JP2018531914A - ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路およびＴＧＦ−βのアンタゴニストを介してがんを処置するための組成物および方法 - Google Patents

ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路およびＴＧＦ−βのアンタゴニストを介してがんを処置するための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、抗ＣＤ１５５［ＣＤ１５５、ネクチン様タンパク質５（Ｎｅｃｌ−５）、Ｔａｇｅ４、ＨＶＥＤ、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）］抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体［ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）、ＷＵＣＡＭ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ細胞接着分子）、Ｖｓｔｍ３（Ｖ−ｓｅｔおよび膜貫通ドメイン含有タンパク質３）、Ｖｓｉｇ９（Ｖ−ｓｅｔおよび免疫グロブリンドメイン含有タンパク質９）］とＴＧＦベータ１アンタゴニストとの併用効果に関する。この効果は、ヒト乳腺癌細胞におけるＩＦＮ−ガンマの産生の増加によって判断される。がんを有する患者を処置するために抗体／ＣＤ１５５またはＴＩＧＩＴ）をＴＧＦ−ベータ１アンタゴニストと併用して使用することが特許請求される。

Description

関連出願
本出願は、２０１５年９月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／２１８，２２７号、および２０１５年９月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／２１８，１６９号に対して優先日の利益を主張する。それぞれの仮特許出願の内容は、その全体が、本明細書に援用される。
背景
腫瘍は、様々な分子機構によってＴ細胞などの浸潤性免疫細胞の機能がダウンレギュレートした高度に抑制的な微小環境を構成する。
免疫チェックポイントとしても知られるＴ細胞共阻害分子の抗体遮断が、最近、がんの処置として現れてきた。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１を標的化する抗体が、ヒトでの臨床試験において治療的有用性を示した。詳細には、抗ＣＴＬＡ−４抗体のイピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））および抗ＰＤ−１抗体のニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））およびペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））が、がん患者の処置について現在認可されている。
しかしながら、免疫阻害性タンパク質の活性を調節するさらなるおよび改善された組成物および方法が未だに必要とされている。そのような作用物質は、がんの免疫療法および慢性感染症などの他の症状の処置に使用することができる。
開示の要旨
本開示は、ＣＤ１５５が多くのタイプのがん細胞上に高度に発現されるという発見、およびＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストをＴＧＦ−β１アンタゴニストと併用して使用することによって、いずれかのアンタゴニストのみの存在下でのＴ細胞活性化のレベルと比べて、がん細胞に曝露されたＴ細胞の活性化が増強されるという発見に部分的に基づく。例えば、実施例（下記）に記載されているように、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路とＴＧＦ−β経路の両方を同時に中和する作用物質の存在下においてがん細胞に曝露されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるＴｈ１サイトカインの産生（すなわち、ＩＬ−２およびＩＦＮγ）は、それらの経路のうちの一方だけが阻害された条件下におけるそのような細胞によるサイトカイン産生のレベルと比べて、有意に増強された。少なくとも、Ｔ細胞によるＴｈ１サイトカインの産生は、産生性の抗腫瘍免疫応答に関連するので、ＴＧＦ−β１アンタゴニストと併用したＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストの投与は、がんの処置に有用である。
したがって、いくつかの態様において、本開示は、患者におけるがんを処置する方法に関し、その方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストを患者に投与することによってその患者を処置することを含む。
他の態様において、本開示は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんを処置するための方法に関し、該方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む。他の態様において、本開示は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんを処置するための方法に関し、該方法は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む。
他の態様において、本開示は、患者におけるがんの処置において使用するためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストに関し、該処置は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む。他の態様において、本開示は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんの処置において使用するためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストに関し、該処置は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む。さらに他の態様において、本開示は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんの処置において使用するためのＴＧＦ−β１アンタゴニストに関し、該処置は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む。
本開示のこれらおよび他の態様において、本明細書中に記載される方法および使用は、患者におけるがん特異的免疫応答を含む。
本開示の他の態様は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けているがん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法に関し、該方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを該患者に投与することにより、該ＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べた場合に、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む。他の態様において、本開示は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けているがん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法に関し、該方法は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べた場合に、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む。いくつかの態様において、本開示は、がん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法に関し、該方法は、有効量の（ｉ）ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および（ｉｉ）ＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該ＴＧＦ−β１アンタゴニストまたは該ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べた場合に、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む。
本開示の他の態様は、患者におけるがんを処置するための方法に関し、該方法は、有効量の
（ｉ）抗ＣＤ１５５抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および
（ｉｉ）２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト
を該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む。
本開示の他の態様は、がん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法に関し、該方法は、有効量の
（ｉ）抗ＣＤ１５５抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および
（ｉｉ）２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト
を該患者に投与することにより、該ＴＧＦ−β１アンタゴニストまたは該ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べて、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む。
本開示のこれらおよび他の態様において、患者のがん細胞は、ＣＤ１５５を発現している。他の態様において、がん細胞は、同じ組織学的種類の正常な細胞と比べてＣＤ１５５を過剰発現している。いくつかの態様において、本明細書に開示の任意の方法は、患者のがん細胞がＣＤ１５５を発現または過剰発現しているかを判定することをさらに含む。
本明細書に開示の任意の態様において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメントである。本開示のこれらおよび他の態様において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの態様において、抗体は、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、非抗体の骨格タンパク質である。
本開示のこれらおよび他の態様において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、低分子、核酸またはポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質である。いくつかの態様において、ＴＧＦ−β受容体タンパク質は二量体である。他の態様において、ＴＧＦ−β受容体タンパク質は、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントである。いくつかの態様において、ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む。
本開示のこれらおよび他の態様において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上させる向上部分とを含む融合タンパク質を含む。いくつかの態様において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上させる向上部分は、ポリエチレングリコール、抗体のＦｃ部分またはアルブミンタンパク質である。他の態様において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む。いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ３ ＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。さらなる態様において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、（ａ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン、および（ｂ）配列番号２に示されているアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。
本開示のこれらおよび他の態様において、がん特異的免疫応答は、Ｔ細胞応答である。いくつかの態様において、患者におけるＴ細胞応答は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストまたはＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後のＴ細胞応答より大きい。他の態様において、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＦＮγの産生を含む。なおさらなる態様において、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＬ−２の産生を含む。他の態様において、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方の増殖を含む。
さらなる態様において、本開示は、患者におけるがん進行の遅延を含む方法を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、患者における腫瘍特異的免疫応答の増強を含む方法を提供する。
図１は、抗ＣＤ１５５抗体によるＣＤ１５５経路遮断を介した腫瘍免疫の増強の提案されているモデルの概略図である。
図２Ａ〜２Ｃは、様々ながんにおけるＴＩＧＩＴ（図２Ａ）、ＣＤ１５５（図２Ｂ）およびＴＧＦ−β（図２Ｃ）遺伝子の中での変異、欠失、増幅または複数の変化の頻度を示している棒グラフである。図２Ａに示されているカラムセグメントは、特定のがんのタイプに対する遺伝子変化のスペクトルを示しており、以下のとおり説明される（左から右に向かって）。第１のカラムは、肺扁平上皮癌腫における変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２のカラムは、食道がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第３のカラムは、頭頸部がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第４のカラムは、卵巣がんにおける変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第５のカラムは、非小細胞肺がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第６のカラムは、胆管がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）である。第７のカラムは、子宮頸がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第８のカラムは、肉腫における変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第９のカラムは、肺腺癌における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１０のカラムは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫における変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第１１のカラムは、子宮がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（欠失）を特徴としている。第１２のカラムは、直腸結腸がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）を特徴としている。第１３のカラムは、小細胞肺がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）を特徴としている。第１４のカラムは、メラノーマにおける変化であり、分割のないカラム（変異）を特徴としている。第１５のカラムは、乳がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１６のカラムは、膀胱がんにおける変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第１７のカラムは、色素嫌性腎細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（変異）を特徴としている。第１８のカラムは、胃がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１９のカラムは、前立腺がんにおける変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２０のカラムは、低悪性度の神経膠腫（神経膠芽腫）における変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２１および第２２のカラムは、両方が神経膠芽腫に対するカラムであり、両方が、分割のないカラム（増幅）である。第２３のカラムは、腎明細胞癌腫における変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２４のカラムは、乳頭状腎細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（変異）を特徴としている。第２５のカラムは、肝臓がんにおける変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第２６のカラムは、乳がんにおける変化であり（ＭＥＴＡＢＲＩＣデータ）、分割のないカラム（増幅）である。
図２Ａ〜２Ｃは、様々ながんにおけるＴＩＧＩＴ（図２Ａ）、ＣＤ１５５（図２Ｂ）およびＴＧＦ−β（図２Ｃ）遺伝子の中での変異、欠失、増幅または複数の変化の頻度を示している棒グラフである。図２Ｂに示されているカラムセグメントは、特定のがんのタイプに対する遺伝子変化のスペクトルを示しており、以下のとおり説明される（左から右に向かって）。第１のカラムは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（欠失）を特徴としている。第２のカラムは、胆管がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第３のカラムは、膀胱がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第４のカラムは、卵巣がんにおける変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第５のカラムは、肺扁平上皮癌腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第６のカラムは、胃がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第７のカラムは、子宮頸がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第８のカラムは、肺腺癌における変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第９のカラムは、腺様嚢胞癌腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１０のカラムは、食道がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１１のカラムは、肉腫における変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１２のカラムは、肝臓がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１３のカラムは、非小細胞肺癌腫における変化であり、下の小さいセグメント（複数の変化）、中央のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１４のカラムは、皮膚Ｔ細胞リンパ腫における変化であり、分割のないカラム（変異）である。第１５のカラムは、中皮腫における変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第１６のカラムは、子宮がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１７のカラムは、乳がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１８のカラムは、胸腺腫における変化であり、分割のないカラム（変異）である。第１９のカラムは、低悪性度の神経膠腫（神経膠芽腫）における変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２０のカラムは、メラノーマにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２１のカラムは、頭頸部がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２２のカラムは、ブドウ膜黒色腫における変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２３のカラムは、前立腺がんにおける変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２４のカラムは、神経膠芽腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２５のカラムは、非淡明細胞型腎細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２６のカラムは、神経膠芽腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２７のカラムは、直腸結腸がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２８のカラムは、乳頭状腎細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（欠失）である。第２９のカラムは、乳がんにおける変化であり（ＭＥＴＡＢＲＩＣデータ）、分割のないカラム（増幅）である。第３０のカラムは、膵がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）である。第３１のカラムは、腎明細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第３２のカラムは、慢性リンパ性白血病における変化であり、分割のないカラム（変異）である。
図２Ａ〜２Ｃは、様々ながんにおけるＴＩＧＩＴ（図２Ａ）、ＣＤ１５５（図２Ｂ）およびＴＧＦ−β（図２Ｃ）遺伝子の中での変異、欠失、増幅または複数の変化の頻度を示している棒グラフである。図２Ｃに示されているカラムセグメントは、特定のがんのタイプに対する遺伝子変化のスペクトルを示しており、以下のとおり説明される（左から右に向かって）。第１のカラムは、肉腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２のカラムは、卵巣がんにおける変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第３のカラムは、膀胱がんにおける変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第４のカラムは、肺扁平上皮癌腫における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第５のカラムは、胆管がんにおける変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第６のカラムは、胃がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第７のカラムは、中皮腫における変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第８のカラムは、乳がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第９のカラムは、非小細胞肺がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）、中央のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１０のカラムは、肺腺癌における変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１１のカラムは、子宮がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１２のカラムは、子宮頸がんにおける変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第１３のカラムは、メラノーマにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１４のカラムは、肝臓がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１５のカラムは、直腸結腸がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１６のカラムは、低悪性度の神経膠腫（神経膠芽腫）における変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１７のカラムは、食道がんにおける変化であり、下のセグメント（欠失）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第１８のカラムは、前立腺がんにおける変化であり、下の部分（変異）および上のセグメント（欠失）を特徴としている。第１９のカラムは、小細胞肺がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２０のカラムは、頭頸部がんにおける変化であり、下のセグメント（変異）および上のセグメント（増幅）を特徴としている。第２１のカラムは、精巣胚細胞性がんにおける変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２２のカラムは、多発性骨髄腫における変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２３のカラムは、乳頭状腎細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（欠失）である。第２４のカラムは、神経膠芽腫における変化であり、分割のないカラム（欠失）である。第２５のカラムは、腎明細胞癌腫における変化であり、分割のないカラム（増幅）である。第２６のカラムは、慢性リンパ性白血病における変化であり、分割のないカラム（変異）である。第２７のカラムは、乳がんにおける変化であり（ＭＥＴＡＢＲＩＣデータ）、分割のないカラム（増幅）である。
図３は、ｍＲＮＡ発現のｚ−スコアとして表されている、健康個体と比較した、がん患者において測定されたＰＤＬ１、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１およびＴＧＦ−βのｍＲＮＡの相対的な発現を示している棒グラフを示している。各バーは、各研究の平均ｚ−スコアを表しており、サンプルサイズが、括弧内に示されており、エラーバーは、平均値の標準誤差を表している。
図３は、ｍＲＮＡ発現のｚ−スコアとして表されている、健康個体と比較した、がん患者において測定されたＰＤＬ１、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１およびＴＧＦ−βのｍＲＮＡの相対的な発現を示している棒グラフを示している。各バーは、各研究の平均ｚ−スコアを表しており、サンプルサイズが、括弧内に示されており、エラーバーは、平均値の標準誤差を表している。 図３は、ｍＲＮＡ発現のｚ−スコアとして表されている、健康個体と比較した、がん患者において測定されたＰＤＬ１、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１およびＴＧＦ−βのｍＲＮＡの相対的な発現を示している棒グラフを示している。各バーは、各研究の平均ｚ−スコアを表しており、サンプルサイズが、括弧内に示されており、エラーバーは、平均値の標準誤差を表している。
図４は、フローサイトメトリーによって測定された、様々ながん細胞株におけるＣＤ１５５の発現を示しているプロットを示している。 図４は、フローサイトメトリーによって測定された、様々ながん細胞株におけるＣＤ１５５の発現を示しているプロットを示している。 図４は、フローサイトメトリーによって測定された、様々ながん細胞株におけるＣＤ１５５の発現を示しているプロットを示している。 図４は、フローサイトメトリーによって測定された、様々ながん細胞株におけるＣＤ１５５の発現を示しているプロットを示している。
図５は、幾何平均蛍光積分値（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）（ｉＧＭＦＩ）によって測定された、卵巣がん患者の腹水から単離された腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）、免疫細胞（ＣＤ４５＋ＥｐＣＡＭ−）および間質細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ−）上でのＣＤ１５５の発現をＰＤＬ１の発現と比較している棒グラフである。
図６は、幾何平均蛍光積分値（ｉＧＭＦＩ）によって測定された、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肺がん腫または卵巣がんを有する患者由来の解離腫瘍細胞から単離された腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）上でのＣＤ１５５の発現をＰＤＬ１の発現と比較している棒グラフである。
図７は、幾何平均蛍光積分値（ｉＧＭＦＩ）によって測定された、健康ドナーおよびＣＲＣ、肺癌腫または卵巣がんを有する患者由来の解離腫瘍細胞およびＰＢＭＣから単離された様々な細胞型上でのＴＩＧＩＴの発現をＰＤ１の発現と比較している棒グラフを示している。 図７は、幾何平均蛍光積分値（ｉＧＭＦＩ）によって測定された、健康ドナーおよびＣＲＣ、肺癌腫または卵巣がんを有する患者由来の解離腫瘍細胞およびＰＢＭＣから単離された様々な細胞型上でのＴＩＧＩＴの発現をＰＤ１の発現と比較している棒グラフを示している。 図７は、幾何平均蛍光積分値（ｉＧＭＦＩ）によって測定された、健康ドナーおよびＣＲＣ、肺癌腫または卵巣がんを有する患者由来の解離腫瘍細胞およびＰＢＭＣから単離された様々な細胞型上でのＴＩＧＩＴの発現をＰＤ１の発現と比較している棒グラフを示している。
図８は、健康ドナー由来のＰＢＭＣを、抗ＣＤ１５５抗体またはアイソタイプ対照で処置したＭＤＡ−ＭＢ３１細胞（乳腺癌）と共培養したときの、サイトカイン（ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２）を産生するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示している。
図９は、健康ドナー由来のＰＢＭＣを、抗ＴＩＧＨＴ抗体またはアイソタイプ対照で処置したＭＤＡ−ＭＢ３１細胞（乳腺癌）と共培養したときの、サイトカイン（ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２）を産生するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示している。
図１０は、健康ドナー由来のＰＢＭＣを、抗ＣＤ１５５抗体、またはＦｃに結合体化されたＴＧＦ−β受容体ＩＩフラグメント（ＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃ）を単独でまたは組み合わせて処置したＭＤＡ−ＭＢ３１細胞（乳腺癌）と共培養したときの、ＩＦＮ−γを産生するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度（上）ならびにＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞からのサイトカイン産生（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２）のパーセント増加（下）を示している。棒グラフにおける各３つ組の列は、左から右に向かって、それぞれ、抗ＣＤ１５５、抗ＣＤ１５５／ＴＧＦＲＩＩ−ＦｃおよびＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃである。
図１１は、健康ドナー由来のＰＢＭＣを、抗ＴＩＧＨＴ抗体、またはＦｃに結合体化されたＴＧＦ−β受容体ＩＩフラグメント（ＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃ）を単独でまたは組み合わせて処置したＭＤＡ−ＭＢ３１細胞（乳腺癌）と共培養したときの、ＩＦＮ−γを産生するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度（上）ならびにＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞からのサイトカイン産生（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２）のパーセント増加（下）を示している。棒グラフにおける各３つ組の列は、左から右に向かって、それぞれ、抗ＴＩＧＨＴ、抗ＴＩＧＨＴ／ＴＧＦＲＩＩ−ＦｃおよびＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃである。
詳細な説明
概要
様々な疾患が、患者における進行性の免疫抑制の発生を特徴とする。悪性腫瘍を有する患者に免疫応答の障害が存在することは、特によく実証されている。がん患者は、遅延型過敏症の減少および溶菌機能の低下およびリンパ球の増殖応答などの、種々の変化した免疫機能を示す。がん患者における免疫機能の増大は、腫瘍の制御に対して有益な効果を有し得る。
１つの態様において、本開示は、患者におけるがんを処置する方法に関し、その方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与することによってその患者を処置することを含む。各作用物質が、免疫系を個別に標的化し、併用処置（例えば、同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）投与、連続投与、同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）投与、前の投与および後の投与）が、それを必要とするがん患者において、改善された効果を提供する。したがって、別の態様において、本開示は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与することによって、Ｔ細胞応答（例えば、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答）などのがん患者におけるがん特異的免疫応答を増強する方法に関する。本明細書中の処置は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者への有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストの投与、またはＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者への有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストの投与を含む。
定義
請求項および明細書において使用される用語は、別段特定されない限り、下記に示されるように定義される。親仮特許出願において使用された用語と直接矛盾する場合、本願において使用される用語が支配するものとする。
本明細書および添付の請求項において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含むことに注意されなければならない。
本明細書中で使用されるとき、「約」は、当業者によって理解され、それが使用される文脈に応じて、ある程度変動し得る。この用語が使用される文脈を与えられた当業者に明らかでないこの用語の使用がある場合、「約」は、特定の値のプラスまたはマイナス１０％までを意味し得る。
用語「回復させる」とは、疾患状態、例えば、がんの処置における任意の治療的に有益な結果（その予防、重症度もしくは進行の低減、緩解、または治癒を含む）のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣物のことを指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸アナログとは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基に結合した炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムのことを指す。そのようなアナログは、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能する化学的化合物のことを指す。
