JP2017526616A - ハイスループットスクリーニングにおいて使用するのに適した新しい二重特異性フォーマット - Google Patents
ハイスループットスクリーニングにおいて使用するのに適した新しい二重特異性フォーマット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017526616A JP2017526616A JP2016569954A JP2016569954A JP2017526616A JP 2017526616 A JP2017526616 A JP 2017526616A JP 2016569954 A JP2016569954 A JP 2016569954A JP 2016569954 A JP2016569954 A JP 2016569954A JP 2017526616 A JP2017526616 A JP 2017526616A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fab
- antigen
- antibody
- bispecific
- peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 title abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 142
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 claims abstract description 44
- 230000008827 biological function Effects 0.000 claims abstract description 35
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 417
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 378
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 378
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 287
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 277
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 276
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 233
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 148
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 148
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 131
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 125
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 93
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 81
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 69
- 101100107610 Arabidopsis thaliana ABCF4 gene Proteins 0.000 claims description 48
- 101100068078 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GCN4 gene Proteins 0.000 claims description 48
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 40
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 34
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 claims description 34
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 29
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 29
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims description 18
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 18
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 17
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 claims description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 claims description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims description 5
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 claims description 4
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 claims description 4
- 102000010648 Natural Killer Cell Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010077854 Natural Killer Cell Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims description 4
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 claims description 4
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 4
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 claims description 4
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 claims description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims description 4
- 102000035025 signaling receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108091005475 signaling receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 claims description 4
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 3
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 49
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 27
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract description 7
- 230000008878 coupling Effects 0.000 abstract description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 193
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 76
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 66
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 61
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 61
- 230000006870 function Effects 0.000 description 58
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 50
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 49
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 47
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 34
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 32
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 29
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 28
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 25
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 24
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 20
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 19
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 19
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 19
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 16
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 15
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 15
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 14
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 14
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 14
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 13
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- 101000835093 Homo sapiens Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 12
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 11
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 9
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 9
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 9
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 description 8
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 description 8
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 8
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 8
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 8
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 7
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 6
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 244000309466 calf Species 0.000 description 6
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 6
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 6
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 6
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 5
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- -1 for example Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 4
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 4
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 4
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 4
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 4
- 108010056751 Phospholipase C gamma Proteins 0.000 description 4
- 102000004422 Phospholipase C gamma Human genes 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 4
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 3
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150078861 fos gene Proteins 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000027405 negative regulation of phosphorylation Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000002702 ribosome display Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 3
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 2
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 2
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 2
