JP2015508653A - ウシ及びブタ精原幹細胞の培養のためのフィーダーフリー法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、精原幹細胞(SSC)を濃縮する方法を特徴とする。本明細書において、長期生存によるフィーダーフリープロトコールにおいてSSCを培養して、細胞の集団を濃縮し得ることが初めて示された。本発明の一実施形態において、SSCは、ウシから得られる。幹細胞濃縮は、生物における細胞の再増殖のための幹細胞に基づく療法、並びに幹細胞の維持及び増殖の制御の原因である成長因子を同定するための実験室における研究並びに人工授精を包含する医学的処置、診断及び研究の分野における様々な目的に有用である。
本発明は、SSCのin vitro維持及び増殖のためのフィーダーフリー培養系を特徴とする。これは、SSCがその構成成分であるウシ未分化精原細胞を、フィーダー細胞により事前調整されたがフィーダー細胞を含有していない培地において、in vitroで維持及び増殖させることができることが本明細書において初めて示されたからである。本発明によって、ウシSSCのin vitro培養のための、最小規定条件を有する培養系が確立され、この系は、規定の方法でSSCの生物学を調査する能力と共に、SSCの維持及び増殖に必要な個々の因子を同定する能力をもたらす。好ましい一実施形態において、フィーダーフリー培養方法は、in vitro受精及び商業的なウシ生産の他の態様における使用のための、フィーダー細胞の混入がないSSC細胞の集団の生成を可能にする。
本発明の一態様において、1個以上のSSCをレシピエント精巣に移植することができる。移植方法は、本技術分野において一般に公知のものであり、本明細書においてごく詳細には議論しない。精巣に関与する一般的な細胞移植方法に関しては、Kanatsu-Shinoharaら(PNAS、99:1383〜1388(2002))、Brinster(I)(米国特許第6,215,039号明細書)及びBrinster(II)(米国特許第5,858,354号明細書)を参照されたい。これら全ては、参照によりその全内容を本明細書に援用する。Brinster(I)及び(II)は、一部には、ドナーから免疫学的に寛容性のあるマウス又は他の適合性レシピエントに移植されたSSCが、レシピエントにおいて複製し、維持され得ることを実証する。フィーダー系を移植するためにはフィーダー細胞を除去する必要があるという点において、フィーダーフリー系は、伝統的なフィーダー系に優る大きな進歩である。フィーダー細胞フリーである本出願人の培養は、このような骨の折れる困難なステップを必要としない。
現在、男性における不妊症の具体的な原因は、症例の40〜60%において未解明のままである。Bhasinら、J Clin Endocrinol Metab 79、1525〜9(1994);Sadeghi-Nejadら、Urol J 4、192〜206(2007);及びMatzukら、Nat Med 14、1197〜213(2008)を参照されたい。総計で雄集団の>5%が不妊であり、全雄の>1%が、無***症と呼ばれる***産生における重篤な欠損を患う。Bhasinら、J Clin Endocrinol Metab 79、1525〜9(1994);Sadeghi-Nejadら、Urol J 4、192〜206(2007);Bartholdら、J Urol 170、2396〜401(2003);及びBleyer、W. A. CA Cancer J Clin 40、355〜67(1990)を参照されたい。本質的に、無***症は、自然交配による繁殖を不可能にするため、ヒト集団においてなぜこの疾患がここまで蔓延し続けているかは謎に思われる。斯かる疫学的傾向は、***産生(即ち、***形成)過程を妨害する強力な環境因子、又はあるヒトを不稔にする一方他のヒトは健康なままである、一生涯の間に生じ得る相当数のde novo突然変異の存在を明らかに指摘する。Bhasinら、J Clin Endocrinol Metab 79、1525〜9(1994);Bleyer、W. A.、CA Cancer J Clin 40、355〜67(1990);Reijo、R.ら、Nat Genet. 