JP2017125075A - 活性剤の送達のための非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート - Google Patents

Abstract

【課題】眼の疾患および障害を処置および予防するための非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートを提供すること。
【解決手段】眼の疾患および障害を処置および予防するための非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートが提供される。ポリマー薬物コンジュゲートは、長期間、治療的レベルの１種または複数の活性剤を効果的に送達することができる、ナノ粒子、マイクロ粒子、およびインプラントを形成することができる。非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートの形態の活性剤を眼に投与すると、活性剤単独投与と比べて、副作用の低減が生じる。また、ウエット型加齢黄斑変性症、ならびにブドウ膜炎などの炎症に伴う眼の疾患および障害などの、眼内血管新生疾患を処置する方法も提供される。
【選択図】なし

Description

（連邦政府後援の研究または開発に関する声明）
本発明は、米国国立衛生研究所によってＪｕｓｔｉｎ Ｓｃｏｔ Ｈａｎｅｓに授与された助成金Ｒ０１ＣＡ１４０７４６、Ｐ３０ＥＹ００１７６５、およびＵ５４ＣＡ１５１８３８、ならびに米国国立衛生研究所によってＰｅｔｅｒ Ａｎｔｈｏｎｙ Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏに授与された助成金Ｒ０１ＥＹ０１２６０９による国庫補助によってなされた。政府は本発明における特定の権利を有する。

本発明は、活性剤を制御送達するため、特に眼に活性剤を制御送達するための、有効性、安定性、安全性、ならびにナノ粒子およびマイクロ粒子への形成容易性が改善されている非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート、ならびにその使用方法に関する。

６５歳を超えるおよそ１７０万人のアメリカ人が、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）に罹患している。国家人口が高齢になるにつれて、この数は新しい症例で１年あたり推定２００，０００人ずつ増えることが予想される。ＡＭＤ、ならびに糖尿病網膜症、緑内障、および網膜色素変性を含めた、後眼部（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ）に影響を及ぼす他の疾患に起因する重症な視力喪失が、世界中で、非可逆的な失明のほとんどの症例の原因となっている。

現在、後眼部疾患の処置は、毒性を回避しながら、眼球後部（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｅｙｅ）における標的組織に有効用量の薬物を送達する難しさにより、かなり限定的である。後眼部に薬物を送達するために４種の投与形態が一般に使用されている。すなわち、局所投与、全身投与、眼内投与、および眼球周囲への投与である。

局所投与、例えば、眼の表面への溶液の適用は、眼疾患を薬理学的に管理する治療の、最も一般的な投与形式である。局所投与は、侵襲性が最小限であるという利点を有する。しかし、多くの要因により、その有用性が制限され得る。例には、角膜上皮により供給される溶質流動に対する大きな障壁、ならびにドレナージおよび涙液の代謝回転の結果として起こる迅速かつ多量の前角膜の減損が挙げられる。典型的に、局所的に適用される薬物の５％未満しか角膜を透過せず、眼内組織に到達しないと見積もられている。点眼された用量の大部分は、結膜を経由し、多くは結膜支質の血管（ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ ｓｔｒｏｍａ）、および眼瞼縁血管により全身的に吸収される。溶液が鼻涙管に入り、鼻および鼻咽頭の粘膜により吸収される場合も、全身的な吸収がかなり起こる。前眼部組織に最終的に到達する、局所適用された薬物用量が比較的少ない割合であるにもかかわらず、主として、投与することができる薬物濃度が非常に高いため、局所製剤はある環境で有効となり得る。

局所薬物送達の最近の進歩は、改善した眼用薬物の接触時間、および眼の表面から後眼部までの薬物送達に着目してきたものである。例えば、軟膏剤、ゲル、リポソーム製剤、およびＯｃｕｓｅｒｔ（登録商標）システムなどの様々な持続性の放出制御基質、コラーゲンシールド、ならびにヒドロゲルレンズが、眼用薬物の接触時間を改善するために開発されてきた。ポリマーゲル、コロイドシステム、およびシクロデキストリンを使用する局所送達システムも、後眼部への薬物送達を改善することを目的に検討されてきた。これらの努力にもかかわらず、局所経路により後眼部へ治療用量の薬物を送達することは、依然
として大きな課題である。

後眼部疾患の処置のための薬物は、全身的にも投与することができる。全身投与は後眼に薬物を送達することができるものの、硝子体後部、網膜または脈絡膜において治療薬物レベルを生じさせるには、多量の全身投与量が通常必要である。その結果、全身投与は、多量の全身投与量の治療剤を投与することに伴う、深刻な副作用により一般に悩まされる。

結膜下もしくは眼球後注射、または徐放性デバイスの配置を使用する球眼周囲への薬物送達は、後眼部組織へ薬物を送達するための別の経路を提供する。この手法は、局在的な徐放性薬物送達の可能性を提示する。ヒトの強膜の平均表面積１７ｃｍ^２は、眼球の表面積の合計の９５％を占めており、眼の内部に薬物が拡散するのに、角膜の表面積１−ｃｍ^２よりもずっと大きい経路を与える。また、強膜の透過性が最も高い領域に徐放性送達デバイスまたはシステムを配置した場合、強膜の厚さの領域による違いを使用して、経強膜による薬物拡散をさらに最適化することができる。強膜は、例えば、視神経近くで１．０ｍｍの厚さであり、角強膜輪部では平均０．５３ｍｍの厚さであり、赤道では平均０．３９ｍｍまで薄くなり、ここでは相当数の眼において０．１ｍｍと薄くなり得る。Ｇｅｒｏｓｋｉら、Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ４１巻（５号）、９６１〜９６４頁（２０００年）を参照されたい。

硝子体内注射は、後眼部へ治療的レベルの薬物を投与するための、最も一般的な方法を表す。硝子体内注射は、薬物に付随するいずれの全身的な毒性を最小限にしながらも、後眼部における初期薬物レベルを制御する機会を提供するが、硝子体内投与はいくつかの深刻な欠点をこうむる。硝子体内注射は、網膜剥離、出血、眼内炎、および白内障の発症リスクを含めた、固有の潜在的な副作用をいくつかを有する。繰り返して注射をする必要があることが多く、この注射は、必ずしも患者により十分許容されるものではない。さらに、硝子体中に直接注射した薬物は迅速に除かれ、これにより後眼部において、治療有効レベルの薬物を維持するのを難しくしている。

薬物が急速に除かれる身体（例えば、後眼部）の領域に投与した薬物は、慢性疾患または障害を処置するために使用され、そして／または治療上有効な濃度範囲（すなわち、治療濃度域）が狭いので、従来的な薬物送達法は不適切である。従来的な薬物投与には、薬物の安定性、活性、およびバイオアベイラビリティを確保する、投与製剤中の治療剤の周期的投与を必要とする。治療剤の投与は、通常、薬物濃度が初期には急激に上昇し（多くの場合、毒性レベルまで）、続いて薬物が排除される、そして／または代謝されるにつれて、濃度が定常的に低下する。慢性眼疾患を処置するために、後眼部において治療剤の有効濃度を維持するため、投与製剤の繰り返し投与が通常必要である。周期的な薬物送達は、経時的に揺れ動く薬物濃度プロファイルを生じ、毒性レベルにまで急上昇する、そして／または治療濃度域より下に落ち込むことが多い。

放出制御製剤は、こうした場合において、患者の転帰を改善する可能性を提供する。放出制御製剤は、薬物濃度の急上昇を最小限にする／なくす能力をもたらし、副作用および／または毒性を最小限にする。放出制御製剤はまた、より一層長い期間、薬物濃度を治療濃度域内に維持することもできる。その結果、これらの製剤は、眼注射の頻度を低減するので、患者にとって一層快適で、かつ便利である。

このような目的で、硝子体内用徐放性デバイスが研究されてきた。これらのデバイスの中で最もよく知られているものは、サイトメガロウイルス性網膜炎の処置において使用されるＶＩＴＲＡＳＥＲＴ（商標）ガンシクロビルインプラントである。しかし、ＶＩＴＲＡＳＥＲＴ（商標）などのインプラントは、複雑で望ましくない眼内手術を必要とし、か
つ定期的に交換しなければならない。

生分解性ポリマー粒子中に封入された薬物を含有している徐放製剤は、魅力的な代替物である。ナノ粒子およびマイクロ粒子製剤は、懸濁液として注射することができ、眼内インプラント手術を不必要とする。ポリマー粒子が分解するにつれ、および／または薬物がポリマー粒子から拡散するにつれ、薬物が放出される。

いくつかの欠点が、放出制御ポリマーナノ粒子およびマイクロ粒子製剤の開発成功の妨げとなってきた。第１に、特にドキソルビシンなどの親水性分子の場合、粒子形成中、高い薬物搭載量、および／または薬物搭載量の制御を達成するのが難しい場合が多い。Ｇｒｏｖｅｎｄｅｒ Ｔ．ら、Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ５７巻（２号）、１７１〜１８５頁（１９９９年）。第２に、ポリマー粒子、特にポリマーナノ粒子を形成する場合、高い薬物封入効率を達成するのが困難である。ほとんどのポリマー粒子は、粒子表面上または近傍において、封入した薬物分子を保有しにくい。その結果、多くの粒子が望ましくない、二相の薬物放出パターンを示す。ナノ粒子の表面上または近傍に不十分に封入されている薬物分子は、注射時に溶液中に素早く拡散する恐れがあり、その結果、薬物が初期バースト放出する。多くのポリマーナノ粒子の場合、４０〜８０％もの多くの封入薬物分子が、投与後、最初の数時間または数十時間もの間にバースト放出される。ポリマー粒子中により一層深く埋められている薬物分子にとっては、拡散障壁が高いので、最初の２４〜４８時間後の薬物放出はかなり一層遅くなる。こうした粒子により、投与すると、多くの場合、薬物濃度の毒性レベルまでの急激な初期上昇がいまだに生じる恐れがある。

したがって、本発明の目的は、活性剤の制御送達のための、特性の改善されたポリマー薬物コンジュゲートを提供することである。

本発明の目的はまた、治療的レベルの１種または複数の活性剤を長期間、眼に効果的に送達することが可能な薬物製剤を提供することでもある。

本発明のさらなる目的は、眼の疾患もしくは障害を処置または予防する改善された方法を提供することである。

Ｇｅｒｏｓｋｉら、Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ４１巻（５号）、９６１〜９６４頁（２０００年） Ｇｒｏｖｅｎｄｅｒ Ｔ．ら、Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ５７巻（２号）、１７１〜１８５頁（１９９９年）

とりわけ眼に薬物を制御送達するために特性が改善されている、ナノ粒子、マイクロ粒子、およびインプラントを形成可能な非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートが提供される。ポリマー薬物コンジュゲートは、多価分岐点を介して共有結合的に接続している１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントおよび１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントを含有して、少なくとも３つのポリマーセグメントを含有している非線状マルチブロックコポリマーを形成する。ポリマー薬物コンジュゲートは、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントに共有結合的に付着している、１種または複数の治療剤、予防剤、または診断剤をさらに含有している。ポリマー薬物コンジュゲートの使用により、より一層制御された薬物搭載量、および薬物放出プロファイルを有する粒子を形成するこ
とができる。さらに、コンジュゲートの溶解度は、可溶な薬物濃度、したがって毒性を最小限にするよう制御することができる。

ポリマー薬物コンジュゲートは、以下に示される一般式

（式中、
Ａは、出現毎に独立して、活性剤を表すが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｘは、出現毎に独立して、疎水性ポリマーセグメントを表し；
Ｙは、多価分岐点を表し；
Ｚは、出現毎に独立して、親水性ポリマーセグメントを表し、ｍは１〜２０の間の整数であり、ｎは０〜２０の間の整数である）
により表すことができる。

一部の実施形態では、ｍは１以上であり、ｎは０である。別の実施形態では、ｍおよびｎは１以上であり、その結果、ｍ＋ｎが２以上（４または５以上など）となる。

好ましくは、Ａは、抗緑内障剤、抗血管新生剤、抗感染症剤、抗炎症剤、成長因子、免疫抑制剤、もしくは抗アレルギー剤などの眼の疾患または障害の処置あるいは予防に有用な治療剤または予防剤である。

１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、任意の、生体適合性がある、非毒性の親水性ポリマーまたはコポリマーとすることができる。好ましい実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリ（アルキレングリコール）を含有している。好ましい実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、２つ以上の親水性ポリマーセグメントを含有している。

１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、任意の生体適合性の疎水性ポリマーまたはコポリマーとすることができる。好ましい実施形態では、この疎水性ポリマーまたはコポリマーは、生分解性である。好ましい実施形態では、この疎水性ポリマーは、ポリセバシン酸無水物などのポリ無水物、またはそのコポリマーである。

１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントの分解プロファイルは、インビボでの活性剤の放出速度に影響を及ぼすよう、選択することができる。例えば、疎水性ポリマーセグメントは、数日間〜２４週間、より好ましくは７日間〜８週間、好ましくは７日間〜３週間の期間をかけて分解するよう、選択することができる。他の場合、疎水性ポリマーセグメントは、７日間〜２年間、より好ましくは数日間〜５６週間、より好ましくは４週間〜５６週間、最も好ましくは８週間〜２８週間の期間をかけて分解するよう、選択することができる。

分岐点は、例えば、３つ以上の官能基を含有している有機分子とすることができる。好ましくは、分岐点は、少なくとも２つの異なるタイプの官能基（例えば、１種または複数のアルコールと１種または複数のカルボン酸、あるいは１種もしくは複数のハライドと１種もしくは複数のカルボン酸または１種もしくは複数のアミン）を含有することになる。こうした場合、分岐点上に存在している異なる官能基は、独立して合成的に対処されて、制御された化学量論比で、分岐点への疎水性セグメントおよび親水性セグメントの共有結合的付着を可能にする。ある種の実施形態では、分岐点は、クエン酸、酒石酸、粘液酸、グルコン酸、または５−ヒドロキシベンゼン−１，２，３，−トリカルボン酸などのポリ
カルボン酸である。
一部の実施形態では、分岐点は、１つの疎水性ポリマーセグメントと３つの親水性ポリエチレングリコールポリマーセグメントとを接続する。ある種の場合、ポリマー薬物コンジュゲートは、式Ｉ

（式中、
Ａは、治療剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｌは、出現毎に独立して、存在しないか、またはエーテル（例えば、−Ｏ−）、チオエーテル（例えば、−Ｓ−）、二級アミン（例えば、−ＮＨ−）、三級アミン（例えば、−ＮＲ−）、二級アミド（例えば、−ＮＨＣＯ−；−ＣＯＮＨ−）、三級アミド（例えば、−ＮＲＣＯ−；−ＣＯＮＲ−）、二級カルバメート（例えば、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−）、三級カルバメート（例えば、−ＯＣＯＮＲ−；−ＮＲＣＯＯ−）、尿素（例えば、−ＮＨＣＯＮＨ−；−ＮＲＣＯＮＨ−；−ＮＨＣＯＮＲ−、−ＮＲＣＯＮＲ−）、スルフィニル基（例えば、−ＳＯ−）、もしくはスルホニル基（例えば、−ＳＯＯ−）であり；
Ｒは、出現毎に個々に、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリール基（アルキル、シクロプロピル、シクロブチルエーテル、アミン、ハロゲン、ヒドロキシル、エーテル、ニトリル、ＣＦ_３、エステル、アミド、尿素、カルバメート、チオエーテル、カルボン酸、およびアリールから個々に選択される１〜５つの間の置換基により場合により置換されている）であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール鎖を表し；
Ｘは、疎水性ポリマーセグメンを表す）
によって表すことができる。

ある種の実施形態では、分岐点はクエン酸分子であり、親水性ポリマーセグメントはポリエチレングリコールである。こうした場合、ポリマー薬物コンジュゲートは、式ＩＡ

（式中、
Ａは、活性剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｄは、出現毎に独立して、ＯまたはＮＨを表し；
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール鎖を表し；

Ｘは、疎水性ポリマーセグメンを表す）
によって表すことができる。

非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、眼に薬物を制御送達するために特性が改善されたナノ粒子、マイクロ粒子、およびインプラントを形成する。また、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるナノ粒子および／またはマイクロ粒子を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤（例えば、眼に注射または局所適用するのに適した溶液または懸濁液を生成するもの）と組み合わせて含有している、医薬組成物も提供される。

また、眼内血管新生疾患（例えば、ウエット型加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、および網膜血管新生（ＲＮＶ））、もしくは炎症（例えば、ブドウ膜炎）を伴う眼疾患などの眼の疾患または障害を処置あるいは予防するために、これらの医薬組成物、およびまたは１種または複数の非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートを含有しているインプラントを投与する方法も提供される。これらの製剤およびインプラントは、長期間、一部の場合、活性剤を単独で投与したときと比べて副作用を低減しながら、治療的レベルの１種または複数の活性剤を眼に効果的に送達することができる。
上記に加え、本発明は以下を提供する。
（項目１）
以下の一般式


