JP2018168263A - Vegetable proteoglycan and use thereof - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は植物性プロテオグリカンに関する。詳しくは、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンに関する。 The present invention relates to plant proteoglycans. Specifically, the present invention relates to a plant proteoglycan having a physiological activity equal to or higher than that of animal proteoglycans.
近年、糖蛋白質が顕著な生理活性を有することが明らかになってきた。糖蛋白質のひとつである動物性プロテオグリカンは、グルコサミノグリカン糖鎖と蛋白質との共有結合化合物の総称であり、その高い保湿性や細胞増殖促進作用から化粧品成分として広く用いられている。動物性プロテオグリカンとしては、例えば、サケ鼻軟骨、サメ鰭軟骨及びイカ頭部軟骨を由来としたものが知られている。しかし、化粧品市場においては、動物由来成分よりも植物由来成分の方がイメージに優れるため、動物性プロテオグリカンも植物由来成分で代替することが求められていた。 In recent years, it has become clear that glycoproteins have significant physiological activity. Animal proteoglycan, one of glycoproteins, is a generic term for covalently bonded compounds of glucosaminoglycan sugar chains and proteins, and is widely used as a cosmetic ingredient because of its high moisture retention and cell growth promoting action. As animal proteoglycans, for example, those derived from salmon nasal cartilage, shark salmon cartilage and squid head cartilage are known. However, in the cosmetics market, since plant-derived components are superior in image to animal-derived components, it has been required to replace animal proteoglycans with plant-derived components.
植物には、動物性プロテオグリカンに類似する構造をもつアラビノガラクタン蛋白質（別名：植物性プロテオグリカン）が含まれている。アラビノガラクタン蛋白質はアラビノガラクタン糖鎖と蛋白質との共有結合化合物の総称である。アラビノガラクタン蛋白質のもつ効果として、乳化性が知られている（非特許文献１）。アラビノガラクタン蛋白質を含む物質の一つにアラビアゴムが挙げられる（特許文献１）。アラビアゴムはアカシア（Ａｃａｃｉａ）の滲出液より回収される樹液である。アラビアゴムは、増粘作用、乳化作用を有することから化粧品用途において広く応用されており、毎年２千トン程度が国内に輸入されている。アラビアゴムは国内で入手が容易で、かつ、化粧品原料として「医薬部外品原料規格２００６」に収蔵されている等の安全性等の面でも実績が多く、植物性プロテオグリカンの原料として有用といえる。 Plants contain arabinogalactan proteins (also known as plant proteoglycans) having a structure similar to animal proteoglycans. The arabinogalactan protein is a general term for a covalent compound of an arabinogalactan sugar chain and a protein. The emulsifiability is known as an effect of the arabinogalactan protein (Non-patent Document 1). One of the substances containing arabinogalactan protein is gum arabic (Patent Document 1). Gum arabic is sap recovered from the exudate of Acacia. Gum arabic has a thickening and emulsifying action and is therefore widely used in cosmetic applications. About 2,000 tons are imported into the country every year. Gum arabic is easy to obtain in Japan and has many achievements in terms of safety, such as being stored in the “quasi-drug raw material standard 2006” as a cosmetic raw material, and can be said to be useful as a raw material for plant proteoglycans. .
特許文献１には、アラビアゴムを６０〜１４０℃で３０分以上加熱することによって乳化力が増強した変性アラビアゴムとなることが示されている。この変性アラビアゴムは、変性前のアラビアゴムに比べてアラビノガラクタン蛋白質（分子量３０万以上）の分子量に相当する高分子量成分が増加しており、生理活性も優れるものと予想されたが、本発明者の研究によれば、この方法で得られる変性アラビアゴムの生理活性は低く、動物性プロテオグリカンの代替えにはならないことが分かった。また、この方法で得られる変性アラビアゴムは臭いを生じることがある。従って、動物性プロテオグリカンと同等の生理活性を有する植物性プロテオグリカンは未だ見出されていない。 Patent Document 1 shows that a modified gum arabic with enhanced emulsifying power is obtained by heating gum arabic at 60 to 140 ° C. for 30 minutes or more. Although this modified gum arabic has a higher molecular weight component corresponding to the molecular weight of the arabinogalactan protein (molecular weight of 300,000 or more) compared to the gum arabic before modification, it is expected to have excellent physiological activity. According to the inventor's research, it was found that the bioactive activity of the modified gum arabic obtained by this method is low, and it does not replace animal proteoglycans. In addition, the modified gum arabic obtained by this method may cause odor. Accordingly, a plant proteoglycan having a physiological activity equivalent to that of animal proteoglycan has not yet been found.
本発明は上記の事情に鑑みて成されたものであり、使用感に優れ、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and an object of the present invention is to provide a plant proteoglycan having excellent usability and having a physiological activity equal to or higher than that of animal proteoglycans.
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ ｓｅｎｅｇａｌ ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ ｓｅｙａｌ Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから、動物性プロテオグリカンと同等の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを得ることができることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have obtained an equivalent of animal proteoglycan from gum arabic obtained from the trunk or branch of an Acacia genus plant (Acacia senegal Willdenow or Acacia sial Delile). The inventors have found that plant proteoglycans having physiological activity can be obtained, and have completed the present invention.
すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］ アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ ｓｅｎｅｇａｌ ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ ｓｅｙａｌ Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、ＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積をＳとし、溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積をＳ１とし、分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積Ｓ２としたとき、ＳとＳ１とＳ２が、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、かつ、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の関係を満足することを特徴とする植物性プロテオグリカン。
［２］ 下記の工程（Ａ）及び工程（Ｂ）を含むことを特徴とする上記［１］に記載の植物性プロテオグリカンの製造方法。
工程（Ａ）：アラビアゴム水溶液を濃度０．５〜２０％（ｗ／ｖ）に調製する工程
工程（Ｂ）：アラビアゴム水溶液を、公称孔径０．０５〜０．２５μｍの精密濾過膜または分画分子量５０万〜２５０万の限外濾過膜に供する工程
［３］ 上記［１］に記載の植物性プロテオグリカンを含む細胞増殖促進剤。
［４］ 上記［３］に記載の細胞増殖促進剤を含む化粧料。
That is, the present invention is as follows.
[1] Size exclusion chromatography with online connection of a multi-angle light scattering detector and a differential refractive index detector obtained from gum arabic obtained from the trunk or branch of an Acacia genus plant (Acacia senegal Wildenow or Acacia sial Delile) The straight line connecting the elution start point to the elution end point of the chromatogram obtained by using PbaseL, the total peak area above PbaseL as S, the peak area from the elution start point to the molecular weight of 3 million as S1, S, S1, and S2 satisfy the relationship of S1 / S2> 0.60 and (S1 + S2) / S> 0.55, when the peak area S2 has a molecular weight of 3 million to 600,000. Plant proteoglycan.
[2] The method for producing a plant proteoglycan according to the above [1], comprising the following steps (A) and (B).
Step (A): Step of preparing an aqueous solution of gum arabic to a concentration of 0.5 to 20% (w / v) Step (B): An aqueous solution of gum arabic with a microfiltration membrane having a nominal pore size of 0.05 to 0.25 μm or a minute Step [3] for providing to an ultrafiltration membrane having a molecular weight of 500,000 to 2.5 million [3] A cell growth promoter comprising a plant proteoglycan according to [1] above.
[4] A cosmetic comprising the cell growth promoter according to [3] above.
本発明の植物性プロテオグリカンは、既知の動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有し、ヒトの皮膚に対して優れた保湿効果及び細胞増殖促進効果を発揮する。また、植物性であるため、化粧料原料に使用することで、優れた保湿効果及び細胞増殖促進効果を有し、イメージもよい化粧料を実現できる。 The plant proteoglycan of the present invention has a physiological activity equivalent to or better than that of known animal proteoglycans, and exhibits an excellent moisturizing effect and cell growth promoting effect on human skin. Moreover, since it is plant nature, it can implement | achieve the cosmetics which have the outstanding moisturizing effect and the cell growth promotion effect, and a good image by using it as a cosmetic raw material.
以下、本発明を実施形態に即して説明する。
本発明でいう「植物性プロテオグリカン」とは、アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ ｓｅｎｅｇａｌ ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ ｓｅｙａｌ Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムの分離精製物であり、有効量のアラビノガラクタン蛋白質成分を含むことによって、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を示すものを指す。
Hereinafter, the present invention will be described with reference to embodiments.
The “plant proteoglycan” as used in the present invention is a separated and purified product of gum arabic obtained from the trunk or branch of an Acacia genus plant (Acacia senegal Wildenow or Acacia sial Delile), and contains an effective amount of arabinogalactan protein component. By containing, it refers to those showing physiological activity equal to or higher than animal proteoglycans.
本発明の植物性プロテオグリカンは、サイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムによって規定される。即ち、サイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、ＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積をＳとし、溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積をＳ１とし、分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積Ｓ２としたとき、ＳとＳ１とＳ２が、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、かつ、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５となる関係を満足することが特徴である。 The plant proteoglycans of the present invention are defined by chromatograms obtained by size exclusion chromatography. That is, the line connecting the elution start point to the elution end point of the chromatogram obtained by size exclusion chromatography is PbaseL, the total peak area above PbaseL is S, and the peak from the elution start point to the molecular weight of 3 million When the area is S1 and the peak area S2 is from a molecular weight of 3 million to a molecular weight of 600,000, S, S1, and S2 are S1 / S2> 0.60 and (S1 + S2) / S> 0.55 It is the feature to satisfy.
（ＳＥＣ測定）
ここで、ピーク面積は、多角度光散乱検出器と示差屈折率検出器をオンライン接続したゲル浸透クロマトグラフィーを使用することによって求めることができる。なお、本明細書において、多角度光散乱検出器を「ＭＡＬＳ検出器」、示差屈折率検出器を「ＲＩ検出器」とも称し、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを「ＳＥＣ測定」と称する。当該ＳＥＣ測定によれば、測定対象の分離精製物中の各成分の組成比は当該ＲＩ検出器により検出でき、当該ＭＡＬＳ検出器により絶対分子量が算出され、ピーク面積を求めることができる。
(SEC measurement)
Here, the peak area can be obtained by using gel permeation chromatography in which a multi-angle light scattering detector and a differential refractive index detector are connected online. In this specification, the multi-angle light scattering detector is also referred to as “MALS detector”, the differential refractive index detector is also referred to as “RI detector”, and the multi-angle light scattering detector and the differential refractive index detector are connected online. Size exclusion chromatography is referred to as “SEC measurement”. According to the SEC measurement, the composition ratio of each component in the separated purified product to be measured can be detected by the RI detector, the absolute molecular weight can be calculated by the MALS detector, and the peak area can be obtained.
本発明で採用されるＳＥＣ測定の条件は以下のとおりである。
システム：Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＨＰＬＣシステム（島津製作所製）
カラム：Ｓｕｐｅｒｏｓｅ ６ １０／３００ ＧＬ （ＧＥヘルスケア・ジャパン製）
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
溶出溶媒：０．２Ｍ 塩化ナトリウム
試料調製：分析試料を溶出溶媒にて希釈後１時間混合し、２５℃で１８時間静置し、０．４５μｍセルロースアセテートメンブランフィルターにて不溶物を除去した液を測定する。
試料濃度：０．４％（ｗ／ｖ）
試料液注入量：１００μｌ
カラムオーブン温調：３０℃
ＲＩ検出器：Ｏｐｔｉｌａｂ Ｔ−ｒＥＸ（温調２５℃）（ＷＹＡＴＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
ＭＡＬＳ検出器：ＤＡＷＮ ＨＥＬＥＯＳ II ８＋（ＷＹＡＴＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
ｄｎ／ｄｃ：０．１４１
データプロットモデル：Ｂｅｒｒｙ
The conditions for SEC measurement employed in the present invention are as follows.
System: Prominence HPLC system (manufactured by Shimadzu Corporation)
Column: Superose 6 10/300 GL (manufactured by GE Healthcare Japan)
Flow rate: 0.5 ml / min
Elution solvent: 0.2 M sodium chloride Sample preparation: The analysis sample was diluted with the elution solvent, mixed for 1 hour, allowed to stand at 25 ° C. for 18 hours, and a solution from which insoluble matter was removed with a 0.45 μm cellulose acetate membrane filter was obtained. taking measurement.
Sample concentration: 0.4% (w / v)
Sample solution injection volume: 100 μl
Column oven temperature control: 30 ° C
RI detector: Optilab T-rEX (temperature control 25 ° C.) (manufactured by WYATT Technology)
MALS detector: DAWN HELEOS II 8+ (manufactured by WYATT Technology)
dn / dc: 0.141
Data plot model: Berry
（ピーク面積）
上記条件で行ったＳＥＣ測定で得られたデータをＡｓｔｒａ Ｖｅｒ． ６．１．２．８４（ＷＹＡＴＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）等を用いて処理することにより、重量平均分子量、ピーク面積Ｓ、ピーク面積Ｓ１及びピーク面積Ｓ２が求められる。ＳＥＣ測定によりＲＩ検出器及びＭＡＬＳ検出器を用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、本発明でいうピーク面積ＳはＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積、ピーク面積Ｓ１は溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積、ピーク面積Ｓ２は分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積を意味する。すなわち、ピーク面積Ｓ１はアラビノガラクタン蛋白質成分の面積に相当し、ピーク面積Ｓ２はアラビノガラクタン蛋白質成分（分子量３００万以上の高分子量成分）との分離が困難な中分子量成分の面積を意味する。ピーク面積Ｓ１とピーク面積Ｓ２との商をとったときにＳ１／Ｓ２を求めることができ、ピーク面積Ｓ１とピーク面積Ｓ２との和に対しピーク面積Ｓとの商をとったときに（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めることができる。
(Peak area)
The data obtained from the SEC measurement performed under the above conditions was recorded as Astra Ver. The weight average molecular weight, the peak area S, the peak area S1, and the peak area S2 are determined by processing using 6.1.284 (manufactured by WYATT Technology) or the like. The straight line connecting from the elution start point to the elution end point of the chromatogram obtained by the SEC measurement using the RI detector and the MALS detector is defined as PbaseL, and the peak area S in the present invention is the total peak area above PbaseL. The peak area S1 means the peak area from the elution start point to the molecular weight of 3 million, and the peak area S2 means the peak area from the molecular weight of 3 million to the molecular weight of 600,000. That is, the peak area S1 corresponds to the area of the arabinogalactan protein component, and the peak area S2 means the area of the medium molecular weight component that is difficult to separate from the arabinogalactan protein component (high molecular weight component having a molecular weight of 3 million or more). . When the quotient of the peak area S1 and the peak area S2 is taken, S1 / S2 can be obtained, and when the quotient of the peak area S is taken with respect to the sum of the peak area S1 and the peak area S2 (S1 + S2) / S can be obtained.
（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓは分離精製物中の生理活性に悪影響を及ぼす分子量が６０万よりも小さい低分子量成分の残存の程度を意味し、Ｓ１／Ｓ２は低分子量成分を除く精製物中の有効成分であるアラビノガラクタン蛋白質（分子量３００万以上の高分子量成分）の占める割合を意味する。 (S1 + S2) / S means the remaining degree of low molecular weight component having a molecular weight of less than 600,000 which adversely affects physiological activity in the separated and purified product, and S1 / S2 is an active ingredient in the purified product excluding the low molecular weight component Is the proportion of arabinogalactan protein (high molecular weight component having a molecular weight of 3 million or more).
本発明の植物性プロテオグリカンは、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、かつ、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の関係を満足する。すなわち、生理活性に悪影響を及ぼす低分子量成分の残存量が少なく、アラビノガラクタン蛋白質（分子量３００万以上の高分子量成分）が十分量存在することから、後述の実施例（実施例１〜４）から明らかなように、保湿性、細胞増殖活性効果及び官能試験結果のいずれにおいても優れた結果が得られ、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する（表１参照）。 The plant proteoglycan of the present invention satisfies the relationship of S1 / S2> 0.60 and (S1 + S2) / S> 0.55. That is, since the residual amount of low molecular weight components that adversely affect physiological activity is small, and a sufficient amount of arabinogalactan protein (high molecular weight component having a molecular weight of 3 million or more) is present, Examples described later (Examples 1 to 4) As is clear from the above, excellent results are obtained in all of the moisturizing property, cell proliferation activity effect and sensory test results, and it has a physiological activity equivalent to or better than animal proteoglycans (see Table 1).
後述の比較例１、２は未精製のアラビアゴムであり、比較例１はＳ１／Ｓ２＞０．６０、及び、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の両方を満足せず、比較例２はＳ１／Ｓ２＞０．６０を満足するが、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５を満足せず、いずれにおいても、生理活性に悪影響を及ぼす低分子量成分を多量に含むため、その生理活性は動物性プロテオグリカンに比べて遥かに低く、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。 Comparative Examples 1 and 2 described later are unrefined gum arabic, Comparative Example 1 does not satisfy both S1 / S2> 0.60 and (S1 + S2) / S> 0.55, and Comparative Example 2 is S1 / S2> 0.60 is satisfied, but (S1 + S2) / S> 0.55 is not satisfied, and any of them contains a large amount of low molecular weight components that adversely affect physiological activity. It is much lower than the proteoglycan, indicating that it cannot be the plant proteoglycan of the present invention (see Table 1).
後述の比較例３はアラビアゴムの精製物であり、Ｓ１／Ｓ２＝０．０２、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＝０．８０である。比較例３は生理活性に悪影響を及ぼす低分子量成分の残存量が多く、低分子量成分を除く精製物中のアラビノガラクタン蛋白質の割合も少ないために、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。 Comparative Example 3 described later is a purified product of gum arabic, and S1 / S2 = 0.02 and (S1 + S2) /S=0.80. Since Comparative Example 3 has a large amount of low molecular weight components that adversely affect physiological activity and a small proportion of arabinogalactan protein in the purified product excluding low molecular weight components, it has a physiological activity equal to or higher than that of animal proteoglycans. First, it shows that it cannot be the plant proteoglycan of the present invention (see Table 1).
後述の比較例４は、特許文献１のアラビアゴムを６０〜１４０℃で３０分以上加熱する方法により変性されたアラビアゴムであり、比較例１、２の未精製のアラビアゴムよりも細胞増殖活性効果がさらに低くなっている（表１参照）。なお、Ｓ１／Ｓ２は０．９４であり、高分子量成分（ピーク面積Ｓ１）を多く含む結果になっているが、これは、加熱変性によって、分子量はアラビノガラクタン蛋白質（分子量３００万以上）のそれに相当するが、アラビノガラクタン蛋白質とは異なる化学特性の高分子量体（むしろ生理活性を阻害する高分子量体）が生成したものと推察される。また、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＝０．５３であり、比較例１、２の未精製のアラビアゴムよりも分子量が６０万よりも小さい低分子量成分の含有量は減っているが、これも加熱によって生理活性を有しないか或いは阻害する分子量が６０万以上の中分子量体を生成した結果であると推察される。 Comparative Example 4 described later is a gum arabic modified by heating the gum arabic of Patent Document 1 at 60 to 140 ° C. for 30 minutes or more, and has a cell growth activity higher than that of the unpurified gum arabic of Comparative Examples 1 and 2. The effect is even lower (see Table 1). In addition, S1 / S2 is 0.94, which is a result of containing a large amount of high molecular weight component (peak area S1). This is due to heat denaturation, the molecular weight of arabinogalactan protein (molecular weight of 3 million or more). Correspondingly, it is presumed that a high molecular weight substance having a chemical property different from that of the arabinogalactan protein (rather, a high molecular weight substance that inhibits physiological activity) was produced. Moreover, although it is (S1 + S2) /S=0.53, the content of the low molecular weight component whose molecular weight is smaller than 600,000 is reduced compared with the unrefined gum arabic of Comparative Examples 1 and 2, this is also caused by heating. It is presumed that this is the result of producing a medium molecular weight body having no physiological activity or inhibiting molecular weight of 600,000 or more.
（原料）
本発明の植物性プロテオグリカンの原料として用いるアラビアゴムは、マメ科植物であるＡｃａｃｉａ属に属するＡｃａｃｉａ ＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ ｓｅｙａｌ Ｄｅｌｉｌｅの幹や枝から得られる天然滲出物である。特に、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗから得られるアラビアゴムを原料とするのが好ましい。アラビアゴムはその由来を問うことなく、いずれの産地由来のものであってもよい。また、アラビアゴムは、脱塩物、塊状物、玉状物、粗粉砕物、顆粒状、粒状や粉末状（スプレードライ粉末を含む）の形態で入手することができるが、本発明ではこれらの形状を問わず、いずれの形態のものも処理対象のアラビアゴム原料として使用することができる。
(material)
The gum arabic used as a raw material for the plant proteoglycan of the present invention is a natural exudate obtained from the trunk or branch of Acacia Senegal Willdenow or Acacia sial Delile belonging to the genus Acacia which is a leguminous plant. In particular, it is preferable to use gum arabic obtained from Acacia Senegal Wildenow as a raw material. The gum arabic may be derived from any origin without questioning its origin. In addition, gum arabic can be obtained in the form of desalted, lump, ball, coarsely pulverized, granulated, granular or powder (including spray-dried powder). Regardless of the shape, any form can be used as a raw material of gum arabic to be treated.
本発明の植物性プロテオグリカンは、アラビアゴムを、膜分離処理、担体処理、サイズ排除クロマトグラフィー処理、有機溶媒沈殿処理等に供して、分離精製することによって得られる。特に、アラビアゴムを水系溶媒に溶解して水溶液とし、この水溶液を膜分離処理に供する方法が好ましい。 The plant proteoglycan of the present invention can be obtained by subjecting gum arabic to separation and purification by subjecting it to membrane separation treatment, carrier treatment, size exclusion chromatography treatment, organic solvent precipitation treatment and the like. Particularly preferred is a method in which gum arabic is dissolved in an aqueous solvent to form an aqueous solution, and this aqueous solution is subjected to membrane separation treatment.
膜分離処理で使用する膜分離装置における、膜分離法（精密濾過、限外濾過、ナノ濾過、逆浸透、透析、電気透析等）、濾過方法（デッドエンド、クロスフロー等）、接触方法（平板状、管状、スパイラル状、中空糸状等）、ならびに分離環境条件（相対湿度、閉鎖系、循環系の有無）等は任意に選択できる。分離膜は、複数個を直列または並列に接続して使用することもできる。 Membrane separation method (microfiltration, ultrafiltration, nanofiltration, reverse osmosis, dialysis, electrodialysis, etc.), filtration method (dead end, crossflow, etc.), contact method (flat plate) Shape, tubular shape, spiral shape, hollow fiber shape, etc.) and separation environment conditions (relative humidity, closed system, presence / absence of circulation system) and the like can be arbitrarily selected. A plurality of separation membranes can be connected in series or in parallel.
膜分離処理は、アラビアゴム水溶液を、公称孔径０．０５μｍ〜０．２５μｍ（好ましくは０．０８μｍ〜０．１２μｍ、より好ましくは０．１μｍ）の精密濾過膜または分画分子量５０万〜２００万（好ましくは８０万〜１２０万、より好ましくは１００万）の限外濾過膜に供する方法で行うのが好ましい。さらに、当該精密濾過膜または限外濾過膜としてクロスフロー式の中空糸状膜を用いて、循環系で実施するのがより好ましい。また、膜分離における有効膜面積は１０〜１３０,０００ｃｍ２が好ましく、５０〜１００，０００ｃｍ２がより好ましく、１００〜７０，０００ｃｍ２が特に好ましい。 In the membrane separation treatment, an aqueous gum arabic solution is obtained from a microfiltration membrane having a nominal pore size of 0.05 μm to 0.25 μm (preferably 0.08 μm to 0.12 μm, more preferably 0.1 μm) or a molecular weight cut-off of 500,000 to 2,000,000. It is preferable to carry out the method by using an ultrafiltration membrane (preferably 800,000 to 1,200,000, more preferably 1,000,000). Furthermore, it is more preferable to carry out in a circulation system using a cross-flow type hollow fiber membrane as the microfiltration membrane or ultrafiltration membrane. The effective membrane area is preferably 10～130,000Cm 2 in membrane separation, more preferably 50~100,000cm 2, 100~70,000cm 2 is particularly preferred.
膜の材質としては、有機高分子（セルロース、ポリエチレン、ポリスルフォン、ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）等）、これらの有機高分子を親水化した親水化高分子、セラミックス等が挙げられる。中でも、ポリエチレン膜、セラミックス膜が好ましい。ポリエチレン膜としては、例えば、「マイクローザ」（旭化成ケミカルズ社製、商品名）等が挙げられる。セラミックス膜としては、例えば、ＮＧＫモノリス型セラミックスフィルター（日本ガイシ社製）等が挙げられる。また、分離効率の調整のために、分離時に、アラビゴム水溶液の塩濃度を調整したり、アラビゴム水溶液に凝集剤、防腐剤等を添加してもよい。塩濃度調整のための塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等が挙げられる。特に好ましい態様として、塩化ナトリウム濃度が０．０１〜１０重量％（好ましくは０．１〜５重量％）のアラビゴム水溶液が挙げられる。 Examples of the material of the membrane include organic polymers (cellulose, polyethylene, polysulfone, PTFE (polytetrafluoroethylene), etc.), hydrophilic polymers obtained by hydrophilizing these organic polymers, ceramics, and the like. Among these, a polyethylene film and a ceramic film are preferable. Examples of the polyethylene film include “Microza” (trade name, manufactured by Asahi Kasei Chemicals). Examples of the ceramic film include an NGK monolith type ceramic filter (manufactured by NGK). In order to adjust the separation efficiency, the salt concentration of the arabi rubber aqueous solution may be adjusted during the separation, or a flocculant, preservative, etc. may be added to the arabi rubber aqueous solution. Examples of the salt for adjusting the salt concentration include sodium chloride, magnesium chloride, calcium chloride and the like. A particularly preferred embodiment is an aqueous arabi rubber solution having a sodium chloride concentration of 0.01 to 10% by weight (preferably 0.1 to 5% by weight).
アラビゴム水溶液の膜処理を行うに当たり、アラビゴム水溶液の温度は好ましくは０〜４０℃、より好ましくは２〜３０℃であり、アラビアゴム水溶液の濃度は好ましくは２０％（ｗ／ｖ）以下、より好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｖ）である。温度が４０℃を超えると、処理中にアラビアゴムが変性して凝集体が生じる。また、アラビアゴム水溶液の濃度が２０％（ｗ／ｖ）を超えると、溶液粘度が高くなり膜処理が困難になる。また、アラビゴム水溶液のｐＨが１０以上であるとアラビアゴムの分解が起こるため、アラビゴム水溶液のｐＨは１０未満とすることが重要である。 In performing the membrane treatment of the arabic rubber aqueous solution, the temperature of the arabic rubber aqueous solution is preferably 0 to 40 ° C., more preferably 2 to 30 ° C., and the concentration of the gum arabic aqueous solution is preferably 20% (w / v) or less, more preferably. Is 0.5 to 10% (w / v). When the temperature exceeds 40 ° C., the gum arabic is denatured during the treatment and aggregates are formed. Moreover, when the density | concentration of gum arabic aqueous solution exceeds 20% (w / v), solution viscosity will become high and membrane processing will become difficult. Further, since the gum arabic is decomposed when the pH of the aqueous arabic rubber solution is 10 or more, it is important that the pH of the aqueous arabic rubber solution is less than 10.
分離処理後に、植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を得ることができる。この植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を任意の有機溶媒や有機溶媒を含有する溶媒により精製処理してもよい。また、さらに担体処理、脱臭処理、脱塩処理、膜分離処理等を行って精製してもよい。植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を得た場合は、さらに脱塩、滅菌等を目的として膜処理等を実施してもよい。水溶液を凍結乾燥処理することで、植物性プロテオグリカンを含有する固形分を得ることもできる。 After the separation treatment, a solid content or an aqueous solution containing the plant proteoglycan can be obtained. You may refine | purify the solid content or aqueous solution containing this vegetable proteoglycan with the arbitrary organic solvents and the solvent containing an organic solvent. Further, the purification may be carried out by further carrier treatment, deodorization treatment, desalting treatment, membrane separation treatment and the like. When an aqueous solution containing a plant proteoglycan is obtained, membrane treatment or the like may be performed for the purpose of desalting, sterilization, or the like. A solid content containing plant proteoglycan can be obtained by freeze-drying the aqueous solution.
サイズ排除クロマトグラフィー処理で使用するカラム、充填担体、ならびに分離環境条件（溶離液、温度、流速）等は任意に選択できる。カラムは、複数個を直列または並列に接続して使用することもできる。 The column, packed carrier, separation environment conditions (eluent, temperature, flow rate), etc. used in the size exclusion chromatography can be arbitrarily selected. A plurality of columns can be connected in series or in parallel.
サイズ排除クロマトグラフィー処理は、アラビアゴム水溶液を、平均粒子径１μｍ〜２００μｍ（好ましくは４０μｍ〜１７０μｍ、より好ましくは４７μｍ）のポリマー担体またはシリカ担体を充填したカラムに供する方法で行うのが好ましい。 The size exclusion chromatography treatment is preferably carried out by a method in which the aqueous gum arabic solution is applied to a column packed with a polymer carrier or silica carrier having an average particle size of 1 μm to 200 μm (preferably 40 μm to 170 μm, more preferably 47 μm).
サイズ排除クロマトグラフィー用の担体としては、ポリマー担体、シリカ担体等が挙げられる。中でも、ポリマー担体が好ましい。ポリマー担体を充填したカラムとしては、例えば、「Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ」（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）、「Ｓｕｐｅｒｄｅｘ」（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）、「Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ」（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）、「ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ」（東ソー社製）、「Ｃｅｌｌｕｆｉｎｅ」（ＪＮＣ製）等が挙げられる。また、アラビアゴムと担体との非特異相互作用の調整のために、分離時に、アラビゴム水溶液のｐＨや塩濃度を調整したり、溶離液の塩濃度やｐＨを調整したりしてもよい。塩濃度調整のための塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等が挙げられる。特に好ましい態様として、塩化ナトリウム濃度が０．０１〜１０重量％（好ましくは１〜２重量％）の溶離液またはアラビゴム水溶液が挙げられる。 Examples of the carrier for size exclusion chromatography include a polymer carrier and a silica carrier. Among these, a polymer carrier is preferable. As a column packed with a polymer carrier, for example, “Sephacry” (manufactured by GE Healthcare Japan), “Superdex” (manufactured by GE Healthcare Japan), “Sepharose” (manufactured by GE Healthcare Japan), “TOYOPEARL” (manufactured by Tosoh Corporation), “Cellufine” (manufactured by JNC), and the like. In order to adjust the non-specific interaction between the gum arabic and the carrier, the pH and salt concentration of the arabic gum aqueous solution may be adjusted or the salt concentration and pH of the eluent may be adjusted during separation. Examples of the salt for adjusting the salt concentration include sodium chloride, magnesium chloride, calcium chloride and the like. As a particularly preferred embodiment, an eluent or an aqueous arabi rubber solution having a sodium chloride concentration of 0.01 to 10% by weight (preferably 1 to 2% by weight) can be mentioned.
アラビゴム水溶液のサイズ排除クロマトグラフィー処理を行うに当たり、溶離液の温度は好ましくは０〜４０℃、より好ましくは２〜３０℃であり、アラビアゴム水溶液の濃度は好ましくは２０％（ｗ／ｖ）以下、より好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｖ）である。温度が４０℃を超えると、処理中にアラビアゴムが変性して凝集体が生じる。また、アラビアゴム水溶液の濃度が２０％（ｗ／ｖ）を超える、溶液粘度が高くなり膜処理が困難になる。また、アラビゴム水溶液のｐＨが１０以上であるとアラビアゴムの分解が起こるため、アラビゴム水溶液および溶離液のｐＨは１０未満である。 In carrying out the size exclusion chromatography treatment of the arabic gum aqueous solution, the temperature of the eluent is preferably 0 to 40 ° C., more preferably 2 to 30 ° C., and the concentration of the gum arabic aqueous solution is preferably 20% (w / v) or less. More preferably, it is 0.5 to 10% (w / v). When the temperature exceeds 40 ° C., the gum arabic is denatured during the treatment and aggregates are formed. Moreover, the density | concentration of gum arabic aqueous solution exceeds 20% (w / v), solution viscosity becomes high, and membrane processing becomes difficult. Further, since the gum arabic is decomposed when the pH of the aqueous arabic gum solution is 10 or more, the pH of the aqueous arabic gum solution and the eluent is less than 10.
サイズ排除クロマトグラフィー処理後に、植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を得ることができる。この植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を、任意の有機溶媒や有機溶媒を含有する溶媒により精製処理してもよい。また、さらに担体処理、脱臭処理、脱塩処理、膜分離処理等を行って精製してもよい。植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を得た場合は、さらに脱塩、滅菌等を目的として膜処理等を実施してもよい。水溶液を凍結乾燥処理することで、植物性プロテオグリカンを含有する固形分を得ることもできる。 After size exclusion chromatography, a solid or aqueous solution containing plant proteoglycans can be obtained. You may refine | purify the solid content or aqueous solution containing this vegetable proteoglycan with the arbitrary organic solvent and the solvent containing an organic solvent. Further, the purification may be carried out by further carrier treatment, deodorization treatment, desalting treatment, membrane separation treatment and the like. When an aqueous solution containing a plant proteoglycan is obtained, membrane treatment or the like may be performed for the purpose of desalting, sterilization, or the like. A solid content containing plant proteoglycan can be obtained by freeze-drying the aqueous solution.
不純物が吸着して能力が低下した分離膜は、通常の酸・アルカリ洗浄、酵素洗浄、界面活性剤洗浄、キレート洗浄、次亜塩素酸洗浄、過酸化水素洗浄等の化学的洗浄、ブラッシングや逆洗等の物理的洗浄等で分離能力を回復できる。 Separation membranes with reduced capacity due to adsorption of impurities can be obtained by chemical cleaning such as normal acid / alkali cleaning, enzyme cleaning, surfactant cleaning, chelate cleaning, hypochlorous acid cleaning, hydrogen peroxide cleaning, brushing and reverse. Separation ability can be recovered by physical washing such as washing.
本発明の植物性プロテオグリカンは、その形状を特に制限するものではなく、水溶液、塊状物、玉状物、粗粉砕物、顆粒状、粒状、及び粉末状のいずれの形状をも有することができる。 The plant proteoglycan of the present invention is not particularly limited in shape, and can have any shape of an aqueous solution, a lump, a ball, a coarsely pulverized product, a granule, a granule, and a powder.
上記のようにして得られた本発明の植物性プロテオグリカンは、高い生理活性、特に高い細胞増殖活性作用を有する。しかも、天然の植物由来であって非常に安全性が高い。したがって、本発明の植物性プロテオグリカンは細胞増殖促進剤として使用できる。 The plant proteoglycan of the present invention obtained as described above has high physiological activity, particularly high cell proliferation activity. Moreover, it is derived from natural plants and is very safe. Therefore, the plant proteoglycan of the present invention can be used as a cell growth promoter.
かかる本発明の細胞増殖促進剤は、医薬部外品、化粧品等に配合される成分、特に化粧品用の成分（化粧料）として好適に利用することができる。 The cell growth promoter of the present invention can be suitably used as a component blended in quasi drugs, cosmetics, etc., particularly as a component for cosmetics (cosmetics).
本発明の細胞増殖促進剤は、そのまま、または必要に応じて一般的な添加剤を加えて、医薬部外品、化粧品等とすることができる。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、基剤、溶剤、溶解補助剤、可溶化剤、懸濁化剤、分散剤、乳化剤、安定化剤、抗酸化剤、粘稠化剤、保存剤、ｐＨ調整剤、矯味剤、香料、着色剤等が挙げられ、これらは１種または２種以上を用いることができる。 The cell growth promoter of the present invention can be used as it is or with the addition of a general additive as necessary to obtain quasi drugs, cosmetics, and the like. Additives include excipients, binders, disintegrants, lubricants, coatings, bases, solvents, solubilizers, solubilizers, suspending agents, dispersants, emulsifiers, stabilizers, An oxidizing agent, a thickening agent, a preservative, a pH adjuster, a corrigent, a fragrance, a coloring agent and the like can be mentioned, and these can be used alone or in combination.
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
〔実施例１〕
精密ろ過
２ｇのアラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ ＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗ）をイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名 マイクローザ ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。排出された濾液と同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて循環させ、２，０００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．７５ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
〔実施例２〕
精密ろ過
２ｇのアラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）をイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名 マイクローザ ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。排出された濾液と同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて循環させ、6，０００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．４２ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples.
[Example 1]
Microfiltration 2 g of gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) was dissolved in ion-exchanged water to prepare 200 ml of 1% (w / v) gum arabic aqueous solution. An aqueous solution of gum arabic is placed in a tank, and a microfiltration device (trade name: Microza PSP-003 (manufactured by Asahi Kasei Chemicals)) made of polyethylene hollow fiber at a flow rate of 500 ml / min using a pump, effective membrane area: 150 cm 2. Nominal pore diameter: 0.1 μm) (25 ° C. environment). The same amount of ion-exchanged water as the discharged filtrate was added to the tank and continuously circulated, and separation was performed until 2,000 ml of the filtrate was discharged. The concentrated solution was recovered and freeze-dried to recover a solid content of 0.75 g containing arabinogalactan protein. This solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined.
[Example 2]
Microfiltration 2 g of gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Trading Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) was dissolved in ion-exchanged water to prepare 200 ml of 1% (w / v) gum arabic aqueous solution. An aqueous solution of gum arabic is placed in a tank, and a microfiltration device (trade name: Microza PSP-003 (manufactured by Asahi Kasei Chemicals)) made of polyethylene hollow fiber at a flow rate of 500 ml / min using a pump, effective membrane area: 150 cm 2. Nominal pore diameter: 0.1 μm) (25 ° C. environment). The same amount of ion exchange water as the discharged filtrate was added to the tank and continuously circulated, and separation was performed until 6,000 ml of the filtrate was discharged. The concentrated solution was recovered and freeze-dried to recover 0.42 g of solids containing arabinogalactan protein. This solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined.
〔実施例３〕
精密ろ過、塩添加
２ｇのアラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）と２ｇの塩化ナトリウムを混合してイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（１．０重量％塩化ナトリウム含有、ｐＨ：４．５）２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名 マイクローザ ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。濾過装置より排出された濾液と同量の１重量％塩化ナトリウム水溶液をタンクに加えて続けて循環させ、８００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を透析膜（商品名 Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｅｓｔｅｒ （ＣＥ） Ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製）、分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．２８ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。図１はこのクロマトグラムを示す。
Example 3
Microfiltration, salt-added 2 g of gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Trading Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) and 2 g of sodium chloride were mixed and dissolved in ion-exchanged water, 1% (w / v) 200 ml of an aqueous gum arabic solution (containing 1.0 wt% sodium chloride, pH: 4.5) was prepared. An aqueous solution of gum arabic is placed in a tank, and a microfiltration device (trade name: Microza PSP-003 (manufactured by Asahi Kasei Chemicals)) made of polyethylene hollow fiber at a flow rate of 500 ml / min using a pump, effective membrane area: 150 cm 2. Nominal pore diameter: 0.1 μm) (25 ° C. environment). The same amount of 1% by weight sodium chloride aqueous solution as the filtrate discharged from the filtration apparatus was added to the tank and continuously circulated, and separation was performed until 800 ml of the filtrate was discharged. The concentrated solution was put into a dialysis membrane (trade name Biotech Cellulose Ester (CE) Membrane (manufactured by Spectrum), molecular weight cut off 500) and rotated in 5 L of ion-exchanged water in a tank (25 ° C. environment). After 1 hour, the ion-exchanged water was discharged, the same amount of ion-exchanged water was added to the tank and continuously rotated, and this treatment was repeated 10 times. The liquid inside the dialysis membrane was recovered and freeze-dried to recover 0.28 g of solids containing arabinogalactan protein. This solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined. FIG. 1 shows this chromatogram.
〔実施例４〕
精密ろ過、塩添加
２ｇのアラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）と２ｇの塩化ナトリウムを混合してイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（１．０重量％塩化ナトリウム含有、ｐＨ：４．５）２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名 マイクローザ ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。濾過装置より排出された濾液と同量の１重量％塩化ナトリウム水溶液をタンクに加えて続けて循環させ、１，２００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製、商品名Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｅｓｔｅｒ （ＣＥ） Ｍｅｍｂｒａｎｅ； 分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．２ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
Example 4
Microfiltration, salt-added 2 g of gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Trading Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) and 2 g of sodium chloride were mixed and dissolved in ion-exchanged water, 1% (w / v) 200 ml of an aqueous gum arabic solution (containing 1.0 wt% sodium chloride, pH: 4.5) was prepared. An aqueous solution of gum arabic is placed in a tank, and a microfiltration device (trade name: Microza PSP-003 (manufactured by Asahi Kasei Chemicals)) made of polyethylene hollow fiber at a flow rate of 500 ml / min using a pump, effective membrane area: 150 cm 2. Nominal pore diameter: 0.1 μm) (25 ° C. environment). The same amount of 1 wt% sodium chloride aqueous solution as the filtrate discharged from the filtration apparatus was added to the tank and continuously circulated, and separation was carried out until 1,200 ml of the filtrate was discharged. The concentrated solution was put into a dialysis membrane (trade name Biotech Cellulose Ester (CE) Membrane; molecular weight cut off: 500, manufactured by Spectrum), and rotated in 5 L of ion-exchanged water stored in a tank (25 ° C. environment). After 1 hour, the ion-exchanged water was discharged, the same amount of ion-exchanged water was added to the tank and continuously rotated, and this treatment was repeated 10 times. The liquid inside the dialysis membrane was recovered and freeze-dried to recover 0.2 g of solids containing arabinogalactan protein. This solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined.
〔比較例１〕アラビアゴム
アラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。図２はこのクロマトグラムを示す。
[Comparative Example 1] Gum arabic Gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Trading Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) was subjected to SEC measurement. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined. FIG. 2 shows this chromatogram.
〔比較例２〕アラビアゴム
脱塩アラビアゴム（商品名 サンアラビック（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
[Comparative Example 2] Gum arabic Desalinated gum arabic (trade name: Sun Arabic, manufactured by Sanei Pharmaceutical Co., Ltd., Acacia Senegal Wildenow) was subjected to SEC measurement. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined.
〔比較例３〕疎水担体
６ｇのアラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）と１２．５ｇの塩化ナトリウムを混合してイオン交換水に溶解し、１０％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（２５．０重量％塩化ナトリウム含有）６０ｍｌを調製した。２５重量％塩化ナトリウム水溶液をあらかじめ洗浄した疎水担体（商品名 ＲｅｌｉＳｏｒｂ ４０５ ＥＢ、ＲＥＳＩＮＤＩＯＮ製）２０ｍｌおよび１０％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（２５重量％塩化ナトリウム含有）６０ｍｌとを混合し、２５℃環境で２４時間振盪させた。疎水担体を２５重量％塩化ナトリウム水溶液４０ｍｌで３回洗浄した。続けて、疎水担体をイオン交換水２０ｍｌで５回洗浄し、洗浄液を回収した。洗浄液を透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製、商品名Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｅｓｔｅｒ （ＣＥ） Ｍｅｍｂｒａｎｅ；分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．２１ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
[Comparative Example 3] Hydrophobic carrier 6 g of gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) and 12.5 g of sodium chloride were mixed and dissolved in ion-exchanged water, and 10% ( w / v) 60 ml of gum arabic aqueous solution (containing 25.0 wt% sodium chloride) was prepared. A hydrophobic carrier (trade name ReliSorb 405 EB, manufactured by REINDION) 20 ml previously washed with 25% by weight sodium chloride aqueous solution and 60 ml of 10% (w / v) gum arabic aqueous solution (containing 25% by weight sodium chloride) were mixed at 25 ° C. Shake for 24 hours in the environment. The hydrophobic carrier was washed 3 times with 40 ml of 25% by weight aqueous sodium chloride solution. Subsequently, the hydrophobic carrier was washed 5 times with 20 ml of ion exchange water, and the washing solution was recovered. The washing solution was put into a dialysis membrane (trade name Biotech Cellulose Ester (CE) Membrane; molecular weight cut off: 500, manufactured by Spectrum), and rotated in 5 L of ion-exchanged water stored in a tank (25 ° C. environment). After 1 hour, the ion-exchanged water was discharged, the same amount of ion-exchanged water was added to the tank and continuously rotated, and this treatment was repeated 10 times. The liquid inside the dialysis membrane was collected and freeze-dried, and 0.21 g of a solid content containing arabinogalactan protein was collected. This solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined.
〔比較例４〕加熱変性
２ｇのアラビアゴム（商品名 アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ Ｓｅｎｅｇａｌ Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）を１１０℃に設定したオーブンに入れ、４８時間加熱した。固形分１．９ｇを回収し、この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。図３はこのクロマトグラムを示す。
[Comparative Example 4] Heat modification 2 g of gum arabic (trade name: Arabic Coal SS (manufactured by Sanei Pharmaceutical Co., Ltd.), Acacia Senegal Wildenow) was placed in an oven set at 110 ° C and heated for 48 hours. A solid content of 1.9 g was recovered, and this solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined. FIG. 3 shows this chromatogram.
〔比較例５〕動物性プロテオグリカン
２００ｍｌのプロテオグリカンＩＰＣ（１重量％プロテオグリカン、３０重量％１，３−ブチレングリコール含有水溶液、一丸ファルコス製）を透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製、商品名Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｅｓｔｅｒ（ＣＥ） Ｍｅｍｂｒａｎｅ；分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、動物性プロテオグリカンを含む固形分１．９９ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
Comparative Example 5 Animal Proteoglycan 200 ml of proteoglycan IPC (1% by weight proteoglycan, 30% by weight 1,3-butylene glycol-containing aqueous solution, manufactured by Ichimaru Falcos) was dialyzed (Spectrum, trade name Biotech Cellulose Ester (CE) Membrane). A molecular weight cut off 500) and rotated in 5 L of ion-exchanged water in a tank (25 ° C. environment). After 1 hour, the ion-exchanged water was discharged, the same amount of ion-exchanged water was added to the tank and continuously rotated, and this treatment was repeated 10 times. The liquid inside the dialysis membrane was collected and freeze-dried, and 1.99 g of a solid content containing animal proteoglycans was collected. This solid content was measured by SEC. In the obtained chromatogram, S1 / S2 and (S1 + S2) / S were determined.
〔評価〕
＜細胞増殖活性試験＞
ヒト正常表皮角化細胞（倉敷紡績（クラボウ）社製）を、１０μｇ／ｍｌインスリン、０．５μｇ／ｍｌハイドロコーチゾン含有ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地（クラボウ社製）を用いて２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で９６ｗｅｌｌ培養プレートに１００μｌずつ播種し、５％ＣＯ２、３７℃の条件にて２４時間培養した。その後、実施例、比較例で得られた各試料（終濃度２５０μｇ／ｍｌ）を含む培地（０．２０μｍセルロースアセテートメンブランフィルターにて不溶物を除去済み）を１００μｌ添加し７２時間培養した。培養後、細胞数をＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（ＣＫ０４、同仁化学製）により測定し、未添加時の細胞数を１００としたときの、表皮細胞増殖促進作用を解析した。
[Evaluation]
<Cell proliferation activity test>
Normal human epidermal keratinocytes (manufactured by Kurabo Industries Co., Ltd.) were used at a concentration of 2 × 10 4 cells / ml using HuMedia-KG2 medium (manufactured by Kurabo Industries) containing 10 μg / ml insulin and 0.5 μg / ml hydrocortisone. Inoculated 100 μl each on a 96-well culture plate and cultured under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. for 24 hours. Thereafter, 100 μl of a medium (0.20 μm cellulose acetate membrane filter from which insoluble matter had been removed) containing each sample (final concentration 250 μg / ml) obtained in Examples and Comparative Examples was added and cultured for 72 hours. After culturing, the number of cells was measured with Cell Counting Kit-8 (CK04, manufactured by Dojindo Chemical Co., Ltd.), and the epidermal cell proliferation promoting action was analyzed when the number of cells when not added was 100.
＜保湿性試験＞
実施例、比較例で得られた各試料を２％含む水溶液を用意し、各水溶液を５０μｌずつシャーレに滴下した。このシャーレを室温２２℃湿度２０％ＲＨ環境で９０分間放置し、放置後の重量（試料水溶液）を初期の重量（試料水溶液）で割った割合（％）を求めた。
<Moisturizing test>
An aqueous solution containing 2% of each sample obtained in Examples and Comparative Examples was prepared, and 50 μl of each aqueous solution was dropped on a petri dish. This petri dish was allowed to stand for 90 minutes in an environment of room temperature 22 ° C. and humidity 20% RH, and a ratio (%) obtained by dividing the weight after the standing (sample aqueous solution) by the initial weight (sample aqueous solution) was obtained.
＜官能試験＞
実施例、比較例で得られた各試料を１重量％含む水溶液について、専門パネラー２０名の前腕内側部に塗布したときの使用感を以下の判断基準で官能評価した。評価結果の平均値を、小数点以下四捨五入をして求めた。
・ すべすべ感
３：すべすべする、２：ややすべすべする、１：どちらともいえない、０：すべすべしない
・ 臭い
３：無臭である、２：どちらともいえない、１：やや臭いがある、０：臭いがある
<Sensory test>
About the aqueous solution containing 1 weight% of each sample obtained by the Example and the comparative example, the usability when apply | coating to the forearm inner part of 20 professional panelists was sensory-evaluated on the following judgment criteria. The average value of the evaluation results was calculated by rounding off after the decimal point.
・ Smooth 3 ： Smooth 2 ： Slightly smooth 1 ： Cannot say 0 ： Does not slip ・ Smell 3 ： Odorless 2 ： Cannot say 1 ： Slightly odor 0 odor Is
〔試験結果〕
試験結果を表１に示す。
〔Test results〕
The test results are shown in Table 1.
Claims (4)
工程（Ａ）：アラビアゴム水溶液を濃度０．５〜２０％（ｗ／ｖ）に調製する工程
工程（Ｂ）：アラビアゴム水溶液を、公称孔径０．０５〜０．２５μｍの精密濾過膜または分画分子量５０万〜２５０万の限外濾過膜に供する工程 The method for producing a plant proteoglycan according to claim 1, comprising the following steps (A) and (B).
Step (A): Step of preparing an aqueous solution of gum arabic to a concentration of 0.5 to 20% (w / v) Step (B): An aqueous solution of gum arabic with a microfiltration membrane having a nominal pore size of 0.05 to 0.25 μm or a minute Process for ultrafiltration membrane with molecular weight of 500,000 to 2.5 million
Cosmetics containing the cell growth promoter of Claim 3.
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Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020075875A (en) * | 2018-11-06 | 2020-05-21 | 日油株式会社 | Hair cosmetic |
| JP2020105123A (en) * | 2018-12-27 | 2020-07-09 | 日油株式会社 | Water-based skin cosmetic |
| JP2020105122A (en) * | 2018-12-27 | 2020-07-09 | 日油株式会社 | Aqueous cosmetic |
| JP2021038171A (en) * | 2019-09-03 | 2021-03-11 | 日油株式会社 | Disinfection composition |
| JP2021042166A (en) * | 2019-09-11 | 2021-03-18 | 日油株式会社 | Protein stabilizer and reagent containing stabilized protein, and method of stabilizing protein contained in reagent |
| JP2021051151A (en) * | 2019-09-24 | 2021-04-01 | 日油株式会社 | Protein adhesion inhibitor for soft contact lenses, soft contact lens solution, and method of preventing adhesion of protein to soft contact lenses |
| WO2021059344A1 (en) * | 2019-09-24 | 2021-04-01 | 日油株式会社 | Plant-derived proteoglycan and application thereof |
| WO2021193398A1 (en) * | 2020-03-27 | 2021-09-30 | 日油株式会社 | Composition for oral cavity |
| TWI826539B (en) * | 2019-09-25 | 2023-12-21 | 日商日油股份有限公司 | Method for manufacturing phytoproteoglycan |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01306401A (en) * | 1988-06-02 | 1989-12-11 | Ina Shokuhin Kogyo Kk | Condensing and fractionating method of extracted solution of polysaccharides |
| JPH03122101A (en) * | 1989-10-06 | 1991-05-24 | Nitta Gelatin Inc | Clarification of gum arabic |
| JPH06256208A (en) * | 1993-03-03 | 1994-09-13 | Food Design Gijutsu Kenkyu Kumiai | Immunopotentiator |
| JPH08508973A (en) * | 1992-04-17 | 1996-09-24 | フィディーア・ソシエタ・ペル・アチオニ | Preparation of low molecular weight hyaluronic acid to stimulate bone formation |
| JPH08259604A (en) * | 1983-10-11 | 1996-10-08 | Fidia Spa | Pharmacologically active fraction of hyaluronic acid,its production,and its medicine composition |
| JP2008532479A (en) * | 2004-11-19 | 2008-08-21 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | Modified plant gum for the preparation of active ingredients |
| JP2010521144A (en) * | 2007-03-15 | 2010-06-24 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | Carotenoid composition containing modified acacia gum |
-
2017
- 2017-03-29 JP JP2017066057A patent/JP2018168263A/en active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08259604A (en) * | 1983-10-11 | 1996-10-08 | Fidia Spa | Pharmacologically active fraction of hyaluronic acid,its production,and its medicine composition |
| JPH01306401A (en) * | 1988-06-02 | 1989-12-11 | Ina Shokuhin Kogyo Kk | Condensing and fractionating method of extracted solution of polysaccharides |
| JPH03122101A (en) * | 1989-10-06 | 1991-05-24 | Nitta Gelatin Inc | Clarification of gum arabic |
| JPH08508973A (en) * | 1992-04-17 | 1996-09-24 | フィディーア・ソシエタ・ペル・アチオニ | Preparation of low molecular weight hyaluronic acid to stimulate bone formation |
| JPH06256208A (en) * | 1993-03-03 | 1994-09-13 | Food Design Gijutsu Kenkyu Kumiai | Immunopotentiator |
| JP2008532479A (en) * | 2004-11-19 | 2008-08-21 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | Modified plant gum for the preparation of active ingredients |
| JP2010521144A (en) * | 2007-03-15 | 2010-06-24 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | Carotenoid composition containing modified acacia gum |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7143727B2 (en) | 2018-11-06 | 2022-09-29 | 日油株式会社 | hair cosmetics |
| JP2020075875A (en) * | 2018-11-06 | 2020-05-21 | 日油株式会社 | Hair cosmetic |
| JP2020105123A (en) * | 2018-12-27 | 2020-07-09 | 日油株式会社 | Water-based skin cosmetic |
| JP2020105122A (en) * | 2018-12-27 | 2020-07-09 | 日油株式会社 | Aqueous cosmetic |
| JP7305954B2 (en) | 2018-12-27 | 2023-07-11 | 日油株式会社 | water-based cosmetics |
| JP7127536B2 (en) | 2018-12-27 | 2022-08-30 | 日油株式会社 | Aqueous skin cosmetic |
| JP2021038171A (en) * | 2019-09-03 | 2021-03-11 | 日油株式会社 | Disinfection composition |
| JP7363218B2 (en) | 2019-09-03 | 2023-10-18 | 日油株式会社 | Disinfectant composition |
| JP2021042166A (en) * | 2019-09-11 | 2021-03-18 | 日油株式会社 | Protein stabilizer and reagent containing stabilized protein, and method of stabilizing protein contained in reagent |
| JP7294012B2 (en) | 2019-09-11 | 2023-06-20 | 日油株式会社 | Protein Stabilizer, Reagent Containing Stabilized Protein, and Method for Stabilizing Protein Contained in Reagent |
| CN114341198A (en) * | 2019-09-24 | 2022-04-12 | 日油株式会社 | Vegetable proteoglycan and use thereof |
| JP7243549B2 (en) | 2019-09-24 | 2023-03-22 | 日油株式会社 | Protein adhesion inhibitor for soft contact lenses, solution for soft contact lenses, and method for inhibiting protein adhesion to soft contact lenses |
| CN114341198B (en) * | 2019-09-24 | 2023-05-16 | 日油株式会社 | Vegetable proteoglycan and use thereof |
| WO2021059344A1 (en) * | 2019-09-24 | 2021-04-01 | 日油株式会社 | Plant-derived proteoglycan and application thereof |
| JP2021051151A (en) * | 2019-09-24 | 2021-04-01 | 日油株式会社 | Protein adhesion inhibitor for soft contact lenses, soft contact lens solution, and method of preventing adhesion of protein to soft contact lenses |
| TWI826539B (en) * | 2019-09-25 | 2023-12-21 | 日商日油股份有限公司 | Method for manufacturing phytoproteoglycan |
| CN115361936A (en) * | 2020-03-27 | 2022-11-18 | 日油株式会社 | Oral composition |
| WO2021193398A1 (en) * | 2020-03-27 | 2021-09-30 | 日油株式会社 | Composition for oral cavity |
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