10、383〜93(1995);Oatesら、Hum Reprod 17、2813〜24(2002)を参照されたい。実際に、斯かるde novo突然変異は、遺伝的レベルで既に規定された数種類の雄性要因の不妊症の原因となり、癌化学療法によりその小児期において不妊のままにされる雄の数が増加しつつあるため、これは数多くの症例において真実である。Sadeghi-Nejadら、Urol J 4、192〜206(2007);Reijoら、Nat Genet. 10、383〜93(1995);Bleyerら、CA Cancer J Clin 40、355〜67(1990);Oatesら、Hum Reprod 17、2813〜24(2002);Bhasin、S.、J Clin Endocrinol Metab 92、1995〜2004(2007);及びGeens、M.ら、Hum Reprod Update 14、121〜30(2008)を参照されたい。多くの無***症の不妊男性に対する新たな希望として、生殖生物学及び遺伝的研究の間の強固なリンクを顕在化させた幹細胞生物学における先駆的ブレイクスルーは、マウス精巣が、単離及び別のマウスの精巣への移植後に完全に機能的な***を生成することができる精原幹細胞を含有していたという発見であった。Brinster & Zimmermann、Proc Natl Acad Sci USA 91、11298〜302(1994)を参照されたい。ラットにおいて同様の実験がその直ぐ後に行われ、次に、単離されたマウス精原細胞は、数か月の培養の後にその再生潜在力を維持することが示された。Clouthierら、Nature 381、418〜21(1996);Naganoら、Tissue Cell 30、389〜97(1998)を参照されたい。in vitroにおける齧歯類精原系列の長期増殖を支持する新たな培養培地が処方され、現在科学者たちは、精巣生検由来のヒト精原系列の培養に必要な条件の確立の一歩手前にある。Kanatsu-Shinoharaら、Biol Reprod 69、612〜6(2003);Hamra、F. K.ら、Proc Natl Acad Sci USA 102、17430〜5(2005);Conrad、S.ら、Nature (2008);及びKossack、N.ら、「Isolation and Characterization of Pluripotent Human Spermatogonial Stem Cell-Derived Cells.」Stem Cells(2008)を参照されたい。表面上は、精原系列を用いて自分自身のドナーの精巣に戻し移植することにより機能的な***を産生させる前に、培養において精原系列を増殖させる能力は、多くの現存する種類の男性不妊症を治癒するための明確な戦略を提示する。しかし、大部分は生殖系列幹細胞の多分化能性質のために、このようなブレイクスルーが、実務作業に置き換えられる前には、先ず、斯かる細胞療法の前臨床的詳細を、医学的関連性のあるより進歩した非ヒトレシピエントにおいて厳密に評価することが欠かせない。Geens、M.ら、Hum Reprod Update 14、121〜30(2008);Conrad、S.ら、「Generation of pluripotent stem cells from adult human testis.」Nature(2008);Kossack、N.ら、「Isolation and Characterization of Pluripotent Human Spermatogonial Stem Cell-Derived Cells.」Stem Cells(2008);Hermann、B. P.ら、Stem Cells 25、2330〜8(2007);及びZhangら、J Cell Physiol 211、149〜58(2007)を参照されたい。
本発明は、少なくとも1のSSCの維持又は増殖のためのフィーダーフリー培養系を含む様々なキットを包含する。例示的なキットを後述するが、本開示を踏まえると、他の有用なキットの内容は当業者に明らかである。これらキットのそれぞれは、本発明の範囲内に包含されている。
1. コラゲナーゼ/DNaseインキュベーション溶液(1〜5mg/mlコラゲナーゼ、Worthington Biological及び5〜10mg/ml DNase、Sigma-Aldrich)を調製する。