（式中、
Ａは、治療剤、予防剤、または診断剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｚは、出現毎に独立して、親水性ポリマーセグメントを表し；
Ｙは、存在しないか、または一価、二価、もしくは多価分岐点を表し；
Ｘは、疎水性ポリマーセグメントを表し；
ｍは１〜２０の間の整数であり、ｎは０〜２０の間の整数である）
により記載されるポリマーコンジュゲート。
（項目２）
Ａが、抗緑内障剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、抗感染症剤、抗炎症剤、成長因子、抗アレルギー剤からなる群から選択される、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目３）
Ｚが、ポリ（アルキレングリコール）、多糖類、ポリ（ビニルアルコール）、ポリピロリドン、ポリオキシエチレンブロックコポリマー、およびそれらのコポリマーからなる群から選択される、項目１または２に記載のコンジュゲート。
（項目４）
Ｚが、出現毎に、ポリエチレングリコールを含む、項目３に記載のコンジュゲート。
（項目５）
Ｘが、生分解性である、項目１〜４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目６）
Ｘが、ポリエステル、ポリカプロラクトン、ポリ無水物、およびそれらのコポリマーからなる群から選択される、項目５に記載のコンジュゲート。
（項目７）
Ｘが、ポリ無水物を含む、項目５に記載のコンジュゲート。
（項目８）
Ｘが、ポリセバシン酸無水物を含む、項目７に記載のコンジュゲート。
（項目９）
Ｘが、１，６ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン（ＣＰＨ）、またはＣＰＨとポリセバシン酸無水物との組合せを含む、項目７に記載のポリマーコンジュゲート。
（項目１０）
Ｙが、以下：


のうちの１つである、項目１〜９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１１）
Ｙが、クエン酸である、項目１０に記載のコンジュゲート。
（項目１２）
項目１〜１１のいずれか一項に記載のコンジュゲートを含む、マイクロ粒子および／またはナノ粒子集団。
（項目１３）
項目１〜１１のいずれか一項に記載のコンジュゲート、または項目１２に記載の粒子、および薬学的に許容される賦形剤を含む、製剤。
（項目１４）
以下の式


（式中、
Ａは、治療剤、予防剤、または診断剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく、
Ｘは、疎水性ポリマーセグメントである）
によって定義されるコンジュゲートをさらに含む、項目１３に記載の製剤。
（項目１５）
Ｘが、ポリ無水物を含む、項目１４に記載の製剤。
（項目１６）
前記賦形剤が、眼に投与するのに適している、項目１３〜１５のいずれか一項に記載の製剤。
（項目１７）
疾患または障害を処置する方法であって、それを必要としている患者に、項目１２〜１６のいずれか一項に記載の製剤を投与することを含む、方法。
（項目１８）
前記製剤が眼に投与される、項目１７に記載の方法。

図１Ａ〜Ｂは、アントラサイクリンを投与しないで、および様々な量のドキソルビシンまたはダウノルビシンを投与した際の、レーザー光凝固によるブルッフ膜破裂の１４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＣＮＶの面積（ｍｍ^２）をプロットした棒グラフである。アントラサイクリン投与時に測定されたＣＮＶの値の場合、アントラサイクリン投与時に観察されたＣＮＶの面積は、未処置僚眼（ＦＥ）において観察されたＣＮＶの面積のとなりにプロットしている。この棒は、脈絡膜ＮＶの平均（±ＳＥＭ）面積を表している。図１Ａは、アントラサイクリンを投与せず（マウスの両眼にビヒクルだけを注射（ＢＥ）、左の棒）、ならびに１０、１．０および０．１μｇのダウノルビシン（ＤＮＲ）を投与した際の、レーザー光凝固によるブルッフ膜破裂の１４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＣＮＶ面積（ｍｍ^２）をプロットしている。１０μｇのＤＮＲを注射した眼は、ビヒクルしか注射されていない僚眼と比べて、統計的に有意なＣＮＶ面積の低下（Ｐ＜０．００１、ｎ＝１０）を示した。１．０μｇおよび０．１μｇのＤＮＲを注射した眼は、ビヒクルしか注射されていない僚眼と比べて、統計的に有意なＣＮＶ面積の低下を示さなかった（１．０μｇの場合、Ｐ＜０．０８２、ｎ＝１０；０．１μｇの場合、Ｐ＜０．３９９、ｎ＝１０）。図１Ｂは、アントラサイクリンを投与せず（マウスの両眼にビヒクルだけを注射（ＢＥ）、左の棒）、ならびに１０、１．０および０．１μｇのドキソルビシン（ＤＸＲ）を投与した際の、レーザー光凝固によるブルッフ膜破裂の１４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＣＮＶの面積（ｍｍ^２）をプロットしている。１０μｇのＤＸＲを注射した眼は、ビヒクルしか注射されていない僚眼と比べて、統計的に有意なＣＮＶ面積の低下（Ｐ＜０．００１、ｎ＝１０）を示した。１．０μｇおよび０．１μｇのＤＸＲを注射した眼は、ビヒクルしか注射されていない僚眼と比べて、ＣＮＶ面積の統計的に有意な低下を示さなかった（１．０μｇの場合、Ｐ＜０．０７１；ｎ＝１０、０．１μｇの場合、Ｐ＜０．３２２、ｎ＝１０）。図２Ａおよび図２Ｂの両方とも、ＣＮＶの平均面積が、僚眼（ＦＥ）および両眼がビヒクルしか注射されていないマウスからの眼（ＢＥ）において類似しており、アントラサイクリンの眼内注射から全身性作用がなかったことを示唆した。 図２Ａ〜Ｂは、ビヒクル対照（アントラサイクリンの存在しないＰＢＳ緩衝液）の投与の５日後、および様々な量のドキソルビシンまたはダウノルビシンの投与の際の、酸素誘発性虚血性網膜症のＣ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＲＮＶの面積（ｍｍ^２）をプロットした棒グラフである。棒は、ＲＮＶの平均（±ＳＥＭ）面積を表す。図２Ａは、ビヒクル対照（アントラサイクリンの存在しないＰＢＳ緩衝液、左の棒）の投与の５日後、ならびに１．０、０．１および０．０１μｇのダウノルビシン（ＤＮＲ）の投与の際の、酸素誘発性虚血性網膜症のＣ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＲＮＶの面積（ｍｍ^２）をプロットしている。１．０μｇおよび０．１μｇのＤＮＲを注射した眼は、統計的に有意なＲＮＶ面積の低下（１．０μｇの場合、Ｐ＜０．００１、ｎ＝６、０．１μｇの場合、Ｐ＝０．０１３、ｎ＝８）を示した。０．０１μｇのＤＮＲを注射した眼は、統計的に有意なＲＮＶの面積の低下を示さなかった（Ｐ＝０．９３０、ｎ＝６）。図２Ｂは、ビヒクル対照（アントラサイクリンの存在しないＰＢＳ緩衝液、左の棒）の投与５日後、ならびに１．０、０．１および０．０１μｇのドキソルビシン（ＤＸＲ）の投与の際の、酸素誘発性虚血性網膜症のＣ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＲＮＶ面積（ｍｍ^２）をプロットしている。１．０μｇのＤＸＲを注射した眼は、統計的に有意なＲＮＶ面積の低下（Ｐ＜０．００１、ｎ＝８）を示した。０．１μｇおよび０．０１μｇのＤＸＲを注射した眼は、統計的に有意なＲＮＶ面積低下（１．０μｇの場合、Ｐ＝０．１９９、ｎ＝７；０．１μｇの場合、Ｐ＝０．０９６、ｎ＝８）を示さなかった。 図３Ａは、ＣＮＶのマウスモデルでＣＮＶを処置する際の、非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート（具体的には、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子）の有効性を実証しているグラフである。図３Ａは、アントラサイクリンを投与せず（マウスの両眼にビヒクルだけを注射（ＢＥ）、左の棒）、ならびに１０、１．０および０．１μｇのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を投与した際の、レーザー光凝固によるブルッフ膜破裂の１４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＣＮＶの面積（ｍｍ^２）をプロットしている棒グラフである。様々な量のＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を投与した際に測定されるＣＮＶの値の場合、ナノ粒子投与の際に観察されたＣＮＶの面積は、未処置僚眼（ＦＥ）において観察されたＣＮＶの面積のとなりプロットしている。この棒は、ＣＮＶの平均（±ＳＥＭ）面積を表す。１０μｇ、１．０μｇおよび０．１μｇのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を注射した眼はすべて、ビヒクルしか注射されていない僚眼と比べて、統計的に有意なＣＮＶ面積の低下（１０μｇの場合、Ｐ＜０．００１、ｎ＝１０；１．０μｇの場合、Ｐ＝０．００９、ｎ＝１０；０．１μｇの場合、Ｐ＝０．００７、ｎ＝１０）を示した。コホートの１つは、測定されたＣＮＶのベースライン面積を有しており、残りのマウスは、一方の眼に１μｇのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子の注射により、また僚眼にビヒクルだけを注射することにより処置した。さらに７日後に、ＣＮＶ面積を、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３およびビヒクル処置眼において測定した。図３Ｂは、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１μｇの投与の７日後、およびブルッフ膜のレーザー光凝固破裂の１４日後に観察されたＣＮＶ面積（ｍｍ^２）をプロット（左の棒）している棒グラフである。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１μｇの投与の７日後、およびブルッフ膜のレーザー光凝固破裂の１４日後に観察されたＣＮＶの面積（ｍｍ^２）と、ビヒクルしか注射されていない僚眼におけるブルッフ膜のレーザー光凝固破裂の１４日後、かつビヒクル注射の７日後（中央の棒）、ならびに未処置眼（ベースースライン、右の棒）におけるブルッフ膜のレーザー光凝固破裂の７日後に測定されたＣＮＶの面積とを比較している。ビヒクルしか注射されていない僚眼（中央の棒）と未処置眼（右の棒）におけるブルッフ膜のレーザー光凝固破裂の７日後に観察されたベースラインＣＮＶの両方に対して、統計的に有意なＣＮＶ面積の低下（Ｐ＜０．００１、ｎ＝１０）が観察され、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３処置により、ＣＮＶが有意に低下するばかりでなく（左と中央の棒の比較）、既存のＣＮＶの退行をも媒介することを実証している（左と右の棒との比較）。 図４は、酸素誘発性虚血性網膜症のマウスでＲＮＶを処置する際の、非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート（具体的には、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子）の有効性を実証しているグラフである。図４は、ビヒクル対照（アントラサイクリンの存在しないＰＢＳ緩衝液、右の棒）の投与５日後、およびＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１μｇの投与（左の棒）の際の、酸素誘発性虚血性網膜症のＣ５７ＢＬ／６マウスの眼において観察されたＲＮＶの面積（ｍｍ^２）をプロットした棒グラフである。この棒は、ＲＮＶの平均（±ＳＥＭ）面積を表す。統計的に有意なＲＮＶ面積の低下（Ｐ＜０．００１、ｎ＝８）が、ビヒクルしか注射されなかった僚眼と比較して観察された。 図５Ａ〜Ｂは、ロドプシンプロモーターが光受容体においてＶＥＧＦの発現を駆動するトランスジェニックマウス（ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウス）において、非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート（具体的には、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子）が、少なくとも３５日間、網膜下血管新生（ＮＶ）を抑制する能力があることを実証している棒グラフである。生後（Ｐ）１４日目に、ヘミ接合ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウスに、一方の眼にＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１０μｇおよび僚眼にビヒクルだけ（ＰＢＳ緩衝剤）を眼内注射した。図５Ａは、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１０μｇの眼内注射の４週間後に観察された、網膜あたりのＮＶ面積（ｍｍ^２）をプロットした棒グラフである（左の棒）。統計的に有意な網膜あたりのＮＶ面積の低下（Ｐ＝０．０４２、ｎ＝５）が、ビヒクルしか注射されなかった僚眼と比較して観察された。図５Ｂは、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１０μｇの眼内注射の５週間後に観察された、網膜あたりのＮＶ面積（ｍｍ^２）をプロットした棒グラフである（左の棒）。統計的に有意な網膜あたりのＮＶ面積の低下（Ｐ＝０．００７、ｎ＝５）が、ビヒクルしか注射されなかった僚眼と比較して観察された。 図６Ａは、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒを使用して決定したマイクロ粒子の体積基準のサイズ分布を示すグラフである。図６Ｂは、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒを使用して決定したナノ粒子の体積基準のサイズ分布を示すグラフである。 図７Ａは、ウサギの眼に注射したマイクロ粒子およびナノ粒子からの、薬物コンジュゲートの水性体液（ＡＨ）への放出量（ｎＭ）を、時間（日数）の関数として示したグラフである。図７Ｂは、粒子を注射されたウサギの眼の、水性体液中（ＡＨ）と硝子体中とに放出されたＤＸＲ薬物コンジュゲートの量（ｎＭ）を比較している棒グラフである。時間（日数）は、ナノ粒子処置動物に関して１０５日であり、マイクロ粒子処置動物に関して１１５日である。 図８は、１０％ＤＸＲ（黒丸）、３０％ＤＸＲ（黒四角）、および５０％ＤＸＲ（黒三角）を含有しているポリマーロッドに関する、時間（日数）の関数としての、ドキソルビシン（ＤＸＲ）コンジュゲートのインビトロでの放出（μｇ）を示しているグラフである。 図９Ａは、ＤＸＲ−ＳＡ−ＰＥＧ_３（黒四角）およびＤＸＲ−ＳＡ−ＣＰＨ−ＰＥＧ（黒三角）から調製したマイクロ粒子からのドキソルビシン（ＤＸＲ）コンジュゲートのインビトロでの放出プロファイルを示すグラフである。図９Ｂは、ＤＸＲ−ＳＡ−ＣＰＨ−ＰＥＧ_３（黒三角）から調製したマイクロ粒子からのドキソルビシン（ＤＸＲ）コンジュゲートのインビトロでの放出プロファイルを示すグラフである。

Ｉ．定義
本明細書で使用する「活性剤」とは、身体において局所的、および／または全身的に作用する、生理的または薬理学的な活性物質を指す。活性剤は、疾患または障害の処置（例えば、治療剤）、予防（例えば、予防剤）、または診断（例えば、診断剤）のために、患者に投与される物質である。本明細書で使用する「点眼薬」または「点眼活性剤」とは、眼の疾患または障害の１つもしくは複数の症状を緩和する、その発症を遅延させる、もしくは上記の症状を予防するために患者に投与される治療剤または予防剤、あるいは眼の画像化または他には眼評価に有用な診断剤を指す。

本明細書で使用する「有効量」または「治療有効量」とは、活性剤により処置される疾患または障害の１つまたは複数の症状を緩和する、その発症を遅延させる、もしくは上記の症状を予防するために有効なポリマー薬物コンジュゲートの量、および／または所望の診断的徴候を生じるのに有効なポリマー薬物コンジュゲートの量を指す。加齢黄斑変性症の場合、有効量のポリマー薬物コンジュゲートは、患者における視力喪失を遅延させる、低減する、または予防する。

本明細書で使用する「生体適合性」および「生物学的に適合性がある」とは、任意の代謝物またはその分解産物と共に、レシピエントに対して一般に非毒性であり、かつレシピエントに対して何ら顕著な有害な影響を引き起こさない物質を一般に指す。一般的に言えば、生体適合性物質とは、患者に投与した場合、顕著な炎症性または免疫応答を誘発しない物質である。

本明細書で使用する「生分解性ポリマー」とは、生理的条件下で、酵素作用および／または加水分解により分解または浸食を受けて、より小さな単位、または対象により代謝、排出、もしくは***することが可能な化学種になるポリマーを一般に指す。分解時間は、ポリマー組成、形態（多孔度など）、粒子寸法、および環境の関数である。

本明細書で使用する「親水性」とは、水に対する親和性を有する特性を指す。例えば、親水性ポリマー（または親水性ポリマーセグメント）は、水溶液に主に可溶であり、かつ／または水を吸収する傾向を有するポリマー（またはポリマーセグメント）である。一般に、ポリマーが親水性であればある程、ポリマーは水に溶解する、水と混合する、または水により湿潤する傾向が高い。

本明細書で使用する「疎水性」とは、水に対する親和性が無いか、または水をはじくことさえある特性を指す。例えば、ポリマー（または、ポリマーセグメント）が疎水性であればある程、ポリマー（または、ポリマーセグメント）は水に溶解しない、水と混合しない、または水により湿潤しない傾向が高い。

親水性および疎水性は、以下に限定されないが、ポリマーまたはポリマーセグメントの群の範囲内の親水性／疎水性のスペクトルなどの相対語で述べることができる。２種以上のポリマーを議論する一部の実施形態では、用語「疎水性ポリマー」とは、親水性が一層高い別のポリマーと比べた場合の、ポリマーの相対的な疎水性に基づいて定義することができる。

本明細書で使用する「ナノ粒子」は、約１０ｎｍ〜約１ミクロン未満、好ましくは１００ｎｍ〜約１ミクロンの平均直径などの直径を有する粒子を一般に指す。粒子は、どのような形も有することができる。球形を有するナノ粒子は、一般に「ナノ球体」と呼ばれる。

本明細書で使用する「マイクロ粒子」とは、約１ミクロン〜約１００ミクロン、好ましくは約１〜約５０ミクロン、より好ましくは約１〜約３０ミクロン、最も好ましくは約１ミクロン〜約１０ミクロンの平均直径などの直径を有する粒子を一般に指す。マイクロ粒子は、任意の形も有することができる。球形を有するマイクロ粒子は、一般に「マイクロスフィア」と呼ばれる。

本明細書で使用する「分子量」とは、別段の指定がない限り、バルクポリマーの相対的な平均鎖長を一般に指す。実際、分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）また
は毛細管粘度測定法を含めた様々な方法を使用して見積もるかまたは特徴づけることができる。ＧＰＣ分子量は、数平均分子量（Ｍｎ）とは対照的に、重量平均分子量（Ｍｗ）として報告される。毛細管粘度測定法は、特定の一連の濃度、温度、および溶媒条件を使用して、希釈ポリマー溶液から決定される固有の粘度として、分子量が見積もられる。