アミノ酸は、一般に知られている３文字の記号またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎが推奨している１文字の記号のいずれかによって本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認められている１文字コードによって本明細書中で言及され得る。
本明細書中で使用されるとき、「アミノ酸の置換」とは、所定のアミノ酸配列（最初のポリペプチドのアミノ酸配列）における少なくとも１つの既存のアミノ酸残基が第２の異なる「置換」アミノ酸残基によって置き換えられることを指す。「アミノ酸の挿入」とは、所定のアミノ酸配列に少なくとも１つのさらなるアミノ酸が組み込まれることを指す。その挿入は、通常、１つまたは２つのアミノ酸残基の挿入からなり得るが、より大きい「ペプチド挿入」、例えば、約３〜約５個、またはさらには最大約１０、１５もしくは２０個のアミノ酸残基の挿入も、行われ得る。挿入される残基は、天然に存在するものであってもよいし、上で開示されたような天然に存在しないものであってもよい。「アミノ酸の欠失」とは、所定のアミノ酸配列から少なくとも１つのアミノ酸残基が除去されることを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「アンタゴニスト」とは、本明細書中に開示される天然のポリペプチドの生物学的活性を部分的にまたは完全に遮断、阻害または中和する任意の分子のことを指す。好適なアンタゴニスト分子としては、具体的には、アンタゴニスト抗体または抗体フラグメント、天然のポリペプチドのフラグメントまたはアミノ酸配列バリアント、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、有機低分子などが挙げられる。いくつかの実施形態において、アンタゴニストの存在下における阻害は、用量依存的様式で観察される。一部の実施形態では、測定されたシグナル（例えば、生物学的活性）は、同等の条件下で陰性対照で測定されたシグナルより少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約１００％低い。本開示の方法における使用に適したアンタゴニストを特定する方法もまた本明細書中に開示される。例えば、これらの方法としては、結合アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ（著作権）システムおよびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。これらのアッセイは、アンタゴニストが目的のポリペプチド（例えば、受容体またはリガンド）に結合する能力を測定するので、そのアンタゴニストがそのポリペプチドの活性を阻害、中和または遮断する能力を示唆する。アンタゴニストの有効性（例えば、アンタゴニストがポリペプチドまたはアゴニストの機能を阻害する能力）は、機能的アッセイを用いても測定され得る。例えば、機能的アッセイは、ポリペプチドをアンタゴニスト分子候補と接触させること、および通常そのポリペプチドに関連する１つまたはそれを超える生物学的活性の検出可能な変化を計測することを含み得る。アンタゴニストの効力は、通常、そのＩＣ５０値（アゴニスト応答の５０％を阻害するのに必要な濃度）によって定義される。ＩＣ５０値が低いほど、アンタゴニストの効力は高く、最大の生物学的応答を阻害するのに必要な濃度は低い。
本明細書中で使用されるとき、用語「抗体」とは、２つの軽鎖ポリペプチドおよび２つの重鎖ポリペプチドを含むホール抗体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）のことを指す。ホール抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ抗体を含む異なる抗体アイソタイプを含む。用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ化抗体またはキメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体および完全ヒト抗体を含む。抗体は、種々の種のうちのいずれか、例えば、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、オランウータン、ヒヒまたはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラットおよびマウスにおいて産生され得るか、またはそれらに由来し得る。抗体は、精製された抗体または組換え抗体であり得る。
本明細書中で使用されるとき、用語「抗体フラグメント」、「抗原結合フラグメント」または類似の用語は、標的抗原（例えば、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β１）に結合して、その標的抗原の活性を阻害する能力を保持する抗体のフラグメントのことを指す。そのようなフラグメントとしては、例えば、一本鎖抗体、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントが挙げられる。ｓｃＦｖフラグメントは、そのｓｃＦｖが由来する抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の両方を含む単一ポリペプチド鎖である。さらに、イントラボディ、ミニボディ、トリアボディおよびダイアボディも、抗体の定義に含まれ、本明細書中に記載される方法における使用に適合している。例えば、そのそれぞれの開示の全体が参考として本明細書に援用されるＴｏｄｏｒｏｖｓｋａら、（２００１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ２４８（１）：４７−６６；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１（１）：１７７−１８９；Ｐｏｌｊａｋ（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２（１２）：１１２１−１１２３；ＲｏｎｄｏｎおよびＭａｒａｓｃｏ（１９９７）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ５１：２５７−２８３を参照のこと。
いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、重鎖ポリペプチドの可変領域および軽鎖ポリペプチドの可変領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される抗原結合フラグメントは、抗体の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドのＣＤＲを含む。
本明細書中で使用されるとき、用語「二重特異性」または「二機能性抗体」とは、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体のことを指す。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結をはじめとした種々の方法によって作製され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、その２つの重鎖／軽鎖対は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７−５３９）。所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合され得る。重鎖可変領域の融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。二重特異性抗体を作製するための例示的な現在公知の方法のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、（１９８６）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０；ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２７０１１；Ｂｒｅｎｎａｎら、（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１；Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ（１９９２）１７５：２１７−２２５；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、（１９９２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８（５）：１５４７−１５５３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８；Ｇｒｕｂｅｒら、（１９９４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５２：５３６８；およびＴｕｔｔら、（１９９１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：６０を参照のこと。二重特異性抗体には、架橋された抗体またはヘテロ結合体抗体も含まれる。ヘテロ結合体抗体は、任意の好都合な架橋方法を用いて作製され得る。好適な架橋剤は、当該分野で周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号にいくつかの架橋法とともに開示されている。
組換え細胞培養物から直接、二重特異性抗体フラグメントを作製および単離するための様々な手法も、報告されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて作製された。例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８（５）：１５４７−１５５３を参照のこと。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結され得る。その抗体ホモ二量体は、ヒンジ領域において還元されてモノマーを形成し、次いで、再度酸化されて、抗体ヘテロ二量体を形成し得る。この方法は、抗体ホモ二量体の作製にも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８によって報告された「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替の機構を提供した。それらのフラグメントは、同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするにはあまりにも短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、一方のフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、もう一方のフラグメントの相補的なＶＬおよびＶＨドメインと対形成せざるを得ないことによって、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用することによって二重特異性抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーも報告されている。例えば、Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５２：５３６８を参照のこと。あるいは、抗体は、例えば、Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２に記載されているような「鎖状抗体」であり得る。簡潔には、これらの抗体は、抗原結合領域の対を形成するタンデムのＦｄセグメントの対（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。鎖状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る。
２より大きい結合価を有する抗体（例えば、三重特異性抗体）が企図され、それは、例えば、Ｔｕｔｔら（１９９１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：６０に記載されている。
本開示は、多重特異的抗体のバリアント型、例えば、Ｗｕら（２００７）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５（１１）：１２９０−１２９７に記載されている二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子も包含する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ法によってタンデムで直接連結されるかまたは短いリンカーを介して連結された後、軽鎖定常ドメインに連結されるように設計されている。同様に、重鎖は、タンデムで連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）に続いて、定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む。２つの親抗体からＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するための方法は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０８／０２４１８８およびＷＯ０７／０２４７１５にさらに記載されている。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、第２の特異性を有する軽鎖可変領域がホール抗体の重鎖可変領域に融合されているＦａｂｓ−ｉｎ−Ｔａｎｄｅｍ免疫グロブリンである。そのような抗体は、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／１０３０７２に記載されている。
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニストは、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、例えば、ラクダ科動物抗体またはヒトコブラクダ抗体（例えば、Ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ、Ｃａｌｅｌｕｓ ｄｒｏｍａｄｅｒｉｕｓまたはＬａｍａ ｐａｃｃｏｓに由来する抗体）である。そのような抗体は、たいていの哺乳動物由来の代表的な２本鎖の抗体（フラグメント）または４本鎖の抗体（ホール抗体）とは異なり、一般に、軽鎖を欠いている。米国特許第５，７５９，８０８号；Ｓｔｉｊｌｅｍａｎｓら、（２００４）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：１２５６−１２６１；Ｄｕｍｏｕｌｉｎら、（２００３）Ｎａｔｕｒｅ ４２４：７８３−７８８；およびＰｌｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒら、（２００３）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １４：４４０−４４８を参照のこと。非ヒト起源の他の抗体と同様に、ラクダ科動物抗体のアミノ酸配列は、ヒト配列により似ている配列が得られるように組換え的に変更することができ、すなわち、ナノボディは、「ヒト化」することができ、それによって、その抗体の潜在的な免疫原性をさらに低下させることができる。
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニストは、非抗体の骨格タンパク質である。これらのタンパク質は、一般に、既存の抗原結合タンパク質のコンビナトリアルケミストリーに基づく改造（ａｄａｐｔａｔｉｏｎ）によって得られる。例えば、ヒトトランスフェリン受容体に対するヒトトランスフェリンの結合部位を、本明細書中に記載されるシステムを用いて多様化することにより、トランスフェリンバリアントの多様なライブラリーを形成することができ、ここで、それらのトランスフェリンバリアントのうちのいくつかが、異なる抗原に対する親和性を獲得している。Ａｌｉら（１９９９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７４：２４０６６−２４０７３。受容体への結合に関わらないヒトトランスフェリンの部分は、変更されないままであり、抗体のフレームワーク領域と同様に、バリアント結合部位を提示する骨格として働く。次いで、そのライブラリーは、抗体ライブラリーと同様に、本明細書中に記載される方法に従って、目的の標的抗原に対してスクリーニングされることにより、その標的抗原に対して最適な選択性および親和性を有するバリアントが特定される。Ｈｅｙら（２００５）ＴＲＥＮＤＳ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２３（１０）：５１４−５２２。
当業者は、非抗体骨格タンパク質の骨格部分が、例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓプロテインＡのＺドメイン、ヒトトランスフェリン、ヒト第１０フィブロネクチンタイプＩＩＩドメイン、ヒトトリプシン阻害剤のｋｕｎｉｔｚドメイン、ヒトＣＴＬＡ−４、アンキリンリピートタンパク質、ヒトリポカリン（例えば、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ））、ヒトクリスタリン、ヒトユビキチンまたはＥ．ｅｌａｔｅｒｉｕｍ由来のトリプシン阻害剤の全部または一部を含み得ることを認識するだろう。
本明細書中で使用されるとき、本発明者らは、自律成長（すなわち、急速に増殖する細胞成長を特徴とする異常な状態または症状）に対する能力を有する細胞のことを指すために用語「がん」（または「がん性」）、「過剰増殖性」および「腫瘍性」を使用し得る。過剰増殖性および腫瘍性の疾患状態は、病的（すなわち、疾患状態を特徴づけるかまたは構成する）として分類され得るか、または非病的（すなわち、正常からは逸脱しているが疾患状態と関連しない）として分類され得る。これらの用語は、病理組織学的タイプまたは侵襲性のステージに関係なく、あらゆるタイプのがん性成長または発がん性プロセス、転移性組織または悪性形質転換した細胞、組織もしくは器官を含むと意味される。「病的な過剰増殖性」細胞は、悪性腫瘍の成長を特徴とする疾患状態において生じる。非病的な過剰増殖性細胞の例としては、創傷修復に関連する細胞の増殖が挙げられる。
用語「がん」または「新生物」は、様々な器官系の悪性腫瘍（肺、***、甲状腺、リンパ腺およびリンパ系組織、胃腸器官ならびに泌尿生殖器に影響するものを含む）、ならびに悪性腫瘍（例えば、たいていの結腸がん、腎細胞癌腫、前立腺がんおよび／または精巣腫瘍、非小細胞肺癌腫、小腸がんおよび食道がん）を含むと通常考えられる腺がんのことを指すために使用される。
本明細書中で使用されるとき、「がん抗原」とは、（ｉ）腫瘍特異的抗原、（ｉｉ）腫瘍関連抗原、（ｉｉｉ）腫瘍特異的抗原を発現している細胞、（ｉｖ）腫瘍関連抗原を発現している細胞、（ｖ）腫瘍上の胚性抗原、（ｖｉ）自己腫瘍細胞、（ｖｉｉ）腫瘍特異的膜抗原、（ｖｉｉｉ）腫瘍関連膜抗原、（ｉｘ）成長因子受容体、（ｘ）成長因子リガンド、および（ｘｉ）がんに関連する他の任意のタイプの抗原または抗原提示細胞もしくは抗原提示材料のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「がん特異的免疫応答」とは、腫瘍、がん細胞またはがん抗原の存在によって誘導される免疫応答のことを指す。ある特定の実施形態において、この応答には、がん抗原特異的リンパ球の増殖が含まれる。ある特定の実施形態において、この応答には、抗体およびＴ細胞受容体の発現およびアップレギュレーション、ならびにリンフォカイン、ケモカインおよびサイトカインの形成および放出が含まれる。自然免疫系と獲得免疫系の両方が相互作用することにより、腫瘍、がん細胞またはがん抗原に対する抗原反応が惹起される。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、Ｔ細胞応答である。
用語「癌腫」は、当該分野において認識されており、上皮または内分泌組織の悪性腫瘍のことを指し、それらには、呼吸器系の癌腫、胃腸系の癌腫、泌尿生殖器系の癌腫、精巣癌腫、乳癌腫、前立腺癌腫、内分泌系の癌腫およびメラノーマが含まれる。ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を用いることにより、腎臓の癌腫もしくはメラノーマを含む任意のタイプのがんまたは任意のウイルス性疾患を有するか、それを有すると疑われるか、またはそれを発症するリスクが高いかもしれない患者を処置することができる。例示的な癌腫としては、子宮頸部、肺、前立腺、***、頭頸部、結腸および卵巣の組織から形成している癌腫が挙げられる。この用語には、がん性組織および肉腫組織から構成される悪性腫瘍を含む癌肉腫も含まれる。「腺癌」とは、腺組織に由来する癌腫または腫瘍細胞が認識可能な腺構造を形成している癌腫のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「ＣＤ１５５」とは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーのことを指し、樹状細胞上、線維芽細胞上、内皮細胞上およびいくつかの腫瘍細胞上に高度に発現されるＩ型膜貫通糖タンパク質（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｇｌｙｇｏｐｒｏｔｅｉｎ）である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５は、ＴＩＧＩＴに高親和性で結合する。
本明細書中で使用されるとき、用語「ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト」とは、ＣＤ１５５がＴＩＧＩＴに結合することによって誘導されるシグナル伝達経路を阻害することができる分子を指す。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＣＤ１５５を特異的にアンタゴナイズする。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴとの相互作用を妨害する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗ＣＤ１５５抗体である。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＴＩＧＩＴを特異的にアンタゴナイズする。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストはＴＩＧＩＴのＣＤ１５５との相互作用を妨害する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。
本明細書中で使用されるとき、「併用療法」とは、活性な作用物質または治療の各々を、その併用の有益な効果を提供し得るレジメンで投与することを指し、その投与は、活性な作用物質もしくは治療の、実質的に同時の様式での同時投与（例えば、固定された比の活性な作用物質を有する単一製剤として）または連続した様式での同時投与（例えば、各活性な作用物質または各治療の複数の別個の製剤として）を含む。併用療法は、個々のエレメントが異なる時点においてかつ／または異なる経路によって投与され得るが、併用された際に、その併用療法の各作用物質または各処置アプローチの共作用（ｃｏ−ａｃｔｉｏｎ）または薬物動態学的効果および薬力学的効果によって有益な効果が提供されるように作用する併用も含む。
指定のポリペプチドまたはタンパク質に「由来する」ポリペプチドまたはアミノ酸配列とは、そのポリペプチドの起源のことを指す。好ましくは、特定の配列に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、その配列またはその一部と本質的に同一のアミノ酸配列を有し、ここで、その一部は、少なくとも１０〜２０アミノ酸、好ましくは、少なくとも２０〜３０アミノ酸、より好ましくは、少なくとも３０〜５０アミノ酸からなるか、またはその配列においてその起源を有すると当業者に特定可能であるものである。別のペプチドに由来するポリペプチドは、最初のポリペプチドと比べて１つまたはそれを超える変異、例えば、別のアミノ酸残基で置換されているかまたは１つもしくはそれを超えるアミノ酸残基の挿入もしくは欠失を有する１つまたはそれを超えるアミノ酸残基を有し得る。
ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を含み得る。そのようなバリアントは、必然的に、最初の分子と１００％未満の配列同一性または類似性を有する。ある特定の実施形態において、バリアントは、例えば、そのバリアント分子の長さにわたって、最初のポリペプチドのアミノ酸配列と約７５％〜１００％未満、より好ましくは、約８０％〜１００％未満、より好ましくは、約８５％〜１００％未満、より好ましくは、約９０％〜１００％未満（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）、最も好ましくは、約９５％〜１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性のアミノ酸配列を有し得る。
ある特定の実施形態において、出発ポリペプチド配列とそれに由来する配列との間に１つのアミノ酸の差異が存在する。この配列に関する同一性または類似性は、最大の配列同一性パーセントが達成されるように配列をアラインメントし、必要であればギャップを導入した後、出発アミノ酸残基と同一（すなわち、同じ残基）である候補配列中のアミノ酸残基の百分率と本明細書中で定義される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１〜５から選択されるアミノ酸配列からなる、本質的にからなる、または含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１〜５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１〜５から選択される連続したアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である連続したアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１〜５から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００または５００（あるいはこれらの数の中の任意の整数）の連続したアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、本発明のペプチドは、ヌクレオチド配列によってコードされる。本発明のヌクレオチド配列は、いくつかの用途に有用であり得、その用途としては、クローニング、遺伝子治療、タンパク質の発現および精製、変異の導入、ＤＮＡワクチン接種を必要とする宿主のＤＮＡワクチン接種、抗体生成（例えば受動免疫について）、ＰＣＲ、プライマーおよびプローブの生成などが挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明のヌクレオチド配列は、配列番号６から選択されるヌクレオチド配列からなる、本質的にからなる、または含む。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号６に示されているヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号６に示されている連続したヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である連続したヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号６に示されているヌクレオチド配列の少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００または５００（あるいはこれらの数の中の任意の整数）の連続したヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含む。
本明細書中に開示される方法における使用に適したポリペプチド（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、ＴＧＦ−β受容体タンパク質）は、それらが、天然の配列の望ましい活性を保持しつつ、それらが由来する天然に存在する配列または天然の配列と配列が異なるように変更され得ることも当業者によって理解されるだろう。例えば、「可欠」アミノ酸残基における保存的置換または保存的変更をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸の置換が行われ得る。変異は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発などの標準的な手法によって導入され得る。
本明細書中に開示される方法における使用に適したポリペプチドは、１つまたはそれを超えるアミノ酸残基、例えば、必須アミノ酸残基または可欠アミノ酸残基における保存的アミノ酸置換を含み得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野において定義されており、それらとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、結合性ポリペプチドにおける可欠アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基で置き換えられる。ある特定の実施形態において、ある一続きのアミノ酸が、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似している一続きで置き換えられ得る。あるいは、ある特定の実施形態において、変異は、飽和突然変異誘発などによってコード配列の全部または一部に沿ってランダムに導入され得、得られた変異体が、本発明の結合性ポリペプチドに組み込まれ得、所望の標的に結合する能力についてスクリーニングされ得る。
本明細書中で使用されるとき、用語「エピトープ」または「抗原決定基」とは、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位のことを指す。エピトープは、連続したアミノ酸、またはタンパク質の三次の折り畳みによって並置される連続していないアミノ酸の両方から形成され得る。連続したアミノ酸から形成されるエピトープは、通常、変性溶媒に曝された状態でも保持されるのに対して、三次の折り畳みによって形成されるエピトープは、通常、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、通常、ユニークな空間的立体配座において、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体によって結合されるかを判定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該分野で周知であり、それらとしては、例えば、免疫ブロット法および免疫沈降アッセイが挙げられ、ここで、例えば、ＣＤ１５５またはＴＩＧＩＴ由来の、重複するペプチドまたは連続したペプチドが、所与の抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体との反応性について試験される。エピトープの空間的立体配座を明らかにする方法には、当該分野における手法および本明細書中に記載される手法、例えば、Ｘ線結晶構造解析および２次元核磁気共鳴（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照のこと）が含まれる。
本明細書中で使用されるとき、用語「Ｆｃ領域」とは、その２つの重鎖のそれぞれのＦｃドメイン（またはＦｃ部分）によって形成される天然の免疫グロブリンの部分を指す。本明細書中で使用されるとき、用語「Ｆｃドメイン」とは、単一の免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖の部分を指し、ここで、このＦｃドメインは、Ｆｖドメインを含まない。したがって、Ｆｃドメインは、「Ｉｇ」または「ＩｇＧ」とも称され得る。ある特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域から始まり、抗体のＣ末端で終わる。したがって、完全なＦｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジ（例えば、上部、中間部および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメインまたはそのバリアント、部分もしくはフラグメントの少なくとも１つを含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、完全なＦｃドメイン（例えば、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメイン（またはその部分）に融合されたヒンジドメイン（またはその部分）を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメイン（またはその部分）に融合されたＣＨ２ドメイン（またはその部分）を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその部分からなる。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン（またはその部分）およびＣＨ３ドメイン（またはその部分）からなる。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメイン（またはその部分）およびＣＨ３ドメインからなる。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン（またはその部分）およびＣＨ２ドメイン（またはその部分）からなる。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメイン（例えば、ＣＨ２ドメインの全てまたは部分）の少なくとも一部を欠く。本明細書中のＦｃドメインは、通常、免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインの全てまたは部分を含むポリペプチドを指す。これには、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインの全体を含むポリペプチド、ならびに例えば、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインだけを含む、そのようなペプチドのフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃドメインは、任意の種および／または任意のサブタイプの免疫グロブリン（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体を含むがこれらに限定されない）に由来し得る。ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５７および表１（すなわち、配列番号１）に見出され得る。ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインは、表１（すなわち、配列番号２）に見出され得る。Ｆｃドメインは、天然のＦｃおよびＦｃバリアント分子を包含する。Ｆｃバリアントおよび天然のＦｃと同様に、Ｆｃドメインという用語は、全抗体から消化されたかまたは他の手段によって生成されたかに関係なく、モノマーまたは多量体の形態の分子を含む。Ｆｃドメインに対するアミノ酸残基番号の割り当ては、Ｋａｂａｔの定義に従う。例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｔａｂｌｅ ｏｆ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｓｅｃｔｉｏｎｓ），５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：ＮＩＨ ｖｏｌ．１：６４７−７２３（１９９１）；Ｋａｂａｔら、“Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ ｖｏｌ．ｌ：ｘｉｉｉ−ｘｃｖｉ（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３（１９８９）（これらの各々は、あらゆる目的のために参照により本明細書中に援用される）を参照のこと。
本明細書中に示されるように、任意のＦｃドメインが、天然に存在する免疫グロブリン分子の天然のＦｃドメインとアミノ酸配列の点で異なるように改変され得ることが、当業者によって理解されるだろう。ある特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、低下したエフェクター機能（例えば、ＦｃγＲへの結合）を有する。
本開示のポリペプチドのＦｃドメインは、種々の免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドのＦｃドメインは、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインならびにＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１分子に部分的に由来しかつＩｇＧ３分子に部分的に由来するキメラヒンジ領域を含み得る。別の例では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１分子に部分的に由来しかつＩｇＧ４分子に部分的に由来するキメラヒンジを含み得る。
本明細書中で使用されるとき、用語「ｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカー」とは、グリシンおよびセリン残基からなるペプチドを指す。例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３，すなわち、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４，すなわち、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。ある特定の実施形態では、ｎ＝７である。ある特定の実施形態では、ｎ＝８である。ある特定の実施形態では、ｎ＝９である。ある特定の実施形態では、ｎ＝１０である。別の例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。別の例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。