1. Life Technologies、Inc.、米国92008カリフォルニア州カールスバッドから市販されているダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)成長培地においてBEF及びBSCフィーダーを維持し、80%コンフルエンスにおいて1:2〜1:5で継代培養する。
1. 35日齢ウシ胚をPBS中に回収する。
1. 精原細胞単離のための分別的プレーティング(differential plating)手順において、ゼラチンでコーティングした培養ウェルに接着するウシ精巣細胞を、精原細胞を除去した後に、DMEM成長培地において維持する。
細胞株BEF1及びBSC1の寄託は、本願の発明者によって維持されており、また本願の出願日以前から維持されていた。この寄託物へのアクセスは、本願の係属中に、要請に応じて、特許商標庁長官及び長官によってその権限があると決定された人物によって利用することができる。本願におけるいずれかの請求項の容認後に、本出願人は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関(American Type Culture Collection)(ATCC)、20110バージニア州マナサスへの各細胞株の寄託を制限なしで公表する。ATCCに寄託された細胞株は、本発明者によって維持される上述の同一寄託物から採取される。さらに、本出願人は、寄託時の試料の生存徴候の提示を包含する、米国特許施行規則第1.801〜1.809条(37 C.F.R.§1.801〜1.809)のあらゆる要件を満たす。細胞株BEF1及びBSC1のこの寄託物は、公的な寄託機関であるATCC寄託機関において、最新の要求後30年間若しくは5年間の期間又は特許の法的強制力のある存続期間のいずれか長い方の期間に亘り維持され、該期間中に生存不能になった場合は交換される。本出願人は、ATCCからの寄託材料の入手可能性に制限を課さない。しかし、本出願人は、生物材料の移動又はその商業目的の輸送に法律によって課されたいかなる制限も撤回する権限がない。
本発明の様々な態様をいかに示す。
1.
少なくとも1の精原幹細胞(SSC)を含有する精巣由来細胞の集団からSSCを濃縮する方法であって、
a)フィーダー細胞株によって事前調整された培地を用意するステップと、
b)SSC細胞の維持及び濃縮に適した条件下で、前記精巣由来細胞の集団を前記事前調整された培地と接触させるステップと
を含む方法。
2.
前記事前調整された培地が、前記培地を、ウシ胚性線維芽細胞及び/又はウシ精巣から単離されたウシ体細胞の系統由来の細胞又はその一部と接触させることにより作製される、上記1に記載の方法。
3.
前記細胞系統が、細胞株BEF1及び細胞株BSC1からなる群から選択される、上記2に記載の方法。
4.
事前調整が、a)培地を、ウシ胚性線維芽細胞及び/又はウシ精巣体細胞からなる群から選択されるフィーダー細胞と接触させるステップと、b)前記培地において前記細胞を増殖させるステップと、その後に、c)前記フィーダー細胞を除去するステップとを包含する、上記2に記載の方法。
5.
前記フィーダー細胞が、細胞株BEF1及び/又はBSC1に由来する、上記4に記載の方法。
6.
前記細胞が、ウシ細胞である、上記1に記載の方法。
7.
ATCC受託番号____として寄託された、ウシ精原幹細胞の培養のための培地を事前調整するためのウシ胚性線維芽細胞株BEF1。
8.
ATCC受託番号____として寄託された、ウシ精原幹細胞の培養のための培地を事前調整するためのウシ体細胞株BSC1。
9.
a.対象から精巣組織を得るステップと、
b.前記組織をコラゲナーゼとインキュベートして、精原細胞及びセルトリ細胞を分離するステップと、
c.他の細胞型から細管を分離するステップと、
d.細管をトリプシンで消化して、精原細胞及びセルトリ細胞の懸濁液を得るステップと、
e.前記懸濁液から精原細胞及びセルトリ細胞を分離するステップと
を含む、ウシ精巣組織から精原幹細胞を単離する方法。
10.
他の細胞型から細管を分離する前記ステップが、重力沈降によるものである、上記9に記載の方法。
11.