本明細書で使用する「平均粒子サイズ」とは、粒子集団中の粒子の統計的な平均粒子サイズ（直径）を一般に指す。本質的に球状の粒子の直径とは、物理的または流体力学的直径を指すことがある。非球状粒子の直径は、流体力学的直径を優先的に指すことがある。本明細書で使用する場合、非球状粒子の直径は、粒子表面の２点間の最大の直線距離間を指すことがある。平均粒子サイズは、動的光散乱などの分野で公知の方法を使用して測定することができる。

「単分散」および「均一なサイズ分布」とは、本明細書では互換的に使用され、粒子のすべてが同じかまたはほとんど同じサイズのナノ粒子またはマイクロ粒子の集団を説明するものである。本明細書で使用する場合、単分散分布とは、分布の９０％以上がメジアン粒子サイズの１５％以内、より好ましくはメジアン粒子サイズの１０％以内、最も好ましくはメジアン粒子サイズの５％以内におさまる粒子分布を指す。

本明細書で使用する「薬学的に許容される」とは、信頼できる医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしにヒトおよび動物の組織に接触させて使用するのに適しており、合理的な利益／リスク比と釣り合いのとれている、化合物、担体、賦形剤、組成物、および／または剤形を指す。

本明細書で使用する「分岐点」は、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントを１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントに接続する働きをする、ポリマー薬物コンジュゲートの一部を指す。

本明細書で一般に使用される「インプラント」とは、埋込み部位において長期間にわたり１種または複数のＨＩＦ−１阻害剤を放出することにより、治療的利益がもたらされるよう、身体の特定の領域に、好ましくは注射または外科的埋め込みにより埋め込みまれるよう構造化されているか、あるサイズに作製されているか、その他には構成されている、ポリマーデバイスまたは要素のことを指す。例えば、眼内インプラントは、好ましくは注射または外科的埋め込みにより眼内に配置させるよう、および長期間にわたり１種もしくは複数のＨＩＦ−１阻害剤を放出することにより１つまたは複数の眼の疾患あるいは障害を処置するよう構造化されているか、あるサイズに作製されているか、その他には構成されている、ポリマーデバイスまたは要素のことを指す。眼内インプラントは一般に、眼の生理的条件と生体適合性があり、有害な副作用を引き起こさない。一般に、眼内インプラントは、眼の視力を乱すことなく、眼に配置することができる。

本明細書において定義されている値の範囲は、その範囲内の値すべて、およびその範囲内にあるすべての部分範囲を含む。例えば、範囲が０〜１０の整数として定義される場合、その範囲は、その範囲内の整数すべて、ならびにその範囲内の任意の部分範囲および部分範囲のすべてを包含する（例えば、１〜１０、１〜６、２〜８、３〜７、３〜９など）。

ＩＩ．非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート
非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートを使用して、眼への送達にとって有用なナノ粒子、マイクロ粒子、およびインプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウエハーなど）を形成することができる。ポリマー薬物コンジュゲートは、多価分岐点を介して共有結合的に接続している１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントおよび１つまた
は複数の親水性ポリマーセグメントを含有して、少なくとも３つのポリマーセグメントを含有している非線状マルチブロックコポリマーを形成する。ポリマー薬物コンジュゲートは、１または複数の疎水性ポリマーセグメントに共有結合的に付着している、１種または複数の治療剤、予防剤、または診断剤をさらに含有している。ポリマー薬物コンジュゲートの使用により、より一層制御された薬物搭載量、および薬物放出プロファイルを有する粒子を形成することができる。さらに、コンジュゲートの溶解度は、可溶な薬物濃度、したがって毒性を最小限にするよう制御することができる。

Ａ．非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートの構造
１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントに共有結合的に付着している１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントに共有結合的に付着している活性剤を含有している非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートが提供される。

ポリマー薬物コンジュゲートは、以下に示される一般式

（式中、
Ａは、出現毎に独立して、活性剤を表すが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｘは、出現毎に独立して、疎水性ポリマーセグメントを表し；
Ｙは、多価分岐点を表し；
Ｚは、出現毎に独立して、親水性ポリマーセグメントを表し、ｍは１〜２０の間の整数であり、ｎは０〜２０の間の整数である）
により表すことができる。

一部の実施形態では、ｍは１以上であり、ｎは０である。別の実施形態では、ｍおよびｎは１以上であり、その結果、ｍ＋ｎが２以上（４または５以上など）となる。

一部の実施形態では、コンジュゲートは、上記コンジュゲートの混合物であり、ここで、一部のコンジュゲートの場合、ｎは０以外の整数値であり、また別のコンジュゲートの場合、ｎ＝０である。

Ａは、出現毎に独立して、眼の疾患または障害の処置、診断、または予防にとって有用な活性剤（本明細書では「薬物」とまとめて指す）であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではない。

１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、独立して任意の生体適合性の疎水性ポリマーまたはコポリマーとすることができる。一部の場合、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、生分解性でもある。適切な疎水性ポリマーの例には、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、またはポリカプロラクトンなどのポリエステル、ポリセバシン酸無水物などのポリ無水物、およびそれらのコポリマーが含まれる。ある種の実施形態では、疎水性ポリマーは、ポリセバシン酸無水物などのポリ無水物、またはそのコポリマーである。

１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、任意の、生体適合性がある、非毒性の親水性ポリマーまたはコポリマーとすることができる。親水性ポリマーセグメントは、例えば、ポリ（アルキレングリコール）、多糖類、ポリ（ビニルアルコール）、ポリピロリドン、ポリオキシエチレンブロックコポリマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標））、またはそれらのコポリマーとすることができる。好ましい実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であるか、またはこれからなる。

一部の場合、ポリマー薬物コンジュゲートは、たった１つの親水性ポリマーセグメントしか含有していない。好ましい実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、２つ以上の親水性ポリマー鎖を含有している。ある種の実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、２〜６つ、より好ましくは３〜５つの親水性ポリマー鎖を含有している。一実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、３つの親水性ポリマーセグメントを含有している。

好ましくは、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントの分子量の合計は、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントの分子量よりも大きいことになる。一部の場合、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントの分子量の合計は、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントの分子量の、少なくとも３倍、より好ましくは少なくとも５倍、最も好ましくは少なくとも１０倍である。

分岐点は、例えば、３つ以上の官能基を含有している有機分子とすることができる。好ましくは、分岐点は、少なくとも２つの異なるタイプの官能基（例えば、１種または複数のアルコールと１種または複数のカルボン酸、あるいは１種もしくは複数のハライドと１種もしくは複数のカルボン酸）を含有することになる。こうした場合、分岐点上に存在している異なる官能基が独立して合成的に対処され、制御された化学量論比で、分岐点への疎水性セグメントおよび親水性セグメントの共有結合的付着を可能にする。ある種の実施形態では、分岐点は、クエン酸、酒石酸、粘液酸、グルコン酸、または５−ヒドロキシベンゼン−１，２，３，−トリカルボン酸などのポリカルボン酸である。

ある種の実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、多価分岐点を介して共有結合的に接続している単一疎水性ポリマーセグメント、および２種以上の親水性ポリマーセグメントから形成される。このタイプの例示的なポリマー薬物コンジュゲートは、以下に示される一般式

（式中、
Ａは、活性剤を表すが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｘは、疎水性ポリマーセグメントを表し；
Ｙは分岐点を表し；
Ｚは、出現毎に独立して、親水性ポリマーセグメントを表し；
ｎは、１または２〜３００の間、より好ましくは１または２〜５０の間、より好ましくは１または２〜３０の間、最も好ましくは１または２〜１０の間の整数である）
により表される。

ある種の実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、２〜６つ、より好ましくは３〜５つの親水性ポリマー鎖を含有している。一実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、３つの親水性ポリマーセグメントを含有している。

分岐点は、例えば、複数の官能基を含有している有機分子とすることができる。好ましくは、この分岐点は、少なくとも２つの異なるタイプの官能基（例えば、アルコールと複数のカルボン酸、またはカルボン酸と複数のアルコール）を含有することになろう。ある種の実施形態では、この分岐点はクエン酸分子などのポリカルボン酸である。

一部の実施形態では、分岐点は、１つの疎水性ポリマーセグメントと３つの親水性ポリ
エチレングリコールポリマーセグメントとを接続する。ある種の場合、ポリマー薬物コンジュゲートは、式Ｉ

（式中、
Ａは、活性剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｌは、出現毎に独立して、存在しないか、またはエーテル（例えば、−Ｏ−）、チオエーテル（例えば、−Ｓ−）、二級アミン（例えば、−ＮＨ−）、三級アミン（例えば、−ＮＲ−）、二級アミド（例えば、−ＮＨＣＯ−；−ＣＯＮＨ−）、三級アミド（例えば、−ＮＲＣＯ−；−ＣＯＮＲ−）、二級カルバメート（例えば、−ＯＣＯＮＨ−；−ＮＨＣＯＯ−）、三級カルバメート（例えば、−ＯＣＯＮＲ−；−ＮＲＣＯＯ−）、尿素（例えば、−ＮＨＣＯＮＨ−；−ＮＲＣＯＮＨ−；−ＮＨＣＯＮＲ−、−ＮＲＣＯＮＲ−）、スルフィニル基（例えば、−ＳＯ−）、もしくはスルホニル基（例えば、−ＳＯＯ−）であり；
Ｒは、出現毎に個々に、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリール基（アルキル、シクロプロピル、シクロブチルエーテル、アミン、ハロゲン、ヒドロキシル、エーテル、ニトリル、ＣＦ_３、エステル、アミド、尿素、カルバメート、チオエーテル、カルボン酸、およびアリールから個々に選択される１〜５つの間の置換基により場合により置換されている）であり；
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール鎖を表し；
Ｘは、疎水性ポリマーセグメンを表す）
によって表すことができる。

ある種の実施形態では、分岐点はクエン酸分子であり、親水性ポリマーセグメントはポリエチレングリコールである。こうした場合、ポリマー薬物コンジュゲートは、式ＩＡ

（式中、
Ａは、活性剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｄは、出現毎に独立して、ＯまたはＮＨを表し；
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール鎖を表し；
Ｘは、疎水性ポリマーセグメンを表す）
によって表すことができる。

一部の実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、以下の式

（式中、
Ａは、活性剤であるが、但し、ＡはＨＩＦ−１阻害剤ではなく；
Ｘは、疎水性ポリマーセグメント、好ましくはポリ無水物である）
により定義される。

Ｂ．活性剤
非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、治療剤、診断剤、および／または予防剤を含有している。活性剤は、低分子活性剤、および／または酵素、タンパク質、成長因子、ポリペプチド、多糖類、脂質、または核酸などの生体分子とすることができる。適切な低分子活性剤には、有機化合物および有機金属化合物が含まれる。一部の例では、低分子活性剤は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、好ましくは約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは約１２００ｇ／ｍｏｌ未満、最も好ましくは約１０００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する。別の実施形態では、低分子活性剤は、約５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する。低分子活性剤は、親水性、疎水性、または両親媒性化合物とすることができる。生体分子は、典型的には、約２０００ｇ／ｍｏｌより大きい分子量を有しており、アミノ酸（ペプチド、タンパク質、酵素など）または窒素ベースの単位（核酸）などの反復単位から構成することができる。

好ましい実施形態では、活性剤は点眼薬である。特定の実施形態では、活性剤は、後眼部の疾患もしくは障害を処置する、予防する、または診断するために使用される薬物である。点眼薬の非限定例には、抗緑内障剤、抗血管新生剤、抗感染症剤、抗炎症剤、成長因子、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、およびそれらの組合せが含まれる。

代表的な抗緑内障剤には、プロスタグランジンアナログ（トラボプロスト、バイマトプロスト、およびラタノプロストなど）、ベータ−アドレナリン（ｂｅｔａ−ａｎｄｒｅｎｅｒｇｉｃ）受容体アンタゴニスト（チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール、およびカルテオロールなど）、アルファ−２アドレナリン受容体アゴニスト（ブリモニジンおよびアプラクロニジンなど）、炭酸脱水酵素阻害剤（ブリンゾラミド、アセタゾラミン、およびドルゾラミドなど）、縮瞳剤（すなわち、ピロカルピンおよびエコチオペートなどの副交感神経興奮剤）、セロトニン作動剤、ムスカリン作動剤、ドーパミンアゴニスト、およびアドレナリンアゴニスト（アプラクロニジンおよびブリモニジンなど）が含まれる。

代表的な抗血管新生剤には、以下に限定されないが、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））およびｒｈｕＦＡｂ Ｖ２（ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、および他の抗ＶＥＧＦ化合物などの血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体；ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマーまたはＥＹＥ００１）（Ｅｙｅｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）；色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）；セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））およびロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（登録商標））などのＣＯＸ−２阻害剤；インターフェロンアルファ；インターロイキン１２（ＩＬ−１２）；レナリドマイド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））などのサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標））およびその誘導体；スクアラミン；エンドスタチン；アンジオスタチン；ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）（Ｓｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）などのリボザイム阻害剤；ＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（登録商標）（ＡＥ−９４１）（Ａｅｔｅｒｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｑｕｅｂｅｃ Ｃｉｔｙ、カナダ）などの多機能性抗血管新生剤；スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））などの受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登
録商標））およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））などのチロシンキナーゼ阻害剤；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））およびセツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））などの上皮成長因子受容体に対する抗体、ならびに当該分野で公知の他の抗血管新生剤が含まれる。

抗感染症剤には、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、および抗真菌剤が含まれる。代表的な抗ウイルス剤には、ガンシクロビルおよびアシクロビルが含まれる。代表的な抗生剤には、アミノグリコシド（ストレプトマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、およびトブラマイシンなど）、アンサマイシン（ゲルダナマイシンおよびヘルビマイシンなど）、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、グリコペプチド（バンコマイシン、テイコプラニン、およびテラバンシンなど）、リンコサミド、リポペプチド（ダプトマイシンなど）、マクロライド（アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、およびエリトロマイシンなど）、モノバクタム、ニトロフラン、ペニシリン、ポリペプチド（バシトラシン、コリスチンおよびポリミキシンＢなど）、キノロン、スルホンアミド、ならびにテトラサイクリンが含まれる。

一部の場合、活性剤は、オロパタジンおよびエピナスチンなどの抗アレルギー剤である。

抗炎症剤には、非ステロイド性とステロイド性抗炎症剤の両方が含まれる。適切なステロイド活性剤には、グルココルチコイド、プロゲスチン、ミネラルコルチコイド、およびコルチコステロイドが含まれる。

点眼薬は、中性形態または薬学的に許容される塩の形態で存在することができる。一部の場合、安定性の増強、または望ましい溶解度もしくは溶解プロファイルなどの、塩の１つまたは複数の有利な物理特性のため、活性剤の塩を含有している製剤を調製するのが望ましいことがある。

一般に、薬学的に許容される塩は、水中もしくは有機溶媒中、または上記２つの混合物中で、遊離酸または塩基形態の活性剤と化学量論量の適切な塩基または酸とを反応させることにより調製することができる。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。薬学的に許容される塩には、無機酸、有機酸、アルカリ金属塩、およびアルカリ土類金属塩に由来する活性剤の塩、ならびに薬物と適切な有機リガンド（例えば、四級アンモニウム塩）との反応により形成される塩が含まれる。適切な塩のリストは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２０００年、７０４頁に見いだされる。薬学的に許容される塩の形態で時として投与される点眼薬の例には、チモロールマレエート、ブリモニジンタートレート、およびジクロフェナクナトリウムが含まれる。

一部の場合、活性剤は、眼を画像化するか、他には評価する診断剤である。例示的な診断剤には、常磁性分子、蛍光化合物、磁気分子、および放射性核種、Ｘ線イメージング剤、および造影剤が含まれる。

Ｃ．疎水性ポリマーセグメント
本明細書に記載されている非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントを含有することができる。１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、ホモポリマーまたはコポリマーとすることができる。好まし
くは、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、生分解性である。

適切な疎水性ポリマーの例には、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、およびポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）などのポリヒドロキシ酸；ポリ−３−ヒドロキシブチレートまたはポリ−４−ヒドロキシブチレートなどのポリヒドロキシアルカノエート；ポリカプロラクトン；ポリ（オルトエステル）；ポリ無水物；ポリ（ホスファゼン）；ポリ（ヒドロキシアルカノエート）；ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）；チロシンポリカーボネートなどのポリカーボネート；ポリアミド（合成および天然ポリアミドを含む）、ポリペプチド、およびポリ（アミノ酸）；ポリエステルアミド；ポリエステル；ポリ（ジオキサノン）；ポリ（アルキレンアルキレート）；疎水性ポリエーテル；ポリウレタン；ポリエーテルエステル；ポリアセタール；ポリシアノアクリレート；ポリアクリレート；ポリメチルメタクリレート；ポリシロキサン；ポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）コポリマー；ポリケタール；ポリホスフェート；ポリヒドロキシバレレート；ポリアルキレンオキサレート；ポリアルキレンスクシネート；ポリ（マレイン酸）、およびそれらのコポリマーが含まれる。

好ましい実施形態では、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、ポリ無水物またはそのコポリマーである。ポリ無水物は、脂肪族ポリ無水物、不飽和ポリ無水物、または芳香族ポリ無水物とすることができる。代表的なポリ無水物には、ポリアジピン酸無水物、ポリフマル酸無水物、ポリセバシン酸無水物、ポリマレイン酸無水物、ポリリンゴ酸無水物、ポリフタル酸無水物、ポリイソフタル酸無水物、ポリアスパラギン酸無水物、ポリテレフタル酸無水物、ポリイソフタル酸無水物、ポリカルボキシフェノキシプロパン無水物、ポリカルボキシフェノキシヘキサン無水物、およびこれらのポリ無水物と他のポリ無水物の様々なモル比でのコポリマーが含まれる。他の適切なポリ無水物は、米国特許第４，７５７，１２８号、同第４，８５７，３１１号、同第４，８８８，１７６号、および同第４，７８９，７２４号に開示されている。１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、ポリ（エステル無水物）またはポリ（アミド無水物）などのポリ無水物コポリマーとすることもできる。例えば、米国特許第５，７５６，６５２号、および米国特許出願２０１０／０２６０７０３号を参照されたい。