本明細書中で使用されるとき、「半減期」とは、ポリペプチドの血清中濃度または血漿中濃度が、インビボにおいて、例えば、分解および／もしくはクリアランスまたは天然の機構による隔離に起因して、５０％低下するのに要する時間のことを指す。本明細書中に開示される方法における使用に適したポリペプチド（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト）は、インビボにおいて安定化されており、その半減期は、例えば、Ｆｃ領域との融合、血清アルブミン（例えば、ＨＳＡまたはＭＳＡ）との融合、ＰＥＧ化、あるいは分解および／もしくはクリアランスまたは隔離に抵抗する血清アルブミン分子（例えば、ヒト血清アルブミン）との結合によって、向上される。半減期は、薬物動態解析などによる、本質的に公知の任意の様式で測定され得る。好適な手法は、当業者に明らかであり、例えば、一般に、好適な用量のアミノ酸配列または化合物を被験体に適切に投与する工程；血液サンプルまたは他のサンプルを前記被験体から一定間隔で回収する工程；前記血液サンプル中のそのアミノ酸配列または化合物のレベルまたは濃度を測定する工程；およびそのようにして得られたデータ（のプロット）から、そのアミノ酸配列または化合物のレベルまたは濃度が、投与されたときの最初のレベルと比べて５０％減少するまでの時間を計算する工程を含み得る。さらなる詳細は、例えば、標準的な手引き書、例えば、Ｋｅｎｎｅｔｈ，Ａ．ら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｆｏｒ ＰｈａｒｍａｃｉｓｔｓおよびＰｅｔｅｒｓら、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（１９９６）に提供されている。Ｇｉｂａｌｄｉ，Ｍ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，２ｎｄ Ｒｅｖ．Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（１９８２）も参照される。
ある特定の態様において、本明細書中に開示される方法における使用に適した、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上する部分を含むＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ポリペプチドリンカーなどの１つまたはそれを超える「リンカードメイン」を使用し得る。本明細書中で使用されるとき、用語「リンカー」または「リンカードメイン」とは、２つまたはそれを超えるドメイン（例えば、血清半減期を向上する部分およびＴＧＦ−β受容体タンパク質）を直鎖状の配列で接続する配列のことを指す。本明細書中で使用されるとき、用語「ポリペプチドリンカー」とは、２つまたはそれを超えるドメインをポリペプチド鎖の直鎖状のアミノ酸配列で接続するペプチドまたはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）のことを指す。例えば、ポリペプチドリンカーは、ＴＧＦ−β受容体タンパク質（例えば、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメイン）をＦｃドメインにつなぐために使用され得る。好ましくは、そのようなポリペプチドリンカーは、ポリペプチド分子に可撓性を提供し得る。ある特定の実施形態において、ポリペプチドリンカーは、１つまたはそれを超えるＦｃドメインおよび／ＴＧＦ−β受容体タンパク質（例えば、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメイン）をつなぐ（例えば、遺伝的に融合する）ために使用される。
本明細書中で使用されるとき、用語「異種抗体」は、そのような抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関して定義される。この用語は、そのトランスジェニック非ヒト動物からならない生物に見られる抗体に対応し、かつ通常はそのトランスジェニック非ヒト動物の種以外の種に由来する、アミノ酸配列またはコード核酸配列を有する抗体のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列の可変領域および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダムなもしくは部位特異的な突然変異誘発またはインビボにおける体細胞変異によって導入される変異）を含み得る。（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６−８５９）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９−１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３：６５−９３ならびにＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ７６４：５３６−５４６を参照のこと）。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体（すなわち、ヒト化抗体）を含まない。
本明細書中で使用されるとき、「免疫細胞」は、造血起源の細胞であって、免疫応答において役割を果たす細胞である。免疫細胞には、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞）、ナチュラルキラー細胞および骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球および顆粒球）が含まれる。
本明細書中で使用されるとき、用語「阻害する」または「遮断する」（例えば、細胞上でのＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との結合またはＴＧＦβＲＩＩへのＴＧＦ−β１の結合の阻害／遮断に対する言及）は、交換可能に使用され、部分的な阻害／遮断と完全な阻害／遮断の両方を包含する。ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５またはＴＧＦ−β１の阻害／遮断は、好ましくは、阻害または遮断なしでＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５またはＴＧＦ−β１の結合が生じたときに生じる活性の正常レベルまたはタイプを減少させるかまたは変化させる。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−β１の阻害／遮断は、ＴＧＦ−β１の隔離（例えば、ＴＧＦ−β受容体（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ）の細胞外ドメインの使用によるもの）によって達成され、それによって、その利用可能性、およびゆえに細胞上に存在するＴＧＦ−β受容体（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ）に結合する能力が妨げられる。
本明細書中で使用されるとき、用語「成長を阻害する」（例えば、細胞に対する言及）は、細胞の成長の任意の測定可能な減少、例えば、細胞の成長の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％または１００％の阻害を含むと意図されている。
用語「インビボ」とは、生存している生物において生じるプロセスのことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体のことを指すと意図されている（例えば、ヒトＣＤ１５５に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ１５５以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まず；ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する単離された抗体は、ＴＩＧＩＴ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。
本明細書中で使用されるとき、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）のことを指す。いくつかの実施形態において、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかの実施形態において、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
本明細書中で使用されるとき、用語「連結された」、「融合された」または「融合」は、交換可能に使用される。これらの用語は、化学的結合体化または組換え手段を含むどんな手段によるものであっても、２つまたはそれを超える（ｔｗｏ ｍｏｒｅ）エレメントまたは構成要素またはドメインが一体となることを指す。化学的結合体化（例えば、ヘテロ二官能性架橋剤を用いる）の方法は、当該分野で公知である。
用語「哺乳動物」または「被験体」または「患者」は、本明細書中で使用されるとき、ヒトと非ヒトの両方を含み、それらには、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ウシ、ウマおよびブタが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、用語「モノクローナル抗体」とは、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す抗体のことを指す。したがって、用語「ヒトモノクローナル抗体」とは、単一の結合特異性を示し、かつヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および随意の定常領域を有する、抗体のことを指す。いくつかの実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合された、ヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
本明細書中で使用されるとき、用語「核酸」とは、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドならびに一本鎖または二本鎖の形態のそれらのポリマーのことを指す。具体的に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、かつ天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される、天然のヌクレオチドの公知のアナログを含む核酸を包含する。別段示されない限り、特定の核酸配列は、その保存的に改変されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）および相補的な配列ならびに明示的に示される配列も暗に包含する。詳細には、縮重コドン置換は、１つまたはそれを超える選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作製することによって達成され得る。（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１，１９９１；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８，１９８５；およびＣａｓｓｏｌら、１９９２；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１−９８，１９９４）。アルギニンおよびロイシンの場合、２番目の塩基における改変も保存的であり得る。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、および遺伝子によってコードされるｍＲＮＡと交換可能に使用される。
本明細書中で使用されるポリヌクレオチドは、無修飾のＲＮＡもしくはＤＮＡまたは修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド（ｐｏｌｙｄｅｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）から構成され得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖および二本鎖のＤＮＡ、一本鎖および二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖であり得るか、より代表的には、二本鎖であり得るかまたは一本鎖および二本鎖の領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三重鎖の領域から構成され得る。ポリヌクレオチドは、１つまたはそれを超える修飾塩基、または安定性もしくは他の理由のために修飾されたＤＮＡ骨格もしくはＲＮＡ骨格も含み得る。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化された塩基およびイノシンなどの稀な塩基が挙げられる。種々の修飾が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ得る；ゆえに、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態を包含する。
本明細書中で使用されるとき、用語「過剰発現している」、「上昇している」および「増加している」とは、特定の標的（例えば、ＣＤ１５５またはＴＩＧＩＴ）のタンパク質または遺伝子の発現の相対的なレベルのことを指す。いくつかの実施形態において、用語「上昇した」は、用語「過剰発現している」、「増加した」および同様の用語と等価である。ある特定の実施形態において、がん細胞、腫瘍またはがん患者由来の他のサンプルにおける特定の標的のタンパク質または遺伝子の発現レベルは、それが、健康な（すなわち、がんではない）サンプルにおけるタンパク質または遺伝子の発現レベルと比較して高い場合、過剰発現されているか、上昇しているか、または増加していると考えられる。
２つまたはそれを超える核酸配列またはポリペプチド配列の文脈における用語「同一性パーセント」とは、２つまたはそれを超える配列または部分配列が、比較され、対応が最大になるようにアラインメントされたとき（下記に記載される配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＮ、または当業者が利用可能な他のアルゴリズム）の１つを用いてまたは目視検査によって測定されるとき）、特定のパーセンテージの同じヌクレオチドまたはアミノ酸残基を有する２つまたはそれを超える配列または部分配列のことを指す。用途に応じて、「同一性パーセント」は、比較されている配列のある領域にわたって、例えば、機能ドメインにわたって存在し得るか、あるいは、比較される２つの配列の全長にわたって存在し得る。配列を比較する場合、代表的には、１つの配列が、試験配列と比較される参照配列として働く。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験配列および参照配列がコンピュータに入力され、必要であれば部分配列の座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムのパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジーアラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）または目視検査（大まかにはＡｕｓｕｂｅｌら、下記を参照のこと）によって行われ得る。
配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントの測定に適したアルゴリズムの一例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載されているＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのウェブサイトを通じて公的に入手可能である。
本明細書中で広く使用されるとき、「薬学的に許容され得る」とは、適切な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応、または合理的なベネフィット／リスク比に相応する他の問題もしくは合併症を伴わない、人間および動物の組織、器官および／または体液との接触における使用に適した化合物、材料、組成物および／または剤形のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーのことを指すために交換可能に使用される。これらの用語は、１つまたはそれを超えるアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的模倣物、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーである、アミノ酸ポリマーにも当てはまる。
本明細書中で使用されるとき、用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製、発現、作製または単離されたすべてのヒト抗体（例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックもしくは染色体導入の動物（例えば、マウス）またはそれらから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）その抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む他の任意の手段によって調製、発現、作製または単離された抗体）を含む。そのような組換えヒト抗体は、生殖細胞系列遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列を使用している可変領域および定常領域を含むが、例えば、抗体が成熟していく間に生じる、その後の再配列および変異も含む。当該分野で公知であるように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７−１１２５を参照のこと）、可変領域は、再配列することにより外来抗原に特異的な抗体を形成する様々な遺伝子によってコードされる抗原結合ドメインを含む。再配列に加えて、可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を高めるために、複数の単一アミノ酸変化（体細胞変異または高頻度変異と称される）によってさらに改変され得る。定常領域は、抗原にさらに応答して変化し得る（すなわち、アイソタイプスイッチ）。ゆえに、抗原に応答して軽鎖免疫グロブリンポリペプチドおよび重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする再配列されたおよび体細胞変異した核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有しない可能性があるが、その代わり、実質的に同一または類似であり得る（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有し得る）。
本明細書中で使用されるとき、用語「血清半減期向上部分」または「血清半減期を向上する部分」とは、ある生物学的に活性な分子に融合されたとき、またはある生物学的に活性な分子とともに投与されたとき、その生物学的に活性な分子の循環半減期を長くするタンパク質、ペプチドまたは部分のことを指す。血清半減期向上部分の例としては、ＰＥＧ、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合剤（米国特許公開番号２００５／０２８７１５３および２００７／０００３５４９、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００９／０８３８０４およびＷＯ２００９／１３３２０８に開示されている、およびＵＳ２０１２／０９４９０９に記載されているようなＳＡＢＡ分子）、血清アルブミン（例えば、ＨＳＡ）、ＦｃまたはＦｃフラグメントおよびそれらのバリアント、トランスフェリンおよびそのバリアント、ならびに糖（例えば、シアル酸）が挙げられる。他の例示的な血清半減期向上部分は、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１１；２２：８６８−８７６（その全体が参照により本明細書中に援用される）に開示されている。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質が、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上する部分に連結または融合されている融合タンパク質である。例示的な融合タンパク質は、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインがＦｃドメインに連結されたＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃ融合物である。
用語「十分な量」または「〜するのに十分な量」は、所望の効果をもたらすのに十分な量、例えば、腫瘍のサイズを小さくするのに十分な量を意味する。
本明細書中で使用されるとき、２つまたはそれを超える個々の構成要素によってもたらされる効果に関する「相乗作用」または「相乗効果」とは、併用で用いられたとき、これらの構成要素によってもたらされる総合効果が、単独で作用する各構成要素の個々の効果の合計よりも大きい現象のことを指す。
用語「Ｔ細胞」とは、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のことを指す。Ｔ細胞という用語は、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞およびＴＨ１７細胞を包含する。
用語「Ｔ細胞の細胞傷害性」は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化によって媒介される任意の免疫応答を含む。例示的な免疫応答としては、サイトカインの産生、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、グランザイムまたはパーフォリンの産生、および感染性因子のクリアランスが挙げられる。
本明細書中で使用されるとき、用語「Ｔ細胞応答」とは、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）を含むＴ細胞の任意の応答のことを指す。Ｔ細胞応答としては、例えば、Ｔ細胞の増殖およびサイトカインの産生（例えば、ＩＬ−２およびＩＦＮγ）が挙げられる。
本明細書中で使用されるとき、用語「ＴＧＦ−β１アンタゴニスト」とは、ＴＧＦ−β受容体（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ）へのＴＧＦ−β１の結合を阻害することによって、シグナル伝達を妨げることができる分子のことを指す。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦ−β１に直接結合し、それによってＴＧＦ−β受容体との結合を妨げる。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、低分子、核酸またはポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストはＴＧＦ−β受容体「トラップ」であり、これは、ＴＧＦ−β１結合を中和するための可溶性ＴＧＦ−β受容体の使用を指す。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦβＲＩＩまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントの細胞外ドメインである。ある特定の実施形態では、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上する部分とを含む融合タンパク質である。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上する部分は、抗体のＦｃドメイン、ポリエチレングリコールまたは血清アルブミンである。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦβＲＩＩまたはそのＴＧＦ−β１−結合フラグメントの細胞外ドメインとＩｇＧ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストに融合されるＩｇＧ Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインであり、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ３ ＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインが挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦβＲＩＩまたはそのＴＧＦ−β１−結合フラグメントの細胞外ドメインと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、（ａ）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン、および（ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。
本明細書中で使用されるとき、用語「ＴＧＦ−β経路」とは、ＩＩ型ＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβＲＩＩ）に３つのリガンド（すなわち、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２またはＴＧＦ−β３）のうちの１つが結合することによって誘導されるシグナル伝達カスケードのことを指す。リガンドが結合すると、ＴＧＦβＲＩＩは、Ｉ型ＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβＲＩ）をリクルートし、次いで、その受容体はリン酸化される。ＴＧＦβＲＩのリン酸化は、受容体Ｓｍａｄ（Ｒ−Ｓｍａｄ）（例えば、Ｓｍａｄ−２およびＳｍａｄ−３）のリクルートメントをもたらし、次いで、その受容体は、Ｓｍａｄ−４に結合する。このＳｍａｄ複合体は、核内に移行し、転写因子として作用することによって、遺伝子発現を制御する。本明細書中で使用されるとき、用語「ＴＧＦ−βアンタゴニスト」とは、ＴＧＦ−β経路の任意の構成要素に結合することによってＴＧＦ−βシグナル伝達カスケードを阻害することができる分子のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「治療用抗体」とは、抗体、抗体のフラグメント、または抗体に由来する構築物のことを指し、標的細胞上の細胞表面抗原に結合して、治療効果を引き起こし得る。そのような抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体であり得る。そのような抗体を作製するための方法は、当該分野で公知である。そのような抗体としては、抗体の一本鎖Ｆｃフラグメント、ミニボディおよびダイアボディが挙げられる。がんの治療にとって有用な当該分野で公知の任意の治療用抗体が、本明細書中に開示される方法における使用に適した併用療法において使用され得る。治療用抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。好ましい実施形態において、治療用抗体は、がん抗原を標的化する。
用語「治療有効量」は、疾患の症候を回復させるのに有効な量である。予防が治療とみなされ得るとき、治療有効量は、「予防有効量」であり得る。
本明細書中で使用されるとき、用語「ＴＩＧＩＴ」または「ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」とは、ＣＤ１５５、ネクチン−２（ＣＤ１１２）およびネクチン−３（ＣＤ１１３）に結合する２４４アミノ酸の膜貫通タンパク質のことを指す。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用は、Ｔ細胞の活性化および増殖を負に制御する。
ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト
いくつかの態様において、本開示は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路のアンタゴニストをＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと併用して投与することによってがんを処置するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路は、下記に記載されるように、その経路における分子（すなわち、ＣＤ１５５またはＴＩＧＩＴ）を個々に標的化することによって、アンタゴナイズされる。
ＣＤ１５５
ＣＤ１５５は、ネクチン様タンパク質５（Ｎｅｃｌ−５）、Ｔａｇｅ４、ＨＶＥＤおよびＰＶＳとしても知られ、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）として初めて同定された。ＣＤ１５５は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、３つの細胞外免疫グロブリン様ドメインを有する膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ１５５は、樹状細胞（ＤＣ）上、ＦＤＣ上、線維芽細胞上、内皮細胞上およびいくつかの腫瘍細胞上に高度に発現される。さらに、ＣＤ１５５は、上皮細胞間の細胞間アドヘレンスジャンクションの形成において役割を果たす。（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５１５１；ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：５８１７；ＵＳ２０１３／０２５１７２０；Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ：１０５（４７）：１８２８４−１８２８９，２００８；およびＭａｉｅｒら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ：３７：２２１４−２２２５，２００７を参照のこと）。
ＣＤ１５５は、ネクチン−３とｔｒａｎｓ−ヘテロ二量体を形成することができる。ＣＤ１５５の細胞外ドメインは、ＣＤ２２６、ＣＤ９６と相互作用し、ＴＩＧＩＴに高親和性で結合する。ＣＤ１５５の細胞外ドメインは、細胞外マトリックス分子であるビトロネクチンへの細胞接着も媒介し、細胞内ドメインは、ダイニン軽鎖Ｔｃｔｅｘ−１／ＤＹＮＬＴ１と相互作用する（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５１５１およびＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：５８１７を参照のこと）。
ＣＤ１５５は、移動している細胞の前縁においてインテグリンαｖβ３と共局在し、成長因子によって誘導される細胞の移動および増殖を増強する。しかしながら、細胞と細胞との接触の際、ＣＤ１５５は、細胞接着分子であるネクチン−３とのｔｒａｎｓ−相互作用によって細胞表面から除去され、それにより、移動および増殖が減少する（Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，Ｖｏｌ．２７：２６４−２７３，２００８を参照のこと）。
ＣＤ１５５ポリペプチドは、例えば、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ．５８１７によって代表されるヒト遺伝子によってコードされる任意のペプチド（例えば、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿００６４９６によって記載された配列を有するポリペプチド）であり得る。
ＣＤ１５５は、胚発生中に発現され、がんと関連する。腫瘍細胞の浸潤および遊走を示す様々なタイプの腫瘍細胞および原発腫瘍が、ＣＤ１５５を発現または過剰発現している；例えば、***、直腸結腸癌腫、肺腺癌、気管支路（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｐａｓｓａｇｅ）、胃腸管、上気道および泌尿生殖器（ｇｅｎｉｔｏｒ−ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔｓ）の上皮層、肝臓、前立腺、メラノーマならびに脳。下記の実施例１および図３に記載されているように、ＣＤ１５５のｍＲＮＡは、直腸結腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、子宮頸がん、胃がん、非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）および膵がんにおいて発現された。興味深いことに、ＣＤ１５５は、解析されたすべてのがんにおいて、ＰＤ−Ｌ１よりも（ｔｈａｔ）高度に発現された。ＣＤ１５５は、いくつかのがん細胞株によっても発現された（下記の実施例１および図４を参照のこと）。
ＣＤ１５５は、免疫応答において機能するとも考えられている。例えば、ＣＤ１５５は、２つのＮＫ細胞受容体であるＣＤ９６およびＣＤ２２６に結合し、ＮＫ細胞の接着において役割を果たし、ＮＫ細胞のエフェクター機能を引き起こすと考えられている（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５１５１を参照のこと）。
さらに、ＣＤ１５５とＴＩＧＩＴ（Ｔ細胞ＩｇおよびＩＴＩＭドメイン）との間の相互作用は、メラノーマにおいて免疫抑制性の機構を引き起こす。ＴＩＧＩＴは、活性化Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現され、ＣＤ１５５への結合についてＣＤ２２６と競合する。特に、ＣＤ２２６は、活性化シグナルをＴ細胞に伝えるが；対照的に、ＴＩＧＩＴは、免疫抑制性の作用を有する。ＣＤ１５５の遮断は、この相互作用の免疫抑制性の作用を少なくとも部分的に逆転させ得る。例えば、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴシグナル伝達を遮断すると、細胞傷害性Ｔ細胞のエフェクター機能が高まり得る。したがって、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用は、少なくとも部分的に、Ｔ細胞の活性化および増殖を負に制御し得る（例えば、Ｍａｈｎｋｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３６：９−１１，２０１６；およびＵＳ２０１３／０２５１７２０を参照のこと）。図１は、抗ＣＤ１５５抗体によるＣＤ１５５の遮断によって、免疫応答が誘導されることの概略図を示している。
本開示は、被験体においてがん細胞に対する免疫応答を誘導または増強するための、ＴＩＧＩＴを介したＣＤ１５５シグナル伝達を阻害または遮断するＣＤ１５５アンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメント）のＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせた使用を提供する。本開示の一部の態様では、ＣＤ１５５アンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストとともに投与されて、疾患の進行を遅延させ、再発またはがんの進行を低減または阻害し、腫瘍免疫の進行を処置または遅延させ；かつ／またはがん患者における免疫応答または機能を増大、増強または刺激する。一部の実施形態では、ＣＤ１５５アンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせて投与されて患者におけるがん特異的Ｔ細胞応答を誘起または増強する。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせたＣＤ１５５アンタゴニストは、抗がん剤および／または抗がん療法の効果を増強し得る。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせたＣＤ１５５アンタゴニストは、ＮＫ細胞の抗がん機能を促進し得る。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせたＣＤ１５５アンタゴニストは、がん患者における免疫応答または機能を増大、増強または刺激し得る。
本開示のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ１５５抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体もしくはヒト化抗体、二重特異性抗体またはヘテロ結合体抗体であり得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５アンタゴニストは、別の作用物質とともに使用され得る。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１５５抗体は、ＳＫＩＩ．４またはＤ１７１である（例えば、米国特許第６，５１８，０３３号を参照のこと）。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１５５抗体は、ＣＤ１５５とＴＩＧＩＴとの結合を阻害する。
ＣＤ１５５に結合する抗体、ならびにそれを作製する方法および使用する方法は、ＵＳ２０１４／０５６８９０およびＵＳ６，５１８，０３３（これらの全内容が、参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
ＴＩＧＩＴ
ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）は、ＷＵＣＡＭ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ細胞接着分子）、Ｖｓｔｍ３（Ｖ−ｓｅｔおよび膜貫通ドメイン含有タンパク質３）、Ｖｓｉｇ９（Ｖ−ｓｅｔおよび免疫グロブリンドメイン含有タンパク質９）およびＰＲＯ５２２５４としても知られ、２４４アミノ酸の膜貫通タンパク質である。ＴＩＧＩＴは、ＩｇＶドメイン、膜貫通ドメインおよび２つの推定の免疫受容体チロシン阻害性モチーフを有する、細胞表面に結合したタンパク質として同定された。ＴＩＧＩＴは、種々の活性化Ｔ細胞（制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、メモリーＴ細胞および濾胞性Ｂ細胞ヘルパーＴ細胞（Ｔｆｈ））およびＮＫ細胞によって発現される免疫受容体として機能する。特に、ＴＩＧＩＴは、活性化されたＴｒｅｇによって高度に発現される。さらに、ＴＩＧＩＴの発現は、正常な対照組織と比べて、関節炎、乾癬、炎症性腸障害および乳がん組織において増加すると示されている（例えば、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：２０１６３３、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ４９５Ａ１、ＵＳ２００４／０１２１３７０、ＵＳ２０１３／０２５１７２０を参照のこと）。
ＴＩＧＨＴポリペプチドは、例えば、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ．２０１６３３によって代表されるヒト遺伝子によってコードされる任意のペプチド（例えば、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿７７６１６０によって記載された配列を有するポリペプチド）であり得る。
ＴＩＧＩＴは、ＣＤ１５５、ネクチン−２（ＣＤ１１２）およびネクチン−３（ＣＤ１１３）に結合し、ＣＤ１５５およびＣＤ１１２との結合についてそれぞれＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１）およびＣＤ９６と競合する。ＴＩＧＩＴは、高親和性でＣＤ１５５に結合し、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６相互作用の遮断において、ＣＤ２２６がＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用を遮断するよりも効果的である。とりわけ、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６とは、Ｔ細胞に対して逆の作用を有する。特に、ＴＩＧＩＴは、抑制活性を有すると示されているのに対して、ＣＤ２２６は、活性化シグナルをＴ細胞に伝える。さらに、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用は、Ｔ細胞の活性化および増殖を負に制御すると示されている（例えば、Ｍａｈｎｋｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３６：９−１１，２０１６；ＵＳ２０１３／０２５１７２０を参照のこと）。
ＣＤ１５５とＣＤ２２６との相互作用が、腫瘍細胞の破壊を増強し得ることが示唆されている。しかしながら、ＣＤ１５５に対するＴＩＧＩＴの高親和性は、この応答を妨げ得る。したがって、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５阻害性相互作用は、抗自己免疫応答の抑制において機能し得るが、腫瘍の破壊も抑制し得る（ＷＯ２０１６／１０６３０２を参照のこと）。
証拠から、ＴＩＧＩＴが、成熟した免疫調節性樹状細胞の産生を促進することによって、Ｔ細胞の活性化を抑制することも示唆されている。さらに、ＴＩＧＩＴならびに他の共阻害分子（例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、Ｌａｇ３およびＢＴＬＡ）は、腫瘍細胞による免疫学的監視の回避において機能し得る。この点において、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用は、ＴおよびＮＫ細胞の抗腫瘍応答を阻害することによって、免疫によって媒介される破壊から腫瘍細胞を保護し得る（ＷＯ２０１６／１０６３０２を参照のこと）。
樹状細胞（ＤＣ）上でのＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との相互作用は、ＤＣの機能、特に、サイトカイン放出を調節すると考えられている。例えば、ＴＩＧＩＴに結合したヒトＤＣは、高レベルのＩＬ−１０、ならびにより低いレベルの炎症促進性サイトカインおよび他のサイトカイン（例えば、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、ＩＬ−１８およびＩＦＮγ）を分泌する。さらに、ＴＩＧＩＴは、ＤＣにおいて、ＩＬ−１０の誘導を介した阻害性フィードバックループを通じてＴ細胞の活性化を阻害すると考えられている（ＵＳ２０１３／０２５１７２０を参照のこと）。
本開示は、被験体においてがん細胞に対する免疫応答を誘導または増強するための、ＴＩＧＩＴシグナル伝達を阻害または遮断するＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメント）のＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせた使用を提供する。本開示の一部の態様では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストとともに投与されて、疾患の進行を遅延させ、再発またはがんの進行を低減または阻害し、腫瘍免疫の進行を処置または遅延させ；かつ／またはがん患者における免疫応答または機能を増大、増強または刺激する。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせて投与されて患者におけるがん特異的Ｔ細胞応答を誘起または増強する。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせたＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗がん剤および／または抗がん療法の効果を増強し得る。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせたＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＮＫ細胞の抗がん機能を促進し得る。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β経路のアンタゴニストと組み合わせたＴＩＧＩＴアンタゴニストは、がん患者における免疫応答または機能を増大、増強または刺激し得る。
本開示のいくつかの実施形態において、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体もしくはヒト化抗体、二重特異性抗体およびヘテロ結合体抗体であり得る。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、別の作用物質とともに使用され得る。ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体および抗体フラグメントの作製、ならびに例えば、がんまたはウイルス感染の処置において、これらの抗体を使用する方法は、ＵＳ２００４／０１２１３７０、ＷＯ２０１５／００９８５６、ＷＯ２０１６／０１１２６４、ＷＯ２０１６／１０６３０２およびＷＯ２０１６／０２８６５６に記載されている。ＵＳ２００４／０１２１３７０、ＷＯ２０１５／００９８５６、ＷＯ２０１６／０１１２６４、ＷＯ２０１６／１０６３０２およびＷＯ２０１６／０２８６５６の全内容は、その全体が参考として本明細書に援用される。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、例えば、そのそれぞれの開示の全体が参考として本明細書に援用されるＷＯ２０１５／００９８５６、ＷＯ２０１６／０１１２６４、ＷＯ２０１６／０２８６５６およびＷＯ２０１６／１０６３０２に記載されるような１０Ａ７、１Ｆ４、１４Ａ６、２８Ｈ５、３１Ｃ６、１５Ａ６、２２Ｇ２、１１Ｇ１１、１０Ｄ７、ＭＢＳＡ４３またはそのヒト化バージョンである。
いくつかの実施形態において、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、細胞表面に発現されたＣＤ１５５へのＴＩＧＩＴの結合を阻害する。例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、異なるＴＩＧＩＴエピトープに結合すると観察された１０Ａ７または１ＦＡであり得る。抗体１０Ａ７および１ＦＡは、ＷＯ２０１５／００９８５６、ＷＯ２０１６／０１１２６４、ＵＳ２０１３／０２５１７２０（これらの全内容が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
ＴＩＧＩＴの結合パートナー、ならびに組成物、検出方法、およびそれらの結合パートナーとＴＩＧＩＴとの相互作用によって調節される免疫障害の処置方法、ならびにＴ細胞の成熟および活性に対するＴＩＧＩＴの作用が、ＵＳ２０１３／０２５１７２０（その全内容が参照により本明細書に援用される）において論じられている。
大腸菌、哺乳動物細胞、酵母およびバキュロウイルスに感染した昆虫細胞においてＴＩＧＩＴを発現させるための方法、ならびにＴＩＧＩＴに結合する抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル）を調製するための方法、および抗ＴＩＧＩＴ抗体を用いてＴＩＧＩＴを精製するための方法が、ＵＳ２００４／０１２１３７０に記載されている。ＵＳ２００４／０１２１３７０の全内容が、参照により本明細書中に援用される。
ＴＧＦ−β拮抗作用
腫瘍形成におけるＴＧＦ−βの役割は、複雑である。臨床データおよびマウスモデルデータは、ＴＧＦ−β系が、腫瘍抑制因子経路として機能し得ることを示しており、ゆえに、ＴＧＦ−β受容体または下流のシグナル伝達の構成要素の減少または喪失が、多くのヒト腫瘍において見られる。しかしながら、末期のヒト腫瘍は、転移の増加および予後不良に関連するＴＧＦ−β発現の矛盾した増加を頻繁に示す。（例えば、Ｎｅｕｚｉｌｌｅｔ，Ｃ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｔｕｉｃｓ，Ｖｏｌ．１４７：２２−３１，２０１５；Ｉｋｕｓｈｉｍａ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．１０：４１５−４２４，２０１０；Ｐｉｃｋｕｐ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．１３：７８８−７９９，２０１３を参照のこと）。
ＴＧＦ−βシグナル伝達経路は、３つの主要なリガンド（すなわち、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３）および２つのセリン／トレオニンキナーゼ受容体（すなわち、ＴＧＦ−β受容体Ｉ（ＴＧＦβＲＩ）およびＴＧＦ−β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ））からなる。この経路は、細胞外ドメインに２つのＴＧＦ−β結合部位を有する３型受容体（ＴＧＦβＲＩＩＩ；すなわち、ベータグリカン）からもなる。ＴＧＦβＲＩＩは、３つすべてのＴＧＦ−βリガンドに対する特異的受容体である。このリガンドとＴＧＦβＲＩＩとの結合によって、ＴＧＦβＲＩとのヘテロ四量体複合体が形成され、ここで、ＴＧＦβＲＩＩは、ＴＧＦβＲＩをリン酸化する。リン酸化されたＴＧＦβＲＩは、Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３などの受容体Ｓｍａｄ（Ｒ−Ｓｍａｄ）をリクルートし、リン酸化する。これらの活性化されたＲ−Ｓｍａｄは、Ｓｍａｄ４と複合体を形成し、その複合体は、核に移動して転写因子として作用する。
ＴＧＦ−β経路の様々な構成要素のいくつかの阻害剤が、企図され、開発された。（Ｋｏｒｐａｌ，Ｍ．およびＫａｎｇ Ｙ．，２０１０ Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４６，１２３２−１２４０；Ｂｏｎａｆｏｕｘ，Ｄ．およびＷｅｎ−Ｃｈｅｒｎｇ，Ｌ．，２００９ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔｅｎｔｓ １９，１７５９−１７６９；Ｐｒｕｄｈｏｍｍｅ，Ｇ．Ｊ．，２００７ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ８７，１０７７−１０９１）。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−β経路の阻害は、リガンドの合成、リガンド−受容体相互作用またはシグナル伝達を遮断することによって達成される。これらのアンタゴニストは、３つの主なクラスに分類される：（ａ）モノクローナルＴＧＦ−β中和抗体および可溶性受容体（その融合物およびペプチドを含む）を含むリガンドトラップ；（ｂ）アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、リボザイム、低分子阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、Ｓｍａｄ６またはＳｍａｄ７を含む核酸ベースの治療；および（ｃ）例えば、ＴＧＦ−β１を遮断することによって、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する低分子。ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害することができる例示的な作用物質は、公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０１５／１４０１５０、例えば、表１、および米国特許第８，８００，９０６Ｂ２号（この各々の内容が参照により本明細書中に援用される）に開示されている。
ＴＧＦ−β経路の阻害は、がんの治療法に対する実行可能な選択肢であるが、がん患者における免疫応答をさらに調節する併用療法を特定する必要がまだ残っている。
いくつかの態様において、本開示は、がんを処置するためのＴＧＦ−βアンタゴニストとＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストとの併用を提供する。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路を阻害することができる作用物質である。他の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路の構成要素に結合することができる作用物質である。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１に結合する。
Ａ．ＴＧＦ−βトラップ
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−βの１つまたはそれを超えるアイソフォームを機能的に中和するペプチド部分である。ある特定の実施形態において、そのペプチド部分は、ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインを含むＴＧＦ−β隔離トラップ、または１つもしくはそれを超えるＴＧＦ−βアイソフォームに特異的に結合し、それを機能的に中和する操作されたポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−β１は、免疫制御の重要なメディエーターであり、それとがん進行との関連が十分に実証されているので、中和されるＴＧＦ−βアイソフォームは、ＴＧＦ−β１である。ゆえに、下記に記載されるＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１を特異的に標的化するアンタゴニストを包含する。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β隔離トラップは、２型ＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβＲＩＩ）の細胞外ドメインを含み、１つまたは複数のＴＧＦ−βアイソフォームを機能的に中和する。一部の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態である。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β受容体タンパク質は、２型ＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβＲＩＩ）の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１−結合フラグメントである。一部の実施形態では、ＴＧＦ−β受容体タンパク質は、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインに対応する配列番号５に示されるアミノ酸配列（アミノ酸Ｔｈｒ２３−Ａｓｐ１５９）を含む。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ＴＧＦ−βアンタゴニストの血清半減期を向上する部分とを含む融合タンパク質である。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストの血清半減期を向上する部分は、ポリエチレングリコール、抗体のＦｃ部分またはアルブミンタンパク質である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、２型ＴＧＦ−β受容体またはそのＴＧＦ−β−結合フラグメントの細胞外ドメインと、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、（ａ）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン、および（ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む。
ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、Ｚｗａａｇｓｔｒａら（Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ；１１（７）：１４７７−８７，２０１２）によって記載されたような二価のＴＧＦ−βトラップである。詳細には、１つの受容体外部ドメイン由来のＣ末端の不規則領域を、第２の外部ドメインのＮ末端の不規則領域に融合することによって「天然配列」の可動性リンカーを用いるトラップが、本開示において使用される。
いくつかの実施形態において、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン（またはそのＴＧＦ−β１結合フラグメント）を含むＴＧＦ−βアンタゴニストは、二量体である。そのような部分の二量体化は、アビディティーによる親和性の増大によって阻害性の効力を高めると示された。例えば、Ｄｅ Ｃｒｅｓｃｅｎｚｏら（２００４）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９（２５）：２６０１３−２６０１８（この開示はその全体が参照により本明細書中に援用される）を参照のこと。当業者は、そのような部分が多量体化され得る数多くの方法（例えば、二量体化ドメイン（例えば、上に記載されたような免疫グロブリンＦｃドメイン）との融合、発現後の架橋などであるがこれらに限定されない）を認識するだろう。二量体化ドメインは、別の二量体化ドメインと会合または結合できるアミノ酸配列である。その会合または結合は、共有結合性または非共有結合性であり得る。また、ホモ二量体（同じ配列との二量体）またはヘテロ二量体（別の配列との二量体）を形成することができる２つのタイプの二量体が存在する。いくつかの実施形態において、二量体化ドメインは、ロイシンジッパーコイルドコイルポリペプチドである。ロイシンジッパーは、通常、特徴的な７残基リピート（そのリピートの１番目および４番目の残基に疎水性残基を有する）を含む約３５アミノ酸を含む（Ｈａｒｂｕｒｙら（１９９３），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２：１４０１）。したがって、ロイシンジッパーは、低分子であり、より大きな相互作用ドメインよりもポリペプチドの正常な機能を妨害する可能性が低いので、ポリペプチドをオリゴマー化する目的でポリペプチドと融合するのに適している。ロイシンジッパーの例としては、ＧＣＮ４、Ｃ／ＥＢＰ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃおよびｃ−Ｍａｘなどのポリペプチド由来のロイシンジッパードメインが挙げられるが、これらに限定されない。
二量体化ドメインのさらなる例としては、ヘリックス−ループ−ヘリックスドメインが挙げられる（Ｍｕｒｒｅら（１９８９），Ｃｅｌｌ ５８：５３７−５４４）。レチノイン酸受容体、甲状腺ホルモン受容体、他の核内ホルモン受容体（Ｋｕｒｏｋａｗａら（１９９３），Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．７：１４２３−１４３５）ならびに酵母転写因子であるＧＡＬ４およびＨＡＰ１（Ｍａｒｍｏｎｓｔｅｉｎら（１９９２），Ｎａｔｕｒｅ ３５６：４０８−４１４；Ｚｈａｎｇら（１９９３），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２８５１−２８５５；米国特許第５，６２４，８１８号）のすべてが、このモチーフを含む二量体化ドメインを有する。
いくつかの実施形態において、２つのタンパク質の間の会合または結合は、二量体化ドメインに非アミノ酸分子が結合することによって促進され得る。例えば、１つの二量体化ドメインに付着したアビジン分子および別の二量体化ドメインに付着したビオチン分子は、アビジン−ビオチン架橋を形成し得るので、これらの２つのドメインの二量体化を促進する。
２つのタンパク質が、いくつかの公知の化学的架橋剤のうちのいずれかを用いて架橋され得る。そのような架橋剤の例は、「ヒンダード」ジスルフィド結合を含む結合を介して２つのアミノ酸残基を連結する架橋剤である。これらの結合では、その架橋単位内のジスルフィド結合は、例えば還元型グルタチオンの作用またはジスルフィドレダクターゼ酵素の作用による還元から（ジスルフィド結合のいずれかの側における基を妨げることによって）保護される。好適な試薬の１つである４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、一方のタンパク質上の末端のリジンおよび他方上の末端のシステインを利用して、２つのタンパク質の間にそのような結合を形成する。各タンパク質上の異なるカップリング部分によって架橋するヘテロ二官能性試薬も使用され得る。他の有用な架橋剤としては、２つのアミノ基を連結する試薬（例えば、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド）、２つのスルフヒドリル基を連結する試薬（例えば、１，４−ビス−マレイミドブタン）、アミノ基とスルフヒドリル基とを連結する試薬（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基とカルボキシル基とを連結する試薬（例えば、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、およびアミノ基とアルギニンの側鎖に存在するグアニジニウム基とを連結する試薬（例えば、ｐ−アジドフェニルグリオキサール一水和物）が挙げられるがこれらに限定されない。好ましくは、２つのタンパク質の架橋は、それらのタンパク質の機能（例えば、アンタゴニスト機能）を干渉しないか、または有意に干渉しない。当業者は、本明細書中に記載されるタンパク質結合研究（例えば、ＴＧＦ−β１：ＴＧＦ−βトラップ結合方法）および実施例において例証される機能的研究を含む、架橋されたタンパク質（例えば、架橋されたＴＧＦ−βアンタゴニスト）の活性を評価する方法を十分承知している。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、参照により本明細書中に援用される公開された米国特許出願２０１５／００４５２９９に記載されているような、ＴＧＦβＲＩＩＩのエンドグリンドメインのＮ末端およびＣ末端に連結されたＴＧＦβＲＩＩの外部ドメインを含むヘテロ三量体の融合トラップである。
１．血清半減期向上部分
上に記載されたように、ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ＴＧＦ−βアンタゴニストの血清半減期を向上する部分に融合される。血清半減期向上部分の非限定的な例は、下記に記載される。ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の循環半減期を向上する他の部分も、本開示に適用可能であることが理解されるべきである。ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、抗体のＦｃドメイン（例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン）である。
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分に融合されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期は、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のみ（すなわち、血清半減期向上部分に融合されていないもの）と比べて増大される。ある特定の実施形態では、血清半減期向上部分と融合されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期は、単独のＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期と比べて少なくとも２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１５０、１８０、２００、４００、６００、８００または１０００％長い。ある特定の実施形態では、血清半減期向上部分と融合されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期は、単独のＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期より少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、１０倍、１２倍、１３倍、１５倍、１７倍、２０倍、２２倍、２５倍、２７倍、３０倍、３５倍、４０倍または５０倍大きい。ある特定の実施形態では、血清半減期向上部分と融合されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期は、少なくとも１０時間、１５時間、２０時間、２５時間、３０時間、３５時間、４０時間、５０時間、６０時間、７０時間、８０時間、９０時間、１００時間、１１０時間、１２０時間、１３０時間、１３５時間、１４０時間、１５０時間、１６０時間または２００時間である。
Ｆｃドメイン
ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、Ｆｃドメイン（例えば、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有するもの）を含む。そのＦｃドメインは、抗原に結合する可変領域を含まない。本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の作製に有用なＦｃドメインは、いくつかの異なる起源から入手され得る。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のＦｃドメインは、ヒト免疫グロブリンに由来する。ある特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号１）に由来する。ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインは、配列番号２に示されている。しかしながら、Ｆｃドメインは、別の哺乳動物種（例えば、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）または非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む）の免疫グロブリンに由来してもよいことが理解される。さらに、Ｆｃドメインまたはその一部は、任意の免疫グロブリンクラス（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む）および任意の免疫グロブリンアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）に由来し得る。
いくつかの態様において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、変異体Ｆｃドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、変異体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。いくつかの態様において、変異体Ｆｃドメインは、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインの中に１つまたはそれを超える変異を含む。いくつかの態様において、変異体Ｆｃドメインは、Ｄ２６５Ａ変異を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）において使用されるＦｃドメインは、例えば、アミノ酸の変異（例えば、付加、欠失または置換）によって変更または改変される。本明細書中で使用されるとき、用語「Ｆｃドメインバリアント」とは、Ｆｃドメインが由来する野生型Ｆｃと比べて、少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、アミノ酸置換）を有するＦｃドメインのことを指す。例えば、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１抗体に由来し、バリアントは、そのヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の対応する位置に野生型アミノ酸と比べて少なくとも１つのアミノ酸変異（例えば、置換）を含む。例示的な変異は、公開米国特許出願２００６／０２３５２０８、２００３／０１０８５４８、ＵＳ２００７／０１１１２８１；米国特許第５，６２４，８２１号；および国際ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／０６３８１５、ＷＯ２００５／０１８５７２に開示されており、それぞれの文献はその全体が参考として本明細書に援用される。
ＰＥＧ化
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ドメインを含む。ＰＥＧ化は、タンパク質に循環半減期の向上をもたらすと当該分野で周知である。ＰＥＧ化の方法は、周知であり、例えば、ＵＳ７，６１０，１５６、ＵＳ７，８４７，０６２（これらのすべてが参照により本明細書に援用される）に開示されている。
ＰＥＧは、商業的に入手可能であるかまたは当該分野で周知の方法（Ｓａｎｄｌｅｒ ａｎｄ Ｋａｒｏ，Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｖｏｌ．３，ｐａｇｅｓ １３８−１６１）に従ってエチレングリコールの開環重合によって調製され得る周知の水溶性ポリマーである。用語「ＰＥＧ」は、サイズまたはＰＥＧの末端における修飾を問わず、任意のポリエチレングリコール分子を包含するために広く使用され、式：Ｘ−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−１ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（式中、ｎは、２０〜２３００であり、Ｘは、Ｈまたは末端修飾、例えば、Ｃ１−４アルキルである）によって表され得る。ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＰＥＧは、片方の末端がヒドロキシまたはメトキシで終結し、すなわち、Ｘが、ＨまたはＣＨ３である（「メトキシＰＥＧ」）。ＰＥＧは、結合反応に必要なさらなる化学基を含み得る；それは、その分子の化学合成に起因するか；またはその分子の部分の最適な距離のためのスペーサーである。さらに、そのようなＰＥＧは、共に連結される１つまたはそれを超えるＰＥＧ側鎖からなり得る。１本より多いＰＥＧ鎖を有するＰＥＧは、マルチアームＰＥＧまたは分岐ＰＥＧと呼ばれる。分岐ＰＥＧは、例えば、グリセロール、ペンタエリトリオールおよびソルビトールを含む様々なポリオールにポリエチレンオキシドを付加することによって調製され得る。例えば、４アーム分岐ＰＥＧは、ペンタエリトリオールおよびエチレンオキシドから調製され得る。分岐ＰＥＧは、例えば、ＥＰ−Ａ０４７３０８４およびＵＳ５，９３２，４６２（この両方が参照により本明細書に援用される）に記載されている。ＰＥＧの１つの形態は、リジンの第１級アミノ基を介して連結された２本のＰＥＧ側鎖を含む（ＰＥＧ２）（Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １９９５；６：６２−９）。
他の血清半減期向上部分
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、血清アルブミンまたはそのフラグメントである。血清アルブミンをタンパク質に融合する方法は、例えば、ＵＳ２０１０／０１４４５９９、ＵＳ２００７／００４８２８２およびＵＳ２０１１／００２０３４５（これらはその全体が参照により本明細書中に援用される）に開示されている。ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはそのバリアントもしくはフラグメントであり、例えば、ＵＳ５，８７６，９６９、ＷＯ２０１１／１２４７１８、ＷＯ２０１３／０７５０６６およびＷＯ２０１１／０５１４７８９に開示されているものである。
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、その全体が参照により本明細書に援用されるＵＳ２００５／０２８７１５３、ＵＳ２００７／０００３５４９、ＵＳ２００７／０１７８０８２、ＵＳ２００７／０２６９４２２、ＵＳ２０１０／０１１３３３９、ＷＯ２００９／０８３８０４およびＷＯ２００９／１３３２０８に記載されるものなどの血清アルブミン結合タンパク質である。
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、ＵＳ７，１７６，２７８およびＵＳ８，１５８，５７９（これらはその全体が参照により本明細書中に援用される）に開示されているようなトランスフェリンである。
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、血清免疫グロブリン結合タンパク質であり、例えば、ＵＳ２００７／０１７８０８２（その全体が参照により本明細書中に援用される）に開示されているものである。
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、血清アルブミンに結合する、フィブロネクチン（Ｆｎ）に基づく骨格ドメインタンパク質であり、例えば、ＵＳ２０１２／００９４９０９（その全体が参照により本明細書中に援用される）に開示されているものである。ＵＳ２０１２／００９４９０９には、フィブロネクチンに基づく骨格ドメインタンパク質を作製する方法も開示されている。Ｆｎ３に基づく向上ＰＫ基の非限定的な例は、Ｆｎ３（ＨＳＡ）、すなわち、ヒト血清アルブミンに結合するＦｎ３タンパク質である。
２．ＴＧＦ−βトラップを作製する方法
本明細書中に記載される方法において使用するためのＴＧＦ−βアンタゴニスト分子を作製するための方法も、本開示に提供される。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインと、そのアンタゴニストの血清半減期を向上する部分とを含む融合タンパク質である。
Ｆｃドメイン
ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清半減期を向上する部分は、Ｆｃドメインである。種々のＦｃドメイン遺伝子配列（例えば、マウスおよびヒトの定常領域遺伝子配列）が、公的にアクセス可能な寄託物の形態で入手可能である。特定のエフェクター機能を欠き、かつ／または免疫原性を低下させる特定の修飾を有する、Ｆｃドメイン配列を含む定常領域ドメインが、選択され得る。抗体および抗体をコードする遺伝子の多くの配列は、公開されており、好適なＦｃドメイン配列（例えば、ヒンジ、ＣＨ２および／もしくはＣＨ３配列またはそれらの一部）は、当該分野において認められている手法を用いてこれらの配列から得ることができる。次いで、前述の方法のいずれかを用いて得られた遺伝物質は、本明細書中に開示される方法における使用に適したポリペプチドを得るために、変更または合成され得る。本発明の範囲は、定常領域のＤＮＡ配列の対立遺伝子、バリアントおよび変異を包含することがさらに認識されるだろう。
