JP2015531594A - 神経栄養因子を分泌する間葉系幹細胞の作製方法 - Google Patents
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Abstract
Description
a)前記混合細胞集団の細胞を、下記のパラメータ:
(i)CD44を所定の閾値よりも少なく発現する細胞、
(ii)CD73を所定の閾値よりも多く発現する細胞
の少なくとも1つについて分析すること、および
(b)前記パラメータの少なくとも1つについて陽性である細胞を選択し、それにより、神経栄養因子を分泌する前記細胞を選択すること
を含む方法が提供される。
a)前記混合細胞集団の細胞を、下記のパラメータ:
(i)CD44を所定の閾値よりも少なく発現する細胞、
(ii)CD73を所定の閾値よりも多く発現する細胞
の少なくとも1つについて分析すること、および
(b)前記パラメータの少なくとも1つについて陽性である細胞を選択し、それにより、神経栄養因子を分泌する前記MSCを選択すること
を含む方法が提供される。
(i)CD44を所定の閾値よりも少なく発現する細胞、
(ii)CD73を所定の閾値よりも多く発現する細胞。
神経栄養因子を分泌する間葉系幹細胞(MSC−NTF)の作製
非限定的な本実施例において、神経栄養因子を分泌する臨床規格の間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)のための製造プロセスは下記の主要な工程を伴う:
1.骨髄吸引(BMA)
2.単核細胞(MNC)の分離
3.多分化能の間葉系間質細胞(MSC)の濃縮および増殖
4.MSC−NTF細胞への分化の誘導
5.最終生成物の採取
6.生成物の包装およびラベル表示
7.移植のための生成物の使用許可
それぞれの処置用包装物が、神経栄養因子を分泌する新しく採取された自己の培養された間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)を臨床研究プロトコルにおける適切な投与経路のために規定された用量にしたがって含有する注入準備のできたシリンジ(1つまたは複数)からなる。
ALS患者のMSCの単離および増殖:ALS患者の骨髄から分離される単核細胞の収量が患者間で変化し、70×106細胞〜400×106細胞の範囲であった。ALS患者の単核細胞から濃縮されるMSCの数もまた、5×106個〜150×106個の範囲で一定しなかった。
神経栄養因子を分泌する間葉系幹細胞(MSC−NTF)のmiRNA分析
本研究の目的は、ミクロRNAに基づく(miRNA)フィンガープリンティングを行って、4つの独立する一致ドナーサンプルの骨髄由来MSCおよびMSC−NTF細胞の特徴づけを、miRNA発現プロフィルの間における相違点および類似点を特定すること、ならびに、これら2つの細胞タイプの間における相違点を明確にし、かつ、それらがどのように表されるか(すなわち、神経/星状膠細胞の分化経路、同様にまた、BDNF、GDNFおよびVEGFの発現およびシグナル伝達)を決定する主要なmiRNAを特定することによって行うことである。
19個がMSCに対してMSC−NTFにおいてアップレギュレーションされた。
22個がMSCに対してMSC−NTFにおいてダウンレギュレーションされた。
サンプル処理および品質管理:総RNAを4つの無関係なドナーサンプルの一致するMSCおよびMSC−NTFの対から単離した。RNA濃度を、サンプルの収量および純度の指標としてもまた求められる260/280nmおよび260/230nmにおける吸光度比(Abs)によって求めた。すべてのサンプルについて、RNAのさらなるQCを、RNA Integrity Number(RIN)を求めるために、Agilent 2200 TapeStationおよびScreenTape R6Kキットを使用して行った。
1.RNAを単色のCy3系試薬により標識すること。
2.標識されたRNAサンプルのマイクロアレイへのハイブリダイゼーション。
3.洗浄工程。
4.スライド走査、データ取り込みおよび特徴抽出(アレイのスポットをmiRNAのIDに対して一致させること)、ならびに、得られた画像およびデータのファイルに対する品質管理検査。
・アレイあたりの平均シグナル
・アレイあたりの平均バックグラウンド
・%存在(発現がそれぞれのアレイで検出されるmiRNAの%)
・十分に正規化されたサンプル集合のPCA(Jackson JE、1991)から得られる主成分1〜3。
検出コールの概要:個々のmiRNAについての検出コール(存在または非存在)をサンプル全体にわたって比較した。検出コールを、Agilent Feature Extraction(AFE)ソフトウエア(バージョン10.7.3.1)を使用して計算した。これらのコールがどのようにもたらされるかの詳細な記述が、Agilentのウエブサイトで、Feature Extraction Reference Guideにおいて入手可能である。
8個すべてのサンプルの全体にわたって検出されるmiRNAの完全なリストが本明細書中下記の表6に示される。
群間における差の仮説検証を、両側ANOVAを使用して行い、有意性をpFDR<0.05およびFC≧1.5において判定した。群間におけるDE miRNAの特定を本明細書中上記で記載されるように行った。
MSCに対するMSC−NTFの比較を行ったとき、19個がアップレギュレーションされた。
MSCに対するMSC−NTFの比較を行ったとき、22個がダウンレギュレーションされた。
DE主要miRNAの発現プロフィルの要約が図17および図18に示される。MSCに対してMSC−NTFにおいてアップレギュレーションされる19個の主要なmiRNAが図17に示され、MSCに対してMSC−NTFにおいてダウンレギュレーションされる22個の主要なmiRNAが図18に示される。
miRNA DEプロフィルによって影響される経路の概要をMSC−NTFについて導き出すために、選択されたDE kmiRs(商標)を、GeneGO MetaCoreTMおよび文献調査を使用して、高い信頼度で実験的に確認されたmRNA標的に対してマッピングした。
定量的PCRの妥当性確認研究
サンプル処理および品質管理:すべての総RNAサンプルをRNAの濃度、収量および品質について調べた。RNAのQCを、RINを求めるために、Agilent 2200 TapeStationおよびR6K Screen Tapes and ReagentsをSistemic’s SOP(SSOP27)に従って使用して行った。
hsa−miR−22−3p;miR−19b−3p;hsa−miR−503、hsa−miR−320b、hsa−miR−424−5p、hsa−miR−34a−5pおよびhsa−miR−132−3p、hsa−miR−320aおよびmiR−222−3p。