ある種の実施形態では、疎水性ポリマーセグメントは、ポリセバシン酸無水物である。ある種の実施形態では、疎水性ポリマーセグメントは、ポリ（１，６−ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン−ｃｏ−セバシン酸）（ポリ（ＣＰＨ−ＳＡ））である。ある種の実施形態では、疎水性ポリマーセグメントは、ポリ（１，３−ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン−ｃｏ−セバシン酸）（ポリ（ＣＰＰ−ＳＡ））である。

好ましい実施形態では、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、生分解性である。１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントが生分解性である場合、ポリマー分解プロファイルは、インビボでの活性剤の放出速度に影響を及ぼすよう、選択することができる。例えば、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、７日間〜２４週間、より好ましくは７日間〜８週間、好ましくは７日間〜３週間の期間をかけて分解するよう、選択することができる。他の場合、疎水性ポリマーセグメントは、７日間〜２年間、より好ましくは７日間〜５６週間、より好ましくは４週間〜５６週間、最も好ましくは８週間〜２８週間の期間をかけて分解するよう、選択することができる。

特定の適用にとって最適な薬物放出速度などの特性を有する粒子を形成するポリマー薬物コンジュゲートを調製するため、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントの分子量は、変えることができる。１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、約１５０Ｄａ〜１ＭＤａの分子量を有することができる。ある種の実施形態では、疎水性ポリマーセグメントは、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａの間、より好ましくは約１ｋＤａ〜約５０ｋＤａ
の間、最も好ましくは約１ｋＤａ〜約２５ｋＤａの間の分子量を有する。

一部の場合、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントは、ポリマー薬物コンジュゲートの１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントの平均分子量の合計よりも小さい平均分子量の合計を有する。好ましい実施形態では、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントの各々は、約５ｋＤａ未満の平均分子量を有する。

Ｄ．親水性ポリマー
本明細書に記載されている非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントも含有することができる。好ましくは、ポリマー薬物コンジュゲートは、２つ以上の親水性ポリマーセグメントを含有している。一部の実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、２〜６つの間、より好ましくは３〜５つの間の親水性ポリマーセグメントを含有している。ある種の実施形態では、ポリマー薬物コンジュゲートは、３つの親水性ポリマーセグメントを含有している。

親水性ポリマーセグメントの各々は、独立して、任意の、生体適合性がある（すなわち、それは、深刻な炎症性または免疫応答を誘発しない）、非毒性の親水性ポリマーまたはコポリマーを含有することができる。適切なポリマーの例には、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）およびエチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマーなどのポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリビニルピロリドン、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ならびにそれらのコポリマー、ターポリマー、ならびに混合物が含まれる。

好ましい実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、ポリ（アルキレングリコール）鎖を含有している。ポリ（アルキレングリコール）鎖は、１〜５００の間の反復単位、より好ましくは４０〜５００の間の反復単位を含有することができる。適切なポリ（アルキレングリコール）には、ポリエチレングリコール、ポリプロピレン、１，２−グリコール、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリプロピレン１，３−グリコール、およびそれらのコポリマーが含まれる。

一部の実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、他の生体適合性ポリマー（例えば、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、またはポリカプロラクトン）からなる１つまたは複数のブロックの他に、１つまたは複数のポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックを含有しているコポリマーである。１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）を含有している１つまたは複数のブロックの他に、１つまたは複数のＰＥＯブロックを含有しているコポリマーとすることができる。具体例には、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲＳ（商標）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯのトリブロックコポリマーが含まれる。

好ましい実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントは、ＰＥＧ鎖である。このような場合、ＰＥＧ鎖は、米国特許第５，９３２，４６２号において記載されているものなど、線状または分岐状とすることができる。ある種の実施形態では、ＰＥＧ鎖は線状である。

１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントの各々は、独立して、約３００Ｄａ〜１ＭＤａの分子量を有することができる。親水性ポリマーセグメントは、上で列挙したいかな
る分子量の範囲の分子量も有していてよい。ある種の実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントの各々は、約１ｋＤａ〜約２０ｋＤａの間、より好ましくは約１ｋＤａ〜約１５ｋＤａの間、最も好ましくは約１ｋＤａ〜約１０ｋＤａの間の分子量を有する。好ましい実施形態では、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントの各々は、約５ｋＤａの分子量を有する。

Ｅ．分岐点
本明細書に記載されている非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントと、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントとを接続する分岐点を含有している。この分岐点は、任意の有機、無機、または有機金属部位とすることができ、これらの部位は、３つ以上の付着点を提供するよう、多価である。好ましい実施形態では、分岐点は、複数の官能基を含有している有機分子である。

官能基は、炭素でも水素でもない少なくとも１個の原子を含有している任意の原子または原子群とすることができるが、但し、基は、疎水性および親水性ポリマーセグメントと反応することができなければならない。適切な官能基には、ハロゲン（臭素、塩素、およびヨウ素）；酸素含有官能基（ヒドロキシル、エポキシド、カルボニル、アルデヒド、エステル、カルボキシル、および酸塩化物など）、窒素含有官能基（アミンおよびアジドなど）、および硫黄含有基（チオールなど）が含まれる。官能基はまた、アルキン、アルケン、またはジエンなどの、１つまたは複数の非芳香族パイ結合を含有している炭化水素部位であってもよい。好ましくは、分岐点は、少なくとも２つの異なるタイプの官能基（例えば、１種または複数のアルコールと１種または複数のカルボン酸、あるいは１種または複数のハライドと１種または複数のアルコール）を含有することになる。こうした場合、分岐点上に存在している異なる官能基は、独立して合成的に対処されて、制御された化学量論比で、分岐点への疎水性セグメントおよび親水性セグメントの共有結合的付着を可能にする。
疎水性および親水性ポリマーセグメントと分岐点上の官能基との反応に続いて、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントおよび１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントが、連結部位を介して結合点に共有結合的に結ばれることになる。連結部位のアイデンティティ（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）は、疎水性ポリマーセグメントと親水性ポリマーセグメントの官能基および反応に富む位置のアイデンティティによって決まることになる（これらの要素が反応し、連結部位または連結部位の前駆体を形成する）。ポリマーセグメントと分岐点とを接続する適切な連結部位の例には、二級アミド（−ＣＯＮＨ−）、三級アミド（−ＣＯＮＲ−）、二級カルバメート（−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−）、三級カルバメート（−ＯＣＯＮＲ−、−ＮＲＣＯＯ−）、尿素（−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＲＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＲ−、−ＮＲＣＯＮＲ−）、カルビノール（−ＣＨＯＨ−、−ＣＲＯＨ−）、エーテル（−Ｏ−）、およびエステル（−ＣＯＯ−、−ＣＨ_２Ｏ_２Ｃ−、−ＣＨＲＯ_２Ｃ−）が含まれ、式中、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基である。ある種の実施形態では、ポリマーセグメントは、エステル（−ＣＯＯ−、−ＣＨ_２Ｏ_２Ｃ−、ＣＨＲＯ_２Ｃ−）、二級アミド（−ＣＯＮＨ−）、または三級アミド（−ＣＯＮＲ−）を介して分岐点に接続しており、式中、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基である。

ある種の実施形態では、この分岐点は、クエン酸、酒石酸、粘液酸、グルコン酸、または５−ヒドロキシベンゼン−１，２，３，−トリカルボン酸などのポリカルボン酸である。例示的な分岐点には、次の有機化合物が含まれる：

Ｆ．非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートの合成
非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、当該分野で公知の合成法を使用して調製することができる。ポリマー薬物コンジュゲートの調製に関する代表的な方法論は、以下で議論されている。所与のポリマー薬物コンジュゲートの合成に関する適切な経路は、官能基の適合性、保護基戦略、および不安定な結合の存在と関係するので、その経路は、全体として、ポリマー薬物コンジュゲートの構造、コンジュゲートを構築しているポリマーのアイデンティティ、活性剤のアイデンティティ、および化合物の構造などの、いくつかの要因を鑑みて決定することができる。

以下に議論する合成的な方法論に加えて、本明細書において開示したポリマー薬物コンジュゲートの調製に有用な代替的反応および戦略は、当該分野で公知である。例えば、Ｍａｒｃｈ、「Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版、２００１年、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。

一般に、非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントおよび１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントをまず分岐点に逐次付着させて、ポリマー薬物コンジュゲートのポリマー部分を形成させることにより調製される。ポリマー薬物コンジュゲートのポリマー構成要素の構築に続いて、次に、１種または複数の活性剤を１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントに共有結合的に付着させることができる。

例えば、スキーム１および２は、３つの親水性ＰＥＧセグメント、および１つの疎水性ポリ（セバシン酸無水物）ポリマーセグメントにより官能基化されているクエン酸分岐点を含有しているポリマー薬物コンジュゲート（ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３）の合成を例示している。ドキソルビシン（ＤＸＲ）は、疎水性ポリマーセグメントに結合している。

スキーム１において示される通り、最初に、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で、クエン酸をＣＨ_３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ_２と反応させて、ＰＥＧ鎖とクエン酸分岐点の３つのカルボン酸残基との間にアミド結合を形成させる。次に、得られた化合物とアシル化ポリセバシン酸前駆体（ＰｒｅＳＡ）と反応させて、無水ホットメルト重合状態下で重合する。スキーム２に示される通り、得られたポリマー（ＰＳＡ−ＰＥＧ_３）は、次に、ドキソルビシンと反応させて、ポリマー薬物コンジュゲートを形成する（ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ
_３）。

ＩＩＩ．ポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子およびインプラント
非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートは、当該分野で公知の様々な技法を使用して、マイクロ粒子、ナノ粒子、およびインプラントを形成することができる。粒子またはインプラント形成のための適切な方法は、粒子／インプラントを形成するために使用される１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートの物理的および化学的性質（すなわち、安定性および溶解度）、ならびに所望の粒子／インプラントのサイズおよび形態を考慮して、選択することができる。

Ａ．粒子形態
マイクロ粒子およびナノ粒子は、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形
成することができる。一部の場合、粒子は、単一ポリマー薬物コンジュゲートから形成される（すなわち、粒子は、同じ活性剤、疎水性ポリマーセグメント（複数可）、分岐点（存在する場合）、および親水性ポリマーセグメント（複数可）を含有しているポリマー薬物コンジュゲートから形成される）。

別の実施形態では、粒子は、２種以上の異なるポリマー薬物コンジュゲートの混合物から形成される。例えば、粒子は、異なる活性剤、および同じ疎水性ポリマーセグメント（複数可）、分岐点（存在する場合）、ならびに親水性ポリマーセグメント（複数可）を含有している２種以上のポリマー薬物コンジュゲートから形成することができる。こうした粒子は、例えば、２種以上の活性剤を共投与するために使用することができる。他の場合、粒子は、同じ活性剤、ならびに異なる疎水性ポリマーセグメント、分岐点（存在する場合）、および／または親水性ポリマーセグメントを含有している２種以上のポリマー薬物コンジュゲートから形成される。こうした粒子は、例えば、活性剤の放出速度を経時的に変えるために使用することができる。粒子は、異なる活性剤、ならびに異なる疎水性ポリマーセグメント、分岐点（存在する場合）、および／または親水性ポリマーセグメントを含有している２種以上のポリマー薬物コンジュゲートから形成することもできる。

粒子は、ポリマー薬物コンジュゲートと１つまたは複数のさらなるポリマーとのブレンドから形成することもできる。これらの場合、１つまたは複数のさらなるポリマーは、以下の項目Ｃにおいて記載されている、非生分解性または生分解性ポリマーのいずれかとすることができるが、生分解性ポリマーが好ましい。これらの実施形態では、１つまたは複数のさらなるポリマーのアイデンティティおよび量は、例えば粒子安定性、すなわち送達が望まれる部位への分布に必要な時間、および送達のための望ましい時間に影響を及ぼすよう、選択することができる。

１０ｎｍ〜１０００ミクロンの間の平均粒子サイズを有する粒子が、本明細書に記載されている組成物において有用である。好ましい実施形態では、粒子は、１０ｎｍ〜１００ミクロンの間、より好ましくは約１００ｎｍ〜約５０ミクロンの間、より好ましくは約２００ｎｍ〜約５０ミクロンの間の平均粒子サイズを有する。ある種の実施形態では、粒子は、５００〜７００ｎｍの間の直径を有するナノ粒子である。粒子は、どのような形も有することができるが、一般に球状の形である。

一部の実施形態では、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子集団は、単分散粒子集団である。別の実施形態では、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子集団は、多分散粒子集団である。１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子集団が多分散粒子集団である一部の例では、粒子サイズ分布の５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％を超えるものが、メジアン粒子サイズの１０％以内におさまる。

好ましくは、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成された粒子は、それらの表面に、ＰＥＧなどのかなりの量の親水性ポリマーを含有している。

Ｂ．マイクロ粒子およびナノ粒子を形成する方法
ポリマー薬物コンジュゲートから形成されるマイクロ粒子およびナノ粒子は、当該分野で公知のポリマーマイクロ粒子またはナノ粒子の形成に適した任意の方法を使用しても調製することができる。粒子形成のために使用される方法は、ポリマー薬物コンジュゲート中に存在しているポリマーの特性、および所望の粒子サイズ、およびサイズ分布を含めた、様々な要因に依存することになる。一部の薬剤が、ある種の溶媒の存在下で、ある種の温度範囲、および／またはある種のｐＨ範囲において不安定であるので、粒子−薬物コンジュゲート中に存在している活性剤のタイプもまた、要因の１つとなり得る。

単分散粒子集団が望ましい状況では、粒子は、単分散ナノ粒子集団を生じる方法を使用して形成することができる。あるいは、多分散ナノ粒子分布を生成する方法を使用することができ、粒子を粒子形成後に分離し、所望の平均粒子サイズおよび粒子サイズ分布を有する粒子集団を提供することができる。こうした分離は、ふるいがけなどの当該分野で公知の方法を使用して行うことができる。

マイクロ粒子およびナノ粒子を調製するための一般技法には、以下に限定されないが、溶媒蒸発、ホットメルト粒子形成、溶媒除去、スプレードライ、転相、コアセルベーション、および低温キャスティングが含まれる。粒子製剤化の適切な方法は、以下に簡単に記載されている。ｐＨ調節剤、崩壊剤、保存剤、および抗酸化剤を含む、薬学的に許容される賦形剤を、場合により、粒子形成中の粒子に取り込ませることができる。

１．溶媒蒸発
この方法では、ポリマー薬物コンジュゲートは、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒に溶解する。次に、ポリ（ビニルアルコール）などの界面活性剤を含有している水溶液中に、ポリマー薬物コンジュゲートを含有している有機溶液を懸濁させる。有機溶媒のほとんどが蒸発して、固体ナノ粒子が残るまで、この得られたエマルションを撹拌する。得られたナノ粒子を水により洗浄し、凍結乾燥装置中で一晩乾燥させる。様々なサイズおよび形態を有するナノ粒子は、この方法により得ることができる。

ある種のポリ無水物などの不安定なポリマーを含有しているポリマー薬物コンジュゲートは、水の存在により、作製過程中に分解することがある。これらのポリマーに関すると、完全に無水の有機溶媒中で実施される、以下の２つの方法を使用することができる。

２．ホットメルト粒子形成
この方法では、ポリマー薬物コンジュゲートは最初に溶融され、次に、（シリコーンオイルのような）非混和性溶媒中に懸濁させて、連続撹拌しながらポリマー薬物コンジュゲートの融点より５℃高く加熱する。一旦エマルションが安定すると、ポリマー薬物コンジュゲート粒子が凝固するまで冷却する。得られたナノ粒子を石油エーテルなどの適切な溶媒を用いるデカンテーションにより洗浄すると、自由流動性粉末が得られる。この技法により調製された粒子の外部表面は、通常、滑らかで密である。ホットメルト粒子形成は、ある種のポリ無水物などの加水分解的に不安定なポリマー薬物コンジュゲートを含有している粒子を調製するために使用することができる。好ましくは、この方法によりマイクロ粒子を調製するために使用されるポリマー薬物コンジュゲートは、全分子量が７５，０００ダルトン未満を有することになる。

３．溶媒除去
加水分解的に不安定なポリマー薬物コンジュゲートから粒子を調製するために、溶媒除去も使用することができる。この方法では、ポリマー薬物コンジュゲートは、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒に分散、または溶解する。次に、この混合物を有機オイル（シリコーンオイルなど）中で撹拌することにより懸濁させ、エマルションを形成する。固形粒子がエマルションから形成し、これを続いて上清から単離することができる。この技法により生じた球状の外的形態は、ポリマー薬物コンジュゲートのアイデンティティに大きく依存する。

４．スプレードライ
この方法では、ポリマー薬物コンジュゲートは、塩化メチレンなどの有機溶媒に溶解する。圧縮ガスの流通により駆動されるマイクロ化ノズルによって、溶液をポンプ押出しして、得られたエアゾールを加熱した空気サイクロン中に懸濁して、マイクロ液滴から溶媒
を蒸発させて粒子を形成させる。この方法を使用して、０．１〜１０ミクロンの間の粒子を得ることができる。

