JP2017520626A - 抗がん薬物とするアリールアミン置換のキノキサリン - Google Patents

Abstract

【課題】抗がん薬物とするアリールアミン置換のキノキサリンを提供する。【解決手段】本発明は該式Ｉ（ａ）〜（ｄ）及びＩＩの化合物を使用した治療方法を提供する。該化合物はタンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）の促進剤、がんタンパクＣＩＰ２Ａ抑制剤及びがんタンパクＳＥＴ拮抗剤とし、しかも効果的にがんを治療できる抗がん薬物とする。【化１】【化２】【化３】【化４】【化５】【選択図】なし

Description

本発明はアリールアミン置換のキノキサリン（ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ）の新規化合物、及び該化合物の用途に関する。

ヒトがん細胞の多くでは、タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ｃａｎｃｅｒｏｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ２Ａ，ＣＩＰ２Ａ）の過度な発現の抑制が発見されている。それは、白血病、前立腺がん、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部がん、結腸がん及び乳がんを含む。そのためＣＩＰ２Ａは、臨床上、侵略性腫瘍及びがん細胞の成長促進と密接な関連があると、発見されている。
ＣＩＰ２Ａは直接、転写因子ｃ-Ｍｙｃと相互に作用し、ｃ-Ｍｙｃのタンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）脱リン酸化を抑制するため、がん化するｃ-Ｍｙｃはより安定し、劣化を免れられる。

タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）は、セリン或いはスレオニン残基タンパク質キナーゼの脱リン酸化を通して細胞増殖を行うキー調節剤であり、ＰＰ２Ａは、レセプター特異性を調節する３個のサブユニットにより組成される。
例えば、ＰＰ２Ａは、ｐ-Ａｋｔをセリン４７３において脱リン酸化させ、細胞成長を減少させる。

そのため、ＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-Ａｋｔシグナルカスケード（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃａｓｃａｄｅ）は、がんの重要な生存調節剤であると考えられている。
また、ＳＥＴにおいて、もう一つ発見されたＰＰ２Ａの抑制剤は、ＳＥＴは多くの異なる腫瘍組織において過度に発現し、しかもＳＥＴの発現量とがん細胞の成長速度とは、正比例の関係にあると、発見されている。

本発明は、拮抗ＳＥＴ或いはＣＩＰ２ＡのＰＰ２Ａに対する抑制を通して、がん細胞中でＰＰ２Ａを再び活性化し、ｐ-Ａｋｔ等がん化促進メッセージの伝達を抑制し、がん細胞アポトーシスを誘発する化合物を開発し、がんに対抗する新しい治療戦略とする。

本発明の目的の一つは、アリールアミンに置換可能なキノキサリンを提供し、それは式Ｉ（ａ）或いは式Ｉ（ｂ）の構造を備える。

その内Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含む。

本発明はさらにアリールアミンに置換可能なキノキサリンを提供し、それは式Ｉ（ｃ）の化学構造を含む。

その内、Ｒ^４及びＲ^５は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含む。
その内、Ｘはハロゲン、ハロアルキル基、メトキシ基、ニトロ基、アミン基、アミド基、カルボキシル基、酸性基、ベンゾフェノン基或いはメトキシカルボニル基である。

本発明はさらにアリールアミンに置換可能なキノキサリンを提供し、それは式Ｉ（ｄ）の化学構造を含む。

その内、Ｒ^６及びＲ^７は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含む。

本発明は化合物をさらに提供し、それは式ＩＩの構造を含む。

その内、Ｒ^８及びＲ^９は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上に他の官能基の原子或いは原子団を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含む。
その内、ＹはＣＯ或いは（ＣＨ_２）_ｎで、ｎ＝１-３、Ｚ＝ＣＯＯＲ^１０で、或いは置換官能基のベンゼンを有し、Ｒ^１０は芳香基或いはアルキル基置換基である。

本発明のもう一つの目的は医薬組成物を提供し、上記で定義される化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。

本発明のさらにもう一つの目的は、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）の細胞内での発現を活性化し、がんタンパクＳＥＴ拮抗剤、タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）拮抗剤、或いはがんタンパク（ＳＥＴ）とタンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）との結合を干渉する医薬組成物を提供し、上記で定義される化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。

本発明のさらに別の目的は、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）不活性化により、がんタンパクＳＥＴの発現量増加、或いはタンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）の発現量増加を特徴とする、疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物を提供し、上記で定義される化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。

本発明の一実施形態において、該医薬組成物は、抗がん薬物をさらに有し、しかも該抗がん薬物は、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）或いはパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）である。

本発明のもう一つの目的は、上記で定義される化合物をさらに含み、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）不活性化、がんタンパクＳＥＴの発現量増加、タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物の製造に用いる用途を提供する。

本発明の一実施形態において、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）の不活性化、がんタンパクＳＥＴの発現量増加或いはタンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状は、肝がん、肺がん、白血病、乳がん、腎がん、甲状腺がん、結腸がん、頭部或いは頸部がんである。

本発明は新設計の化合物を提供し、それはＰＰ２ＡとＳＥＴとの結合を阻害する能力を有し、同時にタンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）及びｐ-Ａｋｔの発現を抑制し、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）を備える促進剤及びがんタンパクＳＥＴ拮抗剤とし、しかも効果的にがんを治療できる抗がん薬物とするアリールアミン置換のキノキサリンに関する。

ＭＴＴ分析を通して、ＨＣＣ細胞中での、ＴＤ-５２及びエルロチニブの細胞アポトーシス効果を示し、異なる細胞株中でのＴＤ-５２のＩＣ_５０示し、点は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 フローサイトメトリーを通して、用量依存性下でＴＤ-５２及びエルロチニブのＨＣＣ細胞アポトーシス効果を測定し、点は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 アネキシン-Ｖ／ＰＩ二重染色法により細胞アポトーシス及び細胞壊死を分析した比率である。 ウエスタンブロット分析法によりカスパーゼ-９、システインプロテアーゼ-３及びペルオキシソーム増殖物が起動するレセプター（ＰＡＰＰ）の発現の分析を示す。 ＴＤ-５２処理後のＤＮＡフラグメンテーション測定（ｎ＝６）を示す。 ＴＤ-５２とｚ-ＶＡＤ-ｆｍｋ共処理による処理の細胞アポトーシス誘発減少を示し、上図はウエスタンブロット分析法による分析で、下図はフローサイトメトリーによる分析である。 ウエスタンブロット分析法により、ＴＤ-５２が、エルロチニブに比べ、上皮細胞成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）リン酸化活性抑制を備えないことを確認する。 ＨＣＣ細胞中で、異なるＴＤ-５２濃度で２４時間処理し、ＣＩＰ２Ａタンパク質の発現をダウンレギュレーションし、細胞溶解物を収集し、ウエスタンブロット分析法によりＣＩＰ２Ａ、ｐ-Ａｋｔ、Ａｋｔタンパク質を分析した発現量を示す。 ＨＣＣ細胞中で、異なる時間で１μＭ ＴＤ-５２を処理し、ＣＩＰ２Ａタンパク質発現をダウンレギュレーションし、細胞溶解物を収集し、ウエスタンブロット分析法によりＣＩＰ２Ａ、ｐ-Ａｋｔ、Ａｋｔタンパク質を分析した発現量を示す。 ＴＤ-５２処理後にＨＣＣ細胞のＰＰ２Ａ活性は向上し、細胞溶解物からＰＰ２Ａホスファターゼ活性を測定し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 ＴＤ-５２の、ＰＰ２Ａ各サブユニットタンパク質発現量への影響を示し、ウエスタンブロット分析法により確認したＰＰ２Ａサブユニットの発現量を示す。 ｍｙｃ-マークをしたＣＩＰ２Ａ異所性過剰発現のＰＬＣ５細胞がＴＤ-５２のＰＬＣ５細胞アポトーシスの効果に与える影響を示し、それぞれフローサイトメトリー（右図）及びウエスタンブロット分析法（左図）により分析し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 ＰＰ２Ａ抑制剤、オカダ酸（ＯＡ）共処理のＴＤ-５２細胞アポトーシス効果への影響を示し、フローサイトメトリー（右図）及びウエスタンブロット分析法（左図）により分析し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 ｓｉＲＮＡを通して、ＰＰ２Ａ触媒領域（ＰＰ２Ａｃ）を除いた、ＴＤ-５２のＰＬＣ５細胞アポトーシスの効果への発現影響を示し、それぞれフローサイトメトリー（右図）で細胞アポトーシスを分析し、及びウエスタンブロット分析法でｐ-Ａｋｔ、ＰＰ２Ａｃ及びＰＡＲＰの発現量（左図）を分析し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 Mｙｃ-マークをしたＡｋｔ１異所性過剰発現がＴＤ-５２のＰＬＣ５細胞アポトーシス効果への減少を示し、それぞれフローサイトメトリー（右図）及びウエスタンブロット分析法（左図）により分析し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 用量依存性の方式及び時間依存性の方式で、ＴＤ-５２によりＰＬＣ５細胞を処理するとＣＩＰ２Ａの転写に影響を与える。異なるＴＤ-５２剤量処理（左上図）及びＴＤ-５２処理時間の違い（左下図）で、ＲＴ-ＰＣＲを利用しＣＩＰ２Ａ ｍＲＮＡを定量化する。柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。右図はウエスタンブロット分析法により、タンパク質合成阻害剤シクロヘキシミド（ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ）とＴＤ-５２処理有り（右下図）、及びタンパク質合成阻害剤シクロヘキシミド（ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ）とＴＤ-５２処理無し（右上図）のＣＩＰ２Ａタンパク質発現量の測定である。 ＴＤ-５２のＣＩＰ２Ａ近位プロモーター領域（ｎ＝３，＊Ｐ＜０．０５への影響を示し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差を表し、ＮＳは非顕著性を表す）。 ＰＬＣ５細胞中でＴＤ-５２が、Ｅｌｋ-１転写因子の細胞核における発現量を抑制することで、ＣＩＰ２Ａタンパクの細胞質における発現量を抑制し、核質分離後の細胞溶解物を、ウエスタンブロット分析法で、Ｅｌｋ-１及びＣＩＰ２Ａタンパク質発現量を分析し、ラミンＢ（ｌａｍｉｎ Ｂ）及びチューブリン（ｔｕｂｕｌｉｎ）は対照組である。 ＰＬＣ５細胞中ＴＤ-５２はＥｌｋ-１のＣＩＰ２Ａのプロモーターへの結合を抑制し、染色質免疫沈澱技術（ＣｈＩＰ）を利用し、ＣＩＰ２Ａプロモーター結合位置Ｅｌｋ-１の結合能力を確認し、電磁泳動図によりＰＣＲ産物を分析する（左図）。ＰＬＣ５細胞中異所性過剰発現Ｅｌｋ-１は、ＴＤ-５２誘導がん細胞アポトーシスの効果を減少させる（右上及び右下）。柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 ＰＬＣ５の異体移植マウスモデルに、それぞれソラフェニブ、ＴＤ-５２或いはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（制御組とする）を与えた後の腫瘍成長曲線を示し、＊Ｐ＜０．０５で、点は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝６）を表す。 ウエスタンブロット分析法によりＰＬＣ５異体移植腫瘍中ＣＩＰ２Ａ、ｐ-Ａｋｔ及びＡｋｔ１の発現量を分析する。 それぞれＴＤ-５２或いはＤＭＳＯ（制御組とする）により処理したＰＬＣ５異体移植腫瘍中ＰＰ２Ａ活性を分析する＊Ｐ＜０．０５、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 ＰＬＣ５細胞中で、用量依存性の方式により、ソラフェニブ及びＴＤ-５２の細胞活性に対する影響を示す。柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝３）を表す。 シグナルルートの模式図で、ＨＣＣ細胞中ＴＤ-５２の細胞アポトーシス促進への影響を説明する。 臨床肝がん腫瘍サンプルｐ-Ａｋｔ細胞核発現及びＣＩＰ２Ａ細胞質発現の免疫組織化学染色法画像図である。 一対の肝がん腫瘍組織及び近隣の正常組織中ＳＥＴの免疫組織化学染色法画像図である。 臨床上サンプル中の腫瘍組織及び非腫瘍組織の平均ＳＥＴの発現量を示し、柱は平均値を表し、誤差線は標準差（ｎ＝２９４）を表す。 非腫瘍組織発現量の一対の腫瘍組織に対する比率を示し、点は各患者の発現量の比率（ｎ＝１４７）を表し、横線は、すべての病人の平均比率を表す。 上図は、異なる患者のＳＥＴ及びｐ-Ａｋｔの免疫組織化学染色法画像図を示し、下図は肝がん患者の手術後の、ＳＥＴ及びｐ-Ａｋｔ共発現を通した無再発生存期間）（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ-ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ）を示す。 ＳＥＴの除去あり、及びなしＰＬＣ５細胞の細胞群形成画像及び数の分析（ｎ＝６）を示し、右下はウエスタンブロット分析法により遺伝子除去の効果を確認した図である。 ＳＥＴの除去あり、及びなしＨｅｐ３Ｂ細胞の肝がん細胞ヘパトスファー（ｈｅｐａｔｏｓｐｈｅｒｅ）形成画像及び数の分析（ｎ＝６）を示す。 ＭＴＴを通してＥＭＱＡ抑制肝がん細胞の生存率を分析し、点は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 フローサイトメトリーにより、ＥＭＱＡ用量依存性の処理を通した肝がん細胞アポトーシスを分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 ＤＮＡフラグメンテーションにより、ＥＭＱＡ用量依存性の処理を通した肝がん細胞アポトーシスを分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 フローサイトメトリー（上図）及びウエスタンブロット分析法（下図）により、時間依存性方式におけるＥＭＱＡが誘発するｐ-Ａｋｔ発がんタンパク発現量減少と肝がん細胞アポトーシスを分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表し、ＣＦはカッティング型式を表す。 ＥＭＱＡ及び制御組治療のＰＬＣ５異体移植腫瘍マウスの腫瘍成長曲線を示し、点は平均値を表し、ストリップは、標準差（ｎ＝１０）を表す。 ウエスタンブロット分析法により、ＰＬＣ５異体移植腫瘍マウスの腫瘍溶解物のｐ-Ａｋｔ及びＡｋｔ１（左図）及びＰＰ２Ａ活性（右図）の発現量を分析し、柱は平均値を表し、ストリップは、標準差（ｎ＝１０）を表す。 フローサイトメトリー及びウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡの、Mｙｃ-マークを備えるＡｋｔ異所性発現のＰＬＣ５細胞に対する細胞アポトーシス効果を分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 フローサイトメトリー及びウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡの、ＰＰ２Ａ抑制剤、オカダ酸（ＯＡ）共処理のＰＬＣ５細胞アポトーシスに対する効果減少を分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 フローサイトメトリー及びウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡの、ｓｉＲＮＡを通してＰＰ２Ａｃを除去したＰＬＣ５細胞の細胞アポトーシス効果減少を分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 ウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡのｐ-Ａｋｔダウンレギュレーションの発現がＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＮ及びＰＤＫ１の発現に影響しないことを分析する。 フローサイトメトリー及びウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡの、Mｙｃ-マークをしたＳＥＴ異所性発現のＨｅｐ３Ｂ細胞アポトーシス効果に対する減少を分析し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ左図）と共免疫沈殿法（ｃｏ-ＩＰ右図）により、全長ＳＥＴ、Ｎ-末端フラグメント（ＳＥＴＮＴＦ，ａ．ａ． ｌ-２２７）及びＣ-末端フラグメント（ＳＥＴＣＴＦ，ａ．ａ．７６-２７７）を備える組み換えタンパクと遺伝子キャリア転写のＳｋ-Ｈｅｐ１細胞が、ＥＭＱＡを確かにＳＥＴ拮抗剤とする影響を示し（左図）、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。ウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡが、全長ＳＥＴ及びＳＥＴＣＴＦのＰＰ２Ａｃの結合を顕著に減少させ、ＳＥＴＮＴＦの結合に影響しないことを示す（右図）。 ＣａｌｃｕＳｙｎ分析ソフトウエア（Ｂｉｏｓｏｆｔ， ケンブリッジ，英国）により、ＥＭＱＡとソラフェニブの組合せが、異なる肝がん細胞において、ＭＴＴテストによる細胞アポトーシス実験結果を示し、ＥＭＱＡとソラフェニブの協同効果を確認した。 フローサイトメトリー及びウエスタンブロット分析法により、肝がん細胞中でＥＭＱＡが、ソラフェニブの細胞アポトーシス促進効果を顕著に改善したことを示す。 ＥＭＱＡとソラフェニブの組合せが、肝がん腫瘍成長を顕著に抑制する腫瘍成長曲線図で、点は平均値（ｎ＝１０）を表し、＊Ｐ＜０．０５である。 ＥＭＱＡとソラフェニブの組合せが、肝がん腫瘍成長を顕著に抑制する腫瘍重量データ図で、柱は平均値を表し、ストリップは標準差を表し、＊Ｐ＜０．０５である。 それぞれ制御組及びＥＭＱＡとソラフェニブの組合せがＰＬＣ５異体移植腫瘍マウスの腫瘍のＰＰ２Ａ活性を治療することを示し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝１０）を表す（上図）。ウエスタンブロット分析法によりＰＬＣ５異体移植腫瘍マウスの腫瘍のｐ-Ａｋｔ、Ａｋｔ１及びＳＥＴの発現を分析する（下図）。 ウエスタンブロット分析法により、３種の異なる非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株が、ＥＭＱＡ及び／或いはパクリタキセルによりｐ-Ａｋｔをダウンレギュレーションされることを示す。 時間依存性の方式で、ＥＭＱＡ及びパクリタキセル結合により、Ａ５４９細胞株を処理したｐ-Ａｋｔ及びポリ（ＡＤＰ-リボース）ポリメラーゼ（ｐｏｌｙ（ＡＤＰ-ｒｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ＰＡＲＰ）の発現量を示す。 用量依存性の方式で、ＥＭＱＡ及びパクリタキセル結合により、Ａ５４９細胞株を処理したｐ-Ａｋｔ及びＰＡＲＰの発現量を示す。 フローサイトメトリー及びウエスタンブロット分析法により、ＥＭＱＡの、Mｙｃ-マークを備えるＡｋｔ過剰異所性発現のＡ５４９細胞に対する細胞アポトーシス効果を示し、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 制御組、パクリタキセル及び／或いはＥＭＱＡを利用し、Ａ５４９異体移植腫瘍マウスを治療した腫瘍成長曲線で、点は平均値を表し、＊Ｐ＜０．０５（各組治療ｎ＝１０）である。 制御組、パクリタキセル及び／或いはＥＭＱＡを利用し、Ａ５４９異体移植腫瘍マウスを治療した平均腫瘍重量で、柱は平均値を表し、ストリップは、標準差（ｎ＝１０）を表す。 ＰＰ２Ａ活性分析図で、柱は平均値を表し、ストリップは標準差（ｎ＝３）を表す。 ウエスタンブロット分析法により分析したＡ５４９異体移植腫瘍マウスの腫瘍溶解物のｐ-Ａｋｔ及びＡｋｔの発現量を示す。 治療を受けたマウスの体重変化を示し、点は平均値を表す。