hsa−miR−22−3pおよびhsa−miR−19b−3pの発現レベルがMSCおよびMSC−NTFにおいて同一であることが見出された。図24Aは、hsa−miR−503−5pが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいてダウンレギュレーションされることを例示する。図24Bは、hsa−miR−320bが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいてダウンレギュレーションされることを例示する。図24Cは、hsa−miR−424−5pが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいてダウンレギュレーションされることを例示する。図24Dは、hsa−miR−34a−5pが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいてアップレギュレーションされることを例示する。図24Eは、hsa−miR−132−3pが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいてアップレギュレーションされることを例示する。図24Fは、hsa−miR−320aが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいて有意にダウンレギュレーションされないことを例示する。図24Gは、miR−222−3pが、MSCと比較して、MSC−NTFにおいて有意にダウンレギュレーションされないことを例示する。
神経栄養因子を分泌する間葉系幹細胞(MSC−NTF)のタンパク質分析
材料および方法
タンパク質分解:タンパク質を、9Mの尿素、400mMの重炭酸アンモニウムおよび10mMのDTT、ならびに、2サイクルの超音波処理において細胞ペレットから抽出した。それぞれのサンプルから得られる20μgのタンパク質を2.8mMのDTTにより還元し(60℃で30分間)、400mMの重炭酸アンモニウムにおいて8.8mMのヨードアセトアミドにより修飾し(暗所において室温で30分間)、1:50の酵素対基質比での修飾トリプシン(Promega)により、37℃で一晩、2Mの尿素、25mMの重炭酸アンモニウムにおいて消化した。さらに2回目のトリプシン処理を4時間行った。
3622個のタンパク質が、少なくとも2つのペプチドによる研究で特定された。高い類似性がサンプル間に存在するにもかかわらず、強度プロフィル間における相関により、同じ群のサンプルの間におけるより高い相関が示される。
神経栄養因子を分泌する自己の培養された間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)の移植の安全性、耐容性および治療効果を評価するための、筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者における第I/II相非盲検臨床研究
研究目的:神経栄養因子を分泌する自己の培養された間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)の注入の安全性、耐容性および治療効果(予備的効力)を、初期疾患段階および進行性疾患段階の筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者のための処置として評価すること。
2.進行性疾患状態のALS患者に対する合計で約60×106個の、神経栄養因子を分泌する自己の培養された間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)の脳脊髄液(CSF)内への1回だけのクモ膜下注入(IT)の安全性評価および耐容性。
・ALS機能評価尺度(ALS−FRS−S)における変化。
・筋チャートによる、また、必要な場合には握ることによる筋力判定(MVIC)における変化。
・努力肺活量における変化(FVC%)(進行性疾患状態群のみにおいて)。
・上肢および下肢のMRIによって推定される筋肉量における変化。
・上肢および下肢の周囲(cm)における変化。
・EMGパラメータにおける変化。
・気管切開または永続的な補助換気に至る必要性および至るまでの時間。
・全生存期間、これにより死亡までの時間を計算する。
A群−初期ALS疾患段階の6名の患者
B群−進行性ALS疾患の6名の患者
IM投与またはIT投与のどちらかによるMSC−NTF処置は、6回の毎月の追跡調査通院の期間中において安全であり、十分に許容された。処置に関連した著しい有害事象が、どちらの投与経路によってでも12名の処置された患者において何ら認められなかった。6名中2名の患者が紫斑および発熱をIM投与後に経験し、6名中3名の患者が、頭痛、頸部硬直および発熱をIT投与後に経験した。
神経栄養因子を分泌する自己の培養された間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)の移植の安全性、耐容性および治療効果を評価するための、筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者における第IIa相非盲検用量漸増臨床研究
研究目的:研究目的は、神経栄養因子を分泌する自己の培養された間葉系骨髄間質細胞(MSC−NTF)の漸増する用量のクモ膜下腔内および筋肉内に同時に施される注入の安全性、耐容性および治療効果(予備的効力)を、初期疾患段階の筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者のための処置として評価することである。
・ALS機能評価尺度(ALS−FRS−S)における変化。
・握ることによる筋力判定(MVIC)における変化。
・%努力肺活量(FVC)における変化。
・上肢のMRIによって推定される筋肉量における変化。
・上肢および下肢の周囲(cm)における変化。
・EMGパラメータにおける変化。
対象者の安全性が、下記の変数の測定値を使用して、MSC−NTFによる処置の後で評価されるであろう:
・理学的検査、
・生命徴候(HR、BP、RP、体温)、
・臨床検査室パラメータ:
・CBC−各種指数を伴うRBC、鑑別を伴うWBC、血小板数、ヘモグロビン(Hb)およびヘマトクリット(Ht)
・凝固機能−プロトロンビン時間(PT)、INR、部分トロンボプラスチン時間(PTT)、フィブリノーゲン
・電解質(ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、塩化物)、グルコース、総タンパク質、トリグリセリド(TG)、総コレステロール、HDL、LDLについての血液化学
・腎機能(尿素、クレアチニン)
・肝機能(総ビリルビン、AST(GOT)、ALT(GPT)、ALP)
・尿検査(ディップ・スティック試験)−比重、pH、グルコース、タンパク質、ケトン体、血液
・有害事象の記録、および
・併用薬
この研究で得られ、かつ、CRFにおいて記録されるすべてのデータが適宜、リストに記載され、また、記述的な群統計学(平均、標準偏差、最小値、最大値、有効事例数)とともに表にされるであろう。統計学的な処理および計算が3つの患者群について並行して行われるであろう。離散変数(例えば、性別、状態、有害事象の数(発生、重篤度、IPとの関連性)などについては、頻度、パーセントおよび分布がコンピューター計算されるであろう。3つの群の間における結果が比較され、統計学的分析によって分析されるであろう。
1工程プロトコルまたは2工程プロトコルを使用して得られるMSC−NTFの収量の比較
材料および方法
1工程プロトコル:実施例1に記載される通り。
図28A〜図28Cに例示されるように、1工程プロトコルは、3つの異なる患者サンプルにおいて示されるように、2工程プロトコルを使用して得られる収量と比較して、MSC−NTFの有意により高い収量であって、実施例1および実施例6において概略された用量で患者における臨床試験を支援することができる実行可能な生産的製造プロセスを確立することを可能にする収量をもたらした。
Claims (49)
- 神経栄養因子(NTF)を分泌する細胞を作製する方法であって、未分化間葉系幹細胞(MSC)の集団を、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)、血小板由来増殖因子(PDGF)、ヘレグリンおよびcAMPを含む分化用培地においてインキュベーションすることを含む方法。