５．転相
転相法を使用して、ポリマー薬物コンジュゲートから粒子を形成することができる。この方法では、ポリマー薬物コンジュゲートを「良好な」溶媒に溶解し、溶液をポリマー薬物コンジュゲートにとって強い非溶媒中に注ぎ入れると、都合のよい条件下で、自発的にマイクロ粒子またはナノ粒子が生成する。この方法を使用して、例えば約１００ナノメートル〜約１０ミクロンを含む広範囲のサイズで、通常、狭い粒子サイズ分布を有するナノ粒子を生成することができる。

６．コアセルベーション
コアセルベーションを使用する粒子形成技術は、当該分野、例えばＧＢ−Ｂ−９２９ ４０６、ＧＢ−Ｂ−９２９ ４０ １、および米国特許第３，２６６，９８７号、同第４，７９４，０００号、および同第４，４６０，５６３号において公知である。コアセルベーションは、２種の非混和液相中へのポリマー薬物コンジュゲート溶液の分離を必要とする。１つの相は密なコアセルベート相であり、この相は高濃度のポリマー薬物コンジュゲートを含有している一方、第２相は低濃度のポリマー薬物コンジュゲートを含有している。密なコアセルベート相内で、ポリマー薬物コンジュゲートが、ナノスケールまたはマイクロスケールの液滴を形成し、この液滴が粒子に固化する。コアセルベーションは、温度変化、非溶媒の添加またはマイクロ塩（単純コアセルベーション）の添加によって、または他のポリマーの添加によって誘発され、これによりインターポリマー複合体（複合コアセルベーション）を形成することができる。

７．低温キャスティング
放出制御マイクロスフィアの超低温キャスティングの方法が、Ｇｏｍｂｏｔｚらの米国特許第５，０１９，４００号に記載されている。この方法では、ポリマー薬物コンジュゲートは、溶媒に溶解する。次に、混合物を、液状非溶媒を含有している容器に、ポリマー薬物コンジュゲート溶液の凝固点よりも低い温度で噴霧すると、ポリマー薬物コンジュゲート液滴が凍結する。液滴、およびポリマー薬物コンジュゲート用の非溶媒が温められると、液滴中の溶媒が解凍し、非溶媒中に抽出されてマイクロスフィアが固化する。

Ｃ．ポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラント
インプラントは、１種または複数の非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートから形成することができる。好ましい実施形態では、インプラントは眼内インプラントである。

一部の場合、インプラントは、単一ポリマー薬物コンジュゲートから形成される（すなわち、インプラントは、同じ活性剤、疎水性ポリマーセグメント、分岐点（存在する場合）、および親水性ポリマーセグメント（複数可）を含有しているポリマー薬物コンジュゲートから形成される）。

別の実施形態では、インプラントは、２つ以上の異なるポリマー薬物コンジュゲートの混合物から形成される。例えば、インプラントは、異なる活性剤、ならびに同じ疎水性ポリマーセグメント、分岐点（存在する場合）、および親水性ポリマーセグメント（複数可）を含有している２種以上のポリマー薬物コンジュゲートから形成することができる。こうしたインプラントは、例えば、２種以上の活性剤を共投与するために使用することができる。別の場合、インプラントは、同じ活性剤、ならびに異なる疎水性ポリマーセグメント、分岐点（存在する場合）、および／または親水性ポリマーセグメントを含有している２種以上のポリマー薬物コンジュゲートから形成される。こうしたインプラントは、例え
ば、活性剤の放出速度を変えるために使用することができる。インプラントは、異なる活性剤、ならびに異なる疎水性ポリマーセグメント、分岐点（存在する場合）、および／または親水性ポリマーセグメントを含有している２種以上のポリマー薬物コンジュゲートから形成することもできる。

インプラントは、１種または複数の非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートと１つまたは複数のさらなるポリマーとのブレンドから形成することもできる。これらの場合、１つまたは複数のさらなるポリマーは、非生分解性または生分解性ポリマーとすることができるが、生分解性ポリマーが好ましい。これらの実施形態では、１つまたは複数のさらなるポリマーのアイデンティティおよび量は、例えば粒子安定性、すなわち送達が望まれる部位への分布に必要な時間、および送達のための望ましい時間に影響を及ぼすよう、選択することができる。

非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲートと一緒にブレンドすることができる代表的な合成ポリマーには、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、およびポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）などのポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）などのポリアルキレングリコール、ポリ（エチレンオキシド）などのポリアルキレンオキシド、ポリ（エチレンテレフタレート）などのポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリ（塩化ビニル）などのポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタンおよびそれらのコ−ポリマー、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシルエチルセルロース、三酢酸セルロース、およびセルロース硫酸ナトリウム塩などの誘導体化セルロース（本明細書では、まとめて「合成セルロース」と言う）、アクリル酸、メタクリル酸のポリマー、またはエステルを含めたそれらのコポリマーもしくは誘導体、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）（本明細書では、まとめて「ポリアクリル酸」と言う）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、およびポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、それらのコポリマー、およびブレンドが含まれる。本明細書で使用する場合、「誘導体」には、置換、化学基の付加（例えば、アルキル、アルキレン、ヒドロキシル化、酸化）、および当業者により慣例的になされる修飾を有するポリマーが含まれる。

好ましい生分解性のポリマーの例には、乳酸およびグリコール酸などのヒドロキシ酸、ならびにＰＥＧとのコポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、それらのブレンド、およびコポリマーが含まれる。

好ましい天然ポリマーの例には、アルブミンおよびプロラミンなどのタンパク質、例えば、ゼイン、および多糖類（アルギネートなど）、セルロース、ならびにポリヒドロキシアルカノエート（例えば、ポリヒドロキシブチレート）が含まれる。

インプラントのインビボ安定性は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共重合したポリラクチド−ｃｏ−グリコリドなどのポリマーを使用することにより、製造中に調節することができる。

好ましい非生分解性ポリマーの例には、エチレン酢酸ビニル、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、それらのコポリマー、およびそれらの混合物が含まれる。

１．インプラントのサイズおよび形
インプラントは、ファイバー、シート、フィルム、マイクロスフィア、球状、ロッド、円形ディスク、またはプラークなどの任意の幾何学的形状とすることができる。インプラントのサイズは、インプラントの耐久性、インプラントの場所、インプラント挿入が提案される方法を考慮したサイズ制限、取り扱いの容易さなどの要因により決まる。

シートまたはフィルムが使用される場合、シートまたはフィルムは、取り扱いの容易さのため、少なくとも約０．５ｍｍ×０．５ｍｍ、通常、約３〜１０ｍｍ×５〜１０ｍｍの範囲で、厚みが約０．１〜１．０ｍｍになる。ファイバーが使用される場合、ファイバー直径は、一般に約０．０５〜３ｍｍの範囲になり、ファイバー長は、一般に、約０．５〜１０ｍｍの範囲になる。

インプラントのサイズおよび形はまた、放出速度、処置期間、および埋込部位の薬物濃度を制御するために使用され得る。より大きなインプラントは、比例的により多くの用量を送達することになるが、質量比に対する表面に応じて、より遅い放出速度を有することが可能である。インプラントの具体的なサイズおよび幾何学的形状は、埋込部位に適するよう選択される。

眼内インプラントは、針による投与の場合、約５μｍ〜約２ｍｍの間、または約１０μｍ〜約１ｍｍの間のサイズを有することができ、外科的埋込みによる投与の場合、１ｍｍ超、または２ｍｍ超（３ｍｍなど）、または最大１０ｍｍのサイズを有することができる。ヒトにおける硝子体腔は、例えば１〜１０ｍｍ長を有する、様々な幾何学的形状の比較的大きなインプラントを収容することができる。インプラントは、寸法が約２ｍｍ×０．７５ｍｍ直径を有する、円筒状ペレット（例えば、ロッド）であってもよい。インプラントは、約７ｍｍ〜約１０ｍｍ長、および直径が約０．７５ｍｍ〜約１．５ｍｍを有する、円筒状ペレットであってもよい。ある種の実施形態では、インプラントは、直径が約０．５ｍｍ、長さが約６ｍｍ、および重量が約１ｍｇの押出しフィラメントの形態である。

眼内インプラントはまた、硝子体中などの眼の中のインプラントの挿入とその後のインプラントの収容の両方を容易にするよう、少なくともやや可動性があるように設計することができる。インプラントの全重量は、通常、約２５０〜５０００μｇ、より好ましくは約５００〜１０００μｇである。ある種の実施形態では、眼内インプラントは、約５００μｇ、７５０μｇ、または１０００μｇの質量を有する。

２．製造方法
インプラントは、当該分野で公知の適切な任意の技法を使用して製造することができる。インプラントの調製に適した技法の例には、溶媒蒸発法、相分離法、界面法、成形法、射出成形法、押出成形法、共押出成形法、カーバープレス（ｃａｒｖｅｒ ｐｒｅｓｓ）法、型抜き法、熱圧縮、およびそれらの組合せが含まれる。インプラントの製造に適した方法は、インプラント中に存在しているポリマー／ポリマーセグメントの特性、インプラント中に存在している１種または複数の活性剤の特性、およびインプラントの所望の形およびサイズを含む、多くの要因を考慮して選択することができる。インプラントの調製に適した方法は、例えば、米国特許第４，９９７，６５２号および米国特許出願公開２０１
０／０１２４５６５号において記載されている。

ある種の場合、インプラント製造中に溶媒の必要性を回避するために、押出成形法を使用することができる。押出成形法を使用する場合、ポリマー／ポリマーセグメントおよび活性剤は、製造に必要な温度、通常、少なくとも摂氏約８５度において安定となるように選択される。しかし、ポリマー構成要素および１種または複数の活性剤の性質に応じて、押出成形法は、摂氏約２５度〜摂氏約１５０度、より好ましくは摂氏約６５度〜摂氏約１３０度の温度を使用することができる。

インプラントは、インプラント表面全体または一部分を被覆するコーティングを提供するために、共押出成形されてもよい。こうしたコーティングは、浸食性または非浸食性であってもよく、活性剤、水、またはそれらの組合せに対し、不透過性、半透過性、または透過性であってもよい。こうしたコーティングを使用して、インプラントからの活性剤の放出をさらに制御することができる。

インプラントを作製するために、圧縮法が使用されることがある。圧縮法は、多くの場合、押出成形法よりも速い放出速度を有するインプラントが生じる。圧縮法は、約５０〜１５０ｐｓｉ、より好ましくは約７０〜８０ｐｓｉ、さらにより好ましくは約７６ｐｓｉの圧力を使用することができ、摂氏約０度〜摂氏約１１５度、より好ましくは摂氏約２５度の温度を使用することができる。

ＩＶ．医薬製剤
１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬製剤が提供される。代表的な賦形剤には、溶媒、希釈剤、ｐＨ調節剤、保存剤、抗酸化剤、懸濁化剤、湿潤剤、粘度調節剤、等張化剤、安定化剤、およびそれらの組合せが含まれる。適切な薬学的に許容される賦形剤は、一般に安全と認められる（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ ｓａｆｅ）（ＧＲＡＳ）物質から好ましくは選択され、望ましくない生物学的副作用または不要な相互作用を引き起こすことなく、個体に投与することができる。

一部の場合、医薬製剤は、たった１つのタイプのポリマー薬物コンジュゲート粒子を含有している（すなわち、医薬製剤に取り込まれたポリマー薬物コンジュゲート粒子は同じ組成を有する）。別の実施形態では、医薬製剤は、２種以上の異なるタイプのポリマー薬物コンジュゲート粒子を含有している（すなわち、医薬製剤は、２種以上のポリマー薬物コンジュゲート粒子集団を含有しており、この場合、ポリマー薬物コンジュゲート粒子集団は、異なる化学組成、異なる平均粒子サイズ、および／または異なる粒子サイズ分布を有する）。

Ａ．さらなる活性剤
医薬組成物は、ポリマー薬物コンジュゲート中には存在していない、１種または複数のさらなる活性剤を含有することができる。一部の場合、１種または複数のさらなる活性剤は、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子中に封入する、分散する、他には会合させることができる。ある種の実施形態では、１種または複数のさらなる活性剤は、薬学的に許容される担体に溶解するか、または懸濁することもできる。

ある種の実施形態では、医薬組成物は、１種または複数の局所麻酔剤を含有している。代表的な局所麻酔剤には、テトラカイン、リドカイン、アメトカイン、プロパラカイン、リグノカイン、およびブピバカインが含まれる。一部の場合、ヒアルロニダーゼ酵素などの１種または複数のさらなる薬剤も製剤に加えて、局所麻酔剤の分散を促進かつ改善させる。

Ｂ．賦形剤
ポリマー薬物コンジュゲートから形成された粒子は、好ましくは、眼に注射するための溶液または懸濁液として製剤化される。眼投与用医薬製剤は、好ましくは、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子の無菌水溶液または懸濁液の形態にある。許容可能な溶媒には、例えば、水、リンガー溶液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、および等張食塩溶液が含まれる。製剤はまた、１，３−ブタンジオールなどの無毒で、非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の無菌溶液、懸濁液、またはエマルションとすることもできる。

一部の例では、製剤は液体形態で分配されるか、または包装される。あるいは、眼投与用製剤は、例えば適切な液体製剤の凍結乾燥によって得られる固体として包装することができる。固体は、投与前に、適切な担体または希釈剤により再構成することができる。

眼投与用の溶液、懸濁液、またはエマルションは、眼投与に適したｐＨを維持するために必要な有効量の緩衝液により緩衝することができる。適切な緩衝液は当業者により周知であり、有用な緩衝液の一部の例は、アセテート、ボレート、カーボネート、シトレート、およびホスフェートの緩衝液である。

眼投与用の溶液、懸濁液、またはエマルションは、製剤の等張範囲を調節するための１種または複数の等張化剤も含有することができる。適切な等張化剤は、当該分野で周知であり、一部の例には、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、および他の電解質が含まれる。

眼投与用の溶液、懸濁液、またはエマルションは、点眼用調製物の細菌汚染を防止するための１種または複数の保存剤も含有することができる。適切な保存剤は当該分野で公知であり、ポリヘキサメチレンビグアニジン（ＰＨＭＢ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）、安定化オキシクロロ複合体（他には、Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）としても知られている）、酢酸フェニル水銀、クロロブタノール、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ベンジルアルコール、パラベン、チメロサール、およびそれらの混合物を含む。

眼投与用の溶液、懸濁液、またはエマルションは、分散剤、湿潤剤、および懸濁化剤などの、当該分野で公知の１種または複数の賦形剤も含有することができる。

他の投与経路に関すると、粒子または薬物コンジュゲートは、眼投与に使用されるものと同じ１種または複数のビヒクル中で懸濁させるか、または乳化することができる。これらは、目（眼球）、鼻（鼻腔）、口（口腔）、直腸、膣、経口などの粘膜表面への注射、点眼、スプレー、局所適用、もしくはデポにより、または血流、組織もしくは皮膚への注射により投与することができる。

Ｖ．使用方法
ある種の実施形態では、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬組成物を使用して、１つもしくは複数の眼の疾患を処置または予防する。一部の実施形態では、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラントを使用して、１つもしくは複数の眼の疾患を処置または予防する。

眼に投与される場合、粒子およびインプラントは長期間をかけて、好ましくは３日超、より好ましくは７日超、最も好ましくは１０日超で、低用量の１種または複数の活性剤を放出する。一部の実施形態では、粒子およびインプラントは、７日間〜２４週間、より好ましくは７日間〜８週間、好ましくは７日間〜３週間の期間をかけて、有効量の１種また
は複数の活性剤を放出する。別の場合、粒子およびインプラントは、７日間〜２年間、より好ましくは７日間〜５６週間、より好ましくは４週間〜５６週間、最も好ましくは８週間〜２８週間の期間をかけて有効量の１種または複数の活性剤を放出する。

ポリマー薬物コンジュゲートの構造、粒子／インプラントの形態、粒子の投与量、および粒子／インプラント中に取り込まれるポリマー薬物コンジュゲートの量は、暗順応ＥＲＧのｂ波の振幅の低下および／または網膜変性などの副作用を最小化しながら、長期間にわたり、治療有効量の１種または複数の活性剤を眼に投与するよう調整することができる。

Ａ．処置される眼の疾患および障害
本明細書で提供される１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬組成物は、眼の１つもしくは複数の疾患または障害を処置あるいは予防するために、それを必要としている患者の眼に投与される。１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラントはまた、眼の１つもしくは複数の疾患または障害を処置あるいは予防するために、それを必要としている患者の眼に投与することもできる。

一部の場合、眼の疾患または障害は、後眼部に影響を及ぼす。本明細書で使用する場合、後眼部とは、前部硝子体膜、およびその後ろにある光学構造体のすべて（硝子体液、網膜、脈絡膜、および視神経など）を含めた、眼の後ろ３分の２を指す。

好ましい実施形態では、本明細書で提供される１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬組成物は、眼内の血管新生疾患を処置または予防するために投与される。ある種の実施形態では、粒子は、平滑筋細胞増殖を阻害する、ダウノルビシンまたはドキソルビシンなどの、アントラサイクリンを含有しているポリマー薬物コンジュゲートから形成される。

眼疾患、特に眼の血管新生を特徴とするものが、深刻な公衆衛生上の懸念となっている。眼内の血管新生疾患は、眼の１つまたは複数の領域における、抑制が利かない脈管の増殖を特徴とする。抑制が利かない血管新生化は、眼における１つまたは複数の構造物に損傷を与える、かつ／または曇らせ、視力が喪失する。眼内の血管新生疾患には、増殖性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病、および他の虚血関連性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、変性近視、フォンヒッペル−リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、および網膜血管新生（ＲＮＶ）が含まれる。眼内の血管新生疾患は、世界中で何百万もの人が苦しんでおり、多くの場合、深刻な視力喪失、クオリティーオブライフおよび生産性の低下に至る。