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 101710099705 Anti-lipopolysaccharide factor Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 102100035634 B-cell linker protein Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010056740 Genital discharge Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000803266 Homo sapiens B-cell linker protein Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010025598 Malignant hydatidiform mole Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000027530 Meniere disease Diseases 0.000 description 1
- 241001436793 Meru Species 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229940121849 Mitotic inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100120533 Mus musculus Fos gene Proteins 0.000 description 1
- 101100180406 Mus musculus Jun gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 101710117971 Peptide Y Proteins 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101100540718 Rattus norvegicus Washc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- GIIZNNXWQWCKIB-UHFFFAOYSA-N Serevent Chemical compound C1=C(O)C(CO)=CC(C(O)CNCCCCCCOCCCCC=2C=CC=CC=2)=C1 GIIZNNXWQWCKIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100174184 Serratia marcescens fosA gene Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000012886 Vertigo Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000007488 abnormal function Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N albuterol Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000011190 asparagine deamidation Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940124748 beta 2 agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000003783 cell cycle assay Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010293 colony formation assay Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 238000012926 crystallographic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000010228 ex vivo assay Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229960000289 fluticasone propionate Drugs 0.000 description 1
- WMWTYOKRWGGJOA-CENSZEJFSA-N fluticasone propionate Chemical compound C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@]1(F)[C@@H]2[C@@H]2C[C@@H](C)[C@@](C(=O)SCF)(OC(=O)CC)[C@@]2(C)C[C@@H]1O WMWTYOKRWGGJOA-CENSZEJFSA-N 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 229960002848 formoterol Drugs 0.000 description 1
- BPZSYCZIITTYBL-UHFFFAOYSA-N formoterol Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(NC=O)=C1 BPZSYCZIITTYBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 208000020694 gallbladder disease Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010820 immunofluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000023589 ischemic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000010232 migration assay Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N piperazine-2,5-dione Chemical compound O=C1CNC(=O)CN1 BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008824 placental choriocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011809 primate model Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 229960002052 salbutamol Drugs 0.000 description 1
- 229960004017 salmeterol Drugs 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical group 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000010809 targeting technique Methods 0.000 description 1
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 101150117224 washc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/73—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing coiled-coiled motif (leucine zippers)
Abstract
Description
1)細胞上の受容体を架橋結合する、
2)細胞媒介効果を誘導する、
3)サイトカインを細胞に局在化してシグナル伝達を調節する又はサイトカイン機能を局所的に遮断する、
4)複数のエピトープに同時に結合して、単一のモノクローナル抗体も、実際、連結していない抗体の混合物(「ポリ−モノクローナル」)も示すことができない「新しい活性」を生み出し、機能又は特異性を増加させる、
などの新規の生物学の利用を促進する。
A−Xは第1の融合タンパク質であり、
Y−Bは第2の融合タンパク質であり、
X:Yはヘテロ二量体繋(heterodimeric-tether)であり、
:はXとYの間の結合相互作用であり、
Aは、Fab又はFab’断片から選択される、二重特異性タンパク質複合体の第1のタンパク質成分であり、
Bは、Fab又はFab’断片から選択される、二重特異性タンパク質複合体の第2のタンパク質成分であり、
Xは、抗原若しくは抗体又はその結合断片から独立して選択される、結合対の第1の結合パートナーであり、
Yは、抗原若しくは抗体又はその結合断片から独立して選択される、結合対の第2の結合パートナーであり、
ただし、Xが抗原である場合、Yは、Xにより表される抗原に特異的である抗体又はその結合断片であり、Yが抗原である場合、Xは、Yにより表される抗原に特異的である抗体又はその結合断片である、上記二重特異性タンパク質複合体が提供される。
X:Yはヘテロ二量体繋であり、例えば、X及びYがホモ二量体を形成するには不適切であり、
A及びBはそれぞれX及びYとの融合タンパク質の形態である二重特異性体の成分であり、
(i)少なくとも1つのヘテロ二量体的に繋がれた二重特異性タンパク質を含むマルチプレックスの一部又はすべてについての機能アッセイにおいて活性を試験するステップと、
(ii)機能アッセイからの読み出し情報を解析して、二重特異性タンパク質複合体における相乗的生物学的機能を同定するステップと
を含む上記方法を考案した。
A−Xは第1の融合タンパク質であり、
Y−Bは第2の融合タンパク質であり、
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
Aは二重特異性体の第1のタンパク質成分であり、
Bは二重特異性体の第2のタンパク質成分であり、
Xは結合対の第1の結合パートナーであり、
Yは結合対の第2の結合パートナーであり、
:はXとYの間の相互作用(例えば、結合相互作用)であり、特に、相互作用が複合体を形成し融合タンパク質を複合体化した形態で保持するのに十分である、上記二重特異性タンパク質複合体フォーマットを用いる。
1.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6066);
2.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6078);
3.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6079);
4.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6080);
5.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6082);
6.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6067);
7.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6068);
8.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6070);
9.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6071);
10.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6073);
11.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6075);
12.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6076);
13.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6077);
14.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6069);
15.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6072);
16.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6074);
17.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(VR6081);
18.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(TSUP−24117);
19.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(TSUP−24432);
20.モックの上澄み1;
21.モックの上澄み2;
22.抗原2Fab−Y(VR4447)+抗原3Fab−X(4126)精製。
少なくとも1つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体及び少なくとも1つの関連する生物学的コンパレーターを同じ若しくは異なるフォーマットで作製するよう組み合わされた少なくとも2つの成分融合タンパク質(A−X及びY−B)、又は
場合によって少なくとも1つの関連する生物学的コンパレーターを同じ若しくは異なるフォーマットで有する少なくとも2つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体
を含む試験のための実体の集団である。
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
:はXとYの間の結合相互作用であり、
A及びBはそれぞれX及びYとの融合タンパク質の形態の二重特異性のタンパク質成分であり、
前記方法は、
(i)少なくとも1つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体を含むマルチプレックスの一部又はすべてについて機能アッセイにおいて活性を試験するステップと、
(ii)機能アッセイからの読み出し情報(単数又は複数)を解析して、ヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的生物学的機能を同定する又は検出するステップと
を含み、
Yは抗原でありXはYに特異的である抗体若しくはその結合断片である、又はXは抗原でありYはXに特異的である抗体若しくはその結合断片である、
上記方法を提供する。
・二重特異性体が用いられるまでは個々の融合タンパク質成分を用いても観測されない(二重特異性フォーマット中には存在しない前記抗原に対する抗体の組合せを用いて観察される活性を含むことがあるが、特に、2つの結合ドメインが二重特異性フォーマットにおいて連結されているときにのみ観察される活性のことである)
生物活性若しくは生物活性のレベル又は生物学的機能若しくは生物活性に対する効果、又は
・本開示の二重特異性タンパク質複合体の第1と第2のタンパク質が個別に用いられるときに観察される活性と比べて高い若しくは低い活性、例えば、二重特異性形態でしか観察されない活性
のことである。
− フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン(芳香族側鎖を有するアミノ酸)
− リシン、アルギニン及びヒスチジン(塩基性側鎖を有するアミノ酸)
− アスパラギン酸及びグルタミン酸(酸性側鎖を有するアミノ酸)
− アスパラギン及びグルタミン(アミド側鎖を有するアミノ酸);並びに
− システイン及びメチオニン(硫黄含有側鎖を有するアミノ酸)
が含まれるがこれらに限定されない。
(a)結合対の第1の結合パートナー(X)に付加されている第1のタンパク質(A)を含む、第1の融合タンパク質(A−X)を作製するステップと、
(b)結合対の第2の結合パートナー(Y)に付加されている第2のタンパク質(B)を含む、第2の融合タンパク質(B−Y)を作製するステップと、
(c)ステップa)及びb)において調製された第1(A−X)と第2(B−Y)の融合タンパク質を一緒に混合するステップと
を含む上記方法が提供される。
(a)結合対の第1の結合パートナー(X)に付加されている第1のタンパク質(A)を含む、第1の融合タンパク質(A−X)を発現させるステップと、
(b)結合対の第2の結合パートナー(Y)に付加されている第2のタンパク質(B)を含む、第2の融合タンパク質(B−Y)を発現させるステップと、
を含み、
融合タンパク質A−X及びB−Yが同じ宿主細胞又は異なる宿主細胞から発現される上記方法が提供される。
a)結合対の第1の結合パートナー(X)に付加されている第1の抗体又は抗体断片(A)を含む1つ又は複数の融合タンパク質(A−X)、及び
b)結合対の第2の結合パートナー(Y)に付加されている第2の抗体又は抗体断片(B)を含む1つ又は複数の融合タンパク質(B−Y)を含むキットであって、後者が第1の結合パートナーに対して特異的であり、