- 前記分化用培地はホスホジエステラーゼ阻害剤を欠いている、請求項1に記載の方法。
- 前記分化用培地はトリヨードチロニンを欠いている、請求項1または2に記載の方法。
- 前記ホスホジエステラーゼ阻害剤はIBMXを含む、請求項2に記載の方法。
- 前記分化用培地は異種由来成分を欠いている、請求項1に記載の方法。
- 前記方法はさらに、未分化MSCの前記集団を前記インキュベーションの前に培養することを含み、ただし、前記培養することが、細胞分化を促進させない条件のもとで行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記培養することが、前記未分化MSCを播種した後の3日間にわたって行われる、請求項6に記載の方法。
- 前記播種することが約6000細胞/cm2〜8000細胞/cm2の密度で行われる、請求項7に記載の方法。
- 前記培養することが、血小板溶解物を含む培養培地において行われる、請求項6に記載の方法。
- 前記培養培地における前記血小板溶解物の割合が約10%である、請求項9に記載の方法。
- 前記培養培地はさらに、L−グルタミン、ピルビン酸ナトリウムおよびヘパリンを含む、請求項9に記載の方法。
- 前記細胞の表面におけるCD44および/またはCD73の発現を分析することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞の表面におけるCD105の発現を分析することをさらに含む、請求項12に記載の方法。
- 前記発現を未分化MSCの表面におけるCD44および/またはCD73の発現と比較することをさらに含む、請求項12または13に記載の方法。
- 請求項1〜14のいずれかに記載の方法に従って作製される、神経栄養因子を分泌する細胞の単離された集団。
- フローサイトメトリーによって検出される場合、CD44、CD73、CD90およびCD105の間葉系幹細胞マーカーのそれぞれを発現する、請求項15に記載の細胞の単離された集団。
- フローサイトメトリーによって検出される場合、CD3、CD14、CD19、CD34、CD45およびHLA−DRの表面マーカーのいずれをも発現しない、請求項15に記載の細胞の単離された集団。
- 遺伝子改変されない、請求項15に記載の細胞の単離された集団。
- 神経栄養因子の投与が有益である疾患の処置をその必要性のある対象において行う方法であって、請求項15に記載の単離された細胞集団の治療有効量を前記対象に投与し、それにより、前記疾患を処置することを含む方法。
- 前記細胞は、前記対象に対して自己であるMSCからエクスビボ分化させられる、請求項19に記載の方法。
- 前記細胞は、前記対象に対して同種異系であるMSCからエクスビボ分化させられる、請求項19に記載の方法。
- 前記細胞は、前記対象の骨髄に由来するMSCからエクスビボ分化させられる、請求項20に記載の方法。
- 前記疾患は神経変性疾患または免疫疾患である、請求項19に記載の方法。
- 前記神経変性疾患は、パーキンソン病、多系統萎縮症(MSA)、多発性硬化症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害、緑内障性神経障害、アルツハイマー病およびハンチントン病からなる群から選択される、請求項23に記載の方法。
- 前記神経変性疾患はALSである、請求項24に記載の方法。
- 前記免疫疾患は自己免疫疾患である、請求項23に記載の方法。
- 前記自己免疫疾患は重症筋無力症である、請求項26に記載の方法。
- 前記投与することが筋肉内および/またはクモ膜下腔内に行われる、請求項19に記載の方法。
- 前記投与することが筋肉内に行われるとき、70kgの対象に投与される細胞の総量が20×106細胞〜100×106細胞の間である、請求項19に記載の方法。
- 前記投与することがクモ膜下腔内に行われるとき、70kgの対象に投与されるMSC−NTFの総量が50×106細胞〜200×106細胞の間である、請求項19に記載の方法。
- 前記投与することが筋肉内およびクモ膜下腔内に行われるとき、70kgの対象に投与されるMSC−NTFの総量が20×106細胞〜500×106細胞の間である、請求項19に記載の方法。
- 神経栄養因子(NTF)を分泌する細胞をMSCの混合集団から選択する方法であって、
(a)前記混合細胞集団の細胞を、下記のパラメータ:
(i)CD44を所定の閾値よりも少なく発現する細胞、
(ii)CD73を所定の閾値よりも多く発現する細胞
の少なくとも1つについて分析すること、および
(b)前記パラメータの少なくとも1つについて陽性である細胞を選択し、それにより、神経栄養因子を分泌する前記細胞を選択すること
を含む方法。 - 前記細胞におけるCD105のレベルを分析すること、および、CD105を所定のレベルよりも少なく発現する細胞を選択することをさらに含む、請求項32に記載の方法。
- 前記NTFはグリア由来神経栄養因子(GDNF)および脳由来神経栄養因子(BDNF)を含む、請求項32に記載の方法。
- 未分化MSCの集団を、前記分析することに先立って、NTFを分泌するMSCを生じさせるように分化用培地においてインキュベーションすることをさらに含む、請求項32に記載の方法。
- 活性成分としての請求項15に記載の単離された細胞集団と、医薬的に許容され得るキャリアとを含む医薬組成物。
- 前記医薬的に許容され得るキャリアは前記組成物における細胞の数を少なくとも48時間にわたって維持する、請求項36に記載の医薬組成物。
- MSCからエクスビボ分化されており、かつ、神経栄養因子を分泌する、疾患の処置のために有用な細胞の適格性を調べる方法であって、miR−503−5p、miR−3659、miR−3529−3p、miR−320b、miR−424−5p、miR−320a、miR−222−3p、miR−3663−3p、miR−762、miR−4327、miR−3665、miR34a−5p、miR−4327、miRNA−3665およびmiR132−3pからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現について前記細胞を分析することを含み、ただし、非分化MSCと比較して、前記miR−3663−3p、miR−762、miR−4327、miR−3665、miR34a−5p、miR−4327、miRNA3665またはmiR132−3pの増大した発現、あるいは、非分化MSCと比較して、前記miR−503−5p、miR−3659、miR−3529−3p、miR−320b、miR−424−5p、miR−320aまたはmiR−222−3pの低下した発現により、疾患を処置するために有用である細胞が示される方法。
- 前記miRNAは、miR−503−5p、miR−320b、miR424−5p、miR−132−3pおよびmiR−34a−5pからなる群から選択される、請求項38に記載の方法。
- MSCからエクスビボ分化されており、かつ、神経栄養因子を分泌する、疾患の処置のために有用な細胞の適格性を調べる方法であって、イソブチリル−CoAデヒドロゲナーゼ、C−X−Cモチーフケモカイン6、ニューロモジュリン、増殖/分化因子15、ヒアルロナンシンターゼ1、インターロイキン−1ベータ、インターロイキン−8、インヒビンベータA鎖、インスリン受容体基質1、インテグリンアルファ−1、ラッカーゼドメイン含有タンパク質1、ラミニンサブユニットアルファ−4、ルミカン、コラゲナーゼ3、食道正常粘膜特異的遺伝子1タンパク質、プレB細胞白血病転写因子相互作用タンパク質1、プレクトストリン相同様ドメインファミリーAメンバー1、ホスファチジルイノシトール−3,4,5−三リン酸依存性Rac交換体1タンパク質、プロスタグランジンEシンターゼ、プロスタグランジンG/Hシンターゼ2、Ras関連タンパク質Rab−27B、Rho関連GTP結合タンパク質RhoB、シアル酸O−アセチルエステラーゼ、モノカルボン酸輸送体7、組織因子経路阻害剤2、膜貫通タンパク質65、Vam6/Vps39様タンパク質、3−オキソ−5−ベータ−ステロイド4−デヒドロゲナーゼ、プロピオニル−CoAカルボキシラーゼベータ鎖(ミトコンドリア)、インターフェロン調節因子2結合タンパク質様、組織アルファ−L−フコシダーゼ、アルド−ケトレダクターゼファミリー1メンバーC2、イノシトール−1,4,5−三リン酸受容体相互作用タンパク質、タンパク質KIAA1199、セレン結合タンパク質1、ホスホリパーゼD3、GTP:AMPホスホトランスフェラーゼ(ミトコンドリア)、タンパク質Wnt−5a;タンパク質Wnt、アルド−ケトレダクターゼファミリー1メンバーC3、ソーティングネキシン−9、ギャップジャンクションアルファ−1タンパク質、ピルビン酸カルボキシラーゼ(ミトコンドリア)、SH3/PXドメイン含有タンパク質2B、インテグリンアルファ−2、シトクロームP450 1B1、キチナーゼ−3様タンパク質1、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ、セプラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、アルド−ケトレダクターゼファミリー1メンバーC1、FERM、RhoGEFおよびプレクトストリンドメイン含有タンパク質1、プロリル4−ヒドロキシラーゼサブユニットアルファ−3、リボヌクレオシド二リン酸レダクターゼサブユニットM2B、コアヒストンマクロ−H2A.2;ヒストンH2A、コリン輸送体様タンパク質1およびニーマン・ピックC1タンパク質、リソソームアルファ−グルコシダーゼからなる群から選択される少なくとも1つのタンパク質の発現について前記細胞を分析することを含み、ただし、非分化MSCと比較して、前記少なくとも1つのタンパク質の発現における増大により、前記細胞が疾患の処置のために有用であることが示される方法。
- MSCからエクスビボ分化されており、かつ、神経栄養因子を分泌する、疾患の処置のために有用な細胞の適格性を調べる方法であって、タイトジャンクションタンパク質ZO−2、アルファ−1,3−マンノシル糖タンパク質2−ベータ−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、スムーセリン(smoothelin)、異所性P顆粒タンパク質5ホモログ、BRCA1会合ATM活性化因子1、WDリピート含有タンパク質36、SH3ドメイン結合タンパク質4、EHドメイン結合タンパク質1様タンパク質1、Ras GTPアーゼ活性化様タンパク質IQGAP3、リシルオキシダーゼホモログ2、トロポミオシン1(アルファ)、イソ型CRA_f、Gem会合タンパク質5、三者モチーフ含有タンパク質16、結合組織増殖因子、リンホカイン活性化キラーT細胞起源のプロテインキナーゼ、テトラトリコペプチドリピートタンパク質4、乳ガンの抗エストロゲン剤抵抗性タンパク質1、リボヌクレオシド二リン酸レダクターゼサブユニットM2、ユビキチン結合酵素E2C、好中球デフェンシン1、Cdc42エフェクタータンパク質3、コンデンシン複合体サブユニット2、Igカッパ鎖C領域、コンデンシン複合体サブユニット3、シンコイリン(syncoilin)、染色体構造維持タンパク質2、コンデンシン複合体サブユニット1、インターアルファ−トリプシン阻害剤重鎖H4、チミジル酸シンターゼ、セロトランスフェリン、妊娠領域タンパク質、DNA複製ライセンス化因子MCM7、ヘモペキシン、DNAミスマッチ修復タンパク質Msh6、アンキリンリピートドメイン含有タンパク質13A、ホスデューシン様タンパク質3、1−ホスファチジルイノシトール−4,5−二リン酸ホスホジエステラーゼベータ−3、補体C3、DNA複製ライセンス化因子MCM3、CD97抗原、CD97抗原サブユニットアルファ、DNA複製ライセンス化因子MCM6、DNA複製ライセンス化因子MCM4、Disabledホモログ2、タンパク質KIAA0664、DNA複製ライセンス化因子MCM2、タンパク質−リシン6−オキシダーゼ、リボヌクレオシド二リン酸レダクターゼラージサブユニット、メラノーマ関連抗原D2、Igガンマ−1鎖C領域、ヘパラナーゼ、インポーチンサブユニットアルファ−2、アスパラギンシンセターゼ[グルタミン加水分解性]、アルファ−2−マクログロブリン、コラーゲンアルファ−1(I)鎖、コラーゲンアルファ−1(V)鎖、DnaJホモログサブファミリーBメンバー4、トロンボスポンジン−1、血清アルブミンおよびコラーゲンアルファ−2(I)鎖からなる群から選択される少なくとも1つのタンパク質の発現について前記細胞を分析することを含み、ただし、非分化細胞と比較して、前記少なくとも1つのタンパク質の発現における低下により、前記細胞が疾患の処置のために有用であることが示される方法。
- 神経栄養因子を分泌する単離された細胞集団であって、前記細胞が、フローサイトメトリーによって検出される場合、CD44、CD73、CD90およびCD105の間葉系幹細胞マーカーのそれぞれを発現し、かつ、CD3、CD14、CD19、CD34、CD45およびHLA−DRの表面マーカーのいずれをも発現しない単離された細胞集団。
- 前記神経栄養因子は、BDNF、GDNF、VEGFおよびHGFからなる群から選択される、請求項42に記載の単離された細胞集団。
- 前記神経栄養因子は、BDNF、GDNF、VEGFおよびHGFを含む、請求項42に記載の単離された細胞集団。
- 前記細胞は遺伝子改変されない、請求項42〜44のいずれかに記載の単離された細胞集団。
- 前記細胞は、非分化MSCと比較して、miR34a−5p、miR−222−3p、miR762、miRNA3663−3pまたはmiR132−3pからなる群から選択されるmiRNAの増大した発現を示す、請求項42〜45のいずれかに記載の単離された細胞集団。
- 前記細胞は、非分化MSCと比較して、miR−503−5p、miR−320b、miR−424−5p、miR−320aまたはmiR−222−3pからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの減少した発現を示す、請求項42〜46のいずれかに記載の単離された細胞集団。
- 前記細胞は、非分化MSCと比較して、イソブチリル−CoAデヒドロゲナーゼ、C−X−Cモチーフケモカイン6、ニューロモジュリン、増殖/分化因子15、ヒアルロナンシンターゼ1、インターロイキン−1ベータ、インターロイキン−8、インヒビンベータA鎖、インスリン受容体基質1、インテグリンアルファ−1、ラッカーゼドメイン含有タンパク質1、ラミニンサブユニットアルファ−4、ルミカン、コラゲナーゼ3、食道正常粘膜特異的遺伝子1タンパク質、プレB細胞白血病転写因子相互作用タンパク質1、プレクトストリン相同様ドメインファミリーAメンバー1、ホスファチジルイノシトール−3,4,5−三リン酸依存性Rac交換体1タンパク質、プロスタグランジンEシンターゼ、プロスタグランジンG/Hシンターゼ2、Ras関連タンパク質Rab−27B、Rho関連GTP結合タンパク質RhoB、シアル酸O−アセチルエステラーゼ、モノカルボン酸輸送体7、組織因子経路阻害剤2、膜貫通タンパク質65、Vam6/Vps39様タンパク質、3−オキソ−5−ベータ−ステロイド4−デヒドロゲナーゼ、プロピオニル−CoAカルボキシラーゼベータ鎖(ミトコンドリア)、インターフェロン調節因子2結合タンパク質様、組織アルファ−L−フコシダーゼ、アルド−ケトレダクターゼファミリー1メンバーC2、イノシトール−1,4,5−三リン酸受容体相互作用タンパク質、タンパク質KIAA1199、セレン結合タンパク質1、ホスホリパーゼD3、GTP:AMPホスホトランスフェラーゼ(ミトコンドリア)、タンパク質Wnt−5a;タンパク質Wnt、アルド−ケトレダクターゼファミリー1メンバーC3、ソーティングネキシン−9、ギャップジャンクションアルファ−1タンパク質、ピルビン酸カルボキシラーゼ(ミトコンドリア)、SH3/PXドメイン含有タンパク質2B、インテグリンアルファ−2、シトクロームP450 1B1、キチナーゼ−3様タンパク質1、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ、セプラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、アルド−ケトレダクターゼファミリー1メンバーC1、FERM、RhoGEFおよびプレクトストリンドメイン含有タンパク質1、プロリル4−ヒドロキシラーゼサブユニットアルファ−3、リボヌクレオシド二リン酸レダクターゼサブユニットM2B、コアヒストンマクロ−H2A.2;ヒストンH2A、コリン輸送体様タンパク質1およびニーマン・ピックC1タンパク質、リソソームアルファ−グルコシダーゼの1種以上の増大した発現を示す、請求項42〜47のいずれかに記載の単離された細胞集団。
- 前記細胞は、非分化MSCと比較して、タイトジャンクションタンパク質ZO−2、アルファ−1,3−マンノシル糖タンパク質2−ベータ−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、スムーセリン(smoothelin)、異所性P顆粒タンパク質5ホモログ、BRCA1会合ATM活性化因子1、WDリピート含有タンパク質36、SH3ドメイン結合タンパク質4、EHドメイン結合タンパク質1様タンパク質1、Ras GTPアーゼ活性化様タンパク質IQGAP3、リシルオキシダーゼホモログ2、トロポミオシン1(アルファ)、イソ型CRA_f、Gem会合タンパク質5、三者モチーフ含有タンパク質16、結合組織増殖因子、リンホカイン活性化キラーT細胞起源のプロテインキナーゼ、テトラトリコペプチドリピートタンパク質4、乳ガンの抗エストロゲン剤抵抗性タンパク質1、リボヌクレオシド二リン酸レダクターゼサブユニットM2、ユビキチン結合酵素E2C、好中球デフェンシン1、Cdc42エフェクタータンパク質3、コンデンシン複合体サブユニット2、Igカッパ鎖C領域、コンデンシン複合体サブユニット3、シンコイリン(syncoilin)、染色体構造維持タンパク質2、コンデンシン複合体サブユニット1、インターアルファ−トリプシン阻害剤重鎖H4、チミジル酸シンターゼ、セロトランスフェリン、妊娠領域タンパク質、DNA複製ライセンス化因子MCM7、ヘモペキシン、DNAミスマッチ修復タンパク質Msh6、アンキリンリピートドメイン含有タンパク質13A、ホスデューシン様タンパク質3、1−ホスファチジルイノシトール−4,5−二リン酸ホスホジエステラーゼベータ−3、補体C3、DNA複製ライセンス化因子MCM3、CD97抗原、CD97抗原サブユニットアルファ、DNA複製ライセンス化因子MCM6、DNA複製ライセンス化因子MCM4、Disabledホモログ2、タンパク質KIAA0664、DNA複製ライセンス化因子MCM2、タンパク質−リシン6−オキシダーゼ、リボヌクレオシド二リン酸レダクターゼラージサブユニット、メラノーマ関連抗原D2、Igガンマ−1鎖C領域、ヘパラナーゼ、インポーチンサブユニットアルファ−2、アスパラギンシンセターゼ[グルタミン加水分解性]、アルファ−2−マクログロブリン、コラーゲンアルファ−1(I)鎖、コラーゲンアルファ−1(V)鎖、DnaJホモログサブファミリーBメンバー4、トロンボスポンジン−1、血清アルブミンおよびコラーゲンアルファ−2(I)鎖の1種以上の減少した発現を示す、請求項42〜48のいずれかに記載の単離された細胞集団。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2020184729A1 (ja) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 北海道公立大学法人札幌医科大学 | 筋萎縮性側索硬化症の治療用医薬組成物 |
WO2020222472A1 (ko) * | 2019-05-02 | 2020-11-05 | 에스씨엠생명과학 주식회사 | hPL 함유 배지에서 배양된 중간엽 줄기세포의 배양액을 포함하는 화장료 조성물 |
WO2022210514A1 (ja) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | 株式会社カネカ | トリプシン阻害方法、それを用いた細胞製剤の製造方法 |
Families Citing this family (26)
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US20170247660A1 (en) * | 2014-09-18 | 2017-08-31 | National Health Research Institutes | Progenitor cells, method for preparation thereof and uses thereof |
DK3286300T3 (da) | 2015-04-24 | 2021-01-18 | Univ Copenhagen | Isolering af bona fide pankreatiske stamceller |
CN105169486B (zh) * | 2015-10-11 | 2018-04-03 | 温州医科大学 | 一种结合去细胞神经应用的神经修复材料 |
EP3455367A1 (en) | 2016-05-09 | 2019-03-20 | Sistemic Scotland Ltd | Functional prediction of cellular functions by means of microrna expression profiling in mesenchymal stem cells |
GB2605113A (en) * | 2016-05-09 | 2022-09-21 | Sistemic Scotland Ltd | Functional prediction |
GB2550136A (en) * | 2016-05-09 | 2017-11-15 | Sistemic Scotland Ltd | Functional prediction |
JP2019527218A (ja) | 2016-07-18 | 2019-09-26 | ブレインストーム セル セラペウティクス リミテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)を治療する方法 |
BR112019004785A2 (pt) * | 2016-09-12 | 2019-06-04 | Genethon | variantes de alfa-glicosidase ácida e usos das mesmas |
US20200246386A1 (en) * | 2017-04-24 | 2020-08-06 | Pluristem Ltd. | Methods and compositions for treating neurological disorders |
US20190054144A1 (en) * | 2017-08-15 | 2019-02-21 | Meridigen Biotech Co., Ltd. | Pharmaceutical composition for treating ischemic stroke and method thereof |
US11286462B2 (en) | 2017-09-14 | 2022-03-29 | University Of Kansas | Materials and methods for generating therapeutic mesenchymal stem cells |
SG11202001909TA (en) * | 2017-09-15 | 2020-04-29 | Cynata Therapeutics Ltd | Method for treating allergic airways disease (aad)/ asthma |
CA2983845C (en) | 2017-10-26 | 2024-01-30 | University Of Copenhagen | Generation of glucose-responsive beta cells |
IL277447B2 (en) * | 2018-04-10 | 2024-04-01 | Brainstorm Cell Therapeutics Ltd | Cell-adapted exosomes and their uses |
US20200000886A1 (en) * | 2018-06-29 | 2020-01-02 | University Of Washington | Engineering the rrm2 subunit of ribonucleotide reductase to resist degradation |
CN111484978A (zh) * | 2019-01-28 | 2020-08-04 | 深圳市第二人民医院 | miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞、其治疗制剂、制备方法和应用 |
EP3985104A4 (en) * | 2019-06-11 | 2023-04-12 | Kyoto University | PROCEDURE FOR GENERATING A KIDNEY INTERSTITIAL CELL |
JP2023517230A (ja) * | 2020-03-11 | 2023-04-24 | リモーター セラピューティクス インコーポレイテッド | 中枢神経系全体にわたってタンパク質を散在させるための方法および材料 |
JP2023550542A (ja) * | 2020-10-26 | 2023-12-01 | ハダシット メディカル リサーチ サービシズ アンド ディベロップメント リミテッド | 間葉系幹細胞およびそれらの培養 |
CN113367123B (zh) * | 2021-06-07 | 2022-05-13 | 南京三生生物技术股份有限公司 | 一种细胞冻存方法 |
CN113789333B (zh) * | 2021-09-07 | 2023-07-14 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | Chi3l1在调控hUC-MSCs抑制Th17分化介导的免疫调节作用上的应用 |
WO2023219655A1 (en) * | 2022-05-13 | 2023-11-16 | University Of Utah Research Foundation | Gja1-20k to limited cardiac arrhythmias |
CN116410921B (zh) * | 2023-02-09 | 2024-01-23 | 北京益华生物科技有限公司 | 一种人源脐带间充质干细胞诱导培养基、诱导方法及应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003144155A (ja) * | 2001-08-30 | 2003-05-20 | Yokohama Tlo Co Ltd | Notch遺伝子の導入を用いて骨髄間質細胞を神経細胞及び骨格筋細胞に分化・誘導する方法 |
WO2009144718A1 (en) * | 2008-05-28 | 2009-12-03 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Mesenchymal stem cells for the treatment of cns diseases |
Family Cites Families (36)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154600B (nl) | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
NL154599B (nl) | 1970-12-28 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking. |
US3901654A (en) | 1971-06-21 | 1975-08-26 | Biological Developments | Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors |
US3853987A (en) | 1971-09-01 | 1974-12-10 | W Dreyer | Immunological reagent and radioimmuno assay |
US3867517A (en) | 1971-12-21 | 1975-02-18 | Abbott Lab | Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies |
NL171930C (nl) | 1972-05-11 | 1983-06-01 | Akzo Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van haptenen, alsmede testverpakkingen. |
US3850578A (en) | 1973-03-12 | 1974-11-26 | H Mcconnell | Process for assaying for biologically active molecules |
US3935074A (en) | 1973-12-17 | 1976-01-27 | Syva Company | Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4034074A (en) | 1974-09-19 | 1977-07-05 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG) |
US3984533A (en) | 1975-11-13 | 1976-10-05 | General Electric Company | Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction |
US4098876A (en) | 1976-10-26 | 1978-07-04 | Corning Glass Works | Reverse sandwich immunoassay |
US4879219A (en) | 1980-09-19 | 1989-11-07 | General Hospital Corporation | Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies |
US5011771A (en) | 1984-04-12 | 1991-04-30 | The General Hospital Corporation | Multiepitopic immunometric assay |
US4666828A (en) | 1984-08-15 | 1987-05-19 | The General Hospital Corporation | Test for Huntington's disease |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4801531A (en) | 1985-04-17 | 1989-01-31 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis |
US5192553A (en) | 1987-11-12 | 1993-03-09 | Biocyte Corporation | Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use |
US5004681B1 (en) | 1987-11-12 | 2000-04-11 | Biocyte Corp | Preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood |
US5272057A (en) | 1988-10-14 | 1993-12-21 | Georgetown University | Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase |
US5192659A (en) | 1989-08-25 | 1993-03-09 | Genetype Ag | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
US5281521A (en) | 1992-07-20 | 1994-01-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modified avidin-biotin technique |
US5656498A (en) | 1994-02-22 | 1997-08-12 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Freeze-dried blood cells, stem cells and platelets, and manufacturing method for the same |
US5955257A (en) | 1997-10-21 | 1999-09-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Infusible grade short-term cell storage medium for mononuclear cells |
US7682825B2 (en) * | 2002-02-06 | 2010-03-23 | Sanbio, Inc. | Differentiation of bone marrow stromal cells to neural cells or skeletal muscle cells by introduction of notch gene |
US20030215942A1 (en) | 2002-02-14 | 2003-11-20 | Stemcyte, Inc. | Undesignated allogeneic stem cell bank |
IL152905A0 (en) | 2002-11-17 | 2003-06-24 | Univ Ramot | Dopaminergic markers induction in neuronal-like cells isolated from adult human bone marrow stromal cells: implications for novel gene therapy strategy for parkinsons disease |
US20050265983A1 (en) | 2002-11-17 | 2005-12-01 | Eldad Melamed | Methods, nucleic acid constructs and cells for treating neurodegenerative disorders |
ES2524996T3 (es) | 2005-06-16 | 2014-12-16 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Células aisladas y poblaciones que comprenden a las mismas para el tratamiento de enfermedades del SNC |
US20100021434A1 (en) | 2005-12-08 | 2010-01-28 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Isolated Oligodendrocyte-Like Cells and Populations Comprising Same for the Treatment of CNS Diseases |
US20100184033A1 (en) | 2008-07-16 | 2010-07-22 | West Michael D | Methods to accelerate the isolation of novel cell strains from pluripotent stem cells and cells obtained thereby |
CA2781149A1 (en) | 2009-11-17 | 2011-05-26 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods of producing human rpe cells and pharmaceutical preparations of human rpe cells |
DE102011121982B3 (de) | 2011-12-22 | 2013-04-18 | Dietmar Hopp Stiftung GmbH | Mesenchymale Stammzellen aus Fettgewebe (ADSC) zur Rekonstruktion von Haut und Weichteilgewebe |
DK2880151T3 (da) | 2012-08-06 | 2020-08-17 | Brainstorm Cell Therapeutics Ltd | Fremgangsmåder til frembringelse af mesenkymale stemceller, som udskiller neurotrofiske faktorer |