ブドウ膜炎などの、他の眼の疾患および障害も既存の治療法を使用して処置するのが困難である。ブドウ膜炎は、虹彩、毛様体、または脈絡膜などの、ブドウ膜のいずれかの構成要素の炎症を指す一般用語である。覆っている網膜の炎症（網膜炎とよばれる）、または視神経の炎症（視神経炎と呼ばれる）が、ブドウ膜炎を伴うか、または伴わずに起こることがある。

とりわけ、未承認（ｕｎｒｅｃｏｇｎｉｚｅ）または不適当に処置された場合、ブドウ膜炎の眼の合併症により、深刻で非可逆性の視力喪失が生じることがある。ブドウ膜炎の最も頻繁に起こる合併症には、網膜剥離、網膜、視神経、または虹彩の血管新生、および嚢胞様黄斑浮腫が含まれる。視力にとって最も重要な網膜の中央部５％にあたる網膜黄斑内に、腫脹、漏出、および背景糖尿病網膜症（ＢＤＲ）が起こると、黄斑浮腫（ＭＥ）が起こり得る。ＭＥは、重症の視力障害の一般的な原因である。

血管新生は、腫瘍によって引き起こされ得る。腫瘍は、良性または悪性腫瘍のいずれかとすることができる。例示的な良性腫瘍には、過誤腫および神経線維腫が含まれる。例示的な悪性腫瘍には、脈絡膜黒色腫、虹彩のブドウ膜黒色腫、毛様体のブドウ膜黒色腫、網膜芽細胞腫、または転移性疾患（例えば、脈絡膜転移）が含まれる。

血管新生は、眼の創傷に伴うことがある。例えば、創傷は、角膜裂傷または眼の手術などの眼球への外傷性損傷の結果であることがある。

ポリマー薬物コンジュゲートは、硝子体網膜手術後の増殖性硝子体網膜症のリスクを予防するか低減する、角膜手術（角膜移植およびエキシマレーザー手術など）後の角膜混濁を予防する、線維柱帯切除術の閉塞を予防する、または翼状片の再発を予防するかもしくは実質的に遅延させるために投与することができる。

ポリマー薬物コンジュゲートは、炎症に伴う眼疾患を処置または予防するために投与することができる。こうした場合、ポリマー薬物コンジュゲートは、好ましくは抗炎症剤を含有する。例示的な炎症性眼疾患には、以下に限定されないが、ブドウ膜炎、眼内炎、および眼の外傷または手術が含まれる。眼疾患はまた、ＨＩＶ網膜症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、および眼内炎などの感染性眼疾患でもあり得る。

１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成された粒子を含有している医薬組成物はまた、ドライアイ、マイボーム腺炎、緑内障、結膜炎（例えば、アレルギー性結膜炎、春季カタル、巨大乳頭結膜炎、アトピー性角結膜炎）、虹彩血管新生を伴う血管新生緑内障、および虹彩炎などの、眼の他の部分に影響を及ぼす、１つまたは複数の疾患を処置または予防するために使用することもできる。

組成物およびインプラントは、活性剤および投与経路の選択に基づいて、別の障害の処置に有用である。有効性の延長および炎症の緩和などの利益が眼の経路を経て達成されるが、コンジュゲートは、別の経路を経て投与した場合にも、利益および薬物動態の改変をはやりもたらすべきである。

Ｂ．投与方法
１．投与形態
ポリマー薬物コンジュゲートは、硝子体内注射（例えば、硝子体の前面、中央部、または背面注射）、結膜下注射、前房内注射、側頭縁部を介する前眼房への注射、基質内注射、角膜内注射、網膜下注射、および眼内注射により、眼に局所投与することができる。好ましい実施形態では、医薬組成物は、硝子体内注射によって投与される。

あるいは、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬組成物は、角膜の表面に適用される点眼剤によって投与することができる。

他の投与経路に関すると、粒子または薬物コンジュゲートは、眼投与に使用されるものと同じ１種または複数のビヒクル中で懸濁させるか、または乳化することができる。これらは、目（眼球）、鼻（鼻腔）、口（口腔）、直腸、膣、経口などの粘膜表面への注射、点眼、スプレー、局所適用、またはデポにより、あるいは血流、組織または皮膚への注射により投与することができる。

本明細書に記載されているインプラントは、当該分野で公知の埋込みに適した方法を使用して、眼に投与することができる。ある種の実施形態では、インプラントは２２ゲージの針などの針を使用して硝子体内に注射される。硝子体内へのインプラントの配置は、イ
ンプラントのサイズ、インプラントの形、および処置すべき疾患または障害を考慮して変えることができる。

一部の実施形態では、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬組成物は、１種または複数のさらなる活性剤と共に共投与される。本明細書で使用する「共投与」とは、ポリマー薬物コンジュゲートと１種または複数のさらなる活性剤とを同じ剤形内で投与すること、およびポリマー薬物コンジュゲートと１種または複数のさらなる活性剤とを異なる剤形を使用して同時に、または本質的に同時に投与することを指す。本明細書で使用する「本質的に同時に」とは、一般に、１０分以内、好ましくは５分以内、より好ましくは２分以内、最も好ましくは１分以内を意味する。

２．用量
好ましくは、ポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子およびインプラントは、長期間にわたり、有効量の１種または複数の治療剤を放出することになる。好ましい実施形態では、粒子およびインプラントは、少なくとも２週間の期間にわたり、より好ましくは少なくとも４週間の期間にわたり、より好ましくは少なくとも６週間の期間にわたり、最も好ましくは少なくとも８週間の期間にわたり、有効量の１種または複数の活性剤を放出する。一部の実施形態では、粒子およびインプラントは、３ヶ月以上の期間にわたり、有効量の１種または複数の活性剤を放出する。

一部の場合、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬製剤（または、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラント）は、脈絡膜の血管新生を低減するために、治療有効量で、それを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬製剤（または、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラント）は、蛍光眼底血管造影法によって測定すると、ＣＮＶの面積を少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％低下させるために、それを必要としている患者に治療有効量で投与される。

一部の場合、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成される粒子を含有している医薬製剤（または、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラント）は、網膜の血管新生を低減するために、治療有効量で、それを必要とする患者に投与される。一部の場合、医薬製剤（または、１種または複数のポリマー薬物コンジュゲートから形成されるインプラント）は、蛍光眼底血管造影法によって測定すると、ＲＮＶの面積を少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％低下させるために、それを必要としている患者に治療有効量で投与される。

有効な投与量は、ポリマーに付着している薬物の公知の治療的有効性、およびコンジュゲートの薬物動態を決定に基づいて、当業者により決定することができる。

３．治療効果
加齢黄斑変性症の場合、患者における治療効果は、以下の１つまたは複数のものによって測定することができる。すなわち、ベースラインから所望の時間までの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）の平均変化の評価、ベースラインと比較した、所望の時間で１５文字（３行）未満の視力を失う患者の割合の評価、ベースラインと比較した、所望の時間で１５文字（３行）またはそれ以上の視力を得る患者の割合の評価、所望の時間で２０／２０００またはそれより悪いスネレン等価視力を有する患者の割合の評価、米国国立眼病研究所の視覚機能の質問表の評価、ならびに蛍光眼底血管造影法を使用する所望時間におけるＣＮＶサ
イズおよびＣＮＶ漏出量の評価である。

ある種の実施形態では、ＣＮＶを最近発症し、本明細書に記載されている製剤で処置されている患者の少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも３５％、最も好ましくは少なくとも４０％は、視覚を３行以上改善する。

他の疾患または障害に関すると、有効性は、疾患または障害の１つまたは複数の症状の緩和または軽減に基づいて決定される。例えば、血管形成術後の筋細胞の制御されない増殖を制限するためにラパマイシンなどの薬物を使用する場合、１つはポリマーを含まないラパマイシンと同等の投与量から開始し、ポリマーを含んだこの投与量での有効性を評価し、有効性を対照に対する再狭窄の低下と相関づける。

腫瘍の処置の場合、有効性は、増殖速度の低下、腫瘍量の減小、または転移の減少として測定することができる。

本発明は、以下の非限定的実施例を参照することにより、さらに理解される。

（実施例１）ポリ無水物薬物コンジュゲート粒子の調製
ポリマーの合成
（ポリエチレングリコール）_３−ｃｏ−ポリ（セバシン酸）（ＰＥＧ_３−ＰＳＡ）を、溶融重縮合により調製した。手短に言えば、セバシン酸を無水酢酸中で還流し、セバシン酸プレポリマー（Ａｃｙｌ−ＳＡ）を形成させた。クエン酸−ポリエチレングリコール（ＰＥＧ_３）を、当該分野で公知の方法（Ｂｅｎ−Ｓｈａｂａｔ， Ｓ．ら、Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｂｉｏｓｃｉ．６巻、１０１９〜１０２５頁（２００６年））を使用して調製した。ＣＨ_３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ_２２．０ｇ、クエン酸２６ｍｇ、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）８３ｍｇ、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）４．０ｍｇを塩化メチレン１０ｍＬに加えた。この混合物を室温で一晩撹拌し、次に沈殿させ、エーテルにより洗浄して真空下で乾燥し、ＰＥＧ_３を単離した。次に、ａｃｙｌ−ＳＡ（９０％ｗ／ｖ）およびＰＥＧ_３（１０％ｗ／ｖ）を１８０℃で３０分間重合した。窒素ガスを１５分毎に３０秒間フラスコに掃引した。ポリマーを周囲温度まで冷却し、クロロホルムに溶解し、過剰の石油エーテル中に沈殿させた。沈殿物をろ過により集め、一定重量になるまで真空下で乾燥した。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子の形成
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子は、ジクロロメタン３ｍＬおよびＤＭＳＯ１ｍＬ中に、ＰＥＧ_３−ＰＳＡとＤＸＲとを規定した比で溶解し、５０℃で２時間反応させた後、１％ポリビニルアルコール（２５ｋＤａ、Ｓｉｇｍａ社）を含有している水溶液１００ｍＬ中にホモジナイズ（Ｌ４ＲＴ、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｍａｃｈｉｎｅｓ社、Ｅａｓｔ Ｌｏｎｇｍｅａｄｏｗ、ＭＡ）することにより調製した。次に、撹拌しながら、室温でクロロホルムを２時間蒸発させることにより、粒子が固化した。粒子を遠心分離（４℃、２０，０００×ｇで、２０分間）によって集め、２倍の蒸留水で３回洗浄した。粒子サイズは、ＺｅｔａＳｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用する動的光散乱法により決定した。サイズ測定は、２５℃において、９０°の散乱角で行った。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子からインビトロでのＤＸＲ放出
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を、２ｍｇ／ｍＬで、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中に懸濁し、旋回台（１４０ＲＰＭ）上、３７℃でインキュベートした。選択した時間点において、上清を遠心分離（１３，５００×ｇ、５分間）により集め、
粒子を新しいＰＢＳ中で再懸濁した。ＤＸＲ含有量は、４８０ｎｍにおける吸光度により測定した。

結果
上記で調製したＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子は、ＤＸＲを２３．６％（重量基準）含有し、かつ平均粒子サイズ６４７ｎｍを有した。インビトロ研究により、最大２週間、３７℃においてＰＢＳ中に浸漬した条件下で、初期の急激な薬物放出段階がなく（すなわち、「バースト効果」がない）、ＤＸＲが、セバシン酸を含むコンジュゲートとして、ナノ粒子から定常的に放出されたことが示された。

（実施例２）ＣＮＶのマウスモデルにおける脈絡膜血管新生の処置
材料および方法
病原体をもたないＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ社、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、およびＪｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの指針に準拠して処置した。

以前に記載されているブルッフ膜のレーザー光凝固誘発性破裂により、脈絡膜ＮＶを誘発させた（Ｔｏｂｅ， Ｔら、Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．１３５巻（５号）、１６４１〜１６４６頁（１９９８年））。手短に言えば、５〜６週齢のＣ５７ＢＬ／６雌性マウスを塩酸ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ体重）により麻酔にかけ、瞳孔を拡張した。ＯｃｕＬｉｇｈｔ ＧＬダイオードレーザー（Ｉｒｉｄｅｘ社、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のスリットランプ投射システムおよび網膜を見るためのコンタクトレンズとしてハンドヘルドの（ｈａｎｄｈｅｌｄ）カバーガラスを用いて、レーザー光凝固（７５μｍのスポットサイズ、期間０．１秒、１２０ｍＷ）を各眼の後極の９時、１２時、および３時の位置に行った。ブルッフ膜の破裂を示す、レーザー時の気泡の発生は、ＣＮＶを得る際の重要な要因である；したがって、本検討では、気泡が発生した単なる火傷を含めた。

ブルッフ膜のレーザー誘発性破裂の直後に、眼内注射するため、マウスを様々な処置群に無作為化した。Ｈａｒｖａｒｄ Ｐｕｍｐ Ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍおよびガラス製プルマイクロピペットを使用して、解剖用顕微鏡下で硝子体内注射を行った。

注射の１、４、７および１４日後に、Ｍｉｃｒｏｎ ＩＩＩ（登録商標）カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．社、Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）を用いて眼底写真を撮影した。１４日後に、フルオレセイン標識デキストラン２５ｍｇ／ｍｌ（２×１０^６ダルトンの平均分子量；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を含有しているＰＢＳ１ｍｌによりマウスを灌流し、蛍光顕微鏡検査法により、脈絡膜フラットマウントを試験した。画像は、Ｎｉｋｏｎ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｓｔｉｌｌ Ｃａｍｅｒａ ＤＸＭ１２００により取得した（Ｎｉｋｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ）。画像解析ソフトウェア（Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ（登録商標）Ｐｌｕｓ；Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ社、Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）を使用して、処置群に関してマスクされている研究者により、各破裂部位におけるＣＮＶ面積の合計を測定した。

酸素誘発性虚血性網膜症の処置
出生後日数（Ｐ）７およびＰ１２において、７５％酸素中に置かれたＣ５７ＢＬ／６マ
ウスを部屋の空気に戻し、ＰＢＳ、またはダウノルビシン、ドキソルビシン、もしくはＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を含有しているＰＢＳの眼内注射を行った。Ｐ１７では、網膜表面上の網膜ＮＶの面積を測定した。手短に言えば、Ｐ１７マウスに、ラット抗マウス血小板内皮細胞接着分子−１（ＰＥＣＡＭ−１）抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）１μｌを眼内注射し、１２時間後、これらのマウスを安楽死させ、眼を室温で５時間、ＰＢＳ緩衝ホルマリンに固定した。網膜を解剖して洗浄し、Ａｌｅｘａ４８８によりコンジュゲートしたヤギ−抗ラットポリクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を１：５００希釈で用いて、室温で４５分間インキュベートし、フラットマウントした。処置群に関してマスクされている観察者が、画像解析により網膜あたりのＮＶの面積を測定した。

ＶＥＧＦ誘発性網膜血管新生の処置
光受容体においてＶＥＧＦを発現するヘミ接合ロドプシン／ＶＥＧＦトランスジェニックマウスに、Ｐ１４において、ＰＢＳ、またはＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１０μｇを含有しているＰＢＳ１μｌを眼内注射した。Ｐ２１、Ｐ２８、Ｐ３５、Ｐ４２、またはＰ４９に、マウスに麻酔をかけ、フルオレセイン標識デキストラン（平均分子量２×１０^６、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）により灌流し、網膜フラットマウントを４００倍の拡大倍率で蛍光顕微鏡検査法（Ａｘｉｏｓｋｏｐ２ ｐｌｕｓ、Ｚｅｉｓｓ社、Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ、ＮＹ）により試験すると狭い被写界深度がもたらされ、その結果、網膜の外側縁部に沿った血管新生に焦点を合わせると、網膜血管の残りが焦点外になり、血管新生の描写および定量化が簡単になる。画像は、三色電荷結合素子ビデオカメラ（Ｃｏｏｌ
ＳＮＡＰＴＭ−Ｐｒｏ、Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ社、Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）およびフレームグラバーによりデジタル化した。染色された血管新生を蛍光により認識するよう、画像解析ソフトウェア（Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ ５．０、Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ社、Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）を設定し、網膜あたりの血管新生の合計面積を計算した。画像解析を行う研究者は、処置群に関してマスクされている。

網膜電図（ＥＲＧ）の記録
成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＰＢＳ、あるいは０．１、１．０もしくは１０μｇのダウノルビシンまたはドキソルビシン、あるいは１．０もしくは１０μｇのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を含有しているＰＢＳ１μｌを眼内注射した。注射後、Ｅｓｐｉｏｎ
ＥＲＧ Ｄｉａｇｎｏｓｙｓ機器を使用し、暗順応および明順応ＥＲＧを１日目、７日目、および１４日目に記録した。暗順応記録に関しては、マウスに暗闇で一晩順応させ、明順応記録に関しては、マウスを強度３０ｃｄ／ｍ^２でバックグラウンド白色光に１０分間順応させた。マウスを、塩酸ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ体重）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ体重）を腹腔内に注射して麻酔をかけた。０．５％トロピカミドおよび０．５％フェニレフリン塩酸塩（参天製薬株式会社、大阪、日本）を含有しているＭｉｄｒｉｎ
Ｐにより瞳孔を拡張した。マウスを３９℃に加熱したパッド上に置き、隅角プリズム溶液（Ａｌｃｏｎ Ｌａｂｓ社、Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ、ＴＸ）の適用後、白金耳電極を各角膜に配置した。参照電極は、両眼間の前頭皮の皮下に配置し、接地電極を尾部に挿入した。マウスの頭を、両眼に等しい照射が確実となる、全体野ボウル型照射器の標準化位置に保持した。両眼の記録は、平衡電気的インピーダンスにより同時に行った。暗順応ＥＲＧは、−３．００〜１．４０ｌｏｇ ｃｄ−ｓ／ｍ２の範囲の白色光を強度レベル１１で記録した。各フラッシュ強度について、６回の測定値を平均した。明順応ＥＲＧは、３０ｃｄ／ｍ２のバックグラウンドで、０．６０〜１．４０ｌｏｇ ｃｄ−ｓ／ｍ２の範囲の白色光を強度レベル３で記録した。各フラッシュ強度について、５回の測定値を平均した。