前記懸濁液から精原細胞及びセルトリ細胞を分離する前記ステップが、遠心分離と、セルトリ細胞が優先的に結合する培養皿におけるインキュベーションとによるものである、上記9に記載の方法。
12.
前記事前調整された培地が、DMEM/F12培地である、上記1に記載の方法。
13.
前記培地に、血清代替物サプリメントが補充されている、上記1に記載の方法。
14.
前記血清代替物サプリメントが、StemProである、上記12に記載の方法。
15.
前記培養が、プラスチック培養ウェルにおいて維持される、上記1に記載の方法。
16.
前記プラスチック培養ウェルが、精原細胞が付着して長期培養において維持されるようMatrigelでコーティングされている、上記14に記載の方法。
17.
前記培地に、GDNF、FGF2、SDF-1及びCSF-1が挙げられるがこれらに限定されない成長因子が補充されている、上記1に記載の方法。
18.
前記細胞が、ウシ細胞である、上記9に記載の方法。
19.
a.ATCC受託番号____として寄託された細胞株BEF1及びATCC受託番号____として寄託された細胞株BSC1を含む群から選択されるフィーダー細胞を、培地と共にインキュベートして、前記精原幹細胞の維持及び濃縮を支持するよう前記培地を事前調整するステップと、その後に、
b.前記培地から前記フィーダー細胞を除去するステップと
を含む、ウシ精原幹細胞の維持及び濃縮のための培地を作製するための方法。
20.
a.前記培地に成長因子又はGDNF、FGF2、SDF-1及びCSF-1を加えるステップ
を更に含む、上記17に記載の方法。
21.
前記培地が、DMEM/F12である、上記17に記載の方法。
22.
前記培地が、血清代替物サプリメントStemProを包含する、上記19に記載の方法。
23.
上記17に記載の方法によって作製されたウシ精原幹細胞の維持及び濃縮のための培地。
24.
前記培地が、Matrigelで予めコーティングされたプラスチック培養ウェル内に含まれている、上記21に記載の培地。
25.
上記1に記載の方法によって作製された、濃縮された精原幹細胞の集団。
26.
前記細胞が、ウシ細胞である、上記25に記載の細胞の集団。
27.
少なくとも1の哺乳類後代を作成する方法であって、
a)上記1に記載の方法によって産生された濃縮されたSSCの集団を、雄レシピエント哺乳類の精巣に投与するステップであって、フィーダー細胞を前記集団から除去する必要がない上記ステップと、
b)前記レシピエント哺乳類において、前記濃縮されたSSCに***形成コロニーを生成させるステップと、
c)前記レシピエント哺乳類を、前記レシピエント哺乳類と同一の種の雌哺乳類と交配するステップと
を含む方法。
28.
前記濃縮されたSSCの集団が、前記レシピエント哺乳類の精細管の管腔に投与される、上記24に記載の方法。
29.
前記レシピエント哺乳類が、不妊である、上記24に記載の方法。
30.
前記レシピエント哺乳類が、齧歯類、霊長類、イヌ、乳牛(又はウシ)、ブタ及びヒトからなる群から選択される、上記24に記載の方法。
31.
前記哺乳類が、乳牛又はウシである、上記30に記載の方法。
32.