例えば、第1の結合パートナー(X)がペプチド又はポリペプチドであり第2の結合パートナー(Y)がそれに特異的な抗体又は抗体断片であり、
Yである第2の結合パートナーが第1の結合パートナーXに特異的であり、第2の結合パートナーが、例えば、それに特異的な抗体又は抗体断片であり、2つの結合パートナーの特異的相互作用(結合相互作用などの)が、a)とb)由来の2つの融合タンパク質を物理的に一つにまとめて二重特異性タンパク質複合体を形成するヘテロ二量体繋を形成し、
融合タンパク質(単数又は複数)が複合体化された又は非複合体形態である
上記キットにまでも及ぶ。
1.式A−X:Y−Bのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出する方法であって、
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
A及びBはそれぞれX及びYとの融合タンパク質の形態である二重特異性体の成分であり、
(i)少なくとも1つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質を含むマルチプレックスの一部又は全てについての機能アッセイにおいて活性を試験するステップと、
(ii)機能アッセイからの読み出し情報を解析して、二重特異性タンパク質複合体における相乗的生物学的機能を同定するステップと
を含む上記方法。
2.項1に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、ヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体のマルチプレックスを形成する第1のステップをさらに含む上記方法。
3.項1又は2に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、Xがペプチド又はタンパク質であり、YがXに特異的なペプチド又はタンパク質結合パートナーである、上記方法。
4.項3に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、ヘテロ二量体繋の結合親和性が5nM又はそれよりも強い、上記方法。
5.項4に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、ヘテロ二量体繋の結合親和性が900pM又はそれよりも強い、例えば800、700、600、500、400又は300pMなどである、上記方法。
6.項3に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、Xが抗体又はその結合断片である、上記方法。
7.項6に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、XがFab、Fab’、単鎖Fv、及びVHHなどの単一ドメイン抗体を含む群から選択される抗体断片である、上記方法。
8.項7に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、Xが単鎖Fvである、上記方法。
9.項8に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、単鎖FvがペプチドGCN4に特異的である、上記方法。
10.項9に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、単鎖Fvが52SR4である、上記方法。
11.項3から10のいずれか一項に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、Yがペプチドである、上記方法。
12.項11に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、ペプチドが5から25アミノ酸長である、上記方法。
13.項1から12のいずれか一項に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、Aが抗体又はその結合断片である、上記方法。
14.項1から13のいずれか一項に従ったヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出するための方法であって、Bが抗体又はその結合断片である、上記方法。
15.マルチプレックスが、少なくとも1つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質に対する少なくとも1つの生物学的コンパレーターを含む、先行する項のいずれか一項に従った方法。
16.複数の二重特異性タンパク質複合体が同時に試験される、項1から15のいずれか一項に従った方法。
17.式A−X:Y−Bのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的機能を検出する方法であって、
A−Xは第1の融合タンパク質であり、
Y−Bは第2の融合タンパク質であり、
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
Aは二重特異性体の第1のタンパク質成分であり、
Bは二重特異性体の第2のタンパク質成分であり、
Xは結合対の第1の結合パートナーであり、
Yは結合対の第2の結合パートナーであり、
:はXとYの間の相互作用(結合相互作用などの)である、上記二重特異性タンパク質複合体。
18.XとYの間の結合相互作用が低い解離定数を有する、項17に従った二重特異性タンパク質複合体。
19.解離定数が1〜9×10−3s−1又はそれよりも少ない、例えば1〜9×10−3s−1、1〜9×10−4s−1、1〜9×10−5s−1、1〜9×10−6s−1又は1〜9×10−7s−1の範囲である、項18に従った二重特異性タンパク質複合体。
20.解離定数が1×10−4s−1又はそれよりも少ない、例えば1×10−5s−1、1×10−6s−1又は1×10−7s−1である、項19に従った二重特異性タンパク質複合体。
21.互いに対するXとYの親和性が5nM又はそれよりも強く、900pM又はそれよりも強い、例えば800、700、600、500、400又は300pMなどである、項17から20のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
22.Yがペプチド又はタンパク質である、項17から21のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
23.ペプチドがGCN4である、項22に従った二重特異性タンパク質複合体。
24.Xが抗体又は抗体断片である、項16から23のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
25.抗体断片がFab、Fab’、単鎖可変断片(scFv)及びVHHなどの単一ドメイン抗体(sdAb)からなる群から選択される、項24に従った二重特異性タンパク質複合体。
26.抗体断片がscFvである、項25に従った二重特異性タンパク質複合体。
27.scFvが52SR4である、項26に従った二重特異性タンパク質複合体。
28.X又はYがペプチドであり、ペプチドがE5B9と呼ばれるペプチドエピトープ以外である、項17から27のいずれか一項に従った二重特異性複合体。
29.結合パートナー対が、
(i)Xはグルタチオン(GSH)でありYはグルタチオン−S−トランスフェラーゼ(GST)である、
(ii)XはFosでありYはJunである、
(iii)XはFLAGでありYは抗FLAG抗体又はその断片である、
(iv)XはHisでありYは抗Hisである、
(v)Xはマルトース結合タンパク質でありYは抗マルトース結合タンパク質又はその断片である
から選択される、項17に従った二重特異性タンパク質複合体。
30.Aが、抗体又は抗体断片などの、抗体、抗体断片、リガンド、受容体、阻害剤及び酵素からなる群から選択される、項17から29のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
31.Bが、抗体又は抗体断片などの、抗体、抗体断片、リガンド、受容体、阻害剤及び酵素からなる群から選択される、項17から30のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
32.A及び/又はBが細胞表面受容体に対して特異的である抗体又は抗体断片である、項30又は31のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
33.A及び/又はBがサイトカイン又はケモカインに対して特異的である抗体又は抗体断片である、項29から30のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
34.Xが第1の抗体又は抗体断片の重又は軽鎖のC末端に付加されており、例えば、Xが第1の抗体又は抗体結合断片の重鎖のC末端に付加されている、項30から34のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
35.Yが第2の抗体又は抗体結合断片の重又は軽鎖のC末端に付加されており、例えば、Yが第2の抗体又は抗体断片の重鎖のC末端に付加されている、項31から35のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
36.Aが第1の抗原に特異的な抗体又は抗体結合断片であり、Bが第2の抗原に特異的な抗体又は抗体断片であり、第1と第2の抗原が異なっている、項17から36のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体。
37.項17から37のいずれか一項に従った1つ又は複数の二重特異性タンパク質複合体を含む組成物。
38.融合タンパク質の少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、又は少なくとも95%が二重特異性タンパク質複合体形態である、項38に従った組成物。
39.融合タンパク質の少なくとも60%が二重特異性タンパク質複合体形態である、項39に従った組成物。
40.項19から37のいずれか一項に従った少なくとも2つの二重特異性タンパク質複合体を含み、二重特異性タンパク質複合体が異なる特異性を有する、二重特異性タンパク質複合体のマルチプレックス。
41.二重特異性タンパク質複合体が溶液中にある又は固体基材表面に固定されている、項41に従ったマルチプレックス。
42.マルチプレックスがアレイ又は格子の形態であり、例えば、96ウェルプレート又は384ウェルプレートなどのマイクロプレート中にある、項42に従ったマルチプレックス。
43.二重特異性タンパク質複合体がビーズにコンジュゲートされている、項41から43のいずれか一項に従ったマルチプレックス。
44.項1から37のいずれか一項に定義されている融合タンパク質A−X又はB−Y。
45.項1から37のいずれか一項に定義されている2つ又はそれよりも多い融合タンパク質を含むライブラリー。
46.項1から37のいずれか一項に定義されている融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列。
47.項47に従ったヌクレオチド配列を含むベクター。
48.治療において使用するための、項17から37のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体又は項38から40のいずれか一項に従った組成物。
49.項7から36のいずれか一項に従った二重特異性タンパク質複合体又は項37から39のいずれか一項に従った組成物の投与を含む、患者を処置する方法。
50.a)1つ又は複数の融合タンパク質A−X、及び
b)1つ又は複数の融合タンパク質B−Y
を含むキットであって、
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
Aは二重特異性体の第1のタンパク質成分であり、
Bは二重特異性体の第2のタンパク質であり、
Xは、ペプチド又はタンパク質などの結合対の第1の結合パートナーであり、
Yは、結合対の第2の結合パートナー、例えば、Xに特異的なペプチド又はタンパク質であり、
XとYの間の特異的結合相互作用がヘテロ二量体繋を形成し、2つの融合物を物理的に持ちより二重特異性タンパク質複合体を形成するように、X及びYはホモ二量体を形成することができず、
キット中の融合タンパク質(単数又は複数)は複合体化された又は非複合体形態である、上記キット。
51.使用するための説明書をさらに含む、項51に従ったキット。
52.1つ又は複数の機能アッセイを実施するための1つ又は複数の試薬をさらに含む、項50又は51に従ったキット。
1.Ribosome display efficiently selects and evolves high-affinity antibodies in vitro from immune libraries. Hanes J, Jermutus L, Weber-Bornhauser S, Bosshard HR, Pluckthun A. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 14130-14135
2.Directed in Vitro Evolution and Crystallographic Analysis of a Peptide-binding Single Chain Antibody Fragment (scFv) with Low Picomolar Affinity. Zhand C, Spinelli S, Luginbuhl B, Amstutz P, Cambillau C, Pluckthun A. (2004) J. Biol. Chem. 279, 18870-18877
3.Antigen recognition by conformational selection. Berger C, Weber-Bornhauser S, Eggenberger Y, Hanes J, Pluckthun A, Bosshard H. R. (1999) F.E.B.S. Letters 450, 149-153
一般方法1:血小板アフェレーシス円錐体由来のヒトPBMCを凍結アリコートとして預けた。アッセイを実施するのに先立って、細胞は解凍し、DMEM(Life Technologies)中で洗浄し、37℃、5%CO2環境に順応させた。
本開示の二重特異性抗体複合体FabB−GCN4(7P14P):52SR4−FabAの構築
図2及び4は本開示の代表的な二重特異性抗体複合体を示している。二重特異性抗体複合体は第1と第2の融合タンパク質で構成されている。
2つの標的抗原に同時に共結合することが可能な非共有結合二重特異性抗体を形成するscFv:ペプチド相互作用のフローサイトメトリー実証
図5は、scFv:ペプチド結合相互作用を使用して形成される2つの異なる二重特異性抗体複合体の抗原特異性を実証するフローサイトメトリー実験の結果を示している。
1.抗抗原5Fab−scFv(52SR4);及び
2.抗抗原6Fab−ペプチド(GCN4)
を使用して構築した。
1.抗抗原5Fab−ペプチド(GCN4);及び
2.抗抗原6Fab−scFv(52SR4)
を使用して構築した。
1.抗抗原5Fab:GCN4;及び
2.抗抗原6Fab:GCN4
から作製した。
scFv:ペプチド相互作用のビアコア実証
図6は、scFv:ペプチド(すなわち、52SR4:GCN4)相互作用の親和性を実証する表面プラズモン共鳴トレースを示している。表面プラズモン共鳴はビアコア3000(GE Healthcare)を使用して実施した。実験はすべて25℃で実施した。ストレプトアビジン(社内で作製)はアミンカップリング化学反応を介してCM5 Sensor Chip(GE Healthcare)上に固定し、最終レベルはおおよそ1750応答単位であった。HBS−N緩衝液(10mM HEPES pH7.4、0.15M NaCl;GE Healthcare)は、固定化及びペプチド捕捉のためのランニング緩衝液として使用した。HBS−N中のビオチン−GCN4ペプチドの5μl注射液(10nM、M.W.4360)を使用して、固定化されたストレプトアビジン上でのおおよそ6RUの捕捉を達成した。ランニング緩衝液は、抗GCN4(52SR4)scFv結合動態学の測定のためにHBS−EP+緩衝液(10mM HEPES pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.05%(v/v)界面活性剤P20;GE Healthcare)に切り替えた。30nMからのFab−scFv(社内で作製)の3倍連続希釈、又はHBS−EP+緩衝液対照は、流速30μl/分で固定化GCN4ペプチド上に注入した(3分会合、15分解離)。表面は、2Mのグアニジン−HClの2回の連続60秒注入により流速10μl/分でそれぞれの注入後に再生した。標準手順に続いて、ダブル参照バックグランド減算結合曲線(Double referenced background subtracted binding curves)を3000 BIAEvalソフトウェア(バージョン4.1)を使用して解析した。動態学パラメータは、1対1結合モデルアルゴリズムをフィットさせることから決定した。データは、scFvがペプチドに対して516pMの親和性を有することを示している。
