JP2014508782A - ホルモン不応性乳癌の治療におけるｅｇｆｒファミリー受容体の阻害剤の使用 - Google Patents

Abstract

腫瘍細胞をＥｒｂＢ３阻害剤、好ましくは抗ＥｒｂＢ３抗体と接触させることにより、ホルモン不応性***腫瘍の成長を抑制する方法を提供する。また、ＥｒｂＢ３またはＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合の阻害剤であって、抗ＥｒｂＢ３抗体または抗ＥｒｂＢ２抗体である阻害剤を患者に投与することによって、患者におけるホルモン不応性乳癌を治療するための方法も提供する。本治療方法は、ホルモン不応性乳癌を有する患者を選択し、次いで本阻害剤をその患者に投与することをさらに含み得る。本治療方法は、エストロゲン受容体拮抗薬またはアロマターゼ阻害剤を患者に投与することも含んでよく、患者にＥｒｂＢ３阻害剤ではない少なくとも１つの追加の抗癌剤、エストロゲン受容体拮抗薬、またはアロマターゼ阻害剤を、ＥｒｂＢ３阻害剤と併用して患者に投与することをさらに含み得る。

Description

背景
女性において、乳癌は、最も一般的な癌の１つであり、癌による死亡の５番目に一般的な原因である。乳癌の不均質性に起因して、１０年の無進行生存率は、ステージおよび型によって９８％〜１０％まで広く変動し得る。乳癌の異なる形態は、顕著に異なる生物学的特徴および臨床的挙動を有する場合がある。したがって、患者の乳癌の分類は、治療レジメンを決定するために重要な要素となっている。例えば、組織学的種類およびグレードの分類に加えて、現在、ホルモン受容体またはＨＥＲ２を標的とするいくつかの治療法が利用可能であるため、現在、乳癌は日常的に、ホルモン受容体（エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体（ＰＲ））の発現、およびＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の発現について評価されている。他の癌、例えば子宮癌または卵巣癌も同様に特徴付けされ得る。ＥＲおよびＰＲはいずれも、核受容体であり（即ち、細胞表面ではなく大部分が細胞核に位置する）、ＥＲおよび／もしくはＰＲを直接的または間接的に標的とする小分子阻害剤が開発されている。ＨＥＲ２、すなわちヒト上皮成長因子受容体２型は、通常、細胞表面上に位置する受容体であり、ＨＥＲ２を標的とする抗体が治療薬として開発されている。ＨＥＲ２は、それ自体で活性化リガンドに結合することができない、ＥＧＦＲファミリー（ＨＥＲ１（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）、およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）も含む）の唯一のメンバーである。したがって、ＨＥＲ２は、ＨＥＲ３等の別のＥＧＦＲファミリーメンバーとのヘテロ二量体受容体複合体に組み込まれるときに、受容体として機能するに過ぎない。エストロゲン受容体を発現するとして分類される癌（エストロゲン受容体陽性、「ＥＲ＋」）は、タモキシフェン等のＥＲアンタゴニストで治療され得る。同様に、高レベルのＨＥＲ２を発現するとして分類される癌は、トラスツズマブ等の抗ＨＥＲ２抗体、またはラパチニブ（ＥＧＦＲチロシンキナーゼも阻害する）等のＨＥＲ２活性受容体チロシンキナーゼ阻害剤もしくはＡＧ８７９で治療され得る。

タモキシフェンは、数十年にわたってＥＲ＋乳癌に対する療法として使用されており、現在、ＥＲ＋乳癌の最前線の療法である標準構成成分を代表する。タモキシフェンは、選択的エストロゲン受容体修飾物質（例えば、ラロキシフェン、トレミフェン、およびフルベストラント）のクラスのメンバーであり、そのうちタモキシフェン、トレミフェン、およびフルベストラントはエストロゲン受容体拮抗薬であり、ラロキシフェンは骨において作動活性を有し、乳癌および子宮癌において拮抗作用を有する。これらの拮抗薬は、エストロゲン受容体のホルモン活性化を特異的に遮断し、ホルモン不応性になっていないＥＲ＋乳癌の治療に有効な治療剤である。例えば、タモキシフェンは、初期の治療において、ＥＲ＋乳癌の患者の半分以上において寛解を誘発する。ホルモン受容体遮断の長期間にわたる利用は、長期治療後のホルモン不応性腫瘍特徴を発現する事象により制限される。ほとんどの治療される腫瘍は、タモキシフェン耐性になるという点で最終的にホルモン不応性となる。

よって、エストロゲン合成を遮断するホルモン拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤（例えば、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アナストロゾール、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾール）等の他のホルモン調節薬によるホルモン遮断はＥＲ＋腫瘍の進行を遅らせることができるが、そのようなホルモン調節薬に対する耐性の頻繁な発達がホルモン不応性ＥＲ＋癌に対して有効な抗癌治療剤の長期的な必要性を生み出している。本開示は、この必要性に対処し、さらなる利益を提供する。

概要
本明細書において、エストロゲン受容体陽性およびエストロゲン受容体陰性のホルモン不応性乳癌を含むホルモン不応性乳癌（例えば腫瘍）を治療するための方法、ならびにそのような方法において使用することができる薬学的組成物が提供される。本方法および組成物は、少なくとも部分的に、ＥｒｂＢ３の阻害がホルモン不応性乳癌細胞の成長を抑制することができるという発見に基づく。特に、抗ＥｒｂＢ３抗体の投与は、ホルモン不応性乳癌細胞の成長を抑制すると考えられる。さらに、今や、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体のヘレグリン活性化が、次いでエストロゲン受容体（のリン酸化をもたらすことにより）を活性化することができることが発見され、これは、ＥＲ＋腫瘍におけるホルモン調節薬に対する耐性の発現の一因であると考えられる事象である。よって、本明細書において、ヘレグリンのＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体への結合を阻害することにより、エストロゲン受容体の活性化を阻害するための方法および組成物も提供する。そのような方法は、本明細書に記載される１つ以上のエストロゲン受容体調節薬の同時投与と併用して有益に実践され得る。