フィーダーフリー培養系において少なくとも1のウシSSCを維持するためのキットであって、
a)フィーダー細胞株BEF1及びBSC1により事前調整された無血清培養培地を含む培養系と、
b)アプリケーターと、
c)前記フィーダーフリー培養系において少なくとも1のウシSSCを維持するための前記キットの使用のための説明書を含む説明用材料と
を含むキット。
Claims (32)
- 少なくとも1の精原幹細胞(SSC)を含有する精巣由来細胞の集団からSSCを濃縮する方法であって、
a)フィーダー細胞株によって事前調整された培地を用意するステップと、
b)SSC細胞の維持及び濃縮に適した条件下で、前記精巣由来細胞の集団を前記事前調整された培地と接触させるステップと
を含む方法。 - 前記事前調整された培地が、前記培地を、ウシ胚性線維芽細胞及び/又はウシ精巣から単離されたウシ体細胞の系統由来の細胞又はその一部と接触させることにより作製される、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞系統が、細胞株BEF1及び細胞株BSC1からなる群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 事前調整が、a)培地を、ウシ胚性線維芽細胞及び/又はウシ精巣体細胞からなる群から選択されるフィーダー細胞と接触させるステップと、b)前記培地において前記細胞を増殖させるステップと、その後に、c)前記フィーダー細胞を除去するステップとを包含する、請求項2に記載の方法。
- 前記フィーダー細胞が、細胞株BEF1及び/又はBSC1に由来する、請求項4に記載の方法。
- 前記細胞が、ウシ細胞である、請求項1に記載の方法。
- ATCC受託番号____として寄託された、ウシ精原幹細胞の培養のための培地を事前調整するためのウシ胚性線維芽細胞株BEF1。
- ATCC受託番号____として寄託された、ウシ精原幹細胞の培養のための培地を事前調整するためのウシ体細胞株BSC1。
- a.対象から精巣組織を得るステップと、
b.前記組織をコラゲナーゼとインキュベートして、精原細胞及びセルトリ細胞を分離するステップと、
c.他の細胞型から細管を分離するステップと、
d.細管をトリプシンで消化して、精原細胞及びセルトリ細胞の懸濁液を得るステップと、
e.前記懸濁液から精原細胞及びセルトリ細胞を分離するステップと
を含む、ウシ精巣組織から精原幹細胞を単離する方法。 - 他の細胞型から細管を分離する前記ステップが、重力沈降によるものである、請求項9に記載の方法。
- 前記懸濁液から精原細胞及びセルトリ細胞を分離する前記ステップが、遠心分離と、セルトリ細胞が優先的に結合する培養皿におけるインキュベーションとによるものである、請求項9に記載の方法。
- 前記事前調整された培地が、DMEM/F12培地である、請求項1に記載の方法。
- 前記培地に、血清代替物サプリメントが補充されている、請求項1に記載の方法。
- 前記血清代替物サプリメントが、StemProである、請求項12に記載の方法。
- 前記培養が、プラスチック培養ウェルにおいて維持される、請求項1に記載の方法。
- 前記プラスチック培養ウェルが、精原細胞が付着して長期培養において維持されるようMatrigelでコーティングされている、請求項14に記載の方法。
- 前記培地に、GDNF、FGF2、SDF-1及びCSF-1が挙げられるがこれらに限定されない成長因子が補充されている、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が、ウシ細胞である、請求項9に記載の方法。
- a.ATCC受託番号____として寄託された細胞株BEF1及びATCC受託番号____として寄託された細胞株BSC1を含む群から選択されるフィーダー細胞を、培地と共にインキュベートして、前記精原幹細胞の維持及び濃縮を支持するよう前記培地を事前調整するステップと、その後に、
b.前記培地から前記フィーダー細胞を除去するステップと
を含む、ウシ精原幹細胞の維持及び濃縮のための培地を作製するための方法。 - a.前記培地に成長因子又はGDNF、FGF2、SDF-1及びCSF-1を加えるステップ
を更に含む、請求項17に記載の方法。 - 前記培地が、DMEM/F12である、請求項17に記載の方法。
- 前記培地が、血清代替物サプリメントStemProを包含する、請求項19に記載の方法。
- 請求項17に記載の方法によって作製されたウシ精原幹細胞の維持及び濃縮のための培地。
- 前記培地が、Matrigelで予めコーティングされたプラスチック培養ウェル内に含まれている、請求項21に記載の培地。
- 請求項1に記載の方法によって作製された、濃縮された精原幹細胞の集団。
- 前記細胞が、ウシ細胞である、請求項25に記載の細胞の集団。
- 少なくとも1の哺乳類後代を作成する方法であって、
a)請求項1に記載の方法によって産生された濃縮されたSSCの集団を、雄レシピエント哺乳類の精巣に投与するステップであって、フィーダー細胞を前記集団から除去する必要がない上記ステップと、
b)前記レシピエント哺乳類において、前記濃縮されたSSCに***形成コロニーを生成させるステップと、
c)前記レシピエント哺乳類を、前記レシピエント哺乳類と同一の種の雌哺乳類と交配するステップと
を含む方法。 - 前記濃縮されたSSCの集団が、前記レシピエント哺乳類の精細管の管腔に投与される、請求項24に記載の方法。
- 前記レシピエント哺乳類が、不妊である、請求項24に記載の方法。
- 前記レシピエント哺乳類が、齧歯類、霊長類、イヌ、乳牛(又はウシ)、ブタ及びヒトからなる群から選択される、請求項24に記載の方法。
- 前記哺乳類が、乳牛又はウシである、請求項30に記載の方法。
- フィーダーフリー培養系において少なくとも1のウシSSCを維持するためのキットであって、
a)フィーダー細胞株BEF1及びBSC1により事前調整された無血清培養培地を含む培養系と、
b)アプリケーターと、