外核層（ＯＮＬ）の厚みの測定
ＯＮＬ厚みを測定した。成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＰＢＳ、あるいは０．１、１．０もしくは１０μｇのダウノルビシンまたはドキソルビシン、あるいは１．０もしくは１０μｇのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を含有しているＰＢＳ１μｌを眼内注射した。マウスを安楽死させ、角膜輪部の１２：００の位置に印を付け、眼を取り除き、最適な切断温度の化合物に埋め込んだ。視神経に沿って１２：００または９：００の経線に対して平行に１０マイクロメートルの凍結切片を切り出し、４％パラホルムアルデヒドに固定した。切片をヘマトキシリンおよびエオシンにより染色し、Ａｘｉｏｓｋｏｐ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（Ｚｅｉｓｓ社、Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ、ＮＹ）により試験し、画像を、三電荷結合素子（ＣＣＤ）カラービデオカメラ（ＩＫ−ＴＵ４０Ａ、東芝、東京、日本）およびフレームグラバーを用いてデジタル化した。Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓソフトウェア（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ社、Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）を使用してＯＮＬの輪郭を描いた。処置群に関してマスクされている観察者により、ＯＮＬの厚みを６箇所の位置、すなわち上極と視神経の間の距離の２５％（Ｓ１）、５０％（Ｓ２）、および７５％（Ｓ３）、ならびに下極と視神経の間の距離の２５％（Ｉ１）、５０％（Ｉ２）、および７５％（Ｉ３）で測定した。

統計解析
データは、平均値±ＳＥＭとして表した。統計解析は、スチューデントｔ検定を使用して行い、Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。

結果
アントラサイクリンは脈絡膜および網膜のＮＶを抑制する。
血管新生ＡＭＤ患者における薬物効果（Ｓａｉｓｈｉｎ， Ｙ．ら、Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９５巻、２４１〜２４８頁（２００３年））を予測する脈絡膜ＮＶのマウスモデル（Ｔｏｂｅ，Ｔ．らＡｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５３巻、１６４１〜１６４６頁（１９９８年））において、ＤＮＲ１０μｇの眼内注射により、脈絡膜ＮＶが抑制される一方、１または０．１μｇの注射は、有意な効果を有さなかった（図１Ａ）。同様に、ＤＸＲ１０μｇの眼内注射により脈絡膜ＮＶが抑制され、１または０．１μｇの注射は、有意な効果を有さなかった（図１Ｂ）。

増殖性糖尿病網膜症における効果を予測するモデルである、酸素誘発性虚血性網膜症を有する新生仔マウスでは、ＤＮＲ１μｇの眼内注射により、網膜ＮＶの面積が著しく低下し、０．１μｇでは僅かに低下し、０．０１μｇでは有意な効果を有さなかった（図２Ａ）。ＮＶおよび硝子体血管を選択的に染色する技法である、抗ＰＥＣＡＭ１によるインビボでの免疫蛍光染色後、網膜フラットマウント上でＮＶを視覚化した。ＤＸＲ１μｇの眼内注射により、網膜ＮＶの面積が有意に低下したが、０．１または０．０１μｇは、そうではなかった（図２Ｂ）。ＤＮＲまたはＤＸＲ１μｇを注射した５日後、沈殿した薬物を網膜の表面上に視覚化した。僚眼における脈絡膜または網膜ＮＶの平均面積は、両方の眼をビヒクル注射したマウスの眼におけるものとは有意な違いがなく、ＤＮＲまたはＤＸＲの眼内注射に起因する全身的作用は存在しないことを示している。

網膜機能に対するＤＮＲまたはＤＸＲの眼内注射の効果
ＤＮＲおよびＤＸＲは、代謝拮抗剤およびＨＩＦ−１阻害剤であるので、本発明者らは、ＥＲＧによって評価される網膜機能に対するそれらの効果を試験した。ＤＮＲまたはＤＸＲ１μｇの眼内注射の１４日後、暗順応および明順応のｂ波の平均振幅が有意に低下したが、０．１μｇのＤＮＲまたはＤＸＲではそうではなかった。これらのデータにより、ＤＮＲおよびＤＸＲは、眼のＮＶを強く抑制する一方、遊離薬物のボーラス注射は網膜毒性を引き起こし得ることが示される。

ジゴキシンの眼内注射後の網膜毒性
ジゴキシン０．０１〜０．２５μｇを眼内注射することにより、ＨＩＦ−１の転写活性および眼のＮＶが抑制されることが以前に実証されている（Ｙｏｓｈｉｄａ， Ｔ．ら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．２４巻、１７５９〜１７６７頁（２０１０年））。網膜機能に対するＤＸＲおよびＤＮＲの有害作用が、ＨＩＦ−１活性の抑制と関連するかを探索するため、網膜機能に対するジゴキシン０．２５および０．０５μｇの眼内注射の影響を測定した。ジゴキシン０．２５μｇを眼内注射した１週間後、暗順応のａ波の平均振幅、暗順応のｂ波の平均振幅、および明順応のｂ波の平均振幅は有意に低下した。網膜における６つの測定位置の内の３つにおいて、外核層の厚みも低下しており、光受容体細胞の死亡を示している。これらの結果は、ジゴキシン０．２５μｇを眼内注射した後、かなりの毒性があることと一致している。ジゴキシン０．０５μｇの眼内注射はそれほど有毒ではなかったが、暗順応および暗順応のｂ波の平均振幅の著しい低下を依然として引き起こした。したがって、アントラサイクリンおよびジゴキシンの両方について、遊離薬物の眼への注射は、網膜毒性のリスクをもたらす。

眼のＮＶに対するＤＸＲ−ポリマーナノ粒子の効果
ＤＸＲナノ粒子の眼内注射の効果を、レーザー誘発性脈絡膜ＮＶを有するマウスにおいてまず試験した。ブルッフ膜のレーザー誘発性破裂の後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０、１．０、または０．１μｇのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を眼内注射した。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１μｇを投与された動物の眼底写真により、注射１日後に網膜後部を覆うナノ粒子の大きなオレンジ色の塊が、時間をかけてゆっくりと減少し、かつ１４日目でも依然として容易に目視可能であることが示された。粒子は５週間もの期間、目視可能のままであった。

１４日目に蛍光顕微鏡検査法により脈絡膜ＮＶを視覚化するために、フルオレセイン標識デキストランにより灌流したマウスでは、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を眼内注射された目における脈絡膜ＮＶの面積は、ＰＢＳを注射された僚眼と比べてより小さいように見えた。画像解析により、ＰＢＳを注射した目と比較して、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を１０、１または０．１μｇ注射した眼では、脈絡膜ＮＶの平均面積はずっと小さいものであった（図３Ａ）。

既に定着した脈絡膜ＮＶに対するＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子の効果を、ＮＶを７日間成長させ、次にＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１μｇを注射することにより調べた。注射の７日後に、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を注射した眼は、ＰＢＳを注射した対照の眼において観察されるものよりもかなり小さな脈絡膜ＮＶの平均面積を有しており、また７日目に存在していた脈絡膜ＮＶのベースライン量よりもやはりかなり小さいものであった（図３Ｂ）。これは、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子が、定着した脈絡膜ＮＶの退行を引き起こすことを示している。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子製剤も、虚血誘発性網膜血管新生のモデル（Ｓｍｉｔｈ， Ｌ． Ｅ． Ｈ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ．３５巻、１０１〜１１１頁（１９９４年））を使用して調べた。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１μｇの眼内注射により、ＰＢＳを注射した僚眼と比較して、網膜ＮＶの平均面積はかなり低下した（図４）。

ｒｈｏ／ＶＥＧＦトランスジェニックマウスにおけるＤＸＲ−ポリマーナノ粒子の眼内注射後のＮＶ抑制の延長
ロドプシンプロモーターが光受容体においてＶＥＧＦ発現を駆動するｒｈｏ／ＶＥＧＦトランスジェニックマウスは、生後（Ｐ）７日目に開始したＶＥＧＦの発現を持続し、治療剤の活性期間を試験するための優れたモデルを提供する（Ｏｋａｍｏｔｏ， Ｎ．ら、Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．１５１巻、２８１〜２９１頁（１９９７年））。

Ｐ１４に、ヘミ接合ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウスに、一方の眼にＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子１０μｇおよび僚眼にＰＢＳを眼内注射した。４週間目（図５Ａ）または５週間目（図５Ｂ）の、網膜下ＮＶの平均面積は、ビヒクル注射僚眼よりも、ＤＸＲナノ粒子注射眼の方がかなり小さかった。

ＤＸＲナノ粒子１または１０μｇを眼内注射すると、ＥＲＧまたはＯＮＬ厚みにより測定される毒性を引き起こさなかった。
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３１０μｇの眼内注射後の１４日目では、ＰＢＳを注射した眼と比較すると、暗順応または明順応のｂ波の振幅に有意な差異は存在しなかった。外核層の厚みも差異は存在しておらず、ＤＸＲナノ粒子が光受容体の細胞死を引き起こさなかったことを示している。

（実施例３）ウサギにおける薬物動態試験
材料および方法
ＰＥＧ_３−ＰＳＡポリマーの調製
（ポリエチレングリコール）_３−ｃｏ−ポリ（セバシン酸）（ＰＥＧ_３−ＰＳＡ）は、溶融縮合により合成した。手短に言えば、セバシン酸を無水酢酸中で還流し、セバシン酸プレポリマー（Ａｃｙｌ−ＳＡ）を形成させた。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ_３）を、塩化メチレン１０ｍＬに加えた、ＣＨ_３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ_２（２．０ｇ）、クエン酸（２６ｇ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；８３ｍｇ）、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、４．０ｍｇ）を混合することにより調製し、室温で一晩撹拌し、次に沈殿させて、エーテルで洗浄して真空下で乾燥した。次に、ａｃｙｌ−ＳＡ（９０％ｗ／ｗ）およびＰＥＧ_３（１０％ｗ／ｗ）を１８０℃で３０分間重合した。窒素ガスを１５分毎に３０秒間フラスコに掃引した。ポリマーを周囲温度まで冷却し、クロロホルムに溶解し、過剰の石油エーテル中に沈殿させた。沈殿物をろ過により集め、一定重量になるまで真空下で乾燥すると、ＰＥＧ_３−ＰＳＡポリマーが生成した。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子およびナノ粒子の調製
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ナノ粒子を調製するため、ＰＥＧ_３−ＰＳＡ８０ｍｇをジクロロメタン（ＤＣＭ）６ｍＬに溶解し、ドキソルビシン塩酸塩（ＤＸＲ）（ＮｅｔＱｅｍ
ＬＬＣ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）２０ｍｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２ｍＬに溶解した。ポリマーおよび薬物の溶液を混合し、５０℃で３０分間維持した。Ｌ４ＲＴホモジナイザー（Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｍａｃｈｉｎｅｓ社、Ｅａｓｔ Ｌｏｎｇｍｅａｄｏｗ、ＭＡ）を使用し、１０，０００ｒｐｍで３分間、得られた混合物を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）溶液（２５ｋＤａ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ社、Ｎｉｌｅｓ、ＩＬ）５０ｍＬ中でホモジナイズした。粒子懸濁液を室温で２時間撹拌し、ジクロロメタンを除去した。粒子を遠心分離（４℃、２０，０００×ｇ、２０分間）によって集め、凍結乾燥前に、超純水で３回洗浄した。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子は、同様の方法で調製した。手短に言えば、ＰＥＧ_３−ＰＳＡ２００ｍｇをＤＣＭ３ｍＬに溶解し、ＤＭＳＯ１．５ｍＬ中に溶解したＤＸＲ４０ｍｇと混合した。５０℃で３０分間インキュベートした後、混合物をＰＶＡ１００ｍＬ中、３，０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズした。２時間撹拌した後、粒子を遠心分離（９，０００×ｇ、２５分）により集め、凍結乾燥前に３回洗浄した。

粒子特性
粒子サイズを、Ｃｏｕｌｔｅｒ ＭｕｌｔｉｓｉｚｅｒＩＶ（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．社、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）を用いて決定した。マイクロ粒子の各回分について、１００，０００個を超える粒子をあるサイズにして、平均粒子径を決定
した。粒子形態は、冷陰極電界放出型ＳＥＭ（ＪＥＯＬ ＪＳＭ−６７００Ｆ、Ｐｅａｂｏｄｙ、ＭＡ）を使用する走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により特徴づけた。薬物搭載量は、ＤＣＭおよびＤＭＳＯ中に粒子の乾燥粉末を溶解することにより決定し、ＵＶ分光光度計を使用して吸光度を４９０ｎｍで測定した。

動物手順
色素が沈着したダッチベルテッドウサギをこれらの研究に使用した（ｎ＝１０）。動物は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ
Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、およびＪｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの指針に準拠して処置した。眼内注射および水性体液の回収のために、ケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（２．５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射により、動物に麻酔をかけた。鎮静すると、瞳孔を２．５％塩酸フェニレフリンおよび１０％トロピカミドにより拡張した。眼球表面の麻酔は、０．５％塩酸プロパラカインの局所点眼法を使用して行った。

注射に関すると、２６ゲージの針を側頭上部の縁部の後方１．５ｍｍの硝子体腔に、針の先端が硝子体中央部に向かうよう、注意深く導入した。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子またはナノ粒子懸濁液の０．１ｍＬ体積分を右眼に送達し、ビヒクル（ＰＢＳ）０．１ｍＬを左眼に送達した。導入部位からの逆流を防ぐために、針を抜き取る前に、１０秒間、定位置で保持した。麻酔から戻るまで、動物をケージに返しモニターした。

指示した時間に、輪部から３０ゲージの針を挿入して、水性体液を取り出すことにより、水性体液（約０．１ｍＬ）を抜き取った。試料は使用するまで−８０℃で保管した。検討の終わり（ナノ粒子処置動物に関しては１０５日目、およびマイクロ粒子処置動物に関しては１１５日目）に、動物をペントバルビタールに基づく安楽死（＞１５０ｍｇ／Ｋｇ）を用いて安楽死させた。動物は眼球を除去され、硝子体を単離して使用するまで−８０℃で保管した。

ウサギの水性体液および硝子体試料中の放出薬物コンジュゲートのＨＰＬＣ定量
ＨＰＬＣによる薬物含有量の定量前に、水性体液試料１００μＬまたは硝子体試料をメタノール２００μＬと混合し、４℃で３時間インキュベートした。遠心分離（１５，０００×ｇ、１０分）および０．２μｍＰＴＦＥフィルターによるろ過後、ろ液１５０μＬをｃ１８逆相カラム（５μｍ、４．６×２５０ｍｍ、Ｇｒａｃｅ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ ＩＬ）を装備したＷａｔｅｒｓ ＨＰＬＣシステムに注入した。放出薬物コンジュゲートを、水およびアセトニトリル（６０％：４０％、ｖ／ｖ）を含有するイソクラティック移動相により１ｍＬ／分で溶出し、蛍光検出器（励起波長：５００ｎｍ、発光波長：５５１ｎｍ）を使用して検出した。推定検出限界は、１０ｎｇ／ｍＬまたは２０ｎＭであった。異なる濃度の一連のＤＸＲ水溶液を較正標準として使用した。データはＥｍｐｏｗｅｒ３クロマトグラフィーデータソフトウェアを使用して分析した（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社、Ｍｉｌｆｏｒｄ ＭＡ）。

結果
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子およびナノ粒子
ＤＸＲ−ＳＡ−ＰＥＧ_３コンジュゲートからなるマイクロ粒子およびナノ粒子を合成し、記載した通りに特徴付けを行った。粒子は、凍結乾燥前、およびビヒクル（ＰＢＳ）中に再構成した後に、あるサイズにした。マイクロ粒子は、凍結乾燥前に、平均サイズ２７．２＋１．０μｍを示し、ナノ粒子は０．９８＋０．０２μｍを示した（表１、図６）。マイクロ粒子の平均薬物搭載量は１３％であり、ナノ粒子の平均薬物搭載量はは２０％で
あった（表１）。

ＳＥＭ解析により、予期したサイズの離散性粒子であることを実証した。図６Ａおよび図６Ｂは、マイクロ粒子およびナノ粒子の体積基準のサイズ分布をそれぞれ示している。

ウサギへのＩＶＴ投与後の薬物放出期間
ウサギは、右眼にＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子またはナノ粒子、および左眼にビヒクル単独（ＰＢＳ）の硝子体内注射（０．１ｍＬ）を受けた。指示した時間に、水性体液を集め（約０．１ｍＬ）、ＨＰＬＣに基づく定量アッセイを使用して、放出された薬物コンジュゲートの存在について分析した。１１５日目（マイクロ粒子群）または１０５日目（ナノ粒子群）に、動物を安楽死させ、水性体液および硝子体を集めた。