機能アッセイのためのFab−A(Fab−scFv「A−X」)及びFab−B(Fab−ペプチド[B−Y])の作製
クローニング戦略:抗体可変領域DNAはPCR又は遺伝子合成隣接制限酵素部位DNA配列により作製した。これらの部位は可変重鎖ではHindIII及びXholであり、可変軽鎖ではHindIII及びBsiWIであった。これにより重可変領域は2つの重鎖ベクター(FabB−Yを備えたpNAFH及びFabA−Xを備えたpNAFH)へのライゲーションを受け入れやすくなる。なぜならば、ベクターが相補的制限部位を有するからである。これにより、可変領域はマウス定常領域及びペプチドY(GCN4)又はscFv X(52SR4)の上流(又は5’)にライゲートされ、全リーディングフレームが作製される。軽鎖は、再び同じ相補的制限部位を使用する標準社内マウス定常カッパベクター(pMmCK又はpMmCK S171C)にクローニングした。pMmCK S171Cベクターは可変領域がウサギから単離された場合に使用する。クローニング事象は、全オープンリーディングフレームに隣接するプライマーを使用する配列決定により確認した。
トランスフェクトされた細胞は、2mM glutamx及び抗生物質有糸***阻害剤(100×)溶液(500中1)で強化したProCHO5培養液を含有する1×3Lエルレンマイヤーフラスコに直接移し、細胞は37℃、5%CO2及び140rpmに設定したKuhner振盪インキュベーター器で振盪しながら培養した。栄養補助剤2g/LのASF(味の素)をトランスフェクションの24時間後に添加し、さらに13日間の培養のために温度を32℃まで下げた。4日目、3mMの酪酸ナトリウム(n−酪酸ナトリウム塩、Sigma B−5887)を培養物に添加した。
Aktシグナル伝達の阻害に基づく(B細胞活性化の尺度として)機能的二価及び二重特異性抗原標的組合せを選択するためのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体フォーマットにおけるFab−A(Fab−scFv「A−X」)及びFab−B(Fab−ペプチド[B−Y])の使用
ヒトPBMCを一般方法1に従って調製した。この期間中、二重特異性又は二価抗体の格子は、10%仔牛血清及び2mMグルタミンを含有するDMEMで細胞表面タンパク質抗原3、抗原1、抗原4及び抗原2に対する種々の抗原特異性を有する等モル(200nM)量のFab’−A(Fab−scFv)及びFab’−B(Fab−ペプチド)を希釈することにより作製した。この格子は表4に示されている。
XはscFv(52SR4)でありYはペプチド(GCN4)である。
XはscFv(52SR4)でありYはペプチド(GCN4)である。
PLCg2シグナル伝達の阻害に基づく(B細胞活性化の尺度として)機能的二価及び二重特異性抗原標的組合せを選択するためのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体フォーマットの使用
ヒトPBMCを一般方法1に従って調製した。この期間中、二重特異性又は二価抗体の格子は、10%仔牛血清及び2mMグルタミンを含有するDMEMで細胞表面タンパク質抗原3、抗原1、抗原4及び抗原2に対する抗原特異性を有する等モル(200nM)量のFab’−A(Fab−scFv[A−X])及びFab’−B(Fab−ペプチド[B−Y])を希釈することにより作製した。この格子は表6に示している。
XはscFvでありYはペプチドである。
CD86発現の阻害に基づく(B細胞活性化の尺度として)機能的二価及び二重特異性抗原標的組合せを選択するためのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体フォーマットの使用
ヒトPBMCを一般方法1に従って調製した。この期間中、二重特異性又は二価抗体の格子は、10%仔牛血清及び2mMグルタミンを含有するDMEMで細胞表面タンパク質抗原3、抗原1、抗原4及び抗原2に対する抗原特異性を有する等モル(200nM)量のFab’−X(Fab−scFv)及びFab’−Y(Fab−ペプチド)を希釈することにより作製した。この格子は表7に示している。
XはscFv(52SR4)でありYはペプチド(GCN4)である。
抗原1(VR4247)に対するFabと抗原2(VR4246)に対するFabの阻害効果は抗体が二重特異性配向に配置された場合のみ再現することができる
ヒトPBMCを一般方法1に従って調製した。この期間中、抗体の二重特異性、二価又は混合物の組合せは、10%仔牛血清及び2mMグルタミンを含有するDMEMで細胞表面タンパク質抗原1及び抗原2に対する抗原特異性を有する等モル(200nM)量のFab’A−X(Fab−scFv)及び/又はFab’B−Y(Fab−ペプチド)を希釈することにより作製した。さらに、単一Fab対照(Fab’−X及びFab’−Y)も加えた。これらの組合せは表8に示している。
XはscFv(52SR4)でありYはペプチド(GCN4)である。
抗抗原3(VR0982)及び抗抗原2(VR4246)の阻害効果は抗体が二重特異性配向に配置された場合のみ再現することができる
ヒトPBMCを一般方法1に従って調製した。この期間中、抗体の二重特異性、二価又は混合物の組合せは、10%仔牛血清及び2mMグルタミンを含有するDMEMで細胞表面タンパク質抗原1及び抗原2に対する抗原特異性を有する等モル(200nM)量のFab’−X(Fab−scFv)及び/又はFab’−Y(Fab−ペプチド)を希釈することにより作製した。これらの組合せは表9に示している。
XはscFv(52SR4)でありYはペプチド(GCN4)である。
抗抗原4及び抗抗原2の阻害効果は抗体が二重特異性配向に配置された場合のみ再現することができる
ヒトPBMCを一般方法1に従って調製した。この期間中、抗体の二重特異性、二価又は混合物の組合せは、10%仔牛血清及び2mMグルタミンを含有するDMEMで細胞表面タンパク質抗原4及び抗原2に対する抗原特異性を有する等モル(200nM)量のFab’A−X(Fab−scFv)及び/又はFab’B−Y(Fab−ペプチド)を希釈することにより作製した。これらの組合せは表10に示している。
XはscFv(52SR4)でありYはペプチド(GCN4)である。
二重特異性複合体特徴付け
機能的スクリーニング試薬の精製:機能的スクリーニングフォーマットFab−X(Fab−scFv−His)及びFab−Y(Fab−ペプチド−His)を標準CHO発現後以下の通りに精製した。浄化した細胞培養上澄みは1Lのステリカップを使用して0.22μm無菌濾過した。pHを測定し必要な場合にはpH7.4に調整した。調製された上澄みは、10mMのリン酸ナトリウム、0.5M NaCl、pH7.4に平衡化された5ml HisTrapニッケルエクセル(GE Healthcare)カラム上に5ml/分で充填した。カラムは15mMイミダゾール、10mMリン酸ナトリウム、0.5M NaCl、pH7.4で洗浄し、その後、250mMイミダゾール、10mMリン酸ナトリウム、0.5M NaCl、pH7.4で溶出した。溶出に続いて280nmでの吸光度及び溶出ピークを収集した。ピーク溶出液はTSKgel G3000SWXL上サイズ排除クロマトグラフィーにより分析され;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させ、280nmの吸光度により検出した。十分な純度の試料は、10kDa分子量カットオフ膜付きのAmicon Ultra−15濃縮器を使用して>1m/mlまで濃縮し、PBS pH7.4(Sigma Aldrich Chemicals)中に透析濾過し、スイングアウトローターにおいて4000×gで遠心分離した。生成物品質が十分でない場合は、ニッケルカラム溶出液を濃縮し、PBS、pH7.4(Sigma Aldrich Chemicals)で平衡化されたXK16/60又はXK16/60 Superdex200(GE Healthcare)カラムのいずれかに適用した。カラムは、それぞれ1ml/分又は2.6ml/分で均一濃度勾配のPBS pH7.4(Sigma Aldrich Chemicals)を用いて展開させた。画分を収集し、TSKgel G3000SWXL上サイズ排除クロマトグラフィーにより分析され;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させ、280nmの吸光度により検出した。選択した画分はプールし、10kDa分子量カットオフ膜付きのAmicon Ultra−15濃縮器を使用して>1mg/mlまで濃縮し、スイングアウトローターにおいて4000×gで遠心分離した。
実験1
精製したFab−X(VR4247)及び精製したFab−Y(VR4248)を1対1モル比で混合し、全タンパク質濃度は500μg/mlにして、環境温度で一晩インキュベートした。対照は、混合している場合と同じ濃度の混合物の個々の部分からなっていた。100μlの試料及びそれぞれの対照をTSKgel G3000SWXL上に注入し;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させた。検出は280nmの吸光度によった(図18参照)。
精製したFab−X(VR4130)とFab−Y(VR4131)を1対1モル比で混合し、全タンパク質濃度は500μg/mlにした。次に、この混合物のアリコートは、濃度50μg/mlと5μg/mlまでPBS pH7.4で希釈した。500μg/mlの混合物に混合している場合と同じ濃度の混合物の個々の部分からなる対照も設定した。混合物及び対照はすべて環境温度で一晩インキュベートした。100μlのすべての試料及び対照をTSKgel G3000SWXL上に注入し;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させた。検出は214nmの吸光度によった(図19、図20及び表11参照)。
新規の二重特異性抗体標的を同定するためのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたタンパク質複合体の大きなパネルの格子スクリーニング
序論:前の例における二重特異性フォーマット及びスクリーニング法が首尾よく確証されたことを受けて、スクリーニングを多数の抗原対にまで広げた。B細胞上で発現される23の異なる抗原に対する抗体可変(V)領域対のパネルを作製した。Fab−Kd−Fab[すなわち、A−X:Y−B A及びBはFab断片]フォーマットを使用して、315の異なる抗原対組合せのそれぞれの複数のV領域組合せを表すヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたタンパク質複合体の格子を形成した。これらの組合せは、二重特異性抗体を用いた介入治療のための新規の標的対を選択するため、ハイスループットフローサイトメトリーアッセイにおいてBCR(B細胞受容体)シグナル伝達を調節するその能力についてスクリーニングした。
Expi293細胞はExpi293(商標)発現培養液において、最終濃度0.5×106生細胞/mLまでルーチン的に継代し、軌道振盪インキュベーター(Multitron、Infors HT)において120rpmで8%CO2及び37℃でインキュベートした。
ドナーPBMCを37℃に設定した水浴を使用して急速解凍し、50mlFalconチューブに慎重に移した。次に、PBMCは、浸透圧ショックを最小化するためアッセイ培養液で5mlまで液滴で希釈した。次に、細胞は20mlまで慎重に希釈し、その後最終培養液希釈液を添加して、容積を50mlにした。次に、細胞は500gで5分間回転させ、その後上澄みを取り除いて細胞を1ml培養液に再懸濁した。次に、細胞は計数し1.66×106細胞/mlまで希釈し、その後ウェル当たり30μlをV字型底TCプレートに分注し、最終アッセイ濃度5.0×104細胞/ウェルを与える。次に、細胞プレートは必要になるまで37℃、5%CO2インキュベーター中にカバーして保存し、最小限1時間休ませる。
FACS緩衝液=PBS+1% BSA+0.05% NaN3+2mM EDTA
抗体カクテルA=1対2 CD20 PerCp−Cy5.5(BD Biosciences)+1対5 PLCganma2 AF88+1対10 Akt AF647+1対50 ERK1/2 PE(FACS緩衝液で希釈)。
抗体カクテルB=1対2 CD20 PerCp−Cy5.5(BD Biosciences)+1対5 Syk PE+1対5 BLNK AF647(FACS緩衝液で希釈)
抗体カクテルC=1対5 CD20 PerCp−Cy5.5(Biolegend)+1対5 PLCganma2 AF488+1対10 Akt AF647+1対5 Syk PE(FACS緩衝液で希釈)
Fab-X+Fab-Y組合せは、抗体カクテルA及びB又はC単独のいずれかを用いてスクリーニングされた。スクリーニングはすべて2つの異なる血液ドナー由来の錐体細胞上で行った。データは市販のソフトウェアツールを使用して取得し評価した。総数で2500のFab-X+Fab-Y組合せは315の異なる抗原組合せまでスクリーニングした。
それぞれのFab−Kd−Fab[すなわち、A−X:Y−BでA及びBはFab断片]組合せによるBCRシグナル伝達カスケードタンパク質のリン酸化の誘導のパーセンテージ阻害を計算し、この例では、B細胞機能を阻害する抗原の新たな組合せを探して、陽性組合せの基準を、V領域の少なくとも1つの組合せによる少なくとも2つのリン酸読み取りの少なくとも30%阻害として設定した。この閾値に従えば、試験した315から11の新たな抗原対組合せが必要とされる基準を満たした。これは3.5%のヒット率を表しており、所望の活性の組合せを見つけるためには多数の組合せをスクリーニングするのが重要であることを実証している。
FabA−X:Y−FabB格子スクリーニングがタンパク質精製に頼らなくても新規の二重特異性抗体標的を同定できるかどうかを評価するための一過性に発現されたヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたタンパク質複合体の評価
序論:Fab−Kd−Fab[FabA−X:Y−FabB]フォーマット及びヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたタンパク質複合体格子スクリーニングを使用して同定された二重特異性抗体としてのB細胞シグナル伝達を阻害する2つの異なる抗原、2及び3に対するV領域はFabA−X及びFabB−Yとして一過性に発現された。一過性に発現され(それに続く精製なしで)及び精製されたFabA−XとFabB−Y組合せの活性を比較して、精製された成分の代わりに一過性発現の直接の生成物を用いて格子スクリーニングを行うことが可能かどうかを評価した。
B細胞培養物は例12に記載されるのと同じように調製した。
例12に記載されるのと同じExpi293トランスフェクション法を使用してFab−X及びFab−Yを含有する一過性上澄みを作製した。
浮遊CHOSXE細胞を、2mM(100×)glutamxを補充したCDCHO培地(Invitrogen)に前順応させた。細胞は、振盪インキュベーター器(Kuner AG、Birsfelden、Switzerland)上、140rpmで撹拌して対数増殖期に維持し、8%CO2を補充して37℃で培養した。
活性化マーカーアッセイ:抗原2特異的Fab’−Y及び抗原3特異的Fab’−Xは、精製されたものでも一過性上澄み中でも、等モル濃度で60分間(37℃及び5%CO2環境で)一緒にインキュベートした。組合せは、1対4連続希釈で開始モル濃度185nMから滴定した。モックの上澄みもインキュベートし、原液から滴定した。V字型底96ウェルプレートにおいて、1.5×105PBMCをウェルに添加し、それに滴定されたFab’−X及びFab’−Y組合せ又はモックの上澄みを添加した。次に、組合せ及び細胞はさらに90分間一緒にインキュベートした。この時間の後、B細胞は、37℃及び5%CO2で24時間、12.5μg/mLのヤギF(ab’)2抗ヒトIgM(Southeren Biotechnology)を添加することにより活性化した。
活性化マーカーアッセイ:図28において見られるように、データは、抗原3と抗原2の組合せが、精製されたものでも一過性上澄み由来でも、抗IgMで刺激されたB細胞上でCD71発現を阻害できることを示している。
最適抗原3抗体V領域を選択するためのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたタンパク質複合体中の精製された抗抗原2Fab−Yと一緒のFab−Xとしての抗原3に対する一過性に発現されたV領域のスクリーニング
序論:抗原2特異的V領域と組み合わせた二重特異性抗体としてB細胞シグナル伝達を阻害する抗原3に対する新しいV領域は、ヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたタンパク質複合体の格子スクリーニングを使用して同定した。抗原3 V領域は、Fab−Xとして一過性に発現され、精製した抗抗原2 Fab−Yと組み合わされた。B細胞シグナル伝達の活性化の阻害を測定してもっとも強力な抗原3及び抗原2 V領域を選択した。
3つの異なる抗体カクテルの代わりに、例12において抗体カクテルAについて記載されたのと同じアッセイ濃度及びインキュベーション条件を用いて1カクテルのみを使用することを除いて、例12に記載されるのと同じ機能アッセイを使用した。
抗体カクテル=1対3 CD20 PerCp−Cy5.5+1対5 PLCganma2 AF88+1対10 Akt AF647+1対5 p38 MAPK PE(FACS緩衝液に希釈した)
図30〜33に見られるように、データは、Fab−X中の異なる一過性に発現された抗原3マウスV領域とFab−Y中の2つの異なる精製された抗原2 V領域(VR447及びVR4450)の組合せがB細胞活性化を異なるレベルにまで阻害することが可能であり、したがって、スクリーニングは最適V領域の選択を促進することを示している。一過性Fab−Xとの組合せは、精製されたFab−X(VR4126)との基準組合せと比べた。
分子的に連結された二重特異性BYbeフォーマットとのFab−Kd−Fabスクリーニングフォーマットにおける抗原2プラス抗原3同時ターゲティングの活性の比較
序論:Fab−Kd−Fabヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたスクリーニング複合体において同定された標的対活性が、別の治療的分子的に連結されたフォーマットにおける類似する所望の活性に変換可能であることを調べるために、抗原2特異性(VR4447)及び抗原3特異性(VR4130)をBYbeフォーマットで生じさせた。このBYbeフォーマットは、抗抗原2Fab(VR4447)の重鎖に融合されたジスルフィド安定化(ds)単鎖(sc)−Fvとしての抗抗原3 V領域(VR4130)からなる。
機能スクリーニングのためのBYbeの精製を以下の通りに実施することを除いて例13に記載の通りである:
機能スクリーニングBYbe(Fab−dsscFv[Fab重鎖のC末端からのscFv])フォーマットは以下の通りに精製した。標準expiHEK又はCHO発現由来の澄んだ細胞培養上澄みを0.22μm無菌濾過した。濾過した上澄みは、PBS pH7.4(Sigma Aldrich Chemicals)で平衡化した50mlのGammabindPlus Sepharose XK26カラム(GE Healthcare)上に2ml/分で充填した。充填後、カラムはPBS pH7.4で洗浄し、次に0.1M グリシン/HCl pH2.7で溶出させた。溶出に続いて280nmで吸光度を測り、溶出ピークを収集し、次に1/25容積の2M Tris/HCl pH8.5で中和した。中和された試料はAmicon Ultra−15濃縮器を使用して濃縮し、10kDa(BYbe)分子量は膜から切り離し、スイングアウトルーターにおいて4000×gで遠心分離した。濃縮した試料は、PBS pH7.4で平衡にしたXK16/60又はXK26/60Superdex200カラム(GE Healthcare)のいずれかに適用した。カラムは、それぞれ1ml/分又は2.6ml/分のいずれかで均一濃度勾配のPBS、pH7.4を用いて展開させた。画分を収集し、TSKgel G3000SWXL上サイズ排除クロマトグラフィーにより分析し;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させ、280nmの吸光度により検出した。選択された単量体画分はプールし、Amicon Ultra−15濃縮器を使用して>1mg/mlまで濃縮し、10kDa(BYbe)分子量は膜から切り離し、スイングアウトルーターにおいて4000×gで遠心分離した。最終試料は、A280Scanning UV−可視光分光光度計(Cary 50Bio)により濃度について;TSKgel G3000SWXL上サイズ排除クロマトグラフィーにより%単量体について;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させ、280nmの吸光度により検出;50mA(ゲルあたり)で53分間4〜20% Tris−グリシン1.5mmゲル(Novex)上で実行される還元性及び非還元性SDS−PAGEにより;並びにカブトガニアメボサイトライセート(LAL)試験カートリッジを用いるCharles River’s EndoSafe(登録商標)携帯型試験システムにより内毒素についてアッセイした。
活性化マーカーアッセイ:抗原2特異的Fab’−Y及び抗原3特異的Fab’−Xは、等モル濃度で60分間(37℃及び5%CO2環境で)一緒にインキュベートした。組合せは、1対4連続希釈で開始モル濃度100nMから滴定した。抗原2及び3特異的BYbeも1対4連続希釈で開始モル濃度100nMから滴定した。V字型底96ウェルプレートにおいて、1.5×105PBMCをウェルに添加し、それに滴定されたFab’−X及びFab’−Y組合せ又は滴定されたBybeを添加した。Fab’−X及びFab’−Y組合せ又はBybeはさらに90分間細胞と一緒にインキュベートした。この時間の後、B細胞は、37℃及び5%CO2で24時間、25μg/mLのヤギF(ab’)2抗ヒトIgM(Southern Biotechnology)を添加することにより活性化した。
PhosFlowアッセイ:図34のデータは、Fab−Kd−Fab又はBybeフォーマットのいずれかで抗原3と抗原2をターゲティングすると、抗IgMで刺激されたB細胞においてリン酸化PLCγ2を阻害できることを示している。図35のデータは、Fab−Kd−Fab又はBybeフォーマットのいずれかで抗原3と抗原2をターゲティングすると、抗IgMで刺激されたB細胞においてリン酸化p38を阻害できることを示している。図36のデータは、Fab−Kd−Fab又はBybeフォーマットのいずれかで抗原3と抗原2をターゲティングすると、抗IgMで刺激されたB細胞においてリン酸化Aktを阻害できることを示している。
in vivo半減期の延長のための分子的に連結された二重特異性Bybeフォーマットにおける抗原2プラス抗原3同時ターゲティングの活性の抗アルブミン結合ドメインのさらなる付加との比較
序論:Fab−Kd−Fabヘテロ二量体的に繋ぎ合わされたスクリーニング複合体において同定された標的対活性が、抗アルブミン標的in vivo半減期延長を有する潜在的な治療的分子的に連結されたフォーマットにおける類似する所望の活性に変換可能であることを調べるために、抗アルブミン抗体断片を例15に記載されるBybeフォーマットの抗原3Fabの軽鎖に融合させた。抗原2特異性(VR4447)及び抗原3特異性(VR4130及びVR4126)を、抗アルブミン断片(VR0645)を付加して及び付加なしでBYbeフォーマットで生じさせた。
機能スクリーニングのためのBYbeの精製
機能スクリーニングBYbe(Fab−dsscFv[Fab重鎖のC末端からのscFv])フォーマットは以下の通りに精製した。標準expiHEK又はCHO発現由来の澄んだ細胞培養上澄みを0.22μm無菌濾過した。濾過した上澄みは、PBS pH7.4(Sigma Aldrich Chemicals)で平衡化した50mlのGammabindPlus Sepharose XK26カラム(GE Healthcare)上に2ml/分で充填した。充填後、カラムはPBS pH7.4で洗浄し、次に0.1M グリシン/HCl pH2.7で溶出させた。溶出に続いて280nmで吸光度を測り、溶出ピークを収集し、次に1/25容積の2M Tris/HCl pH8.5で中和した。中和された試料はAmicon Ultra−15濃縮器を使用して濃縮し、10kDa又は30kDaいずれかの分子量は膜から切り離し、スイングアウトルーターにおいて4000×gで遠心分離した。濃縮した試料は、PBS pH7.4で平衡にしたXK16/60又はXK26/60Superdex200カラム(GE Healthcare)のいずれかに適用した。カラムは、それぞれ1ml/分又は2.6ml/分のいずれかで均一濃度勾配のPBS、pH7.4を用いて展開させた。画分を収集し、TSKgel G3000SWXL上サイズ排除クロマトグラフィーにより分析し;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させ、280nmの吸光度により検出した。選択された単量体画分はプールし、Amicon Ultra−15濃縮器を使用して>1mg/mlまで濃縮し、10kDa又は30kDa分子量は膜から切り離し、スイングアウトルーターにおいて4000×gで遠心分離した。最終試料は、A280Scanning UV−可視光分光光度計(Cary 50Bio)により濃度について;TSKgel G3000SWXL上サイズ排除クロマトグラフィーにより%単量体について;5μm、7.8×300mmカラムは1ml/分で均一濃度勾配の0.2Mリン酸、pH7.0を用いて展開させ、280nmの吸光度により検出;50mA(ゲルあたり)で53分間4〜20%Tris−グリシン1.5mmゲル(Novex)上で実行される還元性及び非還元性SDS−PAGEにより;並びにカブトガニアメボサイトライセート(LAL)試験カートリッジを用いるCharles River’s EndoSafe(登録商標)携帯型試験システムにより内毒素についてアッセイした。
ボールド(全角)のアミノ酸は任意であり、下線部のアミノ酸は連結配列である。
GCTAGCGGAGGCGGAAGAATGAAACAACTTGAACCCAAGGTTGAAGAATTGCTTCCGAAAAATTATCACTTGGAAAATGAGGTTGCCAGATTAAAGAAATTAGTTGGCGAACGCCATCACCATCACCATCAC 配列番号2
DAVVTQESALTSSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYASWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCVLWYSDHWVFGCGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDVQLQQSGPGLVAPSQSLSITCTVSGFLLTDYGVNWVRQSPGKCLEWLGVIWGDGITDYNSALKSRLSVTKDNSKSQVFLKMNSLQSGDSARYYCVTGLFDYWGQGTTLTVSSAAAHHHHHHEQKLISEEDL−配列番号3
配列番号4
Claims (38)
- 式A−X:Y−Bを有する二重特異性タンパク質複合体であって、
A−Xは第1の融合タンパク質であり、
Y−Bは第2の融合タンパク質であり、
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
:はXとYの間の結合相互作用であり、
Aは、Fab又はFab’断片から選択される、二重特異性タンパク質複合体の第1のタンパク質成分であり、
Bは、Fab又はFab’断片から選択される、二重特異性タンパク質複合体の第2のタンパク質成分であり、
Xは、抗原若しくは抗体又はその結合断片から独立して選択される、結合対の第1の結合パートナーであり、
Yは、抗原若しくは抗体又はその結合断片から独立して選択される、結合対の第2の結合パートナーであり、
ただし、Xが抗原である場合、Yは、Xにより表される抗原に特異的である抗体又はその結合断片であり、Yが抗原である場合、Xは、Yにより表される抗原に特異的である抗体又はその結合断片である、上記二重特異性タンパク質複合体。 - AがFab断片である、請求項1に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- BがFab断片である、請求項1又は2に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- XがFab又はFab’断片中の重鎖のC末端に、場合によってリンカーを介して、融合している、請求項1から3までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- YがFab又はFab’断片中の重鎖のC末端に、場合によってリンカーを介して、融合している、請求項1から4までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- Xが、scFv、VHH及びペプチドから独立して選択され、ただし、Xがペプチドである場合、Yは抗体又はscFv若しくはVHHなどのその結合断片であり、XがscFv又はVHHである場合、Yはペプチドなどの抗原である、請求項1から5までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- YがscFv、VHH及びペプチドから独立して選択され、ただし、Yがペプチドである場合、Xは抗体又はscFv若しくはVHHなどのその結合断片であり、YがscFv又はVHHである場合、Xはペプチドなどの抗原である、請求項1から6までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- ペプチドが5から25アミノ酸長の範囲である、請求項6又は7に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- XとYの間の結合親和性が5nM又はそれよりも強い、請求項1から8までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- XとYの間の結合親和性が900pM又はそれよりも強い、例えば800、700、600、500、400又は300pMなどである、請求項9に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- X又はYが、ペプチドGCN4(配列番号、1又は配列番号1のアミノ酸1から38)に特異的であるscFv又はVHHである、請求項1から10までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- scFvが52SR4(配列番号3、又は配列番号3のアミノ酸1〜243)である、請求項11に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- X又はYがペプチドGCN4(配列番号1、又は配列番号1のアミノ酸1〜38)である、請求項1から12までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- A及び/又はBが、T細胞又はB細胞シグナル伝達受容体などの細胞表面受容体、共刺激分子、チェックポイント阻害因子、ナチュラルキラー細胞受容体、免疫グロブリン受容体、TNFRファミリー受容体、B7ファミリー受容体、接着分子、インテグリン、サイトカイン/ケモカイン受容体、GPCR、増殖因子受容体、キナーゼ受容体、組織特異的抗原、がん抗原、病原体認識受容体、補体受容体、ホルモン受容体又はサイトカイン、ケモカイン、ロイコトリエン、増殖因子、ホルモン、酵素などの可溶性分子、及びイオンチャネルを含む群から選択される抗原に対して特異的である、請求項1から13までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体。
- 請求項1から14までのいずれか一項に定義される1つ又は複数の二重特異性タンパク質複合体を含む組成物。
- 治療において使用するための請求項1から15までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体又は請求項15に記載の組成物。
- 請求項1から15までのいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質複合体における相乗的生物学的機能を検出する方法であって、1つ又は複数の機能アッセイにおいて二重特異性タンパク質複合体を試験することを含む、上記方法。
- 式A−X:Y−Bのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的生物学的機能を検出するための方法であって、
X:Yはヘテロ二量体繋であり、
:はXとYの間の結合相互作用であり、
A及びBはそれぞれX及びYとの融合タンパク質の形態の二重特異性のタンパク質成分であり、前記方法は、
(i)少なくとも1つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体を含むマルチプレックスの一部又はすべてについて機能アッセイにおいて活性を試験するステップと、
(ii)機能アッセイからの読み出し情報(単数又は複数)を解析して、ヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体における相乗的生物学的機能を検出するステップと