c)前記フィーダーフリー培養系において少なくとも1のウシSSCを維持するための前記キットの使用のための説明書を含む説明用材料と
を含むキット。
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KR101618237B1 (ko) * | 2014-07-09 | 2016-05-09 | 건국대학교 산학협력단 | 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법 |
CN104830756A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-08-12 | 湖州师范学院 | 翘嘴红鲌精原干细胞分离培养方法 |
CN105316282B (zh) * | 2015-12-09 | 2018-10-30 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种达氏鲟***培养液及应用 |
US20170258495A1 (en) * | 2016-02-29 | 2017-09-14 | The Curators Of The University Of Missouri | Medium supplement to increase the efficiency of oocyte maturation and embryo culture in vitro |
US20200008917A1 (en) * | 2017-03-02 | 2020-01-09 | Orig3N, Inc. | Systems and methods of assisted reproduction and prevention of genetic defects in offspring using induced pluripotent stem cells |
CN109055306A (zh) * | 2018-06-25 | 2018-12-21 | 佛山科学技术学院 | 一种无饲养层无血清培养小鼠精原干细胞的体系及方法 |
CN109182269B (zh) * | 2018-07-26 | 2022-07-05 | 佛山科学技术学院 | 一种使精原干细胞高效向神经细胞分化的培养体系和方法 |
CN109385395A (zh) * | 2018-10-15 | 2019-02-26 | 卢克焕 | 一种用于体外培养的水牛精原干细胞样细胞的纯化方法 |
CN109402045A (zh) * | 2018-10-15 | 2019-03-01 | 卢克焕 | 一种水牛精原干细胞样细胞的体外培养及传代方法 |
WO2020130183A1 (en) * | 2018-12-19 | 2020-06-25 | Dong Ha Bhang | A method for increasing population of spermatogonial stem cells |
WO2022026999A1 (en) * | 2020-07-27 | 2022-02-03 | Washington State University | Methods for spermatogonial culture |
CN113957039A (zh) * | 2021-09-06 | 2022-01-21 | 西南民族大学 | 一种冷冻保存的牛生***体外培养方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004092357A1 (ja) * | 2003-04-15 | 2004-10-28 | Kyoto University | ***幹細胞の生体外における増殖方法、その方法を利用して増殖された***幹細胞、および***幹細胞の生体外増殖に用いられる培地添加剤キット |
WO2005100548A1 (ja) * | 2004-03-30 | 2005-10-27 | Kyoto University | 精巣細胞由来多能性幹細胞の製造方法 |
JP2006115767A (ja) * | 2004-10-21 | 2006-05-11 | Kyoto Univ | フィーダー細胞の不在下で精原幹細胞を増殖させる方法 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5858354A (en) | 1991-12-06 | 1999-01-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Repopulation of testicular Seminiferous tubules with foreign cells, corresponding resultant germ cells, and corresponding resultant animals and progeny |
ES2571355T3 (es) * | 2002-12-16 | 2016-05-24 | Technion Res & Dev Foundation | Sistema de cultivo sin células alimentadoras ni xenocontaminantes para células madre embrionarias humanas |
WO2005105984A2 (en) * | 2004-04-12 | 2005-11-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Culture conditions and growth factors affecting fate determination, self-renewal and expansion of mouse spermatogonial stem cells |