JP6628253B2 (ja) | 2014-02-11 | 2020-01-08 | ブレインストーム セル セラペウティクス リミテッド | 細胞の適性を判定する方法 |
-
2013
- 2013-08-04 DK DK13767124.4T patent/DK2880151T3/da active
- 2013-08-04 EP EP13767124.4A patent/EP2880151B1/en active Active
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- 2013-08-04 BR BR112015001435-6A patent/BR112015001435B1/pt active IP Right Grant
- 2013-08-04 CA CA2877223A patent/CA2877223C/en active Active
- 2013-08-04 US US14/419,668 patent/US10046010B2/en active Active
- 2013-08-04 ES ES13767124T patent/ES2813407T3/es active Active
-
2015
- 2015-10-13 HK HK15109965.5A patent/HK1209453A1/xx unknown
-
2018
- 2018-04-20 JP JP2018081151A patent/JP6753887B2/ja active Active
- 2018-06-27 US US16/019,565 patent/US20180296607A1/en not_active Abandoned
- 2018-08-29 IL IL26144118A patent/IL261441B/en active IP Right Grant
-
2021
- 2021-07-14 US US17/375,032 patent/US20210338739A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003144155A (ja) * | 2001-08-30 | 2003-05-20 | Yokohama Tlo Co Ltd | Notch遺伝子の導入を用いて骨髄間質細胞を神経細胞及び骨格筋細胞に分化・誘導する方法 |
WO2009144718A1 (en) * | 2008-05-28 | 2009-12-03 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Mesenchymal stem cells for the treatment of cns diseases |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, vol. 316, no. 3, JPN5015009092, 9 April 2004 (2004-04-09), pages 753 - 754, ISSN: 0003714153 * |
GLIA, vol. 58, JPN6017050942, 2010, pages 1118 - 1132, ISSN: 0003714158 * |
INTERNATIONAL JOURNAL OF NEUROSCIENCE, vol. 122, no. 5, JPN5015009094, 1 May 2012 (2012-05-01), pages 237 - 247, ISSN: 0003714156 * |
JOURNAL OF NEUROPATHOLOGY AND EXPERIMENTAL NEUROLOGY, vol. 69, no. 9, JPN6017018099, September 2010 (2010-09-01), pages 973 - 985, ISSN: 0003714157 * |
MOLECULAR THERAPY, vol. 9, no. 2, JPN5015009093, 1 February 2004 (2004-02-01), pages 189 - 197, ISSN: 0003714154 * |
STEM CELLS AND DEVELOPMENT, vol. 20, no. 11, JPN6017018098, December 2011 (2011-12-01), pages 53 - 66, ISSN: 0003714155 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020184729A1 (ja) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 北海道公立大学法人札幌医科大学 | 筋萎縮性側索硬化症の治療用医薬組成物 |
WO2020222472A1 (ko) * | 2019-05-02 | 2020-11-05 | 에스씨엠생명과학 주식회사 | hPL 함유 배지에서 배양된 중간엽 줄기세포의 배양액을 포함하는 화장료 조성물 |
KR20200127455A (ko) * | 2019-05-02 | 2020-11-11 | 에스씨엠생명과학 주식회사 | hPL 함유 배지에서 배양된 중간엽 줄기세포의 배양액을 포함하는 화장료 조성물 |
KR102323056B1 (ko) * | 2019-05-02 | 2021-11-09 | 에스씨엠생명과학 주식회사 | hPL 함유 배지에서 배양된 중간엽 줄기세포의 배양액을 포함하는 화장료 조성물 |
CN113728094A (zh) * | 2019-05-02 | 2021-11-30 | Scm生命科学有限公司 | 包含在含有人血小板裂解物的培养基中培养的间充质干细胞培养液的化妆品组合物 |
WO2022210514A1 (ja) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | 株式会社カネカ | トリプシン阻害方法、それを用いた細胞製剤の製造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014024183A1 (en) | 2014-02-13 |
US10046010B2 (en) | 2018-08-14 |
DK2880151T3 (da) | 2020-08-17 |
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IL261441B (en) | 2019-10-31 |
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US20180296607A1 (en) | 2018-10-18 |
CA2877223A1 (en) | 2014-02-13 |
BR112015001435B1 (pt) | 2022-01-18 |
EP2880151B1 (en) | 2020-06-03 |
CA2877223C (en) | 2019-08-27 |
EP2880151A1 (en) | 2015-06-10 |
JP6753887B2 (ja) | 2020-09-09 |
US20210338739A1 (en) | 2021-11-04 |
ES2813407T3 (es) | 2021-03-23 |
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