したがって、ホルモン不応性乳癌の治療用のために、ＥｒｂＢ３阻害剤の使用（例えば、薬剤の製造用のその使用）が提供される。別の態様では、ホルモン不応性乳癌腫瘍（任意に、エストロゲン受容体陽性ホルモン不応性乳癌腫瘍）の成長を抑制する方法を開示し、本方法は、腫瘍を有効量のＥｒｂＢ３阻害剤と接触させることを含む。別の態様では、患者のホルモン不応性乳癌腫瘍（任意に、エストロゲン受容体陽性ホルモン不応性乳癌腫瘍）の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与することを含む。さらに別の態様では、患者をホルモン不応性乳癌腫瘍（任意で、エストロゲン受容体陽性ホルモン不応性乳癌腫瘍）に対して治療する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与することを含む。また別の態様では、患者の乳癌腫瘍を治療する方法が提供され、本方法は、ホルモン不応性乳癌腫瘍（任意に、エストロゲン受容体陽性ホルモン不応性乳癌腫瘍）を有する患者を選択することと、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤をその患者に投与することとを含む。

例となる実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体である。例となる抗ＥｒｂＢ３抗体はＡｂ＃６であり、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を含む。別の例となる抗ＥｒｂＢ３抗体は、任意にアミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号３〜５に示されるＶ_Ｈ ＣＤＲ１、２、および３配列と、任意にアミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号６〜８に示されるＶ_Ｌ ＣＤＲ１、２、および３配列とを含む抗体である。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれ配列番号４２および４３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を有する。他の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、Ａｂ＃３（それぞれ配列番号９および１０に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）、Ａｂ＃１４（それぞれ配列番号１７および１８に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）、Ａｂ＃１７（それぞれ配列番号２５および２６に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）、またはＡｂ＃１９（それぞれ配列番号３３および３４に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）である。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体の投与は、腫瘍の成長または侵襲性もしくは転移を阻害する。

別の態様では、本明細書に提供される治療方法は、ＥｒｂＢ３阻害剤ではない少なくとも１つの追加の抗癌剤を患者に同時投与することをさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、白金系化学療法薬、タキサン、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼ阻害剤、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥｒｂＢ２抗体、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３抗体、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される薬剤（複数可）等の少なくとも１つの化学療法薬を含む。

別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、抗ＥＧＦＲ抗体またはＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤等のＥＧＦＲ阻害剤を含む。好ましい抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含む。抗ＥＧＦＲ抗体の他の例として、ＭＭ−１５１、Ｓｙｍ００４、マツズマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、およびｍＡｂ８０６が挙げられる。例となるＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤は、ゲフィチニブを含む。ＥＧＦＲシグナル伝達の有用な小分子阻害剤の他の例として、アファチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、エルロチニブＨＣＬ、ペリチニブ、ＰＫＩ−１６６、ＰＤ−１５８７８０、およびＡＧ １４７８が挙げられるが、これらに限定されない。

さらに別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤を含む。例となるＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブ抗体等の抗ＶＥＧＦ抗体を含む。また別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方を含む。エストロゲン受容体拮抗薬の例として、ラロキシフェン、タモキシフェン、アフィモキシフェン（４−ヒドロキシタモキシフェン）、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、トレミフェン、およびフルベストラントが挙げられる。アロマターゼ阻害剤の例として、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、アロマターゼ阻害剤はレトロゾールである。また別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）阻害剤等のセリン／スレオニンタンパク質キナーゼ阻害剤、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、または***促進因子活性化キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤を含む。ｍＴＯＲ阻害剤の例として、テムシロリムス、エベロリムス、シロリムス、またはリダフォロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。ＰＩ３Ｋ阻害剤の例として、ＣＡＬ１０１およびＰＸ−８６６が挙げられるが、これらに限定されず、その両方とも現在臨床試験で試験されている。ＭＥＫ阻害剤の例として、ＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３５９０１、セルメチニブ、およびＧＳＫ１１２０２１２が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、ｍＴＯＲ阻害剤およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方を含む。一実施形態では、少なくとも１つの抗癌剤は、エベロリムスおよびエキセメスタンを含む。さらに別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、ＩＧＦ１Ｒ阻害剤を含む。ＩＧＦ１Ｒ阻害剤の例として、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ＡＭＧ−４７９、Ｒ１５０７、フィギツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ＸＬ２２８、ＢＭＳ−７５４８０７、およびＭＭ−１４１が挙げられる。

一実施形態では、ホルモン不応性乳癌はＥＲ＋である。

さらなる態様では、本明細書において、腫瘍細胞内のエストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化を阻害する方法が提供され、前記方法は、１）悪性腫瘍に対して抗エストロゲン療法で治療され、そのような療法に耐性となったヒト患者を選択することであって、患者が悪性腫瘍を有し、その腫瘍が、患者が耐性となった後に患者から採取された腫瘍生検材料の分析により、エストロゲン受容体陽性であり、かつＨＥＲ２を過剰発現し、活性化がエストロゲン受容体のリン酸化を含むことと、２）そのように選択された患者に、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗体を投与することとを含み、抗体は、生体外でＭＣＦ７細胞内のヘレグリン誘発エストロゲン受容体リン酸化を少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、または少なくとも７０％阻害するのに十分な濃度である、患者の血流中の抗体の濃度をもたらす用量で投与され、前記投与量での前記投与は腫瘍を治療するのに有効である。

細胞は、生検によりＥＲ^＋およびＨＥＲ２^＋＋もしくはＨＥＲ２^＋＋＋である、あるいは少なくとも０．０２ｐｇ ＨＲＧ／μｇのタンパク質（例えば、ＥＬＩＳＡにより）を含有する、またはＨＥＲ２ ＦＩＳＨ陽性である腫瘍内に存在し得る。阻害は、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗体を細胞外流体内に導入することにより達成される。一実施形態では、腫瘍は悪性腫瘍である。

