JP2019182845A

JP2019182845A - Kynurenine aminotransferase 2 (kat2) inhibitor

Info

Publication number: JP2019182845A
Application number: JP2019061581A
Authority: JP
Inventors: 英嗣藤垣; Hidetsugu Fujigaki; 邦明齋藤; Kuniaki Saito
Original assignee: Fujita Health University
Current assignee: Fujita Health University
Priority date: 2018-04-02
Filing date: 2019-03-27
Publication date: 2019-10-24

Abstract

To provide a pharmaceutical composition useful for treatment of diseases caused by increased KYNA production, e.g., schizophrenia.SOLUTION: The invention provides compounds shown in the figure or salts thereof. [Ris -OH, -OR', -OCOR', -OCO(CH)COOH, -OCO(CH)COOR', a glucuronic acid group, or a diglucuronic acid group; R' is a halogen or optionally amino-substituted Calkyl; n is from 1 to 3; and Ris hydrogen, a halogen, or optionally amino-substituted Calkyl.]SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、キヌレニンアミノトランスフェラーゼ２（ＫＡＴ２）阻害剤に関する。より具体的には、本発明は、グリチルリチン酸またはその誘導体を含む、キヌレン酸（ＫＹＮＡ）産生増加に起因する疾患を治療するための医薬組成物に関する。 The present invention relates to kynurenine aminotransferase 2 (KAT2) inhibitors. More specifically, the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating a disease caused by increased production of kynurenic acid (KYNA), comprising glycyrrhizic acid or a derivative thereof.

キヌレニンアミノトランスフェラーゼ（ＫＡＴ）には、４種類のアイソザイム（ＫＡＴ１〜ＫＡＴ４）が存在する。そのアイソザイムの一つである、ＫＡＴ２は、トリプトファン−キヌレニン代謝経路においてＬ−キヌレニン（Ｌ−ＫＹＮ）をキヌレン酸（ＫＹＮＡ）に変換する酵素である。 There are four types of isozymes (KAT1 to KAT4) in kynurenine aminotransferase (KAT). One of the isozymes, KAT2, is an enzyme that converts L-kynurenine (L-KYN) to kynurenic acid (KYNA) in the tryptophan-kynurenine metabolic pathway.

キヌレン酸（ＫＹＮＡ）は、ＮＭＤＡ型受容体および神経型ニコチン性アセチルコリンに対する拮抗作用を有し、その濃度が上昇すると、記憶、学習、認知機能が低下すること、そして、統合失調症患者では、脳内のＫＹＮＡ濃度が増加することが報告されている（非特許文献１〜３）。さらに、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症ダウン症候群、双極性障害およびアルツハイマー病の患者もまた、ＫＹＮＡ濃度が増加することが報告されている（非特許文献４〜１０）。 Kynurenic acid (KYNA) has antagonism against NMDA-type receptors and neuronal nicotinic acetylcholine, and when its concentration is increased, memory, learning, cognitive function is reduced, and in schizophrenic patients, the brain It has been reported that the concentration of KYNA increases (Non-Patent Documents 1 to 3). Furthermore, patients with epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral malaria, HIV encephalopathy down syndrome, bipolar disorder and Alzheimer's disease have also been reported to have increased KYNA levels (Non-Patent Documents 4 to 10). .

グリチルリチン酸およびその誘導体は、胃潰瘍などの消化性潰瘍の治療に広く用いられているが、ＫＡＴ２阻害作用を有するとの報告はなく、また統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害およびアルツハイマー病などのＫＹＮＡ産生増加によって引き起こされる疾患の治療に有効であるとの報告もない。
さらに、ＰＦ−０４８５９９８９、ＢＦＦ−１２２、Ｓ−ＥＳＢＡ（（Ｓ）−（４−エチルスルホニル）ベンゾイルアラニン）などの薬剤がＫＡＴ２阻害剤として市販されているが、それらの薬剤はグリチルリチン酸およびその誘導体とは構造が大きく異なる。 Glycyrrhizic acid and its derivatives are widely used for the treatment of peptic ulcers such as gastric ulcers, but there are no reports of KAT2 inhibitory activity, and schizophrenia, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, brain There are no reports of being effective in treating diseases caused by increased KYNA production such as malaria, HIV encephalopathy, Down's syndrome, bipolar disorder and Alzheimer's disease.
Furthermore, although drugs such as PF-04859989, BFF-122, and S-ESBA ((S)-(4-ethylsulfonyl) benzoylalanine) are commercially available as KAT2 inhibitors, these drugs are glycyrrhizic acid and its derivatives. And the structure is very different.

Kynurenic acid levels are elevated in the cerebrospinal fluid of patients with schizophrenia. Neurosci Lett 313:96-98Kynurenic acid levels are elevated in the cerebrospinal fluid of patients with schizophrenia. Neurosci Lett 313: 96-98 The kynurenic acid hypothesis of schizophrenia. Physiol Behav 92:203-209The kynurenic acid hypothesis of schizophrenia. Physiol Behav 92: 203-209 Elevated levels of kynurenic acid in the cerebrospinal fluid of male patients with schizophrenia. Schizophr Res 80:315-322Elevated levels of kynurenic acid in the cerebrospinal fluid of male patients with schizophrenia. Schizophr Res 80: 315-322 Kynurenate and 7-chlorokynurenate formation in chronically epileptic rats. Epilepsia 46:1010-1016Kynurenate and 7-chlorokynurenate formation in chronically epileptic rats.Epilepsia 46: 1010-1016 Endogenous protectant kynurenic acid in amyotrophic lateral sclerosis. Acta Neurol Scand 107:412-418Endogenous protectant kynurenic acid in amyotrophic lateral sclerosis. Acta Neurol Scand 107: 412-418 Metabolites of the kynurenine pathway of tryptophan metabolism in the cerebrospinal fluid of Malawian children with malaria. J Infect Dis 188:844-849Metabolites of the kynurenine pathway of tryptophan metabolism in the cerebrospinal fluid of Malawian children with malaria.J Infect Dis 188: 844-849 Quinolinic acid and kynurenine pathway metabolism in inflammatory and non-inflammatory neurological disease. Brain 115(Pt 5):1249-1273Quinolinic acid and kynurenine pathway metabolism in inflammatory and non-inflammatory neurological disease.Brain 115 (Pt 5): 1249-1273 Increased kynurenic acid levels and decreased brain kynurenine aminotransferase I in patients with Down syndrome. Life Sci 58:1891-1899Increased kynurenic acid levels and decreased brain kynurenine aminotransferase I in patients with Down syndrome.Life Sci 58: 1891-1899 Elevated levels of kynurenic acid in the cerebrospinal fluid of patients with bipolar disorder. J Psychiatry Neurosci. 2010, 35, 195-199.Elevated levels of kynurenic acid in the cerebrospinal fluid of patients with bipolar disorder.J Psychiatry Neurosci. 2010, 35, 195-199. Kynurenine metabolism in Alzheimer’s disease. J Neural Transm. 1999, 106, 165-181.Kynurenine metabolism in Alzheimer ’s disease. J Neural Transm. 1999, 106, 165-181.

本発明は、ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患、例えば統合失調症の治療に有用な医薬組成物を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition useful for the treatment of diseases caused by increased production of KYNA, such as schizophrenia.

本発明者らは、上記課題を解決すべく、約13,000種類の化合物のスクリーニングを行い、既存化合物のＫＡＴ２阻害作用を鋭意検討した結果、あらゆる構造を有する被験化合物の中で、驚くべきことにグリチルリチン酸やその誘導体が共通して優れたＫＡＴ２阻害作用を有し得るという知見を見出し、さらにＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患、例えば統合失調症に対しても、グリチルリチン酸およびその誘導体が優れた治療効果を発揮し得ることを見出し、本発明を完成させた。 In order to solve the above problems, the present inventors screened about 13,000 kinds of compounds, and as a result of earnestly examining the KAT2 inhibitory action of existing compounds, surprisingly among the test compounds having any structure, glycyrrhizin Finding that common acids and derivatives thereof can have an excellent CAT2 inhibitory action, and also having excellent therapeutic effects of glycyrrhizic acid and its derivatives against diseases caused by increased KYNA production, such as schizophrenia The present invention has been completed.

すなわち、本発明は、以下の態様の発明を提供するものである。
［１］式（Ｉ）：
［式中、Ｒ^１は、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＲ’、グルクロン酸基またはジグルクロン酸基であり、ここで、Ｒ’は、ハロゲンまたはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルであり、ｎは１〜３であり；および
Ｒ^２は、水素またはハロゲンもしくはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルである］
で示される化合物またはその塩を含む、キヌレン酸（ＫＹＮＡ）産生増加に起因する疾患を治療するための医薬組成物。
［２］Ｒ^１が、−ＯＨ、−ＯＣＨ_３、−ＯＣＯＣＨ_３、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＯＯＣＨ_３、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ_３またはジグルクロン酸基であり；および
Ｒ^２が、水素またはＣＨ_３である、［１］記載の医薬組成物。
［３］化合物が、以下：
から選択される、［１］または［２］記載の医薬組成物。
［４］該ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患が、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害またはアルツハイマー病である、［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬組成物。
［５］該ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患が、統合失調症である、［４］記載の医薬組成物。
［６］式（Ｉ）：
［式中、Ｒ^１は、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＲ’、グルクロン酸基またはジグルクロン酸基であり、ここで、Ｒ’は、ハロゲンまたはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルであり、ｎは１〜３であり；および
Ｒ^２は、水素またはハロゲンもしくはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルである］
で示される化合物またはその塩を含む、キヌレニンアミノトランスフェラーゼ２（ＫＡＴ２）阻害剤。
［７］治療を必要とする患者に、治療上の有効量の［１］〜［３］のいずれかの式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を投与することを特徴とする、ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患の治療方法。
［８］該ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患が、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害またはアルツハイマー病である、［７］記載の治療方法。
［９］該ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患が、統合失調症である、［８］記載の治療方法。
［１０］ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患を治療するための医薬の製造における、［１］〜［３］のいずれかの式（Ｉ）で示される化合物またはその塩の使用。
［１１］ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患の治療に使用するための［１］〜［３］のいずれかの式（Ｉ）で示される化合物またはその塩。
［１２］治療を必要とする患者に、治療上の有効量の［１］〜［３］のいずれかの式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を投与することを特徴とする、キヌレニンアミノトランスフェラーゼ２（ＫＡＴ２）の阻害方法。 That is, the present invention provides the following aspects of the invention.
[1] Formula (I):
[In the ^{formula, R} 1, -OH, -OR ', - OCOR ', - OCO (CH 2) n COOH, -OCO (CH 2) n COOR ', a glucuronic acid or Jigurukuron acid groups, wherein , R ′ is C _1-6 alkyl optionally substituted with halogen or amino; n is 1-3; and R ² is C ₁ optionally substituted with hydrogen or halogen or amino. _-6 alkyl]
A pharmaceutical composition for treating a disease caused by increased production of kynurenic acid (KYNA), comprising a compound represented by the formula:
[2] R ¹ is —OH, —OCH ₃ , —OCOCH ₃ , —OCOCH ₂ COOH, —OCOCH ₂ CH ₂ COOH, —OCOCH ₂ COOCH ₃ , —OCOCH ₂ CH ₂ COOCH ₃ or a diglucuronic acid group; The pharmaceutical composition according to [1], wherein R ² is hydrogen or CH ₃ .
[3] The compound is:
[1] or [2] pharmaceutical composition selected from.
[4] The disease caused by the increased production of KYNA is schizophrenia, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral malaria, HIV encephalopathy, Down's syndrome, bipolar disorder or Alzheimer's disease. [3] The pharmaceutical composition according to any one of [3].
[5] The pharmaceutical composition according to [4], wherein the disease caused by increased production of KYNA is schizophrenia.
[6] Formula (I):
[In the ^{formula, R} 1, -OH, -OR ', - OCOR ', - OCO (CH 2) n COOH, -OCO (CH 2) n COOR ', a glucuronic acid or Jigurukuron acid groups, wherein , R ′ is C _1-6 alkyl optionally substituted with halogen or amino; n is 1-3; and R ² is C ₁ optionally substituted with hydrogen or halogen or amino. _-6 alkyl]
Or a salt thereof, or a kynurenine aminotransferase 2 (KAT2) inhibitor.
[7] KYNA production comprising administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of a compound represented by the formula (I) of any one of [1] to [3] or a salt thereof Treatment method for diseases caused by the increase.
[8] The disease caused by the increased production of KYNA is schizophrenia, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral malaria, HIV encephalopathy, Down's syndrome, bipolar disorder or Alzheimer's disease Method of treatment.
[9] The treatment method according to [8], wherein the disease caused by increased production of KYNA is schizophrenia.
[10] Use of the compound represented by the formula (I) of any one of [1] to [3] or a salt thereof in the manufacture of a medicament for treating a disease caused by increased production of KYNA.
[11] The compound represented by the formula (I) of any one of [1] to [3] or a salt thereof for use in the treatment of a disease caused by increased production of KYNA.
[12] A kynurenine amino acid, characterized by administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of a compound represented by the formula (I) of any one of [1] to [3] or a salt thereof Method for inhibiting transferase 2 (KAT2).

本発明によれば、グリチルリチン酸またはその誘導体がキヌレニンアミノトランスフェラーゼ２（ＫＡＴ２）を効果的に阻害することにより、ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患、例えば統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害、アルツハイマー病などに対して優れた治療効果を発揮することが期待できる。 According to the present invention, glycyrrhizic acid or a derivative thereof effectively inhibits kynurenine aminotransferase 2 (KAT2), thereby causing diseases caused by increased KYNA production such as schizophrenia, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis. It can be expected to exert excellent therapeutic effects on cerebral malaria, HIV encephalopathy, Down syndrome, bipolar disorder, Alzheimer's disease and the like.

市販のＫＡＴ２阻害剤（PF-04859989、BFF-122および(S)-ESBA）および本発明化合物（グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロン）のlog換算濃度(nM)とその阻害率の関係図およびＩＣ_５０値（μＭ）を示す。Relationship between log equivalent concentration (nM) of commercially available KAT2 inhibitor (PF-04859989, BFF-122 and (S) -ESBA) and the compound of the present invention (glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone) and the inhibition rate and IC ₅₀ Values (μM) are shown. PF-04859989およびcontrolの基質濃度(mM)と反応速度(μM/min)の関係図（左図）およびLineweaver-BurkプロットによるPF-04859989のＫＡＴ２阻害（右図）を示す。The relationship between the substrate concentration (mM) of PF-04859989 and control and the reaction rate (μM / min) (left figure) and KAT2 inhibition (right figure) of PF-04859989 by Lineweaver-Burk plot are shown. グリチルリチン酸およびcontrolの基質濃度(mM)と反応速度(μM/min)の関係図（左図）およびLineweaver-Burkプロットによるグリチルリチン酸のＫＡＴ２阻害（右図）を示す。The relationship figure (left figure) of substrate concentration (mM) and reaction rate (micromol / min) of glycyrrhizic acid and control, and KAT2 inhibition (right figure) of glycyrrhizic acid by Lineweaver-Burk plot are shown. グリチルレチン酸およびcontrolの基質濃度(mM)と反応速度(μM/min)の関係図（左図）およびLineweaver-Burkプロットによるグリチルレチン酸のＫＡＴ２阻害（右図）を示す。The relationship figure (left figure) of substrate concentration (mM) and reaction rate (micromol / min) of glycyrrhetinic acid and control, and KAT2 inhibition (right figure) of glycyrrhetic acid by Lineweaver-Burk plot are shown. カルベノキソロンおよびcontrolの基質濃度(mM)と反応速度(μM/min)の関係図（左図）およびLineweaver-BurkプロットによるカルベノキソロンのＫＡＴ２阻害（右図）を示す。The relationship between the substrate concentration (mM) of carbenoxolone and control and the reaction rate (μM / min) (left diagram) and KAT2 inhibition of carbenoxolone by the Lineweaver-Burk plot (right diagram) are shown. 対照（0mg/kg）群、グリチルリチン酸(25mg/kg)投与群、およびグリチルリチン酸(50mg/kg)投与群のマウスにおける、血清中キヌレン濃度(nM)の平均値（±標準偏差）を示す。The mean value (± standard deviation) of serum kynurene concentration (nM) in mice in the control (0 mg / kg) group, the glycyrrhizic acid (25 mg / kg) administration group, and the glycyrrhizic acid (50 mg / kg) administration group is shown.

以下に、本発明について詳細に説明する。 The present invention is described in detail below.

本発明において、「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を意味する。 In the present invention, “halogen” means fluorine, chlorine, bromine and iodine.

本発明において、「Ｃ_１−６アルキル」とは、炭素数１〜６個を有する直鎖状もしくは分枝状の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ_１−６アルキル」の具体例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、２−エチルブチルなどが挙げられる。好ましくは、メチルまたはエチルである。 In the present invention, “C _1-6 alkyl” means a linear or branched saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms. Specific examples of “C _1-6 alkyl” include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, hexyl, isohexyl, 1, Examples thereof include 1-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl and the like. Preferably, it is methyl or ethyl.

本発明において、「グリチルリチン酸またはその誘導体」とは、式（Ｉ）：
［式中、Ｒ^１は、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＲ’、グルクロン酸基またはジグルクロン酸基であり、ここで、Ｒ’は、ハロゲンまたはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルであり、ｎは１〜３であり；および
Ｒ^２は、水素またはハロゲンもしくはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルである］
で示される化合物またはその塩を意味する。グリチルリチン酸は、甘草の根に含まれる有効成分であって、消化性潰瘍や去痰薬としての効果を有する、以下の構造：
を有する化合物である。
グリチルレチン酸は、グリチルリチン酸の加水分解によって得られるβ−アミリン（オレアナン）系の５環式テルペノイド誘導体の一つであり、以下の構造：
を有する化合物である。アロエやキニーネのような薬品の苦味を緩和するための調味料として用いられ、胃潰瘍の治療に効果的であり、去痰薬としての特性もある。ＰＧＥ−２とＰＧＦ−２αを代謝する酵素を抑制する。
カルベノキソロンは、以下の構造：
を有する化合物である。 In the present invention, “glycyrrhizic acid or a derivative thereof” refers to the formula (I):
[In the ^{formula, R} 1, -OH, -OR ', - OCOR ', - OCO (CH 2) n COOH, -OCO (CH 2) n COOR ', a glucuronic acid or Jigurukuron acid groups, wherein , R ′ is C _1-6 alkyl optionally substituted with halogen or amino; n is 1-3; and R ² is C ₁ optionally substituted with hydrogen or halogen or amino. _-6 alkyl]
Or a salt thereof. Glycyrrhizic acid is an active ingredient contained in licorice root and has the following structure having effects as peptic ulcer and expectorant:
It is a compound which has this.
Glycyrrhetinic acid is one of β-amylin (oleanan) -based pentacyclic terpenoid derivatives obtained by hydrolysis of glycyrrhizic acid, and has the following structure:
It is a compound which has this. It is used as a seasoning to relieve the bitterness of drugs such as aloe and quinine, is effective in treating gastric ulcers, and also has properties as an expectorant. Inhibits enzymes that metabolize PGE-2 and PGF-2α.
Carbenoxolone has the following structure:
It is a compound which has this.

本発明において、グリチルリチン酸およびその誘導体は、塩形態であってもよく、医薬として許容される塩であれば特に限定されない。塩としては、例えば、アルカリ金属（例えば、カリウム、ナトリウム、リチウムなど）の塩、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウムなど）の塩、アンモニウム塩（例えば、テトラメチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩など）、有機アミン（例えば、トリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなど）の塩などが挙げられる。 In the present invention, glycyrrhizic acid and derivatives thereof may be in a salt form, and are not particularly limited as long as they are pharmaceutically acceptable salts. Examples of the salt include salts of alkali metals (eg, potassium, sodium, lithium, etc.), salts of alkaline earth metals (eg, calcium, magnesium, etc.), ammonium salts (eg, tetramethylammonium salt, tetrabutylammonium salt) Etc.), organic amines (for example, triethylamine, methylamine, dimethylamine, cyclopentylamine, benzylamine, phenethylamine, piperidine, monoethanolamine, diethanolamine, tris (hydroxymethyl) methylamine, lysine, arginine, N-methyl-D- Salt of glucamine and the like).

グリチルリチン酸およびその誘導体は公知の方法により製造することができる。また、市販品を用いてもよい。 Glycyrrhizic acid and its derivatives can be produced by known methods. Moreover, you may use a commercial item.

本発明において、「キヌレン酸（ＫＹＮＡ）産生増加に起因する疾患」とは、トリプトファン−キヌレニン代謝経路において、キヌレン酸濃度が上昇することによって引き起こされる疾患または障害およびその症状をいう。その具体例として、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害、アルツハイマー病およびそれらの症状などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。 In the present invention, “disease caused by increased production of kynurenic acid (KYNA)” refers to a disease or disorder caused by an increase in kynurenic acid concentration and its symptoms in the tryptophan-kynurenine metabolic pathway. Specific examples include, but are not limited to, schizophrenia, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral malaria, HIV encephalopathy, Down's syndrome, bipolar disorder, Alzheimer's disease, and symptoms thereof. is not.

本発明において、「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける疾患または障害およびその症状の治癒および／または改善を意味する。また、ＮＹＮＡ産生増加に起因する疾患を予防、緩和および／または軽減することも含まれる。 In the present invention, “treatment” means cure and / or amelioration of a disease or disorder and its symptoms in mammals, particularly humans. It also includes preventing, alleviating and / or alleviating diseases resulting from increased production of NYNA.

本発明において、「患者」とは、ヒトおよび動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどを意味する。その中でも、ヒトが好ましい。 In the present invention, “patient” means humans and animals such as dogs, cats, horses and the like. Among these, human is preferable.

本発明において、「治療上の有効量」とは、組織、系、動物またはヒトにおいて、研究者または医師によって定められる生物学的または医薬的応答を誘発する有効成分の量を意味する。また、「治療上の有効量」とは、疾患を治療するために患者に投与する場合に、疾患に対して治療効果をもたらす有効成分の量の意味も含まれる。「治療上の有効量」は、有効成分、疾患の種類およびその重篤度、ならびに治療されるべき哺乳動物の年齢、体重などに依存して変化する。
かかる有効量としては、グリチルリチン酸またはその誘導体単独の量および／またはＫＡＴ２阻害作用を有する他の活性成分、例えば、ＰＦ−０４８５９９８９と組み合わせたグリチルリチン酸またはその誘導体の量が挙げられる。 As used herein, “therapeutically effective amount” means the amount of an active ingredient that elicits a biological or pharmaceutical response as defined by a researcher or physician in a tissue, system, animal or human. "Therapeutically effective amount" also includes the meaning of the amount of an active ingredient that provides a therapeutic effect against a disease when administered to a patient to treat the disease. The “therapeutically effective amount” will vary depending on the active ingredient, the type of disease and its severity, and the age, weight, etc., of the mammal to be treated.
Such effective amounts include the amount of glycyrrhizic acid or its derivatives alone and / or the amount of glycyrrhizic acid or its derivatives in combination with other active ingredients having a KAT2 inhibitory action, such as PF-04859989.

本発明のキヌレニンアミノトランスフェラーゼ２（ＫＡＴ２）阻害剤とは、トリプトファン−キヌレニン代謝経路におけるＬ−ＫＹＮからＫＹＮＡへの変換に関与するＫＡＴ２の機能を阻害し、ＫＹＮＡ産生を阻害することによって、治療効果を発揮する薬剤を意味する。 The kynurenine aminotransferase 2 (KAT2) inhibitor of the present invention inhibits the function of KAT2 involved in the conversion of L-KYN to KYNA in the tryptophan-kynurenine metabolic pathway, and inhibits the production of KYNA. It means the drug that exerts.

本発明の医薬組成物およびＫＡＴ２阻害剤は、グリチルリチン酸またはその誘導体を有効成分として含むものであればよく、その有効成分の効果を妨げない限り、他の医薬活性成分をさらに含んでいてもよい。例えば、ＰＦ−０４８５９９８９、ＢＦＦ−１２２、Ｓ−ＥＳＢＡなどの既存のＫＡＴ２阻害剤を併用してもよい。本発明の医薬組成物中のグリチルリチン酸またはその誘導体の割合は特に限定されない。
また、本発明の医薬組成物は、グリチルリチン酸またはその誘導体のみからなるものであってもよい。 The pharmaceutical composition and KAT2 inhibitor of the present invention only need to contain glycyrrhizic acid or a derivative thereof as an active ingredient, and may further contain other pharmaceutically active ingredients as long as the effects of the active ingredient are not hindered. . For example, existing KAT2 inhibitors such as PF-04859989, BFF-122, and S-ESBA may be used in combination. The ratio of glycyrrhizic acid or a derivative thereof in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited.
In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may be composed only of glycyrrhizic acid or a derivative thereof.

本発明の医薬組成物およびＫＡＴ２阻害剤は、経口または非経口（例えば、皮下、静脈、局所、経鼻、経肺、直腸など）投与することができる。 The pharmaceutical composition and KAT2 inhibitor of the present invention can be administered orally or parenterally (for example, subcutaneous, intravenous, topical, nasal, pulmonary, rectal, etc.).

本発明の剤形は、対象の身体状況、健康状態などに応じて適宜選択し、調製することができる。例えば、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤、顆粒剤（発泡顆粒剤）、散剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤）、シロップ剤（シロップ用剤）、経口ゼリー剤、口腔用錠剤（トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤（輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤）、透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）、吸入剤（吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤）、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤（点鼻粉末剤、点鼻液剤）、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤（外用散剤）、外用液剤（リニメント剤、ローション剤）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤（テープ剤、パップ剤）などの剤形に、公知の方法により調製されうる。 The dosage form of the present invention can be appropriately selected and prepared according to the physical condition, health condition, etc. of the subject. For example, tablets (orally disintegrating tablets, chewable tablets, effervescent tablets, dispersible tablets, dissolving tablets), capsules, granules (effervescent granules), powders, oral solutions (elixirs, suspensions, emulsions, limonades) , Syrup (syrup preparation), oral jelly, oral tablet (troche, sublingual tablet, buccal tablet, adhesive tablet, gum), oral spray, oral semisolid preparation, mouthwash, injection (Infusion, implantable injection, continuous injection), dialysis agent (peritoneal dialysis agent, hemodialysis agent), inhalant (inhalation powder, inhalation solution, inhalation aerosol), suppository, rectal half Solid preparations, enema preparations, eye drops, eye ointments, ear drops, nasal drops (nasal powders, nasal drops), vaginal tablets, vaginal suppositories, external solid preparations (external powders), external liquids (Liniment, lotion), spray (external aerosol, pump spray), soft , Creams, gels, patches (tape, cataplasms) in dosage forms, such as can be prepared by known methods.

本発明の医薬組成物は、必要に応じ、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトールおよび微結晶セルロース）、崩壊剤（例えば、カルメロース、カルメロースナトリウムおよび低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドンおよび結晶セルロース）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルク）、溶剤（例えば、水、エタノールおよびプロピレングリコール）、緩衝剤（例えば、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム）、懸濁化剤（例えば、アラビアゴム、トラガントおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム）、乳化剤（例えば、グリセリン脂肪酸エステルおよびソルビタン脂肪酸エステル）など１種以上の医薬的に許容される担体を含むものであってもよい。 The pharmaceutical composition of the present invention comprises, as necessary, excipients (for example, lactose, sucrose, D-mannitol and microcrystalline cellulose), disintegrants (for example, carmellose, carmellose sodium and low-substituted hydroxypropylcellulose), Binders (eg, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, povidone and crystalline cellulose), lubricants (eg, magnesium stearate, calcium stearate and talc), solvents (eg, water, ethanol and propylene glycol), buffers ( For example, trisodium phosphate, sodium hydrogen phosphate and sodium dihydrogen phosphate), suspending agents (eg, gum arabic, tragacanth and sodium carboxymethyl cellulose), emulsifiers (eg, glycerin fatty acid ester) It may include a Le and sorbitan fatty acid esters) such as one or more pharmaceutically acceptable carriers.

グリチルリチン酸またはその誘導体および併用薬剤の投与期間は、特に限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差で投与してもよい。グリチルリチン酸またはその誘導体を、併用薬剤に対して先に、同時に、または後に投与してもよい。また、グリチルリチン酸またはその誘導体と併用薬剤の合剤としてもよい。 The administration period of glycyrrhizic acid or a derivative thereof and a concomitant drug is not particularly limited, and these may be administered simultaneously to the administration subject, or may be administered with a time difference. Glycyrrhizic acid or a derivative thereof may be administered to the concomitant drug first, simultaneously or later. Alternatively, glycyrrhizic acid or a derivative thereof and a combination drug may be used.

本発明のグリチルリチン酸またはその誘導体の投与量は、投与方法、対象の年齢、疾患の程度、症状、剤形などにより変化するが、例えば、１日あたり０．００１ｍｇ〜１０ｇの用量で投与することができる。１日あたりのグリチルリチン酸またはその誘導体の量を、１回〜数回に分けて投与してもよい。また、グリチルリチン酸またはその誘導体以外の薬剤と組み合わせて使用する場合、グリチルリチン酸またはその誘導体の投与量は、グリチルリチン酸またはその誘導体以外の薬剤の投与量に応じて減量することができる。 The dose of glycyrrhizic acid or a derivative thereof of the present invention varies depending on the administration method, the age of the subject, the degree of disease, symptoms, dosage form, etc., for example, administered at a dose of 0.001 mg to 10 g per day. Can do. The amount of glycyrrhizic acid or a derivative thereof per day may be administered once to several times. When used in combination with a drug other than glycyrrhizic acid or a derivative thereof, the dose of glycyrrhizic acid or a derivative thereof can be reduced according to the dose of a drug other than glycyrrhizic acid or a derivative thereof.

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。 The present invention will be described more specifically with reference to the following examples, but these examples do not limit the present invention.

実施例１：ＫＡＴ２阻害剤候補化合物のスクリーニング
以下の方法にしたがって、東京大学創薬機構にて提供されているValidated Compound LibraryおよびCore Libraryより入手した約13,000種類の化合物について予備的にスクリーニングを行い、39種類の予備的化合物を選別し、更に選別した化合物の中からＫＡＴ２阻害剤となり得る化合物を選定した。 Example 1: Screening for KAT2 inhibitor candidate compounds According to the following method, about 13,000 kinds of compounds obtained from Validated Compound Library and Core Library provided by the University of Tokyo Drug Discovery Organization were preliminarily screened. 39 types of preliminary compounds were selected, and compounds that could become KAT2 inhibitors were selected from the selected compounds.

［試薬］
・１５０ｍＭ２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）緩衝液（ｐＨ９．５）：ＡＭＰ（１３．３７１ｇ；ＳＩＧＭＡ、No.08578）を超純水と混合し、ＨＣｌでｐＨ９．５に調整し、１５０ｍＭＡＭＰ緩衝液（ｐＨ９．５）を調製した。
・２００ｎｇ／μＬリコンビナントヒトＫＡＴ２（ｒｈＫＡＴ２）：バキュロウイルス・昆虫細胞発現系により精製したｒｈＫＡＴ２の濃度を測定し、ＡＭＰ緩衝液で希釈し、２００ｎｇ／μＬｒｈＫＡＴ２を調製した。
・２０ｍＭＬ−キヌレニン（ＫＹＮ）：ＫＹＮ（４．１６４ｇ；ＳＩＧＭＡ、No.K8625）をＡＭＰ緩衝液に溶解し、２０ｍＭＫＹＮを調製した。
・２０ｍＭ２（α）−ケトグルタル酸（α−ＫＧ）：α−ＫＧ（２９２．２ｍｇ；ナカライテスク、No.19817-95）をＡＭＰ緩衝液に溶解し、２０ｍＭ α−ＫＧを調製した。
・１０ｍＭピリドキサール−５’−ホスフェート（ＰＬＰ）：ＰＬＰ（２６５ｍｇ；ナカライテスク、No.29606-32）をＡＭＰ緩衝液に溶解し、１０ｍＭＰＬＰを調製した。
・０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０：Ｔｗｅｅｎ−２０（１００μＬ；ナカライテスク、No.23926-35）をＡＭＰ緩衝液と混合し、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を調製した。
・３００ｍＭ酢酸亜鉛二水和物（ｐＨ５．０）溶液：酢酸亜鉛二水和物（６５．８５ｇ；ナカライテスク、No.36911-15）を超純水に溶解し、酢酸でｐＨ５．０に調整し、３００ｍＭ酢酸亜鉛二水和物（ｐＨ５．０）溶液を調製した。
［機器］
・ＦＬＵＯＲＡＣ，３８４ウェル，マイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、No.781076）
・多検出モードプレートリーダーＰＨＥＲＡｓｔａｒＰｌｕｓ（ＢＭＧＬａｂｔｅｃｈ、No.470-101）
・マルチラベルプレートリーダーＡＲＶＯ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、No.2030）
・多本架冷却遠心機（ＴＯＭＹ） [reagent]
150 mM 2-amino-2-methyl-1-propanol (AMP) buffer (pH 9.5): AMP (13.371 g; SIGMA, No. 08578) is mixed with ultrapure water and adjusted to pH 9.5 with HCl. After adjustment, 150 mM AMP buffer (pH 9.5) was prepared.
200 ng / μL recombinant human KAT2 (rhKAT2): The concentration of rhKAT2 purified by the baculovirus / insect cell expression system was measured and diluted with AMP buffer to prepare 200 ng / μL rhKAT2.
20 mM L-kynurenine (KYN): KYN (4.164 g; SIGMA, No. K8625) was dissolved in an AMP buffer to prepare 20 mM KYN.
20 mM 2 (α) -ketoglutaric acid (α-KG): α-KG (292.2 mg; Nacalai Tesque, No. 19807-95) was dissolved in AMP buffer to prepare 20 mM α-KG.
-10 mM pyridoxal-5'-phosphate (PLP): PLP (265 mg; Nacalai Tesque, No. 29606-32) was dissolved in AMP buffer to prepare 10 mM PLP.
-0.1% Tween-20: Tween-20 (100 μL; Nacalai Tesque, No. 23926-35) was mixed with AMP buffer to prepare 0.1% Tween-20.
-300 mM zinc acetate dihydrate (pH 5.0) solution: Zinc acetate dihydrate (65.85 g; Nacalai Tesque, No. 36911-15) is dissolved in ultrapure water and adjusted to pH 5.0 with acetic acid. A 300 mM zinc acetate dihydrate (pH 5.0) solution was prepared.
[machine]
・ FLUORAC, 384 well, microplate (Greiner, No.781076)
・ Multi detection mode plate reader PHERAstar Plus (BMG Labtech, No.470-101)
・ Multi-label plate reader ARVO (Perkin Elmer, No.2030)
・ Multiple cooling centrifuge (TOMY)

［方法］
１．予備的化合物の選定
以下の方法にしたがって、予備的スクリーニングを行い、予備的化合物を選定した。
（１）酵素阻害測定用プレートに、POD分注により各化合物（２ｍＭ）を１００ｎＬ／ウェル分注した（n=1、化合物の終濃度１０μＭ、DMSOの終濃度０．５％）。controlおよびbackground用として、同濃度のDMSOを含む水溶液を１００ｎＬ／ウェル分注した（n=16）。
（２）下記の酵素液を、被験化合物、controlおよびbackground用のウェルに添加した。background用では、rhKAT2の代わりにAMP緩衝液を１μＬ／ウェル加えた。

酵素液（被験化合物およびcontrol用）
200 ng/μL rhKAT2 １μＬ
0.1% Tween-20 ０．５μＬ
AMP緩衝液８．５μＬ
１０μＬ

酵素液（background用）
0.1% Tween-20 ０．５μＬ
AMP緩衝液９．５μＬ
１０μＬ

（３）下記の基質液を、被験化合物、controlおよびbackground用のウェルに添加した。

基質液
20 mM KYN １μＬ
20 mM α-KG １μＬ
10 mM PLP １μＬ
0.1% Tween-20 ０．５μＬ
AMP緩衝液６．５μＬ
１０μＬ

（４）プレートを遠心機でスピンダウンし、室温で２時間インキュベートした。
（５）検出液（３００ｍＭ酢酸亜鉛二水和物（ｐＨ５．０）溶液）を２０μＬ／ウェル添加し、プレートを遠心機でスピンダウンした。
（６）多検出モードプレートリーダーＰＨＥＲＡｓｔａｒＰｌｕｓで各被験化合物、controlおよびbackgroundの蛍光強度を測定した（Ex 340 nm、Em 460 nm）。
（７）プレートのＳ／Ｂ、ＣＶ（backgroundおよびcontrol）およびＺ’を、backgroundおよびcontrolの測定値から下記の各式に基づき、算出した（ｎ≧４）。

・Ｓ／Ｂ＝Ｍｅａｎ_Ｃ／Ｍｅａｎ_Ｂ
・ＣＶ（％）＝１００ｘ（ＳＤ_Ｂ／Ｍｅａｎ_Ｂ）
１００ｘ（ＳＤ_Ｃ／Ｍｅａｎ_Ｃ）
・Ｚ’ ＝１−（３ＳＤ_Ｂ＋３ＳＤ_Ｃ）／（Ｍｅａｎ_Ｃ−Ｍｅａｎ_Ｂ）

Ｍｅａｎ_Ｂ： backgroundの平均値
Ｍｅａｎ_Ｃ： controlの平均値
ＳＤ_Ｂ： backgroundの標準偏差
ＳＤ_Ｃ： controlの標準偏差

（８）Controlを反応100%、Backgroundを反応0％として、下式に基づき、阻害率(ＩｎＨ（％）)を算出した。算出された阻害率の高い上位39種類の化合物を予備的化合物として選定した。

ＩｎＨ（％）＝１００ｘ｛１−（Ｓａｍｐｌｅ−Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）／（Ｃｏｎｔｒｏｌ−Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）｝

Ｓａｍｐｌｅ：被験化合物の蛍光強度
Ｃｏｎｔｒｏｌ：controlの蛍光強度の平均値
Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：backgroundの蛍光強度の平均値 [Method]
1. Preliminary compound selection Preliminary screening was performed according to the following method to select preliminary compounds.
(1) 100 nL / well of each compound (2 mM) was dispensed onto a plate for enzyme inhibition measurement by POD dispensing (n = 1, final concentration of compound 10 μM, final concentration of DMSO 0.5%). For control and background, 100 nL / well of an aqueous solution containing the same concentration of DMSO was dispensed (n = 16).
(2) The following enzyme solution was added to the test compound, control, and background wells. For background, 1 μL / well of AMP buffer was added instead of rhKAT2.

Enzyme solution (for test compound and control)
200 ng / μL rhKAT2 1 μL
0.1% Tween-20 0.5μL
AMP buffer 8.5 μL
10 μL

Enzyme solution (for background)
0.1% Tween-20 0.5μL
AMP buffer 9.5 μL
10 μL

(3) The following substrate solution was added to the test compound, control and background wells.

Substrate solution
20 mM KYN 1μL
20 mM α-KG 1μL
10 mM PLP 1 μL
0.1% Tween-20 0.5μL
AMP buffer 6.5 μL
10 μL

(4) The plate was spun down with a centrifuge and incubated at room temperature for 2 hours.
(5) A detection solution (300 mM zinc acetate dihydrate (pH 5.0) solution) was added at 20 μL / well, and the plate was spun down with a centrifuge.
(6) The fluorescence intensity of each test compound, control and background was measured with a multi-detection mode plate reader PHERAstar Plus (Ex 340 nm, Em 460 nm).
(7) S / B, CV (background and control) and Z ′ of the plate were calculated from the measured values of background and control based on the following formulas (n ≧ 4).

・ S / B = Mean _C / Mean _B
-CV (%) = 100x (SD _B / Mean _B )
100x (SD _C / Mean _C )
Z ′ = 1− (3SD _B + 3SD _C ) / (Mean _C− Mean _B )

Mean _B: average value of background Mean _C: average value of Control SD _B: standard deviation of the background SD _C: control the standard deviation of

(8) Based on the following formula, the inhibition rate (InH (%)) was calculated with Control as 100% reaction and Background as 0% reaction. The top 39 compounds with high calculated inhibition rates were selected as preliminary compounds.

InH (%) = 100 × {1- (Sample-Background) / (Control-Background)}

Sample: fluorescence intensity of test compound Control: average value of fluorescence intensity of control Background: average value of fluorescence intensity of background

２．ＫＡＴ２阻害剤候補化合物の選定
以下の方法にしたがって、選別された39種類の化合物をスクリーニングし、ＫＡＴ２阻害剤として有用な化合物を選定した。
（１）酵素阻害測定用プレート（Plate A）および化合物の自家蛍光による蛍光値を差し引くためのcontrolプレート(Plate B)に、POD分注により各化合物(２ｍＭ)を１００ｎＬ／ウェル分注した（n=4、化合物の終濃度１０μＭ、DMSOの終濃度０．５％）。controlおよびbackground用として、同濃度のDMSOを含む水溶液を１００ｎＬ／ウェル分注した（n=16）。
（２）Plate AおよびBについて、以下の工程を行った。
(Plate A)
（ａ）被験化合物、controlおよびbackground用の各ウェルに、上記１と同様の組成を有する酵素液および基質液を１０μＬずつ添加した。
（ｂ）プレートを遠心機でスピンダウンし、室温で２時間インキュベートした。
（ｃ）検出液（３００ｍＭ酢酸亜鉛二水和物（ｐＨ５．０）溶液）を２０μｌ／ウェル添加し、プレートを遠心機でスピンダウンした。

(Plate B)
上記（ａ）〜（ｃ）の工程を試験管にて行い反応を終了させた後に、溶液をプレートに分注した。
（３）マルチラベルプレートリーダーＡＲＶＯで各被験化合物、controlおよびbackgroundの蛍光強度を測定した（Ex 340 nm、Em 460 nm）。
（４）各プレートのＳ／Ｂ、ＣＶ（backgroundおよびcontrol）およびＺ’を、backgroundおよびcontrolの測定値から上記１の各式に基づき、算出した（ｎ≧４）。
（５）Plate Bの蛍光強度からPlate Aの蛍光強度を差し引いた値を用い、controlを反応１００％、backgroundを反応０％として、下式に基づき、阻害率（ＩｎＨ（％））を算出した。ＩｎＨ（％）が２０％以上の化合物を候補化合物とし、更にＩｎＨ（％）が７０％〜１００％の化合物をＫＡＴ２阻害剤として有用な化合物として選定した。

ＩｎＨ（％）＝１００ｘ｛（Ｓ_ＲａｗＢ−Ｓ_ＲａｗＡ）／（Ｃｏｎｔｒｏｌ−Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）｝

Ｓ_ＲａｗＢ：Plate Bの被験化合物の蛍光強度の平均値−Plate Bのbackgroundの平均値
Ｓ_ＲａｗＡ：Plate Aの被験化合物の蛍光強度の平均値−Plate Aのbackgroundの平均値
Ｃｏｎｔｒｏｌ：Plate Aのcontrolの蛍光強度の平均値
Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：Plate Aのbackgroundの蛍光強度の平均値 2. Selection of candidate compounds for KAT2 inhibitor According to the following method, 39 selected compounds were screened to select compounds useful as KAT2 inhibitors.
(1) Each compound (2 mM) was dispensed at 100 nL / well by POD dispensing to a plate for enzyme inhibition measurement (Plate A) and a control plate (Plate B) for subtracting the fluorescence value due to autofluorescence of the compound (n = 4, final concentration of compound 10 μM, final concentration of DMSO 0.5%). For control and background, 100 nL / well of an aqueous solution containing the same concentration of DMSO was dispensed (n = 16).
(2) For Plates A and B, the following steps were performed.
(Plate A)
(A) 10 μL each of enzyme solution and substrate solution having the same composition as in 1 above was added to each well for test compound, control and background.
(B) The plate was spun down in a centrifuge and incubated for 2 hours at room temperature.
(C) 20 μl / well of a detection solution (300 mM zinc acetate dihydrate (pH 5.0) solution) was added, and the plate was spun down with a centrifuge.

(Plate B)
After the steps (a) to (c) were carried out in a test tube to complete the reaction, the solution was dispensed onto a plate.
(3) The fluorescence intensity of each test compound, control and background was measured with a multi-label plate reader ARVO (Ex 340 nm, Em 460 nm).
(4) S / B, CV (background and control) and Z ′ of each plate were calculated from the measured values of background and control on the basis of the above-mentioned formulas (n ≧ 4).
(5) Using the value obtained by subtracting the fluorescence intensity of Plate A from the fluorescence intensity of Plate B, using control as 100% reaction and background as reaction 0%, the inhibition rate (InH (%)) was calculated based on the following equation. . A compound having an InH (%) of 20% or more was selected as a candidate compound, and a compound having an InH (%) of 70% to 100% was selected as a useful compound as a KAT2 inhibitor.

InH (%) = 100x {(S _RawB- S _RawA ) / (Control-Background)}

S _RawB: average value of background average value -Plate B of the fluorescence intensity of the test compound Plate B S _RawA: Plate A in average -Plate A fluorescence intensity of test compound background average value Control: the Plate A Control Average value of fluorescence intensity of background: Background of Plate A: Average value of fluorescence intensity of background of Plate A

［結果］
各プレートのＳ／Ｂ比、ＣＶ（％）（controlおよびbackground）およびＺ’値を、表１に示す。
[result]
Table 1 shows the S / B ratio, CV (%) (control and background) and Z ′ value of each plate.

スクリーニングに用いた39種類の化合物におけるＩｎＨ（％）の平均値および標準偏差を、表２に示す。
Table 2 shows the average values and standard deviations of InH (%) in 39 compounds used for screening.

上記結果より、ＩｎＨ（％）が７０％〜１００％を示す36、37および38をＫＡＴ２阻害剤候補化合物として同定した。これらの化合物は、カルベノキソロン、グリチルリチン酸およびグリチルレチン酸であり、非常に構造が類似していることが認められた。あらゆる構造を有する被験化合物の中で、驚くべきことにグリチルリチン酸やその誘導体が共通して優れたＫＡＴ２阻害作用を有し得ることが示された。すなわち、これらの化合物と構造が類似する化合物もまた、ＫＡＴ２阻害剤として有用であり得ると考えられる。 From the above results, 36, 37, and 38 with InH (%) of 70% to 100% were identified as candidate compounds for KAT2 inhibitor. These compounds were carbenoxolone, glycyrrhizic acid and glycyrrhetinic acid and were found to be very similar in structure. Surprisingly, it has been shown that glycyrrhizic acid and its derivatives can have an excellent KAT2 inhibitory action in common among test compounds having all structures. That is, it is considered that compounds similar in structure to these compounds may also be useful as KAT2 inhibitors.

実施例２：既存薬剤および候補化合物のＫＡＴ２阻害活性の検討
実施例１の測定方法と同様の方法にしたがって、市販のＫＡＴ２阻害剤であるＰＦ−０４８５９９８９、ＢＦＦ−１２２およびＳ−ＥＳＢＡとスクリーニングで得られた化合物、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸およびカルベノキソロンの各測定濃度の蛍光強度を測定して、ＫＡＴ２阻害率を算出した。算出された阻害率および測定濃度（log濃度（ｎＭ）換算）に基づいて検量線を作成し、ＩＣ_５０値を算出した。 Example 2: Examination of KAT2 inhibitory activity of existing drugs and candidate compounds According to the same measurement method as Example 1, obtained by screening with commercially available KAT2 inhibitors PF-04859989, BFF-122 and S-ESBA The fluorescence intensity at each measured concentration of the obtained compound, glycyrrhetinic acid, glycyrrhizic acid and carbenoxolone was measured, and the KAT2 inhibition rate was calculated. A calibration curve was created based on the calculated inhibition rate and measured concentration (converted into log concentration (nM)), and the IC ₅₀ value was calculated.

ＰＦ−０４８５９９８９、ＢＦＦ−１２２、Ｓ−ＥＳＢＡ、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸およびカルベノキソロンの各測定濃度の蛍光強度の平均値(n=3)を、表３に示す。
Table 3 shows the average value (n = 3) of the fluorescence intensity at each measured concentration of PF-04859989, BFF-122, S-ESBA, glycyrrhetinic acid, glycyrrhizic acid and carbenoxolone.

ＰＦ−０４８５９９８９、ＢＦＦ−１２２、Ｓ−ＥＳＢＡ、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸およびカルベノキソロンの各測定濃度のlog濃度（ｎＭ）およびその阻害率の平均値（n=3）を表４に示し、そして、各化合物のＩＣ_５０値（μＭ）を表５に示す。また、各化合物のlog濃度とその阻害率の関係およびＩＣ_５０値を図１に示す。
The log concentration (nM) of each measured concentration of PF-04859989, BFF-122, S-ESBA, glycyrrhetinic acid, glycyrrhizic acid and carbenoxolone and the average value (n = 3) of the inhibition rate are shown in Table 4, and each The IC ₅₀ values (μM) of the compounds are shown in Table 5. Further, FIG. 1 shows the relationship between the log concentration of each compound and its inhibition rate and the IC ₅₀ value.

上記結果より、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンは、既存のBFF-122および(S)-ESBAに比べて、優れたＫＡＴ２阻害活性を有することが示された。 From the above results, it was shown that glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone have superior KAT2 inhibitory activity compared to existing BFF-122 and (S) -ESBA.

実施例３：既存薬剤および候補化合物のＫＡＴ２阻害活性の反応速度論的検討
既存薬剤としてPF-04859989、本願化合物としてグリチルリチン酸、グリチリレチン酸およびカルベノキソロンを用いて、Lineweaver-Burkプロットによる阻害様式の判定を行った。具体的には、１．５ｍＬチューブに、化合物溶液またはcontrolであるDMSO溶液（）、３０μＬの酵素液（実施例１の酵素液（被験化合物およびcontrol用）と同じ組成）、７０μＬの基質液（実施例１の基質液と同じ組成であるが、基質(KYN)の濃度を10 mM、5 mM、2.5 mM、1.25 mM、0.625 mMまたは0.3125 mMとした）、そして、化合物溶液またはcontrolとしてDMSO溶液を加えて、３７℃で３０分間インキュベートした。さらに、該チューブに除タンパク液（3%過塩素酸；１００μＬ）を加えて撹拌し、次いで、14,000rpmで10分間遠心分離してタンパク質を沈殿させた。上清をHPLC用チューブに移し、キヌレン酸濃度を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で測定して、Lineweaver-Burkプロットによる各化合物のＫＡＴ２阻害の解析を行った。 Example 3: Kinetic study of KAT2 inhibitory activity of existing drugs and candidate compounds Using PF-04859989 as an existing drug and glycyrrhizic acid, glycyrrhizic acid and carbenoxolone as compounds of the present application, determination of inhibition mode by Lineweaver-Burk plot went. Specifically, in a 1.5 mL tube, in a DMSO solution () as a compound solution or control, 30 μL enzyme solution (same composition as the enzyme solution of Example 1 (for test compound and control)), 70 μL substrate solution ( The same composition as the substrate solution of Example 1, but the concentration of the substrate (KYN) was 10 mM, 5 mM, 2.5 mM, 1.25 mM, 0.625 mM or 0.3125 mM), and DMSO solution as a compound solution or control And incubated at 37 ° C. for 30 minutes. Further, the protein removal solution (3% perchloric acid; 100 μL) was added to the tube and stirred, and then centrifuged at 14,000 rpm for 10 minutes to precipitate the protein. The supernatant was transferred to an HPLC tube, the kynurenic acid concentration was measured by high performance liquid chromatography (HPLC), and the KAT2 inhibition of each compound was analyzed by Lineweaver-Burk plot.

PF-04859989、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンの基質濃度と酵素反応速度のグラフおよびLineweaver-Burkプロットを図２〜図５に示す。各化合物のLineweaver-Burkプロットから明らかなように、PF-04859989は非競合阻害剤としてＫＡＴ２活性を阻害するのに対し、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンは競合阻害剤としてＫＡＴ２阻害作用を有することが示された。
すなわち、グリチルリチン酸またはその誘導体は、既存薬剤とは異なり、競合阻害剤として機能するものと認められる。 2 to 5 show graphs of substrate concentrations and enzyme reaction rates and Lineweaver-Burk plots of PF-04859989, glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone. As is clear from the Lineweaver-Burk plot of each compound, PF-04859989 inhibits KAT2 activity as a non-competitive inhibitor, whereas glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone have KAT2 inhibitory action as competitive inhibitors. Indicated.
That is, glycyrrhizic acid or its derivative is recognized to function as a competitive inhibitor, unlike existing drugs.

実施例４：候補化合物のＫＡＴ２選択性の検討
グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンについて、ＫＡＴ１、ＫＡＴ２、ＫＡＴ３およびＫＡＴ４の阻害活性を測定し、候補化合物のＫＡＴ２選択性を検討した。
キヌレン酸の定量化に高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用いた以外は、実施例１の方法と同様の方法にしたがって、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンのＫＡＴ１（ヒトＫＡＴ１）およびＫＡＴ２（ヒトＫＡＴ２、マウスＫＡＴ２）に対する阻害活性（ＩＣ_５０値（μＭ））を測定した。ＫＡＴ１酵素阻害活性の測定には、基質としてキヌレニンおよびピルビン酸ナトリウムを用い、ＫＡＴ２酵素阻害活性の測定（ヒトおよびマウス）には、基質としてキヌレニンおよびα−ＫＧを用いた。
また、実施例３の測定方法と同様の方法にしたがって、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンの各測定濃度におけるＫＡＴ３基質溶液およびＫＡＴ４基質溶液中のキヌレン酸濃度を測定して、GraphPad Prism v6.07を用いて非線形回帰から各化合物のＫＡＴ３（ヒトＫＡＴ３）およびＫＡＴ４（ヒトＫＡＴ４）に対する阻害活性（ＩＣ_５０値（μＭ））を測定した。 Example 4: Examination of KAT2 Selectivity of Candidate Compounds For glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone, the inhibitory activity of KAT1, KAT2, KAT3 and KAT4 was measured, and the KAT2 selectivity of candidate compounds was examined.
Except that high performance liquid chromatography (HPLC) was used for quantification of kynurenic acid, KAT1 (human KAT1) and KAT2 (human KAT2, glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone were prepared in the same manner as in Example 1. Inhibitory activity (IC ₅₀ value (μM)) against mouse KAT2) was measured. For measurement of KAT1 enzyme inhibitory activity, kynurenine and sodium pyruvate were used as substrates, and for measurement of KAT2 enzyme inhibitory activity (human and mouse), kynurenine and α-KG were used as substrates.
In addition, according to the same method as the measurement method of Example 3, the concentration of kynurenic acid in the KAT3 substrate solution and KAT4 substrate solution at each measurement concentration of glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone was measured, and GraphPad Prism v6.07 was The inhibitory activity (IC ₅₀ value (μM)) of each compound against KAT3 (human KAT3) and KAT4 (human KAT4) was measured from nonlinear regression.

グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンのＫＡＴ１、ＫＡＴ２、ＫＡＴ３およびＫＡＴ４阻害活性（ＩＣ_５０値（μＭ））を表６に示す。
Table 6 shows the KAT1, KAT2, KAT3 and KAT4 inhibitory activities (IC ₅₀ values (μM)) of glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid and carbenoxolone.

グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびカルベノキソロンは、ＫＡＴアイソザイムの中でＫＡＴ２に対する阻害活性が高いことが示された。すなわち、グリチルリチン酸および誘導体は、高いＫＡＴ２選択性を示すと認められる。 Glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid, and carbenoxolone were shown to have high inhibitory activity against KAT2 among KAT isozymes. That is, glycyrrhizic acid and derivatives are recognized to exhibit high KAT2 selectivity.

実施例５：in vivoにおけるグリチルリチン酸のＫＡＴ２阻害作用の検討
８週齢のC57BL/6N雄性マウスに、生理食塩水に溶解したグリチルリチン酸（25mg/kg(n=7)または50mg/kg(n=8)）を３日間経口投与した。また、対照として生理食塩水を３日間経口投与した(n=7)。最終投与の翌日（投与開始から４日目）に、マウスの腹部大静脈から血液を採取し、実施例３の測定方法と同様の方法にしたがって、採取した血液から血清中のキヌレン酸濃度を測定した。 Example 5: Examination of KAT2 inhibitory action of glycyrrhizic acid in vivo In 8-week-old C57BL / 6N male mice, glycyrrhizic acid (25 mg / kg (n = 7) or 50 mg / kg (n = 8)) was orally administered for 3 days. As a control, physiological saline was orally administered for 3 days (n = 7). On the day after the last administration (the fourth day from the start of administration), blood is collected from the abdominal vena cava of the mouse, and the concentration of kynurenic acid in the serum is measured from the collected blood according to the same method as the measurement method of Example 3. did.

対照群、グリチルリチン酸(25mg/kg)投与群、およびグリチルリチン酸(50mg/kg)投与群のマウスにおける、血清中キヌレン濃度（ｎＭ）の平均値（±標準偏差）を表７および図６に示す。
Table 7 and FIG. 6 show the mean value (± standard deviation) of serum kynurene concentration (nM) in mice of the control group, the glycyrrhizic acid (25 mg / kg) administration group, and the glycyrrhizic acid (50 mg / kg) administration group. .

上記結果より、グリチルリチン酸は、濃度依存的に血清中キヌレン酸の濃度を低下させることが示された。すなわち、グリチルリチン酸およびその誘導体は、in vivoにおいてもＫＡＴ２阻害活性を示すと認められる。 From the above results, it was shown that glycyrrhizic acid decreases the concentration of serum kynurenic acid in a concentration-dependent manner. That is, glycyrrhizic acid and its derivatives are recognized to show KAT2 inhibitory activity even in vivo.

本発明は、トリプトファン−キヌレニン代謝経路におけるＬ−ＫＹＮからＫＹＮＡへの変換に関与するＫＡＴ２の機能を阻害し、ＫＹＮＡ産生増加を抑制することにより、ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患、例えば統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害、アルツハイマー病などの治療に有用である。 The present invention inhibits the function of CAT2 involved in the conversion of L-KYN to KYNA in the tryptophan-kynurenine metabolic pathway and suppresses the increase in KYNA production, thereby causing diseases caused by increased KYNA production, such as schizophrenia, It is useful for the treatment of epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral malaria, HIV encephalopathy, Down's syndrome, bipolar disorder, Alzheimer's disease and the like.

Claims

式（Ｉ）：

［式中、Ｒ^１は、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＲ’、グルクロン酸基またはジグルクロン酸基であり、ここで、Ｒ’は、ハロゲンまたはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルであり、ｎは１〜３であり；および
Ｒ^２は、水素またはハロゲンもしくはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルである］
で示される化合物またはその塩を含む、キヌレン酸（ＫＹＮＡ）産生増加に起因する疾患を治療するための医薬組成物。 Formula (I):

[In the ^{formula, R} 1, -OH, -OR ', - OCOR ', - OCO (CH 2) n COOH, -OCO (CH 2) n COOR ', a glucuronic acid or Jigurukuron acid groups, wherein , R ′ is C _1-6 alkyl optionally substituted with halogen or amino; n is 1-3; and R ² is C ₁ optionally substituted with hydrogen or halogen or amino. _-6 alkyl]
A pharmaceutical composition for treating a disease caused by increased production of kynurenic acid (KYNA), comprising a compound represented by the formula:

Ｒ^１が、−ＯＨ、−ＯＣＨ_３、−ＯＣＯＣＨ_３、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＯＯＣＨ_３、−ＯＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ_３またはジグルクロン酸基であり；および
Ｒ^２が、水素またはＣＨ_３である、請求項１記載の医薬組成物。 R ¹ is —OH, —OCH ₃ , —OCOCH ₃ , —OCOCH ₂ COOH, —OCOCH ₂ CH ₂ COOH, —OCOCH ₂ COOCH ₃ , —OCOCH ₂ CH ₂ COOCH ₃ or a diglucuronic acid group; and R ² The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein is hydrogen or CH ₃ .

化合物が、以下：
から選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。 The compound is:
The pharmaceutical composition according to claim 1 or 2, selected from:

該ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患が、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、脳マラリア、ＨＩＶ脳症、ダウン症候群、双極性障害またはアルツハイマー病である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。 The disease caused by the increased production of KYNA is schizophrenia, epilepsy, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral malaria, HIV encephalopathy, Down syndrome, bipolar disorder or Alzheimer's disease. The pharmaceutical composition according to one item.

該ＫＹＮＡ産生増加に起因する疾患が、統合失調症である、請求項４記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the disease caused by the increased production of KYNA is schizophrenia.

式（Ｉ）：

［式中、Ｒ^１は、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＲ’、グルクロン酸基またはジグルクロン酸基であり、ここで、Ｒ’は、ハロゲンまたはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルであり、ｎは１〜３であり；および
Ｒ^２は、水素またはハロゲンもしくはアミノで置換されていてもよいＣ_１−６アルキルである］
で示される化合物またはその塩を含む、キヌレニンアミノトランスフェラーゼ２（ＫＡＴ２）阻害剤。 Formula (I):

[In the ^{formula, R} 1, -OH, -OR ', - OCOR ', - OCO (CH 2) n COOH, -OCO (CH 2) n COOR ', a glucuronic acid or Jigurukuron acid groups, wherein , R ′ is C _1-6 alkyl optionally substituted with halogen or amino; n is 1-3; and R ² is C ₁ optionally substituted with hydrogen or halogen or amino. _-6 alkyl]
Or a salt thereof, or a kynurenine aminotransferase 2 (KAT2) inhibitor.