各動物について、ＡＨにおける放出薬物のレベルを硝子体中のものと比較した。

ウサギはすべて、硝子体内への粒子投与後、薬物放出が持続していることを示した（図７Ａ、表２）。

マイクロ粒子とナノ粒子の処置動物の両方において、研究期間中（それぞれ、１１５日および１０５日）、ＨＰＬＣアッセイの定量限界（１０ｎｇ／ｍＬまたは２０ｎＭ）より十分高いレベルが観察された（図７Ａ）。硝子体と比べたＡＨにおける放出薬物レベルの直接比較により、硝子体のレベルは、ＡＨにおいて測定されるレベルよりも、ＡＨと比べて硝子体中では最大１８８倍高いという、かなり高いものであることが示された（表３、図７Ｂ）。１１５日目におけるマイクロ粒子処置動物に関する平均放出薬物レベルは、ＡＨにおいては０．０９＋０．１３μＭであり、硝子体においては７．１２＋１２．９２μＭであった。１０５日目におけるナノ粒子処置動物に関すると、平均放出薬物レベルは、ＡＨにおいては０．２３＋０．３１μＭであり、硝子体においては１１．９１＋１０．４５μＭであった（表３）。硝子体における薬物レベルは、ＡＨにおいて測定された薬物レベルよりも７７〜９０倍高いものであった。

図７Ａは、硝子体に注射したマイクロ粒子およびナノ粒子により処置されたウサギの水
性体液（ＡＨ）における、放出されたＤＸＲ薬物コンジュゲートの量（ｎＭ）を時間（日数）の関数として示したグラフである。図７Ｂは、それぞれ、１０５日目および１１５日目のナノ粒子およびマイクロ粒子処置ウサギの、水性体液（ＡＨ）ならびに硝子体における放出薬物量を比較した棒グラフである。

ウサギの眼へのＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子またはナノ粒子の硝子体内送達により、それぞれ少なくとも１１５日間または１０５日間（本検討の期間）持続する長期薬物放出がもたらされた。硝子体中で測定された放出薬物レベルは、水性体液中において測定されたレベルよりも、平均が７７〜９０倍高いという、かなり高いものであった。

これらのデータは、眼内送達するとＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３からの持続放出を実証しており、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３の持続放出は、ＮＶ ＡＭＤを含むＮＶ眼疾患の処置に対する有望な治療法になることを示唆している。

（実施例４）完全生分解性ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ロッドの合成、およびインビトロ評価
３種のドキソルビシン（ＤＸＲ）薬物搭載レベル１０％、３０％および５０％を有する、直径０．５ｍｍ、長さ０．５ｃｍ、および質量１ｍｇのロッド型ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３コンジュゲートを首尾よく作製した。ＤＸＲのインビトロでの放出は、３種のロッドタイプすべてについて、少なくとも２５日間、持続放出であることを実証した。

材料および方法
ＰＥＧ_３−ＰＳＡポリマーの調製
（ポリエチレングリコール）_３−ｃｏ−ポリ（セバシン酸）（ＰＥＧ_３−ＰＳＡ）を溶融縮合により合成した。手短に言えば、セバシン酸を無水酢酸中で還流し、セバシン酸プレポリマー（Ａｃｙｌ−ＳＡ）を形成させた。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ_３）は、塩化メチレン１０ｍＬに加えた、ＣＨ_３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ_２（２．０ｇ）、クエン酸（２
６ｇ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；８３ｍｇ）、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、４．０ｍｇ）を混合することにより調製し、室温で一晩撹拌し、次に沈殿させて、エーテルで洗浄して真空下で乾燥した。次に、ａｃｙｌ−ＳＡ（９０％ｗ／ｖ）およびＰＥＧ_３（１０％ｗ／ｖ）を１８０℃で３０分間重合した。窒素ガスを１５分毎に３０秒間フラスコに掃引した。ポリマーを周囲温度まで冷却し、クロロホルムに溶解し、過剰の石油エーテル中に沈殿させた。沈殿物をろ過により集め、一定重量になるまで真空下で乾燥すると、ＰＥＧ_３−ＰＳＡポリマーが生成した。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ロッドの調製
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ロッドを調製するため、３種の異なる濃度のＤＸＲを使用して、１０％、３０％および５０％（ｗ／ｗ）の薬物搭載レベルを有するロッドを作製した。１０％、３０％および５０％の薬物搭載ロットについては、ＰＥＧ_３−ＰＳＡおよびドキソルビシン塩酸塩（ＤＸＲ）（ＮｅｔＱｅｍ ＬＬＣ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）を９：１、７：３、および１：１（ｗ／ｗ）の比でＣＨＣｌ_３に加えた。ＰＥＧ_３−ＰＳＡおよびＤＸＲを５０℃で１時間インキュベートし、その後、ＣＨＣｌ_３を真空により除去した。反応生成物をすりつぶして微粉末にし、次に、成形型として使用した直径０．５ｍｍのガラス管中に圧縮した。反応生成物をすりつぶして微粉末にし、次に、成形型として使用した直径０．５ｍｍのガラス管中に圧縮した。ロッドを成形型から押し出し、長さ０．５ｃｍに裁断した。各ロッドは、約１ｍｇ（０．９〜１．２ｍｇ）の重量であった。

インビトロ薬物放出
１つのロッド（約１ｍｇ）を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）１ｍｌに加え、回転台（１４０ＲＰＭ）上で、３７℃でインキュベートした。選択した時点において、上清を集め、新しいＰＢＳを加えた。ＤＸＲ−コンジュゲート濃度を、４８０ｎｍにおける吸光度により測定した。

結果
３種の異なる薬物搭載レベル１０％、３０％および５０％を有するロッド型ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３コンジュゲートを作製した。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３コンジュゲートから、直径０．５ｍｍ、長さ０．５ｃｍ、および質量１ｍｇを有するロッドを形成した。

インビトロ薬物放出期間は、薬物搭載レベルが１０％、３０％、および５０％を有するＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ロッドを使用して評価した（図８）。３つのロッドすべてからの薬物放出が、少なくとも２５日間持続した。

これらのデータは、ロッド型ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３コンジュゲートの合成が可能であることを実証する。異なる薬物濃度を有するＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３コンジュゲートからなるロッドを首尾よく合成し、ロッドのすべてがインビトロでの薬物放出を持続することを示した。これらのデータはまた、サイズ、質量、および薬物含有量が異なるロッドを作製することができること、および薬物放出速度を最適化し、各被送達薬物および各治療的指標にとって最も効果的な薬物送達プロファイルを得ることができることも示唆している。

（実施例５）ＤＸＲ−ＰＣＰＨ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３ポリマーコンジュゲートの作製
完全生分解性ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３ポリマー薬物コンジュゲートからなるマイクロ粒子を合成し、これは、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子と比べて、よりゆっくりとした薬物放出速度、および一層持続した薬物放出期間を示した。ポリマーへのＰＣＰＨの付加により、ポリマー薬物コンジュゲートの疎水性が高まり、おそらくＤＸＲ溶解度の低下により、薬物放出期間が延びる結果となった。
材料および方法
１，６−ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン（ＣＰＨ）の合成

１，６−ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン（ＣＰＨ）をＣｏｎｉｘ（１９６６年）により記載される通り合成した。手短に言えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸（２７．６ｇ）および水酸化ナトリウム（１６．０ｇ）を水（８０ｍＬ）中で撹拌し、還流温度まで加熱した。還流温度を維持しながら、１，６−ジブロモヘキサン（９６％、１５．７ｍＬ）を３０分間かけて加え、さらに３．５時間還流した。水（１０ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（４．０ｇ）をこの混合物に加え、さらに２時間還流した後、反応混合物を室温で一晩置いた。二ナトリウム塩をろ過により単離し、メタノール４０ｍＬにより洗浄し、蒸留水に溶解した。溶液を６０〜７０℃に温め、６Ｎ硫酸により酸性にした。二塩基酸をろ過により単離し、真空下で一定重量になるまで乾燥した。

ＰｒｅＣＰＨの合成
１，６−ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン（ＣＰＨ）（１０．０ｇ）を、窒素下、無水酢酸２００ｍＬ中で３０分間還流し、続いてろ過により未反応二酸、および蒸発により溶媒を除去した。残渣をジメチルホルムアミドおよびエチルエーテルから再結晶し、乾燥エチルエーテルにより洗浄して、真空下で一定重量になるまで乾燥した。

ＰＥＧ_３−ＰＳＡ−ＰＣＰＨプレポリマーの合成
（ポリエチレングリコール）_３−ｃｏ−ポリ（セバシン酸）ｃｏ−ポリ（ＣＰＨ）（ＰＥＧ_３−ＳＡ−ＰＣＰＨ）を溶融縮合により合成した。手短に言えば、セバシン酸を無水酢酸中で還流し、セバシン酸プレポリマー（Ａｃｙｌ−ＳＡ）を形成させた。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ_３）を、塩化メチレン１０ｍＬに加えた、ＣＨ_３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ_２（２．０ｇ）、クエン酸（２６ｇ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；８３ｍｇ）、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、４．０ｍｇ）を混合することにより調製し、室温で一晩撹拌し、次に沈殿させて、エーテルで洗浄して真空下で乾燥した。次に、ＰＥＧ_３（１０％、ｗ／ｖ）、ａｃｙｌ−ＳＡ（６０％ｗ／ｖ）およびｐｒｅＣＨＰ（３０％ｗ／ｖ）を１８０℃で３０分間重合した。窒素ガスを１５分毎に３０秒間フラスコに掃引した。ポリマーを周囲温度まで冷却し、クロロホルムに溶解し、過剰の石油エーテル中に沈殿させた。沈殿物をろ過により集め、一定重量になるまで真空下で乾燥すると、ＰＥＧ_３−ＰＳＡ−ＰＣＰＨプレポリマーが生成した。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子の調製
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子を調製するため、ＰＥＧ_３−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ２００ｍｇをジクロロメタン（ＤＣＭ）３ｍＬに溶解し、ＤＭＳＯ１．５ｍＬに溶解したドキソルビシン塩酸塩（ＤＸＲ）（ＮｅｔＱｅｍ ＬＬＣ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）４０ｍｇと混合した。５０℃で３０分間インキュベートした後、混合物をＰＶＡ１００ｍＬ中、３，０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズした。２時間撹拌した後、粒子を遠心分離（９，０００×ｇ、２５分間）により集め、凍結乾燥前に３回洗浄した。

粒子特性
粒子サイズは、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ ＩＶ（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．社、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）を用いて決定した。マイクロ粒子の各回分について、１００，０００個を超える粒子をあるサイズにして、平均粒子径を決定した。

インビトロ薬物放出
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子（２ｍｇ）をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で懸濁し、回転台（１４０ＲＰＭ）上で、３７℃でインキュベートした。選択した時間点において、上澄み液を遠心分離（１３，５００×ｇ、５分間）
により集め、粒子を新しいＰＢＳ中で再懸濁した。ＤＸＲ−コンジュゲートは、４８０ｎｍにおける吸光度により測定した。

結果
ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子を合成し、これは、１３．９％の薬物搭載レベルを有する２４．３±８．７μｍの平均サイズを示した。

ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子とＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子（平均サイズ２２．５±８．３μｍ）との間で、インビトロ薬物放出期間を比較した。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子は、４５日間、薬物放出が持続することを示した一方、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子は、より遅い薬物放出速度および７５日にわたる薬物放出の持続を実証した（図９）。

完全生分解性ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３ポリマー薬物コンジュゲートからなるマイクロ粒子を合成した。ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＣＰＨ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子は、ＤＸＲ−ＰＳＡ−ＰＥＧ_３マイクロ粒子、すなわち粒子にＣＰＨポリマーが付加していないものと比べて、より遅い薬物放出速度、および薬物放出期間の一層長い持続を示した。ポリマーへのＣＰＨの付加により、放出された薬物コンジュゲートの疎水性が高まり、このコンジュゲートはＤＸＲの溶解度を低下させることが予期され、その結果、薬物放出期間が延びた。

これらのデータは、放出される薬物コンジュゲートの疎水性を高めるために、ポリマーの化学的性質を変えることにより、薬物放出レベルおよび期間を改変し得ることを実証しており、これらのパラメータを最適化すると、各被送達薬物および各治療的指標にとって最も効果的な薬物送達プロファイルを得ることができることを示している。

Claims (32)

1. 式
   （式中、
   Ａは、トラボプロスト、ラタノプロスト、バイマトプロスト、チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール、カルテオロール、ブリモニジン、ブリンゾラミド、アセタゾラミド、およびドルゾラミドからなる群から選択され；
   Ｚは、出現毎に独立して、ポリエチレングリコールおよびポリ（プロピレングリコール）から選択される親水性ポリマーセグメントであり；
   Ｙは、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位、無機部位、または有機金属部位である多価分岐点であり；
   Ｘは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される疎水性ポリマーセグメントであり；そして
   ｍは１であり、ｎは１〜２０の間の整数である）
   のポリマーコンジュゲート。
2. Ａが、トラボプロスト、ラタノプロスト、およびバイマトプロストから選択され；
   Ｚが、ポリエチレングリコールであり；
   Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり；
   Ｘが、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される疎水性ポリマーセグメントであり；そして
   ｍが１であり、ｎが１である、
   請求項１に記載のポリマーコンジュゲート。
3. Ａが、ラタノプロストである、請求項２に記載のポリマーコンジュゲート。
4. Ａが、バイマトプロストである、請求項２に記載のポリマーコンジュゲート。
5. Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり、該官能基が、カルボニル、アルデヒド、カルボキシル、エステル、およびアミンから選択される、請求項２に記載のポリマーコンジュゲート。
6. Ａが、チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール、およびカルテオロールから選択され；
   Ｚが、ポリエチレングリコールであり；
   Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり；
   Ｘが、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される疎水性ポリマーセグメントであり；そして
   ｍが１であり、ｎが１である、
   請求項１に記載のポリマーコンジュゲート。
7. Ａが、チモロールである、請求項６に記載のポリマーコンジュゲート。
8. Ａが、ベタキソロールである、請求項６に記載のポリマーコンジュゲート。
9. Ａが、レボベタキソロールである、請求項６に記載のポリマーコンジュゲート。
10. Ａが、カルテオロールである、請求項６に記載のポリマーコンジュゲート。
11. Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり、該官能基が、カルボニル、アルデヒド、カルボキシル、エステル、およびアミンから選択される、請求項６に記載のポリマーコンジュゲート。
12. Ａが、ブリモニジンであり；
    Ｚが、ポリエチレングリコールであり；
    Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり；
    Ｘが、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される疎水性ポリマーセグメントであり；そして
    ｍが１であり、ｎが１である、
    請求項１に記載のポリマーコンジュゲート。
13. Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり、該官能基が、カルボニル、アルデヒド、カルボキシル、エステル、およびアミンから選択される、請求項１２に記載のポリマーコンジュゲート。
14. Ａが、ブリンゾラミド、アセタゾラミド、およびドルゾラミドから選択され；
    Ｚが、ポリエチレングリコールであり；
    Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり；
    Ｘが、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される疎水性ポリマーセグメントであり；そして
    ｍが１であり、ｎが１である、
    請求項１に記載のポリマーコンジュゲート。
15. Ａが、ブリンゾラミドである、請求項１４に記載のポリマーコンジュゲート。
16. Ａが、アセタゾラミドである、請求項１４に記載のポリマーコンジュゲート。
17. Ａが、ドルゾラミドである、請求項１４に記載のポリマーコンジュゲート。
18. Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり、該官能基が、カルボニル、アルデヒド、カルボキシル、エステル、およびアミンから選択される、請求項１４に記載のポリマーコンジュゲート。
19. 少なくとも３つのポリマーセグメントを含む非線状マルチブロックコポリマーを形成するように多価分岐点を介して共有結合的に接続されている１つまたは複数の親水性ポリマーセグメントおよび１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントを含むポリマーコンジュゲートであって、該ポリマー薬物コンジュゲートが、該１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントに共有結合される治療剤を有し、式：
    （式中、
    治療剤（Ａ）は、該１つまたは複数の疎水性ポリマーセグメントに共有結合されるスニチニブであり；
    該親水性ポリマーセグメント（Ｚ）は、出現毎に独立して、ポリエチレングリコールおよびポリ（プロピレングリコール）から選択され；
    Ｙは、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位、無機部位、または有機金属部位である多価分岐点であり；
    該疎水性ポリマーセグメント（Ｘ）は、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択され；そして
    ｍは１であり、ｎは２〜２０の間の整数である）
    のポリマーコンジュゲート。
20. Ｚが、ポリエチレングリコールである、請求項１９に記載のポリマーコンジュゲート。
21. Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点である、請求項１９に記載のポリマーコンジュゲート。
22. Ｙが、少なくとも２つのタイプの官能基を有する有機部位である多価分岐点であり、該官能基が、カルボニル、アルデヒド、カルボキシル、エステル、およびアミンから選択される、請求項２１に記載のポリマーコンジュゲート。
23. Ｘが、ポリ（ラクチド）である、請求項１９に記載のポリマーコンジュゲート。
24. Ｘが、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）である、請求項１９に記載のポリマーコンジュゲート。
25. ｍは１であり、ｎは２である、請求項１９に記載のポリマーコンジュゲート。
26. 薬学的に許容される担体とともに請求項１〜１８のいずれか１項に記載のポリマーコンジュゲートを含む、医薬組成物。
27. 必要な患者において眼の疾患または障害を処置するための請求項２６に記載の医薬組成物。
28. 前記組成物が前記眼に投与される、請求項２６に記載の医薬組成物。
29. 薬学的に許容される担体とともに請求項１９〜２５のいずれか１項に記載のポリマーコンジュゲートを含む、医薬組成物。
30. 必要な患者において眼の疾患または障害を処置するための請求項２９に記載の医薬組成物。
31. 必要な患者において緑内障または加齢黄斑変性症を処置するための請求項３０に記載の医薬組成物。
32. 前記組成物が前記眼に投与される、請求項２９に記載の医薬組成物。