治療される腫瘍の種類の非限定的な例として、乳癌、卵巣癌、肺癌、または皮膚癌（例えば、メラノーマ）が挙げられる。

腫瘍は患者内に存在し、血流中に十分な濃度の抗体をもたらすのに有効な抗体の量を患者に投与することにより、抗体が血流中に導入され得る。投与は、静脈内注射または点滴によるものであり得る。一実施形態では、抗体は、抗ＨＥＲ３（抗ＥｒｂＢ３）抗体、例えば、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を有する抗体であり得る。別の実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号４２および４３に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を含む抗ＥｒｂＢ３抗体であり得る。抗体は、抗ＨＥＲ２（抗ＥｒｂＢ２）抗体、例えばＣ６．５、Ｃ６．５ダイアボディ、またはペルツズマブであり得る。抗体は、抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体であってもよい。ｓｃＦｖヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）複合体であるいくつかの二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３抗体は、米国特許公開第２０１１００５９０７６号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／１２６９２０号に記載されており、そのそれぞれは、ｓｃＦｖ ＨＳＡ複合体であり、本明細書に提供される方法および組成物に使用するのに適しているＢ２Ｂ３−１および他の二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３抗体を開示しており、それには、ＡＬＭ、Ａ５−ＨＳＡ−ＭＬ３．９、Ａ５−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２、Ｂ１２−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２、Ａ５−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、Ｈ３−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、Ｆ４−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、およびＨ３−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２が含まれる。一実施形態では、二重特異性抗体は、配列番号４４を含む。他の好適な二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３抗体は、米国特許第７，３３２，５８０号および第７，３３２，５８５号に開示され、特許請求されている。好ましくは、抗体の投与は、腫瘍の成長または侵襲性または転移を阻害する。

したがって、ヘレグリン媒介エストロゲン受容体活性化を阻害するため、およびもしくは代替的にホルモン不応性乳癌（または卵巣癌、子宮癌、もしくは子宮頸癌等の別のホルモン不応性癌）、または乳癌、卵巣癌、子宮癌、もしくは子宮頸癌等のアロマターゼ耐性エストロゲン受容体陽性癌を治療するためのＥｒｂＢ３阻害剤（例えば、抗ＥｒｂＢ３抗体）または抗ＥｒｂＢ２抗体もしくは二重特異性抗ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３抗体（例えば、薬剤を製造するためのその使用）が提供される。さらなる実施形態では、アロマターゼ阻害剤との併用療法で、エストロゲン受容体陽性癌（例えば、乳癌、卵巣癌、子宮癌、もしくは子宮頸癌）の治療に使用するためのＥｒｂＢ３阻害剤、例えば、抗ＥｒｂＢ３抗体もしくは抗ＥｒｂＢ２抗体または二重特異性抗ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３抗体（例えば、薬剤を製造するためのその使用）が提供される。そのような併用は、そのような併用で治療された癌におけるホルモン耐性の発現を遅延する、または防止する。さらなる実施形態では、本方法は、エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方を同時投与することをさらに含む。さらなる態様では、本明細書において、エストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化を阻害するための組成物が提供され、前記阻害は、悪性腫瘍に対して抗エストロゲン療法で治療され、そのような療法に耐性となったヒト患者を選択することに続き、患者は悪性腫瘍を有し、腫瘍は、患者が耐性となった後に患者から採取された腫瘍生検材料の分析により、エストロゲン受容体陽性であり、かつＥｒｂＢ２を過剰発現し、その活性化はエストロゲン受容体のリン酸化を含み、前記組成物は、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ３抗体、ＥｒｂＢ２に結合し、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２抗体（例えば、ペルツズマブ）を含むか、またはＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体（例えば、配列番号４４（米国特許公開第２０１１００５９０７６号において配列番号１６とも称される）を含む抗体）を含む。いくつかの実施形態では、癌は、ホルモン不応性エストロゲン受容体陽性癌である。

一実施形態では、これらの組成物のそれぞれは、任意に、エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤のうちの１つ以上を含む。エストロゲン受容体拮抗薬の例として、ラロキシフェン、タモキシフェン、アフィモキシフェン（４−ヒドロキシタモキシフェン）、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、トレミフェン、およびフルベストラントが挙げられる。アロマターゼ阻害剤の例として、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールが挙げられる。例となる実施形態では、アロマターゼ阻害剤はレトロゾールである。

別の実施形態では、これらの組成物のそれぞれは、任意に、ｍＴＯＲ阻害剤およびアロマターゼ阻害剤のうちの１つ以上を含む。ｍＴＯＲ阻害剤の例として、テムシロリムス、エベロリムス、シロリムス、またはリダフォロリムスが挙げられる。例となる実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムスである。アロマターゼ阻害剤の例として、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールが挙げられる。例となる実施形態では、アロマターゼ阻害剤はエキセメスタンである。

別の実施形態では、これらの組成物のそれぞれは、任意に、ＭＥＫ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、およびＩＧＦ−１Ｒ阻害剤のうちの１つ以上を含む。

未処理対照細胞（「Ｃ」）、ヘレグリンβ１（「ＨＲＧ」）、ベータセルリン（「ＢＴＣ」）、もしくはエストロゲン（「Ｅ２」）で刺激されたＭＭ−１２１で前処理された細胞（「ＭＭ１２１」）または前処理されなかった細胞からのライセートのゲルのウエスタンブロットの画像を含む。上段のパネルは、リン酸化ＥｒｂＢ３（ｐＥｒｂＢ３）に特異的な抗体でプローブされたブロットの結果を示し、中段のパネルは、リン酸化（ｓｅｒ１６７およびｓｅｒ１１８）エストロゲン受容体α（ｐＥＲ）に特異的な抗体でプローブされたブロットを示し、下段のパネルは、ローディング対照としてグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）に特異的な抗体でプローブされたブロットを示す。 図１の対照（「対照（Ｃｏｎ．）」）、ヘレグリン（「ＨＲＧ」）、ベータセルリン（「ＢＴＣ」）、ヘレグリン＋ＭＭ−１２１（「ＨＲＧ＋ＭＭ１２１」）、およびベータセルリン＋ＭＭ−１２１（「ＢＴＣ＋ＭＭ１２１」）レーンのそれぞれにおける関連（ｐＥＲ）バンドの密度測定の結果を示すグラフである。バンド密度はＧＡＰＤＨ密度に対して正規化され、正規化された密度（Ｙ軸）は、Ｘ軸上に示される対照および刺激された細胞（ＭＭ−１２１前処理されたものと前処理されないものの両方）について示される。ＨＲＧとＢＴＣレーンとの間の矢印は、ＨＲＧレーンのｐＥＲバンドを示す。 レトロゾール耐性マウス異種移植片モデルにおける時間（Ｘ軸−週）に対する腫瘍体積（ｙ軸）を示すグラフである。対照としてのＰＢＳ（正方形）、ＭＭ−１２１単独（「ＭＭ」、三角形）、レトロゾール単独（「Ｌｅｔ」、逆三角形）、およびＭＭ−１２１とレトロゾールの組み合わせ（ＭＭ＋Ｌｅｔ、ひし形）で処置されたマウスについてのデータが示される。１４週目の時点で、レトロゾールマウスは、レトロゾール単独（「Ｌｅｔ」、逆三角形）、ＭＭ−１２１単独（「Ｌｅｔ→ＭＭ」、円形）、およびＭＭ−１２１とレトロゾールの組み合わせ（「Ｌｅｔ→ＭＭ＋Ｌｅｔ」、星形）の３つの群に分けられた。

詳細な説明
本明細書において、ホルモン不応性乳癌および他のＥＲ＋癌、具体的にはＨＥＲ２を過剰発現するものを治療するための方法が提供される。そのような治療のための薬学的組成物およびそのような治療におけるその使用も提供される。実施例でさらに説明されるように、ＥｒｂＢ３阻害剤、例えば、抗ＥｒｂＢ３抗体、またはヘレグリンのＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体への結合を阻害することができる他の抗体は、生体内でホルモン不応性乳癌細胞の成長、侵襲性、および転移のうちの１つ以上を抑制することができると考えられる。したがって、ホルモン不応性乳癌（例えば、エストロゲン受容体陽性ホルモン不応性乳癌）の成長、侵襲性、または転移を抑制するための方法および組成物ならびにその使用、ならびに患者のそのような乳癌を、例えばＥｒｂＢ３阻害剤で治療するための方法および組成物が提供される。

ＥＲ＋癌は、抗エストロゲン剤を含む療法レジメンの候補を例示する。そのような癌は、ある特定の乳癌、卵巣癌、子宮癌、子宮内膜癌、肺癌、骨癌、脳癌、膀胱癌、肝臓癌、および泌尿生殖器癌を含み得るが、これらに限定されない。

癌は、ＥｒｂＢ２遺伝子増幅癌および／またはＥｒｂＢ２発現（ＨＥＲ２＋）もしくは過剰発現（ＨＥＲ２＋＋、ＨＥＲ２＋＋＋）癌であり得る。ＨＥＲ２またはＮｅｕとしても知られるＥｒｂＢ２は、その細胞内チロシンキナーゼ活性を介して細胞内シグナル（例えば、リガンド活性化時）を発生する細胞表面膜貫通型受容体タンパク質である。過剰時、そのようなシグナルは、例えば細胞***を引き起こすことによって腫瘍形成を促進することができる。ＥｒｂＢ２遺伝子は、***、卵巣、子宮内膜、膵臓、結腸直腸、前立腺、唾液腺、皮膚、腎臓、および肺を含むヒト悪性腫瘍の多くの種類で増幅される、および／または過剰発現する。ＥｒｂＢ２過剰発現癌は、ＥｒｂＢ２過剰発現のレベルにより、ＨＥＲ２＋＋＋またはＨＥＲ２＋＋と指定され、ＨＥＲ２＋＋＋は、最高レベルのＨＥＲ２発現を示す。ＨＥＲ２＋＋＋およびＨＥＲ２＋＋の状態は、典型的に、免疫組織化学（ＩＨＣ）、例えばＨｅｒｃｅｐｔｅｓｔ（登録商標）等のイムノアッセイにより決定される。米国病理学会（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ）（ＣＡＰ）および米国臨床腫瘍学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）（ＡＳＣＯ）により提供されるガイドラインによると、ＨＥＲ２陰性と指定される腫瘍は、ＩＨＣ試験が染色を示さない、または３０％未満の腫瘍細胞において膜染色を示す腫瘍であり、ＩＨＣ試験が、膜の一部のみが染色される３０％超の腫瘍細胞においてわずかな膜染色をもたらす場合、腫瘍は「ＨＥＲ２」＋と指定され、ＩＨＣアッセイが３０％超の腫瘍細胞において弱いまたは中程度（完全）の染色をもたらす場合、腫瘍は「ＨＥＲ２＋＋」と指定され、ＩＨＣ試験が３０％超の腫瘍細胞の均一で非常に強い染色をもたらす場合、腫瘍は「ＨＥＲ２＋＋＋」と指定される。ＥｒｂＢ２遺伝子増幅は、例えば、ＦＩＳＨ（蛍光原位置ハイブリダイゼーション）によって決定され得、ＨＥＲ２増幅された癌細胞は、ＨＥＲ２増幅された３つ以上のＨＥＲ２遺伝子コピーを有するものであり、細胞および／または腫瘍は、「ＦＩＳＨ陽性」と称されるＨＥＲ２増幅された癌細胞を含む。

定義：
本明細書で使用される「ホルモン不応性乳癌」という用語は、抗ホルモン療法の作用に耐性である乳癌を指す。ホルモン不応性乳癌は、内分泌療法に対して新たに耐性であるか、または治療中に耐性を獲得するかのいずれかであるエストロゲン受容体陽性乳癌である。約２５〜５０％のホルモン受容体陽性乳癌は、内分泌療法に対して新たに耐性であり、本質的に、すべての転移性乳癌は獲得耐性を発現させる。

本明細書で使用される「エストロゲン受容体陽性」（ＥＲ＋）という用語は、腫瘍細胞が、エストロゲン受容体（ＥＲ）について陽性（即ち、従来の病理組織学的方法を使用して）のスコアを取る腫瘍（例えば、癌）、通常、***腫瘍を指す。ＣＡＰおよびＡＳＣＯにより提供される推奨によると、腫瘍は、試験された（例えば免疫組織化学により）少なくとも１％の腫瘍細胞がＥＲ陽性のスコアを取る場合、ＥＲ＋である。

本明細書で互換的に使用される、「ＥｒｂＢ３」および「ＨＥＲ３」という用語は、米国特許第５，４８０，９６８号に記載される、ヒトＥｒｂＢ３タンパク質を指す。

本明細書で互換的に使用される、「ＥｒｂＢ２」、「ＨＥＲ２」、および「ＨＥＲ２受容体」という用語は、ヒトｎｅｕ癌遺伝子のタンパク質生成物を指し、ＥｒｂＢ２癌遺伝子またはＨＥＲ２癌遺伝子とも称される。

本明細書で使用される「ＥｒｂＢ３阻害剤」という用語は、ＥｒｂＢ３の活性を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的作用物質を含むことが意図される。例となるＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体である。

本明細書で使用される「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的にコードされる結合ドメインを含む、１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質であり、このタンパク質は、抗原に免疫特異的に結合する。認識される免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεに分類され、それらは次いで、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥの免疫グロブリンクラスを定義する。典型的な免疫グロブリン構造単位は、２つの同一の対のポリペプチド鎖から成る四量体を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を含む。「Ｖ_Ｌ」および「Ｖ_Ｈ」は、それぞれこれらの軽鎖および重鎖の可変領域を指す。

抗体は、無傷の免疫グロブリン、ならびにそれらの抗原結合フラグメントを含み、それらは、様々なペプチダーゼでの消化によって産生されるか、または化学的に、もしくは組換えＤＮＡ発現技法を使用して、デノボ合成されてもよい。そのようなフラグメントには、例えば、Ｆ（ａｂ）_２二量体およびＦａｂ単量体が含まれる。有用な抗体には、単鎖抗体（単一のポリペプチド鎖として存在する抗体）、例えば、単鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）が含まれ、そこではＶ_Ｈ鎖およびＶ_Ｌ鎖が一緒に結合されて（直接またはペプチドリンカーを介して）、連続ポリペプチドを形成する。

「免疫特異的」または「免疫特異的に」とは、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的にコードされるドメインを介して、目的とするタンパク質の１つ以上のエピトープに結合するが、抗原分子の混合集団を含有する試料において、他の分子を実質的に認識および結合しない抗体を指す。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイによって測定される、５０ｎＭを超えない値のＫ_ｄで、同種抗原に免疫特異的に結合する。そのようなアッセイの使用は、本技術分野でよく知られており、実施例３で説明されている。

「抗ＥｒｂＢ３抗体」は、ＥｒｂＢ３の細胞外ドメインに免疫特異的に結合する抗体であり、「抗ＥｒｂＢ２抗体」は、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインに免疫特異的に結合する抗体である。抗体は、単離抗体であってもよい。ＥｒｂＢ３またはＥｒｂＢ２へのそのような結合は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイによって測定して、５０ｎＭを超えない値のＫ_ｄを呈する。典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体は、ＥｒｂＢ３のＥＧＦ様リガンド媒介リン酸化を阻害し、例えば、ヘレグリンのＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体への結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２抗体である。ＥＧＦ様リガンドには、ＥＧＦ、ＴＧＦα、βセルリン、ヘパリン結合上皮成長因子、ビレグリン、エピゲン、エピレグリン、およびアンフィレグリンが含まれ、典型的には、ＥｒｂＢ１に結合し、ＥｒｂＢ１のＥｒｂＢ３とのヘテロ二量化を誘導する。

本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合部位を含むタンパク質を指し、第１の結合部位は、第１の抗原またはエピトープに免疫特異的結合を呈し、第２の結合部位は、第１とは明確に異なる第２の抗原またはエピトープに免疫特異的結合を呈する。抗ＥｒｂＢ３／抗ＥｒｂＢ２二重特異性抗体は、１つがＥｒｂＢ３の外部ドメインに免疫特異的に結合し、もう一方がＥｒｂＢ２の外部ドメインに免疫特異的に結合する、２つの結合部位を含む抗体である。

本明細書で使用される「ＥＧＦＲ阻害剤」または「ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害剤」という用語は、ＥＧＦＲシグナル伝達活性を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子チロシンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的作用物質を含むことが意図される。

本明細書で使用される「ＶＥＧＦ阻害剤」という用語は、ＶＥＧＦシグナル伝達活性を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子チロシンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的作用物質を含むことが意図される。

本明細書で使用される「ｍＴＯＲ阻害剤」という用語は、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的作用物質を含むことが意図される。

本明細書で使用される「ＭＥＫ阻害剤」という用語は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的作用物質を含むことが意図される。

本明細書で使用される「ＰＩ３Ｋ阻害剤」という用語は、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的作用物質を含むことが意図される。

本明細書で同義に使用する「抑制する」、「抑制」、「阻害する」、および「阻害」という用語は、活性の完全遮断を含む、生物活性（例えば、腫瘍細胞成長）のあらゆる統計的に有意な減少を指す。例えば、「阻害」は、生物活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の減少を指し得る。