ES2525684T3 (es) * | 2004-12-29 | 2014-12-29 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Sistemas de cultivo de células madre |
PL2185691T3 (pl) * | 2007-07-31 | 2018-08-31 | Lifescan, Inc. | Różnicowanie pluripotencjalnych komórek macierzystych poprzez zastosowanie ludzkich komórek odżywczych |
US20100285577A1 (en) * | 2007-08-07 | 2010-11-11 | Fariborz Izadyar | Isolation, Characterization and Propagation of Germline Stem Cells |
JP5464443B2 (ja) * | 2008-03-31 | 2014-04-09 | オリエンタル酵母工業株式会社 | 多能性幹細胞を増殖させる方法 |
US7939322B2 (en) * | 2008-04-24 | 2011-05-10 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Cells expressing pluripotency markers and expressing markers characteristic of the definitive endoderm |
BR112012010675A2 (pt) * | 2009-11-05 | 2016-11-29 | Primegen Biotech Llc Dba Reprocyte | maturação ex host de células tronco da linhagem germinativa |
CN101818127B (zh) * | 2010-03-31 | 2011-12-28 | 安徽农业大学 | 一种小鼠精原干细胞分离培养方法 |
CN102031242A (zh) * | 2010-11-19 | 2011-04-27 | 西北农林科技大学 | 用于提高动物精原干细胞增殖率的培养液体系和使用方法 |
CN102344909B (zh) * | 2011-10-20 | 2013-09-11 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 一种分离人精原干细胞的方法 |
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AU2012100720A4 (en) * | 2012-05-22 | 2012-06-14 | Kaul, Gautam Dr | Immunomagnetic microbeads for enrichment of CD9+ spermatogonial stem cells |
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Non-Patent Citations (6)
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---|
JPN6015003158; KANATSU-SHINOHARA, M. et al.: 'Long-term culture of mouse male germline stem cells under serum-or feeder-free conditions.' Biol. Reprod. Vol.72 No.4, 2005, pages 985-991 * |
JPN6015003159; KANATSU-SHINOHARA, M. et al.: 'Serum- and Feeder-Free Culture of Mouse Germline Stem Cells' Biol. Reprod. Vol.84 No.1, 2011, pages 97-105 * |
JPN6015003160; LIM, J.J. et al.: 'Long-term proliferation and characterization of human spermatogonial stem cells obtained from obstru' Cell Prolif. Vol.43 No.4, 2010, pages 405-417 * |
JPN6015003161; BAHADORANI, M. et al.: 'Short-term in-vitro culture of goat enriched spermatogonial stem cells using different serum concent' J. Assist. Reprod. Genet. Vol.29 No,.1, 201201, pages 39-46 * |
JPN6015003162; GOEL, S. et al.: 'Spermatogonia-specific proteins expressed in prepubertal buffalo (Bubalus bubalis) testis and their' Theriogenology Vol.74 No.7, 2010, pages 1221-1232 * |
JPN7015000249; LOSINO, N. et al.: 'Maintenance of Murine Embryonic Stem Cells' Self-Renewal and Pluripotency with Increase in Prolifera' Stem Cells and Dev. Vol.20 No.8, 2011, pages 1439-1449 * |
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