以下に図面を参照しながら本発明を実施するための最良の形態について詳細に説明する。本発明の特徴を、以下の各種具体的実施形態及び特許申請の範囲の詳細な記述と図により明確に説明する。本発明名称と内容は、本発明技術内容の説明に用いたのみで、本発明を限定するものではない。本発明の精神に基づく等価応用或いは部品（構造）の転換、置換、数量の増減はすべて、本発明の保護範囲に含むものとする。

（図１Ａ〜１Ｇ）本発明のエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）派生物ＴＤ-５２がエルロチニブに比べ、ＨＣＣ細胞に対して好ましい細胞アポトーシス効果を備えることを示す。
（図２Ａ〜２Ｈ）ＨＣＣ細胞が、タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）を抑制することで、ｐ-Ａｋｔをダウンレギュレーションし、本発明のエルロチニブ派生物ＴＤ-５２の抗がん効果を確認する。
（図３Ａ〜３Ｄ）ＴＤ-５２が、Ｅｌｋ-１機能干渉を通して、ＣＩＰ２Ａの転写作用をダウンレギュレーションすることを示す。
（図４Ａ〜４Ｄ）生体内ＰＬＣ５マウスモデル及び臨床上肝がんサンプルにより、ＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-ｐ-Ａｋｔシグナルルートを実証する。
（図５Ａ〜５Ｆ）肝がん患者腫瘍組織中のＳＥＴ過度発現を示す。
（図６Ａ〜６Ｆ）本発明のエルロチニブ派生物（ＥＭＱＡ）をＳＥＴ拮抗剤とし、肝がん細胞アポトーシスを誘発する。
（図７Ａ〜７Ｅ）ＳＥＴを標的とする、ＰＰ２Ａ-調節ｐ-Ａｋｔダウンレギュレーションの機能強化のＥＭＱＡ抗がんメカニズムを説明する。
（図８Ａ〜８Ｅ）生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及び生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）において、ＥＭＱＡとソラフェニブの組合せ対抗作用が協同効果（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）を備えることを示す。
（図９Ａ〜９Ｄ）ＥＭＱＡ及びパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）結合が、ｐ-Ａｋｔをダウンレギュレーションでできることを示す。
（図１０Ａ〜１０Ｅ）生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）におけるＥＭＱＡとパクリタキセルの組合せの対抗作用の効果を示す。

他に定義がない限り、本文で用いるすべての技術及び科学用語は、本発明が属する技術領域の技術人員が通常理解可能な意味は相同である。本文で提起するすべての出版物は、引用方式で本文に組み入れ、開示と記述は、引用された出版物と関連のある方法及び／或いは材料である。

本文で使用する単数形式「一」（ａ、ａｎ）と「該」（ｔｈｅ）は本文で別の規定がない限り複数の対象を含む。そのため例えば、参照「サンプル」は、複数のこの類のサンプル及び本領域技術人員が周知の等同物を含む。
本文で使用する「ＥＭＱＡ」は、本発明で言うエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）派生物を表し、それはＴＤ-５２〜ＴＤ-９５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２７、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０２〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６０５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０７、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１２〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６２６、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２８〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６３１及びＴＤ-６３２化合物を含む。
「カルボキシル基」とは、原子団-Ｃ（Ｏ）ＯＲを指し、その内Ｒは本文に定義する水素、低炭素アルキル基、置換された低炭素アルキル基、アリール基、置換されたアリール基、及びその類似物である。
「ハロアルキル基」とは、アルキル基原子団の一個或いは多数のハロゲン原子が置換されたことを指し、このような実例は、トリフロロメチルを含むが、これに限定されない。
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素及びアスタチン（Astatine）である。

本発明中では、エルロチニブの構造とその生物活性との間の関係を研究し、エルロチニブの構造を修正した。本発明はこれに基づき、ＳＥＴ拮抗剤機能を備えるエルロチニブ派生物を開発した。しかも、がん常用薬物エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）及びパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）に比べ、これら化合物ががんなどのある種の疾病において、良好な治療効果を備えることを偶然発見した。
本発明に基づき、本発明新設計の化合物は、ＳＥＴ拮抗剤として用いることができ、しかもＳＥＴの発現量抑制を特徴とする肝がん、白血病、肺がん、乳がん、腎がん、甲状腺がん、頭部及び頸部がんなどの疾病或いは病的症状を治療できる。
本発明の化合物は、ＳＥＴ-ＰＰ２Ａ結合を干渉し、こうしてＰＰ２Ａを活性化しがん細胞をアポトーシスさせる効果を備え、そのため本発明の化合物は、新しいターゲットメカニズムを通して、代替えの治療選択を提供する。該選択は、伝統医薬治療に対して耐性を有するがん治療において、極めて大きな役割を果たす可能性がある。

本発明の目的は、アリールアミンに置換可能なキノキサリンを提供し、それは式Ｉ（ａ）或いは式Ｉ（ｂ）の構造を備える。

その内Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含む。
本発明の実施形態において、該式Ｉ（ａ）化合物は、表１に記載する化合物ＴＤ-５２〜ＴＤ-６９及びＩＴＲＩ ＴＤ-６２７であるが、これに限定されない。

本発明の実施形態において、該式Ｉ（ｂ）化合物は、表２に記載する化合物ＴＤ-７０〜ＴＤ-８２であるが、これに限定されない。

本発明のもう一つの目的は、アリールアミンに置換可能なキノキサリンを提供し、それは式Ｉ（ｃ）の化学構造を有する。

その内、Ｒ^４及びＲ^５は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含み、及びその内Ｘはハロゲン、ハロアルキル基、メトキシ基、ニトロ基、アミン基、アミド基、カルボキシル基、酸性基、ベンゾフェノン基或いはメトキシカルボニル基である。

本発明の実施形態において、該式Ｉ（ｃ）化合物は、表３に記載する化合物ＴＤ-８３〜ＴＤ-９５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０２〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６０４、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０７、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１３〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６１８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２０〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６２４及びＩＴＲＩ ＴＤ-６２９であるが、これに限定されない。

本発明のもう一つの目的は、アリールアミンに置換可能なキノキサリンを提供し、それは式Ｉ（ｄ）の構造を備える。

その内、Ｒ^６及びＲ^７は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含む。

本発明の実施形態において、該式Ｉ（ｄ）化合物は、表４に記載する化合物ＩＴＲＩ ＴＤ-６０５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１２、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１９、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２６、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６３０、ＩＴＲＩ ＴＤ-６３１であるが、これに限定されない。

本発明のもう一つの目的は、化合物を提供し、それは式ＩＩの構造を含む。

その内、Ｒ^８及びＲ^９は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上に他の官能基の原子或いは原子団を有し、しかも該置換可能なフェニルは

或いは

を含み、及びその内、ＹはＣＯ或いは（ＣＨ_２）_ｎで、ｎ＝１-３、Ｚ＝ＣＯＯＲ^１０で、或いは置換官能基のベンゼンを有し、Ｒ^１０は芳香基或いはアルキル基置換基である。

本発明の実施形態において、該式ＩＩ化合物は以下に示す。

本発明の化合物は合成後に、色層分析法或いは結晶法或いは本領域中公知の任意の他の適当な方法を通して、さらに純化される。

本発明は医薬組成物を提供し、一種或いは多種の上述の化合物及び医薬上受け入れ可能な賦形剤を有する。
本発明の医薬組成物は、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）とがんタンパクＳＥＴとの結合の阻害に用いられ、以ってＰＰ２Ａの細胞内での生物活性を増加し、或いはＰＰ２Ａの不活性化或いはがんタンパクＣＩＰ２ＡとＳＥＴの過度発現を特徴とする疾病或いは病的症状の治療に用いられる。また、上述の任意の化合物を、ＰＰ２Ａの細胞内での発現量増加、或いはがんタンパクＳＥＴ拮抗剤に用い、或いは本文に記載するＰＰ２Ａの発現量減少或いはＳＥＴ過度発現を特徴とする疾病或いは病的症状の治療に用い、及び該各疾病を治療する薬剤の製造に用いることも本発明の範囲内である。

本発明はＰＰ２Ａ増加、或いはがんタンパクＳＥＴの細胞内での発現量減少、或いは生物活性の方法を提供し、該細胞と有効量の本文に記載する化合物或いは医薬組成物を接触させる。
本発明はさらに、ＰＰ２Ａの個体中で、ＰＰ２Ａの不活性化或いはＳＥＴ過度発現を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する方法を提供し、本文に記載する化合物或いは医薬組成物を含み、有効量で該個体に投与する。

本発明の化合物は、ＰＰ２Ａの不活性化或いはがんタンパクＳＥＴ過度発現を特徴とする疾病或いは病的症状の治療に用いられる。
本発明の化合物は、単独或いは以医薬組成物の形式で、ヒト患者に一剤量投与される。該医薬組成物は、適当な賦形剤或いは賦形剤と混合され、ＰＰ２Ａの発現量減少或いはがんタンパクＳＥＴ過度発現を特徴とする各種の病的症状を治療或いは改善する。因子（例えばＰＰ２Ａ）の発現量或いは生物活性の増加或いは減少は、タンパク質或いはＲＮＡなどの該因子の遺伝子産物を通して容易に測定できる。個体の検体（例えば、血液或いは生体組織由来）中において、酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット分析法及びノースプロット分析法などの本領域公知の検査測定方法を使用し、そのＲＮＡ含量、発現タンパク及びその類似物の構造及び／或いは活性を体外分析する。本発明に基づき、ＰＰ２Ａの不活性化或いはがんタンパクＳＥＴ及びＣＩＰ２Ａ過度発現を特徴とする疾病或いは病的症状の具体的な実例は、がん（例えば肝がん、白血病、肺がん、乳がん、腎がん）及び骨粗しょう症を含むが、これに限定されない。

「治療」とは、該特定失調或いは病的症状の予防、或いは特定失調或いは病的症状と関係が有る症状の減軽及び／或いは該症状の予防或いは除去を含む。
具体的には、「個体」はヒトなどの動物であるが、ペット（例えば、犬、猫及びその類似物）、経済動物（例えば、牛、羊、豚、馬及びその類似物）或いは実験用動物（例えば、ラット、マウス、ハムスター及びその類似物）を含む。該動物は、本文で記載する治療を必要とする。
本文に記載する「有効量」とは、個体上で治療効果を達成するのに必要な活性剤の量を指し、単独、或いは一種または多種の他の活性剤の組合せ使用を含む。投薬ルート、賦形剤の使用、及び他の活性剤との共同使用等の異なる状況に関しては、本領域の技術人員の確認の下、有効量はそれぞれ異なる。

適した投薬ルートは、口服、直腸投薬、粘膜投薬、或いは消化器投薬を含む。非経口投薬は、筋肉内、皮下、髄内注射、及び鞘内、直接心室内、静脈、腹膜、鼻腔内或いは眼内注射を含み、補充或いは緩釈剤型を用いることができる。

本発明の医薬組成物は、本領域公知の方式で製造される。それは例えば、常用の混合、溶解、乳化、エムベディング、コーティング、或いはフリーズドライ製造である。そのため、本発明が使用を提供する医薬組成物は、通常の方式で調製され、賦形剤及び／或いは助剤を含む一個或いは多数の生理上受け入れ可能な賦形剤を使用することができ、これにより活性化合物の加工と医薬上使用可能な製剤を助ける。本文で用いる「受け入れ可能」とは、該賦形剤は、該組成物の活性成分と互換でき（しかも好ましくは、該活性成分を安定させられる）、しかも治療を受ける個体に有害でないということである。適当な剤型は、選択する投薬ルートにより決まる。

具体的には、注射薬の場合には、本発明の化合物は、ハンク緩衝液、リンガー緩衝液或いは生理食塩緩衝液などの生理的に互換できる緩衝液内に調製する。
経口薬の場合には、本発明の化合物の調製は、該活性化合物と、乳糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール、コーンスターチ、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、及び／或いはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ，ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）などの本領域公知の医薬上受け入れ可能な賦形剤とを結合し、本発明の化合物をタブレット、錠剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液及びその類似物に調製することができる。
吸入薬の場合には、本発明の化合物は、自加圧容器或いは噴霧器噴出のエアゾール噴霧に調製し、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素或いは他の適した気体などの適当な推進剤を組み合わせて使用できる。

実施形態１ 化学合成
具体的には、以下に示す反応式は、本発明のある化合物の合成スキームＩ〜Ｖを提供する。
１．１ 合成スキームＩ

本発明の化合物は、上述の合成スキームＩを通して調製される。具体的な合成スキーム実施形態の記述を参照されたい。
合成スキーム１において、先ず１当量の２，３-ジクロロキノキサリン（２，３-ｄｉｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ）及び２．３当量のアニリン類似物を、３〜５ｍＬのイソプロパノール（ｉｓｏｐｒｏｐｙ ａｌｃｏｈｏｌ）中に加え、続いて２モル濃度のＨＣｌを加える。続いて、混合物を６０℃まで加熱し一晩置くと、白色或いは黄色の固体を生じる。反応完成後に、該反応の混合物をイソプロパノールで洗浄し、２個の置換基のキノキサリン派生物を得る。該産物をさらに、酢酸エチル／ヘキサンを使用し、順相クロマトグラフィーを通して純化し、ＴＤ-５２〜ＴＤ-６９及びＩＴＲＩ ＴＤ-６２７等化合物を得る。

１．１．１ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（３-エチニルフェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-ｅｔｈｙｎｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-５２）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ３．４７（ｓ， １Ｈ）δ７．１６（ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２９-７．３３（ｍ， ２Ｈ）， ７．５６（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８４（ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９６（ｓ， １Ｈ）である。

１．１．２ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-フェノキフェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-ｐｈｅｎｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-５３）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．０２（ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．０８-７．１３（ｍ， ３Ｈ）， ７．３２（ｓ， １Ｈ）， ７．３８（ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５３（ｓ， １Ｈ）， ７．９２（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）である。

１．１．３ Ｎ^２，Ｎ^３-ジベンジルキノキサリン-２，３-ジアミン（ＴＤ-５４）（Ｎ^２，Ｎ^３-ｄｉｂｅｎｚｙｌｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-５４）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ４．７２（ｓ， ２Ｈ）， ７．１８-７．２４（ｍ， ２Ｈ）， ７．２９（ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３８（ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５２（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）である。

１．１．４ Ｎ^２，Ｎ^３-ジフェニルキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｄｉｐｈｅｎｙｌｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ ）（ＴＤ-５５）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ７．１０（ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９（ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５８（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３（ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）である。

１．１．５ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（３-クロロフェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-５６）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．１４（ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３８-７．４３（ｍ， ２Ｈ）， ７．６０（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０２（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２４（ｓ， １Ｈ）である。

１．１．６ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（２-フルオロ-５-メチルフェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（２-ｆｌｕｏｒｏ-５-ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-５８）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ２．４２（ｓ， ３Ｈ）， ７．２３（ｓ， １Ｈ）， ７．２５（ｄ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１（ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６１（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）である。

１．１．７ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（３-エチルフェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-５９）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４） δ １．２３（ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， ２．６１（ｑ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．８６（ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１（ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２６（ｓ， １Ｈ）， ７．５４-７．５６（ｍ， ２Ｈ）， ７．６２（ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）である。

１．１．８ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（３-（トリフロロメチル）フェニル） キノキサリン-２，３ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-６０）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．４０（ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５８（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６２（ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１９（ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３４（ｓ， １Ｈ）， ９．３３（ｓ， １Ｈ）である。

１．１．９ ２，２'-（（キノキサリン-２，３-ジイルビス（アザネジイル））ビス（４，１-フェニレン；））アセトニトリル（２，２'-（（ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉｙｌｂｉｓ（ａｚａｎｅｄｉｙｌ））ｂｉｓ（４，１-ｐｈｅｎｙｌｅｎｅ））ｄｉａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）（ＴＤ-６２）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ４．０３（ｓ， ２Ｈ）， ７．３５-７．３９（ｍ， ３Ｈ）， ７．５８（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９９（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）である。

１．１．１０ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-クロロ-３-（トリフロロメチル）フェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-ｃｈｌｏｒｏ-３-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-６３）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ７．２８（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０３（ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３４（ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）である。

１．１．１１ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-（トリフルオロメトキシ）フェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-６５）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ７．２６（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３２（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５７（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９０（ｄ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）である。

１．１．１２ ５，５'-（キノキサリン-２，３-ジイルビス（アザネジイル）ビス（２-メチルフェノール）（５，５'-（ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉｙｌｂｉｓ（ａｚａｎｅｄｉｙｌ））ｂｉｓ（２-ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｏｌ））（ＴＤ-６６）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ２．２４（ｓ， ３Ｈ）， ７．０３（ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１（ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２６（ｓ， １Ｈ）， ７．４４（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６７（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）である。

１．１．１３ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-（ペンタフルオロスルファニル）フェニル） キノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-（Ｐｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｔｈｉｏ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＴＤ-６８）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＨ-ｄ_４）δ７．４１（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６７（ｄｄ， Ｊ ＝ ３．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９（ｄ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．０３（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）である。

１．２ 合成スキームＩＩ

本発明の化合物は、上述の合成スキームＩＩを通して調製して得られる。具体的な合成スキームは、実施形態の記述を参照されたい。
合成スキームＩＩにおいて、先ず１当量の２，３-ジクロロキノキサリン（２，３-ｄｉｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ）及び１当量のアニリン類似物を、３〜５ｍＬのイソプロパノール中に加え、次に１モル濃度のＨＣｌを加える。続いて混合物を電子レンジで１５０℃まで３０分加熱する。

１．２．１ ３-クロロ-Ｎ-（３，５-ジクロロフェニル）キノキサリン-２-アミン（３-ｃｈｌｏｒｏ-Ｎ-（３，５-ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-２-ａｍｉｎｅ）（ＴＤ-７８）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．２０-７．２８（ｍ， ４Ｈ）， ７．５２（ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３５（ｓ， ２Ｈ）， ９．８２（ｓ， １Ｈ）である。

１．２．２ ３-クロロ-Ｎ-（４-クロロ-３-（トリフロロメチル）フェニル） キノキサリン-２-アミン（３-ｃｈｌｏｒｏ-Ｎ-（４-ｃｈｌｏｒｏ-３-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-２-ａｍｉｎｅ）（ＴＤ-７９）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．２１-７．２６（ｍ， ３Ｈ）， ７．４７（ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４７（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８９（ｓ， １Ｈ）， ９．９７（ｓ， １Ｈ）である。

１．２．３ ３-クロロ-Ｎ-（４-（トリフルオロメトキシ）フェニル） キノキサリン-２-アミン（３-ｃｈｌｏｒｏ-Ｎ-（４-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-２-ａｍｉｎｅ）（ＴＤ-８０）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．１９-７．２０（ｍ， ３Ｈ）， ７．３４（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５０（ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２８（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ９．６５（ｓ， １Ｈ）である。

１．２．４ ３-クロロ-Ｎ-（４-（ペンタフルオロスルファニル） フェニル） キノキサリン-２-アミン（３-ｃｈｌｏｒｏ-Ｎ-（４-（Ｐｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｔｈｉｏ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-２-ａｍｉｎｅ）（ＴＤ-８１）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ７．２２-７．２７（ｍ， ３Ｈ）， ７．５４（ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８４（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．３８（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ９．９０（ｓ， １Ｈ）である。

１．３ 合成スキームＩＩＩ

本発明の化合物は、上述の合成スキームＩＩＩを通して調製して得られる。具体的な合成スキーム実施形態の記述を参照されたい。
合成スキームＩＩＩでは、先ず４個位置に修飾があるフェニレンａを２ｍＬの濃ＨＣｌに溶解させ、１８０℃まで加熱し一晩置く。該混合物に水ろ過を通して乾燥後、沈殿した中間産物ｂを得る。続いて、該中間産物ｂをＰＯＣｌ３に溶解させ、１１０℃まで３時間加熱する。反応混合物を室温まで冷やした後、それを冰水中に入れ沈殿物を生じる。該沈殿物をオーブンで乾燥させ、中間産物ｃを得る。アニリン及び中間産物ｃをＩＰＡ中に溶解させ、次に２モル濃度ＨＣｌを加え、続いて混合物を６０℃まで加熱し一晩置く。該混合物にＩＰＡろ過を利用し沈殿物を得て、該沈殿物にさらにクロマトグラフィーを使用して純化し、ＴＤ-８３〜ＴＤ-９５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０２〜ＩＴＲＩ ＴＤ-６０４、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０７、ＩＴＲＩ ＴＤ-６０８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１３ 至 ＩＴＲＩ ＴＤ-６１８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２０からＩＴＲＩ ＴＤ-６２４、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２９等の化合物を得る。

１．３．１ メチル ２，３-ビス（（４-（トリフルオロメトキシ）フェニル）アミン）キノキサリン-６-カルボキシレート（ｍｅｔｈｙｌ ２，３-ｂｉｓ（（４-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-６-ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（ＴＤ-９４）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ_６）δ３．８４（ｓ， ３Ｈ）， ７．３８（ｄｄ， Ｊ ＝ ４．４， ８．０ Ｈｚ， ４Ｈ）， ７．５６（ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３（ｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０（ｄ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１８（ｔ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ４Ｈ）である。

１．３．２ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-メトキシフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６０２）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）３．７９（ｓ， ６Ｈ）， ７．００（ｄｄ， ４Ｈ）， ７．５６（ｄ， １Ｈ）， ７．８９（ｄｄ， ４Ｈ）， ８．０３（ｄ， １Ｈ）， ８．２３（ｓ，１Ｈ）， １０．０（ｂ，２Ｈ）である。

１．３．３ Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-エチニルフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-ｅｔｈｙｎｙｌｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６０４）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）４．１９（ｓ，１Ｈ），４．２０（ｓ，１Ｈ） ７．２３（ｄｄ， ２Ｈ）， ７．４２（ｍ， ３Ｈ）， ７．６４（ｄ， １Ｈ）， ８．１１（ｂ， ４Ｈ）， ８．２３（ｓ，１Ｈ）， １０．１（ｂ，２Ｈ）である。

１．３．４ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-トリフロロメチル）フェニル） キノキサリン-２，３，６-トリアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３，６-ｔｒｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６０７）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ５．４（ｓ， ２Ｈ）， ６．７（ｓ， １Ｈ）， ６．８２（ｄ， １Ｈ）， ７．３５（ｄ， １Ｈ）， ７．６５（ｄ， ２Ｈ）， ７．６８（ｄ， ２Ｈ）， ７．９２（ｄ， ２Ｈ）， ８．０８（ｄ， ２Ｈ），（９．０４， １Ｈ ），（９．２０， １Ｈ）である。

１．３．５ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（３-メトキシフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６０８）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）３．９８（ｓ，３Ｈ）， ３．９７（ｓ， ３Ｈ）， ６．６８（ｄｄ， ２Ｈ）， ７．２７（ｔ， ２Ｈ）， ７．４３（ｄ， １Ｈ）， ７．４４（ｄ， １Ｈ）， ７．６１（ｓ，１Ｈ）， ７．６２（ｍ， ２Ｈ）， ８．０５（ｄ， １Ｈ）， ８．２５（ｓ， １Ｈ）， ９．２８（ｓ， １ Ｈ）， ９．３５，（ｓ， １Ｈ）である。

１．３．６ ３-（２-（３-ヒドロキシフェニルアミノ）-６-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）フェノール（３-（２-（３-ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｅｎｏｌ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６１３）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）６．６８（ｄｄ， ２Ｈ）， ７．０９（ｍ， ２Ｈ）， ７．１８（ｍ， ２Ｈ）， ７．５８（ｄ， １Ｈ）， ７．６１（ｄ，１Ｈ）， ７．７０（ｄ， １Ｈ）， ８．１０（ｄ， １Ｈ）， ８．３１（ｓ， １ Ｈ）， ９．６０-１０．１，（ｂ， ４Ｈ）である。

１．３．７ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（３-ブロモフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（３-ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６１８）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）７．００（ｄｄ， １Ｈ）， ７．１９（ｍ， ２Ｈ）， ７．３０（ｍ， １Ｈ）， ７．５８（ｄ， １Ｈ）， ７．３９（ｄｄ， ２Ｈ）， ７．６２（ｄ， １Ｈ）， ８．０５（ｍ， ３Ｈ）， ８．３８（ｓ， １ Ｈ）， １０．２-１０．６，（ｂ， ２Ｈ）である。

１．３．８ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-フルオロフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６２０）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）７．２５（ｍ， ４Ｈ）， ７．５９（ｄ， １Ｈ）， ７．８８（ｍ， ４Ｈ）， ８．０６（ｄ， １Ｈ）， ８．２６（ｓ， １Ｈ）， ９．３４（ｓ， １Ｈ）， ９．５１（ｓ， １Ｈ）である。

１．３．９ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-クロロ-３-フルオロフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-ｃｈｌｏｒｏ-３-ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ（ＩＴＲＩ ＴＤ-６２４）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）７．４１（ｄｄ， ２Ｈ）， ７．６８（ｍ， ３Ｈ）， ７．９５（ｓ， １Ｈ）， ８．０８（ｓ， １Ｈ）， ８．１０（ｄ， １Ｈ）， ８．３０（ｓ， １Ｈ）， １０．０（ｂ， ２Ｈ）である。

１．３．１０ Ｎ^２，Ｎ^３-ビス（４-フェニルスルフォンアミド）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^２，Ｎ^３-ｂｉｓ（４-ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６２９）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）７．２９（ｂ， ４Ｈ）， ７．７４（ｄ， １Ｈ）， ７．８８（ｄ， ４Ｈ）， ８．２０（ｍ， ５Ｈ）， ８．４２（ｓ， １Ｈ）， １０．１４（ｓ， １Ｈ）， １０．３０（ｂ， １Ｈ）である。

１．４ 合成スキームＩＶ
本発明の化合物は上述の合成スキームＩＶを通して調製して得られる。具体的な合成スキームは、実施形態の記述を参照されたい。
合成スキームＩＶでは、先ずそれぞれ１当量の４-（２-クロロ-７-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）フェノール（４-（２-ｃｈｌｏｒｏ-７-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｅｎｏｌ）、３-クロロ-Ｎ-（４-メトキシフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２-アミン（３-ｃｈｌｏｒｏ-Ｎ-（４-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）- ６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-２-ａｍｉｎｅ）、４-（２-クロロ-７-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）-３-メチルフェノール（４-（２-ｃｈｌｏｒｏ-７-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）-３-ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｏｌ）或いは３-クロロ-Ｎ-（５-メチル-１Ｈ-ピラゾル-３-イル）-６-ニトロキノキサリン-２-アミン（３-ｃｈｌｏｒｏ-Ｎ-（５-ｍｅｔｈｙｌ-１Ｈ-ｐｙｒａｚｏｌ- ３-ｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-２-ａｍｉｎｅ）と１．２当量のアニリン化合物を３〜５ｍＬのＤＭＦに加える。次に１１０℃まで３時間加熱する。反応完成後、該反応混合物に加水し、酢酸エチルにより抽出し、酢酸エチルを水洗、乾燥後に減圧抽幹し、粗産物を得る。粗産物にさらに酢酸エチル／ヘキサンを使用し、順相クロマトグラフィーを通して純化し、それぞれＩＴＲＩ ＴＤ-６０５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１２、ＩＴＲＩ ＴＤ-６１９、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２５、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２６、ＩＴＲＩ ＴＤ-６２８、ＩＴＲＩ ＴＤ-６３０、ＩＴＲＩ ＴＤ-６３１等化合物を得る。

１．４．１ Ｎ^３-（３-エチニルフェニル）-Ｎ^２-（４-メトキシフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^３-（３-ｅｔｈｙｎｙｌｐｈｅｎｙｌ）-Ｎ^２-（４-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＲ-６０５）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ３．７８（ｓ， ３Ｈ），４．２１（ｓ， １Ｈ）， ７．００（ｄ， ２Ｈ）， ７．２１（ｄ， １Ｈ）， ７．４２（ｔ， １Ｈ）， ７．５９（ｄ， １Ｈ）， ８．０１（ｄｄ， ２Ｈ）， ８．０２（ｄ， ２Ｈ）， ８．０７（ｄ， １Ｈ）， ８．２６（ｓ， １Ｈ）， ９．３４（ｓ， １Ｈ）， ９．４１（ｓ， １Ｈ）である。

１．４．２ ３-（２-（４-メトキシフェニルアミノ）-６-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）フェノール（３-（２-（４-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｅｎｏｌ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６１２）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ３．７８（ｓ， ３Ｈ），４．２１（ｓ， １Ｈ）， ７．００（ｄ， ２Ｈ）， ７．２１（ｄ， １Ｈ）， ７．４２（ｔ， １Ｈ）， ７．５９（ｄ， １Ｈ）， ８．０１（ｄｄ， ２Ｈ）， ８．０２（ｄ， ２Ｈ）， ８．０７（ｄ， １Ｈ）， ８．２６（ｓ， １Ｈ）， ９．３４（ｓ， １Ｈ）， ９．４１（ｓ， １Ｈ）である。

１．４．３ ４-（２-（３-エチニルフェニルアミノ）-７-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）フェノール（４-（２-（３-ｅｔｈｙｎｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ）-７-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｅｎｏｌ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６１９）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ４．１９（ｓ， １Ｈ）， ６．８１（ｄｄ， ２Ｈ）， ７．２０（ｄ， １Ｈ）， ７．２２（ｔ， １Ｈ）， ７．５４（ｄ， １Ｈ）， ７．６０（ｄｄ， ２Ｈ）， ８．００（ｄ， ２Ｈ）， ８．０５（ｄ， １Ｈ ）， ８．２３（ｓ， １Ｈ）， ９．３１（ｂ， ２Ｈ）， ９．３９（ｂ， １Ｈ）である。

１．４．４ ４-（２-（３-エチニルフェニルアミノ）-７-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）-３-メチルフェノール（４-（２-（３-ｅｔｈｙｎｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ）-７-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）-３-ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｏｌ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６２５）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ２．０５（ｓ， ３Ｈ）， ４．２１（ｓ， １Ｈ）， ６．６５（ｄ， １Ｈ）， ６．６７（ｓ， １Ｈ）， ７．１３（ｄ， １Ｈ）， ７．２１（ｄ， １Ｈ）， ７．４２（ｍ， ２Ｈ）， ８．０５（ｄ， １Ｈ ）， ８．０５（ｍ， ２Ｈ），８．２６（ｓ， １Ｈ）， ９．１０（ｓ， １Ｈ）， ９．２５（ｓ， １Ｈ）， ９．３９（ｓ， １Ｈ）である。

１．４．５ Ｎ^３-（４-（トリフロロメチル）フェニル）-Ｎ^２-（４-メトキシフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ^３-（４-（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）-Ｎ^２-（４-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６２６）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ３．８９（ｓ， ３Ｈ），７．００（ｄ， ２Ｈ）， ７．５９（ｄ， １Ｈ）， ７．７７（ｍ， ４Ｈ）， ８．１１（ｄ， １Ｈ）， ８．１７（ｄ， ２Ｈ）， ８．３６（ｓ， １Ｈ ）， ９．４７（ｓ， １Ｈ）， ９．５６（ｓ， １Ｈ）である。

１．４．６ ４-（２-（５-メチル-１Ｈ-ピラゾル-３-イルアミン）-６-ニトロキノキサリン-３-イルアミン）フェノール（４-（２-（５-ｍｅｔｈｙｌ-１Ｈ-ｐｙｒａｚｏｌ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-３-ｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｅｎｏｌ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６２８）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ２．２８（ｓ， ３Ｈ），６．８０（ｄ， ２Ｈ）， ６．８８（ｓ， １Ｈ）， ７．６４（ｄ， １Ｈ）， ７．６５（ｄ， ２Ｈ）， ８．０３（ｄ， １Ｈ）， ８．２１（ｓ， １Ｈ ）， ９．２８（ｓ， １Ｈ）， ９．３０（ｓ， １Ｈ）， １０．２（ｓ， １Ｈ）である。

１．４．７ Ｎ^３-（４-フルオロフェニル）-Ｎ^２-（４-メトキシフェニル）-６-ニトロキノキサリン-２，３-ジアミン（Ｎ３-（４-ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）-Ｎ２-（４-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）-６-ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ-２，３-ｄｉａｍｉｎｅ ）（ＩＴＲＩ ＴＤ-６３１）

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）δ３．７８（ｓ， ３Ｈ），７．００（ｄ， ２Ｈ）， ７．２６（ｔ， ２Ｈ）， ７．５７（ｄ， １Ｈ）， ７．９３（ｄ， ２Ｈ）， ７．９２（ｄｄ， ２Ｈ）， ８．０７（ｄ， １Ｈ ）， ８．２５（ｓ， １Ｈ）， ９．３１（ｓ， １Ｈ）， ９．４０（ｓ， １Ｈ）である。

１．５ 合成スキームＶ
本発明の化合物は、上述の合成スキームＶを通して調製して得られる。
合成スキームＶでは、先ず１当量の（２，３- ジクロロキノキサリン-６-イル）（フェニル）メタノン（（２，３-ｄｉｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-６-ｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈａｎｏｎｅ）と１．２当量の３-エチルベンゼンアミン（３-ｅｔｈｙｎｙｌｂｅｎｚｅｎａｍｉｎｅ）を、ＩＰＡ中で加熱回流５時間後に冷却し、析出した固体をさらにＩＰＡで洗浄し、得られた固体を、乾燥させ、産物ＴＤ-６３２（式ＩＩ）を得る。

１．５．１ ２，３-ビス（３-エチニルフェニルアミノ） キノキサリン-６-イル）（フェニル）メタノン（２，３-ｂｉｓ（３-ｅｔｈｙｎｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ）ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎ-６-ｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈａｎｏｎｅ）（ＴＤ-６３２）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ-ｄ６）４．２（ｓ，１Ｈ）， ４．１（ｓ，１Ｈ）．７．２４（ｄ， １Ｈ）， ７．２５（ｄ， １Ｈ），７．５６（ｄ， ２Ｈ）， ７．４０（ｍ ，２Ｈ）， ７．６（ｍ， ３Ｈ）， ７．６４（ｍ ３Ｈ） ，７．７９（ｍ ２Ｈ） ７．８２（ｓ １Ｈ），８．１５（ｂ，２Ｈ） ，９．２５（ｂ，２Ｈ）である。

実施形態２ 生物活性検査測定
２．１ 材料と方法
２．１．１ 試剤と抗体
ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（レイシャワフィルムコート錠）、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（タルセバフィルムコート錠）パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）は、それぞれバイエル製薬（Ｂａｙｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（ウェストヘーブン、コネチカット州）、ロッシュ製薬（Ｒｏｃｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（バーゼル、スイス）により提供する。オカダ酸（ｏｋａｄａｉｃ ａｃｉｄ，ＯＡ）は、ケイマンケミカル（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（アナーバー、ミシガン州）から購入し、及びｚ-ＶＡＤ-ｆｍｋは、シグマ（Ｓｉｇｍａ）（セントルイス、ミズーリ州）から購入する。生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）実験に関しては、各種薬物はすべてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させ、細胞培養は、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭダルベッコ改良Ｅａｇｌｅ培養基（ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ'ｓ ｍｅｄｉｕｍ）或いはＲＰＭＩ（Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）培養基中で行う。
生体内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）実験に関しては、培養基に加えた後、最終的なＤＭＳＯの濃度は０．１％である。免疫ドット分析に用いる抗体は、アンチ-ＣＩＰ２Ａ、アンチ-Ａｋｔ１、アンチ-ＰＡＰＰ、ａｎｔｉ-ＰＰ２Ａ-Ｃ、アンチ-ＰＰ２Ａ-Ａ、アンチ-ＰＰ２Ａ-Ｂ５５及びアンチ-Ｅｌｋ-１で、すべてサンタクルスバイオテクノロジー（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（サンディエゴ、カリフォルニア州）から購入する。他の抗体は、アンチ-システインプロテアーゼ-３（ａｎｔｉ-ｃａｓｐａｓｅ-３）及びアンチ-Ｐ-Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）で、これらはセルシグナリング（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）（ダンフォス、マサチューセッツ州）から購入する。

２．１．２ 細胞培養
Ｓｋ-Ｈｅｐ１、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５（ＰＬＣ）及びＨｅｐ３Ｂ細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（マナッサス、ヴァージニア州）から得る。Ｈｕｈ-７肝がん細胞株は、ヘルスサイエンス研究資源バンク（Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｂａｎｋ）（大阪，日本；ＪＣＲＢ０４０３）から得る。上述の細胞を、１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培養液中に維持し、３７℃の５％二酸化炭素を含む加湿インキュベーター中に置く。非小細胞肺がん細胞株Ｈ３５８、Ｈ４６０及びＡ５４９及び扁平上皮がんＮＣＩ-１７０３、Ｈ２１７０、Ｈ５２０、ＳＷ９００及びＮＣＩ-Ｈ２２６を含む他の細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（マナッサス、ヴァージニア州）から得て、以下の細胞検査測定に使用する。

２．１．３ 細胞アポトーシス分析
ＤＭＳＯ、ソラフェニブ、本発明のエルロチニブ派生物を処理した後、フローサイトメトリー（ｓｕｂ-Ｇ１）を使用し、アポトーシスの細胞を計量した。アネキシン-Ｖ／ヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）二重染色法を用いて、細胞アポトーシス及び壊死の数量を検査測定する。上述の２種の分析方式により、本発明のエルロチニブ派生物処理後にＨＣＣ細胞を収集し、ＰＩと単独培養して、ｓｕｂ-Ｇ１分析に使用し、及びアネキシン-Ｖ-ＦＩＴＣと組合せ培養する。フローサイトメトリーにより細胞組成物の分析を行う。システインプロテアーゼ及びせん断のＰＡＰＰを通して、ウエスタンブロット分析を使用し、本発明のエルロチニブ派生物の細胞死亡誘導効果を分析する。細胞質ヒストン関連のＤＮＡフラグメンテーションの酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）により、細胞死亡（ロッシュ、インディアナポリス、インディアナ州）を検査測定する。ウエスタンブロット分析及びフローサイトメトリーにより、本発明のエルロチニブ派生物及びｚ-ＶＡＤ-ｆｍｋ、システインプロテアーゼに共処理した効果を評価する。

２．１．４ ウエスタンブロット分析法
細胞とシステインプロテアーゼ-３、ＰＡＰＰ、Ｐ-Ａｋｔ、Ａｋｔ、ＣＩＰ２Ａ等を一定時間処理した後、細胞溶解物を、ウエスタンブロット分析法で分析する。

２．１．５ ｓｉＲＮＡを使用し遺伝子を除去
対照組（Ｄ-００１８１０-１０）及びＰＰ２Ａ-Ｃ（Ｌ-００１８１０-１０）を含むＳｍａｒｔ-ｐｏｏｌ ｓｉＲＮＡは、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（シカゴ、イリノイ州、１１１２１-１１１３３）から購入する。メーカーの操作ハンドブックに基づき、六孔盤内で、Ｄｈａｒｍａ-ＦＥＣＴ４染色液（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ社）を使用し、ｓｉＲＮＡ（最終濃度１００ ｎＭ）で、細胞の第一次染色４８時間を行う。その後培養液に交換し、次に細胞を、本発明のエルロチニブ派生物（２μＭ，４８時間）により、続いて収集した細胞に、ウエスタンブロット分析法及びフローサイトメトリーにより、細胞アポトーシス分析を行う。

２．１．６ 過渡性染色（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）
ＣＩＰ２Ａ ｃＤＮＡ（ＫＩＡＡ１５２４）及びＥｌｋ-１ ｃＤＮＡは、Ｏｒｉｇｅｎｅ社（ＲＣ２１９９１８及びＲＧ２０８９２１；ロックビル、メリーランド州）から購入する。
染色４８時間の後、細胞を、本発明のエルロチニブ派生物により一定時間処理した後、収集し、さらに分析を行う。

２．１．７ ＰＰ２Ａホスファターゼ活性
マラカイトグリーンリン複合物分析（ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎーｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｓｓａｙ）（ｕｐｓｔａｔｅバイオテクノロジー社、レークプラシッド、ニューヨーク州）を使用し、スレオニンリンペプチドから游離したリン酸塩を計測し、各細胞溶解物のタンパクホスファターゼ活性を確定する。先ず低洗浄剤溶解緩衝液（ｌｏｗ-ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）中で、ＨＣＣ細胞溶解液を調製する。７５０μＭホスホペプチド受質を含むＰＰ２Ａ-特定反応緩衝液（ミリポア社、ビルリカ、マサチューセッツ州）中で、ホスファターゼ分析を行う。３０℃で１０分培養後、マラカイト染色剤を加え、しかも６５０ｎｍ下で光密度を通過させ、游離したリン酸塩を測定する。サンプルの間の免疫沈殿タンパク質数量の差異により差異を招くことがないよう、ホスファターゼ活性は、各処理グループはどれも、免疫印跡検査測定及び定量のＰＰ２Ａ免疫沈殿数量標準化を経る。

２．１．８ ルシフェラーゼレポーターを確立し、ＣＩＰ２Ａプロモーター及び５’端検査測定を分析
上述研究に基づきＰＬＣ５細胞の遺伝子組ＤＮＡはエクソン１（-２０００ ｂｐから-１ ｂｐ）を含むＣＩＰ２Ａプロモーター上流区域は、ＰＣＲにより拡張し、及びレポーターキャリアにクローニングし、Ｆｒｉｅｆｌｙキャリア（ｐＧＬ４．１７）はＫｐｎＩ及びＢｇ／ＩＩ制限酵素カッティングを通して、ＰＣＲ拡張の引子区域-１０００／-１、-４００-／-１、-３００／-１、-１５０／-１、-１１０／-１はｐＧＬ４キャリアＫｐｎＩ及びＢｇ／ＩＩ制限酵素カッティング位置にクローニングされ、シークエンシングを通してクローニングのヌクレオチド配列を確認する。

２．１．９ 染色質免疫沈澱技術（ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ， ＣｈＩＰ）分析
Ｃｈｉｐ試剤組は、Ｎｏｖｕｓ生物社（ＮＢＰ１-７１７０９，リトルトン、コロラド州）から購入する。１×１０^７個のＰＬＣ５細胞数によりＣｈＩＰを行う。該細胞は、本発明のエルロチニブ派生物により１６時間処理し、３７％ホルムアルデヒドｖ／ｖ（Ｓｉｇｍａ社，Ｆ１６３５）が１％最終濃度から１％を達成し、室温下でＤＮＡ結合タンパクとＤＮＡとを１０分間架橋結合する。架橋結合後、該細胞は、プロテアーゼ抑制剤混合物（Ｃｏｃｋｔａｉｌ）を含む１倍冰ＰＢＳにより２回洗浄し、細胞を収集し、８００×ｇで５分間遠心分離し、４００ μｌのプロテアーゼ抑制剤混合物（Ｃｏｃｋｔａｉｌ）を含む溶解緩衝液を再び懸濁させる。続いて、該細胞を、６回パルス超音波処理する。各パルスは５０％で１５秒出力し、各パルスの間は６０秒開ける。４℃下で、細胞溶解物を、１２５００×ｇで５分間遠心分離し、Ｅｌｋ１或いはウサギＩｇＧ抗体を加え、陰性対照組で免疫沈殿を行う。４℃下で、該免疫複合物を２５ μｌタンパク質Ａ／Ｇ磁性ビーズ処理を行い、沈殿反応を１時間行う。４００μｌで緩衝液を脱水し、タンパク質-ＤＮＡ複合物は、磁性ビーズから洗浄される。９５℃下でタンパク質-ＤＮＡの架橋結合は、８ μｌ ５ＭのＮａＣｌを経て、架橋結合を１５分間行う。
スピンコラム（ｓｐｉｎ ｃｏｌｕｍｎ）を使用しＤＮＡを純化し、２μｌ ＤＮＡをとり、半定量ＰＣＲ反応拡張ＣＩＰ２Ａプロモーター区域（-１３９／-１６ｂｐ）を行う。

２．１．１０ 異体移植（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）腫瘍の成長
オスのＮＣｒ無胸腺ヌードマウス（５-７週齢）は、国家実験動物センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）（台北、台湾）から得る。これらマウスを使用して行うすべての実験プロセスは、国立台湾大学批准の実験操作プロセスに基づく。１×１０^６個のＰＬＣ５或いはＡ５４９細胞数を、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（マトリゲル、ＢＤバイオテクノロジー社、ベッドフォード、マサチューセッツ州）を含み血清を含まない培養基中に懸濁させる。マウス腫瘍が１００-１５０ｍｍ^３になったら、マウスに対して強制経口投与で実験予定の治療を行う。例えば、毎日１kg当たり１０ｍｇのソラフェニブ、本発明のエルロチニブ派生物或いは制御組４間実験予定の治療を行う。

２．１．１１ 免疫組織化学染色法
パラフィンエムベディングのＨＣＣ組織スライド（４ ｍｍ）を、ポリ-１-リジンコーテッドスライド（ｐｏｌｙ-１-ｌｙｓｉｎｅ-ｃｏａｔｅｄ ｓｌｉｄｅｓ）上で、エムベディングを除去し、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ（ｐＨ７．４）及び１５０ｍＭ塩化ナトリウム洗浄し、カタラーゼ、メタノール及び３％過酸化物により抑制（ｑｕｅｎｃｈｅｄ）する。続いて１００℃加圧加熱室内で、スライドを１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ６．０）に２０分間置く。１：２００希釈のｐ-Ａｋｔ１／２／３（Ｔｈｒ ３０８）-抗体（ａｂ８８０５，ａｂｃａｍ社、ケンブリッジ）及び以１：１００希釈のＣＩＰ２Ａ抗体（ａｂ８４５４７，ａｂｃａｍ社，ケンブリッジ）により室温下で１時間処理し、スライドをＰＢＤで完全に３回洗浄する。ＥｎＶｉｓｉｏｎカタラーゼ検査測定システム／ＤＡＢ ウサギ／マウス試剤組（Ｄａｋｏ社、グロススープ）を使用し、すでに結合した抗体を検査する。続いて、該スライドをヘマトキシリン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）で反染色する。マウスパラフィンエムベディングスライド腎組織とヒト結腸がんとを、それぞれｐ-Ａｋｔ１／２／３及びＣＩＰ-２Ａの陽性対照組とする。陰性対照組は、ＰＢＳにより初級抗体を置換する。認証を通過した病理学者が、半定量の染色強度に基づき、ｐ-Ａｋｔ１／２／３及びＣＩＰ-２Ａの発現を評価する。染色強度の評価は、負、弱、中等及び強である。

２．２．１２ 表面プラズモン共鳴（Ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）
本発明は、全長ＳＥＴ及び裁断ＳＥＴの、ＰＰ２Ａｃ（ＰＰ２Ａの触媒領域）への結合親和力、及び本発明のエルロチニブ派生物のＳＥＴ及びＰＰ２Ａｃを干渉する効果を分析する。ＰＰ２Ａｃ-ＧＳＴ組み換えタンパクを、ＧＳＴ捕捉抗体を備えるＣＭ５チップに結合させる。注射を通して、異なる濃度の本発明のエルロチニブ派生物と固定濃度のＳＥＴ組合せタンパク質、或いは固定剤量の本発明のエルロチニブ派生物の異なる濃度の裁断ＳＥＴタンパク質は、センサーグラム（ｓｅｎｓｅｒｇｒａｍ）に示す。ＰＰ２Ａｃ-ＧＳＴ組み換えタンパクは、アブノバ社（Ｈ００００５５１５，Ａｂｎｏｖａ社，台湾）から購入し、及びＳＥＴ-Ｈｉｓ組み換えタンパクは、Ｇｅｎｗａｙ社（ＧＷＢ-ＡＴＧ３１９）から購入する。

２．２．１３統計分析
腫瘍成長データの平均腫瘍体積±Ｓ．Ｅ．を、独立サンプルｔ-検証実験と比較する。臨床サンプルはΧ２-検証実験と比較する。両側検証実験Ｐ値＜０．０５で、顕著な意義があるとみなす。すべての統計分析は、Ｗｉｎｄｏｗｓソフトウエアを支援するＳＰＳＳソフトウエア計算（第１７．０版，ＳＰＳＳ社，シカゴ、イリノイ州）を採用する。

結果
２．２．１ 本発明のエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）派生物はＨＣＣ細胞アポトーシスを拡大
本発明は、エルロチニブ派生物ＴＤ-５２及びエルロチニブにより、ＨＣＣ細胞中抗がん活性の比較を行った。本発明は、ＭＴＴ分析を使用し、ＨＣＣ細胞の、ＴＤ-５２及びエルロチニブに４８時間暴露後の細胞活性を実証し、ＤＭＳＯ処理により対照組とした。その結果は図１Ａに示す。ＨＣＣ細胞株（ＨＡ２２Ｔ、Ｈｅｐ３Ｂ、ＰＬＣ５及びＨｅｐ３Ｂを含む）において、ＴＤ-５２のがん細胞活性に対する減少が、エルロチニブよりすぐれていることを測定した。その内、ＨＡ２２Ｔ（ＩＣ_５０＝０．９μｍｏｌ／ｌ）、Ｈｅｐ３Ｂ（ＩＣ_５０＝０．９μｍｏｌ／ｌ）、ＰＬＣ５（ＩＣ_５０＝０．８μｍｏｌ／ｌ）及びＳｋ-Ｈｅｐ１（ＩＣ_５０＝１．２μｍｏｌ／ｌ）を含む。細胞アポトーシスの程度をさらに確認するため、４個の細胞株を、ＴＤ-５２及びエルロチニブにより２４時間処理後、フローサイトメトリーによりｓｕｂ-Ｇ１細胞の比率を確認した。図１Ｂに示す通り、用量依存性下でｓｕｂ-Ｇ１分析はＭＴＴ分析と同様の結果を示した。つまり、ＴＤ-５２はエルロチニブに比べ、より抗がんの効果を備える。
ＴＤ-５２抗がんの特性をさらに確認するため、本発明は、アネキシン-Ｖ／ＰＩ二重染色法、ウエスタンブロット分析、細胞週期分析及びＤＮＡフラグメンテーション分析（図１Ｃ〜図１Ｅ）を行う。剤量を徐々に増やしながら、アネキシン-Ｖ／ＰＩ二重染色法により、細胞アポトーシス及び細胞壊死の比率を分析する。その結果、２μＭ ＴＤ-５２及びより高い剤量で４個の細胞株を４８時間処理した後、がん細胞死亡の程度（細胞アポトーシス及び壊死を含む）は５０％或いはもっと高い（図１Ｃ）ことが発見された。しかも、Ｈｅｐ３Ｂ細胞は、ＴＤ-５２誘導壊死細胞死亡に対して比較的敏感で、相同の剤量では、ＨＡ２２Ｔ、ＰＬＣ５及びＳｋ-Ｈｅｐ１細胞中の大部分は、細胞アポトーシス死亡を誘導された。ウエスタンブロット分析の結果において、ＴＤ-５２により処理した細胞は、システインプロテアーゼ-９、システインプロテアーゼ-３の活性を誘発し、及びポリ（ＡＤＰ-リボース）ポリメラーゼ（ｐｏｌｙ（ＡＤＰ-ｒｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ＰＡＲＰ）は溶解物を生じる（図１Ｄ）。さらに、ＴＤ-５２（２μＭ）とｚ-ＶＡＤ-ｆｍｋ、ｐａｎ-システインプロテアーゼ抑制剤共処理４８時間後、ＴＤ-５２が細胞アポトーシスを誘発する結果（図１Ｆ）が得られた。同時に、比較的低濃度ＴＤ-５２処理（１μｍｏｌ／ｌ，２４時間）は、がん細胞ＤＮＡフラグメンテーションを誘発する（図１Ｅ）。しかし、ＴＤ-５２は、エルロチニブと相同の抑制上皮細胞成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）キナーゼ抑制剤の効果を備えない（図１Ｇ）。そのため、本発明のエルロチニブ派生物の抗がん活性の効果は、エルロチニブより優れ、しかも該活性は、上皮細胞成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）キナーゼ抑制のメカニズムとは異なる。
また、本発明の各エルロチニブ派生物を、１μＭ及び１０μＭで、扁平上皮がんＮＣＩ-１７０３、Ｈ２１７０、Ｈ５２０、ＳＷ９００及びＮＣＩ-Ｈ２２６、非小細胞肺がんＡ５４９、Ｈ３５８細胞株を処理し、細胞活性及びＩＣ_５０検査測定を行った。その結果は、表５〜表１２に示すが、本発明のエルロチニブ派生物はがん細胞の死亡を促進可能であることが実証された。

２．２．２ 本発明のエルロチニブ派生物は抑制ＣＩＰ２Ａを通してＰＰ２Ａ活性を強化可能
本発明は、本発明のエルロチニブ派生物ＴＤ-５２の作用メカニズムをさらに検討する。特に、タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）-タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）-ｐ-Ａｋｔシグナルルートに注目する。図２Ａ及びＢに示す通り、剤量及び時間依存性の方式で、ＴＤ-５２はＣＩＰ２Ａ及びｐ-Ａｋｔの発現をダウンレギュレーションする。さらに、ＨＣＣ細胞は、１μＭ ＴＤ-５２の処理２４時間の後、ＰＰ２Ａの活性（図２Ｃ）を高めることができる。ＰＰ２Ａと関連するサブユニット（ｓｕｂｕｎｉｔ）、ＰＰ２Ａ-Ａ、ＰＰ２Ａ-Ｂ５及びＰＰ２Ａ-Ｃサブユニットの発現量は、影響を受けない。上述の結果により、ＴＤ-５２処理は、ＣＩＰ２Ａ発現を抑制することで、ＰＰ２Ａ活性を向上させ、こうしてｐ-Ａｋｔをダウンレギュレーションし、及びＨＣＣ細胞アポトーシスを招く（図２Ｄ）。
ＴＤ-５２を通して、細胞アポトーシスＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-ｐ-Ａｋｔ誘発シグナルルートで果たす役割を確認するため、本発明は過渡型染色（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）を通して、ｍｙｃ-マークをしたＣＩＰ２Ａ異所性発現のＰＬＣ５細胞を４８時間（図２Ｅ）、さらに２μＭ ＴＤ-５２処理２４時間後に、野生型細胞のＣＩＰ２Ａ-過度発現細胞中ｐ-Ａｋｔの発現量と比べてアップレギュレーションした。さらには、本発明はｓｕｂ-Ｇ１分析を利用し、ＴＤ-５２のアポトーシス影響は顕著に、該各ＣＩＰ２Ａ-過度発現細胞中で減少することを発見した。続いて、本発明は２個の方法を利用し、ＰＰ２ＡがＴＤ-５２処理のＨＣＣ細胞中で果たす役割を確認する。サイレントＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を通して、ＰＰ２Ａ遺伝子を取り除き、ＰＰ２Ａ抑制剤、オカダ酸（ＯＡ）と共処理する（図２Ｆ及びＧ）。ＰＬＣ５細胞が、１００ ｎＭ ＯＡから処理されると、ｐ-Ａｋｔの発現量は上昇し、ＴＤ-５２-誘発ＨＣＣ腫瘍細胞アポトーシスは減少する（図２Ｆ）。同様に、ＰＰ２ＡがｓｉＲＮＡを通して取り除かれると、ｐ-Ａｋｔの発現量は増加し、しかもＴＤ-５２の抗がん効果は減少する。本発明は、過渡型染色を通して、Ａｋｔ-過度発現ＰＬＣ５細胞を発生し、ＨＣＣ細胞ＴＤ-５２誘発細胞アポトーシスが顕著に減少することが発見された（図２Ｈ）。該各結果により、ＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-ｐ-Ａｋｔシグナルルートが、ＨＣＣ細胞ＴＤ-５２抗がん効果の調節において、重要な役割を果たしていることが実証された。