「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトまたは他の哺乳動物を含む。

本明細書で使用される「治療する」、「治療している」、および「治療」という用語は、本明細書に記載される治療または予防措置を指す。「治療」の方法は、疾患もしくは障害または再発疾患もしくは障害の１つ以上の症状を治癒するか、遅延させるか、重症度を低減させるか、または改善するために、あるいはそのような治療の不在下で予期されるものを超えて患者の生存期間を延長するために、患者、例えば、ホルモン不応性乳癌腫瘍を有する患者への、本明細書に記載されるＥｒｂＢ３阻害剤等のＥｒｂＢ３阻害剤の投与を用いる。

本明細書で使用される「有効量」という用語は、患者に投与されるとき、ホルモン不応性乳癌の治療、予後、または診断に影響を及ぼすのに十分なＥｒｂＢ３阻害剤、例えば、抗ＥｒｂＢ３抗体等の作用物質の量を指す。治療有効量は、治療される患者および病状、患者の体重および年齢、病状の重症度、投与方法等によって異なり、当業者が容易に決定することができる。投与の用量は、例えば、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合部分の約１ｎｇ〜約１０，０００ｍｇ、約５ｎｇ〜約９，５００ｍｇ、約１０ｎｇ〜約９，０００ｍｇ、約２０ｎｇ〜約８，５００ｍｇ、約３０ｎｇ〜約７，５００ｍｇ、約４０ｎｇ〜約７，０００ｍｇ、約５０ｎｇ〜約６，５００ｍｇ、約１００ｎｇ〜約６，０００ｍｇ、約２００ｎｇ〜約５，５００ｍｇ、約３００ｎｇ〜約５，０００ｍｇ、約４００ｎｇ〜約４，５００ｍｇ、約５００ｎｇ〜約４，０００ｍｇ、約１μｇ〜約３，５００ｍｇ、約５μｇ〜約３，０００ｍｇ、約１０μｇ〜約２，６００ｍｇ、約２０μｇ〜約２，５７５ｍｇ、約３０μｇ〜約２，５５０ｍｇ、約４０μｇ〜約２，５００ｍｇ、約５０μｇ〜約２，４７５ｍｇ、約１００μｇ〜約２，４５０ｍｇ、約２００μｇ〜約２，４２５ｍｇ、約３００μｇ〜約２，０００、約４００μｇ〜約１，１７５ｍｇ、約５００μｇ〜約１，１５０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１，１２５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１，１００ｍｇ、約１．２５ｍｇ〜約１，０７５ｍｇ、約１．５ｍｇ〜約１，０５０ｍｇ、約２．０ｍｇ〜約１，０２５ｍｇ、約２．５ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、約３．０ｍｇ〜約９７５ｍｇ、約３．５ｍｇ〜約９５０ｍｇ、約４．０ｍｇ〜約９２５ｍｇ、約４．５ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５ｍｇ〜約８７５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約８５０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約８２５ｍｇ、約３０ｍｇ〜約８００ｍｇ、約４０ｍｇ〜約７７５ｍｇ、約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇ、約１００ｍｇ〜約７２５ｍｇ、約２００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約６７５ｍｇ、約４００ｍｇ〜約６５０ｍｇ、約５００ｍｇ、または約５２５ｍｇ〜約６２５ｍｇの範囲であることができる。投薬は、例えば、毎週、１０日間毎、２週間毎、１８日間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎であってもよい。投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するように調整されてもよい。有効量は、ＥｒｂＢ３阻害剤のいかなる毒作用または有害作用（副作用）も最小化され、かつ／または有益な効果が上回る量でもある。ＭＭ−１２１の場合、正確に、または約６ｍｇ／ｋｇもしくは１２ｍｇ／ｋｇを毎週、または１２ｍｇ／ｋｇまたは２４ｍｇ／ｋｇを隔週静脈内投与してもよい。ＭＭ−１１１の場合、投薬は、正確に、または約ｙ ｍｇ／ｋｇの初期負荷量、および正確に、または約ｚ ｍｇ／ｋｇの後続の維持量で、正確に、または約ｘ日毎に静脈内投与されてもよく、ここで、ｘ、ｙ、およびｚは、７、２５、および２０、または１０、４０および３０、または１４、６０、および４４、または１８、９０、および７５、または２１、１２０、および１０５である。さらなる好ましい投薬レジメンは、以下に説明される。

「抗癌剤」および「抗腫瘍薬」という用語は、癌性増殖等の悪性腫瘍を治療するために使用される薬物を指す。薬物療法は、単独で、または外科手術もしくは放射線療法等の他の治療と組み合わせて使用されてもよい。

「治療的相乗効果」とは、治療薬の併用による患者の治療がその適量で使用される併用のそれぞれ個々の組成成分によって達成される成果より治療的に優れた成果を表す事象を指す（Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ，６６，１１８７）。本内容において、治療的に優れた成果とは、それぞれの組成成分が個々の構成成分として投与されるときと同じ用量で併用（複数可）で投与されるとき、患者がａ）併用の個々の組成成分が併用と同じ用量で単剤療法としてそれぞれ投与されるのと等しいか、もしくはそれより優れた治療利益を受けながら、より少ない有害事象の発生を呈するか、またはｂ）併用のそれぞれ個々の組成成分による治療よりも優れた治療利益を受けながら、用量制限毒性を呈さないかのいずれかであることである。異種移植片モデルにおいて、組成成分のそれぞれが一般にその個々の最大耐量を超えない用量で存在する、その最大耐量で使用される併用は、併用の投与によって達成された腫瘍成長の減少が、組成成分が単独で投与されるときの最善組成成分の腫瘍成長の減少の値よりも優れているときに治療的相乗効果を表す。

よって、併用では、そのような併用の構成成分は、抗ＥｒｂＢ３抗体による単剤療法または抗体療法不在の化学療法（複数可）による治療と比較して、膵臓の腫瘍成長の抑制に対して付加的または超付加的効果を有する。「付加的」とは、それぞれ個々の構成成分による単剤療法によって達成された最善の別個の結果より程度（例えば、腫瘍***指数もしくは腫瘍成長の減少の程度、あるいは腫瘍縮小または無症状もしくは症状減少期間の頻度および／または持続期間の程度）が大きい結果を意味し、一方、「超付加的」とは、程度がそのような別個の結果の総和を超える結果を示すために使用される。一実施形態では、付加的効果は、膵臓の腫瘍成長の減速または停止として測定される。付加的効果は、例えば、膵臓腫瘍の大きさの減少、腫瘍***指数の減少、経時的な転移性病巣の数の減少、全体的な応答速度の増加、または平均もしくは全体的な生存期間の増加としても測定することができる。

治療上の処置の有効性を定量化することができる非限定的な測定の例の１つは、以下の式によって決定される、ｌｏｇ１０細胞死滅を計算することによる。
ｌｏｇ１０細胞死滅＝ＴＣ（日数）／３．３２×Ｔｄ
式中、ＴＣは、細胞成長の遅延を表し、治療群（Ｔ）の腫瘍および対照群（Ｃ）の腫瘍が、既定値（例えば、１ｇまたは１０ｍＬ）に到達するまでの平均時間（日数）であり、Ｔｄは、対照動物において腫瘍の体積を二倍にするのに必要な時間（日数）を表す。この評価基準を適用するとき、ｌｏｇ１０細胞死滅が０．７以上である場合、生成物は活性であると見なされ、ｌｏｇ１０細胞死滅が２．８を超える場合、生成物は非常に活性であると見なされる。この評価基準を用いて、組成成分のそれぞれが一般にその最大耐量以下の用量で存在する、その独自の最大耐量で使用される併用は、ｌｏｇ１０細胞死滅が、単独で投与されるときの最善組成成分のｌｏｇ１０細胞死滅の値よりも大きい場合に治療相乗効果を呈する。典型的な場合では、併用のｌｏｇ１０細胞死滅は、併用の最善組成成分のｌｏｇ１０細胞死滅の値を、少なくとも０．１ｌｏｇ細胞死滅、少なくとも０．５ｌｏｇ細胞死滅、または少なくとも１．０ｌｏｇ細胞死滅を超える。様々な態様および実施形態が、以下の小節でさらに詳述される。

Ｉ．ＥｒｂＢ３阻害剤
本明細書でさらに詳述されるように、本明細書に提供される方法および組成物は、１つ以上のＥｒｂＢ３阻害剤の使用を伴う。

一実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体、例えば、モノクローナル抗体である。有用な抗ＥｒｂＢ３抗体（またはそれに由来するＶＨ／ＶＬドメイン）は、当該技術分野に周知の方法を使用して作製することができる。別の方法としては、当該技術分野が認識する抗ＥｒｂＢ３抗体が使用され得る。例えば、米国特許第７，８４６，４４０号に記載されるＡｂ＃３、Ａｂ＃１４、Ａｂ＃１７、Ａｂ＃１９を使用することができる。ＥｒｂＢ３への結合に関して、これらの抗体のいずれかと競合する抗体も使用することができる。使用することができる、さらなる当該技術分野が認識する抗ＥｒｂＢ３抗体は、米国特許第７，２８５，６４９号、米国特許第２０２００３１０５５７号、米国特許第２０１００２５５０１０号に開示されるもの、ならびに抗体ＩＢ４Ｃ３および２Ｄ１Ｄ１２（Ｕ３ Ｐｈａｒｍａ Ａｇ）（そのいずれも、例えば、米国特許第２００４０１９７３３２号に記載されており、ハイブリドーマ細胞系ＤＳＭ ＡＣＣ２５２７またはＤＳＭ ＡＣＣ２５１７（ＤＳＭＺに堆積される）により生成される）、米国特許第７，７０５，１３０号に記載されるＡＭＧ８８８（Ｕ３−１２８７−Ｕ３ Ｐｈａｒｍａ Ａｇ ａｎｄ Ａｍｇｅｎ）と称される抗ＥｒｂＢ３抗体、および米国特許第５，９６８，５１１号に記載されるモノクローナル抗体８Ｂ８（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＢ−１２０７０（商標））、ならびに米国特許公開第２０１１０２５６１５４号に記載されるＡＶ−２０３（Ａｖｅｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）と称される抗ＥｒｂＢ３抗体を含む。他の有用な抗ＥｒｂＢ３抗体は、二重特異性抗体の内容で当該技術分野において開示されている（例えば、国際公開第２００９１２６９２０号のＢ２Ｂ３−１またはＢ２Ｂ３−２、ならびに米国特許第７，８４６，４４０号、米国特許第２００９０２９１０８５号、米国特許第２０１０００５６７６１号、および米国特許第２０１００２６６５８４号に記載されるものを参照）。例となる抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、現在第ＩＩ相臨床試験が行われている完全ヒト抗ＥｒｂＢ３抗体であるＭＭ−１２１を含む。ＭＭ−１２１は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／１００６２４号および米国第７，８４６，４４０号にさらに記載されており、それぞれ配列番号１および２に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む。ＭＭ−１２１は、米国特許第７，８４６，４４０号において、「Ａｂ＃６」と称される。あるいは、抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、ＥｒｂＢ３への結合に関して、ＭＭ−１２１と競合する抗体である。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれ配列番号３〜５（Ｖ_ＨＣＤＲ１、２、３）および６〜８（Ｖ_ＬＣＤＲ１、２、３）に示されるＭＭ−１２１のＶ_ＨおよびＶ_ＬＣＤＲ配列を含む抗体である。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれ配列番号４２および４３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を有する。抗ＥｒｂＢ３抗体の他の例として、Ａｂ＃３、Ａｂ＃１４、Ａｂ＃１７、およびＡｂ＃１９が挙げられ、国際公開第２００８／１００６２４号においてもさらに説明され、それぞれ配列番号９および１０、１７および１８、２５および２６、ならびに３３および３４において示される、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を有する。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、Ａｂ＃３のＶ_ＨおよびＶ_ＬＣＤＲ配列（それぞれ配列番号１１〜１３および１４〜１８において示される）を含む抗体であるか、またはＡｂ＃１４のＶ_ＨおよびＶ_ＬＣＤＲ配列（それぞれ配列番号１９〜２１および２２〜２４において示される）を含む抗体であるか、またはＡｂ＃１７のＶ_ＨおよびＶ_ＬＣＤＲ配列（それぞれ配列番号２７〜２９および３０〜３２において示される）を含む抗体であるか、またはＡｂ＃１９のＶ_ＨおよびＶ_ＬＣＤＲ配列（それぞれ配列番号３５〜３７および３８〜４０において示される）を含む抗体である。