を含み、
Yは抗原でありXはYに特異的である抗体若しくはその結合断片である、又はXは抗原でありYはXに特異的である抗体若しくはその結合断片である、上記方法。 - マルチプレックスが格子の形態である、請求項18に記載の方法。
- マルチプレックスが少なくとも2つのヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体を含む、請求項18又は請求項19に記載の方法。
- ヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体(単数又は複数)がFc領域を含有しない、請求項18から20までのいずれか一項に記載の方法。
- Aが、Fab断片、Fab’断片、VHH、VH、VL及びscFvから独立して選択される、請求項18又は21のいずれか一項に記載の方法。
- AがFabなどのFab又はFab’断片である、請求項22に記載の方法。
- Bが、抗体、Fab断片、Fab’断片、VHH、VH、VL及びscFvから独立して選択される、請求項18から23までのいずれか一項に記載の方法。
- BがFab断片などのFab又はFab’断片である、請求項24に記載の方法。
- Xが抗体、Fab又はFab’断片中の重鎖のC末端に、場合によってリンカーを介して、融合している、請求項18から25までのいずれか一項に記載の方法。
- Yが抗体、Fab又はFab’断片中の重鎖のC末端に、場合によってリンカーを介して、融合している、請求項18から26までのいずれか一項に記載の方法。
- Xが、scFv、VHH及びペプチドから独立して選択され、ただし、Xがペプチドである場合、Yは抗体又はscFv若しくはVHHなどのその結合断片であり、XがscFv又はVHHである場合、Yはペプチドなどの抗原である、請求項18から27までのいずれか一項に記載の方法。
- Yが、scFv、VHH及びペプチドから独立して選択され、ただし、Yがペプチドである場合、Xは抗体又はscFv若しくはVHHなどのその結合断片であり、YがscFv又はVHHである場合、Xはペプチドなどの抗原である、請求項18から28までのいずれか一項に記載の方法。
- ペプチドが5から25アミノ酸長の範囲である、請求項28又は29に記載の方法。
- XとYの間の結合親和性が5nM又はそれよりも強い、請求項18から30までのいずれか一項に記載の方法。
- XとYの間の結合親和性が900pM又はそれよりも強い、例えば800、700、600、500、400又は300pMなどである、請求項31に記載の方法。
- X又はYが、ペプチドGCN4(配列番号1、又は配列番号1のアミノ酸1から38)に特異的であるscFv又はVHHである、請求項18から32までのいずれか一項に記載の方法。
- scFvが52SR4(配列番号3、又は配列番号3のアミノ酸1〜243)である、請求項33に記載の方法。
- X又はYがペプチドGCN4(配列番号1、又は配列番号1のアミノ酸1〜38)である、請求項18から34までのいずれか一項に記載の方法。
- A及び/又はBが、T細胞又はB細胞シグナル伝達受容体などの細胞表面受容体、共刺激分子、チェックポイント阻害因子、ナチュラルキラー細胞受容体、免疫グロブリン受容体、TNFRファミリー受容体、B7ファミリー受容体、接着分子、インテグリン、サイトカイン/ケモカイン受容体、GPCR、増殖因子受容体、キナーゼ受容体、組織特異的抗原、がん抗原、病原体認識受容体、補体受容体、ホルモン受容体又はサイトカイン、ケモカイン、ロイコトリエン、増殖因子、ホルモン若しくは酵素などの可溶性分子、若しくはイオンチャネルを含む群から選択される抗原に対して特異的である、請求項18から35までのいずれか一項に記載の方法。
- ヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体が試験に先立って精製されない、請求項18から36までのいずれか一項に記載の方法。
- A−X及びY−B融合タンパク質が一過性に発現され、1対1モル比で混合されてヘテロ二量体的に繋ぎ合わされた二重特異性タンパク質複合体をそれぞれ生成する前に精製されない、請求項37に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1409558.2 | 2014-05-29 | ||
GBGB1409558.2A GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-05-29 | Method |
PCT/EP2015/061819 WO2015181282A1 (en) | 2014-05-29 | 2015-05-28 | New bispecific format suitable for use in high-through-put screening |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017526616A true JP2017526616A (ja) | 2017-09-14 |
JP6628741B2 JP6628741B2 (ja) | 2020-01-15 |
Family
ID=51214419
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016569954A Active JP6628741B2 (ja) | 2014-05-29 | 2015-05-28 | ハイスループットスクリーニングにおいて使用するのに適した新しい二重特異性フォーマット |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10358493B2 (ja) |
EP (2) | EP3750915B1 (ja) |
JP (1) | JP6628741B2 (ja) |
KR (2) | KR20220162883A (ja) |
CN (2) | CN113480663A (ja) |
AU (2) | AU2015265900B2 (ja) |
BR (2) | BR112016026337B1 (ja) |
CA (1) | CA2949725C (ja) |
CL (1) | CL2016003068A1 (ja) |
CY (1) | CY1124573T1 (ja) |
DK (2) | DK3149032T3 (ja) |
ES (2) | ES2885815T3 (ja) |
GB (1) | GB201409558D0 (ja) |
HR (2) | HRP20211538T1 (ja) |
HU (2) | HUE056727T2 (ja) |
IL (2) | IL248573B (ja) |
LT (2) | LT3750915T (ja) |
MA (2) | MA40252A (ja) |
MX (2) | MX2016014684A (ja) |
MY (1) | MY182625A (ja) |
PL (2) | PL3149032T3 (ja) |
PT (2) | PT3750915T (ja) |
SG (1) | SG11201608882RA (ja) |
SI (2) | SI3149032T1 (ja) |
WO (1) | WO2015181282A1 (ja) |
Families Citing this family (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG191153A1 (en) | 2010-12-23 | 2013-07-31 | Hoffmann La Roche | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
BR112014029888A2 (pt) * | 2012-06-27 | 2020-05-12 | Hoffmann La Roche | Métodos de produção de um anticorpo, de determinação de uma combinação de sítios de ligação e de tratamento de um indivíduo com câncer, formulação farmacêutica, anticorpo e uso de um anticorpo |
GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-07-16 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
GB201411320D0 (en) | 2014-06-25 | 2014-08-06 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody construct |
GB201412659D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521383D0 (en) * | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech | Method |
GB201521393D0 (en) * | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521391D0 (en) * | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521382D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521389D0 (en) * | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
EP3579848A4 (en) | 2017-02-08 | 2021-03-03 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | MULTISPECIFIC BINDING PROTEINS FOR ACTIVATING NATURAL KILLER CELLS AND THEIR THERAPEUTIC USES FOR TREATING CANCER |
AU2018220736A1 (en) | 2017-02-20 | 2019-09-05 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Proteins binding HER2, NKG2D and CD16 |
CN107064092B (zh) * | 2017-05-08 | 2019-12-13 | 上海药明生物技术有限公司 | 一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法及其应用 |
US11339221B2 (en) * | 2017-11-01 | 2022-05-24 | Tufts Medical Center, Inc. | Bispecific antibody constructs and methods of use |
CN112368012A (zh) | 2018-02-08 | 2021-02-12 | 蜻蜓疗法股份有限公司 | 靶向nkg2d受体的抗体可变结构域 |
GB201817311D0 (en) | 2018-10-24 | 2018-12-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201817309D0 (en) | 2018-10-24 | 2018-12-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
CN110669137B (zh) * | 2019-10-24 | 2021-07-16 | 高新 | 一种多特异性抗体及其制备方法和用途 |
US20230125234A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-04-27 | UCB Biopharma SRL | Anti cd44-ctla4 bispecific antibodies |
US20230096030A1 (en) * | 2020-02-13 | 2023-03-30 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 and cd7 |
EP4103608A1 (en) | 2020-02-13 | 2022-12-21 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 and cd137 |
EP4103611B1 (en) | 2020-02-13 | 2024-03-27 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies binding hvem and cd9 |
US20230151109A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-05-18 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 |
CN111473332B (zh) * | 2020-04-09 | 2022-02-15 | 浙江集美生物技术有限公司 | 一种智能化节能环保死猪焚烧线*** |
WO2022002033A1 (zh) * | 2020-06-30 | 2022-01-06 | 和铂医药(上海)有限责任公司 | 具有H2L2与HCAb结构的结合蛋白 |
WO2024022602A1 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Akamis Bio Ltd | Virus encoding transgenes to complement cellular therapy |
CN115976035B (zh) * | 2022-10-14 | 2024-01-09 | 武汉大学 | 可调控通用型car、car-t细胞及融合引导多肽 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07501698A (ja) * | 1991-11-29 | 1995-02-23 | プロテイン デザイン ラブス,インコーポレイティド | 二価特異性ヘテロ二量体 |
WO2014001326A1 (en) * | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the selection and production of tailor-made, selective and multi-specific therapeutic molecules comprising at least two different targeting entities and uses thereof |
Family Cites Families (119)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4741900A (en) | 1982-11-16 | 1988-05-03 | Cytogen Corporation | Antibody-metal ion complexes |
GB8422238D0 (en) | 1984-09-03 | 1984-10-10 | Neuberger M S | Chimeric proteins |
DK336987D0 (da) | 1987-07-01 | 1987-07-01 | Novo Industri As | Immobiliseringsmetode |
GB8719042D0 (en) | 1987-08-12 | 1987-09-16 | Parker D | Conjugate compounds |
US6010902A (en) | 1988-04-04 | 2000-01-04 | Bristol-Meyers Squibb Company | Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity |
DE768377T1 (de) | 1988-09-02 | 1998-01-02 | Dyax Corp | Herstellung und Auswahl von Rekombinantproteinen mit verschiedenen Bindestellen |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
GB8907617D0 (en) | 1989-04-05 | 1989-05-17 | Celltech Ltd | Drug delivery system |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
AU7247191A (en) | 1990-01-11 | 1991-08-05 | Molecular Affinities Corporation | Production of antibodies using gene libraries |
US5780225A (en) | 1990-01-12 | 1998-07-14 | Stratagene | Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules |
DE69120146T2 (de) | 1990-01-12 | 1996-12-12 | Cell Genesys Inc | Erzeugung xenogener antikörper |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
CA2090126C (en) | 1990-08-02 | 2002-10-22 | John W. Schrader | Methods for the production of proteins with a desired function |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
ES2246502T3 (es) | 1990-08-29 | 2006-02-16 | Genpharm International, Inc. | Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos. |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
ES2113940T3 (es) | 1990-12-03 | 1998-05-16 | Genentech Inc | Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas. |
DE69233750D1 (de) | 1991-04-10 | 2009-01-02 | Scripps Research Inst | Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden |
GB9112536D0 (en) | 1991-06-11 | 1991-07-31 | Celltech Ltd | Chemical compounds |
GB9113120D0 (en) | 1991-06-18 | 1991-08-07 | Kodak Ltd | Photographic processing apparatus |
GB9120467D0 (en) | 1991-09-26 | 1991-11-06 | Celltech Ltd | Anti-hmfg antibodies and process for their production |
DK1024191T3 (da) | 1991-12-02 | 2008-12-08 | Medical Res Council | Fremstilling af autoantistoffer fremvist på fag-overflader ud fra antistofsegmentbiblioteker |
US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6129914A (en) | 1992-03-27 | 2000-10-10 | Protein Design Labs, Inc. | Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line |
US6106834A (en) | 1993-06-02 | 2000-08-22 | Research Corporation Technologies, Inc. | Use of anti-CD45 leukocyte antigen antibodies for immunomodulation |
UA40577C2 (uk) | 1993-08-02 | 2001-08-15 | Мерк Патент Гмбх | Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин |
EP0733070A1 (en) | 1993-12-08 | 1996-09-25 | Genzyme Corporation | Process for generating specific antibodies |
DK0744958T3 (da) | 1994-01-31 | 2003-10-20 | Univ Boston | Polyklonale antistofbiblioteker |
US5516637A (en) | 1994-06-10 | 1996-05-14 | Dade International Inc. | Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
JP2978435B2 (ja) | 1996-01-24 | 1999-11-15 | チッソ株式会社 | アクリロキシプロピルシランの製造方法 |
US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
CA2279329C (en) * | 1997-01-31 | 2013-05-21 | Universite De Montreal | Protein fragment complementation assays to detect biomolecular interactions |
US20020062010A1 (en) | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
ID28040A (id) * | 1998-05-19 | 2001-05-03 | Avidex Ltd | Reseptor sel t yang dapat larut |
DE19952956A1 (de) | 1999-11-03 | 2001-05-17 | Acgt Progenomics Ag | Verfahren zur Verbindung von molekularen Substanzen |
EP2392596A3 (en) | 1999-12-28 | 2013-11-27 | ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC | Intrabodies with defined framework that is stable in a reducing environment and applications thereof |
GB0103389D0 (en) | 2001-02-12 | 2001-03-28 | Novartis Ag | Organic compounds |
US20050069538A1 (en) | 2003-09-18 | 2005-03-31 | Gregorio Aversa | Therapeutic binding molecules |
US6833441B2 (en) | 2001-08-01 | 2004-12-21 | Abmaxis, Inc. | Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers |
US6908963B2 (en) | 2001-10-09 | 2005-06-21 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith |
CA2467597A1 (en) | 2001-12-03 | 2003-06-12 | Abgenix, Inc. | Anti-cd45rb antibodies for use in treating autoimmune disease and transplant rejection |
JP2005526501A (ja) | 2002-02-21 | 2005-09-08 | デューク・ユニヴァーシティ | 自己免疫疾患用の試薬および治療方法 |
US8658773B2 (en) | 2011-05-02 | 2014-02-25 | Immunomedics, Inc. | Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration |
GB0210121D0 (en) | 2002-05-02 | 2002-06-12 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
EP1413316A1 (en) * | 2002-09-27 | 2004-04-28 | Bruno Robert | Bifunctional conjugates or fusion proteins |
GB0225279D0 (en) | 2002-10-30 | 2002-12-11 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
JP4603894B2 (ja) | 2002-12-03 | 2010-12-22 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | 抗体産生細胞を同定するためのアッセイ |
GB0305702D0 (en) | 2003-03-12 | 2003-04-16 | Univ Birmingham | Bispecific antibodies |
GB0312481D0 (en) | 2003-05-30 | 2003-07-09 | Celltech R&D Ltd | Antibodies |
US20050048578A1 (en) | 2003-06-26 | 2005-03-03 | Epitomics, Inc. | Methods of screening for monoclonal antibodies with desirable activity |
US20040268306A1 (en) | 2003-06-30 | 2004-12-30 | Cheng Ken Prayoon | Methods, systems and computer program products for language independent data communication and display |
GB0315450D0 (en) | 2003-07-01 | 2003-08-06 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
GB0315457D0 (en) | 2003-07-01 | 2003-08-06 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
WO2005003169A2 (en) | 2003-07-01 | 2005-01-13 | Celltech R & D Limited | Modified antibody fab fragments |
CA2533830A1 (en) | 2003-08-07 | 2005-02-24 | Epitomics, Inc. | Methods for humanizing rabbit monoclonal antibodies |
JP4762142B2 (ja) | 2003-09-18 | 2011-08-31 | ノバルティス アーゲー | 治療用結合分子 |
GB0411186D0 (en) | 2004-05-19 | 2004-06-23 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
CA2569240A1 (en) | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Domantis Limited | Drug fusion comprising a polypeptide drug and an immunoglobulin heavy chain variable domain specific for serum albumin |
GB0412181D0 (en) | 2004-06-01 | 2004-06-30 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
US20060018897A1 (en) | 2004-06-28 | 2006-01-26 | Transtarget Inc. | Bispecific antibodies |
ATE459648T1 (de) | 2005-05-11 | 2010-03-15 | Philogen Spa | Fusionsprotein von antikörper l19 gegen fibronectin ed-b und interleukin 12 |
US7745393B2 (en) | 2005-11-03 | 2010-06-29 | Jumi Shin | Minimalist bZIP proteins and uses thereof |
GB0523954D0 (en) | 2005-11-24 | 2006-01-04 | Ucb Celltech | Bioassays |
GB0601513D0 (en) | 2006-01-25 | 2006-03-08 | Univ Erasmus Medical Ct | Binding molecules 3 |
EP1986689A4 (en) | 2006-01-27 | 2009-09-02 | Cellerant Therapeutics Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING HEMATOLOGICAL PROLIFERATIVE DISORDERS |
JP2009539413A (ja) | 2006-06-12 | 2009-11-19 | トゥルビオン・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | エフェクター機能を有する単鎖多価結合タンパク質 |
MX2009005776A (es) | 2006-12-01 | 2009-06-10 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se enlazan al cd 22 y sus usos. |
EP2626372B1 (en) | 2007-03-29 | 2018-03-21 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
JP5469600B2 (ja) | 2007-07-16 | 2014-04-16 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗CD79b抗体及びイムノコンジュゲートとその使用方法 |
EP2195341B1 (en) | 2007-09-26 | 2017-03-22 | UCB Biopharma SPRL | Dual specificity antibody fusions |
US20100093563A1 (en) * | 2008-09-22 | 2010-04-15 | Robert Anthony Williamson | Methods and vectors for display of molecules and displayed molecules and collections |
HUE033438T2 (en) | 2008-09-26 | 2017-11-28 | Ucb Biopharma Sprl | Biological products |
CN102481348A (zh) | 2009-08-31 | 2012-05-30 | Ibc药品公司 | 双特异性免疫细胞因子停靠-和-加锁(dnl)复合物及其治疗性用途 |
GB0920127D0 (en) | 2009-11-17 | 2009-12-30 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
GB201000467D0 (en) | 2010-01-12 | 2010-02-24 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
WO2011130305A2 (en) | 2010-04-12 | 2011-10-20 | Sorrento Therapeutics Inc. | Method for displaying antibodies |
US9150663B2 (en) | 2010-04-20 | 2015-10-06 | Genmab A/S | Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof |
CN107441480A (zh) | 2010-06-30 | 2017-12-08 | 卡姆普根有限公司 | 多肽及其作为用于治疗多发性硬化、类风湿性关节炎以及其他自身免疫病症的药物的用途 |
MX338953B (es) | 2010-08-16 | 2016-05-06 | Novimmune Sa | Metodos para la generacion de anticuerpos multiespecificos y multivalentes. |
AU2012222833B2 (en) | 2011-03-03 | 2017-03-16 | Zymeworks Inc. | Multivalent heteromultimer scaffold design and constructs |
EP2714738B1 (en) | 2011-05-24 | 2018-10-10 | Zyngenia, Inc. | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
CN104114579B (zh) | 2011-10-27 | 2020-01-24 | 健玛保 | 异二聚体蛋白的生成 |
EP2783214A2 (en) | 2011-11-23 | 2014-10-01 | The Board of Regents of The University of Texas System | Proteomic identification of antibodies |
US20140212425A1 (en) | 2011-12-05 | 2014-07-31 | Immunomedics, Inc. | Therapeutic use of anti-cd22 antibodies for inducing trogocytosis |
CA2853138A1 (en) | 2011-12-05 | 2013-06-13 | Immunomedics, Inc. | Therapeutic use of anti-cd22 antibodies for inducing trogocytosis |
TW201408698A (zh) | 2012-07-09 | 2014-03-01 | Genentech Inc | 抗cd79b抗體及免疫結合物 |
SG11201500087VA (en) | 2012-07-09 | 2015-02-27 | Genentech Inc | Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies |
SG11201500096YA (en) | 2012-07-09 | 2015-02-27 | Genentech Inc | Immunoconjugates comprising anti - cd79b antibodies |
CA2874904A1 (en) | 2012-07-09 | 2014-01-16 | Genentech, Inc. | Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies |
US9682143B2 (en) | 2012-08-14 | 2017-06-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
KR101963231B1 (ko) | 2012-09-11 | 2019-03-28 | 삼성전자주식회사 | 이중특이 항체의 제작을 위한 단백질 복합체 및 이를 이용한 이중특이 항체 제조 방법 |
GB201223276D0 (en) | 2012-12-21 | 2013-02-06 | Ucb Pharma Sa | Antibodies and methods of producing same |
RU2015140915A (ru) | 2013-02-26 | 2017-04-03 | Роше Гликарт Аг | Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки |
UA116479C2 (uk) | 2013-08-09 | 2018-03-26 | Макродженікс, Інк. | БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ |
KR102339240B1 (ko) | 2013-10-15 | 2021-12-15 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 펩타이드 키메라 항원 수용체 t 세포 스위치 및 이의 용도 |
CN106029098A (zh) | 2014-02-25 | 2016-10-12 | 免疫医疗公司 | 人源化rfb4抗cd22抗体 |
GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-07-16 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
GB201411320D0 (en) | 2014-06-25 | 2014-08-06 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody construct |
GB201411420D0 (en) | 2014-06-26 | 2014-08-13 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody constructs |
GB201412659D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
US11091546B2 (en) | 2015-04-15 | 2021-08-17 | The Scripps Research Institute | Optimized PNE-based chimeric receptor T cell switches and uses thereof |
GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
GB201521393D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521383D0 (en) * | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech | Method |
GB201521382D0 (en) * | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521391D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521389D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
-
2014
- 2014-05-29 GB GBGB1409558.2A patent/GB201409558D0/en not_active Ceased
-
2015
- 2015-05-28 LT LTEP20176103.8T patent/LT3750915T/lt unknown
- 2015-05-28 HR HRP20211538TT patent/HRP20211538T1/hr unknown
- 2015-05-28 MA MA040252A patent/MA40252A/fr unknown
- 2015-05-28 EP EP20176103.8A patent/EP3750915B1/en active Active
- 2015-05-28 HR HRP20220649TT patent/HRP20220649T1/hr unknown
- 2015-05-28 JP JP2016569954A patent/JP6628741B2/ja active Active
- 2015-05-28 LT LTEPPCT/EP2015/061819T patent/LT3149032T/lt unknown
- 2015-05-28 WO PCT/EP2015/061819 patent/WO2015181282A1/en active Application Filing
- 2015-05-28 HU HUE15726923A patent/HUE056727T2/hu unknown
- 2015-05-28 AU AU2015265900A patent/AU2015265900B2/en active Active
- 2015-05-28 PL PL15726923T patent/PL3149032T3/pl unknown
- 2015-05-28 PT PT201761038T patent/PT3750915T/pt unknown
- 2015-05-28 ES ES15726923T patent/ES2885815T3/es active Active
- 2015-05-28 DK DK15726923.4T patent/DK3149032T3/da active
- 2015-05-28 BR BR112016026337-5A patent/BR112016026337B1/pt active IP Right Grant
- 2015-05-28 PT PT157269234T patent/PT3149032T/pt unknown
- 2015-05-28 DK DK20176103.8T patent/DK3750915T3/da active
- 2015-05-28 MX MX2016014684A patent/MX2016014684A/es unknown
- 2015-05-28 SG SG11201608882RA patent/SG11201608882RA/en unknown
- 2015-05-28 HU HUE20176103A patent/HUE059106T2/hu unknown
- 2015-05-28 US US15/311,198 patent/US10358493B2/en active Active
- 2015-05-28 KR KR1020227041542A patent/KR20220162883A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-05-28 PL PL20176103.8T patent/PL3750915T3/pl unknown
- 2015-05-28 SI SI201531713T patent/SI3149032T1/sl unknown
- 2015-05-28 KR KR1020167034620A patent/KR102472643B1/ko active IP Right Grant
- 2015-05-28 SI SI201531849T patent/SI3750915T1/sl unknown
- 2015-05-28 CN CN202110759765.3A patent/CN113480663A/zh active Pending
- 2015-05-28 BR BR122020025858-6A patent/BR122020025858B1/pt active IP Right Grant
- 2015-05-28 CA CA2949725A patent/CA2949725C/en active Active
- 2015-05-28 MA MA053624A patent/MA53624A/fr unknown
- 2015-05-28 CN CN201580028405.9A patent/CN106459220B/zh active Active
- 2015-05-28 EP EP15726923.4A patent/EP3149032B1/en active Active
- 2015-05-28 MY MYPI2016704211A patent/MY182625A/en unknown
- 2015-05-28 ES ES20176103T patent/ES2916468T3/es active Active
-
2016
- 2016-10-27 IL IL248573A patent/IL248573B/en active IP Right Grant
- 2016-11-09 MX MX2021002826A patent/MX2021002826A/es unknown
- 2016-11-29 CL CL2016003068A patent/CL2016003068A1/es unknown
-
2019
- 2019-05-02 US US16/402,097 patent/US20190322739A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-06-29 IL IL275743A patent/IL275743B/en unknown
-
2021
- 2021-03-10 AU AU2021201515A patent/AU2021201515A1/en active Pending
- 2021-10-07 CY CY20211100875T patent/CY1124573T1/el unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07501698A (ja) * | 1991-11-29 | 1995-02-23 | プロテイン デザイン ラブス,インコーポレイティド | 二価特異性ヘテロ二量体 |
WO2014001326A1 (en) * | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the selection and production of tailor-made, selective and multi-specific therapeutic molecules comprising at least two different targeting entities and uses thereof |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
J. NUCLEAR MED., 2008年, vol. 49, no. 1, JPN6019014112, pages 158 - 163, ISSN: 0004020357 * |
TRENDS IN BIOTECHNOL., 2010年, vol. 28, JPN6019014114, pages 355 - 362, ISSN: 0004020358 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6628741B2 (ja) | ハイスループットスクリーニングにおいて使用するのに適した新しい二重特異性フォーマット | |
US11286312B2 (en) | Multispecific antibodies | |
US10774157B2 (en) | Multispecific antibodies | |
US10618979B2 (en) | Multispecific antibodies | |
US10829566B2 (en) | Method employing bispecific antibodies | |
RU2747980C2 (ru) | Молекулы со специфичностью к cd45 и cd79 | |
CN106661122B (zh) | 具有针对cd79和cd22的特异性的分子 | |
RU2780436C2 (ru) | Новый биспецифический формат, подходящий для применения в скрининге с высокой пропускной способностью |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170130 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180514 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190717 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190718 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20191126 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20191203 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6628741 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |