JP2017500547A - 心臓障害のためのバイオマーカー - Google Patents
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Abstract
Description
(i)対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定されたTnTuORFペプチドのレベルと適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
対照集団と比較したTnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になることの予測であり、さらに、上記測定するステップが、TnTuORFペプチドと、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む方法を提供する。
(i)対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定されたTnTuORFペプチドのレベルと適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
対照集団と比較したTnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を示し、さらに、上記測定するステップが、TnTuORFペプチドと、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む方法を提供する。
(i)対象からの第1の生体試料中のTnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)同じ対象から採取される、上記対象からの第2の生体試料中のTnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
(iii)第1の試料中のTnTuORFペプチドの測定レベルと第2の試料中のTnTuORFペプチドの測定レベルを比較するステップと
を含み、
第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFペプチドのレベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する反応不良を示し、第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFペプチドのレベルの減少が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物又は治療法での処置に対する好反応を示すものである方法を提供する。
(i)対象からの第1の生体試料中のTnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)同じ対象から採取される、上記対象からの第2の生体試料中のTnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
(iii)第1の試料中のTnTuORFペプチドの測定レベルと第2の試料中のTnTuORFペプチドの測定レベルを比較するステップと
を含み、
第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFペプチドのレベルの減少が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する反応不良を示し、第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFペプチドのレベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する好反応を示すものである方法を提供する。
特に別段の定義がない限り、本明細書で用いるすべての専門及び科学用語は、本発明が属する技術分野の(例えば、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学及び生化学の)当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を有すると解釈されるものとする。
本明細書全体を通して、用語「TnTuORF」は、トロポニンT上流オープンリーディングフレームを意味する。本明細書において、用語「TnTuORF」及び「TnTuORFペプチド」は同義で用いており、別個の化学エンティティー(chemical entity)として循環器に存在し、トロポニンT遺伝子の上流オープンリーディングフレームによってコードされている、任意のペプチドを意味することを意図したものである。
本出願人は、心筋トロポニンの上流オープンリーディングフレームによってコードされたペプチドが、循環器に及び特にヒト血漿中にはっきりと区別できる別個のバイオマーカーとして存在するという本発明者らの仮説を先ず確認することを試みた。
免疫反応性TnTuORFが実際にヒト循環器に存在することが確証されたので、本出願人は、急性冠症候群をはじめとする心臓障害におけるそのような免疫反応性TnTuORFの潜在的臨床的有用性を判定することを試みた。先ず、4つの独立したコホートからの患者、すなわち、(i)心血管、内分泌又は神経疾患の証拠も病歴もない健常ボランティア(n=109)、(ii)臨床的に必要と判断された心臓カテーテル留置を受けた患者(n=16)、(iii)記録されたST上昇心筋梗塞がある患者(n=4)及び急性冠症候群コホート(n=502)をリクルートした。これらの種々の患者コホートからの血液サンプリング範囲の詳細は、実施例1の方法セクションに記載する。
(i)対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定されたTnTuORFペプチドのレベルと適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
対照集団と比較したTnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になることの予測であり、さらに、上記測定するステップが、TnTuORFペプチドと、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む方法を提供する。
(i)対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定されたTnTuORFペプチドのレベルと適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
対照集団と比較したTnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になることを示し、さらに、上記測定するステップが、TnTuORFペプチドと、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む方法を提供する。
(i)対象からの第1の生体試料中のTnTuORFのレベルを測定するステップと、
(ii)同じ対象から採取される、上記対象からの第2の生体試料中のTnTuORFのレベルを測定するステップと、
(iii)第1の試料中のTnTuORFの測定レベルと第2の試料中のTnTuORFの測定レベルを比較するステップと
を含み、
第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFのレベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する反応不良を示し、第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFのレベルの減少が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する好反応を示すものである方法を提供する。
(i)対象からの第1の生体試料中のTnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)同じ対象から採取される、上記対象からの第2の生体試料中のTnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
(iii)第1の試料中のTnTuORFペプチドの測定レベルと第2の試料中のTnTuORFペプチドの測定レベルを比較するステップと
を含み、
第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFペプチドのレベルの減少が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する反応不良を示し、第1の試料と第2の試料間でのTnTuORFペプチドのレベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する好反応を示すものである方法を提供する。
心筋梗塞をもたらす急性心虚血を直接予測又は診断することができる点でのTnTuORFペプチドの有用性欠如にもかかわらず、驚くべきことに、本出願人は、TnTuORFペプチドが、心筋梗塞を予測及び/又は診断する際の既存心筋トロポニンバイオマーカーの感度及び偽陽性パフォーマンスを改善することを立証する。絶対的には、トロポニンI×hsトロポニンT/TnTuORF(本明細書ではトロポニンプラス(商標)と呼ぶ)の生成物比が、2時間以内に検出された心筋梗塞患者数を4%増加させ(すなわち、94/96 NSTEMI患者又は98%;90/96 NSTEMI患者又は90%を検出したhsTNT及び88/96 NSTEMI患者又は92%を検出したTnIと比較)、偽陽性診断率を7%低下させた(実施例6;図8)。
TnTUORFペプチドは、体液試料において、TnTuORFペプチドと、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することによって測定される。本開示の方法で使用するための結合剤は、例えばANP及びBNPとの、低い交差反応性を好ましくは有する。結合剤としては、抗原TnTuORFペプチド又はその断片を免疫抗原として使用して調製される、抗体又は抗原結合断片、例えばFab及びF(ab)2を挙げることができる。ポリペプチド又は断片を記載の担体に結合させてもよい。一例では、結合剤は、抗体である。抗体は、モノクローナル抗体であってもよいし、又はポリクローナル抗体であってもよい。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体並びにそれらの断片の生産方法は、当技術分野において周知である(例えば、Harlow及びLane、Antibodies:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、New York 1988を参照されたい)が、本出願人も社内で開発した(例えば、Siriwardenaら(2010)Circulation 122:255〜264)。特異性のため、モノクローナル抗体が好ましい。ヒト化抗体がインビトロアッセイに必要とされないことは、当業者には理解されるであろう。
本発明は、TnTuORFペプチドを結合剤と結合させることと、その後、結合されたペプチドの量を検出することとを含む、検出システムの使用を含む。類似の解決策は、試料中の未結合の結合剤の量を検出して、未結合の又は結合したTnTuORFの指標を得ることである。そのような代替法は、結合した結合剤の量を直接検出するための機能的代替手段として本発明の範囲内に入ると解釈される。試料体積がわかっている場合、試料中のTnTuORFの量から試料中のTnTuORFの濃度を容易に算出することができることは、当業者には理解されるであろう。
典型的に、キットは、当技術分野において公知のアッセイ用に、及び特定の実施形態では当技術分野において公知であるようなRIA又はELISAアッセイ用に構成されることになる。
急性冠症候群(ACS)をはじめとする心臓障害の臨床診断は、トロポニンT及びトロポニンIをはじめとする心筋トロポニンなどの循環診断バイオマーカーに依存するところが大きい。しかし、高感度(hs)アッセイを用いたときでさえ、循環トロポニンの検出可能な変化が遅れることは、疑われる心臓障害を提示する有意な数の患者において臨床的不確実性につながる。したがって、心臓障害の早期情報を提供することができる新規バイオマーカーの同定が主として重要である。本出願人は、上流オープンリーディングフレーム(uORF)ペプチドがヒト循環器にはっきりと区別できる化学的エンティティーとして存在することの初めての証拠をここに提供する。このuORFは、心筋トロポニンTに由来し(TnTuORF)、正常な健常個体に存在する。TnTuORFの最高血漿レベルは、例えば心房細動、心不全、心膜炎及び神経伝導障害を含むがこれらに限定されない、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を有する患者において観察され、したがって、TnTuORFの最高血漿レベルを本発明のアッセイ、方法及びキットにおいて用いて、対象における心臓障害を予測又は診断することができる。
化学物質
合成ヒトTnTuORF、TnTuORF(Tyr)、TnTuORF(Cys)、及び小胞内在性膜タンパク質36のシグナルペプチドのアミノ酸1〜7(VIP36sp(1〜7))を、質量分析及び高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって95%より高い純度でミモトープ(Melbourne、Australia)によって合成した。他のすべての合成又は精製タンパク質は、Hytest(Turku、FI)、株式会社ペプチド研究所(大阪府、日本)又はSigma−Aldrich(St Louis、USA)から購入した。
ヒト心筋トロポニンTの主オープンリーディングフレームの上流5’領域(NCBIアクセッションNG_007556)の評価により、+2のコザックスコアを有し、効率的に翻訳される尤度が高い、主オープンリーディングフレーム(ORF)開始部位の上流1512bpをコードする推定12アミノ酸ペプチド(全アミノ酸配列MAPEGWVIVVIS;配列番号1)を同定した(図1)。この配列は、速筋型(NCBIアクセッションNG_013085)又は遅筋型(NCBIアクセッションNG_011829)ヒト骨格筋トロポニンTには見られなかった。しかし、NCBI BLAST検索エンジンでの調査により、相同性を示すような1つの部分配列、小胞内在性膜タンパク質36のシグナルペプチドの最初の7アミノ酸(配列MAAEGWI)、が明らかになった(Fielerら(1994)EMBO J.13:1729〜1740)。本出願人は、シグナルペプチドがヒト循環器に存在することを以前に証明した(Siriwardenaら(2010)Circulation 122:255〜264;Pembertonら(2012)Clin.Chem.58:757〜767)ので、検出抗体をTnTuORFのアミノ末端に対して作り、VIP36sp(1〜7)ペプチドを潜在的干渉について評価した。TnTuORFのアミノ末端に特異的な抗体を本出願人の以前のプロトコル(Siriwardenaら(2010)Circulation 122:255〜264;Pembertonら(2012)Clin.Chem.58(757〜767)に従って発生させた。簡単に言うと、全身性TnTuORF(Cys)をキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)に結合させ、4匹のニュージーランド白ウサギの5〜6部位に皮内注射した。注射11〜13日後にウサギから採血し、妥当な抗血清(r244)力価が得られるまで4〜6週間ごとに上記手順を繰り返した。
5μLの0.5Mリン酸緩衝液(pH7.3)中の5μgクロラミンTの存在下、0.5mCi Na−125Iを使用して、15〜20秒間、ヒトTnTuORF(Tyr)(2.5μg)をヨウ素化した。さらなる5μLのリン酸緩衝液中の50μgのシステインHClの添加によって反応を停止させた。得られたヨージネートを10cm RP300 Brownlee HPLCカラム(Applied Biosystems、San Jose、CA)に負荷し、0.1%トリフルオロ酢酸(TFA)中0%〜60%アセトニトリルの勾配で15分にわたって1mL/分の流速で純粋なTnTuORF(125I−Tyr)を溶出させた。
TnTuORFアッセイには、抗血清r244を1:15,000の最終希釈度で使用した。すべての放射活性トレース及び抗血清をイムノアッセイ用緩衝液(Siriwardenaら(2010)Circulation 122:255〜264)で希釈した。血漿試料及び標準物質をアッセイ用緩衝液で1:3希釈した。アッセイインキュベートは、混合し、22時間、4℃で放置してインキュベートした、希釈度1:5000の50uLの抗体と混合した50uLの試料又は標準物質(0〜13,000pg/mL TnTuORFペプチド)から成った。次いで、50uLのヨウ素化TnTuORF(Tyr)トレーサー(約3000cpm)を添加し、チューブを混合し、さらに22時間、4℃で放置してインキュベートした。次いで、遊離及び結合TnTuORFを、固相二次抗体法(ロバ抗ウサギSacCel、Immunodiagnostic Systems、Boldon、UK)によって分離した。2%ポリエチレングリコール/リン酸緩衝液中のSac−Cel(500uL)(最終Sac−Cel濃度5%)を各チューブに添加し、室温で30分間放置してインキュベートした。次いで、チューブを2800×gで15分間、遠心分離し、上清をデカントし、ペレットをガンママスター(Gammamaster)カウンター(LKB、Uppsala、Sweden)でカウントした。溶血の評価により、TnTuORFが、最大1.5g/Lのヘモグロビン濃度まで又は最大2.0g/Lの血漿脂質含有量によって改変されなかったと判定した。NT−プロBNPは、社内イムノアッセイ(Richardsら(2006)J.Am.Coll.Cardiol.47:52〜60;Wrightら(2003)J.Am.Coll.Cardiol.42:1793〜1800)によって判定した。高感度TnTは、14pg/mLの99パーセンタイルカットオフを用いてエレクシス(Elecsys)2010アナライザー(Roche Diagnostics)で判定した。すべてのhsTnT結果をRocheによるhsTnTの世界的再評価(worldwide reassessment)(Appleら(2012)Clin.Chem.58:1599〜1600)中にPenzbergに提出し、3つだけは修正を要すると報告された。TnIは、0.03ug/Lの99パーセンタイルカットオフを用いてレイトジェネレーションアッセイ(Abbott Architect)によって判定した。
ヒト血漿試料は、4つの研究群(人口統計学的データを表I及びIIに示す)から、ニュージーランド保健省のHealth and Disabilities Ethics Committeeによって承認された倫理プロトコルに従って得た。すべての参加者は、リクルートメント前にインフォームドコンセントを与えた。すべての調査は、ヘルシンキ宣言の指針を順守する。血漿試料を、(i)心血管、内分泌又は神経疾患の証拠又は病歴のない健常ボランティア(n=109)、(ii)臨床的に必要と判断された心臓カテーテル留置を受けた患者(n=16)、(iii)記録されたST上昇心筋梗塞がある患者(n=4)及び(iv)ACSコホート(n=502)から採取した。この研究のために、胸痛持続時間<4時間の主訴をChristchurch Hospitalに提示した患者に、急性冠動脈イベントにおけるシグナルペプチド(SPACE、http://www.anzctr.org.au、ACTRN12609000057280)として公知の本発明者らの予期的観察研究へのリクルートメントを申し出た。ACSが疑われ、明らかな心臓以外の原因のない、20分以上続く急性胸、上腹部、頸部、顎又は腕痛の主訴を有する患者を、ガイドライン定義(Leupkerら(2003)Circulation 108:2543〜2549)に従って登録した。より一般的な/非定型な症状(例えば、疲労、悪心、嘔吐、発汗及び失神型めまい)は、組み入れ基準として用いなかった。急性MIの宣告診断(adjudicated diagnosis)は、2名の独立した心臓専門医が2007 ESC/ACCF/AHA/WHFタスクフォースガイドライン(Thygesenら(2007)Circulation 352:98〜100)に従って、TnTuORFではなくすべての臨床データにわたって診断した。診断の生化学成分は、入院24時間以内の血漿cTnIの上昇≧0.03ug/Lを用いた。すべての関連臨床、人口統計学的及び診断パラメータを、指標となる入院時に採集し、45及び365日に追跡調査した。
ヒト血漿において検出された免疫反応性TnTuORFを生成するために、r244からの抗TnTuORF IgGを、TnTuORF(Cys)と結合されたスルホリンク(SulfoLink)(商標)カラム(Pierce Biotechnology、IL)での抗原親和性クロマトグラフィーによって精製した。2mLのr244無希釈抗血清をPBS(pH7.2)で1:1v/v希釈し、スルホリンク(商標)カラムに通した。結合した抗体を0.1Mグリシン(pH2.5)で溶出させ、0.1Mリン酸緩衝液での3回の洗浄によって0.1Mリン酸緩衝液に透析した。次いで、精製されたr244抗TnTuORF IgGを、製造業者の取扱説明書に従って調製したプロテインAアガロースゲル(Pierce Biotechnology、IL)に結合させた。純粋なTnTuORFを得るために、100mLのST上昇MI患者血漿をPBS(pH7.2)で1:1v/v希釈し、プロテインA/r244−IgGカラムに重力下、室温で2時間にわたって通した。次いで、カラムを0.1M PBS/0.5M NaCl(pH7.2)で洗浄し、0.1Mグリシン(pH2.5)で溶出させた。1mL画分を回収し、アリコートをイムノアッセイ用緩衝液で1:10v/v希釈し、特異的イムノアッセイに付して、精製されたTnTuORFの量を決定した。グリシン溶出生画分を直ちに−80℃で、HPLCによる分析まで保存した。
0.1Mグリシン中の免疫親和性精製TnTuORFペプチドを40℃の逆相(RP)HPLCカラム(Phenomenex、Torrance、CA)に直接負荷し、10〜40%アセトニトリル/0.1%TFAの勾配で30分にわたって1mL/分の流速で溶出させた。画分を1分間隔で回収し、アリコートをTnTuORFイムノアッセイに付した。免疫反応性画分を空気下で乾燥させ、次いで、G2000シリカカラム(東ソー株式会社、日本)を用いる60%アセトニトリル/0.1%TFAの定組成勾配で0.25mL/分の流速でのサイズ排除(SE)HPLCに付した。画分を1分間隔で回収し、RP−HPLCの場合と同様にイムノアッセイによって調べて、適切な分子サイズを決定した。免疫精製されたTnTuORFの溶出後、RP−HPLCを合成TnTuORFペプチドで較正した。SE−HPLC実行は、シトクロムC(Mr12,000)、アプロチニン(MR6,500)、CNP22(Mr2,200)及びアンジオテンシンII(Mr1,045)ペプチドで較正した。
結果を平均±SDとして提示する。対応両側スチューデントt検定を用いて平均の比較を適宜行った。スピアマンの順位相関検定及び受信者操作曲線(receiver operated curve)(ROC)分析を用いる血漿分析物濃度の関係分析を、SPSS v17を使用して行った。ROC曲線生成及びバイオマーカーパネル比較のために、バイオマーカーデータを標準化変数(zスコア)として分析した。すべての場合、標準化変数は、t=0、1及び2時間試料から得た最大バイオマーカー値、すなわち3つの値の最大値から導出した。すべての分析において、P値<0.05を有意と考えた。
TnTuORFのアミノ末端に対するポリクローナル抗体r244により、31±3%の平均ゼロ結合、26±6pg/mLの試料検出限界、458±105pg/mLのED50及び130〜3900pg/mLの動作範囲を有する、高感度、特異的ラジオイムノアッセイ(図2)を得、アッセイ内変動係数(CV)は、25アッセイにわたって<10%であった。アッセイ間CVは、1300pg/mLで14%、747pg/mLで15%であった。抗血清244と関連内因性ペプチド、特に心筋トロポニンT、トロポニンI及びVIP36sp(1〜7)、並びに周知薬剤との交差反応性は無視できた(表III)。初期評価により、TnTuORF免疫反応性がNa3−EDTAに採集した末梢血からのヒト血漿中に存在すること、及びそのTnTuORF免疫反応性が合成標準曲線と並行して弱まることを確認した(図2)。正常ヒト静脈血漿中の免疫反応性TnTuORFのレベル(平均±SD)は、725±340pg/mL(範囲273〜2260pg/mL、正常範囲の上限の99パーセンタイル=1885pg/mL)であり、免疫反応性がすべての試料において検出された。TnTuORF濃度は、男性のほうが有意に高く(825±403pg/mL対666±285pg/mL、p=0.018)、血漿クレアチニンとのみ有意な生化学的相関を有した(r=0.201、p=0.036、図3)。付随するhsTNTレベル、年齢、血圧及びBMIにはTnTuORFとの有意な関連性はなかった。対応するhsTNTレベルは、6.0±2.4pg/mL(範囲3.0〜14.9pg/mL)であり、免疫反応性が試料の49%(53名/109名)に存在した。hsTnTレベルは、男性のほうが高い傾向があり(6.6±2.4pg/mL対5.5±2.3pg/mL)、年齢と有意に相関した(r=0.328、P=0.017)。
MIの診断に使用されるTnTの形態は、心臓特異的であると考えられる(Thygessenら(2012)Circulation 126:2020〜2035)。これを踏まえて、本出願人は、TnTuORFのレベルが心臓に供給する血液(すなわち動脈試料)中より心臓から流出する血液中(すなわち、心冠静脈洞試料中)のほうが高くなると予想した。冠静脈洞血漿は、同時に採取した動脈血漿試料と比較して、より高い濃度の免疫反応性TnTuORFを含有する傾向があった(978.2±118.1pg/mL対908.7±88.9pg/mL、平均±SD、P=0.472、図4)。しかし、TnTuORFの静脈レベル上昇も肝静脈全域にわたって観察されたが、大腿静脈全域にわたってTnTuORFのレベルが低減される傾向があった。比較すると、hsTnTのレベルは、心冠静脈洞試料において有意に上昇された(13.1±2.7pg/mL対10.1±1.8pg/mL、P=0.019)。hsTnTの腎静脈レベルは、動脈レベルと比較して有意に低かった(8.6±1.5pg/mL対10.1±1.7pg/mL、P=0.002、図4)。このように、TnTuORF及びcTnTの局所血漿プロファイルは、純生産量及びクリアランスの勾配に関して、器官によって異なった。
精製TnTuORFを100mLの血漿から免疫親和性精製によって調製し、次いで、イムノアッセイと結合されたRP−HPLC及びSE−HPLCによるさらなる精製に付した。主RP−HPLCによって2つの大きい免疫反応性ピークを同定し、2番目に溶出したものが合成TnTuORFペプチドと一致した(ピークII、図5のA)。SE−HPLCでは、RP−HPLCで得られたピークIIがおおよそ1.5K分子量で溶出した一方で、ピークIは、およそ1K分子量で溶出した(図5のB)。考え合わせると、これらの結果は、免疫反応性TnTuORFがヒト血漿中に(i)12アミノ酸インタクト形態、及び(ii)MAPEGWVIVVI(配列番号2)、MAPEGWVIVV(配列番号3)又はMAPEGWVIV(配列番号4)を含む、カルボキシル末端短縮形体として存在することを示唆している。
免疫反応性TnTuORFがヒト循環器に存在することを確証したので、本出願人は、心筋梗塞をもたらす急性心虚血の診断バイオマーカーとしての循環TnTuORFの臨床的有用性を判定することを試みた。症状発症が症状提示前4時間未満であった、記録されたST上昇心筋梗塞(STEMI)がある患者4名において、静脈TnTuORF濃度は、症状発症4〜5時間後には減少する傾向があり、そして24時間までに増加して安定水準に戻った(図6のA)。症状発症後5時間までの平均濃度は、正常対照に見られるもののほぼ半分であり、72時間までにその対照で見られる範囲に完全には戻らなかった。このプロファイルは、STEMIの血漿において急上昇するhsTnTのプロファイルとは異なる(図6のB)。
TnTuORF測定がACSの診断に役立つ可能性を評価するために、本出願人は、心臓に起因することが疑われる胸痛の主訴を継続的に提示する患者502名の予期的観察研究に着手した。患者人口統計学的及び分析物データを表IIに示す。患者のおおよそ23%は、心筋梗塞(MI)の最終宣告診断を有した。提示TnTuORF濃度は、急性MI(ROC AUC=0.46、P=NS)の診断にも不安定狭心症(UA、ROC AUC=0.47、P=NS)の診断にも一切有用性も有さなかったが、ACS以外の心臓障害を有する患者の良好な診断能力を有し(AUC=0.79、P<0.001、図7)、NTプロBNPより正確であった(AUC=0.72、P<0.001)。したがって、症状提示2時間以内のTnTuORFの最大濃度は、非MI、非UA心臓障害を有する患者では、他のすべての患者群と比較して有意に高かった(1159±429pg/mL対778±353pg/mL、P<0.001)。さらに、TnTuORFを心拍数及びヘモグロビン(HB)濃度に加えたとき、代替心臓障害の診断のためのAUCは0.83に好転した(P<0.001、図7)。hsTnT及びTnI両方は、それぞれ0.95及び0.97のROC曲線(NSTEMI n=96、両方ともP<0.001)で、非ST上昇MI(NSTEMI)を診断する優れた診断能力を有した。比較すると、TnI×hsTnT/TnTuORF(ここでは「トロポニンプラス(商標)」と呼ぶ)の生成物比は、0.97のAUCをもたらした(P<0.001、図8)。絶対的には、症状提示2時間以内に、hsTnTはNSTEMI患者の94%(90名/96名)を検出した一方で、TnIは、92%(88名/96名)を検出したが、hsTnTによって示されたこの改善された感度は、偽陽性増加という犠牲を払って実現された(hsTnT陽性非MI患者=68名対TnI陽性非MI患者=32名)。比較すると、トロポニンプラスは、2時間以内にNSTEMI患者の98%(94名/96名)を検出し、63の非MI陽性結果を生じさせた。このように、hsTnT単独と比較して、トロポニンプラス比は、2時間以内に検出されるMI患者数を4%増加させ、偽陽性率を7%低下させた。
本出願人の結果は、循環器内のはっきりと区別できる別々のエンティティーとしてのuORFペプチドの初めての証明である。GR−1A受容体からのuORFペプチドが分離細胞サイトゾル抽出物中に存在すること(Dibaら(2001)J.Cell.Biochem.81:149〜161)は以前に報告されており、著者は、上記uORFペプチドが彼らの実験で使用した培地中に存在することを報告しなかった。本出願人は、イムノアッセイでもHPLCでもヒト血漿中のTnTuORFがhsTNTと関連しているという証拠を見いださず、実際、TnTuORFの血漿レベルはhsTnT及びTnIと負の相関をもつ傾向があった。しかし、本出願人は、TnTとTnIの両方について報告されている(Erikssonら(2005)N.Engl.J.Med.352:98〜100;Savukoskiら(2012)Clin.Chem.58:1040〜1048)ような、TnTuORFが他の血漿エンティティー、例えば自己抗体又は他の結合タンパク質と関連又は結合する可能性を排除することができない。
Claims (43)
- 心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になる対象のリスクを予測する方法であって、
(i)前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定された前記TnTuORFペプチドのレベルと、適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
前記対照集団と比較した前記TnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になることの予測であり、さらに、前記測定するステップが、前記TnTuORFペプチドと、前記TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む、方法。 - 対象における心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を診断する方法であって、
(i)前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定された前記TnTuORFペプチドのレベルと、適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
前記対照集団と比較した前記TnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を示し、さらに、前記測定するステップが、前記TnTuORFペプチドと、前記TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む、方法。 - 前記対象からの第1の生体試料中の前記TnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
前記第1の生体試料と同じ対象から採取されるが時間の点ではより後に採取される第2の生体試料中の前記TnTuORFペプチドのレベルを測定するステップと、
前記第1の試料中の前記TnTuORFペプチドのレベルと、前記第2の試料中の前記TnTuORFペプチドのレベルとを比較するステップと、
を含み、
前記第1の試料と前記第2の試料間での前記TnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞若しくは不安定狭心症以外の心臓障害になるリスク増加を示すか、又は、心筋梗塞若しくは不安定狭心症以外の心臓障害、及び/又は心筋梗塞若しくは不安定狭心症以外の心臓障害の持続、を示す、請求項1又は2に記載の方法。 - 心拍数、ヘモグロビン濃度、血圧、年齢、性別、体重、身体活動レベル、並びに肥満、糖尿病及び心イベントを含むイベントの家族歴、並びにトロポニンT及びトロポニンIの循環レベルを含む、1つ又は複数のリスク因子の分析と併せて実行される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記リスク因子が、心拍数及びヘモグロビン濃度を含む、請求項4に記載の方法。
- (iii)前記対象に処置レジメンを行うステップであり、前記対象が、前記対照集団における前記TnTuORFペプチドの循環レベルと比較して、前記TnTuORFペプチドの循環レベルの増加を有することが判明している、ステップをさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する対象の反応性をモニターするための方法であって、
(i)前記対象からの第1の生体試料中のTnTuORFのレベルを測定するステップと、
(ii)同じ対象から採取される、前記対象からの第2の生体試料中のTnTuORFのレベルを測定するステップと、
(iii)前記第1の試料中のTnTuORFの測定レベルと前記第2の試料中のTnTuORFの測定レベルとを比較するステップと
を含み、
前記第1の試料と前記第2の試料間でのTnTuORFのレベルの増加が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する反応不良を示し、前記第1の試料と前記第2の試料間でのTnTuORFのレベルの減少が、心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害のための薬物での処置、又は治療に対する好反応を示す、方法。 - 前記対照集団が、前記心臓障害であることがわかっている、性別及び年齢を一致させた対象である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記基準範囲が、前記対照集団からの平均循環TnTuORFペプチド濃度である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記心臓障害が、心房細動、心不全、心膜炎、神経伝導障害、血管迷走神経性失神、又はこれらのいずれかの組合せから選択される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生体試料が、体液又は心臓組織試料である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記体液が、静脈血及び動脈血を含む血液、血漿、血清並びに間質液から選択される、請求項11に記載の方法。
- 前記結合剤が、抗体又はその抗原結合断片である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ若しくはヒト化抗体又はそれらの抗原結合断片から選択される、請求項13に記載の方法。
- 前記抗体が、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である、請求項14に記載の方法。
- 前記結合剤又は前記抗体が、固相に固定されている、請求項13〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドが、配列番号1、配列番号2、配列番号3及び配列番号4のいずれか1つで示されるアミノ酸配列からなる、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を有する対象又はそのような心臓障害になるリスクがある対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するアッセイであって、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、前記対象からの生体試料中の前記TnTuORFペプチドとの結合に基づいて定量的に測定することができる、アッセイ。
- (i)前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するステップと、
(ii)測定された前記TnTuORFペプチドのレベルと適切な対照集団からの基準範囲とを比較するステップと
を含み、
前記対照集団と比較した前記TnTuORFペプチドの循環レベルの増加が、心筋梗塞若しくは不安定狭心症以外の心臓障害になることの予測であり、又は対象を心筋梗塞若しくは不安定狭心症以外の心臓障害と診断するのに役立ち、さらに、前記測定するステップが、前記TnTuORFペプチドと、前記TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤との間の結合を検出することを含む、請求項18に記載のアッセイ。 - イムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ又は化学発光アッセイである、請求項18又は19に記載のアッセイ。
- 前記結合剤が、抗体又はその抗原結合断片である、請求項18〜20のいずれか一項に記載のアッセイ。
- 心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を有する対象又はそのような心臓障害になるリスクがある対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するためのキットであって、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、TnTuORFペプチドとの結合に基づいて定量的に測定することができる、キット。
- 前記結合剤が、抗体又はその抗原結合断片である、請求項22に記載のキット。
- 前記試料中のTnTuORFペプチドのレベルの測定方法についての取扱説明書をさらに含む、請求項21又は22に記載のキット。
- 心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になる対象のリスクの予測に使用するための、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤。
- 対象における心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害の診断に使用するための、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤。
- 心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害になる対象のリスクを予測するための薬剤の製造における、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤の使用。
- 対象における心筋梗塞又は不安定狭心症以外の心臓障害を診断するための薬剤の製造における、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤の使用。
- 単離されたトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチド。
- 配列番号1、配列番号2、配列番号3又は配列番号4のいずれかで示されるアミノ酸配列からなる、請求項26に記載の単離されたTnTuORFペプチド。
- 対象の心筋梗塞リスクを予測する際の心筋トロポニンの感度及び偽陽性パフォーマンスを改善するアッセイであって、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、前記対象からの生体試料中の前記TnTuORFペプチドとの結合に基づいて定量的に測定することができる、アッセイ。
- 対象の心筋梗塞を診断する際の心筋トロポニンの感度及び偽陽性パフォーマンスを改善するアッセイであって、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、前記対象からの生体試料中の前記TnTuORFペプチドとの結合に基づいて定量的に測定することができる、アッセイ。
- 前記心筋トロポニンが、トロポニンT及びトロポニンIを含む、請求項31又は32に記載のアッセイ。
- 前記心筋トロポニンが、高感度トロポニンT×トロポニンIによって表される、請求項31〜33のいずれか一項に記載のアッセイ。
- 心筋トロポニンの前記感度及び前記偽陽性パフォーマンスが、心筋トロポニンのTnTuORFペプチドに対する生成物比を用いることによって改善される、請求項31〜34のいずれか一項に記載のアッセイ。
- 生成物比が、高感度トロポニンT×トロポニンI/TnTuORFペプチドによって表される、請求項35に記載のアッセイ。
- 心イベント後の対象における死亡率を予測するアッセイであって、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、前記対象からの生体試料中の前記TnTuORFペプチドとの結合に基づいて定量的に測定することができる、アッセイ。
- 心イベント後に急性非代償性心不全になる対象のリスクを予測する際のN末端脳ナトリウム利尿ペプチド(NT−プロBNP)の感度及び偽陽性パフォーマンスを改善するアッセイであって、トロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、前記対象からの生体試料中の前記TnTuORFペプチドとの結合に基づいて定量的に測定することができる、アッセイ。
- 対象における心筋梗塞を予測又は診断する際の心筋トロポニンの感度及び偽陽性パフォーマンスの改善に使用するための、前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するためのキットであって、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、TnTuORFとの結合に基づいて定量的に測定することができる、キット。
- 心イベント後に急性非代償性心不全になる対象のリスクを予測する際のN末端脳ナトリウム利尿ペプチド(NT−プロBNP)の感度及び偽陽性パフォーマンスの改善に使用するための、前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドのレベルを測定するためのキットであって、TnTuORFペプチドに選択的に結合する結合剤を含み、該結合剤は、TnTuORFとの結合に基づいて定量的に測定することができる、キット。
- 対象における心筋梗塞を予測又は診断する際の心筋トロポニンの感度及び偽陽性パフォーマンスの改善に使用するための、前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤。
- 心イベント後の対象における死亡率の予測に使用するための、前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤。
- 心イベント後に急性非代償性心不全になる対象のリスクを予測する際のN末端脳ナトリウム利尿ペプチド(NT−プロBNP)の感度及び偽陽性パフォーマンスの改善に使用するための、前記対象からの生体試料中のトロポニンT上流オープンリーディングフレーム(TnTuORF)ペプチドに選択的に結合するTnTuORFペプチド結合剤。
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Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006526140A (ja) * | 2002-12-24 | 2006-11-16 | バイオサイト インコーポレイテッド | 鑑別診断のためのマーカーおよびその使用方法 |
US20070172888A1 (en) * | 2006-01-25 | 2007-07-26 | Klaus Hallermayer | Measuring troponin antibodies to assess cardiovascular risk |
WO2008030122A1 (en) * | 2006-09-07 | 2008-03-13 | University Of Otago | Biomarkers |
JP2009524807A (ja) * | 2006-01-25 | 2009-07-02 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 抗トロポニン抗体および心臓血管リスク |
EP2261669A1 (en) * | 2001-05-04 | 2010-12-15 | Alere San Diego, Inc. | Diagnostic markers of acute coronary syndromes and methods of use thereof |
WO2013017690A2 (en) * | 2011-08-03 | 2013-02-07 | Roche Diagnostics Gmbh | Troponin based rule in and rule out algorithm of myocardial infarction |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3922873A1 (de) * | 1989-04-25 | 1990-10-31 | Boehringer Mannheim Gmbh | Spezifische antikoerper gegen troponin t, ihre herstellung und verwendung in einem reagenz zur bestimmung von hermuskelnekrosen |
US6991907B1 (en) | 1995-04-18 | 2006-01-31 | Biosite, Inc. | Methods for the assay of troponin I and T and complexes of troponin I and T and selection of antibodies for use in immunoassays |
CN101371144A (zh) * | 2006-01-25 | 2009-02-18 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗肌钙蛋白抗体和心血管风险 |
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2261669A1 (en) * | 2001-05-04 | 2010-12-15 | Alere San Diego, Inc. | Diagnostic markers of acute coronary syndromes and methods of use thereof |
JP2006526140A (ja) * | 2002-12-24 | 2006-11-16 | バイオサイト インコーポレイテッド | 鑑別診断のためのマーカーおよびその使用方法 |
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