Ｆｃドメイン配列は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応および目的のドメインを増幅するために選択されたプライマーを用いて、クローニングされ得る。抗体からＦｃドメイン配列をクローニングするために、ｍＲＮＡが、ハイブリドーマ、脾臓細胞またはリンパ球から単離され、ＤＮＡに逆転写され、抗体遺伝子がＰＣＲによって増幅され得る。ＰＣＲ増幅法は、米国特許第４，６８３，１９５号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８００，１５９号；同第４，９６５，１８８号；および例えば、“ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”Ｉｎｎｉｓら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）；Ｈｏら、１９８９．Ｇｅｎｅ ７７：５１；Ｈｏｒｔｏｎら、１９９３．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２７０）に詳細に記載されている。ＰＣＲは、コンセンサス定常領域プライマー、または公開されている重鎖ＤＮＡ配列および軽鎖ＤＮＡ配列ならびに重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列に基づくより特異的なプライマーによって開始され得る。上で論じられたように、ＰＣＲは、抗体の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡクローンを単離するためにも使用され得る。この場合、コンセンサスプライマーまたはより大きな相同性プローブ（例えば、マウス定常領域プローブ）によってライブラリーがスクリーニングされ得る。抗体遺伝子の増幅に適した数多くのプライマーセットが、当該分野で公知である（例えば、精製された抗体のＮ末端配列に基づく５’プライマー（Ｂｅｎｈａｒ ａｎｄ Ｐａｓｔａｎ．１９９４．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：１５０９）；ｃＤＮＡ末端の迅速な増幅（Ｒｕｂｅｒｔｉ，Ｆ．ら、１９９４．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １７３：３３）；抗体リーダー配列（Ｌａｒｒｉｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １９８９；１６０：１２５０））。抗体配列のクローニングは、さらに、１９９５年１月２５日に出願されたＮｅｗｍａｎらの米国特許第５，６５８，５７０号（参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、１つまたは複数のＦｃドメイン（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多くのＦｃドメイン）を含み得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは異なる種類であり得る。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）に存在する少なくとも１つのＦｃドメインは、ヒンジドメインまたはその部分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくとも１つのＣＨ２ドメインまたはその部分を含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくとも１つのＣＨ３ドメインまたはその部分を含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくとも１つのＣＨ４ドメインまたはその部分を含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくとも１つのヒンジドメインまたはその部分と、少なくとも１つのＣＨ２ドメインまたはその部分とを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む（例えば、ヒンジ−ＣＨ２の方向で）。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくとも１つのＣＨ２ドメインまたはその部分と、少なくとも１つのＣＨ３ドメインまたはその部分とを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む（例えば、ＣＨ２−ＣＨ３の方向で）。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくとも１つのヒンジドメインまたはその部分、少なくとも１つのＣＨ２ドメインまたはその部分、および少なくとも１つのＣＨ３ドメインまたはその部分を、例えば、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３、ヒンジ−ＣＨ３−ＣＨ２またはＣＨ２−ＣＨ３−ヒンジの方向で含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。
ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、１つまたは複数の免疫グロブリン重鎖に由来する少なくとも１つの完全なＦｃ領域（例えば、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含むＦｃドメインであるが、これらは同じ抗体に由来する必要はない）を含む。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、１つまたは複数の免疫グロブリン重鎖に由来する少なくとも２つの完全なＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、完全なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ免疫グロブリン重鎖（例えば、ヒトＩｇＧ１）に由来する。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、完全なＣＨ３ドメインを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、完全なＣＨ２ドメインを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、少なくともＣＨ３ドメインと、ヒンジ領域およびＣＨ２ドメインのうちの少なくとも１つとを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ヒンジおよびＣＨ３ドメインを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法における使用のために好適なＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ免疫グロブリン重鎖（例えば、ヒトＩｇＧ１）に由来する。
本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のＦｃドメインを構成している定常領域ドメインまたはその一部は、種々の免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、本明細書中に開示される方法における使用に適したポリペプチドは、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２ドメインまたはその一部およびＩｇＧ３分子に由来するＣＨ３領域またはその一部を含み得る。別の例では、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ＩｇＧ１分子に部分的に由来するおよびＩｇＧ３分子に部分的に由来するヒンジドメインを含むＦｃドメインを含み得る。本明細書中に示されるように、Ｆｃドメインは、アミノ酸配列が天然に存在する抗体分子と異なるように変更され得ることが当業者によって理解されるだろう。
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、完全なＦｃ領域の１つまたはそれを超える定常領域ドメインを欠き、すなわち、それらは、部分的にまたは完全に欠失される。ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ＣＨ２ドメイン全体を欠き得る。ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、ＩｇＧ１ヒト定常領域ドメインをコードするベクター（例えば、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ製）に由来するＣＨ２ドメイン欠失Ｆｃ領域を含む（例えば、ＷＯ０２／０６０９５５Ａ２およびＷＯ０２／０９６９４８Ａ２を参照のこと）。この例示的なベクターは、ＣＨ２ドメインを欠失するように、およびドメイン欠失ＩｇＧ１定常領域を発現する合成ベクターを提供するように、操作される。これらの例示的な構築物は、好ましくは、結合性のＣＨ３ドメインをそれぞれのＦｃドメインのヒンジ領域に直接融合するように操作されることに注意されたい。
他の構築物では、構成している１つまたはそれを超えるＦｃドメインの間にペプチドスペーサーを提供することが望ましい場合がある。例えば、ペプチドスペーサーは、ヒンジ領域とＣＨ２ドメインとの間および／またはＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの間に配置され得る。例えば、ＣＨ２ドメインが欠失されており、かつ残りのＣＨ３ドメイン（合成または非合成）が、１〜２０、１〜１０または１〜５アミノ酸ペプチドスペーサーによってヒンジ領域に接続されている、適合性の構築物が発現され得る。そのようなペプチドスペーサーは、例えば、定常領域ドメインの調節エレメントが、遊離したままでありかつ接近可能なままであること、またはヒンジ領域が可動性のままであることを保証するために、付加され得る。好ましくは、本発明において使用されるいずれの適合性のリンカーペプチドも、比較的、非免疫原性であり、Ｆｃの適切な折り畳みを妨げない。
ＰＥＧ化
ある特定の実施形態において、ｐｅｇ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、部位特異的ｐｅｇ化、特に、ＮまたはＣ末端のシステイン部分へのＰＥＧの結合体化によって作製される。ＰＥＧ部分は、アミンへの結合体化を含む他の化学によっても付着され得る。ペプチドまたはタンパク質へのＰＥＧの結合体化は、通常、ＰＥＧの活性化、および活性化されたＰＥＧ中間体を標的タンパク質／ペプチドまたはリンカーに直接カップリングすることを含み、そのリンカーは、その後、活性化され、標的タンパク質／ペプチドに結合される（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉら、ＪＢＣ １９７７；２５２：３５７１およびＪＢＣ １９７７；２５２：３５８２およびＨａｒｒｉｓら：Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；（Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ ｅｄ．）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２；Ｃｈａｐ．２１ ａｎｄ ２２を参照のこと）。種々の分子量の形態のＰＥＧ、例えば、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）への結合体化のためには約１，０００ダルトン（Ｄａ）〜１００，０００Ｄａ（ｎは２０〜２３００である）が選択され得る。ＰＥＧにおける繰り返し単位「ｎ」の数は、ダルトンで記載される分子量に近似している。活性化されたリンカー上のＰＥＧの合計の分子量は、薬学的使用に適していることが好ましい。したがって、１つの実施形態において、ＰＥＧ分子の分子量は、１００，０００Ｄａを超えない。例えば、３つのＰＥＧ分子が、リンカーに付着される場合（ここで、各ＰＥＧ分子は、１２，０００Ｄａという同じ分子量を有する（各ｎは約２７０である））、そのリンカー上のＰＥＧの総分子量は、約３６，０００Ｄａである（ｎの合計は約８２０である）。そのリンカーに付着されるＰＥＧの分子量、例えば、１つのリンカー上の３つの分子のＰＥＧの分子量は、異なることもあり、２つのＰＥＧ分子が、それぞれ５，０００Ｄａであり得（各ｎは約１１０である）、１つのＰＥＧ分子が、１２，０００Ｄａであり得る（ｎは約２７０である）。
当業者は、ＰＥＧにとって好適な分子量を、例えば、ｐｅｇ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）がどのようにして治療的に使用されるか、所望の投与量、循環時間、タンパク質分解に対する抵抗性、免疫原性および他の考慮すべき事柄に基づいて選択し得る。タンパク質の特性を高めるためのＰＥＧおよびその使用に関する考察については、Ｎ．Ｖ．Ｋａｔｒｅ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９３；１０：９１−１１４を参照のこと。
ある特定の実施形態において、ＰＥＧ−ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）結合体を形成するために、ＰＥＧの炭酸エステルが使用される。Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネート（ＤＳＣ）が、ＰＥＧとの反応において使用されることにより、活性な混合ＰＥＧ−スクシンイミジルカーボネートが形成され得、それはその後、リンカーの求核基またはＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のアミノ基と反応され得る（米国特許第５，２８１，６９８号および米国特許第５，９３２，４６２号を参照のこと）。同様のタイプの反応では、１，１’−（ジベンゾトリアゾリル）カーボネートおよびジ−（２−ピリジル）カーボネートが、ＰＥＧと反応して、それぞれＰＥＧ−ベンゾトリアゾリルおよびＰＥＧ−ピリジル混合カーボネートを形成し得る（米国特許第５，３８２，６５７号）。ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のｐｅｇ化は、最新の方法に従って、例えば、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）を求電子的に活性なＰＥＧ（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ，ｗｗｗ．ｓｈｅａｒｗａｔｅｒｃｏｒｐ．ｃｏｍ）と反応させることによって、行うことができる。本明細書中に開示される方法における使用に適した好ましいＰＥＧ試薬は、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルプロピオネート（ＰＥＧ−ＳＰＡ）、ブタノエート（ＰＥＧ−ＳＢＡ）、ＰＥＧ−スクシンイミジルプロピオネートまたは分岐Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、例えば、ｍＰＥＧ２−ＮＨＳ（Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉ，Ｃ，ら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．６（１９９５）６２−６９）である。
ある特定の実施形態において、ＰＥＧ分子は、ＩＬ−２上のスルフヒドリル基に結合され得る（Ｓａｒｔｏｒｅ，Ｌ．，ら、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２７，４５（１９９１）；Ｍｏｒｐｕｒｇｏら、Ｂｉｏｃｏｎ．Ｃｈｅｍ．，７，３６３−３６８（１９９６）；Ｇｏｏｄｓｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９０）８，３４３；ＵＳ５，７６６，８９７）。ＵＳ６，６１０，２８１およびＵＳ５，７６６，８９７には、スルフヒドリル基に結合され得る例示的な反応性ＰＥＧ種が記載されている。
ＰＥＧ分子がＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）上のシステイン残基に結合体化されるある特定の実施形態において、そのシステイン残基は、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）にとって天然のものであるのに対して、ある特定の実施形態では、１つまたはそれを超えるシステイン残基が、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）に入るように操作される。ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のコード配列に変異が導入されることにより、システイン残基が作製され得る。これは、例えば、１つまたはそれを超えるアミノ酸残基をシステインに変異することによって、達成され得る。システイン残基に変異するために好ましいアミノ酸としては、セリン、トレオニン、アラニンおよび他の親水性残基が挙げられる。好ましくは、システインに変異されるべき残基は、表面に露出した残基である。一次配列またはタンパク質に基づいて残基の表面到達性を予測するためのアルゴリズムが、当該分野で周知である。
ある特定の実施形態において、ｐｅｇ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、リンカーに共有結合的に付着された１つまたはそれを超えるＰＥＧ分子を含む。
ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、Ｃ末端においてｐｅｇ化される。ある特定の実施形態において、タンパク質は、Ｃ末端のアジド−メチオニンの導入、およびその後のシュタウディンガー反応を介したメチル−ＰＥＧ−トリアリールホスフィン化合物の結合体化によって、Ｃ末端においてｐｅｇ化される。このＣ末端の結合体化方法は、Ｃａｚａｌｉｓら、Ｃ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎ Ｍｕｔａｎｔ ｗｉｔｈ Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｌｌ Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２００４；１５（５）：１００５−１００９に記載されている。ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のモノｐｅｇ化は、ＷＯ９４／０１４５１に記載されている一般的な方法に従っても達成され得る。ＷＯ９４／０１４５１には、修飾された末端のアミノ酸アルファ−炭素反応基を有する組換えポリペプチドを調製するための方法が記載されている。その方法の工程は、組換えポリペプチドを形成する工程、およびそれを、Ｎ末端のアルファ−アミンおよびＣ末端のアルファ−カルボキシルにおいて、１つまたはそれを超える生物学的に付加された保護基で保護する工程を含む。次いで、そのポリペプチドは、反応性の側鎖基を選択的に保護することにより側鎖基が修飾されるのを妨げるために、化学的保護剤と反応され得る。次いで、そのポリペプチドは、生物学的保護基に特異的な切断試薬で切断されて、保護されていない末端のアミノ酸アルファ−炭素反応基が形成される。その保護されていない末端のアミノ酸アルファ−炭素反応基は、化学的修飾剤で修飾される。次いで、側鎖が保護され、末端が修飾された１コピーの組換えポリペプチドは、その側鎖基において脱保護されて、末端が修飾された１コピーの組換えポリペプチドを形成する。その方法における工程の数および順序は、そのポリペプチドのＮおよび／またはＣ末端のアミノ酸における選択的な修飾を達成するために変動し得る。
結合体化反応における、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）と活性化されたＰＥＧとの比は、約１：０．５〜１：５０、約１：１〜１：３０または約１：５〜１：１５であり得る。様々な水性緩衝液を用いることにより、ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）へのＰＥＧの共有結合性の付加を触媒することができる。ある特定の実施形態において、使用される緩衝液のｐＨは、約７．０〜９．０である。ある特定の実施形態において、ｐＨは、わずかに塩基性の範囲内、例えば、約７．５〜８．５である。中性ｐＨの範囲に近いｐＫａを有する緩衝液、例えば、リン酸緩衝液が、使用され得る。
サイズ排除（例えば、ゲル濾過）およびイオン交換クロマトグラフィーなどの当該分野で公知の従来の分離手法および精製手法を用いることにより、ＰＥＧ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）を精製することができる。生成物はまた、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて分離され得る。分離され得る生成物としては、モノｐｅｇ化された、ジｐｅｇ化された、トリｐｅｇ化された、ポリｐｅｇ化された、およびｐｅｇ化されていないＩＬ−２、ならびに遊離ＰＥＧが挙げられる。モノ−ＰＥＧ結合体のパーセンテージは、組成物中のモノ−ＰＥＧのパーセンテージを高めるために、溶出ピークあたりのより広い画分をプールすることによって制御され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したＰＥＧ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、１つ、２つまたはそれを超えるＰＥＧ部分を含む。ある特定の実施形態において、ＰＥＧ−ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）におけるＰＥＧの合計分子量または総分子量は、約３，０００Ｄａ〜６０，０００Ｄａ、必要に応じて、約１０，０００Ｄａ〜３６，０００Ｄａである。ある特定の実施形態において、ｐｅｇ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）におけるＰＥＧは、実質的に線形の直鎖ＰＥＧである。
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法における使用に適したｐｅｇ化されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、好ましくは、非修飾タンパク質に関連する生物学的活性の少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％を保持する。ある特定の実施形態において、生物学的活性とは、ＴＧＦ−β１に結合する能力を指す。ＰＥＧによって修飾されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の血清クリアランス速度は、非修飾ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）のクリアランス速度と比べて、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはさらには９０％だけ低下し得る。ＰＥＧによって修飾されたＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）は、非修飾ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の半減期と比べて向上された循環半減期（ｔ＾）を有し得る。ＰＥＧ−ＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の半減期は、修飾されていないＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）の半減期と比べて少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％だけまたは５００％、あるいはさらに１０００％だけ向上され得る。ある特定の実施形態において、タンパク質の半減期は、インビトロにおいて、例えば、緩衝食塩水溶液または血清中で決定される。ある特定の実施形態において、タンパク質の半減期は、インビボ循環半減期、例えば、血清中または動物の他の体液中のタンパク質の半減期である。
リンカー
ある特定の実施形態において、血清半減期向上部分は、必要に応じて、リンカーを介してＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）に融合される。血清半減期向上部分をＴＧＦ−βアンタゴニスト（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）に融合するのに適したリンカーは、当該分野で周知であり、例えば、ＵＳ２０１０／０２１０５１１、ＵＳ２０１０／０１７９０９４およびＵＳ２０１２／００９４９０９（これらは、その全体が参考により本明細書中に援用される）に開示されている。例示的なリンカーとしては、ｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカー、グリシン−プロリンポリペプチドリンカーおよびプロリン−アラニンポリペプチドリンカーが挙げられる。ある特定の実施形態において、リンカーは、ｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカー、すなわち、グリシンおよびセリン残基からなるペプチドである。
例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３、すなわち、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４、すなわち、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。ある特定の実施形態では、ｎ＝７である。ある特定の実施形態では、ｎ＝８である。ある特定の実施形態では、ｎ＝９である。ある特定の実施形態では、ｎ＝１０である。別の例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。別の例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。別の例示的なｇｌｙ−ｓｅｒポリペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎを含む。ある特定の実施形態では、ｎ＝ｌである。ある特定の実施形態では、ｎ＝２である。ある特定の実施形態では、ｎ＝３である。ある特定の実施形態では、ｎ＝４である。ある特定の実施形態では、ｎ＝５である。ある特定の実施形態では、ｎ＝６である。
Ｂ．他のＴＧＦ−βアンタゴニスト
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、低分子阻害剤である。ある特定の実施形態において、低分子阻害剤は、ＴＧＦ−β受容体Ｉ型キナーゼ（ＡＬＫ５）を標的化する。ある特定の実施形態において、アンタゴニストは、ＡＬＫ５阻害剤である。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βの阻害剤は、ＳＢ４３１５４２である（例えば、Ｌａｐｉｎｇ，ＮＪ，ｅｔ．ａｌ．，（２００２），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ６２（１）：５８−６４を参照のこと。商業的に入手可能な、例えば、Ｓｉｇｍａ Ｐｒｏｄ．Ｎｏ．Ｓ４３１７）。ある特定の実施形態において、低分子阻害剤は、ＴＧＦ−β受容体キナーゼの触媒活性を直接遮断することによって、リガンド−受容体相互作用を最小にする。いくつかの低分子阻害剤（例えば、ＳＤ−２０８（ＴＧＦ−βＲＩキナーゼのＡＴＰ結合部位の低分子阻害剤；Ｂｏｎｎｉａｕｄ，Ｐ．ら、２００５ Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １７１，８８９−９８；Ｕｈｌ，Ｍ．ら、２００４ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４，７９５４−６１；Ｇｅ，Ｒ．ら、２００６ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １２，４３１５−３０）およびＫｉ２６８９４（低分子ＴＧＦ−βＲＩキナーゼ阻害剤；Ｅｈａｔａ，Ｓ．ら、２００７ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ ９８，１２７−３３））が、前臨床効果を有すると示されている。ある特定の実施形態において、低分子阻害剤は、両方のＴＧＦ−β受容体を標的化する。例えば、ＬＹ２１０９７６１は、前臨床効果を有すると示された、ＴＧＦ−βＲＩおよびＴＧＦ−βＲＩＩの低分子二重阻害剤である（Ｍｅｌｉｓｉ，Ｄ．ら、２００８ Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７，８２９−４０；Ｚｈａｎｇ，Ｂ．ら、２００９ Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２７７，１１４−２０）。さらに、ＬＹ２１５７２９９は、第Ｉ相臨床試験に入っているＴＧＦ−βＲＩキナーゼ低分子阻害剤である（Ｃａｌｖｏ−Ａｌｌｅｒ，Ｅ．Ｂ．Ｊ．ら、２００８ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６ Ａｂｓｔｒａｃｔ ＃１４５５４）。
いくつかの実施形態において、低分子阻害剤は、ＴＧＦ−β経路の下流のシグナル伝達エフェクターを標的化する。例えば、低分子ＳＩＳ３（６，７−ジメチル−２−［（２Ｅ）−３−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル−プロパ−２−エノイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩）が、Ｊｉｎｎｉｎら（Ｊｉｎｎｉｎ Ｍ．ら、２００６，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ６９：５９７−６０７）によって、Ｓｍａｄ３のリン酸化、ＤＮＡ−Ｓｍａｄ３結合、およびＳｍａｄ３とＳｍａｄ４との相互作用を抑制する、Ｓｍａｄ３の特異的な阻害剤として報告された。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、中和抗ＴＧＦ−β抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの実施形態において、抗ＴＧＦ−β抗体は、ＴＧＦ−βリガンド（すなわち、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２またはＴＧＦ−β３）を中和する。いくつかの実施形態において、抗ＴＧＦ−β抗体は、ＴＧＦ−β受容体（すなわち、ＴＧＦ−β受容体１型または２型）を中和する。中和抗体は、リガンドと受容体との間の相互作用を最小にする。ある特定の実施形態において、抗体の中和能力は、中和アッセイを用いて測定される。中和アッセイの例は、Ｌｕｃａｓ，Ｃ．ら、１９９０ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５，１４１５−１４２２に記載されているように、ミンク肺ＭｖｌＬｕ上皮細胞に対するインビトロにおけるＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３の成長阻害活性の中和の測定である。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、相補的なＲＮＡにハイブリダイズし、ｍＲＮＡの機能を阻害し、ＲＮａｓｅ Ｈによる加速されたｍＲＮＡ分解または立体的遮断によってタンパク質合成を妨げる、通常、１３〜２５ヌクレオチド長の一本鎖ポリヌクレオチド分子である。ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３アイソタイプまたはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体の他の構成要素をコードするｍＲＮＡに特異的である。ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド（例えば、ロックト核酸（ＬＮＡ；例えば、オキシル−ＬＮＡ、アミノ−ＬＮＡ、チオ−ＬＮＡ）として公知の２’−Ｏ、４’−ｃ−メチレンに連結された二環式リボヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、ホスホロチオエート（ＰＳ）、２’−Ｏ−メチル（ｍｅｈｙｌ）（２’−Ｏｍｅ）、２’−フルオロ（ｆｌｕｒｏ）（２’−フルオロ（２’−Ｆ））または２’−メトキシエチル（２’−ＭＯＥ）誘導体）を含む。アンチセンスによって媒介される、ＴＧＦ−β１遺伝子発現の阻害は、前臨床試験において有効であると示され、ＡＰ１２００９が、臨床開発の進んだ段階にある（Ｓｃｈｌｉｎｇｅｎｓｉｅｐｅｎ，Ｋ．Ｈ．ら、２００８ Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １７７，１３７−５０）。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β２ ｍＲＮＡに特異的なアンチセンスＲＮＡ分子（例えば、ベラゲンプマツセル−Ｌ）および／またはＴＧＦ−β１ ｍＲＮＡもしくはＴＧＦ−β３ ｍＲＮＡに特異的なアンチセンスＲＮＡ分子、あるいはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体をコードするｍＲＮＡの他の構成要素に特異的なアンチセンスＲＮＡ分子である。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、サイレンシングＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）である。ｓｉＲＮＡとは、標的ｍＲＮＡの切断および分解のために、相同な内因性ｍＲＮＡをＲＮＡ誘導サイレンシング複合体にガイドするために、その複合体に組み込まれる１９〜２３塩基長のヌクレオチドのことを指す。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３アイソタイプまたはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体の他の構成要素をコードするｍＲＮＡに対して特異的なサイレンシングＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。ｓｈＲＮＡとは、ＲＮＡ干渉を介して標的遺伝子の発現を発現停止させるために使用され得る堅固なヘアピンターンを有する人工的な二本鎖オリゴヌクレオチドのことを指す。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３アイソタイプまたはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体の他の構成要素をコードするｍＲＮＡに特異的な短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）分子である。マイクロＲＮＡは、標的ｍＲＮＡ転写物上の相補的な部位に結合することによって遺伝子発現を制御する、植物および動物に見られる制御性分子の１クラスに属する、低分子非コードＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｎｏｎ−ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ）である。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３アイソタイプまたはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体の他の構成要素をコードするｍＲＮＡに特異的なマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）分子である。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、アプタマーおよび／またはシュピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）分子である。アプタマーは、標的結合ドメインならびに安定化および標的の機能の干渉を行う足場ドメインを含む、低分子のペプチド、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。シュピーゲルマーは、Ｌ−ＲＮＡアプタマーである。ある特定の実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３アイソタイプまたはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体の他の構成要素に特異的なアプタマーおよび／またはシュピーゲルマー分子である。
いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、リボザイムである。リボザイムは、それ自体の一部または他の別個の核酸分子を切断および／またはライゲートし得る酵素的な核酸（例えば、ＲＮＡ）分子であり、ゆえに、標的化されたＲＮＡの発現をダウンレギュレートし得る。ある特定の実施形態において、リボザイムは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３アイソタイプまたはＴＧＦ−βシグナル伝達集合体の他の構成要素をコードするｍＲＮＡに特異的である。
抗体を作製する方法
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法において使用するためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストは、抗体またはその結合フラグメントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗ＣＤ１５５抗体である。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、抗ＴＧＦ−β１抗体である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＴＧＦ−β経路のシグナル伝達成分に結合する抗体である。本開示は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを産生するための方法も取り上げる。
また、本明細書中に記載される特定の抗体によって認識されるエピトープの全部または一部（例えば、同じ領域または重複領域またはその領域の間の領域またはその領域にまたがる領域）を含む、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β経路構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）上のエピトープに結合する抗体も、本開示によって包含される。
本明細書中に記載される抗体と同じエピトープに結合する抗体、および／または本明細書中に記載される抗体とヒトＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β経路構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）への結合について競合する抗体も、本開示によって包含される。同じエピトープを認識するかまたは結合について競合する抗体は、日常的な手法を用いて特定され得る。そのような手法としては、例えば、１つの抗体が別の抗体と標的抗原との結合を遮断する能力を示すイムノアッセイ、すなわち、競合結合アッセイが挙げられる。競合的結合は、試験されている免疫グロブリンが、共通の抗原（例えば、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β１）と参照抗体との特異的結合を阻害するアッセイにおいて測定される。数多くのタイプの競合結合アッセイ、例えば、固相の直接または間接的なラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相の直接または間接的な酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照のこと）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照のこと）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照のこと）；Ｉ−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照のこと）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））が知られている。代表的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合された精製抗原またはこれらのうちのいずれかを有する細胞、未標識の試験免疫グロブリンおよび標識された参照免疫グロブリンの使用を含む。試験免疫グロブリンの存在下におけるその固体表面または細胞に結合された標識の量を測定することによって、競合阻害が計測される。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在するとき、その競合する抗体は、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％またはそれを超えて阻害する。
他の手法としては、例えば、エピトープマッピング法、例えば、エピトープの原子分解を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線解析が挙げられる。他の方法は、抗体と抗原フラグメントまたは抗原の変異したバリエーションとの結合をモニターし、ここで、抗原配列内のアミノ酸残基の改変に起因する結合の喪失が、エピトープの構成要素の示唆であると考えられることが多い。さらに、エピトープマッピングのためのコンピュータによるコンビナトリアル方法も使用され得る。これらの方法は、目的の抗体がコンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特異的な短いペプチドを親和性単離する能力に依存する。次いで、それらのペプチドを、ペプチドライブラリーをスクリーニングするために使用した抗体に対応するエピトープを定義するためのリードと見なす。エピトープマッピングの場合、不連続な立体構造エピトープをマッピングすると示されたコンピュータによるアルゴリズムも開発されている。
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される抗体を調製するための方法は、被験体（例えば、非ヒト哺乳動物）に適切な免疫原を免疫することを含み得る。本明細書中に記載される任意の抗体を作製するために好適な免疫原は、本明細書中に示される。例えば、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β経路構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）に結合する抗体を作製するために、当業者は、好適な被験体（例えば、非ヒト哺乳動物、例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、イヌ、ネコ、ブタ、ヤギ、ウマまたは非ヒト霊長類）に完全長ポリペプチドを免疫し得る。
好適な被験体（例えば、非ヒト哺乳動物）が、適切な抗原で免疫され得、それとともに、その後、その哺乳動物による抗体の産生を誘発するのに十分な回数だけ追加免疫され得る。免疫原は、アジュバントとともに被験体（例えば、非ヒト哺乳動物）に投与され得る。被験体における抗体の産生において有用なアジュバントとしては、タンパク質アジュバント；細菌アジュバント、例えば、細菌全体（ＢＣＧ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）および細胞壁骨格を含む細菌の構成要素、トレハロースジミコール酸、モノホスホリルリピドＡ、結核菌のメタノール抽出可能残基（ＭＥＲ）、フロイント完全アジュバントまたはフロイント不完全アジュバント；ウイルス性アジュバント；化学的アジュバント、例えば、水酸化アルミニウムおよびヨード酢酸およびコレステリルヘミスクシネートが挙げられるが、これらに限定されない。免疫応答を誘導するための方法において使用され得る他のアジュバントとしては、例えば、コレラ毒素およびパラポックスウイルスタンパク質が挙げられる。Ｂｉｅｇら、（１９９９）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ３１（１）：１５−２４も参照のこと。例えば、Ｌｏｄｍｅｌｌら、（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ １８：１０５９−１０６６；Ｊｏｈｎｓｏｎら、（１９９９）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４２：４６４０−４６４９；Ｂａｌｄｒｉｄｇｅら、（１９９９）Ｍｅｔｈｏｄｓ １９：１０３−１０７；およびＧｕｐｔａら、（１９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ １３（１４）：１２６３−１２７６も参照のこと。
いくつかの実施形態において、上記方法は、免疫原に結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞株を調製することを含む。例えば、好適な哺乳動物（例えば、実験室のマウス）に、上に記載されたようなポリペプチド（例えば、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β１）を免疫する。免疫された哺乳動物の抗体産生細胞（例えば、脾臓のＢ細胞）を、その免疫原の少なくとも１回の追加免疫の２〜４日後に単離し、次いで、短時間にわたって培養液中で生育した後、好適なミエローマ細胞株の細胞と融合し得る。それらの細胞を、融合促進物質（例えば、ワクシニアウイルスまたはポリエチレングリコール）の存在下において融合し得る。その融合において得られたハイブリッド細胞をクローン化し、所望の抗体を分泌する細胞クローンを選択する。例えば、好適な免疫原を免疫されたＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓細胞が、ミエローマ細胞株ＰＡＩまたはミエローマ細胞株Ｓｐ２／０−Ａｇ１４の細胞と融合され得る。その融合の後、その細胞は、正常なミエローマ細胞が所望のハイブリドーマ細胞を超えて生育しないように、選択培地、例えば、ＨＡＴ培地が補充された好適な培養液中にて一定間隔で拡大される。次いで、得られたハイブリッド細胞は、所望の抗体、例えば、ＴＩＧＩＴに結合してＴＩＧＩＴとＴＩＧＩＴ受容体（例えば、ＣＤ１５５）との相互作用を阻害する抗体の分泌についてスクリーニングされる。
いくつかの実施形態において、当業者は、例えば、米国特許第６，３００，０６４号（Ｋｎａｐｐｉｋら；Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ ＡＧに対する）およびＳｃｈｏｏｎｂｒｏｏｄｔら（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３３（９）：ｅ８１に記載されているような免疫に偏らないライブラリー（ｎｏｎ−ｉｍｍｕｎｅ ｂｉａｓｅｄ ｌｉｂｒａｒｙ）から抗体を特定し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法は、例えば、ファージディスプレイ技術、細菌ディスプレイ、酵母表面ディスプレイ、真核生物ウイルスディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイおよび無細胞（例えば、リボソームディスプレイ）抗体スクリーニング法を伴い得るか、またはそれらとともに使用され得る（例えば、Ｅｔｚら、（２００１）Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ １８３：６９２４−６９３５；Ｃｏｒｎｅｌｉｓ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１：４５０−４５４；Ｋｌｅｍｍら、（２０００）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １４６：３０２５−３０３２；Ｋｉｅｋｅら、（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ １０：１３０３−１３１０；Ｙｅｕｎｇら、（２００２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｐｒｏｇ １８：２１２−２２０；Ｂｏｄｅｒら、（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ３２８：４３０−４４４；Ｇｒａｂｈｅｒｒら、（２００１） Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ ４：１８５−１９２；Ｍｉｃｈａｅｌら、（１９９５）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２：６６０−６６８；Ｐｅｒｅｂｏｅｖら、（２００１）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７５：７１０７−７１１３；Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌら、（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１９−１３５；およびＨａｎｅｓら、（２０００）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １８：１２８７−１２９２を参照のこと）。
いくつかの実施形態において、選択とスクリーニングとの組み合わせを用いることにより、例えば、ハイブリドーマ由来抗体の集団またはファージディスプレイ抗体ライブラリーから目的の抗体を特定することができる。好適な方法は当該技術分野で公知であり、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ（１９９７）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５：６２−７０；Ｂｒｉｎｋｍａｎら、（１９９５）（上記）；Ａｍｅｓら、（１９９５）（上記）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、（１９９４（上記）；Ｐｅｒｓｉｃら、（１９９７）（上記）；およびＢｕｒｔｏｎら、（１９９４）（上記）に記載されている。例えば、複数のファージミドベクター（各々が、バクテリオファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３ファージのｐＩＩＩ、ｐＶＩＩＩまたはｐＩＸ）と、異なる抗原結合領域との融合タンパク質をコードする）が、標準的な分子生物学の手法を用いて作製され、次いで、細菌（例えば、大腸菌）の集団に導入される。細菌におけるそのバクテリオファージの発現は、いくつかの実施形態において、ヘルパーファージの使用を必要とし得る。いくつかの実施形態では、ヘルパーファージを必要としない（例えば、Ｃｈａｓｔｅｅｎら（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３４（２１）：ｅ１４５を参照のこと）。その細菌から産生されたファージを回収し、次いで、例えば、固体支持体に結合された（固定化された）標的抗原に接触させる。ファージは、溶液中の抗原にも接触され得、続いて、複合体が固体支持体に結合される。
上記の方法を用いてスクリーニングされた抗体の部分集団は、当該分野で公知の任意の免疫学または生化学に基づく方法を用いて、特定の抗原（例えば、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−β１）に対するそれらの特異性および結合親和性について特徴づけられ得る。例えば、抗体の特異的結合は、例えば、免疫学または生化学に基づく方法（例えば、上に記載されたような、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＳＰＲアッセイ、免疫沈降アッセイ、アフィニティークロマトグラフィーおよび平衡透析であるがこれらに限定されない）を用いて測定され得る。抗体の免疫特異的結合および交差反応性を解析するために使用され得るイムノアッセイとしては、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイおよびプロテインＡイムノアッセイなどの手法を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が挙げられるが、これらに限定されない。そのようなアッセイは、当該分野において日常的かつ周知である。
本明細書中に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、分子生物学およびタンパク質化学の分野において公知の種々の手法を用いて作製され得る。例えば、抗体の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの一方または両方をコードする核酸が、転写制御配列および翻訳制御配列（例えば、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および転写停止配列、翻訳開始配列および翻訳停止配列、転写ターミネーターシグナル、ポリアデニル化シグナルならびにエンハンサー配列またはアクチベーター配列を含む）を含む発現ベクターに挿入され得る。それらの制御配列には、プロモーターおよび転写開始配列および転写停止配列が含まれる。さらに、発現ベクターは、それが２つの異なる生物、例えば、発現のために哺乳動物細胞または昆虫細胞ならびにクローニングおよび増幅のために原核生物宿主において、維持され得るように、１つより多い複製システムを含み得る。
抗体またはその抗原結合フラグメントの発現に適切な宿主細胞としては、酵母、細菌、昆虫、植物および哺乳動物細胞が挙げられる。特に興味深いのは、大腸菌などの細菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓなどの真菌、ＳＦ９などの昆虫細胞、哺乳動物細胞株（例えば、ヒト細胞株）、ならびに主要な細胞株である。
いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、トランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）において発現され得、それらから精製され得る。例えば、抗体は、例えば、Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ（２００２）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １３（６）：６２５−６２９；ｖａｎ Ｋｕｉｋ−Ｒｏｍｅｉｊｎら（２０００）Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ ９（２）：１５５−１５９；およびＰｏｌｌｏｃｋら（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１（１−２）：１４７−１５７に記載されているように、トランスジェニック非ヒト哺乳動物（例えば、げっ歯類）において産生され得、乳汁から単離され得る。
抗体またはそのフラグメントは、他に何の構成要素がサンプル中に存在するかに応じて、当業者に公知の種々の方法で単離または精製され得る。標準的な精製方法としては、電気泳動的手法、分子的手法、免疫学的手法、ならびにイオン交換、疎水性、親和性および逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーを含むクロマトグラフ法が挙げられる。例えば、抗体は、標準的な抗抗体カラム（例えば、プロテイン−Ａまたはプロテイン−Ｇカラム）を用いて精製され得る。限外濾過および膜分離法も、タンパク質濃縮とともに、有用である。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ（１９９４）“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，” Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃｉｔｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。必要な精製の程度は、所望の用途に応じて変動し得る。いくつかの場合、発現された抗体またはそのフラグメントの精製は、必要ない。
ポリペプチドを作製する方法
いくつかの態様において、本明細書中に記載されるポリペプチド（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト）は、組換えＤＮＡ法を用いて、形質転換された宿主細胞において産生される。そのようにするために、そのペプチドをコードする組換えＤＮＡ分子が調製される。そのようなＤＮＡ分子を調製する方法は、当該分野で周知である。例えば、それらのペプチドをコードする配列は、好適な制限酵素を用いてＤＮＡから切り出され得る。あるいは、そのＤＮＡ分子は、ホスホルアミデート法などの化学合成法を用いて合成され得る。また、これらの手法の組み合わせも使用され得る。
ポリペプチドを作製する方法には、適切な宿主においてペプチドを発現することができるベクターも含まれる。そのベクターは、適切な発現調節配列に作動可能に連結されたペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む。そのＤＮＡ分子がベクターに挿入される前または後に、この作動可能な連結に影響する方法が周知である。発現調節配列としては、プロモーター、アクチベーター、エンハンサー、オペレーター、リボソームヌクレアーゼドメイン、開始シグナル、停止シグナル、キャップシグナル、ポリアデニル化シグナル、および転写または翻訳の調節に関わる他のシグナルが挙げられる。
そのＤＮＡ分子をそのベクター上に有する得られたベクターを用いて、適切な宿主を形質転換する。この形質転換は、当該分野で周知の方法を用いて行われ得る。
多数の利用可能かつ周知の宿主細胞のいずれもが、本明細書中に開示される方法における使用に適している可能性がある。特定の宿主の選択は、当該分野によって認識されているいくつかの因子に依存する。これらとしては、例えば、選択される発現ベクターとの適合性、ＤＮＡ分子によってコードされるペプチドの毒性、形質転換率、ペプチドの回収のしやすさ、発現の特徴、バイオセイフティーおよび費用が挙げられる。これらの因子のバランスは、すべての宿主が特定のＤＮＡ配列の発現にとって等しく有効であり得るわけではないと理解されなければならない。これらの一般的なガイドラインの中で、有用な微生物宿主としては、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ｓｐ．）、酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）および他の培養下の真菌細胞、昆虫細胞、植物細胞、哺乳動物（ヒトを含む）細胞、または当該分野で公知の他の宿主が挙げられる。
次に、形質転換された宿主は、培養され、精製される。宿主細胞は、所望の化合物が発現されるように、従来の発酵条件下で培養され得る。そのような発酵条件は、当該分野で周知である。最後に、当該分野で周知の方法によって、培養物からペプチドが精製される。
化合物は、合成の方法によって作製されてもよい。例えば、固相合成法が使用され得る。好適な技術は当該技術分野で周知であり、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９７３），Ｃｈｅｍ．Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｐ．３３５−６１（Ｋａｔｓｏｙａｎｎｉｓ ａｎｄ Ｐａｎａｙｏｔｉｓ ｅｄｓ．）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｄａｖｉｓら、（１９８５），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．１０：３９４−４１４；ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９６９），Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；米国特許第３，９４１，７６３号；Ｆｉｎｎら、（１９７６），Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（３ｒｄ ｅｄ．）２：１０５−２５３；ならびにＥｒｉｃｋｓｏｎら、（１９７６），Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（３ｒｄ ｅｄ．）２：２５７−５２７に記載されるものが挙げられる。固相合成は、低分子ペプチドを作製する最も費用対効果の高い方法であるので、個々のペプチドを作製する好ましい手法である。誘導体化されたペプチドを含むかまたは非ペプチド基を含む化合物は、周知の有機化学の手法によって合成され得る。
分子の発現／合成の他の方法が、当業者に対して当該分野で広く公知である。
ポリペプチドの発現
上に記載された核酸分子は、例えば、ベクターを形質導入された細胞においてそれらの発現を指示することができるベクター内に含められ得る。したがって、ポリペプチド変異体に加えて、変異体をコードする核酸分子を含む発現ベクター、およびこれらのベクターでトランスフェクトされた細胞が、ある特定の実施形態に含まれる。
使用に適したベクターとしては、細菌において使用するためのＴ７ベースのベクター（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｇｅｎｅ ５６：１２５，１９８７を参照のこと）、哺乳動物細胞において使用するためのｐＭＳＸＮＤ発現ベクター（Ｌｅｅ ａｎｄ Ｎａｔｈａｎｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：３５２１，１９８８）、および昆虫細胞において使用するためのバキュロウイルス由来のベクター（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．製の発現ベクターｐＢａｃＰＡＫＳ）が挙げられる。そのようなベクターにおいて目的のポリペプチドをコードする核酸挿入物は、例えば、発現が探究されている細胞型に基づいて選択されたプロモーターに作動可能に連結され得る。例えば、Ｔ７プロモーターが、細菌において使用され得、ポリヘドリンプロモーターが、昆虫細胞において使用され得、サイトメガロウイルスプロモーターまたはメタロチオネインプロモーターが、哺乳動物細胞において使用され得る。また、高等真核生物の場合、組織特異的プロモーターおよび細胞型特異的プロモーターが広く利用可能である。これらのプロモーターは、体内の所与の組織または細胞型において核酸分子の発現を指示する能力があるのでそのように命名されている。当業者は、核酸の発現を指示するために使用できる数多くのプロモーターおよび他の調節エレメントを十分承知している。
挿入された核酸分子の転写を促進する配列に加えて、ベクターは、複製開始点、および選択可能なマーカーをコードする他の遺伝子を含み得る。例えば、ネオマイシン抵抗性（ｎｅｏｒ）遺伝子は、それが発現される細胞にＧ４１８抵抗性を付与するので、トランスフェクトされた細胞の表現型選択を可能にする。当業者は、所与の調節エレメントまたは選択可能なマーカーが特定の実験の状況における使用に適しているか否かを容易に判断できる。
使用に適したウイルスベクターとしては、例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ベクター、ヘルペスウイルスベクター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）ベクターおよびウシパピローマウイルスベクターが挙げられる（例えば、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｅｄ．），Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，ＣＳＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
ポリペプチド変異体をコードする核酸分子を含み、発現する原核細胞または真核細胞も、使用に適している。細胞は、トランスフェクトされた細胞、すなわち、組換えＤＮＡ法を用いて核酸分子、例えば、変異体ポリペプチドをコードする核酸分子が導入された細胞である。そのような細胞の子孫も、本明細書中に開示される方法における使用に適していると考えられる。
発現系の正確な構成要素は、重要ではない。例えば、ポリペプチド変異体は、原核生物宿主（例えば、細菌である大腸菌）または真核生物宿主（例えば、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ２１細胞）または哺乳動物細胞（例えば、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞またはＨｅＬａ細胞））において産生され得る。これらの細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．）をはじめとした多くの供給源から入手可能である。発現系を選択する際、それらの構成要素が互いに適合性であることだけが重要である。当業者または通常の技術は、そのような決定をすることができる。さらに、発現系を選択する際の指針が必要である場合、当業者は、Ａｕｓｕｂｅｌら（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３）およびＰｏｕｗｅｌｓら（Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８５ Ｓｕｐｐｌ．１９８７）を見ればよい。
発現されたポリペプチドは、日常的な生化学的手順を用いて発現系から精製され得、例えば、本明細書中に記載されるような治療薬として使用され得る。
薬学的組成物および投与のモード
ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は共に一緒に投与される（同時にまたは連続的に）。ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）は単独で投与される。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は単独で投与される。
ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）を、薬学的に許容され得る希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、キャリア、可溶化剤、乳化剤、保存剤および／またはアジュバントとともに含む薬学的組成物、ならびにＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を、薬学的に許容され得る希釈剤、キャリア、可溶化剤、乳化剤、保存剤および／またはアジュバントとともに含む薬学的組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を、薬学的に許容され得る希釈剤、キャリア、可溶化剤、乳化剤、保存剤および／またはアジュバントとともに含む薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態において、それらの作用物質、例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）の各々は、別個の組成物として製剤化され得る。ある特定の実施形態において、許容され得る製剤化材料は、好ましくは、使用される投与量および濃度においてレシピエントにとって無毒性である。ある特定の実施形態において、製剤化材料は、ｓ．ｃ．および／またはＩ．Ｖ．投与用である。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、例えば、その組成物のｐＨ、重量オスモル濃度、粘度、透明度、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解速度もしくは放出速度、吸着または浸透を改変、維持または保存するための製剤化材料を含み得る。ある特定の実施形態において、好適な製剤化材料としては、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；抗菌剤；酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、炭酸水素塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩または他の有機酸）；増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン）；充填剤；単糖類；二糖類；および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；着色料、香味料および希釈剤（ｄｉｌｕｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）；乳化剤；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；懸濁化剤；界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール（ｔｙｌｏｘａｐａｌ））；安定性向上剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）；張度向上剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトール）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤および／または薬学的アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９５）。ある特定の実施形態において、その製剤は、ＰＢＳ；２０ｍＭ ＮａＯＡＣ，ｐＨ５．２、５０ｍＭ ＮａＣｌ；および／または１０ｍＭ ＮＡＯＡＣ，ｐＨ５．２、９％スクロースを含む。ある特定の実施形態において、最適な薬学的組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形式および所望の投与量に応じて、当業者によって決定され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出を参照のこと。ある特定の実施形態において、そのような組成物は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度およびインビボでのクリアランス速度に影響し得る。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物における主要なビヒクルまたはキャリアは、本質的に水性または非水性であり得る。例えば、ある特定の実施形態において、好適なビヒクルまたはキャリアは、非経口投与用の組成物に共通の他の材料がおそらく補充された、注射用水、生理食塩水溶液または人工脳脊髄液であり得る。ある特定の実施形態において、その食塩水は、等張性リン酸緩衝食塩水を含む。ある特定の実施形態において、中性緩衝食塩水、または血清アルブミンと混合された食塩水が、さらに例示的なビヒクルである。ゆえに、ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、ソルビトールまたは好適な代用品をさらに含み得る、約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓ緩衝液または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む組成物は、所望の程度の純度を有する選択された組成物を、随意の製剤化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出）と混合することによって、凍結乾燥されたケークまたは水溶液の形態で保管するために調製され得る。さらに、ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む組成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して、凍結乾燥物として製剤化され得る。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、非経口送達のために選択され得る。ある特定の実施形態において、組成物は、吸入または消化管を通じた送達（例えば、経口的）のために選択され得る。そのような薬学的に許容され得る組成物の調製は、当業者の能力の範囲内である。
ある特定の実施形態において、製剤の構成要素は、投与部位に許容され得る濃度で存在する。ある特定の実施形態において、組成物を生理学的ｐＨまたはそれよりわずかに低いｐＨで、代表的には、約５〜約８のｐＨ範囲内で維持するために、緩衝剤が使用される。
ある特定の実施形態において、非経口投与が企図されるとき、治療的組成物は、薬学的に許容され得るビヒクル中にＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む非経口的に許容され得る発熱物質非含有水溶液の形態であり得る。ある特定の実施形態において、非経口注射用のビヒクルは、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）が滅菌された等張性溶液として製剤化され、適切に保存される、滅菌された蒸留水である。ある特定の実施形態において、その調製物は、後に蓄積注射を介して送達され得る生成物の制御放出または持続放出を提供し得る作用物質（例えば、注射可能なミクロスフェア、生体内分解性の粒子、重合体化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコール酸）、ビーズまたはリポソーム）を含む所望の分子の製剤を含み得る。ある特定の実施形態において、ヒアルロン酸も使用され得、ヒアルロン酸は、循環における持続時間の継続を促進する効果を有し得る。ある特定の実施形態において、植え込み型の薬物送達デバイスが、所望の分子を導入するために使用され得る。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、吸入のために製剤化され得る。ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）は、吸入用の乾燥粉末として製剤化され得る。ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む吸入溶液が、エアロゾル送達のために噴射剤を用いて製剤化され得る。ある特定の実施形態において、溶液は、噴霧され得る。化学的に改変されたタンパク質の肺送達を記載しているＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５には、肺投与がさらに記載されている。
ある特定の実施形態において、製剤は、経口的に投与され得ると企図される。ある特定の実施形態において、この形式で投与されるＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）は、錠剤およびカプセルなどの固形剤形を配合する際に慣習的に使用されるキャリアとともに、またはそれらのキャリアなしで、製剤化され得る。ある特定の実施形態において、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大になり、初回通過の（ｐｒｅ−ｓｙｓｔｅｍｉｃ）分解が最小になる、消化管内の位置において製剤の活性な部分を放出するようにデザインされ得る。ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）の吸収を促進するために、少なくとも１つのさらなる作用物質が含められ得る。ある特定の実施形態において、希釈剤、香味料、低融点ろう、植物油、潤滑剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤および結合剤も使用され得る。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、有効な量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を、錠剤の製造に適した無毒性賦形剤との混合物として含み得る。ある特定の実施形態において、錠剤を滅菌水または別の適切なビヒクルに溶解することによって、単位用量の形態の溶液が調製され得る。ある特定の実施形態において、好適な賦形剤としては、不活性な希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム、ラクトースまたはリン酸カルシウム）；または結合剤（例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア）；または滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク）が挙げられるが、これらに限定されない。
持続送達製剤または制御送達製剤としてＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む製剤をはじめとしたさらなる薬学的組成物が当業者に明らかになるだろう。ある特定の実施形態において、他の種々の持続送達手段または制御送達手段を製剤化するための手法（例えば、リポソームキャリア、生体内分解性の微小粒子または多孔性のビーズおよび蓄積注射）も当業者に公知である。例えば、薬学的組成物の送達のための多孔性の重合体微小粒子の制御放出を記載しているＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照のこと。ある特定の実施形態において、持続放出調製物は、成形された物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態としての半透性ポリマーマトリックスを含み得る。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号およびＥＰ０５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸およびガンマエチル−Ｌ−グルタメートの共重合体（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒら、前出）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）を含み得る。ある特定の実施形態において、持続放出組成物は、当該分野で公知の任意のいくつかの方法によって調製され得るリポソームも含み得る。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−３６９２（１９８５）；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６およびＥＰ１４３，９４９を参照のこと。
インビボ投与のために使用される薬学的組成物は、通常、滅菌されている。ある特定の実施形態において、これは、滅菌された濾過膜で濾過することによって達成され得る。ある特定の実施形態において、組成物が凍結乾燥されている場合、この方法を用いた滅菌法は、凍結乾燥および再構成の前または後に行われ得る。ある特定の実施形態において、非経口投与用の組成物は、凍結乾燥された形態でまたは溶液として保存され得る。ある特定の実施形態において、非経口組成物は、一般に、滅菌されたアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
ある特定の実施形態において、いったん薬学的組成物が製剤化されると、それは、滅菌されたバイアル内で、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水された粉末もしくは凍結乾燥粉末として、保存され得る。ある特定の実施形態において、そのような製剤は、すぐに使える形態または投与前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥された形態）で保存され得る。
ある特定の実施形態において、単一用量の投与単位を作製するためのキットが提供される。ある特定の実施形態において、そのキットは、乾燥したタンパク質を有する第１の容器と水性製剤を有する第２の容器の両方を含み得る。ある特定の実施形態において、単一および複数のチャンバーがある予め満たされたシリンジ（例えば、液体シリンジおよび溶解シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅｓ））を含むキットが含められる。
ある特定の実施形態において、治療的に使用される、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む薬学的組成物の有効量は、例えば、治療の状況および目的に依存する。したがって、当業者は、ある特定の実施形態に従って、処置に適切な投与量レベルが、送達される分子、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／もしくはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）が使用される適応症、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面または器官のサイズ）および／または条件（年齢および全般的な健康状態）に部分的に応じて変動することを認識するだろう。ある特定の実施形態において、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投与量を決定（ｔｉｔｅｒ）し得、投与経路を変更し得る。
ある特定の実施形態において、投与の頻度は、使用される製剤におけるＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）の薬物動態パラメータを考慮に入れ得る。ある特定の実施形態において、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に達するまで組成物を投与し得る。ゆえに、ある特定の実施形態において、組成物は、１回で、または時間をかけて２回もしくはそれを超える回数で（同じ量の所望の分子を含むかもしれないし、含まないかもしれない）、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルを介して持続注入として、投与され得る。適切な投与量のさらなる緻密化が、日常的に当業者によってなされ、それは、当業者が日常的に行う作業の領域内である。ある特定の実施形態において、適切な投与量は、適切な用量反応データを使用することによって確かめることができる。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物の投与経路は、公知の方法、例えば、経口的、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、皮下、眼内、動脈内、門脈内もしくは病巣内の経路による注射；持続放出系または埋め込みデバイスと一致する。ある特定の実施形態において、組成物は、ボーラス注射によって、または注入によって持続的に、または埋め込みデバイスによって、投与され得る。ある特定の実施形態において、併用療法の個々のエレメントは、異なる経路によって投与され得る。
ある特定の実施形態において、組成物は、所望の分子が吸収または被包された膜、スポンジまたは別の適切な材料を埋め込むことによって、局所的に投与され得る。ある特定の実施形態において、埋め込みデバイスが使用される場合、そのデバイスは、任意の好適な組織または器官に埋め込まれ得、所望の分子の送達は、拡散、徐放性のボーラスまたは連続投与によるものであり得る。ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む薬学的組成物をエキソビボの様式で使用することが望ましいことがある。そのような場合、患者から取り出された細胞、組織および／または器官が、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む薬学的組成物に曝露され、その後続いて、その細胞、組織および／または器官が、再びその患者に移植される。
ある特定の実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）は、そのポリペプチドを発現および分泌する方法（例えば、本明細書中に記載されるもの）を用いて、遺伝的に操作されたある特定の細胞を移植することによって送達され得る。ある特定の実施形態において、そのような細胞は、動物細胞またはヒト細胞であり得、自己、異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）または異種（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）のものであり得る。ある特定の実施形態において、それらの細胞は、不死化され得る。ある特定の実施形態において、免疫学的応答の機会を減少させるために、それらの細胞は被包されて、周囲の組織の浸潤を回避し得る。ある特定の実施形態において、被包材料は、代表的には、タンパク質産物の放出を可能にするが、患者の免疫系によるかまたは周囲の組織からの他の有害な因子による細胞の破壊を防ぐ、生体適合性で半透性の重合体の囲いまたは膜である。
キット
キットは、本明細書中に開示されるような、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）ならびに使用するための指示書を含み得る。キットは、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）、１つまたはそれを超える対照、ならびに当該分野で周知の様々な緩衝剤、試薬、酵素および他の標準的な成分を好適な容器の中に含み得る。ある特定の実施形態は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）を同じバイアルに有するキットを含む。ある特定の実施形態では、キットは、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）を別のバイアルに含む。
その容器は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）が入れられていることがあり、いくつかの場合、適切に等分されていることがある、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または他の容器手段を含み得る。さらなる構成要素が提供される場合、そのキットは、この構成要素が入れられ得るさらなる容器を含み得る。それらのキットは、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含めるための手段、ならびに商業的に販売するために厳重に閉じ込められた状態の他の任意の試薬容器も含み得る。そのような容器としては、所望のバイアルが保持される、射出成形またはブロー成形のプラスチック容器が挙げられ得る。容器および／またはキットは、使用するための指示書および／または警告を含むラベルを含み得る。
使用方法
本明細書中に記載される、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）、ならびに／またはそれらを発現する核酸は、異常なアポトーシスまたは分化プロセス（例えば、細胞増殖性障害（例えば、過剰増殖性（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｅｔｉｖｅ）障害）または細胞分化障害（例えば、がん））に関連する障害を処置するために有用である。本発明の方法による処置に適しているがんの非限定的な例は、下記に記載される。
細胞増殖性障害および／または細胞分化障害の例としては、がん（例えば、癌腫、肉腫、転移性障害または造血性腫瘍性障害、例えば、白血病）が挙げられる。転移性腫瘍は、たくさんの原発腫瘍タイプから生じ得、そのタイプとしては、前立腺、結腸、肺、***および肝臓のものが挙げられるがこれらに限定されない。したがって、例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）を含む、本明細書中で使用される組成物は、がんを有する患者に投与され得る。
ある特定の実施形態では、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）は、ＴＧＦ−β１（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けているがんを有する患者に投与されることによって、患者を処置する。
ある特定の実施形態では、ＴＧＦ−β１（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）アンタゴニストは、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）による処置を受けたことがあるかまたは受けているがんを有する患者に投与されることによって、患者を処置する。
上に記載されたように、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、種々のがん（例えば、白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄単球性、単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症 リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫（ｃｈｒｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ）、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫（ｓｙｎｏｖｉｏｍａ）、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、直腸結腸癌腫、膵がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん（去勢抵抗性前立腺がんを含む）、扁平上皮癌腫、頭頸部の扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、ヘパトーマ、胆管がん、絨毛がん、セミノーマ、胎児性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、子宮がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、非小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、鼻咽頭癌腫、食道癌腫、基底細胞癌腫、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）がん、子宮頸がん、絨毛癌、直腸結腸がん、結合組織がん、消化系がん、子宮体がん、食道がん、眼がん、頭頸部がん、胃がん、上皮内新生物、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん（小細胞、大細胞）、メラノーマ、神経芽細胞腫；口腔がん（例えば、唇、舌、口および咽頭）、卵巣がん、膵がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸がん；呼吸器系がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、泌尿器系がん、ならびに本明細書中に記載される（例えば、図２Ａ、２Ｂおよび２Ｃを参照のこと）または別途当該分野で公知の他の任意のがんタイプであるがこれらに限定されない）を処置するために使用され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、直腸結腸がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、子宮頸がんまたは膵がんを処置するために使用され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される方法は、腫瘍またはがんにおけるＣＤ１５５の発現レベルを測定する工程をさらに含む。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、がんを処置するために使用され得、ここで、そのがん細胞は、ＣＤ１５５を発現している。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、がんを処置するために使用され得、ここで、そのがん細胞は、同じ組織学的種類の正常な細胞（すなわち、がん細胞ではない細胞）と比べて高レベルのＣＤ１５５を発現している。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の高発現レベルは、参照サンプルにおけるレベルと比較したときのものである。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の高発現レベルは、所定のレベルのＣＤ１５５と比較したときのものである。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の高発現レベルは、ＰＤ−Ｌ１と比較したときのものである。いくつかの実施形態において、用語「高い」は、用語「過剰発現している」、「増加した」および類似の用語と等価である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５に結合するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体は、ＣＤ１５５の発現レベルをアッセイするために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１５５抗体は、Ｄ１７１などのモノクローナル抗体である。ＣＤ１５５の存在をアッセイするための方法は、Ｕ．Ｓ．６，５１８，０３３（その全内容が、参照により本明細書中に援用される）（ＵＳ６５１８０３３）に記載されている。ＣＤ１５５に結合する抗体、ならびにそれを作製および使用するする方法は、ＵＳ２０１４／０５６８９０（その全内容が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される方法は、免疫細胞（例えば、腫瘍浸潤リンパ球）または腫瘍もしくはがんの細胞によるＴＩＧＩＴの発現レベルを測定する工程をさらに含む。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、がんを処置するために使用され得、ここで、そのがん細胞は、ＴＩＧＩＴを発現している。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、活性化Ｔ細胞（制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、メモリーＴ細胞および濾胞性Ｂ細胞ヘルパーＴ細胞（Ｔｆｈ））およびＮＫ細胞上の発現が測定される。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上の発現が測定される。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、がんを処置するために使用され得、ここで、そのがん細胞は、同じ組織学的種類の正常な細胞（すなわち、がん細胞ではない細胞）と比べて高レベルのＴＩＧＩＴを発現している。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの高発現レベルは、参照サンプルにおけるレベルと比較したときのものである。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの高発現レベルは、所定のレベルのＴＩＧＩＴと比較したときのものである。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの高発現レベルは、ＰＤ−１と比較したときのものである。
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される方法は、免疫細胞（例えば、腫瘍浸潤リンパ球）または腫瘍もしくはがんの細胞によるＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の発現レベルを測定する工程をさらに含む。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、がんを処置するために使用され得、ここで、そのがん細胞は、ＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）を発現している。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物（例えば、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−βアンタゴニスト）は、がんを処置するために使用され得、ここで、そのがん細胞は、同じ組織学的種類の正常な細胞（すなわち、がん細胞ではない細胞）と比べて、高レベルのＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）を発現している。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の高発現レベルは、参照サンプルにおけるレベルと比較したときのものである。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の高発現レベルは、所定のレベルのＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）と比較したときのものである。
ある特定の実施形態において、本開示は、がんを処置するための方法を提供し、その方法は、ｉ）アッセイの結果を得ること（ここで、がん組織を有する被験体から得られた試験組織サンプルを、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の発現について評価する）；ｉｉ）がんと診断された被験体に治療有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび治療有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与すること（ここで、試験組織におけるＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の発現は、所定のレベルを超えている）を含む。ある特定の実施形態において、試験組織サンプルは、腫瘍細胞および腫瘍浸潤炎症細胞を含む。ある特定の実施形態において、そのアッセイは、細胞表面上のＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦβＲＩＩ）の発現について、試験組織サンプル中のある割合の細胞を評価する。
細胞、腫瘍またはがんにおけるＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の発現レベルを測定するための方法は、当業者に公知である。核酸の発現の場合、これらの方法としては、ＰＣＲベースのアッセイ、マイクロアレイ解析およびヌクレオチドシークエンシング（例えば、ＮｅｘｔＧｅｎシークエンシング）が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる方法としては、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の配列に基づいて、適切に標識されたプローブを使用した、サザンブロッティング、ｍＲＮＡの転写を定量するノーザンブロッティング（Ｔｈｏｍａｓ，ＰＮＡＳ ７７：５２０１−５２０５，１９８０）、ドットブロッティング（ＤＮＡ解析）またはインサイチュハイブリダイゼーションによる様々な組織における遺伝子発現の測定が挙げられる。あるいは、特異的な二重鎖（ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖およびＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二重鎖またはＤＮＡ−タンパク質二重鎖を含む）を認識し得る抗体が使用され得る。
タンパク質の発現の場合、これらの方法としては、ウエスタンブロット解析、タンパク質アレイ、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイ、免疫沈降、イムノブロット、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）およびＦＡＣＳが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、組織切片の免疫組織化学的染色および細胞培養物または体液のアッセイを使用することにより、遺伝子産物の発現が直接定量される。免疫組織化学的染色および／またはサンプル流体のアッセイに有用な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得、任意の哺乳動物において調製され得る。好都合には、抗体は、天然の配列のポリペプチドに対して、またはポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に基づく合成ペプチドに対して、またはポリペプチドおよび特異的抗体エピトープをコードするＤＮＡに融合された外来性配列に対して、調製され得る。いくつかの実施形態において、タンパク質の発現は、細胞集団の頻度にマーカーの幾何蛍光強度（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を乗算することによって計算される、特定の細胞型上のマーカー発現の強度の相対的な定量的尺度である、幾何平均蛍光強度積分値（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｇｅｏｍｅｔｉｃ ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）（ｉＧＭＦＩ）によって測定される。
腫瘍またはがんが、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βシグナル伝達構成要素（例えば、ＴＧＦ−β１）の高発現レベルを有するかを判定するための方法は、種々のサンプルを使用することができる。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、腫瘍またはがんを有する被験体から採取される。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、新鮮な腫瘍／がんサンプルである。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、凍結された腫瘍／がんサンプルである。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、ホルマリン固定パラフィン包埋サンプルである。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、処理された細胞溶解産物である。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、ＤＮＡまたはＲＮＡに処理される。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、解離腫瘍細胞である。いくつかの実施形態において、そのサンプルは、腹水である。いくつかの実施形態において、ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋染色によって判定された腫瘍細胞が、発現について測定される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４５＋ＥｐＣＡＭ−染色によって判定された免疫細胞が、発現について測定される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ−染色によって判定された間質細胞が、発現について測定される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の発現は、腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）、免疫細胞（ＣＤ４５＋ＥｐＣＡＭ−）および間質細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ−）上においてＰＤ−Ｌ１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の発現は、卵巣がんの腹水中に存在する腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）、免疫細胞（ＣＤ４５＋ＥｐＣＡＭ−）および間質細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ−）上においてＰＤ−Ｌ１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の発現は、直腸結腸がんを有する患者における腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）上においてＰＤ−Ｌ１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の発現は、非小細胞肺癌腫を有する患者における腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）上においてＰＤ−Ｌ１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５の発現は、卵巣がんを有する患者における腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）上においてＰＤ−Ｌ１の発現より高い。
いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ４＋ＰＢＭＣ、ＣＤ４＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＣＤ８ｈｉｇｈＰＢＭＣ、ＣＤ８ｈｉｇｈＴＩＬ、ＣＤ８ｌｏｗＰＢＭＣおよびＣＤ８ｌｏｗＴＩＬ上においてＰＤ−１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ４＋ＰＢＭＣ上においてＰＤ−１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ４＋ＴＩＬ上においてＰＤ−１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ８ｈｉｇｈＰＢＭＣ上においてＰＤ−１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ８ｈｉｇｈＴＩＬ上においてＰＤ−１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ８ｌｏｗＰＢＭＣ上においてＰＤ−１の発現より高い。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴの発現は、がんを有する患者由来のＣＤ８ｌｏｗｓＴＩＬ上においてＰＤ−１の発現より高い。
腫瘍の成長およびサイズを減少させるのに十分なＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）の各々に対する量、すなわち治療有効量は、選択される特定の化合物または組成物だけでなく、投与経路、処置されている症状の性質ならびに患者の年齢および症状によっても変動し、最終的には、患者の医師または薬剤師の裁量であることが、当業者によって認識されるだろう。本方法において使用される化合物が投与される時間の長さは、個々の基準によって変動する。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は、がんを処置するために使用される。ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は、患者において耐久性のある臨床反応を誘導する。
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示されるＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）は、メラノーマ、白血病、肺がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、結腸がんおよび脳がんを処置するために使用される。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は、腫瘍細胞の成長および／または増殖を阻害する。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は、腫瘍サイズを低減する。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）および／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、ＴＧＦ−β受容体タンパク質の可溶性形態）は、原発腫瘍の転移を阻害する。
がんの発症は、免疫系が、がん細胞、がん抗原および／または腫瘍の存在を適切に認識してそれに応答することができなかった結果であることが多い。ゆえに、患者においてがん特異的免疫応答を誘導または強化することが、有益であり、いくつかの場合では、がんを処置し得る。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、Ｔ細胞の増殖および機能（すなわち、Ｔ細胞応答）の増加を含む。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、組織浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の増加を含む。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、細胞傷害性Ｔ細胞の増加を含む。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、がん細胞、がん抗原および／または腫瘍に対する抗体の産生を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書中に開示されるＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ１５５抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体）およびＴＧＦ−β１アンタゴニスト（例えば、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質）は、患者においてがん特異的免疫応答を促進する。ある特定の実施形態において、本開示は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者においてがん特異的免疫応答を高めるための方法を提供し、その方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態において、患者は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを投与される前に、任意の長さ（例えば、１年間、６ヶ月間、１日間）のＴＧＦ−β１アンタゴニスト処置を受けたことがある。いくつかの実施形態において、そのＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが投与されたとき、ＴＧＦ−β１アンタゴニストの所定の薬物動態に基づくと、その患者内においてもはや生物学的に活性でない。いくつかの実施形態において、患者は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストと同じ日であるがＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが投与される前に、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト処置を受けたことがある。いくつかの実施形態において、患者は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを投与される前に、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト処置を受ける。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト処置を受ける患者は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを同時に、一斉に、または連続的に投与される。
ある特定の実施形態において、本開示は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者においてがん特異的免疫細胞の応答を高めるための方法を提供し、その方法は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態において、患者は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与される前に、任意の長さ（例えば、１年間、６ヶ月間、１日間）のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト処置を受けたことがある。いくつかの実施形態において、そのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストは、ＴＧＦ−β１アンタゴニストが投与されるとき、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストの所定の薬物動態に基づくと、その患者内においてもはや生物学的に活性でない。いくつかの実施形態において、患者は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストと同じ日であるがＴＧＦ−β１アンタゴニストが投与される前に、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト処置を受けたことがある。いくつかの実施形態において、患者は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与される前に、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト処置を受ける。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト処置を受ける患者は、ＴＧＦ−β１アンタゴニストを同時に、一斉に、または連続的に投与される。
ある特定の実施形態において、本開示は、患者においてがん特異的免疫細胞の応答を高めるための方法を提供し、その方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態において、患者は、有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｂｏｕｔ）のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストを同時に、一斉に、または連続的に投与される。
ある特定の実施形態において、患者におけるがん特異的免疫応答は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストまたはＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後のがん特異的免疫応答より大きい。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＦＮγの産生を含む。ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＬ−２の産生を含む。
ある特定の実施形態において、がん特異的免疫応答は、Ｔ細胞応答である。ある特定の実施形態において、患者におけるＴ細胞応答は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストまたはＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後のＴ細胞応答より大きい。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＦＮγの産生を含む。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＬ−２の産生を含む。
がんの有効な処置（およびゆえにその減少）は、種々の好適な方法のいずれかによって検出され得る。がんおよび有効ながん処置を検出するための方法は、臨床検査（症候には、腫脹、触知できる塊、リンパ節の拡大、出血、目に見える皮膚病変および体重減少が含まれ得る）；イメージング（Ｘ線の手法、マンモグラフィー、結腸鏡検査、コンピュータ断層撮影（ＣＴおよび／またはＣＡＴ）法、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）など）；免疫診断アッセイ（例えば、ＣＥＡ、ＡＦＰ、ＣＡ１２５などの検出）；抗体によって媒介される放射性イメージング；および細胞／組織免疫組織化学の解析を含む。がんの状態および有効ながん処置を評価するための好適な手法の他の例としては、ＰＣＲおよびＲＴ−ＰＣＲ（例えば、がん細胞に関連する遺伝子または「マーカー」の）、生検、電子顕微鏡法、ポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影法、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、核型分析および他の染色体解析、イムノアッセイ／免疫細胞化学的検出法（例えば、差次的抗体認識）、組織学的および／または病理組織学的アッセイ（例えば、細胞膜の変化のアッセイ）、細胞動態研究および細胞周期解析、超音波または他の超音波検出法、放射線検出法、フローサイトメトリー、内視鏡的可視化法、ならびに理学的検査法が挙げられる。
他の態様において、本開示は、本明細書中に記載されるようなＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストとＴＧＦ−β１アンタゴニストとの組み合わせを投与することによって慢性感染症を処置するための方法を提供する。感染性因子（例えば、細菌、ウイルスおよび真菌）の長期の残留は、慢性感染をもたらす。本明細書中に開示されるように、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストとＴＧＦ−β１アンタゴニストとの組み合わせは、Ｔ細胞の活性化（すなわち、ＩＦＮγおよびＩＬ−２の産生）をもたらす。少なくとも、Ｔ細胞によるＴｈ１サイトカインの産生が、産生性の免疫応答に関連するので、ＴＧＦ−β１アンタゴニストと組み合わせたＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストの投与は、慢性感染症の処置に有用である。
いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ポリオウイルス感染の処置において有用である。ポリオウイルスは、ピコルナウイルス科に属し、一本鎖プラス鎖ＲＮＡゲノムおよびタンパク質キャプシドから構成されるウイルスを含む。ポリオウイルスによる感染は、神経疾患である灰白髄炎をもたらす。ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）は、ＣＤ１５５であるので、いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路をアンタゴナイズすることにより、継続した感染が予防される。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ポリオウイルスの慢性感染を阻害する。いくつかの実施形態において、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ポリオウイルスの慢性感染を阻害し、免疫応答を高める。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストは、ポリオウイルス感染を処置する。
本明細書中での処置に対する言及は、その言及されたがんおよび症候の予防ならびに処置に拡大されることが当業者に認識されるだろう。
実施例１：様々ながんにおける免疫調節因子の発現の解析
公知の免疫調節因子の発現レベルががんにおいて変化するかを判定するために、パブリックドメインにおいて入手可能なデータのバイオインフォマティクスマイニングを、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）を用いて行った。９１のがん研究の２１４４１個の腫瘍サンプルに対するデータを有するｃＢｉｏｐｏｒｔａｌデータベースを使用して、ＴＣＧＡ研究において、変化した遺伝子（増幅、変異および欠失）の頻度を評価した。詳細には、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５およびＴＧＦ−βの個々の遺伝子の変化の頻度を解析した。図２Ａ〜２Ｃにおける結果は、がん患者において、これらの遺伝子の欠失が変異または増幅と比べて少ないことを示したので、図２Ａ〜２Ｃに記載されているものを含む広範囲のがんタイプにおいて標的化の見込みのある経路が示唆された。
ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ−１およびＴＧＦ−βのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現レベルも、種々のヒトがん（すなわち、直腸結腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、子宮頸がん、胃がん、非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）および膵がん）にわたって、正常な健康個体と比べて評価した。各がんに対するｍＲＮＡ発現のｚ−スコアをＴＣＧＡデータベースからダウンロードし、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてグラフ化した（図３を参照のこと）。それらのｚ−スコアは、ＲＮＡ Ｓｅｑ Ｖｅｒ２ ＲＳＥＭ（ＲＮＡ−Ｓｅｑ ｂｙ Ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ Ｍａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ；Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を用いて、ＴＣＧＡによって生成された。また、ＣＤ１５５の発現を、様々なヒトがん細胞株において測定した。細胞を解凍し、洗浄し、一晩休ませ、フローサイトメトリーのために、ＣＤ１５５に特異的な抗体で染色した。染色された細胞をＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａにおいて取得し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて解析した。図４は、ＣＤ１５５が、リンパ系集団のがん細胞株（すなわち、バーキットリンパ腫）を含むいくつかのがん細胞株上で発現されたことを示している。正常では、リンパ系集団における細胞は、ＣＤ１５５などの接着タイプの分子を発現しない。
まとめると、これらの結果は、ＣＤ１５５およびＴＩＧＩＴが、複数のがんタイプ上で高度に発現されることを示唆している。
実施例２：がん患者由来のサンプルにおける免疫調節因子の評価
健康なドナーまたは直腸結腸がん（ＣＲＣ）、卵巣がんもしくは肺がんを有する患者由来のサンプルにおけるＣＤ１５５、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴおよびＰＤ−１の発現を解析した。肺がんサンプルは、非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）を含む混合集団からのサンプルである。解析されたサンプルの特徴を下記の表に示す：
卵巣がん、ＣＲＣおよびＮＳＣＬＣ由来の解離腫瘍細胞（ＤＴＣ）、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）および／または腹水細胞は、正常な健康ドナー由来のＰＢＭＣとともに、Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ Ｂｉｏから入手した。細胞を解凍し、洗浄し、一晩休ませることにより、表面マーカーの発現を回復させた。次いで、細胞を免疫細胞（すなわち、ＣＤ３、ＣＤ２８ ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ４５）、腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ１５５、ＰＤ−１およびＴＩＧＩＴに対する抗体特異的マーカーで染色し、それらを、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａサイトメーターを用いるフローサイトメトリーによって測定し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて解析した。ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ１５５、ＥｐＣＡＭおよびＰＤ−Ｌ１に対する抗体は、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから入手したのに対して、抗ＰＤ−１は、Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから入手し、抗ＴＩＧＩＴは、ＥＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから入手した。ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ１５５の場合、特定の細胞型上でのマーカー発現の強度の相対的な定量尺度である幾何平均蛍光強度積分値（ｉＧＭＦＩ）を、細胞集団の頻度にそのマーカーの幾何蛍光強度を乗算することによって計算した。ＰＤ−１およびＴＩＧＩＴの場合、陽性の事象の頻度を、種々の指標にわたって比較した。
図５は、卵巣がんの腹水中に存在する腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）、免疫細胞（ＣＤ４５＋ＥｐＣＡＭ−）および間質細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ−）上において、ＣＤ１５５の発現がＰＤ−Ｌ１の発現より高かったことを示している。図６は、ＣＲＣ、肺がんまたは卵巣がんを有する患者由来のＤＴＣから単離された腫瘍細胞（ＣＤ４５−ＥｐＣＡＭ＋）上において、ＣＤ１５５の発現がＰＤ−Ｌ１の発現より高かったことを示している。
図７は、ＤＴＣおよびＰＢＭＣサンプルから単離された細胞におけるＰＤ−１の発現と比較したＴＩＧＩＴの発現を示している。詳細には、ＣＤ４＋ＰＢＭＣ、ＣＤ４＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＣＤ８ｈｉｇｈＰＢＭＣ、ＣＤ８ｈｉｇｈＴＩＬ、ＣＤ８ｌｏｗＰＢＭＣおよびＣＤ８ｌｏｗＴＩＬ。ＴＩＬは、記載されているがんのＤＴＣサンプルから単離した。ＴＩＧＩＴは、ＣＲＣ、肺がんおよび卵巣がんにおけるＣＤ８＋およびＣＤ４＋ＴＩＬ上においてＰＤ−１よりも高度に発現されたことが見出された。
実施例３：免疫調節因子の遮断の効果
次に、ＣＤ１５５またはＴＩＧＩＴの抗体遮断が、Ｔ細胞によるサイトカイン産生に対して影響を及ぼすかを評価した。ＣＤ１５５を発現しているＭＤＡ−ＭＢ３２１細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−２６；ヒト乳腺癌細胞株）を、健康ドナーのＰＢＭＣから単離された、活性化されたヒトプライマリーＴ細胞と共培養した。詳細には、５×１０４個のＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、２４時間休ませたのに対して、Ｔ細胞を、それぞれ１０μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌという最終濃度の可溶性抗ヒトＣＤ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；クローンＯＫＴ３）および抗ヒトＣＤ２８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；クローンＣＤ２８．２）で刺激し、次いで、ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞に３：１の比（Ｔ細胞：腫瘍細胞）で加えた。次いで、それらの細胞を４時間インキュベートし、ブレフェルジンＡ／モネンシン（Ｓｉｇｍａ）の組み合わせを最後の１２時間にわたって加えた。細胞を組み合わせたとき、培養物に抗ＣＤ１５５（マウス抗ヒト；クローンＳＫＩＩ．４，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗ＴＩＧＩＴ（クローンＭＢＳＡ４３，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびマウスＩｇＧ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を個々に加えた。遮断抗体またはアイソタイプ対照抗体のすべてを５μｇ／ｍｌという最終濃度で使用した。以下のフローサイトメトリー抗体を使用した：ＡＦ４８８−ＣＤ３、ＢＶ４２１−ＣＤ４、ＡＰＣ−Ｃｙ７−ＣＤ８、ＰＥ−Ｃｙ７−ＩＦＮ−γ（クローン４Ｓ．Ｂ３；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびＰｅｒＣｐ−ｅＦｌｕｏｒ７１０（クローンＭＱ１−１７Ｈ１２；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。
染色した後、ＢＤ ＬＳＲＩＩにおいてサイトカイン産生について細胞を解析し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて解析した。図８（ＣＤ１５５遮断）および図９（ＴＩＧＩＴ遮断）に示されている結果は、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の産生を測定したとき、ＣＤ１５５およびＴＩＧＩＴの抗体遮断が、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方のＴ細胞活性化を促進することを示した。
次に、同じ系を用いて、ＴＧＦ−βの中和と組み合わせたＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路の遮断が、Ｔ細胞活性化をさらに増強するかを評価した。ＴＧＦ−βを中和するために、Ｆｃに融合されたＴＧＦ−β受容体ＩＩ（ＴＧＦＲＩＩ）（ＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃ；３４１−ＢＲ Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を２．５μｇ／ｍｌの濃度で使用した。細胞を７２時間インキュベートし、ブレフェルジンＡ／モネンシンの組み合わせを最後の１２時間にわたって加えた。細胞を混合したとき、抗ＣＤ１５５または抗ＴＩＧＩＴ抗体を、単独で加えたか、またはＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃと組み合わせて加えた。細胞を、上に記載された抗体と同じフローサイトメトリー抗体で染色し、ＢＤ ＬＳＲＩＩにおいてサイトカイン産生について解析し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて解析した。
抗ＣＤ１５５をＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃと組み合わせた結果を図１０に示す。ＴＧＦＢＲＩＩ−Ｆｃタンパク質を介したＴＧＦ−βの中和とＣＤ１５５抗体遮断との組み合わせは、ＣＤ１５５またはＴＧＦ−βのいずれかの中和のみと比べて、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の産生を増加させた。抗ＴＩＧＩＴをＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃと組み合わせた結果を図１１に示す。抗ＣＤ１５５とＴＧＦＲＩＩ−Ｆｃとの組み合わせと同様に、ＴＧＦＢＲＩＩ−Ｆｃタンパク質を介したＴＧＦ−βの中和とＴＩＧＩＴ抗体遮断との組み合わせは、ＴＩＧＩＴまたはＴＧＦ−βのいずれかの中和のみと比べて、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の産生を増加させた。
これらの結果は、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路とＴＧＦ−β経路を同時に中和することによって、これらの経路を個々に中和するよりもＴ細胞活性化が高まることを裏付けている。
等価物
当業者は、本明細書中に記載される特定の実施形態の多くの等価物を認識し得るか、またはそれらを単なる日常的な実験法を用いて確かめることができるだろう。そのような等価物は、以下の請求項によって包含されると意図されている。

Claims (79)

  1. 患者におけるがんを処置するための方法であって、該方法は、有効量の（ｉ）ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および（ｉｉ）ＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、方法。
  2. ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんを処置するための方法であって、該方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、方法。
  3. ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんを処置するための方法であって、該方法は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、方法。
  4. 前記がんのがん細胞が、ＣＤ１５５を発現している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記がん細胞が、同じ組織学的種類の正常な細胞と比べてＣＤ１５５を過剰発現している、請求項４に記載の方法。
  6. 前記がんのがん細胞がＣＤ１５５を発現または過剰発現しているかを判定することをさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
  9. 前記抗体が、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である、請求項７または８に記載の方法。
  10. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、低分子、核酸またはポリペプチドを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質である、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントである、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上させる向上部分とを含む融合タンパク質を含む、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記部分が、ポリエチレングリコール、抗体のＦｃ部分またはアルブミンタンパク質を含む、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ３ ＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、（ａ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン、および（ｂ）配列番号２に示されているアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、請求項１６または１７に記載の方法。
  19. 処置が、前記患者におけるがん特異的免疫応答を含む、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
  20. 前記がん特異的免疫応答が、Ｔ細胞応答である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記患者におけるＴ細胞応答が、前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストまたは前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後のＴ細胞応答より大きい、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＦＮγの産生を含む、請求項２０または２１に記載の方法。
  23. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＬ−２の産生を含む、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方の増殖を含む、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 処置が、前記患者におけるがん進行の遅延を含む、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
  26. 処置が、前記患者における腫瘍特異的免疫応答の増強を含む、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
  27. 患者におけるがんを処置するための方法であって、該方法は、有効量の
    （ｉ）抗ＣＤ１５５抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および
    （ｉｉ）２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト
    を該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、方法。
  28. ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けているがん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法であって、該方法は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを該患者に投与することにより、該ＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べた場合に、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む、方法。
  29. ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けているがん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法であって、該方法は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べた場合に、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む、方法。
  30. がん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法であって、該方法は、有効量の（ｉ）ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および（ｉｉ）ＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該ＴＧＦ−β１アンタゴニストまたは該ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べた場合に、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む、方法。
  31. がん患者におけるがん特異的免疫応答を増強するための方法であって、該方法は、有効量の
    （ｉ）抗ＣＤ１５５抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト；および
    （ｉｉ）２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト
    を該患者に投与することにより、該ＴＧＦ−β１アンタゴニストまたは該ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストのみの投与後の該患者におけるがん特異的免疫応答と比べて、該患者におけるがん特異的免疫応答を増強することを含む、方法。
  32. 前記がんのがん細胞が、ＣＤ１５５を発現している、請求項２７〜３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記がん細胞が、同じ組織学的種類の正常な細胞と比べてＣＤ１５５を過剰発現している、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記がんのがん細胞がＣＤ１５５を発現または過剰発現しているかを判定することをさらに含む、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２７〜３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２７〜３４のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記抗体が、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である、請求項３５または３６に記載の方法。
  38. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、低分子、核酸またはポリペプチドを含む、請求項２７〜３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントである、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上させる向上部分とを含む融合タンパク質を含む、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記部分が、ポリエチレングリコール、抗体のＦｃ部分またはアルブミンタンパク質を含む、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ３ ＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、（ａ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン、および（ｂ）配列番号２に示されているアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、請求項４４または４５に記載の方法。
  47. 前記がん特異的免疫応答が、Ｔ細胞応答である、請求項２７〜４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記患者におけるＴ細胞応答が、前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストまたは前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後のＴ細胞応答より大きい、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＦＮγの産生を含む、請求項４７または４８に記載の方法。
  50. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＬ−２の産生を含む、請求項４７〜４９のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方の増殖を含む、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 処置が、前記患者におけるがん進行の遅延を含む、請求項２７〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 処置が、前記患者における腫瘍特異的免疫応答の増強を含む、請求項２７〜５２のいずれか１項に記載の方法。
  54. 患者におけるがんの処置において使用するためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニストであって、該処置は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよびＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  55. ＴＧＦ−β１アンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんの処置において使用するためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストであって、該処置は、有効量のＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニスト。
  56. ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストによる処置を受けたことがあるかまたは受けている患者におけるがんの処置において使用するためのＴＧＦ−β１アンタゴニストであって、該処置は、有効量のＴＧＦ−β１アンタゴニストを該患者に投与することにより、該患者を処置することを含む、ＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  57. 前記がんのがん細胞は、ＣＤ１５５を発現している、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  58. 前記がん細胞が、同じ組織学的種類の正常な細胞と比べてＣＤ１５５を過剰発現している、請求項５７に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  59. 前記がんのがん細胞がＣＤ１５５を発現または過剰発現しているかを判定することをさらに含む、請求項５４〜５８のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  60. 前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項５４〜５９のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  61. 前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストが、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項５４〜６０のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  62. 前記抗体が、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である、請求項６０または６１に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  63. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、低分子、核酸またはポリペプチドを含む、請求項５４〜６２のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  64. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、可溶性形態のＴＧＦ−β受容体タンパク質である、請求項６３に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  65. 前記ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントである、請求項６４に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  66. 前記ＴＧＦ−β受容体タンパク質が、配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  67. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストの血清半減期を向上させ向上る部分とを含む融合タンパク質を含む、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  68. 前記部分が、ポリエチレングリコール、抗体のＦｃ部分またはアルブミンタンパク質を含む、請求項６７に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  69. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメインまたはそのＴＧＦ−β１結合フラグメントと、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインとを含む融合タンパク質を含む、請求項６８に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  70. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ３ ＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、請求項６９に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  71. 前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストが、（ａ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む２型ＴＧＦ−β受容体の細胞外ドメイン、および（ｂ）配列番号２に示されているアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、請求項６９または７０に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  72. 処置が、前記患者におけるがん特異的免疫応答を含む、請求項５４〜７１のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  73. 前記がん特異的免疫応答が、Ｔ細胞応答である、請求項７２に記載の使用のためＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  74. 前記患者におけるＴ細胞応答が、前記ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストまたは前記ＴＧＦ−β１アンタゴニストのみの投与後のＴ細胞応答より大きい、請求項７３に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  75. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＦＮγの産生を含む、請求項７３または７４に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  76. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方によるＩＬ−２の産生を含む、請求項７３〜７５のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  77. 前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の一方または両方の増殖を含む、請求項７３〜７６のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  78. 処置が、前記患者におけるがん進行の遅延を含む、請求項５４〜７７のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
  79. 処置が、前記患者における腫瘍特異的免疫応答の増強を含む、請求項５４〜７８のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴアンタゴニストおよび／またはＴＧＦ−β１アンタゴニスト。
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