 |
EP3596120C0 (en) | 2023-12-13 |
EP3596120A1 (en) | 2020-01-22 |
US20200087385A1 (en) | 2020-03-19 |
GB201704182D0 (en) | 2017-05-03 |
JP7275040B2 (ja) | 2023-05-17 |
US20230340092A1 (en) | 2023-10-26 |
EP3596120B1 (en) | 2023-12-13 |
ES2969042T3 (es) | 2024-05-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6408051B2 (ja) | 病理学バイオマーカーアッセイ | |
JP2021003114A (ja) | 血漿カリクレイン系バイオマーカーを決定するためのアッセイ | |
US9726674B2 (en) | PIIINP neo-epitope assay | |
US9835631B2 (en) | Combined biomarker measurement of fibrosis | |
KR20150107870A (ko) | pKal 매개 장애의 평가, 검정 및 치료 | |
AU2009322367B2 (en) | Methods of measuring ADAMTS13-mediated in vivo cleavage of von Willebrand factor and uses thereof | |
JP2019510210A (ja) | 線維症の組み合わせたバイオマーカー測定 | |
Kjeld et al. | The endothelial specific isoform of type XVIII collagen correlates to annual bleeding rate in haemophilia patients | |
US20230340092A1 (en) | Collagen Type XVIII Assay | |
US20220317133A1 (en) | Assay for Assessing Heart Failure | |
JP2023515436A (ja) | 循環bmp10(骨形成タンパク質10)の検出方法 | |
RU2739607C2 (ru) | Специфически очищенные антитела против пресепсина | |
JP6505749B2 (ja) | 肺疾患および他の疾患用の生化学マーカー | |
JP2023522052A (ja) | 線維症のバイオマーカー | |
Manon-Jensen et al. | Initiation of the wound healing cascade in inflammatory bowel disease: assessment of Von Willebrand factor ADAMTS-13 processing and formation in crohn’s disease | |
JP7169356B2 (ja) | Sparcアッセイ | |
JP6999653B2 (ja) | ニドゲン-1フラグメントアッセイ | |
US20200340994A1 (en) | Tumstatin Assay | |
US20220227848A1 (en) | Type XXIII Collagen Assay | |
US20200378971A1 (en) | Elastin Assay | |
WO2024126685A1 (en) | Single-domain antibody targeting von wilebrand factor a3-domain |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210311 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210311 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20211222 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220105 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220328 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220603 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220927 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221214 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230222 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230324 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230404 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230502 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7275040 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |