JP2017536347A - セリチニブとｅｇｆｒ阻害剤の組合せ - Google Patents

Abstract

本開示は、２つのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、すなわちセリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤を含む医薬組成物に関する。本組合せは、ＴＫＩ媒介疾患、例えば、がんの処置に共同で治療上有効な量で、独立にまたは別々に投与することができる。本開示は、医薬の製造のためのそのような組合せの使用、薬としてのそのような組合せの使用、そのような組合せを含むキットオブパーツ、およびそのような組合せの処置の方法も提供する。

Description

本開示は、２つのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む医薬組成物に関する。本組合せは、ＴＫＩ媒介疾患の処置に共同で治療上有効な量で、独立にまたは別々に投与される。本開示は、医薬の製造のためのそのような組合せの使用；薬としてのそのような組合せの使用；そのような組合せを含むキットオブパーツ；およびその組合せが関与する処置の方法にさらに関する。

チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）などの標的療法は、幾つかのタイプのがんを処置し、標準的なプラチナベースの化学療法の代替を提供するために広範に使用されている。

ＡＬＫは、インスリン受容体スーパーファミリーの受容体チロシンキナーゼのメンバーである。未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）が関与する染色体再編成は、種々のヒト悪性疾患において検出されており、細胞の制御経路における妨害が導かれる。ＡＬＫチロシンキナーゼ阻害剤を用いるＡＬＫ経路の阻害または抑制により、悪性細胞の細胞増殖停止およびアポトーシスが引き起こされる。ＡＬＫチロシンキナーゼ阻害剤が関与する標的療法が、開発されている。

セリチニブ（ＬＤＫ３７８）は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤である。その化学式は、５−クロロ−Ｎ^２−（２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ^４−［２−（プロパン−２−スルホニル）−フェニル］−ピリミジン−２，４−ジアミンである。セリチニブを調製するためのプロセスは、国際公開第２００８／０７３６８７号パンフレットに開示された。化合物は、クリゾチニブに対する不耐性に進行しているまたは不耐性である、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者の処置のために、Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標）として米国ＦＤＡによって承認されている。

上皮増殖因子受容体は、幾つかのファミリーメンバーを有する上皮増殖因子ファミリーのリガンドに対する受容体である。幾つかのタイプのがんは、ＥＧＦＲ過剰活性またはＥＧＦＲ過剰発現に依存的であることが公知である。

ＥＧＦＲシグナル伝達が、ＡＬＫ阻害をバイパスできることが観察された。この事象は、ＥＧＦＲ変異体がんタイプならびにＥＧＦＲ変異を有さないがんに起こる可能性がある。ＡＬＫ阻害剤による臨床経験に基づいて、処置の開始から１〜２年後に、ＡＬＫ変異を有する患者が、標的療法ＡＬＫチロシンキナーゼ阻害剤に対して耐性を発生することが観察された。驚くべきことに、獲得耐性は、二次的ＡＬＫ変異の発生に起因するだけでなく、ＥＧＦＲなどの他の発癌性ドライバーの出現にも起因することが観察された。

ＥＧＦＲ阻害剤単独は、細胞がＡＬＫ阻害剤による処置に対して耐性を獲得した場合に十分ではない。ＡＬＫ阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の組合せが、必要とされる。したがって、本開示は、処置の開始から有利な効果を提供することができる、セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤の組合せを取り扱う。例えば、患者がＡＬＫ阻害剤で以前に処置されたことがないＡＬＫナイーブ患者の処置において、この組合せは価値があることが明らかとなった。加えて、その組合せは、ＡＬＫ陽性がんにおいて可能性のある獲得耐性を克服する。したがって、その組合せは、クリゾチニブ後またはセリチニブ後の状況などのＡＬＫ阻害剤後の状況に有用であろう。

本開示の第１の態様は、（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩、および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む組合せ医薬である。

本開示の別の態様は、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の医薬の製造のための、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせたセリチニブの使用である。

本開示の更なる態様は、がんの処置のための同時のまたは別々の投与に有効な量のセリチニブまたは薬学的に許容されるその塩およびＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を提供する。

本開示のさらなる別の態様は、セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩が、ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩と組み合わせて投与される、薬として使用するためのセリチニブである。

Ｈ２２２８細胞株においてＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイによって得られる散布図であり、どのリガンドが、セリチニブの増殖阻害効果を反転できる可能性があるかを示す図である。 指示される用量のセリチニブを６日間処置したＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１細胞の細胞増殖を示す図である。 ＥＧＦＲ阻害剤単独（グラフの上部ライン）またはＥＧＦＲ阻害剤と０．５μΜセリチニブの組合せ（グラフにおける下部ライン）によるＭＧＨ０４９細胞増殖における効果を示す図である。 ＥＧＦＲ阻害剤単独（グラフの上部ライン）またはＥＧＦＲ阻害剤と０．５μΜセリチニブの組合せ（グラフにおける下部ライン）によるＭＧＨ０５１細胞増殖における効果を示す図である。 ＡＬＫの阻害が、ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣ細胞株におけるＨＥＲ３の活性化を誘導することを示す図である。細胞を短期および長期セリチニブ（ＬＤＫ３７８）処置後に採取し、全細胞溶解物をウエスタンブロッティングによって分析した。長期ＡＬＫ阻害は、ＨＥＲ３リン酸化の上方制御を導いた。 ＨＥＲ３およびＥＧＦＲ阻害剤の添加が、ＡＫＴリン酸化におけるリバウンドを抑制することを示す図である。ＭＧＨ０５１細胞を、セリチニブ（ＬＤＫ３７８）で４時間または８日間処置した。抗体Ａ、エルロチニブおよびアファチニブを、長期ＬＤＫ３７８処置の最終日に添加した。 エルロチニブが、ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣ細胞におけるセリチニブ（ＬＤＫ３７８）の抗増殖活性を増強することを示す図である。細胞を、セリチニブ（０．５μΜ）、エルロチニブ（１μΜ）、または組合せに７日間曝露した。各細胞株について、全てのディッシュを同時に固定し、染色し、撮影した。 図８Ａは、雌ＳＣＩＤベージュマウスにおけるＨ２２２８ ＮＳＣＬＣ異種移植片における、セリチニブ（ＬＤＫ３７８）単独ならびにセツキシマブおよび／または抗体Ａ（表１からのＡｂ Ａ；ＭＯＲ１０７０３）との組合せの有効性を示す図である。 図８Ｂは、雌ＳＣＩＤベージュマウスにおけるＨ２２２８ ＮＳＣＬＣ異種移植片における、セリチニブ（ＬＤＫ３７８）単独ならびにセツキシマブおよび／または抗体Ａ（表１からのＡｂ Ａ；ＭＯＲ１０７０３）との組合せの有効性を示す図である。

驚くべきことに、ＥＧＦＲシグナル伝達が、ＡＬＫ阻害をバイパスできることが見出された。ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣ細胞株におけるｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ研究からの結果により、ＡＬＫ阻害剤が使用されてきておらずモデルがＡＬＫ阻害剤に対する耐性をすでに初期に示していた状況において、ＥＧＦＲおよびＡＬＫの阻害が、共同的に機能することが示された。驚くべきことに、それらの研究は、ＡＬＫ変異型細胞をセリチニブで処置する間に誘導される可能性のある耐性経路を克服することが可能な相乗的な抗癌薬組合せの発見も導く。セリチニブとＥＧＦＲ阻害剤を組み合わせることによって耐性を克服できることが見出された。また、セリチニブとＥＧＦＲ阻害剤を組み合わせて、ＥＧＦＲ経路にＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣにおけるＡＬＫシグナル伝達をバイパスさせないことによって、セリチニブに対する獲得耐性を克服できることも見出された。開示に従ったセリチニブとＥＧＦＲ阻害剤の相乗的な組合せは、同時に独立に、または時間間隔内に別々に投与することができる。したがって、本開示は、（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む組合せ医薬（例えば、組合せ製品）を提供する。
薬学的に許容される塩は、例えば、好ましくは有機酸または無機酸で、酸付加塩として形成することができる。適切な無機酸は、例えば、ハロゲン酸、例えば、塩酸である。適切な有機酸は、例えば、カルボン酸またはスルホン酸、例えば、フマル酸またはメタンスルホン酸である。単離または精製目的のため、薬学的に許容されない塩、例えば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療目的のため、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみが用いられ（薬学的製剤の形態で適用可能な場合）、したがって、これらが好ましい。例えば、新規化合物の精製または同定における、中間体として使用することができる塩を含む、遊離形態における新規化合物とそれらの塩の形態におけるものの間の密接な関係性の観点において、以上および以下の遊離化合物への任意の参照は、必要に応じておよび便宜上、対応する塩も参照していると理解されるべきである。式（Ｉ）の化合物の塩は好ましくは、薬学的に許容される塩であり；薬学的に許容される塩を形成する適切な対イオンが当該分野において公知である。

上記の第１の実施形態に従う本開示は、上記の組合せパートナーを含む、組合せ医薬、特に組合せ医薬製品に関する。

ＥＧＦＲ阻害剤は、上皮増殖因子ファミリーの受容体チロシンキナーゼ（ホモ二量体またはヘテロ二量体として、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４）およびそれらの変異体の活性を、標的化し、減少させ、または阻害する、任意の化合物であってよい。ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥｒｂＢ３（ＨＥＲ３）およびＥｒｂＢ４（ＨＥＲ４）は、細胞外リガンド結合エクトドメイン、膜貫通ドメイン、短い膜近傍セクション、チロシンキナーゼドメインおよびチロシン含有Ｃ末端尾部からなる、構造的に関連する、単鎖膜貫通糖タンパク質受容体である。上皮増殖因子受容体ファミリーの活性を標的化、減少または阻害する化合物は、特に、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリーのメンバー、例えば、ＥＧＦ受容体（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を阻害するまたはＥＧＦもしくはＥＧＦ関連リガンドに結合する、化合物、タンパク質または抗体である。特定の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ、ａｋａ ＥｒｂＢ−１および／またはＥｒｂＢ３（ａｋａ ＨＥＲ３）の活性を標的化、減少または阻害する。特定の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ特異的（ＥｒｂＢ１、ＨＥＲ１）である。別の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥｒｂＢ３特異的（ＨＥＲ３）である。なお別の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ遺伝子の体細胞性変異を有するＥＧＦＲを標的化する。これらの変異は、アミノ酸７４７から７５０に影響する小さい欠失または点突然変異（最も一般には、ロイシンのアルギニンによるコドン８５８での置き換え［Ｌ８５８Ｒ］）であってよい。加えて、または代替的に、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍを阻害できる。特定の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、野生型ＥＧＦＲを阻害できる。

例えば、ＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、ペリチニブ、ネラチニブ、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド、パニツムマブ、マツズマブ、ペルツズマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、イコチニブ、アファチニブおよびセツキシマブ、ならびに薬学的に許容されるそれらの塩からなる群から選択することができる。

本開示によると、ゲフィチニブ、セツキシマブおよびエルロチニブは、セリチニブと組み合わせることができる特に好ましいＥＧＦＲ阻害剤である。

エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）として市販される、Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）は、以下の式で実施例２０として国際公開第９６／３０３４７号パンフレットに開示されるＥＧＦＲ阻害剤である。

＝Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス−（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン、または薬学的に許容されるその塩。
ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）として市販される、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）は、例えば、国際公開第９６／３３９８０号パンフレット、実施例１に開示されており、以下の構造を有する。

＝Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］キナゾリン−４−アミン、または薬学的に許容されるその塩。この化合物またはその薬学的に許容される塩は、本開示の実施形態において特に好ましい。

別のＥＧＦＲ阻害剤ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）（ＵＳＡ）、Ｔｙｖｅｒｂ（登録商標）（ＥＰ）として市販される、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）は、米国特許第６，３９１，８７４号、米国特許第７，１５７，４６６号、米国特許第６，８２８，３２０号、ＵＳに開示された。

＝Ｎ−［３−クロロ−４−（３−フルオロベンジルオキシ）フェニル］−６−｛５−［４−（メチルスルホニル）−２−アザブチル］−２−フリル｝キナゾリン−４−アミン、または薬学的に許容されるその塩もしくはプロドラッグ、例えば、国際公開第９９３５１４６号パンフレット（実施例２９）を参照されたい。

カネルチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）（例えば、二塩酸塩として使用される）、またはＮ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−（３−モルホリン−４−イルプロポキシ）キナゾリン−６−イル］プロパ−２−エンアミド、または薬学的に許容されるその塩もしくはプロドラッグは、国際公開第２００００３１０４８号パンフレットに開示されており、以下の式を有する。

ペリチニブ（Ｗｙｅｔｈ、Ｐｆｉｚｅｒにより所有）は、（２Ｅ）−Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミドの名称と以下の式を有する。

国際公開第２００５０２８４４３号パンフレット（実施例２０）を参照されたい。

ネラチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）、（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］アミノ］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド、または薬学的に許容されるその塩もしくはプロドラッグ（以下の式を有する）。

例えば、国際公開第２００５０２８４４３号パンフレット、実施例２を参照されたい。

セリチニブとの組合せに使用される別のＥＧＦＲ阻害剤は、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）であってよい。

国際公開第２０１３１８４７５７号パンフレットに開示される。

別のＥＧＦＲ阻害剤、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）（ＵＳ）として市販される、Ａｍｇｅｎ）は、米国特許第６，２３５，８８３号および米国特許第７，８０７，７９８号に開示された。

別のＥＧＦＲ阻害剤、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ＵＳ）として市販される、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）は、国際公開第２００１００２４４号パンフレットに開示された。

別のＥＧＦＲ阻害剤、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００、Ｍｅｒｋ Ｓｅｒｏｎｏ）は、臨床治験研究（ＮＣＴ００１１１８３９およびＮＣＴ００２１５６４４）に開示された。

別のＥＧＦＲ阻害剤、ザルツムマブ（Ｇｅｎｍａｂによって開発された）は、臨床治験研究（ＮＣＴ０００９３０４１）およびBastholt et al. Radiother. Oncol. 2007, 85(1), 24-28に開示された。

別のＥＧＦＲ阻害剤、イコチニブ（Ｃｏｎｍａｎａの名称で中国において承認されている、Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｂａｔａ Ｐｈａｒｍａ Ｌｔｄ．）は、国際公開第２００３０８２８３０号パンフレット（実施例１５）に開示されており、以下の式を有する。

＝３−エチルニル−フェニル−（７，８，１０，１１，ｌ３，１４−ヘキサヒドロ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−１，３−ジアザシクロドデカ［ｂ］ナフタレン−４−イル）−アミンまたは薬学的に許容されるその塩。

別のＥＧＦＲ阻害剤、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標）（ＥＵ）、Ｏｎｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ＡＧ）は、Grosse et al. J. Cell. Biochem. 1992, 49(2), 157-165およびBartels et al. Future Oncol. 2009, 5(9), 1349-1361に開示された。

別のＥＧＦＲ阻害剤、アファチニブ（ＧＩＬＯＴＲＩＦ（登録商標）（ＵＳ）、ＧＩＯＴＲＩＦ（登録商標）（ＥＵ）として市販される、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、米国特許第８，７３５，４０９（Ｂ２）号に開示された。

＝（Ｓ，Ｅ）−Ｎ−（４−（（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ）−７−（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）キナゾリン−６−イル）−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミドまたは薬学的に許容されるその塩。

可能性のあるＥＧＦＲ阻害剤のうち、抗体、例えば、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂおよびＭｅｒｃｋ ＫｇａＡ）も言及され、これはキメラ（マウス／ヒト）モノクローナル抗体であり、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤として活性であり、例えば、静脈内に投与することができる。

一実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、表１に示される任意の抗体のＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって計算された１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む、ＨＥＲ３受容体に対する単離された抗体またはその断片である。

一例では、ＥＧＦＲ阻害剤は、配列番号４、配列番号１０、配列番号２２、配列番号２８、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７６、配列番号８２、配列番号９４、配列番号１００、配列番号１１２、配列番号１１８、配列番号１３０、配列番号１３６、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２０、配列番号２３８、配列番号２５６、配列番号２７４、配列番号２９２、配列番号３１０、配列番号３２８、配列番号３４６、および配列番号３６４からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその断片である。単離されたＨＥＲ３抗体または断片の例には、以下が含まれる。

配列番号１５を含むＶＨおよび配列番号１４を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号３３を含むＶＨおよび配列番号３２を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号５１を含むＶＨおよび配列番号５０を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号６９を含むＶＨおよび配列番号６８を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号８７を含むＶＨおよび配列番号８６を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号１０５を含むＶＨおよび配列番号１０４を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号１２３を含むＶＨおよび配列番号１２２を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号１４１を含むＶＨおよび配列番号１４０を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号１５９を含むＶＨおよび配列番号１５８を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号１７７を含むＶＨおよび配列番号１７６を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号１９５を含むＶＨおよび配列番号１９４を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号２１３を含むＶＨおよび配列番号２１２を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号２３１を含むＶＨおよび配列番号２３０を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号２４９を含むＶＨおよび配列番号２４８を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号２６７を含むＶＨおよび配列番号２６６を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号２８５を含むＶＨおよび配列番号２８４を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号３０３を含むＶＨおよび配列番号３０２を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号３２１を含むＶＨおよび配列番号３２０を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号３３９を含むＶＨおよび配列番号３３８を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；
配列番号３５７を含むＶＨおよび配列番号３５６を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列；ならびに
配列番号３７５を含むＶＨおよび配列番号３７４を含むＶＬ、またはその９７〜９９パーセント同一性を有するアミノ酸配列。

一例では、ＥＧＦＲ阻害剤は、配列番号１のＨＥＲ３受容体のドメイン２内のアミノ酸残基２６５〜２７７、および３１５およびドメイン４内のアミノ酸残基５７１、５８２〜５８４、５９６〜５９７、６００〜６０２、および６０９〜６１５を含み、配列番号１の配列は国際公開第２０１３／０８４１４８号パンフレットに定義される、ＨＥＲ３受容体のコンフォメーションエピトープを認識する抗体またはその断片であって、リガンド依存的およびリガンド非依存的なシグナル伝達の双方を遮断する抗体またはその断片である。代替的に、ＥＧＦＲ阻害剤は、配列番号１２８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２９のＣＤＲ２；配列番号１３０のＣＤＲ３；ならびに配列番号１３１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３２のＣＤＲ２；および配列番号１３３のＣＤＲ３を含む、抗体またはその断片である。抗体またはその断片の可能性のあるバリアントは、上記に定義されるＨＥＲ３受容体のコンフォメーションエピトープを認識し、少なくとも１つの配列番号１２８の可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２９のＣＤＲ２；もしくは配列番号１３０のＣＤＲ３；または少なくとも１つの配列番号１３１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３２のＣＤＲ２；もしくは配列番号１３３のＣＤＲ３を含むものである。好ましいＥＧＦＲ阻害剤は、表１に定義されるＭＯＲ１０７０３の配列を含む抗体またはその断片である（抗体Ａ）。抗体を調製するプロセスは、国際公開第２０１３／０８４１４８号パンフレットに記載された。セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩は、表１に定義されるＭＯＲ１０７０３の配列を含む抗体（抗体Ａ）、またはその断片、およびセツキシマブと組み合わせることもできる。抗体Ａおよびセツキシマブの組合せは、セリチニブの有効性を有意に改善することができる。三重の組合せは、ＮＳＣＬＣの処置に特に効果的である。

セリチニブと組み合わせることができる、ＥＧＦＲ阻害剤（ＨＥＲ３阻害剤）は、配列番号１２８の重鎖可変領域ＣＤＲ１を含む抗体であってよい。ＥＧＦＲ阻害剤は、配列番号１２９の重鎖可変領域ＣＤＲ２を含む抗体であってもよい。抗体は、配列番号１３０の重鎖可変領域ＣＤＲ３を含むことができる。

セリチニブと組み合わせることができる、ＥＧＦＲ阻害剤（ＨＥＲ３阻害剤）は、配列番号１３１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１を含む抗体であってよい。同じまたは代替的な実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、配列番号１３２の軽鎖可変領域ＣＤＲ２を含む、抗体であってよい。ＥＧＦＲ阻害抗体は、配列番号１３３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含むこともできる。前記ＣＤＲのさらなる組合せが、本明細書において企図される。

本開示と一致して、組合せ医薬における化合物である、成分（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、別々にまたは一緒に投与することができる。

セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤が、同時に独立に、または時間間隔内に別々に投与され、時間間隔が、組合せパートナーが共同で活性であることを可能にする、薬として使用するための、本開示による組合せ医薬。

本明細書で用いられる用語「組合せ医薬」は、非固定の組合せにおいて、活性成分、例えば、（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を、別々にまたは一緒に混合することおよび組み合わせることから得られる製品を指す。

用語「組合せ」は、組合せ使用のためのまたは組合せ製品に対する、指示書の有り無しでの、別々のパートナーの製剤を指す。組合せ化合物は、同じまたは異なる製造者によって製造および／または製剤化されうる。したがって、組合せパートナーは、互いに独立にも販売される完全に別々の医薬剤形または医薬組成物であってもよく、それらの組合せ使用の公正な指示書が：（ｉ）医師に発売する前（例えば、開示の化合物および他の治療剤を含む「キットオブパーツ」の場合において）；（ｉｉ）医師自身により（または医師のガイダンスのもとに）投与のすぐ前；（ｉｉｉ）医師または医療スタッフにより患者自身に提供される。

用語「非固定の組合せ」は、活性成分、例えば、セリチニブおよびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、両方とも、別々にまたは一緒に、同時に独立してまたは時間間隔内に別々に投与され、そのような投与が、必要とする対象において活性成分の治療上有効なレベルを提供することを意味する。後者は、例えば３つ以上の活性成分の投与の、カクテル療法にも適用される。この用語は、組合せパートナー（ｉ）セリチニブと（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤（存在する場合、さらなる１つまたは複数の共因子）が、本明細書で定義されるように、互いに独立に投与することができるとの意味で、特に「キットオブパーツ」と定義される。それにもかかわらず、本明細書においてセリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤は、薬物が単独で使用される場合に、それぞれの使用される用量と比較して低減させた用量で投与できることが企図される。これは、特に、忍容性および薬物関連有害事象が化合物を用いた場合に問題となる場合において、有利であり得る。このような事例における薬物用量減少は、組合せパートナーを追加しつつ、患者などの対象への薬物投与の維持に役立つ可能性がある。全体的に、そのようなアプローチは、臨床チームに、対象のための処置オプションに関してより優れた柔軟性を授ける。薬物の１つまたは両方の低減させた用量が投与される、そのような組合せの一例は、セリチニブおよびアファチニブの組合せである。胃腸の副作用、例えば、下痢が、適切に緩和または少なくとも低減できることが期待される。

本開示は、ＥＧＦＲ阻害剤が、エルロチニブ、ゲフィチニブまたはセツキシマブである、本開示による組合せ医薬も含む。

別の実施形態において、本開示による組合せ医薬は、ＥＧＦＲ阻害剤として、表１に示される任意の抗体のＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって計算された１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む、ＨＥＲ３受容体に対する単離された抗体またはその断片を含む。

本開示のさらなる実施形態は、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置に共同で治療上有効である量を含む組合せ（例えば、組合せ製品）を提供する。用語「共同で治療上有効」は、化合物を、必要とする対象、例えば、温血動物、特にヒトを処置するため、別々にまたは一緒に、同時に独立してまたは時間間隔内に別々に投与される場合に、化合物が相乗的な相互作用を示すことを意味する。

用語「媒介疾患」は、状態または疾患が、決定的な病因を欠いているが、調節不全、炎症、免疫応答、細胞増殖、細胞アポトーシス、アレルギーなどの医学的な障害がもたらされる共通経路を特徴とすることを意味する。

本開示の組合せが、薬として使用することができる、相乗的な相互作用、強いｉｎ−ｖｉｖｏおよびｉｎ−ｖｉｔｒｏ抗腫瘍性応答などの有益な治療特性を有することが示された。その特性は、それをがんの処置に特に有用にする。

本開示の組合せで処置することができる適切ながんは、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、神経芽細胞腫、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含むが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、がんは、ＮＳＣＬＣである。一実施形態において、がんは、ｗｔ ＥＧＦＲを含む。別の実施形態において、がんは、Ｔ７９０Ｍ ＥＧＦＲを含む。

開示のさらなる実施形態は、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患がＮＳＣＬＣである、本開示による組合せ医薬に関する。

本開示による組合せは、特に、がん療法と化学療法、放射線治療、免疫療法、外科的な介入またはこれらの組合せのために、その上またはそれに加えて投与することができる。長期療法は、上記のような、他の処置戦略の場面において、アジュバント療法と等しく可能である。他の可能性のある処置は、例えば、リスクがある患者における、腫瘍退縮、またはさらには化学予防療法後の患者の状態を維持する療法である。

任意の疾患または障害の「処置する（treat）」、「処置すること（treating）」および「処置（treatment）」の用語は、疾患または障害の開始または発生または進行を予防するまたは遅延させるために、疾患または障害を改善すること（例えば、疾患または少なくとも１つのその臨床症状の発生を遅くする、停止する、または低減させること）を指す。加えて、それらの用語は、患者によって識別可能ではない可能性があるものを含む、少なくとも１つの身体的なパラメータを緩和することまたは改善することを指し、疾患または障害を、身体的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理的に（例えば、身体的なパラメータの安定化）、または両方においてモジュレートすることも指す。

用語「処置」は、例えば、疾患を治癒するまたは疾患退縮もしくは疾患の進行の遅延における効果を有させる目的で、そのような処置を必要とする温血動物、特にヒトへの、組合せパートナーの治療投与を含む。

用語「必要とする対象」は、処置により生物学的、医学的または生活の質に利益をもたらされるであろう温血動物、特にヒトを指す。
セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤の組合せは、上記のように、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の医薬の製造のため使用することができる。同様に、組合せは、上記のように、本開示に従って、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法であって、有効量の（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩の組合せを、別々にまたは一緒に、それを必要とする対象に投与することを含む方法に使用することができる。

例えば、用語「共同で（治療上）活性」は、化合物が、好ましくは、処置される温血動物、特にヒトにおいて、依然として（好ましくは、相乗的な）相互作用（共同治療効果）を示すような時間間隔で（時差的な様式で、特に順序特異的な様式で）別々にまたは逐次的に与えられ得ることを意味しうる。共同治療効果は、とりわけ、両方の化合物が処置されるヒトの血液中に少なくとも特定の時間間隔において存在することを示す、血中レベルを追跡することによって決定することができるが、これは、化合物が、同時に血液中に存在しないにもかかわらず共同で活性である場合を排除しない。

組合せ投与を受けることができる対象または患者は、哺乳動物および非哺乳動物を包含する。哺乳動物の例には、ヒト、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモットなどが含まれるが、これらに限定されない。非哺乳動物の例には、鳥類、魚類などが含まれるが、これらに限定されない。最も好ましい実施形態では、対象または患者は、ヒトである。本明細書に開示される疾患または障害のため処置を必要とすると診断されているヒトであってよい。

本開示は、（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩の組合せが、別々にまたは一緒である、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法も記載する。

本開示は、有効量の（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物に関する。医薬組成物は、例えば、任意の適切な薬学的賦形剤であってよい、薬学的に許容される担体で調製することができる。担体には、当業者には公知であろう、任意のおよび全ての結合剤、フィラー、溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張性剤、吸収遅延剤、塩、薬物安定化剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、色素などおよびそれらの組合せが含まれる（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329；Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed. Pharmaceutical Press 2011；およびその続きのバージョンを参照されたい）。任意の従来の担体が活性成分と不適合性である範囲を除いて、治療または医薬組成物におけるその使用が企図される。
本開示と一致して、組合せパートナーは、別々の単位剤形において、同時に独立に、または時間間隔内に別々に投与することができる。２つの治療パートナーは、それ自体既知の様式で調製してもよく、温血動物、特にヒトを含む必要とする対象に対する腸内、例えば、経口または直腸、局所および非経口投与に適切なものである。適切な医薬組成物は、例えば、約０．１％から約９９．９％の活性成分を含有する。

医薬組成物は、最終的な剤形−錠剤またはカプセルを調製するために加工することができる。これは、最終的なブレンドの組合せを、場合により１つまたは複数の賦形剤と一緒に、圧縮することによって達成させることができる。圧縮は、例えば、回転式錠剤プレスで達成することができる。異なる形状の錠剤を、調製することができる（丸形、卵形、または他の適切な形状）。錠剤は、消化管中での崩壊および吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたり作用を持続させるために、公知の技法によってコーティングされてもよくまたはコーティングされなくてもよい。特に指示のない限り、これらはそれ自体既知の方法で、例えば、混合、造粒、糖衣加工によって調製される。経口使用のための製剤は、硬いゼラチンカプセル剤として提供することができ、有効成分は、不活性固形希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはセルロースベースの賦形剤と混合され、または軟らかいゼラチンカプセルとして提供することができ、有効成分は、水または油性媒体、例えば、オリーブ油、液体パラフィンまたはピーナツ油と混合される。

用語「有効量」は、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって探求されている、細胞、組織、器官、系、動物またはヒトにおいて生物学的または医学的な応答を引き起こさせる対象化合物の量を意味する。本発明の組合せに用いられるそれぞれの組合せパートナー剤の有効な用量は、用いられる特定の化合物または医薬組成物、投与のモード、処置される状態、処置される状態の重症度に応じて変わり得る。通常の技術を有する医師、臨床医または獣医師は、状態を予防し、状態に対抗し、または状態の進行を停止するのに必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。効力を生じる範囲内の薬物の濃度を達成する至適な精度には、標的部位への組合せ薬物利用能の動態に基づいたレジメンが必要とされる。これには、薬物の分布、平衡および排出の考慮が含まれる。

本開示は、組合せ投与のための、「キットオブパーツ」の形態での本開示による組合せ医薬も記載する。組合せは、１つの単位剤形に固定された組合せまたは組合せ投与のためのキットオブパーツのいずれかを指すことができ、この場合、（ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、同時に独立に、または時間間隔内に別々に投与してもよく、特にこれらの時間間隔は組合せパートナーが協同（＝共同）効果を示すことを可能にする。独立した製剤または製剤、製品、もしくは組成物のパーツは、例えば、同時にまたは時差的に、すなわち、キットオブパーツの任意のパーツについて異なる時点で、および等しいまたは異なる時間間隔で、投与することができる。本開示の組合せ療法では、本開示による有用な化合物は、同じまたは異なる製造者によって製造および／または製剤化されてもよい。さらに、組合せパートナーは：（ｉ）組合せ製品を医師に発売する前に（例えば、セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤を含むキットの場合において）；（ｉｉ）医師自身により（または医師のガイダンスのもとに）投与のすぐ前に；（ｉｉｉ）例えば、本開示の化合物および他の治療剤の逐次的な投与の間の患者自身における、組合せ療法にしてもよい。一実施形態において、組合せの効果は、相乗的である。

本開示の組合せ（または医薬組成物）の治療上有効な用量は、対象の種、体重、年令および個別の条件、処置される障害または疾患またはその重篤度に依存し、標準の臨床技術によって決定することができる。加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、至適な用量範囲の同定を援助するために場合により用いられうる。用いられる正確な用量は、投与の経路および処置される状態の深刻度に依存する場合もあり、例えば、公開された臨床研究の観点で、従事者の判断および各対象の事情に従って決定することができる。一般に、満足な結果は、全身性に１５０ｍｇから７５０ｍｇの経口セリチニブの一日用量で得られると示される。ほとんどの場合において、セリチニブについての一日量は、３００ｍｇと７５０ｍｇの間であってよい。例えば、ゲフィチニブ一日量は、例えば、経口的に２５０ｍｇであってよい。エルロチニブは、特に、患者が非小細胞肺癌を有する場合において、各日１５０ｍｇの常用量に組み合わせることができる。いくつかの場合において、１００ｍｇエルロチニブを、各日与えることができる。エルロチニブ用量は、５０ｍｇステップで調整されてもよい。

例えば、セツキシマブは、体表面積１ｍ^２あたり４００ｍｇセツキシマブの初回量で週一回投与される。全ての引き続く週用量はそれぞれ、１ｍ^２あたり２５０ｍｇセツキシマブである。

例えば、アファチニブは、一日一回２０ｍｇから４０ｍｇの用量で投与することができる。
例えば、ニモツズマブは、一日に１５０ｍｇ／ｍ^２投与することができる。

用語「薬学的に許容される」は、妥当な利益／危険率に相応して、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答またはその他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織との接触に使用するために適切な化合物、材料、組成物および／または剤形を指す。

本開示の別の態様は、ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患、例えば、がんの処置のため、セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩が、ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩と組み合わせて投与される、薬として使用するためのセリチニブである。

用語「ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患」は、一方または両方のキナーゼの活性が、細胞、例えば、がんにおける、他の調節経路の活性の過剰発現、変異または相対的な欠如を含む、調節経路の異常な活性を導く疾患を指す。

略語
ＡＬＣＬ：未分化大細胞リンパ腫
ＡＬＫ：未分化リンパ腫キナーゼ
ＮＳＣＬＣ：非小細胞肺癌
ＥＧＦＲ：上皮増殖因子受容体
ＴＫＩ：チロシンキナーゼ阻害剤

以下の実施例は、本開示を例示し、特定の実施形態を提供するが、本開示の範囲を限定するものではない。

ＥＧＦＲリガンドは、セリチニブ処置に対してＨ２２２８細胞株を脱感作する
ＮＣＩ−Ｈ２２２８を、ＡＴＣＣから得た。その細胞株は、ＥＭＬ４−ＡＬＫ再編成を保有した。ＮＣＩ−Ｈ２２２８細胞を、１５％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ−１６４０（ＡＴＣＣカタログ番号３０−２００１）中で培養した。

Ｓｅｃｒｅｔｏｍｅスクリーニングを、以前に記載されたように行った（Lito P, Pratilas CA, et al. Cancer Cell 2012; 22: 668-82）。手短に言えば、２２０種の特有な分泌タンパク質を表す３１７種のｃＤＮＡ構築物を、個別にＨＥＫ２９３Ｔ細胞にリバーストランスフェクトし、４日間インキュベートして、上清中に分泌タンパク質を蓄積させた。上清を、アッセイ細胞、すなわちＮＣＩ−Ｈ２２２８細胞に移し、その後、セリチニブを終濃度０．５μΜで加えた。細胞増殖を、９６時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて測定した。条件培地の非存在下のＤＭＳＯでおよびセリチニブ単独で処置された細胞を、対照として使用した。

Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイを、Ｈ２２２８細胞株で行った。その細胞株は、腺癌；非小細胞肺癌に由来する。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイは、代謝的に活性な細胞の存在のシグナルとなるＡＴＰ存在の定量化に基づく、培養中の生存細胞の数を決定する細胞生存アッセイである。図１は、結果を示している。

「セリチニブ リガンド無し」は、セリチニブのみ（任意のリガンドの非存在）で処置した細胞を表し、細胞生存度におけるセリチニブの影響を表す。

「ＤＭＳＯ」は、ビヒクルが存在するが、いかなる化合物も存在しない基礎的な細胞生存度（対照レベル）を表し、全ての他のドットは、特定のリガンドの存在下でのセリチニブを表す。細胞生存度レベルが、低レベルの「セリチニブ リガンド無し」からＤＭＳＯ細胞生存度レベルに向かってシフトする場合、特定のリガンドが、ＡＬＫシグナル伝達の阻害に起因する生存度のロスを代償する経路を活性化できることを意味する。ＥＧＦＲおよびＥＲＢＢ３に対するリガンドは、セリチニブの阻害効果に明確に打ち勝ち、細胞がＤＭＳＯのみで処置された場合に観察されたレベルに向けて細胞生存度を後押しすることができた。ＥＧＦＲシグナル伝達は、ＡＬＫ阻害をバイパスすることができる。

Ｈ２２２８細胞株は、対象（例えば、患者）がＡＬＫ阻害剤で前処置されていないナイーブな状況の患者をよく表している。したがって、セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤を含む組合せ医薬が、ナイーブ患者においてすでに有効であることを実験は示している。

ＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１細胞の細胞増殖アッセイ
ＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１を、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌから得た（Friboulet L, Li N, et al. Cancer Discovery 2014;4:662-73）。これらの細胞株は、ＥＭＬ４−ＡＬＫ再編成を保有する。ＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１を、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ（ＡＴＣＣカタログ番号３０−２００２）中で培養した。

セリチニブの用量と細胞増殖におけるその効果の規模の間の用量反応相関を決定するために、１Ｋ ＭＧＨ０４９および４Ｋ ＭＧＨ０５１細胞を、３８４ウェルプレートの各ウェルにプレートし、処置前に２４時間増殖させた。次いで、細胞を、ＤＭＳＯまたはセリチニブで濃度４ｎＭから１μΜの範囲（３倍希釈）で処置した。６日後、細胞増殖を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存度アッセイを用いて測定した。パーセント阻害を、中央値ＤＭＳＯシグナルと比べて計算した。

図２は、ＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１細胞を指示された用量のセリチニブで６日処置した後の細胞増殖アッセイの結果を示す。ＭＧＨ０５１は、ＭＧＨ０４９よりもセリチニブ処置により感受性がある。ＭＧＨ０５１細胞におけるパーセント阻害は０．３μΜセリチニブで７０％であるが、ＭＧＨ０４９は２０％である。

セリチニブとＥＧＦＲ阻害剤の組合せは、細胞増殖を低減させる
１Ｋ ＭＧＨ０４９および４Ｋ ＭＧＨ０５１細胞を、３８４ウェルプレートの各ウェルにプレートし、次の日に０．５μΜセリチニブの非存在下または存在下で、ラパチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブおよび化合物Ａの用量を増大させて処置した。６日目の終わりに、細胞増殖の阻害を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて評価した。３つのレプリケートプレートを、各細胞株および薬物化合物セリチニブの有り無しについてセットした。次いで、代表的な用量反応曲線を、セリチニブの有り無しで、３つのレプリケートにわたり平均をとることによって計算した。増殖阻害値を、セリチニブの有り無しで、ゼロ用量の化合物で測定された阻害値に対して標準化した。

細胞株ＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１で行った実験は、それぞれ図３および図４に示される。細胞増殖を、異なる濃度のそれぞれのＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブまたは化合物Ａ）を単独で（グラフの上部ライン）またはそれぞれのＥＧＦＲ阻害剤と０．５μΜセリチニブの組合せ（グラフにおける下部ライン）を追加する間に観察した。図から、組合せが、細胞増殖を相乗的に低減させたことは明らかである。細胞株ＭＧＨ０４９は、セリチニブに対して耐性であったが、任意のＡＬＫ耐性変異を保有していない。

セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤の組合せがＡＬＫ耐性の状況（すなわち、細胞がセリチニブ単独の処置に対して耐性である場合）においてさえも有効であることが実験により示された。したがって、本明細書において提供される組合せは、患者がＡＬＫ阻害剤で以前に処置された場合（例えばクリゾチニブ処置後またはセリチニブ処置後）において、有用であろう。

それぞれセリチニブおよびゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブまたは化合物Ａの組合せで得られた有意義なデータは、特定的なものではないとしても、セリチニブと他のＥＧＦＲ阻害剤の組合せが最も可能性があり、また非常に有利でかつ価値があることを示した。

ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣ細胞株の処置は、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）の活性化と関連する
ＥＭＬ４−ＡＬＫ転座を保有している複数のＮＳＣＬＣ細胞株のＡＬＫおよびＨＥＲ３の活性化状態を、短期および長期培養の両方で評価した。４種のＡＬＫ陽性細胞株のセリチニブ（ＬＤＫ３７８）での長期処置が、ＨＥＲ３リン酸化の誘導を導くことが観察されており、ＨＥＲ３受容体の活性化を示している（図５）。加えて、ｐＨＥＲ３のレベルは、処置の持続時間に相関した（図５）。次に、様々な阻害剤を用いて、ＨＥＲ３の下流シグナル伝達の活性化およびセリチニブ誘導性ＨＥＲ３活性化のリプレッションを評価した。ＭＧＨ０５１におけるＡＫＴリン酸化の初期阻害後、セリチニブの８日間処置により、ＡＫＴリン酸化における著明なリバウンドがもたらされ、ＨＥＲ３のリン酸化の増加が付随していた（図６）。長期処置の最終日に、抗体Ａ（表１からのＭＯＲ１０７０３）、抗ＨＥＲ３抗体を付加することにより、ＨＥＲ３の活性化およびＡＫＴリン酸化におけるリバウンドが著明に抑制された（図６）。ＥＧＦＲ阻害剤エルロチニブおよびｐａｎ−ＨＥＲ阻害剤アファチニブも、ＡＫＴリン酸化におけるリバウンドを抑制でき（図６）、ＨＥＲ３によるＰＩ３Ｋ経路の再活性化がＥＧＦＲ依存的であることを示唆している。さらに、処置の最終日のエルロチニブおよびアファチニブの添加が、ＥＲＫリン酸化の阻害の増強を導いた（図６）。これらの結果は、ＨＥＲ３のフィードバック活性化がＡＬＫ阻害によって誘発されたことならびにＡＬＫおよびＨＥＲ３阻害剤を組み合わせることまたはＡＬＫおよびＥＧＦＲ阻害剤を組み合わせることの治療戦略に対する合理性が提供されたことを示唆した。

ＥＧＦＲ阻害はセリチニブによるＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣ細胞増殖の阻害を増強する
セリチニブ（ＬＤＫ３７８）とＥＧＦＲ阻害剤エルロチニブの組合せの抗増殖効果を評価するために、ＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１細胞を用いて細胞コロニー形成アッセイを適用した。細胞を、セリチニブ、エルロチニブまたは組合せに７日間曝露し、クリスタルバイオレットで染色した。図７に示されるように、セリチニブは、ＭＧＨ０５１の細胞増殖の阻害において部分的に有効であったが、ＭＧＨ０４９細胞における有効性は低かった。セリチニブおよびエルロチニブ組合せは、より大きな抗増殖効果を有し、セリチニブ単独よりもＭＧＨ０４９およびＭＧＨ０５１細胞を死滅させることにおいてより効果的であった（図７）。エルロチニブは単剤として細胞増殖における効果を有しておらず、これらの細胞株がＡＬＫ依存的であり、ＥＧＦＲシグナル伝達が生存経路として機能するかまたはセリチニブに対して耐性を付与することが示唆される（図７）。これらの結果は、ＡＬＫおよびＥＧＦＲ阻害の組合せが、セリチニブの抗腫瘍活性を増強するまたはＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣにおけるセリチニブ耐性を克服することができることを示唆する。

雌ＳＣＩＤベージュマウスにおけるＨ２２２８ ＮＳＣＬＣ異種移植片における、セリチニブ（ＬＤＫ３７８）単独ならびにセツキシマブおよび／または抗体Ａ（表１からのＭＯＲ１０７０３）との組合せの有効性
本実験において、Ｈ２２２８腫瘍を担持している雌ＳＣＩＤベージュマウスを使用した。開始時に、マウスは８から１２週齢であった。最初に、マウスの脇腹に、皮下注射によって４ｍｍ^３ Ｈ２２２８腫瘍断片を接種した。断片を移植する前にＭａｔｒｉｇｅｌに浸した。腫瘍が平均サイズ１００〜１５０ｍｍ^３に到達したときに、以下のスキームに従って処置を開始した。体重を最初の５日間毎日測定し、次いで終了まで隔週測定した。腫瘍を終了までキャリパーによって隔週測定した。セリチニブ（ＬＤＫ３７８）を経口的に投与し、セツキシマブおよび抗体Ａ（表１からのＡｂ Ａ；ＭＯＲ１０７０３）を腹腔内（ｉｐ）に投与した。化合物の投薬を、試験３２日目に終了した。この後、再増殖に関して観察期の間に腫瘍サイズをモニターした。

結果は、図８Ａおよび図８Ｂに示される。グラフ中の平均腫瘍体積データは、全ての群について試験の終了を経て完成していない。ある群が死亡または倫理的な屠殺により５０％を超える動物を喪失したら、これらの群における残りの動物についての平均腫瘍体積はもはやグラフ化しなかった。データは、抗体Ａまたはセツキシマブのいずれかの組合せが、ＬＤＫ３７８の有効性を有意に改善することを示した。

Claims (43)

1. （ｉ）セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む組合せ医薬。
2. 成分（ｉ）および（ｉｉ）を別々にまたは一緒に含む、請求項１に記載の組合せ医薬。
3. セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤が、同時に独立に、または時間間隔内に別々に投与される、薬として使用するための、請求項１または２に記載の組合せ医薬。
4. 時間間隔が、前記組合せパートナーが共同で活性であることを可能にする、請求項３に記載の組合せ医薬。
5. ＥＧＦＲ阻害剤が、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、ペリチニブ、ネラチニブ、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド、パニツムマブ、マツズマブ、ペルツズマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、イコチニブ、アファチニブおよびセツキシマブ、ならびに薬学的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
6. 前記ＥＧＦＲ阻害剤が、エルロチニブ、ゲフィチニブまたはセツキシマブであり、特にセツキシマブである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
7. ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置に共同で治療上有効である量を含む、請求項１から６のいずれかに記載の組合せ医薬。
8. 前記ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患が、がんである、請求項７に記載の組合せ医薬。
9. 前記ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患が、ＮＳＣＬＣまたはリンパ腫であり、特にＮＳＣＬＣである、請求項７に記載の組合せ医薬。
10. 薬として使用するための、請求項１から９のいずれかに記載の組合せ医薬。
11. がんの処置において使用するための、請求項１から９のいずれかに記載の組合せ医薬。
12. 前記がんが非小細胞肺癌である、請求項１１に記載の組合せ医薬。
13. ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の医薬の製造のための、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせたセリチニブの使用。
14. 前記疾患ががんである、請求項１３に記載の医薬の製造のための、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせたセリチニブの使用。
15. 前記がんが非小細胞肺癌である、請求項１４に記載の医薬の製造のための、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせたセリチニブの使用。
16. 前記ＥＧＦＲ阻害剤がゲフィチニブまたはエルロチニブである、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の医薬の製造のための、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせたセリチニブの使用。
17. ＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法であって、有効量の請求項１から６のいずれか一項に記載の（ｉ）および（ｉｉ）の組合せを、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
18. 前記疾患ががんである、請求項１７に記載のＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法。
19. 前記がんがＮＳＣＬＣである、請求項１８に記載のＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法。
20. 前記必要とする対象が温血動物、特にヒトである、請求項１７から１９のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法。
21. 前記（ｉ）および（ｉｉ）の組合せが薬学的に許容される担体を含む、請求項１７から２０のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／またはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法。
22. がんの処置のための同時のまたは別々の投与に有効な量のセリチニブまたは薬学的に許容されるその塩、およびＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物。
23. 前記がんが非小細胞肺癌である、請求項２２に記載の医薬組成物。
24. 有効量のセリチニブ、エルロチニブまたはセツキシマブを含む、請求項２２または２３に記載の医薬組成物。
25. 有効量のセリチニブ、ゲフィチニブまたはセツキシマブを含む、請求項２２から２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
26. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
27. セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩が、ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩と組み合わせて投与される、薬として使用するためのセリチニブ。
28. がんの処置のための、請求項２７に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
29. 前記がんが非小細胞肺癌である、請求項２８に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
30. 前記ＥＧＦＲ阻害剤がエルロチニブ、ゲフィチニブまたはセツキシマブである、請求項２７から２９に記載の組み合わせた薬として使用するためのセリチニブ。
31. 組合せ投与のための、キットオブパーツの形態での請求項１から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
32. セリチニブまたは薬学的に許容されるその塩および前記ＥＧＦＲ阻害剤または薬学的に許容されるその塩が、共同で、または同時に独立に、または時間間隔内に別々に投与される、請求項３１に記載の組合せ医薬。
33. 前記ＥＧＦＲ阻害剤がゲフィチニブである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から３０のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
34. 前記ＥＧＦＲ阻害剤がエルロチニブである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から３０のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
35. 前記ＥＧＦＲ阻害剤がセツキシマブである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から３０のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
36. 前記ＥＧＦＲ阻害剤が、配列番号４、配列番号１０、配列番号２２、配列番号２８、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７６、配列番号８２、配列番号９４、配列番号１００、配列番号１１２、配列番号１１８、配列番号１３０、配列番号１３６、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２０、配列番号２３８、配列番号２５６、配列番号２７４、配列番号２９２、配列番号３１０、配列番号３２８、配列番号３４６、および配列番号３６４からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその断片である、請求項１から４もしくは７から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、または請求項２２、２３もしくは２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から２９のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
37. 前記ＥＧＦＲ阻害剤が、配列番号１２８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２９のＣＤＲ２；配列番号１３０のＣＤＲ３；ならびに配列番号１３１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３２のＣＤＲ２；および配列番号１３３のＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその断片である、請求項１から４もしくは７から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、または請求項２２、２３もしくは２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から２９のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
38. 前記ＥＧＦＲ阻害剤が、配列番号１２８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２９のＣＤＲ２；配列番号１３０のＣＤＲ３；ならびに配列番号１３１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３２のＣＤＲ２；および配列番号１３３のＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその断片とセツキシマブの組合せである、請求項１から４もしくは７から１２のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、または請求項２２、２３もしくは２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から２９のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
39. 前記疾患がＥＧＦＲ ｗｔである、請求項７から１２もしくは３１から３８のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６もしくは３１から３８のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１もしくは３１から３８のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６もしくは３１から３８のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２８から３８のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
40. 前記疾患がＴ７９０Ｍ ＥＧＦＲを含む、請求項７から１２もしくは３１から３８のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６もしくは３１から３８のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１もしくは３１から３８のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６もしくは３１から３８のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２８から３８のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
41. セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤がＡＬＫナイーブ患者に投与される、請求項３から１２もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６もしくは３１から３９のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１もしくは３１から４０のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から４０のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
42. セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤がＡＬＫ阻害剤で前処置されている患者に投与される、請求項３から１２もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１もしくは３１から４０のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から４０のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。
43. セリチニブおよびＥＧＦＲ阻害剤がセリチニブで前処置されている患者に投与される、請求項３から１２もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１３から１６もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の使用、請求項１７から２１もしくは３１から４０のいずれか一項に記載のＡＬＫおよび／もしくはＥＧＦＲ媒介疾患の処置のための方法、請求項２２から２６もしくは３１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２７から４０のいずれか一項に記載の薬として使用するためのセリチニブ。