JP2016070896A - 抗原検出のための前処理方法 - Google Patents
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Abstract
Description
すなわち本発明は以下のような構成からなる。
免疫学的測定のための検体の前処理方法であって、以下の[1]から[3]までの工程を含む方法。
[1]亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液を、3以上のウェルを有するカートリッジのうち2つのウェルに、それぞれ別々に保持する工程。
[2]前記カートリッジのうち、前記2種類の試薬溶液が保持されていないウェルにて、自動で前記2種類の試薬溶液および検体を混合する工程。
[3]前記2種類の試薬溶液と検体との混合溶液を一定時間保持する工程。
[項2]
前記工程[3]において検体を30℃から50℃の間で保持する、項1に記載の方法
[項3]
前記工程[3]において保持時間が10秒から2分である、項1または2に記載の方法。
[項4]
検体がA群β溶血連鎖球菌を含む検体である、項1〜3のいずれかに記載の方法。
[項5]
項1〜4のいずれかに記載の前処理方法で処理された検体中の測定対象物質を、免疫学的方法で測定する方法。
[項6]
項1〜5のいずれかに記載の方法に用いるためのカートリッジであって、3以上のウェルを有し、そのうち2つのウェルに、亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液が、それぞれ別々に保持されているカートリッジ。
[項7]
項1〜4のいずれかに記載の方法に用いるための検査キットであって、以下の[1]から[2]の構成を含むキット。
[1]3以上のウェルを有するカートリッジであって、そのうち2つのウェルに、亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液が、それぞれ別々に保持されているカートリッジ。
[2]検体中の測定対象物質検出用の抗体を含む試薬。
[項8]
測定対象物質がA群β溶血連鎖球菌である、項7に記載の検査キット。
[1]亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液を、3以上のウェルを有するカートリッジのうち2つのウェルに、それぞれ別々に保持する工程。
[2]前記カートリッジのうち、前記2種類の試薬溶液が保持されていないウェルにて、自動で前記2種類の試薬溶液および検体を混合する工程。
[3]前記2種類の試薬溶液と検体との混合溶液を一定時間保持する工程。
温度を保持させる方法は、種々の方法が知られており特に限定されない。例えば、市販のヒーターおよびサーミスタに、市販のヒートブロックを適宜組み合わせて用いればよい。
ウェルの数は、検体の前処理に用いるのであれば、3以上であれば特に限定されない。前処理された検体をさらに免疫学的測定法に供する場合は、さらに、測定対象物質の測定原理(たとえば測定のステップ数や必要な試薬数など)に応じて適宜増やせば良く、好ましくは5以上である。ウェル数の上限は特にないが、1測定項目あたり15以下であることが好ましく、さらに好ましくは13以下である。
ウェルの大きさやカートリッジ上の位置は特に限定されない。例えば、入手できる検体の量、測定に必要な試薬量、適用する機器との対応関係など事情に応じて適宜決めればよい。
[1]3以上のウェルを有するカートリッジであって、そのうち2つのウェルに、亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液が、それぞれ別々に保持されているカートリッジ。
[2]検体中の測定対象物質検出用の抗体を含む試薬。
本発明のキットの構成として、例えば、特許文献2に記載の試薬カートリッジ(図1)の各ウェルに以下の溶液が別々に保持されているキットを用いることが好適である。
[A]ブロック液
[B]洗浄液
[C]R1試薬(ビオチン標識抗A群β溶血連鎖球菌抗体)
[D]R2試薬(アルカリフォスファターゼ標識抗A群β溶血連鎖球菌抗体)
[E]R3試薬(発光基質)
[F]亜硝酸を含む溶液
[G]クエン酸を含む溶液
[H]抗ビオチン抗体がメンブレン上に固相化された反応容器
を組み合わせて用いることが好適である。
7.5mmol/L亜硝酸ナトリウム溶液を50μL、0.045mmol/Lのクエン酸溶液30μL、および検体ウェルに入れた検体20μLを別のウェルに自動分注・混合し、所定温度で所定の時間処理した。
(2)R1試薬(2.5μg/mlビオチン標識抗A群β溶血連鎖球菌抗体液)30μLとR2試薬(30ng/ml アルカリフォスファターゼ標識抗A群β溶血連鎖球菌抗体液)40μLおよび(1)の検体処理液90μLを別のウェルに自動分注・混合し、40℃で2分30秒インキュベートし抗原−抗体のサンドイッチ複合体を形成した。
(3)POCube専用反応容器(第一抗体に結合したリガンドを特異的に認識するリガンド捕捉剤が結合された多孔性フィルタ(抗ビオチン抗体を結合させたガラスフィルター固相)を含む容器)に、1重量%カゼインを含むブロッキング剤を50μL添加した後、(2)でインキュベート後の抗原−抗体のサンドイッチ複合体検体・抗体混合液130μLを反応容器に滴下し、40℃で20秒インキュベートし抗原−抗体のサンドイッチ複合体を反応容器に結合させた。
(4)インキュベート後、反応容器に洗浄液を80μLを2回分注し、BF分離を行った後、R3試薬(Lumigen社APS−5)30μLを添加し、発光強度を測定した。
加温温度;30℃、35℃、40℃、45℃、50℃
処理時間;10秒、30秒、60秒、120秒
Claims (8)
- 免疫学的測定のための検体の前処理方法であって、以下の[1]から[3]までの工程を含む方法。
[1]亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液を、3以上のウェルを有するカートリッジのうち2つのウェルに、それぞれ別々に保持する工程。
[2]前記カートリッジのうち、前記2種類の試薬溶液が保持されていないウェルにて、自動で前記2種類の試薬溶液および検体を混合する工程。
[3]前記2種類の試薬溶液と検体との混合溶液を一定時間保持する工程。 - 前記工程[3]において検体を30℃から50℃の間で保持する、請求項1に記載の方法
- 前記工程[3]において保持時間が10秒から2分である、請求項1または2に記載の方法。
- 検体がA群β溶血連鎖球菌を含む検体である、請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- 請求項1〜4のいずれかに記載の前処理方法で処理された検体中の測定対象物質を、免疫学的方法で測定する方法。
- 請求項1〜5のいずれかに記載の方法に用いるためのカートリッジであって、3以上のウェルを有し、そのうち2つのウェルに、亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液が、それぞれ別々に保持されているカートリッジ。
- 請求項1〜4のいずれかに記載の方法に用いるための検査キットであって、以下の[1]から[2]の構成を含むキット。
[1]3以上のウェルを有するカートリッジであって、そのうち2つのウェルに、亜硝酸を含有する試薬溶液、および、クエン酸または酢酸を含有する試薬溶液が、それぞれ別々に保持されているカートリッジ。
[2]検体中の測定対象物質検出用の抗体を含む試薬。 - 測定対象物質がA群β溶血連鎖球菌である、請求項7に記載の検査キット。
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