２．２．３ 本発明のエルロチニブ派生物がＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-ｐ-Ａｋｔシグナルルートにおいて、細胞アポトーシスを誘発する分子メカニズム
ＴＤ-５２がＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-ｐ-Ａｋｔシグナルルートにいかにして影響するかをさらに確認するため、本発明はタンパク質合成阻害剤シクロヘキシミド（ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ）が転写作用を阻害する時、ＴＤ-５２がＣＩＰ２Ａタンパク質の劣化（ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）に影響するかどうかを確認する。また、ＤＭＳＯ処理を対照組とし、その結果は図３Ａに示す。ＣＩＰ２Ａタンパク質の劣化に必要な時間は、ＴＤ-５２のあるなしに影響されないが、ＲＴ-ＰＣＲの検査により、ｍＲＮＡ発現はＴＤ-５２処理により抑制されることが発見された。該結果は、ＴＤ-５２がＣＩＰ２Ａの転写作用を抑制できることを示している。本発明は、ＣＩＰ２Ａプロモーターの作用メカニズムをさらに確認する。ＣＩＰ２Ａ遺伝子プロモーターとルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）レポーターの連接時、用量依存性の方式下で、ＴＤ-５２がルシフェラーゼの活性を抑制する（図３Ｂ上図）ことが発見された。本発明は、シリーズのｐＧＬ４ルシフェリンキャリア欠失選択株を作り、ＣＩＰ２Ａ遺伝子プロモーター区域中の序列の、ＴＤ-５２に対する影響が鍵であることを確認した。図３Ｂに示す通り、-１１０／-１キャリアを備える細胞中で、ＴＤ-５２処理は、ルシフェラーゼ活性に影響しない。この結果は、ＰＬＣ５細胞中-１１０及び-１５０の間には、ＣＩＰ２Ａ発現の結合位置があることを説明している。既存の文献では、Ｅｌｋ-１は該位置上に結合し、子宮頸がん及び子宮内膜がん中Ｅｌｋ-１は、もう一つの転写因子Ｅｔｓ-１と一緒にＣＩＰ２Ａの発現を調整すると開示している。よって、本発明は、ウエスタンブロット分析法を通して、ＴＤ-５２処理を経たＰＬＣ５細胞でＥｌｋ-１及びＣＩＰ２Ａの発現を測定し、Ｅｌｋ-１が、ＣＩＰ２Ａ-ＰＰ２Ａ-ｐ-Ａｋｔシグナルルートの調節で果たす役割を確認した。その結果は、肝がん細胞中でＥｌｋ-１転写因子は、細胞核中で発現することで、ＣＩＰ２Ａ遺伝子の転写を調整しているが、ＴＤ-５２処理後のＰＬＣ５細胞では、ＣＩＰ２Ａ及びＥｌｋ-１は、顕著に抑制されていることが発見された（図３Ｃ）。
本発明は、染色質免疫沈澱技術（ＣｈＩＰ）及び定量ＰＣＲにより、Ｅｌｋ-１とＣＩＰ２Ａプロモーター遺伝子との間の関係を確認し（図３Ｄ）、未処理の細胞中で、タンパク質-ＤＮＡ複合物を架橋結合し、Ｅｌｋ-１発現を測定し、Ｅｌｋ-１がＣＩＰ２Ａ遺伝子のプロモーター区域に結合することを実証した。さらに、細胞がＴＤ-５２に暴露されると、用量依存性の方式で、Ｅｌｋ-１の発現は減少する。つまり、この結果は、ＴＤ-５２は、Ｅｌｋ-１とＣＩＰ２Ａプロモーターとの間の結合を干渉することで、ＣＩＰ２Ａ転写を減少させＣＩＰ２Ａをダウンレギュレーションを示している。ＣＩＰ２Ａが抑制されると、ＰＰ２Ａ活性化はＡｋｔ 脱リン酸化を促し、がん細胞をアポトーシスさせる。さらに、Ｅｌｋ-１の過度な発現は減少し、ＴＤ-５２はＣＩＰ２Ａのダウンレギュレーション作用及びがん細胞アポトーシス（図３Ｄ、右欄）を誘導する。

２．２．４ 本発明のエルロチニブ派生物のＰＬＣ５を有する異体移植の体内作用
本発明中では、ＰＬＣ５の異体移植マウスモデルを用い、ＴＤ-５２生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）における影響を評価する。本発明は、現在臨床上の抗がん薬物ソラフェニブ（１０／ｍｇ／ｋｇ）、ＴＤ-５２（１０／ｍｇ／ｋｇ）或いはＤＭＳＯ（制御組とする）を使用し、4週間投薬した後、ソラフェニブ及びＴＤ-５２を受けたマウスの腫瘍サイズは制御組より小さい。
さらに、ソラフェニブに比べ、ＴＤ-５２は生体外腫瘍成長及び生体内の細胞活性に対して、より良い抑制能力（Ｐ＜０．０５；図４Ａ及びＤ）があると示された。本発明は、ＴＤ-５２投薬及び制御組マウスの異体移植腫瘍組織のタンパク質発現をさらに測定する。図４Ｂ及びＣに示す通り、生体腫瘍サンプル中で、ＴＤ-５２はＰＰ２Ａ活性を高め、しかもＣＩＰ２Ａ及びｐ-Ａｋｔの発現量をダウンレギュレーションした。そのため、ＴＤ-５２は、Ｅｌｋ-１とＣＩＰ２Ａプロモーターとの間の結合を干渉することで、ＣＩＰ２Ａ転写を減少させ、ＣＩＰ２Ａの転写をダウンレギュレーションし、及びＰＰ２Ａの活性を拡大すると示された。ＴＤ-５２がＰＰ２Ａの活性を高めると、Ａｋｔは脱リン酸化し、ＨＣＣ細胞アポトーシスを促進する。

２．２．５ 肝がん患者腫瘍組織の検査測定
ｐ-Ａｋｔ及びＣＩＰ２Ａの臨床意義を確認するため、１４７個の肝がん患者の腫瘍サンプル及び臨床特性をさらに分析する。図４Ｆ中で、５５．５％の腫瘍サンプルＣＩＰ２Ａは高度に発現し、さらにｐ-Ａｋｔ免疫組織化学染色法は、細胞核ｐ-Ａｋｔの発現強度と細胞核質ＣＩＰ２Ａには顕著な相関があることを示している。

２．２．６ がんタンパクＳＥＴの腫瘍組織中での過度発現
本発明はさらに、肝がん腫瘍組織中でのＳＥＴ過度発現及びＳＥＴ及びｐ-Ａｋｔ共発現から、手術後肝腫瘍患者再発のリスクを予測できると検証する。本発明は、１４７の肝がん患者腫瘍組織及びその近隣の正常組織を収集し、ＳＥＴがんタンパク質の異常発現を測定した（図５Ａ〜Ｃ）。腫瘍組織中でＳＥＴの発現は、他の正常組織より顕著に高く、２９４サンプル中（各患者に一対のサンプル）でＳＥＴの発現は、腫瘍組織の平均Ｈ分数は１７０．８で、非腫瘍組織の分数は８６．７（ｐ＝８６．８）である（図５Ｂ）。腫瘍中のＳＥＴの発現量は、一対の正常組織に比べ、腫瘍組織ＳＥＴは特異な発現を示す。図５Ｃに示す通り、ほとんどの各患者はＳＥＴの発現が明らかに高く、腫瘍の、非腫瘍に対するＳＥＴの発現の平均比率は２．２である。さらに、ＳＥＴの高発現量と比較的劣る臨床特性とは、顕著な関連性がある。ＳＥＴは、がん抑制剤ホスファターゼＰＰ２Ａの抑制剤であることから、本発明は、腫瘍細胞中のＳＥＴの異常発現とＰＰ２Ａ機能障害とに関連があるか測定し、ＳＥＴの高発現量とＡｋｔシグナルの活性には、顕著な関連性があることを発見した。ＰＰ２Ａにより重要な腫瘍シグナルルートを調整し（図５Ｄ）、しかも肝がん患者の手術後のＳＥＴとｐ-Ａｋｔ共発現量は高く、再発が高リスクであると予測される（図５Ｄ、下図）。
さらに、肝腫瘍細胞中のＳＥＴががん化する特性、特定のｓｈＲＮＳ細胞成長中のＳＥＴ沈黙に対する効果を確認する。図５Ｅに示す通り、抗ＳＥＴのｓｈＲＮＡをＰＬＣ５細胞に転写すると、以ｓｈＲＮＡを転写した陰性対照組の成長率に比べ、その結果は前記と一致した。ＳＥＴ沈黙は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞の自我分化を招き、肝がん細胞ヘパトスファー（ｈｅｐａｔｏｓｐｈｅｒｅ）の能力減少させる（図５Ｆ）。そのため、該発現は、ＳＥＴの異常発現は、肝腫瘍の発生を促進すると示している。同時に、本発明は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）Ａ５４９細胞株及び非小細胞肺がん患者組織により、ＳＥＴが肺がん細胞中でがん化する鍵となる役割を果たし、及び肝がん細胞中ＳＥＴとＰＰ２Ａｃ（ＰＰ２Ａ触媒領域（ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎ））結合は、ＰＰ２Ａの活性を増加させる（結果は未図示）ことを実証した。

２．２．７ ＰＰ２ＡはＡｋｔのダウンレギュレーション及び肝がん細胞アポトーシスを促進する
本発明はさらに、ＳＥＴ-ＰＰ２Ａが、抗がん戦略の新目標であるかどうかを実証する。まず、本発明は、肝がん細胞を相同剤量の本発明のエルロチニブ派生物（ＥＭＱＡ）に４８時間暴露させ、ＭＴＴ分析を用いて測定し、細胞活性を確認する。図６Ａに示す通り、ＥＭＱＡは、四種の肝がん細胞ＰＬＣ５、ＨｕＨ７、Ｈｅｐ３Ｂ及びＳｋ-Ｈｅｐ１細胞株を含む肝がん細胞活性を顕著に減少させる。ＥＭＱＡ処理後に細胞アポトーシスを促進する効果も測定する。四種の肝がん細胞を相同濃度のＥＭＱＡに２４時間暴露させ、さらにフローサイトメトリーを通して、酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）及びウエスタンブロット分析法で、細胞死亡を分析し、ＤＭＳＯを対照組とする。フローサイトメトリーを通して、ＥＭＱＡの高剤量或いは長時間処理のｓｕｂ-Ｇ１細胞に対する比率（図６Ｂ及びＤ、上図）を測定し、ＥＬＩＳＡ分析を通して、ＤＮＡフラグメンテーション程度が、ＥＭＱＡ処理の剤量が増加するに従い増加することを示す（図６Ｃ）。用量依存性及び時間依存性の方式で、ＥＭＱＡ-誘発-肝細胞アポトーシスは、ｐ-Ａｋｔシグナルをダウンレギュレーションする（図６Ｄ）。
さらに、本発明は、ＰＬＣ５異体移植腫瘍マウスモデルを通して、生体内ＥＭＱＡの肝がんに対する影響を評価し、制御組のマウスに比べ、ＥＭＱＡ治療（１０ ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の腫瘍マウスは、腫瘍成長が顕著に減少した（図６Ｅ）。腫瘍組織発生の分子メカニズムを確認するため、ウエスタンブロット分析法及びＰＰ２Ａ活性分析により、ＥＭＱＡ治療及び制御組の異体移植腫瘍マウスの腫瘍組織を測定したところ、生体外検査測定の結果と一致した。
ＥＭＱＡ治療を受けた異体移植腫瘍マウスの腫瘍組織は、制御組ｐ-Ａｋｔより発現が低く、しかもＰＰ２Ａの活性は高かった（図６Ｆ）。

２．２．８ ＳＥＴ／ＰＰ２Ａ／ｐ-Ａｋｔシグナルの抑制により、本発明のエルロチニブ派生物の細胞アポトーシス促進の効果を確認する
本発明は、ＡｋｔがＥＭＱＡのＨＣＣに対抗する効果を調節する鍵であるかどうかを確認する。過渡性染色（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）を通して、Mｙｃ-マークをしたＡｋｔ異所性発現のＰＬＣ５細胞を、５μＭ ＥＭＱＡで２４時間処理後、図７Ａに示す通り、野生型に比べ、ＥＭＱＡ処理後のｓｕｂ-Ｇ１細胞及びＰＡＲＰカッティング形式の比率は、過度発現ＡｋｔのＰＬＣ５細胞中で顕著に減少し、それはＡｋｔがＥＭＱＡの細胞アポトーシス促進効果を決めていることを示す。続いて、本発明は３個の異なる戦略により、ＥＭＱＡ-調節ＡｋｔダウンレギュレーションＰＰ２Ａの役割を実証する。まず、ＰＰ２Ａ抑制剤、オカダ酸（ＯＡ）を使用し、ＰＰ２Ａの活性を抑制する。図７Ｂに示す通り、ＥＭＱＡ処理を通して、ｐ-Ａｋｔダウンレギュレーションの発現を誘発し、及び細胞アポトーシス促進の効果は、さらに５ μＭ ＥＭＱＡ及び１００ｎＭ ＯＡ共処理後に、反対の結果を得た。続いて、本発明はｓｉＲＮＡを通して特異性ＰＰ２Ａｃ除去を行い、野生型のＰＬＣ５細胞に比べ、ｓｉＲＮＡによりＰＰ２Ａｃを除去すると、ｐ-Ａｋｔの発現は増強される（図７Ｃ）。さらに、ＭＱＡ-細胞アポトーシス誘発の比率は、ＰＰ２Ａｃ-除去-ＰＬＣ５細胞中で明らかに減少する。ＰＰ２Ａの他に、ＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＭ及びＰＤＫ１を含む他のタンパク質キナーゼは、調節Ａｋｔシグナル活性と関連があると公知である。本発明は、ＥＭＱＡ-処理肝がん細胞溶解物中で、該各タンパク質の発現を確認する。図７Ｄに示す通り、ＥＭＱＡを通して、ｐ-Ａｋｔの発現を顕著に抑制するが、ＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＭ及びＰＤＫ１の発現に影響しない。該各結果は、ＰＰ２Ａは、ＰＰ２ＡがＥＭＱＡ-誘発Ａｋｔダウンレギュレーションを調節する過程で、重要な役割を果たすことを実証した。
ＥＭＱＡは、ＳＥＴ-ＰＰ２Ａｃ結合を切断することで、ＰＰ２Ａを再活性化するため、本発明はＳＥＴの役割を実証するため、過渡性染色を通して、Mｙｃ-マークを備えるＳＥＴ異所性発現のＨｅｐ３Ｂ細胞を産生し、ＳＥＴ過度発現の細胞中で、ＥＭＱＡ処理を通して誘発後のｐ-Ａｋｔダウンレギュレーションの発現及び細胞アポトーシスの効果は減少（図７Ｅ）した。本発明は、２種の裁断のＳＥＴタンパク質で、ＥＭＱＡの目標位置を確認する。それはそれぞれ、Ｎ-末端フラグメント（ＳＥＴ_ＮＴＦ，ａ．ａ．ｌ-２２７）及びＣ-末端フラグメント（ＳＥＴ_ＣＴＦ，ａ．ａ．７６-２７７）で、生体外ＳＰＲシステムにより検査測定（図７Ｆ、左図）及び細胞システム（ｃｅｌｌ-ｂａｓｅｄ ｓｙｓｔｅｍ，図７Ｆ，右図）である。ＰＰ２ＡｃがＣＭチップをコーティング固定する量に従い、本発明は、ＳＰＲシステム中の固定剤量のＥＭＱＡが、異なる比率の全長及び裁断型式のＳＥＴタンパク質の干渉をテストする。図７Ｆに示す通り、ＥＭＱＡの干渉効果は、ＳＥＴ_ＮＴＦの比率により増加して影響を受けることはなく、反対に、ＳＥＴ_ＮＴＦ及び全長のＳＥＴタンパク質を含む複合体の、ＰＰ２Ａｃに対する結合親和力は、ＳＥＴ_ＮＴＦ比率増加に従い増加する。本発明は、過渡性染色を通して、２個の裁断型式を備えるＦｌａｇ-マークＳＥＴタンパク質の異所性発現の細胞を産生し、ＳＰＲの結果と一致する。ＥＭＱＡは、全長ＳＥＴ及びＳＥＴ_ＣＴＦ対ＰＰ２Ａｃの結合を減少させ、ＳＥＴ_ＮＴＦの結合に影響しない（図７Ｆ、右図）。同時に、本発明は、肺がん細胞Ａ５４９中で、相同の結果を得た（結果は未図示）。この結果は、ＥＭＱＡが特異性でＳＥＴタンパクのＣ-末端を目標とすることを実証する。

２．２．９ 本発明のエルロチニブ派生物の生体外及び生体内での、ソラフェニブのＨＣＣ細胞に対する敏感性強化ＰＰ２Ａの機能
現在、ソラフェニブは、肝がん患者治療に合格した分子標的薬物である。それは、有限の無増悪生存期間（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ-ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ）及び比較的高い治療相関毒性程度を有するため、ソラフェニブの肝がん患者に対する薬物敏感性を改善する必要がある。本発明は、ＰＰ２Ａ再活性化は、ソラフェニブの効果を改善できるかどうかをテストする。本発明はまず、ＭＴＴにより、ＥＭＱＡ組合せソラフェニブの効果をテストする。四個の異なる肝がん細胞株中で、ＥＭＱＡ組合せソラフェニブの比率が１：５である時、抗がん効果を顕著に改善できる。ＭＴＴの結果により、すべての肝がん細胞株の組合せ比率が確認された。それは協同効果（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）があることを示している（図８Ａ）。さらに、ｓｕｂ-Ｇ１分析及びウエスタンブロット分析法を通して、該組合せ処理の細胞アポトーシス促進の結果を確認した。ソラフェニブ単独処理に比べ、Ｈｅｐ３Ｂ及びＰＬＣ５細胞中でＥＭＱＡをソラフェニブに比べると、フローサイトメトリーを通して測定したｓｕｂ-Ｇ１の比率及びＰＡＲＰのカッティング型式は、顕著に増加している（図８Ｂ）。現在ソラフェニブは、末期の肝がん治療にだけ適用されている。その腫瘍は通常は巨大で、しかも他の方式で処理できない。この這種の臨床症状に似せるため、本発明では、ＰＬＣ５異体移植腫瘍を備えるマウスにより、ソラフェニブ及びＥＭＱＡ結合の治療効果をテストする。図８Ｃに示すように、単独でＥＭＱＡ或いはソラフェニブを受けたマウスに比べ、ソラフェニブ及びＥＭＱＡ結合は、腫瘍成長の速度を顕著に抑制し、しかも治療を受けた末期腫瘍の平均重量は明らかに低く（図８Ｄ）、さらには腫瘍中で、該組合せ治療も、ＰＰ２Ａの活性を強化し（図８Ｅ、上図）及びｐ-Ａｋｔの発現を抑制していた。

２．２．１０ 本発明のエルロチニブ派生物とパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）は、ｐ-Ａｋｔをダウンレギュレーションし、非小細胞肺がん細胞のアポトーシスを促進する
本発明は、ウエスタンブロット分析法により、パクリタキセル及び／或いはＥＭＱＡ処理の細胞溶解物を分析する。図９Ａに示す通り、パクリタキセル及びＥＭＱＡ処理の肺がん細胞ｐ-Ａｋｔの発現量は顕著に減少している。さらに、用量依存性及び時間依存性の方式で、共処理し、ｐ-Ａｋｔダウンレギュレーションを誘発し（図９Ｂ及びＣ）、さらに重要なのは、ＰＡＲＰシグナルの活性とｐ-Ａｋｔダウンレギュレーションの結果は一致した。本発明は、過渡性染色を通して、Mｙｃ-マークを備えるＡｋｔ異所性発現のＡ５４９細胞を作り、５μＭ ＥＭＱＡ及び１０ ｎＭパクリタキセルで２４時間処理したところ、図９Ｄに示す通り、共処理により、Ａｋｔ過度発現細胞は顕著に減少した。つまり、Ａｋｔシグナル抑制の、非小細胞肺がん細胞中のＥＭＱＡ及びパクリタキセルの協同効果が確認された。

２．２．１１ 生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）における本発明のエルロチニブ派生物とパクリタキセルのがんに対応する協同効果
本発明は、生体内で、ＥＭＱＡとパクリタキセル結合の抗がん効果をテストした。本発明は、Ａ５４９異体移植腫瘍のマウスを産生し、制御組、パクリタキセル及び／或いはＥＭＱＡ治療マウスとした。ＥＭＱＡ或いはパクリタキセルを単独で受けたマウスに比べ、ＥＭＱＡとパクリタキセル結合治療を受けたマウスの腫瘍成長速度は明らかに減少（図１０Ａ）した。しかも、平均腫瘍種量は顕著に低い（図１０Ｂ）。異なる治療を受けたマウスの体重には、明らかな差異はない（図１０Ｅ）。本発明は、ウエスタンブロット分析法及びＰＰ２Ａ活性を通して、腫瘍溶解物を分析したところ、その結果は前記と相同で、ＥＭＱＡとパクリタキセル結合治療を受けたマウス腫瘍のＰＰ２Ａ活性は、制御治療を受けたマウスより明らかに高い（図１０Ｃ）。しかも、ｐ-Ａｋｔの発現も、ダウンレギュレーションされている。本発明は、ウエスタンブロット分析法により、Ａ５４９異体移植腫瘍マウスの腫瘍溶解物ｐ-Ａｋｔ及びＡｋｔの発現量を分析したところ、減少の趨勢が見られた（図１０Ｄ）。
よって、本発明のエルロチニブ派生物は、腫瘍細胞において新しい治療メカニズムを発言でき、ＣＩＰ２Ａを抑制することで、ＰＰ２Ａ発現を向上させ、しかもｐ-Ａｋｔをダウンレギュレーションするため、本発明のエルロチニブ派生物は、ＰＰ２Ａ活性を増強するがん治療方法に用いることができる。同時に、本発明はＳＥＴの高度発現が、患者腫瘍の深刻さ、及び予後の悪さには関連があると実証した。そのため、本発明はＳＥＴ-ＰＰ２Ａの結合干渉を、がん治療の新戦略とし、本発明のエルロチニブ派生物とソラフェニブ或いはパクリタキセル結合を通して、ソラフェニブの治療効果を強化し、腫瘍の成長を抑制できる。本発明は、がん治療の代替え選択を提供し、該選択は伝統医薬治療に対して耐性を有するがん治療において、極めて大きな役割を果たす可能性がある。

Claims (22)

1. アリールアミンに置換可能なキノキサリンであって、それは式Ｉ（ａ）或いは式Ｉ（ｂ）の構造を備え、
   

   

   

   その内Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   或いは
   

   

   を含むことを特徴とするアリールアミンに置換可能なキノキサリン。
2. アリールアミンに置換可能なキノキサリンは、式Ｉ（ｃ）の化学構造を含み、
   

   

   その内Ｒ^４及びＲ^５は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   或いは
   

   

   を含み、及びその内Ｘはハロゲン、ハロアルキル基、メトキシ基、ニトロ基、アミン基、アミド基、カルボキシル基、酸性基、ベンゾフェノン基或いはメトキシカルボニル基であることを特徴とするアリールアミンに置換可能なキノキサリン。
3. アリールアミンに置換可能なキノキサリンは、式Ｉ（ｄ）の化学構造を含み、
   

   

   その内Ｒ^６及びＲ^７は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上には、他の官能基の原子或いは原子団、複素環式芳香族基を有し、しかも該置換可能なフェニルは、
   

   

   

   

   

   

   

   

   或いは
   

   

   を含むことを特徴とするアリールアミンに置換可能なキノキサリン。
4. 化合物は、式ＩＩの構造を含み、
   

   

   その内Ｒ^８及びＲ^９は相同或いは異なり、各自独立して置換可能なフェニル及びベンジル上に他の官能基の原子或いは原子団を有し、しかも該置換可能なフェニルは
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   或いは
   

   

   を含み、その内ＹはＣＯ或いは（ＣＨ_２）_ｎ，ｎ＝１-３；Ｚ＝ＣＯＯＲ^１０で、 或いは置換官能基のベンゼンを有し、Ｒ^１０は芳香基或いはアルキル基置換基であることを特徴とする化合物。
5. 医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
6. 前記医薬組成物は、抗がん薬物をさらに有することを特徴とする請求項５記載の医薬組成物。
7. 前記抗がん薬物は、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）或いはパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）であることを特徴とする請求項６記載の医薬組成物。
8. タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）の細胞内発現を活性化する医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に記載の化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
9. タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）不活性化を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
10. がんタンパクＳＥＴ拮抗剤とする医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
11. がんタンパクＳＥＴの発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
12. タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）拮抗剤とする医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
13. タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
14. がんタンパクＳＥＴとタンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）との結合の干渉に用いる医薬組成物は、請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物、及び薬理上受け入れ可能な賦形剤を含む。
15. 前記請求項８〜１４中の任意の一項に記載の医薬組成物は抗がん薬物をさらに有する。
16. 前記抗がん薬物は、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）或いはパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）であることを特徴とする請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物は、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）不活性化を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物の製造に用いられる用途。
18. 前記タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）不活性化を特徴とする疾病或いは病的症状は、肝がん、肺がん、白血病、乳がん、腎がん、甲状腺がん、結腸がん、頭部或いは頸部がんであることを特徴とする請求項１７記載の用途。
19. 前記請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物は、がんタンパクＳＥＴの発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物の製造に用いられる用途。
20. 前記がんタンパクＳＥＴの発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状は、肝がん、肺がん、白血病、乳がん、腎がん、甲状腺がん、結腸がん、頭部或いは頸部がんであることを特徴とする請求項１９記載の用途。
21. 前記請求項１〜４の任意の一項に定義する化合物は、タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状を治療する医薬組成物の製造に用いられる用途。
22. 前記タンパク質ホスファターゼ２Ａがん抑制因子（ＣＩＰ２Ａ）発現量増加を特徴とする疾病或いは病的症状は、肝がん、肺がん、白血病、乳がん、腎がん、甲状腺がん、結腸がん、頭部或いは頸部がんであることを特徴とする請求項２１に記載の用途。

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