JP2018502897A - 関節及び軟組織の苦痛のために注射可能な凝集体 - Google Patents

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Abstract

キトサン及びヒアルロナンの１つ又は両方から形成され、液体担体中で懸濁され、又はそうでなければ分散された凝集体は、対象の関節又は筋肉の苦痛の処置に有用であり、ここで、組成物は、１種又は複数の薬学的に活性な薬剤を含んでもよく、組成物は関節又は筋肉に例えば、注射によって局所的に送達される。【選択図】図１

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１５年１月２０日に出願された米国特許仮出願第６２／１０５，７０３号及び２０１５年１２月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／２７１，６７５号の利益を米国特許法第１１９条（ｅ）に基づいて主張し、その出願はすべての目的のためにそれらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本発明は、一般に、薬剤製品及びその使用に、より詳しくは、例えば、骨関節症及び関節リウマチ等の関節障害の処置に使用する、ポリマー（複数可）及び薬学的に活性な薬剤（複数可）を含む注射可能な組成物に関する。
即ち、一実施形態において、本開示は、１種又は複数の凝集体を含む組成物を提供する。一態様において、凝集体はヒアルロナン、キトサン及び薬剤を含む。他の態様において、組成物は、ヒアルロナン、キトサン及び薬剤の１つのみ又は２つを含む凝集体を含む。一態様において、組成物は、保管及び／又は患者への直接の送達に適切である乾燥した形態にある。他の態様において、組成物は液体担体、例えば水を含む。
なお、他の実施形態において、本開示は、その必要がある患者を処置する方法を提供する。例えば、本開示の組成物は、疼痛緩和等の有益な結果を達成するため、及び／又は関節の潤滑を高めるため、及び／又は関節炎の一定の形態の元にあるプロセスを阻害するために関節に苦痛のある患者の関節に注射されてもよい。別の例として、本開示の組成物は、苦痛を起こしている元にある症状の構造的な治癒又は修復を達成するために関節に苦痛のある患者の関節に注射されてもよい。例示の関節は膝、腰、肘、手首、くるぶし、肩、指又は足指関節を含む。関節は、手首の５つの関節である手根中手骨（ＣＭＣ）関節のいずれか１つ又は複数であってもよい。第３の例として、本開示の組成物は、軟組織、例えば損傷されるか炎症を起こした軟組織、例えばテニス肘として知られる症状を生じさせる軟組織に注射されてもよい。
例えば、一実施形態において、本開示は、アミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサンを含む、粒子と称されてもよい凝集体を含む組成物を提供する。粒子はまた、粒子に組み込まれた医薬品活性成分(active pharmaceutical ingredient)（ＡＰＩ）を含む。粒子は、球体でも球体でなくてもよく、約２０ミクロンを超え、例えば、２１、又は２２、又は２３、又は２４、又は２５、又は２６、又は２７、又は２８、又は２９、又は３０ミクロンを超え、かつ約１００ミクロン未満、例えば１１０ミクロン、又は１０５、又は１００、又は９５、又は９０ミクロン未満の粒子の直径を特徴としてもよい。架橋キトサンは、架橋剤とキトサンとの反応生成物であり、ここで、キトサンは、７５％を超えかつ９５％未満、又はその値を含む範囲、例えば８０％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有する。ＡＰＩは、例えば、ＮＳＡＩＤであってもよく、ここで、例示のＮＳＡＩＤは塩又は酸形態のジクロフェナクである。場合によって、ジクロフェナクの少なくとも幾つかは結晶性形態で存在する。架橋キトサンはキトサンと架橋剤との反応生成物であり、ここで、架橋剤は、アミノ基と共有結合で反応する架橋剤から場合によって選択される。例えば、一実施形態において、架橋キトサンは、グルタルアルデヒドと、共有結合の架橋を与えるキトサンとの反応生成物である。架橋キトサンは、架橋剤とキトサンとの反応生成物であり、ここで、キトサンはその極限粘度を特徴としてもよい。キトサンの極限粘度は１から１，０００ｍＰａｓの間であり、５０ｍＰａｓを超えかつ３００ｍＰａｓ未満の極限粘度を有するキトサンから場合によって選択されてもよい。本組成物は、１８−２７のゲージの針を介してＡＰＩを必要とする対象に組成物が注射可能となるように液体媒体を含んでもよい。このように、本開示は、一実施形態において、粒子を含む組成物を提供し、前記粒子は、アミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサン、及び前記粒子に組み込まれた医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含み、前記粒子は、２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有し、ここで、架橋キトサンは、架橋剤と、７５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有するキトサンとの反応生成物であり、ここで、ＡＰＩはジクロフェナクであり、ジクロフェナクの少なくとも幾つかは結晶性形態にあり、架橋キトサンはグルタルアルデヒドと、共有結合の架橋を与えるキトサンとの反応生成物であり、架橋キトサンは、架橋剤とキトサンとの反応生成物であり、５０ｍＰａｓを超えかつ３００ｍＰａｓ未満の極限粘度を有する。
別の実施形態において、本開示は、粒子から活性薬剤（ＡＰＩ）の徐放性(sustained release)デポーを与える、対象の滑液(synovial fluid)及び関節滑膜(synovium)に粒子を送達する方法を提供する。本方法は、本明細書に開示される実施形態のいずれかによる粒子を含む液体組成物をもたらす工程を含み、例えば、前記粒子は、アミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサン、及び前記粒子に組み込まれた活性薬剤（ＡＰＩ）を含み、前記粒子は、２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有し、ここで、架橋キトサンは、架橋剤と、７５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有するキトサンとの反応生成物である。本方法はまた、液体組成物含有する、１８−２７のゲージの範囲の針を有する注射器をもたらす工程を含む。注射器は、針を介してその必要がある対象に液体組成物を関節内注射するために使用される。粒子は大きすぎてマクロファージは呑み込むことができないが、粒子上に存在するアミノ基により粒子は関節滑膜と相互作用し、その内部に包埋されるようになる、すなわち、それらは対象の関節滑膜の細胞中に存在する。粒子は、直接、周囲の関節滑膜にＡＰＩを放出し、例えば２４時間を超える、ＡＰＩの徐放をもたらすことができる。粒子は、場合によって、対象へ注射したら直ちにＡＰＩのバーストを送達し、その後少なくとも２４時間の長期間にわたってＡＰＩを放出してもよい。場合によって、ＡＰＩはジクロフェナクであり、ジクロフェナクの少なくとも幾つかは結晶性形態の粒子に組み込まれている。
１つ又は複数の実施形態の詳細は、以下の記載に述べる。例示の一実施形態に関連して例証又は記載される特色は、他の実施形態の特色と組み合わせてもよい。他の特色、目的及び利点は、記載、図面及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。更に、本明細書において参照されるすべての特許及び特許出願の開示は、その全体が参照によって組み込まれる。
本開示、その性質及び様々な利点の例示の特色は、添付の図、様々な実施形態の以下の詳細な記載から明らかになるであろう。
図１は、ヒツジ滑膜層、本開示による、ジクロフェナク活性薬剤を有するキトサン凝集体が包埋された、１Ａ、１Ｂ、１Ｃ及び１Ｄのラベルを付けた４つの図形を提供する。 図２は、ジクロフェナクを含むキトサン凝集体（それらの幾つかは番号１のラベルを付けている）を、関節滑膜マクロファージの内側でなく、近傍に示す（それらの幾つかは番号２のラベルを付けている）ヒツジ滑膜層の図形を提供する。
（００１１） 一実施形態として、本開示は、液体担体中に分布した凝集体を含む組成物を提供する。一態様において、凝集体は、キトサン、架橋キトサン及び医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含む。一態様において、凝集体はヒアルロナン、キトサン及び薬剤を含む。担体は水を含んでもよく、場合によって塩（複数可）及び追加の薬剤（複数可）等の成分を含んでよい。本組成物、組成物の様々な成分及び組成物を調製及び使用する方法は、以下の節に記載する。更に、本開示は、読み手が本開示を理解する助けとして下記に定義される様々な用語及び短縮形を利用する。
定義及び規則
（００１２） 凝集体とは、１種又は複数の化学種（ポリマー鎖又は薬剤等）を一緒に集めて接着性又は密着性の単位にした結果を指す。凝集体の成分は、互いに結合して、化学種の近隣の凝集とは異なる個別の単位を作る。凝集体という用語は本明細書において頻繁に使用されるが、固まり、又は粒子、又は集団、又は顆粒、又はクラスター、又はビーズ、又は球体、又は小球体、マイクロカプセル、又は微粒子という用語は、本明細書におけるいずれの言及でも用語「凝集体」と置き換えることができる代替用語である。
（００１３） ＣＡはキトサンから形成された凝集体を指す。ＣＡはヒアルロナン又は薬剤を含まないが、他の成分を含んでいてもよい。
（００１４） ＣＤＡは薬物を装填したキトサン含有凝集体を指す。ＣＤＡはヒアルロナンを含まないが、他の成分を含んでいてもよい。
（００１５） ＣＨＡは、キトサン及びヒアルロナンの両方から形成された凝集体を指す。ＣＨＡはいかなる薬剤も含まないが、他の成分を含んでいてもよい。
（００１６） ＣＨＤＡは、キトサン及びヒアルロナンの両方から形成された、薬物を装填した凝集体を指す。ＣＨＤＡは他の成分を含んでいてもよい。
（００１７） ＤＡは、薬剤（薬物）から形成された凝集体を指す。ＤＡは、キトサン又はヒアルロナンのいずれかを含まないが、他の成分を含んでいてもよい。
（００１８） ＨＡは、ヒアルロナンから形成された凝集体を指す。ＨＡはキトサン又は薬剤のいずれかを含まないが、他の成分を含んでいてもよい。
（００１９） ＨＤＡは薬物を装填したヒアルロナン含有する凝集体を指す。ＨＤＡはキトサンを含まないが、他の成分を含んでいてもよい。
（００２０） ｎＡＣは、非凝集のキトサンを指し、言いかえればそれ自体又は他の材料との凝集体の一部でなく、その代りに、担体中に溶解した、そうでなければ分散したキトサンを指す。
（００２１） ｎＡＤは、非凝集の薬剤（薬物）を指し、言いかえればそれ自体又は他の材料との凝集体の一部でなく、その代りに、担体中に溶解した、そうでなければ分散した薬物を指す。
（００２２） ｎＡＨは、非凝集のヒアルロナンを指し、言いかえればそれ自体又は他の材料との凝集体の一部でなく、その代りに、担体中に溶解した、そうでなければ分散したヒアルロナンを指す。
（００２３） 凝集体及び本開示の組成物の両方は複数の薬物を含んでもよい。単一の凝集体が複数の薬物を含む場合、凝集体は、凝集体の命名において「Ｄ」の代わりに、第１の薬物、第２の薬物、第３の薬物等を指すために、規則ｄ１、ｄ２、ｄ３等を使用して短縮されてもよい。例えば、２種の異なる薬物を有するＣＤＡは、Ｃｄ１ｄ２Ａと称されてもよい。同様に、３種の異なる薬物を有するＣＨＤＡはＣＨｄ１ｄ２ｄ３Ａと称されてもよい。組成物が複数の薬物を含む場合、成分名は複数の薬物の存在を示すことができる。例えば、組成物がＣＤＡ及びＨＤＡを含み、ＣＤＡ中の薬物がＨＤＡ中の薬物とは異なる場合、場合によって、組成物はＣｄ１Ａ及びＨｄ２Ａを含有すると記載されてもよい。ｄ１、ｄ２等の命名法が指定されない場合、場合によって、「Ｄ」は、凝集体中の複数の薬物を示す必要に応じてｄ１、ｄ２等で置き換えてよく、同様に組成物中の複数の薬物で置き換えてもよい。
（００２４） 対象とは、処置を必要とする人又は動物を指す。例えば、関節痛、関節の炎症、関節中の軟骨の劣化、骨関節症、及び／又は、関節リウマチ等の関節の苦痛を有する人又は動物（例えばイヌ、ネコ、ウマ）が、処置を必要とする人である。
凝集体成分
（００２５） 本開示の凝集体はヒアルロナンを含有してもよい。本明細書において使用される場合、用語「ヒアルロン酸」、「ヒアルロナン」及び「ＨＡ」は、ヒアルロン酸、又は、とりわけナトリウム、カリウム及びマグネシウム及びカルシウム塩等のヒアルロン酸の塩を指すために交換可能に使用される。ヒアルロナンはグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）であり、詳細にはヒアルロナンは、交互するグルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンの単位で構成された非分岐多糖類である。これは、軟骨の細胞外マトリックス中で見られる粘弾性材料である。ヒアルロナンは、関節軟骨の弾力のある特性を与える、凝集したプロテオグリカンの重要な構成成分である。ヒアルロナンは、関節を和らげる軟骨を強く柔軟に維持するのを助けるだけでなく、関節を潤滑する滑液の供給を高めるのを助ける。
（００２６） このように、一実施形態において、本開示は、キトサン及び架橋キトサンの少なくとも１つを含む、液体担体中に懸濁した粒子；ヒアルロン酸、並びに緩衝剤及び水の少なくとも１つを含む液体担体を含む組成物を提供する。場合によって、粒子は活性薬剤（ＡＰＩ）を組み込み、粒子は、投与によって組成物を受ける、その必要がある対象へのＡＰＩの長期放出を提供する。また場合によって、ヒアルロン酸は、投与によって組成物を受ける対象の関節への粘度補給を提供する。
（００２７） 更に、本開示の実施形態は、ヒアルロン酸、並びにキトサン及び架橋キトサンの少なくとも１つを含む粒子を提供する。一実施形態において、粒子は架橋キトサンを含む。場合によって、粒子は、活性薬剤（ＡＰＩ）を更に含み、ここで、ＡＰＩはジクロフェナク等のＮＳＡＩＤであってもよく、場合によって、ジクロフェナクの少なくとも幾つかは結晶性形態にある。
（００２８） グルクロン酸残基の存在により、特にグルクロン酸残基のカルボン酸基により、ヒアルロナンは酸性材料である。従って、ヒアルロナンは温和なアルカリ水に可溶性であり、正に帯電した種、例えばキトサンと、イオン錯体、すなわち塩を形成する。
（００２９） 本開示において使用されるヒアルロナンは、天然製剤、合成製剤又はこれらの組み合わせを含む。ヒアルロナンは液体又は固体の製剤中で提供することができ、ヒアルロナンは、純粋な液体形態、又は様々な濃度の溶媒中にあってよい。
（００３０） ヒアルロナンは、本組成物及び方法で使用するのにより適切にするために物理的に又は化学的に改質されてもよい。ＨＡにされてもよい化学的改質の例は、ＨＡの４種の反応性基、すなわちアセトアミド、カルボキシル、ヒドロキシル及び還元する末端の１つ又は複数とのいずれかの反応を含む。
（００３１） ヒアルロナンはポリマー分子であるので、数平均又は重量平均分子量を特徴とすることができる。本開示による使用に適切なヒアルロナンは様々な分子量を有することができる。適切な分子量は、約４００から５００キロダルトン（ｋＤａ）の低い分子量（「ＬＷＭ」）のヒアルロナン、約５００−１０００ｋＤａの中間分子量（「ＭＭＷ」）のヒアルロナン、及び約１．０−４．０のメガダルトン（ＭＤａ）の高分子量（「ＨＭＷ」）のヒアルロナンを含む。様々な任意選択の実施形態において、ヒアルロナンは１５０ＫＤａから１．８ＭＤａの分子量を有する。様々な実施形態において、分子量は、例えば、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００ｋＤａ以上、又は本明細書において推論可能な任意の範囲であってもよい。例示の２種のヒアルロナンは、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）からのヒアルロン酸ナトリウムであり、約７３０ｋＤａの平均分子量、粘度（Ｍｗ）を有するもの、及び１３５０ｋＤａの平均分子量、粘度（Ｍｗ）を有するものであり、白色粉体又は繊維質の凝集体として供給業者から入手される。
（００３２） 化学改質された又は架橋したヒアルロナンは、上記とは非常に異なる分子量があってもよい。それとは関係なく、これらの材料もまた、好ましくは製剤中で非架橋、又は軽く架橋したＨＡと組み合わせた場合、本発明において適用可能である。
（００３３） ヒアルロナンの適切な供給源は、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ ＵＳ Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を含む。
（００３４） 本開示の凝集体はキトサンを含んでもよい。キトサンは、典型的にはキチンに由来し、キチンは、他の供給源の中でも小エビ及びカニから得られるような甲殻類の殻の主要成分として見られる。化学的には、キチンは、β−（１，４）連結−Ｎ−アセチルグルコサミン残基の線状ポリマーである。キチンの脱アセチル化によってキトサンが生成し、ここで、キトサンは、ランダムに分布したＤ−グルコサミン（すなわち脱アセチルしたＮ−アセチルグルコサミン）とＮ−アセチルグルコサミン残基とのコポリマーである。このように、キトサンの脱アセチル化反応はＮ−アセチル基をアミノ基に変換する。
（００３５） アミノ基の存在により、キトサンは、約６．２−７．０であるグルコサミン残基のｐＫａ値を有する弱塩基である。従って、キトサンは中性及びアルカリのｐＨで不溶性である。しかし、酸性媒質中で、キトサン並びに架橋キトサンのアミノ基はプロトン化され、結果として可溶性で、正に帯電した多糖類、すなわちキトサンの塩が得られる。
（００３６） キトサンが正の電荷を担持し得る程度は、脱アセチル化がその形成中に起こる程度に依存する。キトサン製造業者は、製造し販売する様々なキトサンについて脱アセチル化度（ＤＤＡ）を測定し報告している。一般に本開示のキトサンは、６０％を超える、又は７０％を超える、又は８０％を超える、又は８５％を超える、又は９０％を超える、又は９２％を超える、又は９４％を超えるＤＤＡを有する。キトサンはまた最大のＤＤＡに関して記載されてもよく、様々な実施形態において、キトサンのＤＤＡは、１００％未満又は９５％未満、又は９３％未満である。例えば、適切なキトサンは約８０−９５％のＤＤＡを有してよいが、別の適切なキトサンは８５−９５％のＤＤＡを有してもよい。本開示の粒子に適切なＤＤＡの他の範囲は、本明細書のどこか他のところで提供される。
（００３７） キトサンはその分子量（ＭＷ）に関して特徴づけられてもよい。その分子量はダルトン（ｇ／ｍｏｌ）に関して表わされてもよい。時には、特に非常に高分子量のキトサンについて、製造業者は分子量の指標として溶液粘度測定を提供している。本組成物で使用されるキトサンは、一般に、例示の範囲が、１０ｋ−５０ｋ、３０ｋ−８０ｋ、６０−１５０ｋ、１１０−１５０ｋ、１５０−２５０ｋ、１５０−３５０ｋ、１５０−５００ｋ及び２５０−６００ｋｇ／ｍｏｌから選択されてもよい範囲の分子量を有し、ここで、分子量は対応するキトサンアセタートの分子量に基づいて測定されてもよい。見掛け粘度値が分子量を特徴とするために使用される場合、適切な粘度値は、約１から約１，０００ｍＰａｓ、又は約１０から約１，０００ｍＰａｓである。本開示の粒子に適切な他の極限粘度範囲は、本明細書のどこか他のところで提供される。
（００３８） キチン及びキトサンの両方は、多数の供給業者から容易に入手可能である。実際、セルロース以外で、キチンは地球上で見られる最も豊富な多糖類であり、２つの供給源を挙げるなら甲殻類及び菌の供給源の両方から入手可能である。キトサンの適切な供給業者は、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ（ＦＭＣ ＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡの事業単位）、Ｈｅｐｐｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ ＧｍｂＨ（Ｌａｎｄｓｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ａｌｔａｋｉｔｉｎ Ｃｏｒｐ．（Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＣＡ）及びＭｙｃｏｄｅｖ Ｇｒｏｕｐ（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｃａｎａｄａ）を含む。これらの会社のそれぞれは、本開示の組成物中で使用されてもよいキトサン生成物を売っている。
（００３９） 本開示の組成物を殺菌する方法は、成分（複数可）の分子量を変化させてもよい。例えば、電離放射線が組成物を殺菌するために使用される場合、殺菌していない組成物のポリマーの分子量は無菌の組成物のポリマーの目標分子量より大きい必要があり得るが、それは、電離放射線がポリマー鎖の開裂と、それにより分子量の低下とを引き起こす場合があるからである。電離放射線が殺菌に使用されることが構想される事例において、キトサンの分子量は２５０ｋｇ／ｍｏｌを超えてよい。
（００４０） 本開示の凝集体は薬剤を含んでいてもよい。代替として、又は更に、薬剤は担体中に溶解又は懸濁されてもよい。薬剤は、症候を制御することができ、例えば、疼痛を軽減することができ、又は、疾患進展を防止することができ、例えば、軟骨損傷の進展を邪魔することができる。本開示の組成物は、複数の薬剤を含んでもよく、例えば、組成物は、疼痛を軽減する第１の薬剤、並びに、疾患進展を防止する及び／又は関節の健康状態を改善する第２の薬剤を含んでもよい。薬剤は、本明細書において薬物、又は医薬品活性成分（ＡＰＩ）と称されてもよく、これらの用語は本明細書において同義的に使用される。
（００４１） 一態様において、薬剤は、鎮痛薬としても知られる鎮痛剤である。本開示に適切な種類の鎮痛薬はオピオイドである。適切なオピオイドは、パラセタモール／アセトアミノフェン、デクストロプロポキシフェン、コデイン、トラマドール、タペンタドール、アニレリジン、アルファプロジン、ペチジン、ヒドロコドン、モルヒネ、オキシコドン、メタドン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルホン、レボルファノール、７−ヒドロキシミトラギニン（７−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｔｒａｇｙｎｉｎｅ）、ブプレノルフィン、フェンタニル、サフェンタニル、ブロマドール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、カルフェンタニル、及びヘロインから選択されてもよい。これらの具体的なオピオイドは、中毒を引き起こす傾向があり、麻酔性オピオイドとして知られる。
（００４２） 前に言及したように、本明細書において開示される凝集体はキトサンを含んでいてもよい。関節の苦痛を有する対象にキトサンを導入することの利益の１つは、恐らく過剰プロトンの吸収によってキトサンが炎症性疼痛に鎮痛効果があると示されたことである（参照：例えばＯｋａｍｏｔｏ Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ４９：２４９−２５２（２００２））。このように、キトサンは、ヒアルロナン及び／又は薬剤のための担体の機能を提供するだけでなく、関節の苦痛と関係する疼痛を軽減する恩恵を提供し得る。一部には、これは、キトサンがインビボでグルコサミンに分解するという事実による可能性があるが、それは後に本明細書において論じるＤＭＯＡＤである。
（００４３） 従って、一実施形態において、本開示は、グルコサミンをその必要がある対象に送達する方法であって、グルコサミンを必要とする対象の関節に、キトサンを含む組成物を投与する工程を含む方法を提供する。追加の実施形態において、以下の例示の特色のいずれか１つ又は複数は、その必要がある対象にグルコサミンを送達する方法を更に特徴とすることができる：グルコサミンは、キトサンの劣化によって長期間にわたって送達される；キトサンは、グルコサミンの対象への長期送達を提供するリゾチームによって分解性である；キトサンの単独注射は、無毒な濃度でグルコサミンの対象への長期送達を提供する；キトサンの単独注射は、鎮痛薬濃度でグルコサミンの対象への長期送達を提供する；キトサンの単独注射は、非炎症性の濃度でグルコサミンの対象への長期送達を提供する；キトサンの単独注射は、疾患を修飾する量のグルコサミンを関節へ提供する。
（００４４） 一態様において、薬剤はステロイド、すなわちコルチコステロイドである。コルチコステロイド投薬の例は、トリアムシノロン、コルチゾン、プレドニゾン、デクサメタゾーン及びメチルプレドニゾロンを含む。低用量のステロイドは、関節リウマチを含む症状を有する人々のための疼痛及び硬直からかなりの救済を提供し得る。ステロイドのより高用量の一時使用は、人が厳しい関節炎再燃から回復するのを助け得る。経口的に又は静脈内に摂取された場合、ステロイドは多数の副作用を有することがある。本開示によって関節腔にステロイドを直接送達することにより、これらの副作用のリスクは大幅に低減される。
（００４５） 一態様において、薬剤は非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。例示のＮＳＡＩＤは、以下を含むがこれらに限定されない（挙げたＮＳＡＩＤの一般の商品名（複数可）を、ＮＳＡＩＤの一般的名称の後に挿入句として示す。）：アスピリン（Ａｎａｃｉｎ，Ａｓｃｒｉｐｔｉｎ，Ｂａｙｅｒ，Ｂｕｆｆｅｒｉｎ，Ｅｃｏｔｒｉｎ，Ｅｘｃｅｄｒｉｎ）、コリン及びサリチル酸マグネシウム（ＣＭＴ、Ｔｒｉｃｏｓａｌ、Ｔｒｉｌｉｓａｔｅ）、サリチル酸コリン（Ａｒｔｈｒｏｐａｎ）、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）、ジクロフェナクカリウム（Ｃａｔａｆｌａｍ）、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ， Ｖｏｌｔａｒｅｎ ＸＲ）、ミソプロストールを含むジクロフェナクナトリウム（Ａｒｔｈｒｏｔｅｃ）、ジフルニサル（Ｄｏｌｏｂｉｄ）、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ、Ｌｏｄｉｎｅ ＸＬ）、フェノプロフェンカルシウム（Ｎａｌｆｏｎ）、フルルビプロフェン（Ａｎｓａｉｄ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ、Ｍｏｔｒｉｎ ＩＢ、Ｎｕｐｒｉｎ）、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ、Ｉｎｄｏｃｉｎ ＳＲ）、ケトプロフェン（Ａｃｔｒｏｎ，Ｏｒｕｄｉｓ，Ｏｒｕｄｉｓ ＫＴ，Ｏｒｕｖａｉｌ）、サリチル酸マグネシウム（Ａｒｔｈｒｉｔａｂ，Ｂａｙｅｒ Ｓｅｌｅｃｔ，Ｄｏａｎ’ｓ Ｐｉｌｌｓ，Ｍａｇａｎ，Ｍｏｂｉｄｉｎ，Ｍｏｂｏｇｅｓｉｃ）、メクロフェナム酸ナトリウム（Ｍｅｃｌｏｍｅｎ）、メフェナム酸（Ｐｏｎｓｔｅｌ）、メロキシカム（Ｍｏｂｉｃ）、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ、Ｎａｐｒｅｌａｎ）、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ、Ａｎａｐｒｏｘ）、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ）、ピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ）、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ）、サルサレート（Ａｍｉｇｅｓｉｃ、Ａｎａｆｌｅｘ ７５０、Ｄｉｓａｌｃｉｄ、Ｍａｒｔｈｒｉｔｉｃ、Ｍｏｎｏ−Ｇｅｓｉｃ、Ｓａｌｆｌｅｘ、Ｓａｌｓｉｔａｂ）、サリチル酸ナトリウム、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ）、トルメチンナトリウム（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ）、及びバルデコキシブ（Ｂｅｘｔｒａ）。
（００４６） 一態様において、本開示は、ＮＳＡＩＤ及びキトサンを含む製剤を提供する。別の態様において、本開示は、ＮＳＡＩＤ及びヒアルロン酸を含む製剤を提供する。別の態様において、本開示は、ＮＳＡＩＤ、キトサン及びヒアルロン酸を含む製剤を提供する。先に言及したように、凝集体は小球体の形態をしていてもよい。下記に論じるように、ＮＳＡＩＤはシクロオキシゲナーゼを阻害し、その結果、プロスタグランジン合成を阻害することができる。
（００４７） 一態様において、薬剤はジクロフェナクであり、これは、またＡｃｌｏｎａｃ、Ｃａｔａｆｌａｍ及びＶｏｌｔａｒｅｎを含む幾つかの商品名によって知られる。ＩＵＰＡＣ命名法によると、ジクロフェナクは２−（２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）フェニル）酢酸として知られる。ジクロフェナクの正確な生物学的作用機序は完全にはわかっていない。その抗炎症、解熱及び鎮痛作用に対する原因である基本的メカニズムは、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の阻害によるプロスタグランジン合成の阻害であると考えられる。研究によると、ジクロフェナクはトロンボキサン−プロスタノイド受容体を阻害し、アラキドン酸放出及び取り込みに影響を与え、リポキシゲナーゼ酵素を阻害し、酸化窒素−ｃＧＭＰの抗侵害受容の経路を活性化することができることを示唆する。他の新規のＭＯＡは、基質Ｐの阻害、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲガンマ）の阻害、酸感知イオンチャネルの遮断、インターロイキン６産生の変化、及びＮ−メチル−Ｄ−アスパルタート（ＮＭＤＡ）受容体痛覚過敏の阻害を含んでもよい。一態様において、本発明は、ジクロフェナクを含む組成物及び方法を提供する。ジクロフェナクの恩恵は、例えば、Ｇａｎ，Ｔ．Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｏｐｉｎｉｏｎ， ２６（７）：１７１５−１７３１（２０１０）に開示されている。
（００４８） 別の態様において、薬剤はインドメタシンであり、これはＩＵＰＡＣ命名法によると、２−｛１−［（４−クロロフェニル）カルボニル］−５−メトキシ−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル｝酢酸と命名される。また、このＮＳＡＩＤは、他の多数の商品名と一緒にインドメタシンとしても知られる。インドメタシンは、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）１及び２（アラキドン酸からのプロスタグランジン合成に関与する酵素）の非選択的禁止剤である。インドメタシンは臨床的に重要な作用の２つの追加の様式を有する。すなわち：ｉ）コルヒチンに類似する多形核白血球の運動性の阻害；及びｉｉ）サリチラートと同様に軟骨（及び肝臓）のミトコンドリア中の酸化的リン酸化の脱結合。これらの機能は、一緒になって、インドメタシンが鎮痛及び抗炎症の特性の両方を有することを可能にする。一態様において、本発明は、インドメタシンを含む組成物及び方法を提供する。
（００４９） 別の態様において、薬剤はケトプロフェンであり、これはＩＵＰＡＣ命名法によると（ＲＳ）−２−（３−ベンゾイルフェニル）プロパン酸と命名される。ケトプロフェンは、シクロオキシゲナーゼ−１及び−２の（ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２）酵素を可逆的に阻害することにより、その解熱、鎮痛及び抗炎症の特性のために使用され、これは炎症誘発性のプロスタグランジン前駆体の産生を減少させる。一態様において、本発明は、ケトプロフェンを含む組成物及び方法を提供する。
（００５０） 別の態様において、薬剤はイブプロフェンであり、ＩＵＰＡＣ命名法によるとＲＳ）−２−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）プロパン酸と命名される。イブプロフェンは、アラキドン酸をプロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）に変換する酵素シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）を阻害することによって機能する。ＰＧＨ２は、次に、他の酵素によって疼痛、炎症及び熱の媒介物質である他の幾つかのプロスタグランジンに変換される。イブプロフェンは関節リウマチに対する一般的な処置であり、本開示の組成物及び方法のいずれにも含むことができる。
（００５１） 一態様において、薬剤は、一般にＤＭＡＲＤと短縮される疾患修飾性抗リウマチ薬である。ＤＭＡＲＤは、水酸化クロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ）、レフルノミド（Ａｒａｖａ）、シクロスポリン（Ｎｅｏｒａｌ）、スルファサラジン（Ｓｕｌｆａｓａｌaｚｉｎｅ）（アザルフィジン）、メトトレキセート（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ， Ｔｒｅｘａｌｌ）、アザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ）、及び様々なバイオロジクス（Ａｃｔｅｍｒａ、Ｃｉｍｚｉａ、Ｅｎｂｒｅｌ、Ｈｕｍｉｒａ、Ｋｉｎｅｒｅｔ、Ｏｒｅｎｃｉａ、Ｒｅｍｉｃａｄｅ、Ｒｉｔｕｘａｎ、Ｓｉｍｐｏｎｉ）を含む。
（００５２） 一態様において、薬剤は、一般にＤＭＯＡＤと短縮される疾患修飾性骨関節症（ＯＡ）薬である。ＤＭＯＡＤは、例えば、軟骨異化及び／又は同化作用を標的にすることによって、滑膜層の炎症を標的にすることによって、又は軟骨下骨リモデリングを標的にすることによって、例えば、この組織の再吸収の防止及び／又は石灰化の増進を介して異常な軟骨下骨代謝活性の低下を標的にすることによって骨関節症の進展を低減又は停止する。別の例として、ＤＭＯＡＤはマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）酵素及び／又はアダマリシン（ＡＤＡＭＴＳ）酵素の水準及び／又は活性を低下させることができ、その両方が、プロテオグリカンの破壊、及び関節炎の関節中のコラーゲン網目の分解に関係する。ＤＭＯＡＤは、関節腔においてタンパク質分解酵素（例えばコラゲナーゼ及びゼラチナーゼ）及び／又はサイトカイン（例えばＩＬ−１β、ＩＬ−６又はＴＮＦ−α）を阻害することができる。ＤＭＯＡＤは、例えばアデノシン３受容体、ＭＡＰキナーゼ（例えばｐ３８α）又はＩＫＫを標的にすることによって、炎症促進性のサイトカインに誘発されたシグナル伝達経路を阻害することができる。参照：例えばＭａｒｔｅｌ−Ｐｅｌｌｅｔｅｉｒ Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｏｎｅ ５１：２９７−３１１（２０１２）．
（００５３） 本開示において使用するのに適切なＤＭＯＡＤは、コンドロイチン硫酸（例えば、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｑｕｅ Ｓｏｃｉｅｔｅ Ａｎｏｎｙｍｅがスポンサーとなる臨床試験を参照）を含む、グルコサミン硫酸（例えば、Ｒｏｔｔａｐｈａｒｍがスポンサーとなった臨床試験を参照）、ジアセレイン（例えば、Ｎｅｇｍａがスポンサーとなった治験を参照）及びドキシサイクリン（例えば、ＮＩＨがスポンサーとなった治験を参照）を含む。他の適切なＤＭＯＡＤは、化学的に硫酸化したキシロピラノース（ｘｙｌａｎｏｐｙｒａｎｏｓｅ）であるカルシウムペントサンポリ硫酸（ＣａＰＰＳ）、Ｌ−Ｎ６−イミノエチル−Ｌ−リジン（Ｌ−Ｎ６−ｉｍｍｉｎｏ ｅｔｈｙｌ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ）等のｉＮＯＳ阻害薬及びＳＤ−６０１０（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００５６５８１２）、骨形成因子７（ＢＭＰ−７）としても知られる骨形成タンパク質１（ＯＰ−１）（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００４５６１５７を参照）、線維芽細胞成長因子１８（ＦＧＦ−１８、ＮＩＨ登録ＮＣＴ００９１１４６９、ＮＣＴ０１０３３９９４及びＮＣＴ０１０６６８７１）、ＰＧ−５３０７４２及びＰＧ−１１６８００（ＮＩＨ登録ＮＣＴ０００４１７５６）、アグリカナーゼ（ＡＧＧ−５２３、ＮＩＨ登録ＮＣＴ００４２７６８７及びＮＣＴ００４５４２９８）、ＩＬ−１Ｒａ（Ａｎａｋｉｎｒａ、ＮＩＨ登録ＮＣＴ００１１０９１６）、カナキヌマブ（ＡＣＺ８８５、ＮＩＨ登録ＮＣＴ０１１６０８２２）、ＡＭＧ １０８（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００１１０９４２）、アダリムマブ（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００２９６８９４及びＮＣＴ００５９７６２３）、インフリキシマブ（ＮＩＨ登録ＮＣＴ０１１４４１４３）、及びＤＬＸ １０５（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００８１９５７２）、Ａ３ＡＲ作動薬（ＣＦ１０１、ＮＩＨ登録ＮＣＴ０１０３４３０６及びＮＣＴ００４２８９７４）、ＰＨ−７９７８０４（ＮＩＨ登録ＮＣＴ０１１０２６６０）、ＳＡＲ−１１３９４５（ＮＩＨ登録ＮＣＴ０１１１３３３３）、リセドロネート、ＳＭＣ０２１（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００７０４８４７）、バリカチブ（ＮＩＨ登録ＮＣＴ００４８６４３４及びＮＣＴ ００３７１６７０）、プロテロス、コレカルシフェロール（ＮＩＨ登録ＮＣＴ０１１７６３４４及びＮＣＴ００５９９８０７）、ラネル酸ストロンチウム、及びリコフェロン（Ｍｅｒｃｋｌｅ ＧｍｂＨ）として知られる２元系ＣＯＸ／５−ＬＯＸ（５−リポキシゲナーゼ）阻害薬を含む。新しいＤＭＯＡＤを発見するために活発に調査されている。
（００５４） 小球体等の凝集体中のキトサンの包含の別の利点は、関節腔へのグルコサミンの徐放性を提供することである。グルコサミンは、関節腔の天然成分であるヒアルロン酸の合成を促進する。更に、グルコサミンは、細胞外の軟骨基質の形成速度を高めるムコ多糖合成に刺激的な影響を及ぼすことができる。このように、本開示のキトサン含有凝集体は、薬剤を単に担持する以上のことをすることができ、またキトサンの粘着付着性の特性により包埋された又は結合する薬剤のより長期的な送達を提供し、キトサンの分解は、疾患修飾性骨関節症薬として機能し得るグルコサミンの関節腔への徐々の放出をもたらす。
（００５５） グルコサミンをもたらすキトサン分解に加えて、一態様において、本開示の製剤はグルコサミン又はグルコサミン硫酸を含む。更に、本開示の製剤は、本明細書に開示される１種又は複数のＮＳＡＩＤを含んでもよい。ＮＳＡＩＤ及びグルコサミン又はグルコサミン硫酸の組み合わせは、相乗的、加法的、又は劣加法的である抗侵害受容相互作用をもたらすことができる。例えば、ＮＳＡＩＤ及びグルコサミン又はグルコサミン硫酸の組み合わせは、慢性炎症の症状において相乗効果を含む抗関節炎の恩恵をもたらすことができる。別の例として、ＮＳＡＩＤ及びグルコサミン又はグルコサミン硫酸の組み合わせは、ＮＳＡＩＤ単独で引き起こされる軟骨プロテオグリカン合成における落ち込みを減少させることができる。
（００５６） 一態様において、薬剤は、生物学的薬剤としても知られるバイオロジクスである。生物学的薬はＤＭＯＡＤとしても機能することができ、実際に、本明細書のどこか他のところで記載されるＤＭＯＡＤの幾つかはバイオロジクスである。バイオロジクスは、例えば、主要なサイトカインの影響を阻害又は調節することによって、又は成長因子に軟骨修復を改善する目標を与えることによって骨関節症を処置するために使用されてもよい。そのようなバイオロジクスは、タネズマブ、β−ＮＧＦ又はその受容体のいずれかに対して向けたヒト化モノクローナル抗体、高親和性の神経成長因子受容体（ＴｒｋＡ）である。参照：例えばＣｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ９：４００−４１０（２０１３）。調査では、タネズマブはＮＳＡＩＤＳと共投与されるべきでないことを示唆する（参照、例えばＳｅｉｄｅｌ，Ｍ．Ｆ．ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｎ．Ｅ．Ｃｕｒｒ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｒｅｐ．６：５８３−５８８（２０１２））。
（００５７） 一態様において、薬剤はＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）と呼ばれるタンパク質分子である。このタンパク質は身体中に天然に存在し、炎症を軽減し損傷を受けた組織の修復を助けることができる。タンパク質が軟骨組織に注射される場合でさえ、損傷部位を標的にすることができないので、ＣＮＰは患者の骨関節症を処置するために使用することはできない。これはＣＮＰが容易に分解され、病気の部位に到達することができないからである。しかし、本開示の製剤に（例えば本明細書に開示される凝集体内に）ＣＮＰを組み込むことによって、ＣＮＰは徐々に放出され、身体のメカニズムによって分解される前に、関節中で有益な効果を持つことができる。例えば、それは、骨関節症の進展を遅らせ及び／又は損傷を受けた組織を修復し始めることができる。
（００５８） 一態様において、薬剤は多血小板血漿（ＰＲＰ）又は自己由来の調整された血清である。別の態様において、薬剤は幹細胞である。これらの薬剤は、関節に様々な有益な材料を送達するのを助け、例えば、成長因子を与えることができ、抗炎症のシグナルを調節する存在を与えることができ、血管新生を調整する存在を与えることができる。ＰＲＰは、血小板及び赤血球凝集を増やすことによって血液凝固時間を短縮することができる。更に、ＰＲＰは、ＰＤＧＦ−ＡＢ及びＴＧＦβ１放出の速度増加を誘発することができる。
（００５９） ＰＲＰ又は幹細胞をキトサン粒子と関節へ共投与すると、その組み合わせの創傷治癒及び抗炎症の特性、並びにヒアルロン酸産生の刺激によって治療の恩恵を与えることができる。キトサン粒子が血小板と関節組織の両方に接着する能力によって、関節中の血小板のための滞留時間を増強する。このように、血小板は小球体に組み込まれてもよいが、小球体、特にキトサンを含む小球体の外側にも接着してよく、又は代替として接着してもよい。キトサンに接着することによって、血小板は、膝又は他の関節の関節腔中により長く残存する。更に、キトサンの分解生成物（すなわちグルコサミン）は、有益に骨関節症の症候及び構造を修飾することができ、このことは、キトサンが関節内に保持され、徐々に分解しそれにより、グルコサミンの持続放出製剤を効果的に与える場合、特に役立つ。
（００６０） ＰＲＰ及び幹細胞は、関節中の自然治癒配列を調整し得る形態形成の生体材料を与える。例えば、一実施形態において、本明細書に開示されるキトサン粒子に血小板溶解物が装填され、次いでヒトの脂肪由来の幹細胞と合わせてインビトロで培養される。組成物からの成長因子の放出は、ＰＤＧＦ−ＡＢ及びＴＧＦβ１放出を増強することができる。キトサン及び幹細胞の組み合わせは、関節腔中の軟組織の再生において相乗作用を与える。
（００６１） このように、一実施形態において、本開示は、キトサン粒子及び細胞を含む組成物を提供する。場合によって、組成物は注射可能な組成物である。場合によって、組成物は幹細胞又は血小板細胞を含む。関連する実施形態において、本開示は、（ａ）対象への細胞治療を施す工程；及び（ｂ）対象にキトサン粒子を投与する工程を含む細胞治療の方法を提供する。任意選択の実施形態において、方法は、以下の例示のパラメーターのいずれか１つ又は複数を更に特徴としてもよい：細胞治療は、対象への血小板に富む血漿（ＰＲＰ）の投与を含む；細胞治療は、対象への幹細胞の投与を含む；キトサン粒子は、細胞治療から活性薬剤の対象中での滞留時間を増強する；キトサン粒子は、細胞治療の有効性を増強する；キトサン粒子は、対象中での細胞の滞留時間を増やす；キトサン粒子は、細胞治療の抗炎症の効能を増強する；キトサン粒子は、キトサン粒子の投与のない状態における成長因子の放出と比較して、成長因子の対象への放出を高める。
（００６２） 先に言及されたように、本発明の製剤は複数の活性薬剤を含んでもよい。例えば、製剤は、本明細書に開示されるＰＲＰとステロイド又は非ステロイドの薬剤の両方を含んでもよい。ＰＲＰをＮＳＡＩＤ（ケトロラク又はジクロフェナク等の）と組み合わせると、炎症の主要な媒介物質であるシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素の阻害をもたらすことができる。組み合わせはまた望ましい鎮痛特性をもたらすことができる。ケトロラクトロメタミンはＣＯＸ及びリポオキシゲナーゼ（ＬＯＸ）酵素を阻害し、これは、プロスタグランジンとロイコトリエンの両方の望ましくない合成を防止することができる。このように、一実施形態において本開示の製剤は、本明細書に開示される凝集体、例えばキトサン微粒子（ｍｉｃｒｏｓｐａｒｔｉｃｌｅｓ）と組み合わせた、ＰＲＰ及びＮＳＡＩＤを含む。
（００６３） 一態様において、薬剤は、アボカド及び大豆油からできた天然の植物抽出物であるアボカド大豆不鹸化物である（しばしばＡＳＵと称される）。栄養補助食品として、ＡＳＵは骨関節症上に有益な効果を有すると臨床研究で示されている。参照：例えばＮＩＨ登録ＮＣＴ０１０６２７３７のプロテアーゼ阻害剤Ｐｉａｓｃｌｅｄｉｎｅ ３００。
（００６４） 一態様において、薬剤はアントシアニン、又はアントシアニンを含有するチェリー抽出物又はチェリージュース抽出物である。アントシアニンは、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２酵素を阻害することが発見され、これらは、アスピリン、イブプロフェンを含む抗炎症薬、並びに関節炎薬であるｃｅｌｅｃｏｘｉｂ及びジクロフェナクによって標的にされる酵素である。チェリーに含まれる幾つかのアントシアニンは、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙの２００４年１２月版の報告によれば、炎症と戦うことになればアスピリンより実際に強力であることがある。
（００６５） 一態様において、薬剤はインビボ産生及び／又はサイトカインの活性を妨げる。そのような薬剤は時にはサイトカイン遮断薬と称される。例えば、ＴＮＦα、ＩＬ１及びＩＬ６サイトカインは関節炎治療の標的にされている。ＴＮＦαに対して活性な抗体薬剤は、インフリキシマブ、アダリムバブ（Ａｄａｌｉｍｕｍｂ）、セルトリズマブペゴル及びゴリムバブを含む。エタネルセプトはＴＮＦαに対して活性な融合タンパク質である。抗ＩＬ−１拮抗薬は融合タンパク質リロナセプト及びヒト化抗体カナキヌマブ（Ｃａｎａｋｉｍｕｍａｂ）を含む。抗体トシリズマブはＩＬ６に対して使用することができる。参照：例えば、サイトカイン遮断薬の議論についてＥｄｗａｒｄｓ，Ｃ．Ｊ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ７３−７４（１）：７１−８２（２００５）；Ｆｅｌｄｍａｎｎ，Ｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１８（１１）：３５３３−３５３６（２００８）；及びＳｉｎｇｈ，Ｒ．， ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１７（３）：２７４−２７９（２００５）。サイトカイン遮断薬は、本開示の組成物中の薬剤として使用されてもよい。
一態様において、薬剤はアトルバスタチン又はその塩（例えばアトルバスタチンカルシウム）である。アトルバスタチンの適切な形態は、リピトールとして売買されている。アトルバスタチン（Ａｔｏｖａｓｔａｔｉｎ）は、軟骨保護（ｃｈｒｏｎｄｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）効果をもたらすか増強するために本開示の製剤に組み込まれてもよい。
（００６７） 一態様において、薬剤はアロプリノールである。規則的に摂取されると、アロプリノールは、身体中の尿酸の量を減少させる。身体中での尿酸の形成は、この物質を関節中で結晶化させる場合があり、次いで、これは痛風で起こるような疼痛発作を引き起こす。尿酸が人の身体中でより少ないと、結晶化はそれほど頻繁に強く起こらず、それにより、関節への害を減少させる。尿酸形成を減少させる、アロプリノール等の物質は、従って、今開示した製剤及び方法に使用するのに適切である。同様に、キサンチン酸化酵素阻害薬として分類されるＦｅｂｕｘｏｓｔａｔ、並びにプロベネシッドは両方とも、血液中の尿酸レベルを低下させることによって予防的な投薬として機能し、本製剤及び方法に含まれてよい。コルヒチンも、痛風の発現を治療し制御するのに有益に使用され、多形核白血球の運動性の阻害薬である。従って、コルヒチンは本開示の製剤及び方法に含まれてよい。
（００６８） 一態様において、薬剤は、調理用の香辛料ウコンの成分であるクルクミンである。ウコンは、ショウガ族の一員であるクルクマ・ロンガという植物の根茎（地下茎）に由来する。これは、インドカレー及びアメリカのカラシナの黄色の着色に対する原因である。クルクミンは、強力な抗酸化性及び抗炎症の特性を有し、ウコンの最も有効な成分である。クルクミンの市販調合剤は３つの主成分：ジフェルロイルメタン、デメトキシクルクミン（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕｉｎ）及びビスデメトキシクルクミンを含み、これらはまとめてクルクミノイドと称され、すべて抗炎活性がある。クルクミンの活動性関節リウマチの処置の効能は、インドで遂行された臨床試験において調査され、Ｃｈａｎｄｒａｎ Ｂ．ａｎｄ Ｇｏｅｌ Ａ．，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．，Ｍａｒｃｈ ９，２０１２によって報告された。著者らは、クルクミンが関節の腫脹及び圧痛、及び結果的に関節リウマチと関係する疼痛を軽減することを観察した。
（００６９） 一態様において、薬剤は水酸化クロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌとしても知られる）である。Ｐｌａｑｕｅｎｉｌは、関節炎による疼痛及び腫脹を減少させることができる疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）である。これは関節損傷を防止し、長期的な身体障害のリスクを減少させることができる。参照：例えばＰａｖｅｌｋａ Ｊｒ．，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ４８：５４２−５４６（１９８９）。またｔｈｅ Ｈｅｒａ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，９８（２）：１５６−１６８（Ｆｅｂ １９９５）を参照、ここで水酸化クロロキンの臨床試験の結果を再検討し、３６週間かけて、水酸化クロロキンが、最近始まった関節リウマチの滑膜炎、疼痛及び身体障害に有意な利点を有していたと結論した。
（００７０） 一態様において、薬剤はレスベラトロールである。核内因子カッパＢ（ＮＦ−κＢ）は、ＴＮＦアルファ及びＩＬ−１ベータ遺伝子の活性化に関与する極めて重要な転写因子である。滑膜細胞中のＮＦ−κＢの活性化は関節炎患者において見られる特色である。レスベラトロールは、ブドウの皮及び赤ワインに特に高い水準で見られるポリフェノール系天然フィトアレキシンであり、ＴＮＦアルファ及びＩＬ−１ベータに誘発されるＮＦ−κＢ活性化の強力で特異的な阻害薬である。参照：例えばＥｌｍａｌｉ Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，３０（１−２）：１−６（Ａｐｒ．２００７）。ここで、レスベラトロールの関節内注射が、実験的に誘発された関節内（ＩＡ）の発症に対して軟骨を保護し得ることを示す証拠を報告した。また参照：Ｇａｏ Ｘｕｚｈｕ，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７１：１２９−１３５（２０１２）。ここでＴｈ１７及びＢ細胞機能の阻害により、レスベラトロールがネズミのコラーゲンに誘発された関節炎を調整することを報告している。
（００７１） 本開示の組成物及び方法において薬剤として使用されてもよい別の例示のＮＦ−κＢ阻害薬は、Ｓａｎｏｆｉによって開発されたＳＡＲ１１３９４５であり、現在臨床試験が行われている（ＮＣＴ０１４６３４８８を参照）。この薬剤はＩＫＫ−β阻害薬としても知られる。
（００７２） 一態様において、薬剤は、アブラナ科植物に見られる化合物であるスルフォラファンである。芽キャベツ及びキャベツは良好な供給源であるが、ブロッコリははるかに良い。調査では、スルフォラファンが抗癌及び抗炎症性の特性を有することを示唆し、今や、英国の研究者は、関節健康状態に対する物質の影響についての最初の主要な研究を行っている。参照：例えばＤａｖｉｄｓｏｎ Ｒ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６５（１２）：３１３０−４０（Ｄｅｃ．２０１３）、ここで、スルフォラファンがＮｒｆ２と無関係に骨関節症に関係する重要なメタロプロテイナーゼの発現を阻害し、ＮＦ−κＢの炎症レベルで遮断し、インビボ及びインビトロで軟骨破壊に対して保護すると報告している。
（００７３） 一態様において、薬剤はレバミピドである。レバミピドは、胃の保護作用及び試験的な胃潰瘍を治癒する効能を有することがわかった２（１Ｈ）−キノリノンのアミノ酸類似体である。更に、レバミピドは、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ分化及びヘムオキシゲナーゼ−１誘発の相互調節によってコラーゲンに誘発された関節炎を抑制することがわかった。参照：例えばＭｏｏｎ Ｓ．Ｊ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．（Ｄｅｃ．２０１３）。この著者らは、関節炎症に対するレバミピドの抑制効果が、Ｔｈ１７とＴｒｅｇの細胞間のアンバランスからの回復及びＮｒｆ２／ＨＯ−１抗酸化剤経路の活性化と関係していることを見いだした。
（００７４） 一態様において、薬剤はラネル酸ストロンチウムである。この薬物は、骨形成を刺激し、骨吸収を低下させることが示されている。これは、閉経後骨粗鬆症及び男性の骨粗鬆症の処置に１００を超える国で認可され承認されている。これは、米国では承認されていないが、伝えられるところによれば、骨粗鬆症には適応外使用で使用されている。参照：例えばＲｅｇｉｎｓｔｅｒ Ｊ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ Ｉｎｔ．，２３（Ｓｕｐｐｌ ２）：Ｓ５７−Ｓ８４：ＯＣ３（２０１２）。フェーズＩＩＩの、変形性膝関節症と臨床診断された５０歳以上の男性及び女性の複数機関の臨床試験は、Ｓｅｒｖｉｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓがスポンサーとなり、ストロンチウムラネル酸を用いる処置が、軟骨劣化のより少ない進展と関係し、ラネル酸ストロンチウムが忍容性良好であることを見いだした。
（００７５） 一態様において、薬剤は８−メチル−Ｎ−バニリル−６−ノネンアミドとしても知られるカプサイシンである。カプサイシンは、トウガラシ属に属する植物であるチリペッパーの活性成分である。クリームの形態で、カプサイシンは、関節炎に対する安全で効果的な処置として記載されている。参照：、例えばＤｅａｌ Ｃ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｔｈｅｒ．，１３（３）：３８３−９５（Ｍａｙ−Ｊｕｎ １９９１）。
（００７６） 一態様において、薬剤はブルシン又はブルシンＮ−オキシドである。Ｙｉｎ Ｗ．，Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．；８８（２−３）：２０５−１４（Ｏｃｔ．２００３）による調査は、これらの薬剤が、インビボで催炎物質及びシグナルを低減させるのに効果的であることを示した。ブルシンの関節内注射を対象とするＣｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，８：３８４３−３８５３（２０１３）調査も参照のこと。
（００７７） 一態様において、薬剤はブラジキニン阻害薬又は拮抗薬である。ブラジキニン（ＢＫ）は、骨関節症を患う人々の関節滑膜中で発生する、血管拡張剤及び炎症性のノナペプチドである。それは、炎症の開始及び持続に寄与する。ブラジキニン阻害薬の関節内の投与（特にブラジキニンＢ２受容体拮抗薬）は、変形性膝関節症に影響を受けた患者において長く永続する鎮痛作用を生ずることが報告された。Ｍｅｎａｒｉｎｉグループ（イタリア）は、骨関節症の処置のための、ＭＥＭ１６１３２と呼ばれるブラジキニン拮抗薬（参照、例えば臨床試験登録ＮＣＴ０１０９１１１６）を開発した。これは、本開示の組成物及び方法において薬剤として利用されてもよい。
（００７８） 一態様において、薬剤はジアセレインとして知られるＮＳＡＩＤである。ジアセレインはアントラキノンと呼ばれる物質の種類である。ジアセレインは、膝及び腰の骨関節症を処置することが見いだされ、欧州での販売を承認された。参照：例えばＰｅｌｌｅｔｉｅｒ Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４３（１０）：２３３９−４８（Ｏｃｔ．２０００）。ジアセレインは、他のＮＳＡＩＤＳと比較して独特の作用機序を有する。ジアセレインは、ＮＳＡＩＤが行うような、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）経路の阻害とは全く異なってインターロイキン１を遮断する。下痢及び肝障害等の胃腸の副作用が、ジアセレインを受ける人々によって観察されている。
（００７９） 一態様において、薬剤はルブリシンである。プロテオグリカン４（ＰＲＧ４）としても知られるｌｕｂｒｉｃｉｎは、浅在帯タンパク質（ＳＺＰ）及び巨核球刺激因子（ＭＳＦ）であり、糖タンパク質である。これはインビボ潤滑剤として機能し、関節の摩擦を低下させるのを助ける。ルブリシンはまた、運動によって誘発された歪エネルギーを分散する能力を滑液にもたらすので、軟骨保護の特色を有する。ルブリシンは天然に存在する材料であるが、しかし、また組み換え版も知られている。組み換えルブリシンは、軟骨表面に結合することが見いだされ、有意に軟骨変性を減少させた。参照：例えばＪａｙ ＧＤ ｅｔ ａｌ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，５６（１１）：３６６２−９，（Ｎｏｖ ２００７）、及びＺａｐｐｏｎｅ Ｂ，Ｊａｙ ＧＤ ｅｔ ａｌ，Ｌａｎｇｍｕｉｒ，２４（４）：１４９５−１５０８，（Ｆｅｂ ２００８）。組み換えルブリシンは、例えばＳＢＨ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）から市販されている。
（００８０） 凝集体（キトサン及び／又はヒアルロナン）の主要な成分は、天然高分子であり、及び／又は天然高分子に由来する。これらの成分は生物学的に適合し、成長因子及び細胞のような生物学的な治療薬と組み合わせて使用されてもよい。例えば、本開示の組成物は、間葉系幹細胞及び脂肪由来の幹細胞（ＡＳＣ）等の幹細胞を含んでもよく、どちらも組織再生中に増殖効率及び多分化能を有している。これらの幹細胞は、本開示の組成物及び方法を使用して、関節腔に送達されてもよい。生物学的治療薬の別の例として、本明細書のどこか他のところで詳細を更に論じるように、成分を血小板に富む血漿（ＰＲＰ）と組み合わせてもよい。
（００８１） 薬剤は、キトサン及びヒアルロナンの１つ又は両方を含む凝集体の内側に含まれているか、又は結合していてもよい。代替として、又は更に、薬剤は、キトサン及びヒアルロナンの１つ又は両方を含んでいる凝集体との混合物中にあってもよい。代替として、又は更に、薬剤は液担体に溶解されてもよい。
（００８２） 代替として、又は更に、薬剤は、凝集体はまた、キトサン又はヒアルロナンを含まない凝集体形態にあってもよい。この場合、薬剤は、担体中に懸濁したミクロ粒子又は他の固体粒子形態にあってもよい。薬剤の他の凝集体形態は、小胞又はリポソーム等の封入された薬剤を含む。担体が水中油型エマルジョンである場合、薬剤は水中に懸濁した油小滴中で凝集されてもよい。
（００８３） 一実施形態において、１種又は複数の薬剤はポリマーで被覆され、次いで、このポリマー被覆薬剤は、本開示の凝集体中に、又は凝集体上に組み込まれる。例示の凝集体はキトサンから形成される。ポリマーコーティングは、少なくとも、コーティングのポリマーと、凝集体を形成するポリマーとの間に引き寄せる相互作用を有する場合に凝集体内に薬剤を維持する役目をすることができる。更に、又は代替として、ポリマーコーティングは、薬物を分離し、それによって対象の薬物受容体との直接接触を遅らせる役目をすることができる。言いかえれば、ポリマーコーティングは、コーティングが薬物のまわりに存在する限り、薬物が細胞受容体と接触することを妨げる。コーティングは、溶解し又はそうでなければ薬物から分離するように生分解性であることが好ましく、それによって、単離された薬物を自由にして細胞受容体と相互作用することができる。ポリマーコーティングの好適な選択によって、薬物は長期間でも短期間でも凝集体内に維持され、次に薬物が凝集体を出た後、コーティングは、薬物のまわりになお存在すれば、場合によって、膜に薬物を包埋しておき、及び／又は徐々に分解して薬物の遅延放出性を与え、対象中で直接の薬物受容体と接触する役目をする。
（００８４） 塗料として薬剤のために使用されてもよい例示のポリマーは、キトサン、ヒアルロン酸、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）及びオイドラギットを含む。薬物は、適切な溶媒又は溶媒系における薬物及びコーティングポリマーの両方の溶解、次いで、噴霧乾燥プロセス又は凍結乾燥プロセスの実施により容易に被覆することができ、それによって被覆薬物の粒子を形成することができる。次いで、これらの粒子は、被覆されない薬物の幾つか又はすべての代わりに被覆された薬物を使用して、本明細書に開示される凝集体を形成するプロセスに含むことができる。
（００８５） 一実施形態において、薬学的に活性な薬剤は、凝集体を形成するポリマーと共有結合で結合される。共有結合は、活性薬剤上の官能基とポリマー上の官能基との間に直接存在してもよい。例えば、カルボン酸基を有する活性薬剤は、アミン又はヒドロキシル基を有するポリマーと直接反応してアミド又はエステルの連結基をそれぞれ形成することができる。代替として、活性薬剤及びポリマーの両方と反応するスペーサー分子を使用することができる。酸性薬物（ジクロフェナク）及び酸性ポリマー（ヒアルロン酸）の状況のスペーサー分子の例は、例えば米国特許第７，８７９，８１７号明細書に開示されている。他の適切なスペーサーは、酸性薬物（例えばジクロフェナク）を塩基性高分子（例えばキトサン）に連結するスペーサーを含む当業者に公知である。
（００８６） 上に論じた薬剤は本開示の組成物及び方法の幾つかの実施形態において存在し有用であるが、本発明の他の実施形態は薬剤を必要としないか、又は含まない。例えば、関節腔中に送達され保持されるキトサンを含む凝集体は、薬剤を含むか含まないかによらず、関節症状に直接の有益な効果をもたらすことができる。例えば、キトサンは骨関節症の関節軟骨上に保護効果があってもよい。キトサンは、また骨関節症（ＯＡ）の初期段階の軟骨において、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−３のｍＲＮＡ発現を抑制することができる。キトサンはまたスーパーオキシド及びヒドロキシルのラジカルを捕捉することができる。キトサン含有製剤の他の利点は本明細書のどこか他のところで論じる。
担体及びその成分
（００８７） 本開示は、患者の関節の苦痛又は軟弱な筋肉の苦痛に取り組むために患者に投与されてもよい組成物を提供する。これらの実施形態のそれぞれの任意選択の成分は、担体、又は担体を形成することができる成分のいずれかである。
（００８８） 一実施形態において、担体は液体である。組成物が注射又は同様の手段によって（例えばカテーテルによって）患者に投与される場合、液体担体は特に好ましい。担体の液体成分は水であってもよく、水を含む担体は本明細書において水性担体と称されてもよい。
（００８９） 水性担体は溶解した塩を含んでいてもよく、ここで適切な塩は、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、リン酸カリウム等を含む。これらの塩は、組成物のオスモル濃度及びイオン濃度を、組成物を受ける対象のものに調節するために担体中に含まれる。一態様において、担体はＰＢＳ緩衝剤であり、これは、等張液を与えるためにリン酸ナトリウム等の１種又は複数の溶解された塩を含有する水溶液である。
（００９０） 水性担体は、更に、又は代替として、溶解されたヒアルロナンを含んでよく、本明細書において溶解されたｎＡＨと称される。ｎＡＨは滑液の天然成分で、粘弾性を関節腔に与える際に有益である。従って、本開示の組成物中へのｎＡＨの包含は、患者の関節腔からの天然ヒアルロナンの消失を克服するのを助ける。
（００９１） 担体中に存在するｎＡＨの濃度は変化してよいが、しかし、例示の実施形態において、ｎＡＨは薬学的有効量で与えられる。他の例示の実施形態において、ｎＡＨは、１〜５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ、１〜７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、１〜１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍｌ、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で液体担体中に存在する。
（００９２） 水性担体の別の任意選択の成分は架橋したヒアルロナンである。例えば、担体はＳＹＮＶＩＳＣ（登録商標）（ｈｙｌａｎ Ｇ−Ｆ ２０）又はＳＹＮＶＩＳＣ−ＯＮＥ（登録商標）であってもよく、前者はニワトリのとさかから製造されたｈｙｌａｎ Ａ及びｈｙｌａｎ Ｂポリマーを含有する粘弾性の高分子量液である。Ｈｙｌａｎ Ｇ−Ｆ ２０中のヒアルロナンは化学的に架橋される。これらの材料はＳａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ Ｕ．Ｓ．ＬＬＣ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）によって販売されている。
（００９３） 水性担体、更に又は代替として、本明細書において溶解ｎＡＣと称される、溶解されたキトサンを含む。本開示の組成物におけるｎＡＣの包含は、組成物の粘度を増やすのを助けることができる。キトサン（ｃｈｉｏｔｏｓａｎ）のインビボ分解産物（複数可）は、また本組成物及び方法の治療上の利点に寄与することができる。先に言及したように、キトサンは、恐らく過剰プロトンの吸収によって炎症性疼痛に鎮痛効果があると示されている（参照：例えばＯｋａｍｏｔｏ Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ４９：２４９−２５２（２００２））。従って、ｎＡＣは、キトサンは、インビボで後に本明細書において論じるＤＭＯＡＤであるグルコサミンに分解するという事実により、関節の苦痛と関係した疼痛を軽減する利点をもたらすことができる。
（００９４） 担体中に存在するｎＡＣの濃度は変化してよいが、例示の実施形態においてｎＡＣは薬学的有効量で与えられる。他の例示の実施形態において、ｎＡＣは、１〜５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ、１〜７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、１〜１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍｌ、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で液体担体中に存在する。
（００９５） 製剤は多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、トレハロースを含んでいてもよい。これらの多価フェノールの化合物は、ヒアルロン酸が解重合するのを防止する抗酸化剤として働くことができる。製剤は、また、ＨＡの劣化を減少させ得る抗酸化化合物であるカルノシンを含んでもよく、又は代替として含んでもよい。
任意選択成分
（００９６） ヒアルロナンとイオン錯体を形成することによる以外の手段によってキトサンを架橋することが所望される場合、架橋は、トリポリホスファート（ＴＰＰ）、グルタルアルデヒド又はゲニピン等の多官能性物質とキトサンを反応させることにより達成されてもよい。シクロペンタ（ｃ）ピラン−４−カルボン酸、１，４ａ−アルファ，５，７ａ−アルファ−テトラヒドロ−１−ヒドロキシ−７−（ヒドロキシメチル）−メチルエステルとしても知られるゲニピンは、天然物であるので、架橋剤として使用の増加が見られる。ゲニピンはゲニポシドの加水分解物であり、クチナシの果実中に見られる。キトサンと容易に架橋するゲニピンの機構は不明であるが、恐らくキトサンの第１級アミン基との反応を含む。ゲニピンは、例えばＣｈａｌｌｅｎｇｅ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔａｉｗａｎから市販されている。
（００９７） キトサンの架橋は、キトサン凝集体の劣化速度に影響するだけでなく、また湿気に曝露した場合、キトサン凝集体が受ける膨潤度にも影響する。一般に、ＰＢＳ等の水性媒体に装入された場合、より大きな架橋で、キトサン凝集体が経験する膨潤量は減少する。本開示の目的に合わせると、より大きな凝集体は、固定したサイズの注射器針又はカニューレに通して送達するのがより困難であるので、過剰な膨潤は望ましくない。また、一般に、本開示の乾燥した凝集体は、水に曝露された（水分が補給される）場合、膨潤することができ、それにより平均粒径を増やす。
（００９８） 架橋剤は本開示の組成物及び方法の幾つかの実施形態に利用されていてもよいが、架橋剤は任意選択の特色である。幾つかの実施形態において、ＴＰＰは組成物及び方法に含まれない。別の実施形態において、追加の架橋剤は組成物及び方法に含まれない、すなわち、架橋はキトサンとヒアルロナンとの間の相互作用によってのみ生じる。
（００９９） しかし、架橋剤が使用される場合、本開示は粒子を含む組成物である実施形態を提供し、ここで、粒子は、アミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサンを含む。架橋キトサンは、キトサンと架橋剤、好ましくはグルタルアルデヒド等のキトサン上に存在するアミノ基と共有結合で反応する架橋剤との反応生成物である。架橋キトサン上のアミノ基の存在を確実にするために、キトサンは、キチンからの脱アセチル化生成物であってもよく、ここで、キトサンは７５％を超えかつ９５％未満の比較的高い脱アセチル化度（ＤＤＡ）であり、この高いＤＤＡは多くのアミノ基をキトサンに与える。出発キトサン上に多数のアミノ基があると、それらのアミノ基の幾つかがグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｅ）等の架橋剤と反応することができて架橋の形成を可能にするが、他のそのアミノ基を未反応−ＮＨ2基として残して、組成物が対象に投与される場合には、プロトン化してアンモニウム（ＮＨ3 +）基を形成する。粒子中に存在するキトサンポリマーのすべてが必ず架橋されるとは限らないことは言及されてもよい。アンモニウム基が生物学的組織と相互作用して粒子と組織との間の接着相互作用を形成するので、架橋キトサンのプロトン化形態は有利である。本明細書に開示される組成物のいずれかの粒子は、一般に球体であってもよく、直径を特徴とすることができる。たとえ粒子が完全に球体ではあり得なくても、概略球体と考えることができ、直径を特徴としてもよく、ここで、球体又は非球体粒子の直径は、描くことができる、粒子の外縁を横切る最長の直線を指す。様々な実施形態において、組成物は、少なくとも１０、又は１１、又は１２、又は１３、又は１４、又は１５、又は１６、又は１７、又は１８、又は１９、又は２０、又は２１、又は２２、又は２３、又は２４、又は２５、又は２６、又は２７、又は２８、又は２９、又は３０、又は３１、又は３２、又は３３、又は３４、又は３５、又は３６、又は３７、又は３８、又は３９、又は少なくとも４０ミクロン、かつ最大１２０、又は１１９、又は１１８、又は１１７、又は１１６、又は１１５、又は１１４、又は１１３、又は１１２、又は１１１、又は１１０、又は１０９、又は１０８、又は１０７、又は１０６、又は１０５、又は１０４、又は１０３、又は１０２、又は１０１、又は１００、又は９９、又は９８、又は９７、又は９６、又は９５、又は９４、又は９３、又は９２、又は９１、又は最大９０ミクロンの範囲内の直径を有する粒子を含む。例えば、粒子は、２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満、又は３０ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有していてもよい。他に明示しない限り、本開示の組成物は、明示の最小値未満（例えば２５ミクロン未満）の直径を有する幾つかの粒子を有していてもよいこと、及び、そのような組成物はやはり、組成物中の粒子の少なくとも幾つかが明示の範囲内の直径を有する限り本開示の組成物であることは理解されるに違いない。明示の上側範囲値を超える幾つかの粒子を有する組成物についても同様である。粒子が例えば１１０ミクロンを超えて大きくなりすぎる場合、処置を必要とする平均的対象が耐えられる満足できるゲージの針を有する注射器を介して投与するのが困難である。一実施形態において、組成物は更に液体媒体を含み、組成物は１８〜２７のゲージの針を介して注射可能である。適切な範囲（例えば２５〜１００ミクロン）内の粒子を有する直径は、例えばスピンディスク技術によって調製されていてもよい。本開示の実施形態のいずれかの粒子は、少なくとも１ｍＰａｓ、かつ１，０００ｍＰａｓ未満、及び本明細書に含まれる値から選択される範囲の極限粘度を有するキトサンから調製されてよい。スピンディスク技術により調製された粒子に関しては、好ましいキトサンは、約５０から約３００ｍＰａｓの範囲の粘度を有する。一般に、出発キトサンは、１ｍＰａｓを超え、又は１０、又は２０、又は３０、又は４０、又は５０、又は６０、又は７０、又は８０、又は９０、又は１００、又は１１０、又は１２０、又は１３０、又は１４０、又は１５０ｍＰａｓを超え、かつ１，０００ｍＰａｓ未満、又は９００、又は８００、又は７００、又は６００、又は５００、又は４００、又は３００、又は２９０、又は２８０、又は２７０、又は２６０、又は２５０、又は２４０、又は２３０、又は２２０、又は２１０、又は２００ｍＰａｓ未満の極限粘度を有してもよい。粒子は本明細書に開示される医薬品活性成分（ＡＰＩ）を組み込んでもよく、ここで、ＡＰＩは場合によってＮＳＡＩＤであり、場合によってジクロフェナクである。ＡＰＩは、ジクロフェナクであってもよく、場合によって、結晶性形態の粒子内に存在してもよく、ここで、任意選択の実施形態において、ＡＰＩの実質的にすべては結晶性形態にあり、又は、ほとんどのＡＰＩは結晶性形態にあり、又は、少なくともＡＰＩの幾つかは結晶性形態にあり、又は、下位の比率のＡＰＩは結晶性形態にあり、ＡＰＩの大半は非晶質形態にある。
（００１００） 従って、一実施形態において、本開示は、粒子を含む組成物であって、粒子がアミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサン、及び粒子に組み込まれた医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含む組成物を提供し、ここで、ＡＰＩは場合によって、ジクロフェナクであり、ジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にあり、粒子は、例えば１０、又は１５、又は２０、又は２５、又は３０ミクロンを超え、かつ最大、例えば１２０、又は１１０、又は１０５、又は１００、又は９５ミクロンの直径を有し、架橋キトサンは、架橋剤とキトサンとの反応生成物であり、ここで、場合によって、グルタルアルデヒドが架橋剤である場合に形成されるように、架橋剤は共有結合の架橋を形成するが、架橋剤は共有結合の架橋又は非共有結合の架橋を形成してもよく、キトサンは、例えば、７５％を超え、又は８０％を超え、又は８５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有し、例えば５０ｍＰａｓを超え、１００ｍＰａｓを超え、かつ３００ｍＰａｓ未満又は２５０ｍＰａｓ未満の極限粘度を有する。本組成物は、１８〜２７のゲージの針を介して注射可能な液体組成物を与えるために液体媒体（水又は水性緩衝剤、又は他の水性担体等）を更に含んでもよい。任意選択の実施形態において、粒子中に存在する唯一のポリマーは、架橋キトサン、又は架橋キトサンと非架橋のキトサンである。本開示の粒子はキトサン粒子と称されてもよく、もし文脈がそれ以外に示さなければ、キトサンから調製された粒子を指し、キトサン鎖間に架橋していても、していなくてもよい。
（００１０１） 従って、一実施形態において、本開示は、粒子を含む組成物であって、粒子がアミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサン、及び粒子に組み込まれた医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含む組成物を提供し、ここで、ＡＰＩはジクロフェナクであり、ジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にあり、粒子は、例えば、２５ミクロンを超えかつ例えば１００ミクロン未満の直径を有し、ここで、架橋キトサンは、グルタルアルデヒドと、例えば、７５％を超えかつ例えば９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有し、例えば５０ｍＰａｓを超えかつ例えば３００ｍＰａｓ未満の極限粘度を有するキトサンとの反応生成物である。本明細書のどこか他のところで言及するように、本開示の実施形態のいずれかの粒子は、少なくとも１ｍＰａｓ、かつ１，０００ｍＰａｓ未満、及び本明細書に含まれる値の極限粘度から選択される範囲を有するキトサンから調製されてよいｍＰａｓ。スピンディスク技術により調製される粒子に関しては、好ましいキトサンは、約５０から約３００ｍＰａｓの範囲の粘度を有する。一般に、出発キトサンは、１ｍＰａｓ、又は１０、又は２０、又は３０、又は４０、又は５０、又は６０、又は７０、又は８０、又は９０、又は１００、又は１１０、又は１２０、又は１３０、又は１４０、又は１５０ｍＰａｓを超え、かつ１，０００ｍＰａｓ未満、又は９００、又は８００、又は７００、又は６００、又は５００、又は４００、又は３００、又は２９０、又は２８０、又は２７０、又は２６０、又は２５０、又は２４０、又は２３０、又は２２０、又は２１０又は２００ｍＰａｓ未満の極限粘度を有してもよい。本組成物は、１８〜２７のゲージの針を介して注射可能な液体組成物を与えるために液体媒体（水又は水性緩衝剤、又は他の水性担体等）を更に含んでもよい。任意選択の実施形態において、粒子中に存在する唯一のポリマーは、架橋キトサン、又は代替として架橋キトサンと非架橋のキトサンの混合物である。しかし、他の実施形態において、キトサン又は架橋キトサン以外のポリマーが粒子中に存在してもよい。
（００１０２） 本明細書のどこか他のところで論じるように、滑液及び対象の関節滑膜に粒子を送達する方法において、この組成物は、粒子から医薬品活性成分（ＡＰＩ）の徐放用のデポーを提供するために使用されてもよく、前記方法は、（ａ）粒子を含む上記の液体組成物を得る工程であって、粒子は、アミノ（ＮＨ２）基を有する架橋キトサン、及び前記粒子に組み込まれる医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含み、粒子は、例えば２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有し（他の選択肢は、少なくとも１０、又は１１、又は１２、又は１３、又は１４、又は１５、又は１６、又は１７、又は１８、又は１９、又は２０、又は２１、又は２２、又は２３、又は２４、又は２５、又は２６、又は２７、又は２８、又は２９、又は３０、又は３１、又は３２、又は３３、又は３４、又は３５、又は３６、又は３７、又は３８、又は３９、又は少なくとも４０ミクロン、かつ最大１２０、又は１１９、又は１１８、又は１１７、又は１１６、又は１１５、又は１１４、又は１１３、又は１１２、又は１１１、又は１１０、又は１０９、又は１０８、又は１０７、又は１０６、又は１０５、又は１０４、又は１０３、又は１０２、又は１０１、又は１００、又は９９、又は９８、又は９７、又は９６、又は９５、又は９４、又は９３、又は９２、又は９１、又は最大９０ミクロンの範囲内の直径を有する粒子を含む組成物である）、ここで、架橋キトサンは、架橋剤と、例えば７５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有するキトサンとの反応生成物であり；（ｂ）１８〜２７のゲージの範囲の針を有する、液体組成物を含有する注射器を得る工程；及び（ｃ）針を介してその必要がある対象に関節内に液体組成物を注射する工程を含む。
（００１０３） 本開示はまた、一実施形態において、水性担体及び水性担体に分散した架橋キトサン粒子を含む注射可能な組成物を提供し、ここで、以下の少なくとも１つは真である：（ａ）大半の粒子は、例えば２５から１００ミクロンの間の直径を有し（他の選択肢は、少なくとも１０、又は１１、又は１２、又は１３、又は１４内に、又は１５、又は１６、又は１７、又は１８、又は１９、又は２０、又は２１、又は２２、又は２３、又は２４、又は２５、又は２６、又は２７、又は２８、又は２９、又は３０、又は３１、又は３２、又は３３、又は３４、又は３５、又は３６、又は３７、又は３８、又は３９、又は少なくとも４０ミクロン、かつ最大１２０、又は１１９、又は１１８、又は１１７、又は１１６、又は１１５、又は１１４、１１３、又は１１２、又は１１１、又は１１０、又は１０９、又は１０８、又は１０７、又は１０６、１０５、又は１０４、又は１０３、又は１０２、又は１０１、又は１００、又は９９、又は９８、又は９７、又は９６、又は９５、又は９４、又は９３、又は９２、又は９１、又は最大９０ミクロンの範囲の直径を有する粒子を含む組成物である。）；（ｂ）キトサンは、例えば、７５−９５％の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有し；及び／又は（ｃ）キトサンは例えば５０〜３００ｍＰａｓの極限粘度を有し；ここで、組成物は医薬品活性成分（ＡＰＩ）を更に含む。追加の実施形態において、本開示は、以下の例示の特色のいずれか１つ又は複数を特徴とする注射可能な組成物を提供する：ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩはジクロフェナクである；ＡＰＩはジクロフェナクであり、ジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にある；ＡＰＩはジクロフェナクであり、ジクロフェナクの実質的にすべては結晶性形態にある；ＡＰＩはジクロフェナクであり、ジクロフェナクは非炎症性の治療薬濃度で粒子から放出される；組成物は、低い、すなわち、非炎症性の内毒素濃度を有する。
（００１０４） 別の実施形態において、本開示は、対象への投与の際に医薬品活性成分（ＡＰＩ）の即時及び長期の放出を達成する、キトサン粒子及びＡＰＩを含む組成物を提供し、放出は、粒子からのＡＰＩの拡散及び粒子の分解のうちの少なくとも１つによって捕捉されたＡＰＩを放出して生じる。追加の実施形態において、本開示は、ＡＰＩの即時及び長期の放出を達成する組成物を提供し、以下の例示の特色のいずれか１つ又は複数を特徴とする：キトサン粒子は架橋キトサンを含む；ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩは、場合によって、全体又は一部が結晶性形態にあってもよいジクロフェナクである；即時の放出が投与から１２時間の時間をかけて生じ、粒子からＡＰＩの５から７０％を放出する；長期の放出が投与から０．５から７日の時間をかけて生じ、粒子からＡＰＩの５から７０％を放出する；粒子は、対象への投与後関節滑膜によって摂取される。例えば、ヒツジの膝へのジクロフェナク結晶を組み込む架橋キトサン粒子の投与は、関節内投与後７日で０．６９ｍｇ／ｍＬの、及び関節内投与後１４日で０．１３ｍｇ／ｍＬのジクロフェナクの滑液濃度を提供することがわかった。対照的に、ジクロフェナク（キトサン粒子に組み込まれていない）の同等量の関節内直接注射は、注射後７日の滑液中に約０．０５ｍｇ／ｍＬのジクロフェナクの濃度を与え、注射後１４日には、滑液中にジクロフェナクは検知できなかった。従って、本明細書に開示される架橋キトサン粒子へのＡＰＩの組み込みは、滑液へのＡＰＩの長期の放出をもたらすことができる。
（００１０５） さらなる実施形態において、本開示は、キトサン及びジクロフェナクを含む組成物であって、ジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にある組成物を提供する。追加の実施形態において、本開示は、キトサン及びジクロフェナクを含む組成物であって、ジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にある組成物を提供し、以下の例示の特色のいずれか１つ又は複数を特徴とする：ジクロフェナクは結晶性及び非晶性形態の両方である；ジクロフェナクの主要な比率は結晶性形態にあり、ジクロフェナクの下位の比率は非晶性形態にある；ジクロフェナクの実質的にすべては結晶性形態にある；ジクロフェナクの主要な比率は非晶性形態にあり、ジクロフェナクの下位の比率は結晶性形態にある；キトサンは粒子の形態にあり、ジクロフェナクは粒子に組み込まれる；組成物は更に水性担体を含む；ジクロフェナクは、組成物中に存在するキトサン、架橋キトサン及びジクロフェナクの合計重量の１〜２５％の範囲で存在する。
（００１０６） 別の実施形態において、本開示は、キトサン及び活性薬剤（ＡＰＩ）を含む組成物であって、ここで、ＡＰＩの少なくともいくらかは非晶性形態にある組成物を提供する。追加の実施形態において、本開示は、キトサン及びＡＰＩを含む組成物であって、ここで、ＡＰＩの少なくともいくらかは非晶性形態にある組成物を提供し、いずれかの１つ又は複数の以下の例示の特色を特徴とする：ＡＰＩは結晶性及び非晶性形態の両方である；ＡＰＩのすべては非晶性形態にある；ＡＰＩの主要な比率は結晶性形態にあり、ＡＰＩの下位の比率は非晶性形態にある；ＡＰＩの実質的にすべては非晶性形態にある；ＡＰＩの主要な比率は非晶性形態にあり、ＡＰＩの下位の比率は結晶性形態にある；キトサンは粒子の形態にあり、ＡＰＩは粒子に組み込まれる；組成物は水性担体を更に含む；ＡＰＩは、キトサン、架橋キトサン及びＡＰＩの合計重量の１〜２５％の範囲で存在する。
（００１０７）別の実施形態において、本開示は、架橋キトサン及び活性薬剤（ＡＰＩ）を含む組成物を提供する。場合によってＡＰＩは、場合によって、ジクロフェナクであってもよいＮＳＡＩＤである。本組成物は粒子を含んでよく、ここで、場合によって、粒子の少なくともいくらかは、例えば２５から１００ミクロンの範囲内の直径を有する。好ましくは、組成物は、未反応の架橋試薬をほとんど又はまったく含まない。
（００１０８） 水性担体は水を含み、１種又は複数の任意選択の成分、例えば無機又は有機塩、デキストロース等の糖、防腐剤及び緩衝剤を更に含んでもよい。
（００１０９） 水性担体は、場合によって、血小板に富む血漿（ＰＲＰ）等の血漿、及び自己由来又は異質遺伝子型の調整された血清を含んでいてもよい。血漿は、成長因子、及び／又は関節変性進展の防止に寄与し、修復プロセスを増強し得る炎症媒介物質を、特に骨関節症を有する関節に含む。一実施形態において、ＰＲＰは、例えば約４００％の末梢血小板計測数の、及び／又は、１ミリメートル当たり１００万以上の血小板を有する基線を超える血小板の濃度を有する自家血液である。ＰＲＰを調製する方法は、例えば、Ｄｏｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７（３）：１５８〜１６７，２００９に記載されている。ＰＲＰの関節内注射が炎症過程を調整する初期段階に有用であることが報告された。参照：例えばＦｒｉｚｚｉｅｒｏ，Ａ．，Ｓｐｏｒｔ Ｓｃｉ．Ｈｅａｌｔｈ，８：１５〜２２（２０１２）．
凝集体及び担体の調製及び特性
（００１１０） 本開示の組成物及び方法に適切な凝集体は、幾つかのプロセスのいずれによって調製されてもよい。例示のプロセスは噴霧乾燥及び乳化の技法を含み、そのそれぞれは以下に記載される。
（００１１１） 凝集体は噴霧乾燥プロセスによって調製されてもよい。噴霧乾燥は、例えば、組成物の溶液、懸濁液、エマルジョン及び溶融形態から凝集体を調製するために使用されてもよい。そのようなプロセスは当業界で公知である。参照：例えばＫａｓｐａｒ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｗｄｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２４０：３１〜４０（２０１３）、及びそこに引用された参考文献。Ｋａｓｐａｒらは噴霧乾燥技法を使用して、キトサン−ＴＰＰ架橋凝集体を調製する方法論を開示している。例えば、キトサン及びＴＰＰの分離した溶液が調製され、次に、別々に、それぞれ三液ノズルの外側部及び内側部に供給されもよい。それらの流速又は濃度の比を変更することによって、凝集体の平均サイズ及びモルフォロジをもたらすために使用することができる。より高いＴＰＰ／キトサン比は、一般に大きい平均サイズの凝集体をもたらすが、しかし凝集体のサイズは、また噴霧乾燥されるコロイド溶液の濃度に依存する。２〜４μｍの凝集体の平均サイズは、一般にこの技法によって入手可能である。より大きな寸法の凝集体を作るために、約０．５％（重量／体積）のキトサン溶液を使用する二液ノズルシステムを用いて、約３〜１０μｍのスパン（Ｄ90〜Ｄ10）を有する最大約１０μｍの凝集体サイズを与えることができる。
（００１１２） 別の例として、キトサン凝集体は、水（体積／体積）中１％の酢酸中に０．７５％重量／体積濃度でキトサン（ＭＷは６００ｋＤａ、ＤＤＡは９６％である）を溶解することにより調製されてもよい。キトサンの他の適切な濃度は１％、２％及び３％（重量／体積）を含む。グルタルアルデヒド（１％体積／体積）は、１：２０（グルタルアルデヒド：キトサン＝１：２０体積／体積）の比で１時間撹拌しながら加えられる。凝集体は、４０ｍ3／ｈｒでＱ−フローを使用し、出口温度１２０℃で及び１５ｍＬ−ｍｉｎ-1のポンプ速度で噴霧乾燥することによって調製される。骨材中の薬剤の包含は、水性キトサン溶液中に薬剤の小さな粒子の溶解又は懸濁により達成されてもよい。凝集体は、約２．５μｍの平均サイズを有する、０．５から４．５μｍの範囲の粒度分布を有する。さらなる情報として、Ｄｅｓａｉ，Ｋ．Ｇ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：１１４〜１２８（２００５）は、キトサン凝集体を形成するための噴霧乾燥技法の良好な概要を提供している。
（００１１３） 噴霧乾燥はまた、ごく小さい小滴を形成するためにノズルではなくスピンディスク装置を使用して達成され、このごく小さい小滴から溶媒を除去した後、本開示の凝集体（例えば粒子、微粒子）を提供することができる。スピンディスク装置は、米国特許第７，７５８，７７８号明細書に記載されているもの、又はそこに言及された幾つかのスピンディスク装置の１つであってもよい。架橋剤を含む凝集体、例えばＴＰＰで架橋したキトサンを得るために、ＴＰＰ及びキトサンは、凝集形成プロセスの諸段階のいずれで合わせられてもよい。例えば、キトサン及びＴＰＰは、活性薬剤（ジクロフェナク等の）と一緒に適切な溶媒（酸性水、例えば水と酢酸の混合物等）に合わせ、スピンディスク上に又はスピンディスク上の貯留槽に堆積させてもよい懸濁液又は溶液を提供することができる。代替として、ＴＰＰの溶液は、スピンディスク上の貯留槽に加えられてもよく、キトサンの溶液又は懸濁液は、スピンディスク上の貯留槽に別々に加えられ、ここで、活性薬剤は、ＴＰＰ又はキトサン溶液／懸濁液のいずれの成分であってもよい。貯留槽内で合わせられると、架橋剤及びキトサンは、凝集体を形成し始めるが、そこにはごく小さい小滴中に存在し、これはスピンディスクから駆逐される。
（００１１４） 従って、一実施形態において、本開示は、キトサン、キトサンの架橋剤及び医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含む反応体をスピンディスクプロセスへ加えることにより調製された粒子を提供し、ここで、結果として得られた粒子は架橋キトサン及びＡＰＩを含む。以下の例示の任意選択の１つ又は複数の特色は、スピンディスクプロセスによって調製された粒子を更に特徴としてもよい：架橋剤はグルタルアルデヒドである；架橋剤はＴＰＰである；ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩはジクロフェナクであり、それらの少なくともいくらかは、結晶性形態の得られた粒子に場合によって存在する。結果として得られた粒子は、基本的に球体の形態及び、例えば、約１５、又は２０、又は２５、又は３０から約１２０、又は１１５、又は１１０、又は１０５、又は１００ミクロンの範囲の直径を有していてもよい。
（００１１５） 関連する実施形態において、本開示は、キトサン、キトサンの架橋剤及び医薬品活性成分（ＡＰＩ）から粒子を形成する方法を提供する。本方法は以下を含む：（ａ）適切な溶媒（水及びメタノールの混合物等）中にキトサン及びＡＰＩを合わせて均一の溶液又は懸濁液を得る工程；（ｂ）グルタルアルデヒド等の架橋剤を（ａ）の均一の溶液又は懸濁液に撹拌しながら加える工程；（ｃ）（ｂ）からの混合物をスピンディスク装置に徐々に加えて（例えば滴下して）粒子形成を可能にする工程。
（００１１６） 噴霧乾燥装置が使用される場合、一実施形態において、ノズル又はスピンディスク等から来る凝集体は、場合によって乾燥室（通常乾燥した不活性気体の助力を用いて）で乾燥された後、液体浴に搬送されてもよい。浴は、凝集体内に含まれる何らかの残存溶媒が浴に拡散し、それにより凝集体からの排出を可能にし得る。更に、又は代替として、浴は、凝集体と反応する、及び／又は、凝集体に組み込むことができる１種又は複数の成分を含んでいてもよい。例えば、架橋剤（ＴＰＰ等）は浴中に存在し、架橋した凝集体を得るために架橋していないポリマー（キトサン等）と反応を行うことができる。別の例として、薬剤は浴中に存在してもよく、組成物中に唯一の薬剤となるように、又は凝集体形成中に凝集体に既に組み込まれていた薬剤を補足するように、又は凝集体形成中に凝集体にまだ組み込まれていない新しい薬剤を加え、場合によって、それによって凝集体に薬剤（複数可）の階層状の分布を得るように、前記浴中で、薬剤は、例えば、凝集体へ拡散するか、又は凝集体と錯体形成してもよい。なお別の例として、酸又は塩基が、噴霧乾燥装置に搬送された初めの製剤中に存在する場合、初めの製剤中に存在するその酸又は塩基を中和する必要に応じて、浴は塩基又は酸を含んでいてもよい。
（００１１７） 本発明の凝集体はコア−シェル構造を含んでもよい。例えば、ポリマーマトリクスの全体にわたって拡散した薬物を含有するコア、及びコアを囲むシェルであり、ここで、シェルは、通常、コア中に存在するポリマーと異なるポリマーマトリクスである。そのようなコア−シェル凝集体は、米国特許第７，７５８，７７８号明細書に記載されているように調製されてもよく、ここでそれらはマイクロカプセルとして記載されている。一実施形態において、コア及びシェルのポリマーはヒアルロン酸及びキトサンから選択される。別の実施形態において、キトサンはシェルではなくコア中に存在する。また別の実施形態において、キトサンはコアではなくシェル中に存在する。なお別の実施形態において、キトサンはコアとシェルの両方に存在する。
（００１１８） 凝集体は、乳化プロセスによって調製されてもよく、ここで、そのようなプロセスは当業界で公知である。参照：例えば、Ｋｏｔｓａｅｎｇ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２８：３６９〜３７８（２０１０）、及びそこに引用された参考文献。Ｋｏｔｓａｅｎｇらは、Ｗ／Ｏ乳化拡散法と呼ばれる乳化プロセスの変形を記載している。このプロセスによると、水性キトサン溶液は水相を与え、酢酸エチルは、水中油型エマルジョンを形成するための油相を与える。キトサン溶液は、キトサン薄片（８５〜９０％ＤＤＡ、１００又は７４０ｋＤａの平均分子量）を４％（体積／体積）の酢酸溶液に溶解することにより調製される。この溶液は酢酸エチルへ滴下され、次いで、容器は１時間撹拌を継続しながら酢酸エチルの蒸発を防止するために被覆された。約６００ｒｐｍの撹拌速度は、ほぼ最適であるとわかった。凝集体は遠心分離によって収集され、室温で２４時間真空オーブン中で乾燥された。凝集体の架橋は、グルタルアルデヒドを用いる後処理によって達成されてもよい。この後処理プロセスにおいて、キトサン凝集体は中程度の振盪をしながら２．５％（体積／体積）のグルタルアルデヒド溶液に室温で２４時間浸される。その後、粒子は遠心分離によって収集され、４０℃で真空オーブンに乾燥する前に蒸留水で洗浄される。凝集体のサイズは１５０μｍ未満から３００μｍを超える範囲であった。凝集体のモルフォロジは出発溶液中のキトサンの濃度の変更により達成されてもよい。Ｋｏｔｓａｅｎｇのプロセスによって調製された凝集体は、スポンジ、すなわち多孔性である場合がある。一態様において、本開示の凝集体は多孔性である。
（００１１９） 場合によって薬剤を組み込んだキトサンの凝集体は、Ｇｅ Ｙ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．３３８：１４２〜１５１（２００７）及びＧｅ Ｙ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｙａｋｕｇａｋｕ Ｚａｓｓｈｉ １３１（１２）：１８０７〜１８１２（２０１１）に記載されている乳化／化学的架橋技法によって調製されてもよい。この技法によれば、懸濁した薬剤（例えば微粉化形態で）を含むキトサンの溶液（水中の５％重量／体積、８０％を超えるＤＤＡ）は、約１：１．２ポリマー：薬物重量比を有する。この水相は、２％Ｓｐａｎ ８０（重量／体積）を含有する液体パラフィンからなる油相に垂らして１５分間３００ｒｐｍで撹拌することにより油中水形エマルジョンを形成する。次いで、２５％グルタルアルデヒドが添加され室温で３時間撹拌された。架橋した小球体は真空で誘発された濾過によって分離、洗浄され、次いで、室温で真空デシケーター中で乾燥された。結果として得られた小球体は、約７３μｍの平均粒子直径を有している。薬物を装填したキトサン凝集体を作るための類似したエマルジョン系の技法は、Ｍｏｔｈｉｌａｌ，Ｍ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓ．３（２）：３０５〜３１５（２０１２）．に記載されている。
（００１２０） 本組成物及び本方法に適切な単離凝集体を調製するために用いられてもよい他のプロセスは、沈殿及び顆粒化を含む。例えば、２．５ｍｇ／ｍＬのキトサン溶液は、２％（体積／体積）酢酸及び１％（重量／体積）Ｔｗｅｅｎ８０界面活性剤の混合物中で調製されてもよい。次いで、１０％（重量／体積）の水性硫酸ナトリウム溶液は連続的な超音波の下でキトサン溶液へ滴下される。硫酸ナトリウムを添加した後に、撹拌及び超音波処理が２０分間継続される。この方法によって形成された凝集体は、４，０００ｒｐｍで遠心分離によって分離され、乾燥されて本開示の乾燥組成物を与えることができる。乾燥凝集体は続いて再懸濁されて、本開示の液体組成物を与えることができる。
（００１２１） 更に、以下の記事は、凝集体の調製についての情報を提供する。Ｚａｍｂｉｔｏ，Ｙ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ９，ｐａｇｅｓ ２４３〜２６３（２０１３）；Ｒａｆｅｅｑ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １（４）：３８３〜３９０（Ｏｃｔ〜Ｄｅｃ ２０１０）；及び特にイオンチャネル型ゲル化に関して、例えばＫｏｕｋａｒａｓ，Ｅ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ９：２８５６〜２８６２（２０１２）を参照。
（００１２２） 先に言及したように、架橋剤は、キトサン凝集体を安定化するためにキトサンと組み合わせて使用されてもよい。ＴＰＰが架橋剤として選択される場合、安定化したキトサン凝集体は以下のように調製されてもよい。２％（体積／体積）の酢酸／水中のキトサンの溶液（溶液中２．５ｍｇ／ｍＬのキトサン）は、場合によって、１％（重量／体積）の界面活性剤（例えばＴＷＥＥＮ ８０）を用いて調製される。水中のＴＰＰの溶液は、３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製され、磁気撹拌下で合計体積約４．０ｍＬでキトサン溶液へ滴下される。溶液中のキトサンの最終濃度は１〜３ｍｇ／ｍＬの範囲にあり、最終のＴＰＰ濃度は０．５〜１ｍｇ／ｍＬの範囲にある。
（００１２３） 凝集体は粒径を特徴としてもよく、ここで、粒径は、例えばレーザー光散乱によって粒径を計測する３００ＲＦ ｍｍレンズを用いてＭａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ＭＳ／Ｓを使用してヘキサン又は水中で凝集体を懸濁することによって測定されてもよい。この機器はＭａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｕ．Ｋ．）から入手可能である。粒径はまた、光学顕微鏡検査によって、スライドグラスに凝集体の懸濁液を移動し、次いで、溶媒を蒸発させることによって測定されてもよい。一態様において、本開示の凝集体は、ミクロン範囲、すなわち１から１０００ミクロン、又は１から５００ミクロン、又は５から５００ミクロン、又は５から１００ミクロン、又は５から５０ミクロンのモードの断面距離の平均粒径を有する。別の態様において、凝集体は、ナノメーター範囲、すなわち１から１０００ナノメートルの平均断面距離のモードの粒径を有する。別の態様において、平均粒径は、例えば、１００から１００，０００ナノメートル（０．１から１００ミクロン）、又は１００から５０，０００ナノメートル（０．１から５０ミクロン）、又は５００から１００，０００ナノメートル（０．５から１００ミクロン）、又は５００から５０，０００ナノメートル（０．５から５０ミクロン）のモードの断面距離を有するナノメートル及びマイクロメーターの範囲に及ぶ。粒径はまた分布によって記載されてもよい。一態様において、粒径分布は狭く、例えば、粒子の約９０％はモード粒径の２０％以内である粒径を有する。
（００１２４） 凝集体の粒径は、液に曝露されているかどうかに応じて変化し得る。凍結乾燥された凝集体は、再懸濁の凝集体より小さな粒径を有してもよい。もしそうでなく文脈からは明瞭でなければ、本明細書において言及される粒径は、光学顕微鏡検査によって分析されるような懸濁粒子を指す。
（００１２５） 本明細書のどこか他のところで言及されるように、様々な態様において、凝集体は、１、又は５、又は１０、又は１５、又は２０、又は２５、又は３０、又は３５、又は４０、又は４５、又は５０ミクロンの最小の粒径を有する。更に、又は代替として、凝集体は、又は１００、又は９５、又は９０、又は８５、又は８０、又は７５、又は７０、又は６５、又は６０、又は５５、又は５０、又は４５、又は４０、又は３５、又は３０ミクロンの最大粒径に関して特徴づけられてもよい凝集体は、場合によって、範囲の上限及び下限が先の値から選択されてよい範囲内にある粒径を有することに関して特徴づけられてよい。例えば、凝集体は、４つの例として１０〜８０ミクロンの範囲内、又は２０〜７０ミクロンの範囲内、２０〜４０ミクロンの範囲内、又は２０〜３０ミクロンの範囲内の粒径を有していてもよい。
（００１２６） 注目すべきは、凝集体が範囲に対する下限及び上限を規定する粒径範囲に関して特徴づけられる場合、これは、本開示の組成物中に凝集体がすべて明示の範囲の幅内に必ずある粒径を有するということではない。むしろ、凝集体がｘ−ｙの範囲にある粒径を有するという仕様（ｘはある範囲に対する下限であり、ｙはある範囲に対する上限である。）は、凝集体の少なくとも幾つかは明示の範囲内の粒径を有すること、及びそれらの特定の凝集体は、その範囲の外側の粒径を有する凝集体（例えば、それと同じ溶液中の）と結合していてもしていなくてもよいことを意味する。様々な実施形態において、複数の凝集体の組成物は、明示の範囲内にある、若しくは明示の最大サイズ未満にある粒径を有する、又は明示の最小サイズより大きなサイズを有する凝集体の数的な分画に関して特徴づけられてもよい。例えば、凝集体の組成物は、粒径の明示の範囲ｘ−ｙ内にある粒径を有する組成物中に凝集体の数の少なくとも９５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも５０％を有すると特徴づけられてもよい。
（００１２７） 凝集体はまた、凝集体と結合した薬剤の素性、量及び／又はモルフォロジに関して特徴づけられてもよい。一般に、薬剤は、凝集体の内側及び／又は表面に非晶性形態で存在してもよく、又は少なくとも結晶化することができる薬剤については結晶性形態で存在してもよい。一実施形態において、本開示の凝集体は薬剤の非晶性形態と結合する。別の実施形態において、本開示の凝集体は薬剤の結晶性形態と結合する。なお別の実施形態において、凝集体は、例えばジクロフェナクであってもよい薬剤の結晶性及び非晶性形態の両方と結合する。用語「結合する」は、凝集体内に包埋されているか、又は薬剤が凝集体の表面と複合化しているかのどちらかである薬剤を含むように使用される。
（００１２８） 薬剤が凝集体のポリマーと結合する形態は、凝集体から薬剤の放出の速度論に影響し得る。例えば、凝集体内に分散した非晶性の活性薬剤は遅い拡散プロセスによって放出し得る。遅い拡散プロセスにおいて、分散した薬剤は、周囲の液と平衡し、それによって、凝集体から外に、及び隣接組織又はホストの液に拡散する。本開示の凝集体では、遅い拡散プロセスは日又は週の期間にわたって薬剤を放出し得る。別の例として、薬剤が結晶性形態にあり、凝集体内に包埋されている場合、凝集体のポリマーが分解し結晶が凝集体を出るための物理的な開口部をもたらすまで、凝集体はなくならなくてもよい。本開示の凝集体では、結晶質の薬剤の放出は、日又は週又は月の期間にわたって行われてもよく、ここで、そのような放出は長期放出と称されてもよく、凝集体はデポーと称されてもよい。本開示の凝集体は非晶性及び結晶質の薬剤を含んでいてもよく、その場合には薬剤の放出は、最初に遅い拡散プロセス、続いて長期の放出プロセスであってもよく、その２つの間の放出プロセスは、遅い拡散及び長期の放出の両方が同時に生じるように重なってもよい。
（００１２９） 従って、薬剤が結晶性か非晶性形態にあるかどうかは、その薬剤が凝集体内に含まれる場合、薬剤の放出プロフィールに影響し得る。薬剤が凝集体の表面と結合している場合、薬剤の形態は放出プロフィールに対しそれほど影響はない。言いかえれば、薬剤が凝集体の表面又は表面の近くと結合している場合、拡散（非晶性薬剤の場合）又は溶解して拡散（結晶の場合）をすることによって薬剤は凝集体から容易に離れる。凝集体の表面又は表面の近くからの薬剤の放出は迅速に生じ、薬剤の初めのボーラス又はバーストの対象への送達を与える。
（００１３０） 一実施形態において、薬剤はジクロフェナク等のＮＳＡＩＤである。一実施形態において、ＮＳＡＩＤ、例えばジクロフェナクは結晶性形態の凝集体中に存在する。別の実施形態において、ＮＳＡＩＤ、例えばジクロフェナクは、結晶性形態及び非晶性形態の両方の凝集体中に存在する。本明細書において提供される例によって例証されるように、薬剤は凝集体形成中に凝集体中で結晶化してもよい。
（００１３１） 一実施形態において、本開示の組成物中の大半の凝集体は２０〜５０又は３０〜４０ミクロンの範囲の粒径を有する。場合によって、凝集体の５％未満は、６０ミクロンを超える粒径を有する。２０〜５０又は３０〜４０ミクロンのサイズ範囲の凝集体が、関節腔の縁、例えば膝関節の滑膜層に存在する膜に容易に包埋するので特に有利であることが観察される。この粒径は、粒子として正味の正の電荷と合わせて、膜中に包埋するのに特に適合している。膜に包埋されていると、凝集体は、凝集体から非晶性薬剤の遅い拡散をもたらすことによって、又は活性薬剤の結晶性形態の放出用のデポーとして機能することによってのいずれかで薬剤を放出する。凝集体サイズがより小さい、典型的には直径２０ミクロン未満又は１０ミクロン未満の場合、凝集体は、膜に凝集体を運ぶマクロファージによって呑み込まれることがある。しかし、本開示の凝集体が直径約２０、又は約３０ミクロンを超える場合、凝集体は、容易にマクロファージによって呑み込まれないで、その代り、静電的相互作用によって膜と直接結合し得る。従って、一態様において、本開示は、滑膜層等の膜と直接結合し、次いで、それらの凝集体が例えばリゾチームによって分解されるような、凝集体から薬学的に活性な薬剤の放出用のデポーを与える凝集体を提供する。
（００１３２） 一実施形態において、本開示は、正味の正の電荷を有する粒子を含む組成物を提供し、粒子の少なくとも幾つかは、少なくとも１０、又は１５、又は２０、又は２５、又は３０から１２０、又は１１０、又は１０５、又は１００ミクロンの範囲内の直径を有する球体である。場合によって、粒子は、直径が十分に大きく、粒子が滑液に投与されたとき、マクロファージによる食作用を受けない。場合によって、粒子は、粒子が滑液に投与される場合に、近くの滑膜に包埋されるようになる。粒子は、医薬品活性成分（ＡＰＩ）を組み込んでもよく、粒子が滑液に投与される場合、粒子は徐々にＡＰＩを放出する。
（００１３３） 従って、一態様において、本開示は、関節腔と結合した組織から薬剤を送達するデポーを提供する。そのような組織は、例えば、滑膜層（本明細書において滑膜とも称される）等の膜であってもよい。デポーは、薬剤の結晶性形態等の薬剤を保存し、また関節領域に薬剤を放出する役目をする。デポーは、薬剤の長期放出を提供し、その放出は、薬剤が凝集体から放出される日数に関して特徴づけられてもよい。日数は、例えば１、又は２、又は３、又は４、又は５、又は６、又は７、又は８、又は９、又は１０、又は１１、又は１２、又は１３、又は１４、又は１５、又は１６、又は１７、又は１８、又は１９、又は２０、又は２１、又は２２、又は２３、又は２４、又は２５、又は２６、又は２７、又は２８、又は２９、又は３０、又は３１、又は３２、又は３３、又は３４、又は３５、又は３６、又は３７、又は３８、又は３９、又は４０、又は４１、又は４２、又は４３、又は４４、又は４５、又は４６、又は４７、又は４８、又は４９、又は５０、又は５１、又は５２、又は５３、又は５４、又は５５、又は５６、又は５７、又は５８、又は５９、又は６０から選択されてもよい。明瞭にするために、凝集体が９日の放出時間を有することに関して特徴づけられる場合、何らかの薬剤が１〜９日目それぞれに凝集体から放出されることを意味し、ここで、１日目は凝集体がホストに注射される日であることが留意されるべきである。追加の放出が生じてもよい。例えば、追加の放出が１０日目、又は１１日目等に生じてもよい。従って、９日間の放出時間は、例えば、１０日間の放出時間を含む。しかし、１０日間の放出時間は、活性薬剤の何らかの放出が１０日目に生じなければ、９日間の放出時間を含まない。
（００１３４） デポーから放出され、それにより周囲の組織及び／又は関節腔に局所的に送達される薬剤の量は、２つの選択肢として薬剤のｍｇに関して、又は凝集体中に最初に存在する薬剤のパーセントに関して特徴づけられてもよい。様々な実施形態において、０．５ｍｇ、又は０．６ｍｇ、又は０．７ｍｇ、又は０．８ｍｇ、又は０．９ｍｇ、又は１．０ｍｇ、又は１．１ｍｇ、又は１．２ｍｇ、又は１．３ｍｇ、又は１．４ｍｇ、又は１．５ｍｇ、又は１．６ｍｇ、又は１．７ｍｇ、又は１．８ｍｇ、又は１．９ｍｇ、又は２．０ｍｇ、又は２．１ｍｇ、又は２．２ｍｇ、又は２．３ｍｇ、又は２．４ｍｇ、又は２．５ｍｇ、又は２．６ｍｇ、又は２．７ｍｇ、又は２．８ｍｇ、又は２．９ｍｇ、又は３．０ｍｇ、又は３．２ｍｇ、又は３．４ｍｇ、又は３．６ｍｇ、又は３．８ｍｇ、又は４．０ｍｇ、又は４．２ｍｇ、又は４．４ｍｇ、又は４．６ｍｇ、又は４．８ｍｇ、又は５．０ｍｇ、又は５．２ｍｇ、又は５．４ｍｇ、又は５．６ｍｇ、又は５．８ｍｇ又は６．０ｍｇ、又は６．２ｍｇ、又は６．４ｍｇ、又は６．６ｍｇ、又は６．８ｍｇ、又は７．０ｍｇ、又は７．２ｍｇ、又は７．４ｍｇ、又は７．６ｍｇ、又は７．８ｍｇ、又は８．０ｍｇ、又は８．２ｍｇ、又は８．４ｍｇ、又は８．６ｍｇ、又は８．８ｍｇ又は９．０ｍｇ、又は９．２ｍｇ、又は９．４ｍｇ、又は９．６ｍｇ、又は９．８ｍｇ、又は１０．０ｍｇ、又は１０．０ｍｇを超える薬物が、デポーから放出され、ここで放出は場合によって明示の放出期間の間の放出に関して更に特徴づけられてもよい。例えば、１．０ｍｇの放出は、少なくとも１．０ｍｇの薬剤が放出される限り生じるので、これらの放出量が最小の放出量であることは留意されるべきである。別の実施形態において、５％、又は１０％、又は１５％、又は２０％、又は２５％、又は３０％、又は３５％、又は４０％、又は４５％、又は５０％、又は５５％、又は６０％、又は６５％、又は７０％、又は７５％、又は７５％を超える薬剤がデポーから放出され、放出は場合によって明示の放出期間の間の放出に関して、更に特徴づけられる。例えば、５０％の放出が、薬剤の初めの装填率の少なくとも５０％が場合によって明示の期間内にデポーから放出される限り生じるので、これらの放出百分率が最小の放出量であることは留意されるべきである。
（００１３５） デポー効果は、凝集体を形成し、結晶性薬剤を囲むポリマー（複数可）が劣化すると観察される。ポリマーが劣化すると、結晶性薬剤を収容する部屋は、凝集体を囲む液及び／又は組織に開かれ、結晶性薬剤が液／組織に流出し、次いで、液に溶解することができるようになる。一実施形態において、キトサンは、凝集体高分子成分のいくらか又はすべてを形成する。キトサンは、少なくとも一部酵素リゾチームの作用のために、組織及び液中で劣化に受けやすい。リゾチームは、キトサンを分解してオリゴマーを形成する。一実施形態において、キトサン劣化の速度は脱アセチル化度と関係があり、ここで、より高い脱アセチル化度を有するキトサンは、リゾチームと接触してよりゆっくりと分解する。言いかえれば、凝集体のリゾチームに誘発された劣化速度は、使用されるキトサンの脱アセチル化度に依存し、その脱アセチル化の増加ともに減少する。
（００１３６） 上に言及したように、デポー効果を示すことに加えて、又はその代わりに、及び遅い拡散効果を示すことに加えて、又はその代わりに、本開示の凝集体は、薬剤のバースト送達を示してもよい。本明細書において使用される場合、バースト送達は、対象への本開示の組成物の投与で直ちに生じる薬剤の急速な送達を指す。このバースト局面の間に送達される薬剤は、元来非晶性であっても結晶性薬剤であってもよい。バースト送達は、明示の期間中に凝集体のない形態で、対象に送達される薬剤の量に関して特徴づけられてもよい。期間は、対象への組成物の投与の後例えば、１、又は２、又は３、又は４、又は５、又は６、又は７、又は８、又は９、又は１０、又は１１、又は１２、又は１３、又は１４、又は１５、又は１６、又は１７、又は１８、又は１９、又は２０、又は２１、又は２２、又は２３、又は２４時間のいずれかから選択されてもよい。バースト局面中に送達される薬剤の量は、２つの選択肢として薬剤の質量（例えばｍｇで）に関して、又は凝集体中に最初に存在する薬剤のパーセントに関して特徴づけられてもよい。様々な実施形態において、０．５ｍｇ、又は０．６ｍｇ、又は０．７ｍｇ、又は０．８ｍｇ、又は０．９ｍｇ、又は１．０ｍｇ、又は１．１ｍｇ、又は１．２ｍｇ、又は１．３ｍｇ、又は１．４ｍｇ、又は１．５ｍｇ、又は１．６ｍｇ、又は１．７ｍｇ、又は１．８ｍｇ、又は１．９ｍｇ、又は２．０ｍｇ、又は２．１ｍｇ、又は２．２ｍｇ、又は２．３ｍｇ、又は２．４ｍｇ、又は２．５ｍｇ、又は２．６ｍｇ、又は２．７ｍｇ、又は２．８ｍｇ、又は２．９ｍｇ、又は３．０ｍｇ、又は３．２ｍｇ、又は３．４ｍｇ、又は３．６ｍｇ、又は３．８ｍｇ、又は４．０ｍｇ、又は４．２ｍｇ、又は４．４ｍｇ、又は４．６ｍｇ、又は４．８ｍｇ、又は５．０ｍｇ、又は５．２ｍｇ、又は５．４ｍｇ、又は５．６ｍｇ、又は５．８ｍｇ又は６．０ｍｇ、又は６．２ｍｇ、又は６．４ｍｇ、又は６．６ｍｇ、又は６．８ｍｇ、又は７．０ｍｇ、又は７．２ｍｇ、又は７．４ｍｇ、又は７．６ｍｇ、又は７．８ｍｇ、又は８．０ｍｇ、又は８．２ｍｇ、又は８．４ｍｇ、又は８．６ｍｇ、又は８．８ｍｇ、又は９．０ｍｇ、又は９．２ｍｇ、又は９．４ｍｇ、又は９．６ｍｇ、又は９．８ｍｇ、又は１０．０ｍｇ、又は１０．０ｍｇを超える薬物は、バースト期間の間に凝集体と結合していない形態で対象に送達され、放出は、場合によって、明示の放出期間の間の放出に関して更に特徴づけられる。例えば、１．０ｍｇの放出は、少なくとも１．０ｍｇの薬剤が放出される限り生じるので、これらの放出量が最小の放出量であることは留意されるべきである。別の実施形態において、５％、又は１０％、又は１５％、又は２０％、又は２５％、又は３０％、又は３５％、又は４０％、又は４５％、又は５０％、又は５５％、又は６０％、又は６５％、又は７０％、又は７５％又は７５％を超える薬剤がバースト期間の間に凝集体と結合することがない形態で対象に送達され、明示の放出期間の間の放出に関して、放出が、場合によって更に特徴づけられる。組成物中の薬剤の初めの装填率の少なくとも５０％が、場合によって明示の期間内に、組成物から放出される限り、例えば５０％の放出が生じるので、これらの放出百分率が最小の放出量であることが留意されるべきである。
（００１３７） バースト局面中に放出される薬剤の量及びその放出の速度論は、凝集体の特性によって影響を受けることがある。例えば、粒径の変化は、放出のバースト量及びタイムラインを変えてことがある。更に、製作中に凝集体を洗浄又は予備処置することは、放出のバースト量及びタイムラインを変えることができる。例えば、エタノール、ＰＢＳ緩衝剤又は純水で凝集体を洗浄することは、バースト局面中に放出される利用可能な薬剤の量を低下させ得る。他の製作後の処置、例えば、反応性グルタルアルデヒド架橋剤を除去するための（メタ）重亜硫酸ナトリウム又はグリシンを用いる処置等は、またバースト局面中に放出される利用可能な薬剤の量に影響し得る。
（００１３８） 様々な方法が凝集体ペイロードを求めるために使用されてもよい。例えば、薬物を装填した凝集体は単離され、次いで、単離された凝集体の求めた重量は、メタノールに溶解される。メタノール溶液はＨＰＬＣ又はＵＶ分析によって分析され、結果は、またメタノールに溶解された活性薬剤の標準濃度と比較される。このようにして、凝集体由来のメタノール溶液中の薬物の濃度を求めることができ、この測定はどれだけの薬物が凝集体の求めた重量中に存在したか計算するために使用されてもよい。初めの薬物を装填した凝集体はまた、凝集体ペイロードへのこれらのパラメーターの影響の測定を可能にする粒径、架橋又は他のパラメーターによって特徴づけられてもよい。放出プロフィールを測定するために、緩衝剤又は純水中の凝集体の溶液を室温又は高温で振盪機浴に入れてもよく、試料は定期的に取って分析する。例えば、１０〜２０ｍｇの薬物を装填した凝集体は、２０〜１，０００ｍｌのＰＢＳ緩衝剤を有する容器に入れ、容器を室温又は高温（例えば３７℃）で振盪機浴に入れてもよい。試料は、様々な時点で：０．２５、０．５及び１及び３及び８及び２４及び４８及び１６８、３３６時間等を含むがこれらに限定されない、週単位の増分で採取される。そのような試料はＨＰＬＣ又はＵＶ分析によって分析される。
（００１３９） 一態様において、本開示の凝集体含有組成物は、組成物が必要とする対象に投与される場合、薬剤のバースト送達、及び薬剤の長期放出のデポーの両方を提供する。この場合、バースト送達のための期間は２４時間未満に設定され、デポー送達のための期間は、バースト送達時間帯が終わってから始めるように設定され、６０日未満、９０日未満又は１２０日未満の明示の時間ｎ延長する。例えば、２４時間のバースト送達時間に関しては、様々な実施形態において、組成物のデポー効果は、２４時間のバースト期間後、１、又は２、又は３、又は４、又は５、又は６、又は７、又は８、又は９、又は１０、又は１１、又は１２、又は１３、又は１４、又は１５、又は１６、又は１７、又は１８、又は１９、又は２０、又は２１、又は２２、又は２３、又は２４、又は２５、又は２６、又は２７、又は２８、又は２９、又は３０、又は３１、又は３２、又は３３、又は３４、又は３５、又は３６、又は３７、又は３８、又は３９、又は４０、又は４１、又は４２、又は４３、又は４４、又は４５、又は４６、又は４７、又は４８、又は４９、又は５０、又は５１、又は５２、又は５３、又は５４、又は５５、又は５６、又は５７、又は５８、又は５９、又は６０日間、薬剤を与えてもよい。この長期の放出局面のいくらかが重なるのは、凝集体から非晶性薬剤の遅い拡散である可能性がある。
（００１４０） バースト局面、遅い拡散局面及びデポー局面のいずれか１つ又は複数の間に組成物から放出される薬剤の量は、組成物中の薬剤の合計量に関して記載することができる。様々な実施形態において、対象に与えられる用量に存在する薬剤の合計量は、少なくとも０．５ｍｇ、又は少なくとも１．０ｍｇ、又は少なくとも１．５ｍｇ、又は少なくとも２．０ｍｇ、又は少なくとも２．５ｍｇ、又は少なくとも３．０ｍｇ、又は少なくとも３．５ｍｇ、又は少なくとも４．０ｍｇ、又は少なくとも４．５ｍｇ、又は少なくとも５．０ｍｇ、又は少なくとも５．５ｍｇ、又は少なくとも６．０ｍｇ、又は少なくとも６．５ｍｇ、又は少なくとも７．０ｍｇ、又は少なくとも７．５ｍｇ、又は少なくとも８．０ｍｇ、又は少なくとも８．５ｍｇ、又は少なくとも９．０ｍｇ、又は少なくとも９．５ｍｇ、又は少なくとも１０．０ｍｇであってもよい。しかしながら、あまりにも多くの薬剤が炎症促進性であり得るので、そのために様々な実施形態において、本開示の凝集体、組成物及び方法は、対象に与えられる用量中に存在する薬剤の最大量に関して特徴づけられてもよい。様々な実施形態において、その最大量は、２０ｍｇ、又は１９．５ｍｇ、又は１９．０ｍｇ、又は１８．５ｍｇ、又は１８．０ｍｇ、又は１７．５ｍｇ、又は１７．０ｍｇ、又は１６．５ｍｇ、又は１６．０ｍｇ、又は１５．５ｍｇ、又は１５．０ｍｇ、又は１４．５ｍｇ、又は１４．０ｍｇ、又は１３．５ｍｇ、又は１３．０ｍｇ、又は１２．５ｍｇ、又は１２．０ｍｇ、又は１１．５ｍｇ、又は１１．０ｍｇ、又は１０．５ｍｇ、又は１０．０ｍｇ、又は９．５ｍｇ、又は９．０ｍｇ、又は８．５ｍｇ、又は８．０ｍｇ、又は７．５ｍｇ、又は７．０ｍｇ、又は６．５ｍｇ、又は６．０ｍｇ、又は５．５ｍｇ、又は５．０ｍｇ、又は４．５ｍｇ、又は４．０ｍｇ、又は３．５ｍｇ又は３．５ｍｇ未満であってもよい。本開示は、このように、用量中に存在する最小量及び最大量の薬剤の１つ又は両方を指す組成物及び用量及び方法を提供し、それらの最大値及び最小値が、前述の値について選択されてよい。
（００１４１） 一態様において、組成物中の薬剤の約２０−６０％は、投与後２４時間を終えるバースト局面中に放出され、薬剤の約１０−４０％は、バースト局面の完了に続く１４日又は３０日又は６０日又は９０日の長期放出のデポー局面中に放出される。
（００１４２） 先に言及したように、所定粒径は、凝集体についての正味の正電荷と組み合わせて、凝集体が関節腔を囲む又は隣接する膜又は滑膜に包埋されるようになることを可能にするために特に適合している。粒径に加えて、凝集体の成分としてのキトサンの選択、及びキトサンを特徴づける脱アセチル化度（ＤＤＡ）の選択は、凝集体の表面に存在する正電荷の量に影響する。キトサン上に比較的大きい正に帯電したアミン基を与えるためには、ＤＤＡは相当大きくなければならない。様々な実施形態において、ＤＤＡは、５０％を超え、５５％を超え、又は６０％を超え、又は６５％を超え、７０％を超え、又は７５％を超え、又は８０％を超え、又は８５％を超え、又は９０％を超え、又は９５％を超える。一実施形態において、ＤＤＡは９５％を超えない。別の実施形態において、ＤＤＡは９０％を超えない。まだ別の実施形態において、ＤＤＡは８５％を超えない。従って、一実施形態において、本開示は８０から８５％の間のＤＤＡを有するキトサンから調製される凝集体を提供する。キトサンアミン基のｐＫａは約６．５であるので、凝集体が滑液等の生体液に入ると、そのアミン基はプロトン化され、その形態でアンモニウム基と称されてもよい。便宜上、もし文脈がそれ以外に示さなければ、アミン基という用語は、プロトン化、及び非プロトン化形態の両方を指す。
（００１４３） キトサンＤＤＡは、まずはじめに相当に大きくなければならないが、その理由は、一実施形態において、凝集体内に架橋するためにはアミン基がグルタルアルデヒドとの反応によって消費されるからである。グルタルアルデヒドとのアミン基の反応は、他のすべての因子が等しい場合、表面アミン基の数、従って表面に存在する帯電したアミン基の数を減少させる。架橋凝集体を与えるために使用される架橋剤の量は非常に大きい必要がないので、大半のアミン基は架橋反応に関与せず、様々な実施形態において、キトサンのアミン基の少なくとも９５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも５０％は、架橋反応に関与しない。
（００１４４） 凝集体は、キトサン（ＣＳ）とヒアルロナン（ＨＡ）の重量比を特徴としてもよい。重量比は、凝集体を作るために使用される成分の相対重量に基づいて求められてもよい。一態様において、ＣＳ：ＨＡ比は、１：１を超え、例えば、２：１を超え、又は２．５：１を超え、又は３：１を超え、又は３．５：１を超え、又は４：１を超え、又は４．５：１を超え、又は５：１を超える。他の態様において、ＣＨ：ＨＡ比は１：１未満であり、例えば、１：１．５未満、又は１：２未満、又は１：２．５未満、又は１：３未満、又は１：３．５未満、又は１：４未満、又は１：４．５未満、又は１：５未満である。
（００１４５） 本開示の水性担体は、望ましくは溶解形態にある、担体の様々な他の成分（例えば塩）と水を合わせることにより容易に形成される。これらの成分は合わせられてよく、可溶性成分を撹拌すると水に容易に溶解する。
（００１４６） 水性担体はヒドロゲルであってもよい。例えば、キトサンヒドロゲル等の温度敏感なヒドロゲルは、Ｃｈｅｎ Ｍｉｎｙａｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍ．２１：１９９１−１９９３（２０１０）の方法によって調製されてもよい。このヒドロゲルは、１％の水性酢酸にキトサン（２％重量／体積）を溶解し、次いでその溶液をグリセリンと１０：１の体積比で混合することにより調製される。ホウ砂溶液はｐＨを６．７に調節するために添加される。次いで、本開示による凝集体はこのキトサンヒドロゲル中に分散されてもよい。
（００１４７） 従って、一実施形態において、本開示は、対象の滑液及び滑膜に粒子を送達して粒子から医薬品活性成分（ＡＰＩ）の徐放のデポーを与える方法であって、（ａ）粒子を含む液体組成物を得る工程であって、粒子は、アミノ（ＮＨ２）基を有する架橋キトサン、及び前記粒子に組み込まれる医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含み、粒子は、２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有し、ここで、架橋キトサンは、架橋剤と、７５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有するキトサンとの反応生成物であり；。（ｂ）１８〜２７のゲージの範囲の針を有する、液体組成物を含有する注射器を得る工程；及び
（ｃ）針を介してその必要がある対象に関節内に液体組成物を注射する工程を含む方法を提供する。場合によって、投与すると、粒子は対象の滑膜の細胞中で存在してもよく；滑膜中の粒子は、活性薬剤の徐放性を与える場合、及び粒子がＡＰＩを滑膜へ放出するところではマクロファージの内部に含まれていない；ＡＰＩは例えば少なくとも２４時間の期間にわたって粒子から放出される；組成物は、組成物が対象に注射された直後にＡＰＩのバーストを送達し、その後、少なくとも２４時間の長期の期間にわたってＡＰＩを放出する；投与後、及び滑膜に包埋されるようになった後、長期の期間にわたって組成物の粒子はＡＰＩを滑膜に放出する；ＡＰＩはジクロフェナクであり、粒子に組み込まれたジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にある。
組成物の実施形態
（００１４８） 先に言及したように、本開示は、場合によって、液体担体中で分布してもよい凝集体を含む組成物を提供する。一態様において、凝集体はヒアルロナン、キトサン及び薬剤のそれぞれを含み、すなわち、各凝集体は何らかの量の３つの挙げた成分のそれぞれを含んでいる。代替態様において、組成物は、挙げた成分のただ１つ又は２つを含む凝集体を含む。開示した組成物のそれぞれは、凝集体形態ではない薬剤を含んでいてよく、すなわち、非凝集体形態にあり、例えば、それは界面活性剤等によって担体中に溶解され、又は担体中に懸濁していてもよい。
（００１４９） 一実施形態において、本開示の組成物は、少なくとも３成分の凝集体を含み、ここで、必要とする３成分はヒアルロナン、キトサン及び薬剤である。この凝集体は、単一凝集体中にキトサン、ヒアルロナン及び薬物（薬剤）を含むことを示すために便宜上ＣＨＤＡと称される。ＣＨＤＡ凝集体を含む組成物は、ＣＨＤＡ実施形態又はＣＨＤＡ組成物と称される。
（００１５０） それらの成分の相対量は、好都合には、凝集体中の成分のすべての全重量に対して重量パーセントに関して表わされる。一態様において、ヒアルロナンは、凝集体の合計重量の５から９０重量％、又は３０から８５％、又は５０から８０％の濃度で存在する。キトサンは、凝集体の合計重量の５から９０重量％、又は３０から８５％、又は５０から８０％の濃度で存在する。薬剤は、凝集体の合計重量の０．１％から１０％、又は１％から８％、又は２％から７％の濃度で存在する。
（００１５１） 更に、ＣＨＤＡ組成物は：ヒアルロナン又は薬剤を含まないキトサン凝集体；キトサン又は薬剤を含まないヒアルロナン凝集体；キトサン又はヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）を含まない薬剤凝集体；キトサン及びヒアルロン酸を含むがいかなる薬剤も含まない凝集体、キトサン及び薬剤を含むがいかなるヒアルロナンも含まない凝集体、及び／又はヒアルロナン及び薬剤を含有するがいかなるキトサンも含まない凝集体の１つ又は複数を含んでもよい。例えば、本発明の組成物は、場合によって、ＣＨＤＡの成分である同じ薬剤であってもそうでなくてもよい追加の薬剤と共に、ＣＨＤＡ及びＨＡを含む。
（００１５２） 先に言及したように、ＣＨＤＡは薬剤を含むが、ＣＨＤＡ組成物は、場合によって、非凝集体薬剤の形態の追加の薬剤（ＣＨＤＡ中の薬剤と同じでも同じでなくてもよい）を含んでいてもよい。例えば、本開示の組成物は、ＣＨｄ１Ａとして示されるようにＣＨＤＡ中の第１の薬物、及びｎＡｄ２として示されるように非凝集形態中の第２の薬物を含んでもよい。ＣＨＤＡは２種の薬物を含んでもよく、それにより、ＣＨｄ１ｄ２Ａと示されてもよい。本組成物は２種のＣＨＤＡを含んでもよく、それぞれ異なる薬物を有し、すなわち、組成物はＣＨｄ１Ａ及びＣＨｄ２Ａを含む。
（００１５３） 他の実施形態において、本開示は、液体担体に加えてキトサン、ヒアルロナン及び薬剤から選択される２つの（しかし３つではない）成分を含む少なくとも１つの凝集体を含む組成物を提供する。これらの組成物は、場合によって、キトサン、ヒアルロナン及び薬剤の１つ又は複数（しかし３つすべてではない）を同様に含んでよい第２、第３又は追加の凝集体を含んでよい。これらの組成物は便宜上ＣＨＤ組成物と称される。
（００１５４） 第１の実施形態として、本開示のＣＨＤ組成物は、キトサン及び薬剤から形成された凝集体を含んでいてもよいが、しかしいかなるヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）も含有しない。この凝集体はキトサン−薬物凝集体（便宜上ＣＤＡと示す）と称される。薬物の濃度は、キトサンの合計重量と合わせた薬物の全重量に対して、すなわち、重量パーセント基準で、好ましくは０．１％から３０％の間にある。
（００１５５） 例えば、一実施形態において、本開示は以下を含む組成物を提供する：（ａ）水性媒体；（ｂ）ジクロフェナク又はその塩であってもよいＮＳＡＩＤ、及び（ｃ）水性媒体中で分散したキトサン粒子、ここで、以下の少なくとも１つは真である：ｉ）大半の粒子は２６〜１００ミクロン（場合によって、３０〜８０ミクロン）の範囲の直径を有する；及び／又は、ｉｉ）キトサンは、７５−９５％（場合によって、８０〜９２％）の間の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有する；及び／又は、ｉｉｉ）キトサンは２６０−６００キロダルトンの分子量を有する。
（００１５６） 第２の実施形態として、本開示のＣＨＤ組成物は、ヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）及び薬剤から形成された凝集体を含んでもよいが、いかなるキトサンも含有しない。この凝集体はヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）−薬物凝集体（便宜上ＨＤＡと示す）と称される。薬物の濃度は、ヒアルロナンの合計重量と合わせた薬物の全重量に対して、すなわち、重量パーセント基準で、好ましくは０．１％から３０％の間にある。
（００１５７） 第３の実施形態として、本開示のＣＨＤ組成物は、ヒアルロナン及びキトサンから形成された凝集体を含んでもよいが、しかしいかなる薬剤も含有しない。この凝集体はキトサン−ヒアルロナン凝集体（便宜上ＣＨＡと示す）と称される。ＣＨＡ凝集体は、キトサン及びヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）の合計重量に対して１０−９０重量％のキトサン、及び９０−１０％のヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）を含む。
（００１５８） 更に、ＣＨＤ組成物は、ＣＨＤ組成物中にまだ存在しない１種又は複数の追加の凝集体を含んでもよく、ここで、これらの１種又は複数の追加の凝集体は以下から選択される：ヒアルロナン又は薬剤を含まないキトサン凝集体；キトサン又は薬剤を含まないヒアルロナン凝集体；キトサン又はヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）を含まない薬剤凝集体；キトサン及びヒアルロン酸を含むがいかなる薬剤も含まない凝集体、キトサン及び薬剤を含むがいかなるヒアルロナンも含まない凝集体、及び／又はヒアルロナン及び薬剤を含有するがいかなるキトサンも含まない凝集体。
（００１５９） 先に言及したように、ＣＨＤ組成物は凝集体の一部として薬剤を含んでもよいが、ＣＨＤ組成物は、場合によって、追加の薬剤（ＣＨＤ組成物の凝集体（複数可）中の薬剤と同じでも同じでなくてもよい）を非凝集体薬剤の形態で含んでもよい。追加の薬剤が凝集体の一部でない場合、そのような組成物はＣＤＡ及びｎＡＤであってもよく、例えば凝集体及び非凝集体薬物が同一であると特に規定する場合、Ｃｄ１Ａ、ｎＡｄ１、又は凝集体及び非凝集体薬物が異なる場合、Ｃｄ１Ａ及びｎＡｄ２であってもよい。代替として、組成物はＨＡＤ及びｎＡＤであってもよく、例えば凝集体及び非凝集体薬物が同一であると特に規定する場合、Ｈｄ１Ａ及びｎＡｄ１、又は凝集体及び非凝集体薬物が異なる場合、Ｈｄ１Ａ及びｎＡｄ２であってもよい。別の代替として、組成物はＣＨＡ及びｎＡＤであってもよい。
（００１６０） 更に、ＣＨＤ組成物は、それぞれ凝集体の形態で２種以上の異なる薬剤を含んでもよい。例えば、単一凝集体が２種以上の薬物を含んでもよく、例えば、Ｃｄ１ｄ２Ａと示す凝集体が本開示の組成物中にあってもよく、Ｈｄ１ｄ２Ａと示す凝集体が本開示の組成物中にあってもよく、どちらかが正確に２種の薬剤を含む凝集体を有する組成物を提供する。更に、又は代替として、更に２種の薬物が単一組成物内の別個の凝集体に位置してもよい。例えば、キトサンを別個の凝集体中のｄ１及びｄ２と組み合わせた場合、Ｃｄ１Ａ及びＣｄ２Ａを含む組成物になる。同様に、本開示は、Ｈｄ１Ａ及びＨｄ２Ａを含む組成物、すなわち、それぞれ異なる薬剤を担持する２種の異なるヒアルロナン凝集体を有する組成物を提供する。
（００１６１） 先に言及したように、本開示は１種又は複数の明瞭な凝集体を含む組成物を提供し、ここで、凝集体は、ヒアルロナン、キトサン及び薬剤から選択される２種又は３種の成分を含む。場合によって、ヒアルロナンは、ヒアルロナンのみを含む明瞭な凝集体中に存在してもよい。そのような組成物は便宜上ＨＡ組成物と称され、ＨＡ（ヒアルロナン−凝集体のみ）を含む本開示の実施形態はＨＡ実施形態と称されてもよい。
（００１６２） 本開示のＨＡ組成物はヒアルロナンのみ含有する凝集体及び液体担体を含むが、ＨＡ組成物は１種又は複数の他の凝集体を含んでもよい。例示の追加の凝集体は、ヒアルロナン又は薬剤を含まないキトサン凝集体；キトサン又はヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）を含まない薬剤凝集体；キトサン及びヒアルロン酸を含むがいかなる薬剤も含まない凝集体、キトサン及び薬剤を含むがいかなるヒアルロナンも含まない凝集体、及び／又はヒアルロナン及び薬剤を含有するがいかなるキトサンも含まない凝集体である。
（００１６３） 従って、ＨＡ組成物は、場合によって、凝集体の一部として薬剤を含んでもよい。しかし、別の実施形態において、ＨＡ組成物は薬剤を含み、これは、非凝集体薬剤の形態で、凝集体形態の薬剤と同じでも同じでなくてもよい。一態様において、ＨＡ組成物は２種の異なる薬剤を含み、場合によって、両方が凝集体形態にあり、場合によって、一方の薬剤は凝集体形態にあり、他方の薬剤は非凝集体形態にある。
（００１６４） 先に言及したように、本開示は１種又は複数の明瞭な凝集体を含む組成物を提供し、ここで、凝集体は、ヒアルロナン、キトサン及び薬剤から選択される２種又は３種の成分を含む。場合によって、キトサンは、キトサンのみを含む明瞭な凝集体中に存在してもよい。そのような組成物は便宜上ＣＡ組成物と称され、ＣＡ（キトサン−凝集体のみ）を含む本開示の実施形態はＣＡ実施形態と称されてもよい。
（００１６５） 本開示のＣＡ組成物はキトサンのみ含有する凝集体及び液体担体を含むが、ＣＡ組成物は１種又は複数の追加の凝集体を含んでもよい。例示の追加の凝集体は以下から選択される：キトサン又は薬剤を含まないヒアルロナン凝集体；キトサン又はヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）を含まない薬剤凝集体；キトサン及びヒアルロン酸を含むがいかなる薬剤も含まない凝集体、キトサン及び薬剤を含むがいかなるヒアルロナンも含まない凝集体、及び／又はヒアルロナン及び薬剤を含有するがいかなるキトサンも含まない凝集体。
（００１６６） 従って、ＣＡ組成物は、場合によって、凝集体の一部として薬剤を含んでもよい。しかし、別の実施形態において、ＣＡ組成物は薬剤を含み、これは、非凝集体薬剤の形態で、凝集体形態の薬剤と同じでも同じでなくてもよい。一態様において、ＣＡ組成物は２種の異なる薬剤を含み、場合によって、両方が凝集体形態にあり、場合によって、一方の薬剤は凝集体形態にあり、他方の薬剤は非凝集体形態にある。
（００１６７） 本明細書に開示される組成物実施形態のそれぞれにおいて、薬剤は、例えば特に本明細書において特定された薬剤のいずれからも選択されてよい。更に、組成物が複数の薬剤を含む場合、２種以上の薬剤が同一である必要はない。医薬品組成物は好ましくは殺菌した形態にある。
（００１６８） 例えば、一実施形態において、本開示は、関節への組成物の送達でＡＰＩの長期放出を提供する、医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含む組成物を提供する。本開示はまた追加の実施形態を提供し、ここで、ＡＰＩを含む組成物は、以下の例示の特性のいずれか１つ又は複数を更に特徴とする：組成物は更にキトサンを含む；組成物は、ＡＰＩを含む粒子を更に含む；ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩはジクロフェナクであり、ここで、場合によって、少なくともジクロフェナクは結晶性形態にあってもよい；組成物は１〜５０ｍｇのＮＳＡＩＤ（例えばジクロフェナク）を含む；送達は関節内注射による；長期放出は少なくとも２４時間の期間である。
（００１６９） 別の例として、一実施形態において、本開示は、関節に活性薬剤（ＡＰＩ）の長期放出を提供する方法であって、２４時間以上の期間にわたってＡＰＩの長期放出を提供する、ＡＰＩを含む組成物を関節に投与する工程を含む方法を提供する。本開示はまた追加の実施形態を提供し、ここで、活性薬剤（ＡＰＩ）の長期放出を関節へ与える方法は、以下の例示の特性のいずれか１種又は複数を更に特徴とする：ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩはジクロフェナクである；組成物は１〜５０ｍｇのＮＳＡＩＤを含む；投与は関節内注射による；組成物は粒子を含み、ＡＰＩは粒子に組み込まれる。
（００１７０） 以下は、本開示の医薬組成物の幾つかの追加の例示の実施形態にある：
１）キトサン、ヒアルロナン及び薬剤を含む凝集体、並びに液体担体を含む医薬品組成物。
２）ヒアルロナン又は薬剤を含まないキトサン凝集体を更に含む、実施形態１の医薬品組成物。
３）キトサン又は薬剤を含まないヒアルロナン凝集体を更に含む、実施形態１の医薬品組成物。
４）キトサン又はヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）を含まない薬剤凝集体を更に含む、実施形態１の医薬品組成物。
５）キトサン及びヒアルロン酸を含むがいかなる薬剤も含まない凝集体を更に含む、実施形態１の医薬品組成物。
６）キトサン及び薬剤を含むがいかなるヒアルロナンも含まない凝集体を更に含む、実施形態１の医薬品組成物。
７）ヒアルロナン及び薬剤を含有するがいかなるキトサンも含まない凝集体を更に含む、実施形態１の医薬品組成物。
８）液体担体中に溶解した薬剤を更に含む、実施形態１−７のいずれかの医薬品組成物。
９）組成物中の薬剤として鎮痛薬を含む、実施形態１−８のいずれかの医薬品組成物。
１０）組成物中に薬剤としてＮＳＡＩＤを含む、実施形態１−８のいずれかの医薬品組成物。
１１）ＤＭＡＲＤが組成物中の薬剤である、実施形態１−８のいずれかの医薬品組成物。
１２）ＤＭＯＡＤが組成物中の薬剤である、実施形態１−８のいずれかの医薬品組成物。
１３）第１の凝集体、第２の凝集体及び液体担体、キトサン又は薬剤を含まずヒアルロナンを含む第１の凝集体、並びにヒアルロナンを含まずキトサン及び薬剤を含む第２の凝集体を含む医薬品組成物。
１４）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態１３の医薬品組成物。
１５）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第３の凝集体を更に含む、実施形態１３の医薬品組成物。
１６）組成物中の薬剤として鎮痛薬を含む、実施形態１３−１５のいずれかの医薬品組成物。
１７）組成物中の薬剤としてＮＳＡＩＤを含む、実施形態１３−１５のいずれかの医薬品組成物。
１８）ＤＭＡＲＤが組成物中の薬剤である、実施形態１３−１５のいずれかの医薬品組成物。
１９）ＤＭＯＡＤが組成物中に薬剤である、実施形態１３−１５のいずれかの医薬品組成物。
２０）ヒアルロナンを含まずキトサン及び薬剤を含む、第１の凝集体を含む医薬品組成物。
２１）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態２０の医薬品組成物。
２２）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第３の凝集体を更に含む、実施形態２０の医薬品組成物。
２３）薬剤を含まずヒアルロナン及びキトサンを含む第１の凝集体、ヒアルロナンを含まずキトサン及び薬剤を含む第２の凝集体、並びに液体担体を含む医薬品組成物。
２４）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態２３の医薬品組成物。
２５）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第３の凝集体を更に含む、実施形態２３の医薬品組成物。
２６）キトサンを含まずヒアルロナン及び薬剤を含む第１の凝集体、ヒアルロナンを含まずキトサン及び薬剤を含む第２の凝集体並びに液体担体を含む医薬品組成物。
２７）液体担体中に溶解した薬剤を更に含む実施形態２６の医薬品組成物。
２８）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第３の凝集体を更に含む、実施形態２６の医薬品組成物。
２９）薬剤又はキトサンを含まずヒアルロナンを含む第１の凝集体、薬剤又はヒアルロナンを含まずキトサンを含む第２の凝集体並びに液体担体を含む医薬品組成物。
３０）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態２９の医薬品組成物。
３１）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第３の凝集体を更に含む、実施形態２９の医薬品組成物。
３２）キトサン又は薬剤を含まずヒアルロナンを含む第１の凝集体及び液体担体を含む医薬品組成物。
３３）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態３２の医薬品組成物。
３４）薬剤を含まずキトサン及びヒアルロナンを含む第２の凝集体を更に含む、実施形態３２の医薬品組成物。
３５）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第３の凝集体を更に含む、実施形態３４の医薬品組成物。
３６）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態３４の医薬品組成物。
３７）ヒアルロナン又は薬剤を含まずキトサンを含む第１の凝集体及び液体担体を含む医薬品組成物。
３８）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態３７の医薬品組成物。
３９）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第２の凝集体を更に含む、実施形態３７の医薬品組成物。
４０）薬剤を含まずキトサン及びヒアルロナンを含む第１の凝集体及び液体担体を含む医薬品組成物。
４１）液体担体に溶解した薬剤を更に含む、実施形態４０の医薬品組成物。
４２）キトサン又はヒアルロナンを含まず薬剤を含む第２の凝集体を更に含む、実施形態４０の医薬品組成物。
（００１７１） これらの例示の医薬組成物実施形態１−４２のそれぞれにおいて、鎮痛薬が薬剤として存在してもよい。この選択肢は、本開示の医薬組成物に限定して考えられるべきではなく、ここで、本明細書に開示される薬剤のいずれかが薬剤として存在してもよく、実際に、特に本明細書において開示しない薬剤が医薬品組成物中に存在してもよい。
組成物の調製
（００１７２） 一態様において、凝集体（複数可）は担体とは別々に形成され、次いで、本開示の組成物を形成するために凝集体（複数可）は担体成分と合わせる。例えば、凝集体は本明細書のどこか他のところで記載される噴霧乾燥又は凍結乾燥技法によって調製されてもよい。次いで、結果として得られた凝集体は、水、又は溶解成分、例えば、塩（複数可）及び／若しくはヒアルロナン及び／若しくは薬剤を含有する水と合わせる。そのような組み合わせは良好な短期安定性を有している。
（００１７３） 例えば、本開示の組成物は、以下のような２段階プロセスで形成されてもよい。キトサン凝集体は、キトサン（２．５ｍｇのキトサン／１ｍＬ水）の溶液にＴＰＰ溶液（３．００ｍｇのＴＰＰ／１ｍＬ水）を撹拌しながら添加し、３．０から０．５ｍｇ／ｍＬのＴＰＰに対するキトサンの最終濃度にすることにより調製されてもよい。これらの凝集体は２，０００ｒｐｍで遠心分離によって単離され、水と２度洗浄され、１ｘＰＢＳで再分散させる。ヒアルロン酸（１５００ｋＤａ）は懸濁液に添加され、１％（重量／体積）の最終濃度にし、混合物を一晩撹拌して水にＨＡを溶解する。生成物は、可溶性ヒアルロン酸を含む担体中で架橋したキトサン凝集体である。
（００１７４） 水性媒体中に凝集体（複数可）を分散させるために使用されてもよい別の選択肢は、比較的揮発性の有機溶媒中に凝集体（複数可）を分散させ、次いで、その溶媒／粒子の組み合わせを水又はＰＢＳ溶液へ添加し、有機溶媒を蒸発させることである。この手法を使用すると、凝集体を水中に分散することができる。
（００１７５） 本明細書のどこか他のところで言及するように、凝集体（複数可）のための担体は溶解したヒアルロナンを含んでもよい。凝集体、水及び溶解したヒアルロナンを含む組成物は以下のように調製されてもよい。凝集体（複数可）を１％のＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤を含有するヘキサンと合わせ、約１００ｍｇ／ｍＬの最終濃度にする。この混合物の２００μＬアリコートを２ｍＬの水に激しく撹拌しながら添加して水中ヘキサンのエマルジョンを得る。エマルジョンを３０℃で一晩撹拌してヘキサンの完全な蒸発を達成する。１ｘＰＢＳ又は０．５ｘＰＢＳ中に３％（重量／体積）の濃度でヒアルロナン（例えばＬｉｆｅｃｏｒｅ ＨＡ、７００ｋＤａ）の溶液を、成分を合わせて１００ｒｐｍで一晩撹拌することによって調製した。等しい重量のヒアルロナン溶液及び凝集体懸濁液を合わせ、ボルテックスし、一晩撹拌する。このプロセスは、溶解したヒアルロナンを含む水性担体の全体にわたって分散した凝集体をもたらし、これは本開示の一態様である。
（００１７６） ヒアルロナンの水溶液はずり流動化挙動を示す。一般に、他のすべての因子を一定に維持した場合、水に溶解するヒアルロナンが少ないほど、得られた溶液はずり流動化挙動が減少する傾向がある。キトサン凝集体をヒアルロナンの水溶液と合わせた場合、組み合わせはまた、キトサン凝集体を含まない同じ溶液と比較して、ずり流動化の減少を示す。ずり流動化作用の増加は一定の寸法の注射器針を介して組成物を送達することを妨害するので、減少したずり流動化は一般に望ましい。従って、凝集体（例えば正に帯電した凝集体）の水性ヒアルロナン溶液への添加は、ずり流動化の増加を相殺するために使用することができる。そうではなく、その溶液を濃い濃度及び／又は高分子量のヒアルロナン（どちらも一般に関節腔中でのヒアルロナンの滞留時間の増加には望ましいが）を用いて調製すれば、ずり流動化の増加が生じる。
本開示の方法
（００１７７） 一態様において、本開示は、苦しんでいる関節に薬剤を直接入れるために使用することができる組成物及び方法を提供する。全身的な送達と比較して、薬剤の局所的な送達は望ましくない医薬品の副作用を極小化し、対象に送達される活性薬剤の用量軽減を可能にし、必要な場合、関節内の薬剤の治療水準を増強する。関節から薬剤が急速になくなることは、歴史的に薬剤が関節に直接注射される場合に見られる問題であった。本開示は、注射部位で残存する凝集体と薬剤（複数可）を組み合わせることによりこの問題に取り組み、凝集体が分解する経時的な薬物の徐放性を提供する。
（００１７８） 本開示は、患者の関節の苦痛に取り組む方法を提供する。処置されている関節は軟骨性関節であってもよく、又は、関節は滑膜性関節であってもよい。より具体的には、苦痛がある関節は、例えば、膝、腰、肘、手首、くるぶし、肩、指又は足指関節であってもよい。関節は、手首の５つの関節である手根中手（ＣＭＣ）関節のいずれか１つ又は複数であってもよい。
（００１７９） 例えば、本開示は、損傷した膝、腰、及び関節炎又は他の変形性関節疾患（骨関節症、関節リウマチ又は乾癬性関節炎等の）にかかっていると診断された他の関節の処置を提供する。
（００１８０） 従って、一実施形態において、本開示は、炎症の進行を防止する方法であって、キトサン及び抗炎症性薬剤を含む有効量の粒子を、投与以前に外傷を経験した、その必要がある対象に投与する工程を含む方法を提供する。以下の例示の任意選択の特色のいずれか１つ又は複数は、炎症の進行を防止する方法を更に特徴とすることができる：抗炎症剤はＮＳＡＩＤである；抗炎症剤は、場合によって少なくとも一部結晶性形態のジクロフェナクである；抗炎症剤はステロイドである。
（００１８１） 関連する実施形態において、本開示は、骨関節症を防止する方法であって、投与前に外傷を経験した、その必要がある対象にキトサン及び抗骨関節症薬剤を含む有効量の粒子を投与する工程を含む方法を提供する。場合によって、骨関節症抗薬剤はＮＳＡＩＤである；又は、ＤＭＯＡＤである；又は、ＤＭＡＲＤである。
（００１８２） 本開示は、対象の関節の苦痛の問題に取り組む、１つ又は複数の医療の恩恵を生み出す方法を提供する。例えば、一実施形態において、本開示は、関節炎によって引き起こされ得るような関節中の疼痛及び／又は炎症を軽減する方法を提供する。
（００１８３） 一実施形態において、本開示は、関節炎として知られる関節の苦痛を処置する組成物及び方法を提供する。関節炎は、対象の関節の望ましくない炎症を有する症状である。一般に、関節炎という用語は、関節に影響する１００を超えるリウマチ性疾患及び症状を指す。２つの最も一般的なタイプの関節炎は骨関節症及び関節リウマチである。
（００１８４） 骨関節症は最も一般的なタイプの関節炎で、特に年配の人々の間で見られる。骨関節症は、通常、関節の使用に経験を積んだ正常損耗によって引き起こされる。骨関節症は時には変形性関節疾患又は骨関節症と呼ばれる。骨関節症はたいてい、関節を形成するために一緒になった、骨の端部を被覆する硬質の滑りやすい組織である軟骨に影響する。健康な軟骨は、骨が互いを覆って滑ることを可能にし、また、物理的な運動の衝撃からエネルギーを吸収する。骨関節症において、軟骨は壊れ摩滅する。そのために、軟骨の下の骨は互いにこすれ、疼痛、腫脹、及び関節運動の喪失を引き起こす。経時的に、関節はその正常形を失いさえし得る。幾つかの事例において、骨増殖体又は骨棘と呼ばれる骨の小さな堆積物は関節の縁で成長することがある。骨又は軟骨の小片は関節腔の内部で折れて浮遊し、関節内で一層の疼痛及び損傷を引き起こし得る。骨関節症の対象は通常関節痛及び幾つかの運動制限を有する。
（００１８５） 関節炎の２番目に一般的な形態にある関節リウマチにおいて、免疫系は関節の組織を攻撃し、疼痛、炎症、最終的に関節損傷及び奇形をもたらす。関節リウマチは一般に骨関節症より若い年齢で始まり、関節の腫脹及び発赤を引き起こし、人々は病気になり、疲れ、稀に発熱することがある。他のタイプの関節炎は、尿酸結晶、感染及び基礎疾患状態（乾癬又は自己免疫疾患等）の原因となる場合がある。
（００１８６） 本開示は、苦しんでいる関節腔若しくは空洞、又は軟組織への薬剤の局所的な送達を含む、関節炎の処置を提供する。非炎症性タイプの関節炎（例えば骨関節症）は、通常ＮＳＡＩＤを含む口腔内痛投薬を用いて処置され、本開示は、薬剤としての鎮痛剤の局所的な送達を提供する。関節炎（例えば関節リウマチ）の炎症性タイプも口腔内痛投薬を用いて処置されてもよいが、しかし、更に、経口又は系統的な注射可能抗炎症性薬剤（例えばコルチコステロイド等のステロイド）を用いて処置されてもよい。更に、炎症性タイプの関節炎は、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）又はバイオロジクスを用いて抗炎症性標的に対して処置されてもよい。本開示は、本開示の組成物中の局所的な送達の薬剤として、非炎症性及び炎症性関節炎のための投薬（複数可）の包含を提供する。
（００１８７） 従って、一実施形態において、本開示は、関節の炎症を軽減する方法、及び関節の炎症を軽減するために使用されてもよい組成物の両方を提供する。その炎症は上に論じた関節炎によって引き起こされてもよいが、それは、代替として他の原因（例えば関節への他の疾患状態又は外傷）によるものでもよい。例えば、一実施形態において、本開示は、癒着性関節嚢炎としても知られる五十肩を処置する方法を提供する。本方法は、五十肩にかかっている対象の肩に直接本明細書に開示される凝集体を投与する工程を含む。例えば、投与は、肩カプセル、回旋腱板の腱、肩関節、肩関節近傍の軟組織、又は肩カプセル及び肩関節を囲む滑液に向けられてもよい。投与は、薬剤（例えばジクロフェナク等のＮＳＡＩＤ）の治療有効量を送達する注射によってもよい。本開示の方法は、五十肩を特徴とする疼痛及び硬直を緩和する。肩の動きは著しく切り詰められる厳しい五十肩を持っている対象において、本発明の方法は、肩の運動の容易さ及び範囲をより大きくする。本発明の方法は、五十肩にかかっている対象の肩カプセルの滑らかな組織に存在する炎症を軽減することができる。
（００１８８） 別の実施形態において、患者は関節の苦痛を関節運動中に生じる疼痛の形態で持っているが、しかし、疼痛の原因は関節炎によらず、実際には公知の原因ではないことがある。従って、一実施形態において、対象は慢性関節痛にかかっている。慢性関節痛を有する対象は、関節病と診断されてもされなくてもよい。別の実施形態において、関節痛は漸近の関節痛であり、別の実施形態において、疼痛は特発性の関節痛である。これらの実施形態において、疼痛は、骨関節症等の軟骨損傷、変性又は外傷の臨床診断がなされていない外傷、非病気の関節中に生じる。従って、本開示は、関節の運動に関係した疼痛の軽減のために、その必要がある対象の関節への鎮痛剤の局所的な送達を提供する。
（００１８９） 本開示の組成物の投与は、そのような組成物を受ける患者のための医療の恩恵及び健康状態改善を提供する。例えば、組成物は、適当な関節機能を改善又は修復するのを助けるために病気か、そうでなければ苦しんでいる関節に特に望ましい、関節の増強された潤滑及び／又は緩和を提供してもよい。増強された関節の潤滑は、一般に、関節運動に関係した疼痛を軽減し、その疼痛軽減は、組成物中の凝集体又はどこか他のところに存在する鎮痛剤（複数可）の送達によって補足及び／又は延長されてもよい。例えば、組成物中に存在するキトサンは、関節腔内で炎症性疼痛に鎮痛薬効果を提供することができる（参照：例えば、Ｏｋａｍｏｔｏ Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ４９：２４９〜２５２（２００２））。
（００１９０） 対象への本開示の組成物の投与による、関節の増強された潤滑及び／又は緩和、並びに直ちに又は迅速に対象に与えられる他の恩恵は、より重篤な処置及び様相を遅らせるために使用することができる。例えば、そうでなければ短期に膝の取り換えをする必要があり得る患者は、その代りに、関節の現状を維持しそれによって外科的処置（その問題に取り組むために例えば膝の取り換え、又は他の関節の取り換え）の必要を遅らせるために本開示の組成物によって処置されてもよい。言いかえれば、本開示の組成物の投与により達成することができる増強された運動性及び軽減された疼痛は、より侵襲性で危険な手順の必要を遅らせることによって対象に恩恵を与え得る。
（００１９１） 本開示の製剤は、外傷骨関節症（ＯＡ）（軍事行動に従事する人々に生じ得るような）の場合には前処処置するために使用されてもよい。軍事行動中に生じ得るような異常な機械的ストレスは、骨関節症の関節軟骨変性をもたらす場合がある。そのような働きは軟骨のアポトーシス及び代謝の障害を引き起こし得る。酸化的障害はこれらの悪影響の直近原因であり得、そのため、軟骨細胞の抗酸化剤防御は、機械的損傷に対する耐性を提供し得る。多数の細胞のタイプの抗酸化剤防御は、中程度のオキシダント露光によって刺激される。従って、一態様において、本開示は、異常な機械的ストレスへの曝露後に軟骨外植片中の急性軟骨死及びプロテオグリカン破壊を軽減するためにオキシダントプレコンディショニングを提供する。
（００１９２） 本開示の製剤は外傷骨関節症（ＯＡ）後に有益な効果を与えることができる。抗オキシダント（ＮＳＡＩＤ、例えばジクロフェナクを含む）を含む製剤は、機械的に誘発された軟骨の損傷及びマトリックス劣化の進行を防止するために傷害前、例えば、数時間内に適用されてもよい。更に、前処置は、滑膜のスーパーオキシド活性の増加をもたらし得る。従って、スーパーオキシドジスムターゼ活性を減少させる薬剤を含む、本開示の組成物は、外傷後の処置レジメンに有益であり得る。ＮＳＡＩＤはまた、炎症細胞の働きを調整し、それによって酸化代謝物の放出を軽減することができる。本開示は、本明細書において開示される関節腔への送達製剤を含む、この有益な結果を達成する方法を提供する。関節腔への局所的な送達は、その腔での対応する高い有効な活性を有する高濃度の抗酸化剤をもたらす。
（００１９３） 本開示の方法及び組成物によって処置される対象は関節の苦痛を有していてよい。本明細書において使用される場合、関節の苦痛は、１又は複数の関節の疼痛、関節の炎症、関節の外傷、関節の疾患を指し、ここで、疾患は、人身事故（ＡＣＬ傷害）、メニスカス引裂、又は軟骨の損傷又は喪失等による、関節の老朽化、例えば関節が経時的に経験する正常損耗、損傷を受けた関節を含む。患者はいかなる年齢であってもよい。
（００１９４） 従って、一態様において、本開示は、対象の関節の疼痛を緩和する方法であって、キトサン、ヒアルロナン及び薬剤を含む凝集体、並びに担体を含む有効量の組成物をその必要のある対象の関節に投与する工程を含む方法を提供する。薬剤は、鎮痛薬例えば麻薬性鎮痛薬である。
（００１９５） 別の態様において、本開示は、対象の関節の炎症を軽減する方法であって、キトサン、ヒアルロナン及び薬剤を含む凝集体並びに担体を含む有効量の組成物を、その必要のある対象の関節に投与する工程を含む方法を提供する。薬剤はＮＳＡＩＤであってもよい。
（００１９６） 別の態様において、本開示は、関節リウマチにより対象の関節の損傷の進展を遅らせる方法であって、キトサン、ヒアルロナン及び薬剤を含む凝集体並びに担体を含む有効量の組成物を、その必要のある対象の関節に投与する工程を含む方法を提供する。薬剤はＤＭＡＲＤであってもよい。
（００１９７） 本開示の方法は関節腔への組成物の投与に限定されていない。本開示の組成物は、医療の恩恵及び健康状態改善を提供するために関節腔を含まない部位で対象に局所的に投与されてもよい。３例として、以下に更に詳細に論じるように、対象は回旋腱板損傷、テニス肘又は足底筋膜炎にかかっていてもよい。
（００１９８） 例えば、一実施形態において、本開示は、キトサン及び医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含む本開示の組成物をその必要のある対象の軟組織に投与する工程を含む処置又は防止の方法を提供する。任意選択の実施形態において、方法は、例えば、又は以下のいずれか１又は複数を更に特徴としてもよい：対象は軟組織のリウマチの症候群を有する；対象は、筋膜の疼痛、手根管症候群、狭窄性腱鞘炎及び足底筋膜炎から選択される症候群を有する；対象はテニス肘又はゴルファー肘を有する；対象は滑液嚢炎を有する；対象は腱炎を有する；軟組織は腱、靭帯、嚢及び関節に隣接する筋肉から選択される。また場合によって、投与は注射によってもよい。ＡＰＩは、本明細書において開示されるジクロフェナク等のＮＳＡＩＤであってもよい。
（００１９９） 回旋腱板は肩の筋肉及び腱で構成される。これらの筋肉及び腱は、肩ソケット中に上側腕骨のボールをしっかりと保持するのを助ける。肩関節まわりに位置し、回旋腱板を含む筋肉は、棘上筋、棘下筋、肩甲下筋及び小円筋と命名されている。回旋腱板損傷はいかなるタイプの回旋腱板筋肉又は関係する腱への刺激又は損傷を含む。回旋腱板に影響し得る、以下の３つの一般の症状がある：回旋腱板腱炎、回旋腱板インピンジメント症候群及び回旋筋腱板損傷。回旋腱板損傷の原因は、挙げ、下げ及び繰り返しの腕動作、特に、球を投げる又は頭上の棚に品を入れる等の頭上に行われることを含んでもよい。本開示は、回旋腱板損傷を処置する方法であって、活性薬剤として抗炎症性薬剤及び／又は鎮痛薬を場合によって含んでもよい本開示の組成物を、回旋腱板に、例えば回旋腱板の筋肉のいずれかに投与する工程を含む方法を提供する。
（００２００） テニス肘は、腕、前腕及び手の筋肉の使い過ぎによって引き起こされる肘疼痛をもたらす症状についての一般用語である。この症状は時には外側上顆炎又は内側上顆炎と呼ばれる。それはテニスをすることのみから生じないが、しかし、肘が通常手首及び腕の反復運動によって酷使される場合、より一般に引き起こされる。テニス肘は、肘の外側のまわりの筋肉及び腱領域の急激か鋭敏な傷害によって引き起こされる。テニス肘は、具体的には肘の外側上顆と呼ばれる外部の骨のような領域に前腕の筋肉及び腱が結合している領域を含んでいる。使い過ぎ傷害は、肘の裏面又は後部に同様に影響する場合がある。本開示は、テニス肘を処置する方法であって、活性薬剤として抗炎症性薬剤及び／又は鎮痛薬を場合によって含む本開示の組成物を、肘の外側のまわりの筋肉に、例えば、肘の領域の多数の筋肉のいずれ１つ又は複数に投与する工程を含む方法を提供する。
（００２０１） 足底筋膜は、人の足の底部の皮膚の下に直接存在する、長く薄い靭帯である。それはかかとを足の前方に連結し、足底弓を支持する。足底筋膜は、歩行、ランニング及び他の運動中に足に当たる高い応力及び歪を吸収する。時には、過剰な圧力が組織を損傷するか又は引きちぎり、局所的な炎症をもたらし、その結果かかとの疼痛及び足底筋膜炎の硬直を起こす。疼痛はまた、踵骨の内側結節で足底筋膜を発端にしてコラーゲン変性によって引き起こされ得る。この変性は慢性腱炎の慢性壊死に類似し、これは、コラーゲン連続性の喪失、基底物質（結合組織のマトリックス）及び脈管質の増加、並びに腱炎の急性炎症と共に通常見られる炎症細胞ではなく線維状芽細胞の存在を特色とする。変性の原因は、それ自体を修復する身体の能力を乗り越える、足底筋膜の繰り返しの微細亀裂である。足底筋膜炎は、かかとの底部の疼痛の最も一般的な原因である。足底筋膜炎の古典的兆候は、最悪の疼痛が朝最初の数ステップで生じるということである。しかし、すべての患者がこの症候を持つとは限らない。およそ２００万人の患者が、毎年米国のこの症状について処置される。本開示は、足底筋膜の傷害及び／又は変性を処置する方法であって、活性薬剤として抗炎症性薬剤及び／又は鎮痛薬を場合によって含む本開示の組成物を足底筋膜の領域に投与する工程を含む方法を提供する。
（００２０２） 従って、例示の実施形態において、本開示は、以下のように、本開示の範囲の単に例示で非限定的である処置の方法を提供する：
１）対象の関節の疼痛を緩和する方法であって、例示の実施形態１−４２のいずれかの有効量の医薬品組成物をその必要がある対象の関節に投与する工程を含む方法。
２）対象の関節の炎症を軽減する方法であって、例示の実施形態１−４２のいずれかの有効量の医薬品組成物をその必要がある対象の関節に投与する工程を含む方法。
３）対象の関節の損傷の進展を遅らせる方法であって、例示の実施形態１−４２のいずれかの有効量の医薬品組成物をその必要がある対象の関節に投与する工程を含む方法。
４）対象の部位の炎症を軽減する方法であって、例示の実施形態１−４２のいずれかの有効量の医薬品組成物を炎症の部位に直接投与する工程を含む方法。
５）対象の部位の疼痛を軽減する方法であって、例示の実施形態１−４２のいずれかの有効な量の医薬品組成物を疼痛の部位に直接投与する工程を含む方法。
（００２０３） これらの例示の方法の実施形態１〜５それぞれにおいて、鎮痛薬が薬剤として使用されてもよい。これらの例示の方法の実施形態１〜５それぞれにおいて、ＮＳＡＩＤが薬剤として使用されてもよい。これらの例示の方法の実施形態１〜５それぞれにおいて、ＤＭＡＲＤが薬剤として使用されてもよい。これらの例示の方法の実施形態１〜５それぞれにおいて、ＤＭＯＡＤが薬剤として使用されてもよい。これらの４つの選択肢は、本開示の方法に限定して考えられるべきではなく、ここで、本明細書において開示される薬剤のいずれも薬剤として使用されてよく、実際に、具体的には本明細書において開示されない薬剤が、これらの例示の方法において使用されてもよい。
（００２０４） 本組成物は、これらの恩恵を患者への最小限の不便で提供する。例えば、組成物の送達は、通常かなり短期間の間に外来患者のセッティングで達成することができる。組成物が局所的に送達されるので、治療が全身に送達される場合、そうでなければ生じる得る関節の外側の副反応のリスクが軽減される。薬剤の副作用（複数可）の極小化は、特定の患者にとって治療をより安全にするだけでなく、経口薬物が禁忌とされる病状（例えば糖尿病、ＮＳＡＩＤＳ）の患者を含む治療を受けることができる個体数を潜在的に拡大する。
（００２０５） 本開示の方法及び組成物は外来患者セッティングに適切であるが、また、それらは入院患者（すなわち病院、外科的なセッティング）において使用するのにも適切である。例えば、医薬組成物は、外科的処置、例えば、関節の取り換え又はそのメニスカス引裂の固定を受けている対象に投与されてもよい。本組成物はまた、又は代替として、治癒の速度を加速するために手術後のセッティングの対象に投与されてもよい。
（００２０６） 本開示の方法は、人々の処置に適切（ｓｕａｂｌｅ）であるが、しかし、また、それらは畜産での適用において使用されてもよい。例えば、方法は、ウマ、イヌ又はネコ等の動物の関節の苦痛又は軟部組織損傷を処置するために使用されてもよい。同様に、本開示の組成物及びその剤形は、人ではなく動物への投与の見方で選択されてもよい。用語「対象」及び「患者」は、ヒトを指し、場合によってそれに限定されてもよい。しかし、より一般に、用語「対象」及び、「患者」は、関節の苦痛又は軟部組織損傷に罹患したヒト及び動物を指す。
（００２０７） 本組成物は、短期又は長期、すなわち日、週、月又は更に年の期間にわたって１つ又は複数の剤形で対象に投与することができる。言いかえれば、本開示の恩恵は、本明細書において開示される組成物の単一投与又は一連の投与によって達成されてもよい。例えば、対象は、４週間の間の毎週の投与、その後、５か月の間の毎月の投与を受けてもよい。他の投与レジメンは、処置されている病状の重症度、処置を受ける健康状態及び対象の他の特性、及び投与されている具体的な凝集体及び薬剤（複数可）に基づいて開発されてよい。１つの投与の組成物は、同じ対象に異なる時間に与えられる別の投与の組成物と同じである必要はない。
（００２０８） 処置に使用するのに必要とされるＡＰＩの量は選択された特定のＡＰＩに応じて変化するだけでなく、また投与経路、処置されている症状の性質及び患者の症状及び年齢と共に変化する。用量は、究極的には、付き添いの医師又は臨床医の裁量にある。しかしながら、本明細書において開示される凝集体の局所的な送達によって対象に投与される薬剤の有効量は、一般に、その薬剤が非局所的な送達（例えば経口投与）によって投与される場合より著しく少ない。例えば、一般の成人について、治療有効量のジクロフェナクを送達する、凝集体の関節内注射は、５０ｍｇ未満のジクロフェナクを有する。その期間が週又は月の程度である場合、対象はそのような関節内注射を定期的に受ける。対照的に、有効量のジクロフェナクの経口投与は、通常５０〜１５０ｍｇ／日であり、ここで、この一日量は効能を得るために数週及び恐らく数か月の間投与されることがある。従って、３０日の期間にわたり、経口投与によって有効量のジクロフェナクを受ける対象は、１５００から４５００ｍｇの程度のジクロフェナクが投与されてもよいが、本開示による関節内注射を受ける対象は、主治医によって選択される用量に応じて３０日の期間に２００ｍｇ未満、又は１００ｍｇ未満、又は５０ｍｇ未満のジクロフェナクを受けてもよい。本開示の凝集体の局所投与及び放出速度論は、全身的な送達と比較して、はるかに少ない用量で対象に有効量のＮＳＡＩＤを与え、いかなる薬剤の投与にも伴う副作用の軽減に非常に有利である。従って、一実施形態において本開示は、３０日の期間にわたって骨関節症の処置を提供し、特に５０ｍｇ未満のＮＳＡＩＤ、例えば５０ｍｇ未満のジクロフェナクの使用によって３０日の期間の間に骨関節症に関係した疼痛の軽減を提供する。
（００２０９） 本開示の徐放性製剤の別の利点は、凝集体からの薬物の徐々の放出が薬物と薬物受容体との間でより一貫した接触を提供するということである。言いかえれば、薬物受容体部位は、薬物が経口的に日に一、二度投与される状況と比較して、本開示の凝集体から送達される薬物とより頻繁に接している。薬物がＮＳＡＩＤである事例において、本開示の凝集体を用いて実現される薬物−受容体相互作用の頻度が高まると、抗炎症性効果の点でより有効になる。これは次には、対象の骨関節症の進展を遅らせるのを助けることができる。実際に、本開示の凝集体からの送達の速度論は、骨関節症（ＯＡ）進展を遅らせるために望ましい治療上の閾値濃度を超えた薬物濃度を維持する。
（００２１０） 本開示の薬物を分担する凝集体の関節内の送達を使用する利点はまた、薬物標的インデックスを見ることで知ることができる。薬物標的インデックス（Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｉｎｄｅｘ）（ＤＴＩ）の概念は、文献（参照：例えばＫｉｒｔａｎｅ ＡＲ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１５ １０４：１１７４−１１８６及びＨｕｎｔ ＣＡ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １９８６ ３（６）：３３３−３４４に記載されている。ＤＴＩは、遊離の薬物の具体的なカプセル化製剤を使用する全体の恩恵を定量し、カプセル封入により薬物の治療係数について乗数として解釈することができる比の比である。大きいＤＴＩは、標的区画（例えば関節腔）への改善された標的、毒性区画（ここでは「正常」器官）の軽減された被曝、又はその両方に起因することができる。
（００２１１） 本質的には、ＤＴＩは、所与の薬物分子が所望の標的にぶつかる確率を求めることによって薬物の分子が薬物を受ける対象とどれほど効果的に相互作用するかを見る。経口送達では、薬物（ＮＳＡＩＤ等）が有効であるためには、胃腸系を通る安全な通過、血流に到達する前に、及び炎症シグナルの原因である領域の膝関節腔、特に細胞受容体に入る血流に到達した後等の通過する必要のある多数のハードルがある。関節内注射では、経口送達と比較して、薬物が関節腔に到達する可能性は大いに改善され、それにより、ＤＴＩの増進を提供する。更に、本開示の凝集体が滑膜に包埋される場合、それらは、ＮＳＡＩＤの受容体部位がある細胞の直ぐ近傍にある。従って、凝集体から拡散又はそうでなければ脱出する薬物は、受容体部位に到達するために遠くに移動する必要はない。本質的には、薬物及び薬物受容体の濃度は、比較的小さな量が薬物と受容体の両方を含むために必要であるので、薬物が凝集体を去れば直ちに比較的高くなる。同様に、薬物が、薬物が標的にしている領域に包埋されているので、薬物は正常組織での望ましくない副作用を引き起こし得る対象の領域に到達する恐れは低い。従って、本開示の凝集体による薬物送達は、薬物の比較的大きなＤＴＩを提供する。
（００２１２） 従って、一実施形態において、本開示は、滑液に医薬品活性成分（ＡＰＩ）の長期放出を達成する方法であって、（ａ）対象の関節へ粒子を投与する工程と；（ｂ）粒子を滑膜に移行させる工程と；（ｃ）粒子を滑膜内に包埋する工程と；（ｄ）粒子を滑膜中で分解させ、滑膜にＡＰＩを放出する工程とを含む方法を提供する。任意選択の実施形態において、以下の例示の特色のいずれかの１つ又は複数は、滑液へのＡＰＩの長期放出を達成する方法を更に特徴としてもよい：ＡＰＩは、投与の部位で対象の疼痛及び炎症の少なくとも１つを軽減する；ＡＰＩは疾患修飾を達成する；方法は、投与の部位で疼痛及び炎症のためのＡＰＩの薬物標的インデックスを増加させる；ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩはジクロフェナクであり、ここで、場合によって、ジクロフェナクの少なくともいくらかは結晶性形態にある。
（００２１３） 関連する実施形態において、本開示は、医薬品活性成分（ＡＰＩ）の薬物標的インデックス（ＤＴＩ）を上げる方法であって、関節（例えば膝）に関節内注射することによってＡＰＩを含む組成物を投与する工程を含む方法を提供する。追加の実施形態において、以下の例示の特色のいずれか１つ又は複数は、ＡＰＩのＤＴＩを上げる方法を更に記載することができる：ＡＰＩはＮＳＡＩＤである；ＡＰＩはジクロフェナクである；ＤＴＩは、経口、静脈内（ＩＶ）、皮下（ｓｕｂＱ）、局所に又は筋肉内（ＩＭ）のいずれかによってＡＰＩを投与することにより提供されるＤＴＩに対して引き上げられる；組成物は膝の滑液にＡＰＩを送達する；組成物は膝の滑膜にＡＰＩを送達する；ＡＰＩは膝の滑膜に包埋されていた粒子から放出される；組成物は、ジクロフェナク及びキトサンを含む粒子を含み、少なくともジクロフェナクのいくらかは、場合によって、結晶性形態にある。
（００２１４） また、本開示の組成物は、基本的なプラットフォームの融通性及び多目的性に関して有利である。より具体的には、キトサン及び／又はヒアルロナンから形成された、本明細書において開示されるポリマーの凝集体は、生物学的材料を含む広範囲の薬剤と適合する。凝集体は、関節腔への薬剤の時間制御された放出を提供するために、１種又は複数の薬剤を封入するかそうでなければ結合するのに使用されてもよい。凝集体が形成されるポリマーは天然に存在するか、又は、複数のセッティング（例えば化粧品、整形外科）で生物学的な安全性を示した、天然に存在する材料に由来する。
（００２１５） 本開示の組成物は固体形態又は液体形態にあってもよく、これらの形態のいずれで患者に送達されてもよい。固体の形態の場合、例えば米国特許第７，７３１，９８１号明細書及び第７，９１４，５１２号明細書に開示されているような、例えば送達カニューレ及び拡張組立体を使用して組成物が患者に送達されてもよい。本組成物は、カニューレの内部に取り付ける小さな詰め物の形態をしていてもよく、ここで、詰め物に適切なサイズは約０．５ｍｍから直径５ｍｍである。詰め物は多孔性でも多孔性でなくてもよく。それは、その形状及びコンシステンシーを維持する助けのために織った、又は不織布の材料を含んでいてもよい。関節腔への送達の後、組成物はその環境から湿気を吸収し、次いで、関節に活性薬剤を送達し始める。
（００２１６） 液体形態にある場合、組成物はペースト、ゲル、溶液、懸濁液、分散液等の形態を取ってもよい。それは、皮下注射器を使用して、すなわち関節内注射によって患者の関節に送達されてもよい。注射器は、適切なサイズの針、例えば１８〜２７のゲージ又は１８〜２４のゲージの程度のサイズの針を有する。代替として、液組成物は、熟練した健康管理専門家に公知の方法によってカニューレ又はカテーテルを使用して関節に送達されてもよい。
（００２１７） 候補製剤のインビボ放出特性は健康なヒツジの膝関節で評価されてもよい。製剤は、偽薬、薬物を装填した凝集体、又は薬物を含まない凝集体（ブランク凝集体）のいずれかを含む注射を用いて関節内注射によって投与される。例えば、薬物を装填した凝集体は、キトサン及びジクロフェナクを含有する粒子、適切な担体（例えばＰＢＳ）中に懸濁してある粒子であってもよい。薬物及びポリマー（例えばキトサン）の様々な用量及び濃度が評価されてもよい。薬物（例えばジクロフェナク）の局所的及び全身的な薬物動態（ｐｈａｒｍｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）（ＰＫ）及び薬力学（ｐｈａｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ）（ＰＤ）を評価するために、滑液及び血液が様々な時点で試料採取されてもよい。場合によって、炎症誘発性物質（細菌性脂質多糖体等）は、動物中の痛覚過敏の炎症性状態を誘発するために使用されてもよく、それは本開示の製剤によって調整される。薬物凝集体製剤の分解及び滞留を確立するために必要である限り、液は試料採取されてもよい。滑液は、場合によって数か月の期間にわたって例えば白血球、タンパク濃度を含む炎症の指標について、評価されてもよい。薬力学効果は、例えば浸出、皮膚温度、不具によって測定される、滑液炎症マーカー（例えばＰＧＥ２、白血球、タンパク質）及び／又は炎症の臨床的症状の軽減によって及び／又は、例えば機材を備えた通路を使用する地面保持力によって測定される足取りパラメーターの修復によって示される。動物は、例えば、日々定期的に、効能の臨床症状（例えば局所的な関節刺激の変化の証拠）について評価されてもよい。動物は、調査の全体にわたって折々秤量されてもよい。動物は、調査の中間点及び最後で安楽死させられてもよく、健康状態、食欲及び活動水準を記載する臨床的なパラメーターが記録されてもよい。各動物からの関節組織及び領域リンパ節が、例えば、局所刺激の変化の証拠、及び粒子の配置について、分光器で、肉眼で組織学的に調べられてもよい。活性薬剤（例えばジクロフェナク）が動物からなくなり、凝集体（例えばキトサン粒子）が関節からなくなるまで、調査が継続されてもよい。
（００２１８） 候補製剤はまた、薬力学を評価するラットの関節炎のペプチドグリカン−多糖類（ＰＧＰＳ）モデルで評価されてもよい。この調査によって、局在性膝滑膜炎モデルの効能の継続時間について情報を得ることができる。最初に、滑膜炎は、本開示による候補製剤での処置の少なくとも１週間前にＰＧＰＳの関節内注射を用いて誘発されてもよい。候補製剤の幾つかの用量が評価されてもよい。滑膜炎の後の発赤は、関節炎の応答を延長及び復活させるための実験の最中にＰＧＰＳの尾部静脈注射によって誘発されてもよい。膝痛を表す体重負荷及び足取りの差異、並びに、組織病理学及び薬物動態学（ＰＫ）の評価は適切な期間（例えば４〜５週間）にわたって数時間の時点で測定されてもよい。
（００２１９） 本開示の方法及び組成物は以下の非限定的な例によって例証される。
実施例１
第１部：キトサン粒子の調製
（００２２０） 水性酢酸の１％体積／体積溶液１２．５ｍＬに８３〜９５％の間の脱アセチル化度及び４７０〜５００キロダルトンの分子量を有する１８７．５ｍｇのキトサンを添加し、１．５％重量／体積のキトサン溶液を得た。連続混合しながら、アセトン１２．５ｍＬを１．５％重量／体積のキトサン溶液にゆっくり滴下した。沈殿が生じるたら、手で混合した。別々に、綿実油３００ｍＬを２ｍＬのソルビタンモノオレアート（ＳＰＡＮ（商標）８０界面活性剤、Ｃｒｏｄａ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＰＬＣ；例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＩ，ＵＳＡから入手可能）と合わせた。１．５％重量／体積のキトサン溶液を一定撹拌しながら綿実油／ＳＰＡＮ溶液に滴下してエマルジョンを形成した。エマルジョンを保持する容器を３７℃の水浴に入れ、ボルテックスを用いて７００〜８００ｒｐｍで連続的な撹拌をしながら１４時間その温度で維持した。別々に１．２ｇのトリポリリン酸ナトリウム（ＴＰＰ、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＩ，ＵＳＡから入手可能）を水１０ｍＬに溶解し、次いでこのＴＰＰ溶液１ｍＬ（ＴＰＰ０．１２ｇと同等）をエマルジョンに滴下した。次いで、エマルジョンをさらなる４時間撹拌した。エマルジョン粒子はＷｈａｔｍａｎ ＃４濾紙を使用して、真空濾過によって単離した。採取した粒子は、ヘキサンの等しい量を用いてすすぎ、次いで、一晩乾燥して粒子３００ｍｇ（９７．５％の収率）が得られた。乾燥した粒子を、オリンパスＢＸ５１光顕微鏡（ＬＥＡ ０８０１９−０１ＲＤ）を使用して２００倍で観察した。
第２部：ジクロフェナクを装填したキトサン粒子の調製
（００２２１） ２個のビーカーそれぞれに２：１メタノール：水（体積：体積）３０ｍＬを装填した。第１のビーカーにナトリウムジクロフェナク１．００ｇを更に装填し、第２のビーカーにはナトリウムジクロフェナク４．１６ｇの更に装填して、飽和ナトリウムジクロフェナク溶液が得られた。各ビーカーに、上記第１部で調製したキトサン粒子１５０ｍｇを添加した。粒子をジクロフェナク溶液それぞれに２４時間浸漬した。粒子をＷｈａｔｍａｎ ＃４濾紙を使用して真空濾過によって単離した。集めた粒子を水で完全にすすいで残ったジクロフェナク取り除き、一晩風乾した。乾燥した粒子はオリンパスＢＸ５１光顕微鏡（ＬＥＡ ０８０１９−０１ＲＤ）を使用して２００倍で観察し、メタノール：水溶液中のナトリウムジクロフェナクの濃度に関係なく、基本的に同一に見え、ほとんどの粒子が球体であり直径が２５から１００ミクロンであった。
（００２２２） 粒子中のジクロフェナクの濃度は、２４時間３７℃及び６０ｒｐｍでインキュベーター／振盪機中で維持したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１００ｍＬに入れた粒子から２５ミクロン孔径メッシュを通ってジクロフェナクを抽出することにより求めた。このアッセイによると、粒子はジクロフェナクを１０〜１３重量％含んでいた。
例２
（００２２３） 適切な容器に、キトサン塩７．５９ｇ（１００から１５０ｍＰａ・ｓの間の見掛け粘度；８３から９５％の間のＤＤＡ）及び水７００ｍｌを撹拌しながら添加し、透明な溶液が得られた。この溶液を０．１ＭＮａＯＨで処理して５．４のｐＨを有する酸性溶液を得た。次いで、メタノール１６３３ｍｌを混合しながら酸性溶液に添加した。別々に、ジクロフェナク２．５７をメタノール２６ｍｌに溶解し、このジクロフェナク溶液を撹拌しながらキトサン溶液に添加した。ジクロフェナク及びキトサンの混合物を、回転子／固定子ホモジナイザー（ＩＫＡ Ｔｕｒｅｘ Ｔ−２５）に１０−１５ｋｒｐｍで接して入れ、その間、脱イオン水（ｐＨ９）中の１％（重量／体積）のＴＰＰ７０ｍｌを滴下して添加の合計をＴＰＰ７００ｍｇとし、濁った混合物が得られた。
（００２２４） 直径３インチの歯のあるスピンディスクを装備した直径４フィートのステンレス鋼製錐状囲いを使用してこの混合物を粒子形態に変換した（米国特許第７，２６１，５２９号明細書及び第７，７５８，７７８号明細書を参照）。エア入口の送風機速度は１２Ｈｚであり、錐状体の頂点の温度は７５〜８５℃であり、錐状体の底の温度は５５〜６５℃であり、スピンディスク速度は油圧ユニット（１．５ｇｐｍ）を使用して調節して４６００〜４８００ｒｐｍの回転速度が得られた。ジクロフェナク／キトサン／ＴＰＰの濁った混合物を蠕動ポンプを２５ｍｌ／分で使用してスピンディスクの中央に供給し、粒子５．２グラムを収集した。
（００２２５） 粒子の試料をメタノールに溶解し、メタノール溶液はジクロフェナクの濃度について分析した。分析前に粒子をエタノールで洗浄した場合、２３．３％の濃度（ペイロード）が測定され、分析前に粒子をエタノールで洗浄した場合、１５．５％の濃度（ペイロード）が測定された。大半の粒子は１０〜４０ミクロンのサイズを有していた。
（００２２６） エタノール洗浄した粒子の試料をヒツジ膝関節に注射した。ヒツジは注射後７日及び１４日に安楽死させ、ヒツジ滑膜は図の示す結果を用いて調べた。７日目に、微粒子は滑膜中で膜にエオシン染料を添加することによって視覚化して見えた。エオシン染料は正に帯電したキトサンアミン基（図１Ａを参照）と優先的に複合体を形成する。画像中の暗色のスポット（カラー顕微鏡写真中の赤い色）は、微粒子である。１４日目では、粒子は滑膜中になお存在する。黒色矢印は、図１Ｂの１４日目の画像中にそのような１個の粒子を指し示す。更に、滑膜の７日目の試料は蛍光顕微鏡の下で調べた。これらの条件の下では、結晶材料は、黄色スポット（黒及び白色の画像中の白色スポット；図１Ｃ参照）として現われる。エオシン染料、及び蛍光顕微鏡検査法を用いて評価した７日目の画像を比較すると、粒子及び結晶は同じ場所にあり、ジクロフェナクの結晶がキトサン粒子中に存在することを示している。この同じ結果は１４日目の画像（図１Ｄ参照）に見られ、ここで、黒色矢印は、結晶性形態のジクロフェナクを表す白点を指し示す。
（００２２７） 図２は図１のヒツジ滑膜の別の図であり、ここで、図２は、キトサン粒子（その幾つかは図２で「１」と呼ぶ）及び滑膜マクロファージ（その幾つかは図２で「２」と呼ぶ）の相対的位置を指し示す。エオシン染料に曝露し微視的に見ると、粒子及びマクロファージのそれぞれが暗色の領域として現われる。粒子（例えば「１」）は、１０〜４０ミクロンの程度のサイズを持と、マクロファージ（例えば「２」）より数倍大きく見える。滑膜マクロファージより大きい粒子の選択によって、本開示は、マクロファージが食作用によって粒子を呑み込み得る可能性を減少させる。滑膜内に存在するが、マクロファージによって呑み込まれない粒子から放出されるＡＰＩは、滑膜の全体にわたって直ちに分散することができ、滑膜を出て滑液に入ることができる。言いかえれば、マクロファージはこの放出を遮断しない。このように、粒子がマクロファージによって呑み込まれない場合、ＡＰＩは関節腔を通じてより高い濃度で送達されるが、粒子がマクロファージ内にあれば、マクロファージはＡＰＩを捕捉し得る。
実施例３
（００２２８） 以下の原料を、列挙の順に明示の量で、回転子／固定子ホモジナイザーを使用して均一混合を維持しながら反応容器に装填した：水中の１．５％（重量／体積）のキトサン３８４ｇ（１００から１５０ｍＰａ・ｓの間の見掛け粘度；９５から８３％の間のＤＤＡ）；メタノール１１６７ｍｌ；及びメタノール２２ｍＬ中のジクロフェナク２．２４ｇ。理論的な薬物装填率（２．２４／８．９７）＝２５％が得られた。混合物が透明、均質に見えたら、１２〜１５Ｋｒｐｍで均質化しながら１．５％のグルタルアルデヒド（２５％のストックから水へ希釈した）１１５．５ｍｌを滴下した。約１５分間この混合物を撹拌し、次いで、以下のパラメーターを有するスピンディスク粒子形成プロセスを使用した：直径３インチの歯のあるスピンディスクを装備した直径４フィートのステンレス鋼製錐状囲い；エア入口送風機速度：１０．５Ｈｚ；錐状体の頂点での温度８５〜９０℃；錐状体の底部で温度７０〜７５℃；油圧ユニットを使用して調節したスピンディスク速度（１．４５ｇｐｍ）（およそ４６００−４８００ｒｐｍ）。メタノール／水中のジクロフェナクキトサン／グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｅ）からの溶液を２５ｍＬ／分で蠕動ポンプを使用してスピンディスクの中央に供給した。４．８グラムの材料の全体（８．９７グラムの固体合計の５３．５％の回収率）を収集した。
（００２２９） 上記の様々な実施形態のいずれかを組み合わせてさらなる実施形態を提供することができる。この明細書中で参照された米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許刊行物のすべてが参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。またさらなる実施形態を提供するために、様々な特許、出願及び刊行物の概念を用いることが必要なら、実施形態の態様は修正することができる。これら及び他の変更は、上記の詳細な記載の観点から実施形態に施すことができる。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は特許請求の範囲を本明細書及び特許請求の範囲で開示した具体的な実施形態に限定するものと解釈されるべきでなく、そのような特許請求の範囲が権利を与える均等物の全範囲と一緒にありとあらゆる実施形態を含むものと解釈されるべきである。従って、その請求項は開示によって限定されていない。

Claims (15)

  1. 粒子を含む組成物であって、前記粒子が、アミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサン、及び前記粒子に組み込まれた医薬品活性成分（ＡＰＩ）を含み、前記粒子が、２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有し、前記架橋キトサンが、架橋剤と、７５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有するキトサンの反応生成物であることを特徴とする組成物。
  2. 前記ＡＰＩが、ＮＳＡＩＤである、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ＡＰＩが、ジクロフェナクであり、前記ジクロフェナクの少なくともいくらかは、結晶性形態にある、請求項１に記載の組成物。
  4. 前記架橋キトサンが、アミノ基と共有結合で反応する架橋剤の反応生成物である、請求項１に記載の組成物。
  5. 前記架橋キトサンが、共有結合の架橋を与えるグルタルアルデヒドとキトサンとの反応生成物である、請求項１に記載の組成物。
  6. 前記架橋キトサンが、架橋剤と、５０ｍＰａｓを超えかつ３００ｍＰａｓ未満の固有粘度を有するキトサンとの反応生成物である、請求項１に記載の組成物。
  7. 液体媒体を更に含み、１８〜２７のゲージの針を介して注射可能である、請求項１に記載の組成物。
  8. 前記ＡＰＩが、ジクロフェナクであり、前記ジクロフェナクの少なくともいくらかが、結晶性形態にあり、前記架橋キトサンが、共有結合の架橋を提供するグルタルアルデヒドとキトサンとの反応生成物であり、前記架橋キトサンが、架橋剤と、５０ｍＰａｓを超えかつ３００ｍＰａｓ未満の固有粘度を有するキトサンとの反応生成物である、請求項１に記載の組成物。
  9. 対象の滑液及び滑膜に粒子を送達して前記粒子から活性薬剤（ＡＰＩ）の徐放のデポーを提供する方法であって、
    ａ．前記粒子を含む液体組成物を提供する工程であって、前記粒子が、アミノ（ＮＨ2）基を有する架橋キトサン、及び前記粒子に組み込まれる活性薬剤（ＡＰＩ）を含み、前記粒子が、２５ミクロンを超えかつ１００ミクロン未満の直径を有し、前記架橋キトサンが、架橋剤と、７５％を超えかつ９５％未満の脱アセチル化度（ＤＤＡ）を有するキトサンとの反応生成物である工程、
    ｂ．前記液体組成物を含有する注射器を提供する工程であって、前記注射器が、１８〜２７のゲージの範囲の針を有する工程、及び
    ｃ．前記針を介してその必要がある対象に前記液体組成物を関節内注射する工程、
    を含むことを特徴とする方法。
  10. 前記対象の滑膜の細胞間に前記粒子を存在させる、請求項９に記載の方法。
  11. 前記粒子が、活性薬剤の徐放性を提供する際、前記滑膜中の前記粒子がマクロファージの内部に含まれておらず、前記粒子が、前記滑膜にＡＰＩを放出する、請求項９に記載の方法。
  12. 前記ＡＰＩが、少なくとも２４時間の期間にわたって前記粒子から放出される、請求項９に記載の方法。
  13. 前記組成物が、前記対象に注射された直後に、前記組成物が、ＡＰＩをバースト送達し、その後、少なくとも２４時間の長期にわたって前記ＡＰＩを放出する、請求項９に記載の方法。
  14. 前記組成物が、前記滑膜に長期の期間にわたってＡＰＩを放出する、請求項９に記載の方法。
  15. 前記ＡＰＩが、ジクロフェナクであり、前記粒子に組み込まれた前記ジクロフェナクの少なくともいくらかが結晶性形態にある、請求項９に記載の方法。
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