あるいは、抗ＥｒｂＢ３抗体は、配列番号４１の残基９２〜１０４を含むヒトＥｒｂＢ３のエピトープに結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であり、ＥｒｂＢ３を発現する癌細胞の増殖の阻害を特徴とする。癌細胞は、ＭＡＬＭＥ−３Ｍ細胞、ＡｄｒＲ細胞、またはＡＣＨＮ細胞であり得、増殖は、対照と比較して、少なくとも１０％減少され得る。さらなる実施形態では、この単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４１の残基９２〜１０４および１２９を含むエピトープに結合する。

さらに別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、２つ以上の抗ＥｒｂＢ３抗体の混合物またはカクテルを含むことができ、それぞれ、ＥｒｂＢ３上の異なるエピトープに結合する。一実施形態では、混合物またはカクテルは、３つの抗ＥｒｂＢ３抗体を含み、それぞれ、ＥｒｂＢ３上の異なるエピトープに結合する。

別の実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、ＥｒｂＢ３の発現または活性を阻害する、ＲＮＡ分子等の核酸分子を含む。ＥｒｂＢ３のＲＮＡアンタゴニストは、本技術分野において説明されている（例えば、米国特許出願公開第２００８０３１８８９４号を参照のこと）。さらに、ＥｒｂＢ３の発現および／または活性を特異的に阻害する、ｓｈＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ等のＥｒｂＢ３に特異的な干渉ＲＮＡが、本技術分野において説明されている。

さらに別の実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、ＥｒｂＢ３経路を介するシグナル伝達を阻害する可溶性形態のＥｒｂＢ３受容体を含む。そのような可溶性ＥｒｂＢ３分子は、本技術分野において説明されている（例えば、それぞれＭａｉｈｌｅらの米国特許第７，３９０，６３２号、米国特許第７，６３８，３０３号、および米国特許第７，６３８，３０２号、ならびにＺｈｏｕの米国特許第７，９１９，０９８号を参照のこと）。

ＩＩ．抗ＥｒｂＢ２抗体
本明細書で提供される方法および組成物は、ヘレグリンのＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体への結合を阻害することができる１つ以上の抗ＥｒｂＢ２抗体の使用に関し得る。好適な抗ＥｒｂＢ２抗体は、米国特許第５，９７７，３２２号に記載されるＣ６．５（および多数のその誘導体）、ならびに米国特許第６，０５４，２９７号に記載されるトラスツズマブまたは米国特許第６，９４９，２４５号に記載されるペルツズマブを含む。

ＩＩＩ．二重特異性抗体
本明細書で提供される方法および組成物は、１つ以上の二重特異性抗体、好ましくはヘレグリンのＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体への結合を阻害することができるものの使用に関し得る。そのような二重特異性抗体は、米国特許第７，３３２，５８０に記載されるＡＬＭ、ならびに米国特許出願公開第２０１１００５９０７６号およびＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／１２６９２０号に記載されるＡ５−ＨＳＡ−ＭＬ３．９、Ａ５−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２、Ｂ１２−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２、Ａ５−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、Ｈ３−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、Ｆ４−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、およびＨ３−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２を含み、そのそれぞれは、本明細書に記載されるように、ｍＨＳＡを含むもの等の変異形態を有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、配列番号４４を含む。

ＩＶ．方法
一態様では、ホルモン不応性乳癌の治療のための薬剤を製造するために、ＥｒｂＢ３阻害剤の使用が提供され、ある実施形態では、乳癌は、エストロゲン受容体陽性ホルモン不応性乳癌である。

別の態様では、ホルモン不応性乳癌細胞（任意に、ＥＲ＋ホルモン不応性乳癌細胞）の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、該細胞を有効量のＥｒｂＢ３阻害剤と接触させることを含む。

別の態様では、患者におけるホルモン不応性乳癌腫瘍（任意で、ＥＲ＋ホルモン不応性乳癌腫瘍）の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与することを含む。

また別の態様では、患者の乳癌腫瘍（任意に、エストロゲン受容体陽性のホルモン不応性乳癌腫瘍）を治療する方法が提供され、本方法は、
ホルモン不応性乳癌腫瘍を有する患者を選択することと、
その患者に有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を投与することと、を含む。

別の態様では、ホルモン不応性乳癌腫瘍を有する患者は、係属中の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５４０５１号に開示される選択方法の使用によってさらに選択された患者である。

ＥｒｂＢ３阻害剤で治療されるホルモン不応性乳癌は、ＥｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）、ＥｒｂＢ３、およびヘレグリン（ＨＲＧ）を同時発現し得る。ＥＧＦＲおよびＨＲＧの発現は、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥｒｂＢ３抗体、または抗ＨＲＧ抗体を用いて、ＲＴ−ＰＣＲまたは標準免疫アッセイ技法、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ホルマリン固定されたパラフィン包埋組織（例えば、組織学的評価のために日常的に処理された乳癌組織）の免疫組織化学的染色によって識別することができる。本明細書の開示に従う治療に好ましい腫瘍のさらなる特徴は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５４０５１号に対する優先権を主張する、係属中の米国特許公開第２０１１００２７２９１号において説明されている。

一実施形態では、患者に投与されるＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体である。例となる抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれ配列番号１および２に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＭＭ−１２１、またはそれぞれ配列番号３〜５に示されるＶ_Ｈ ＣＤＲ１、２、および３配列、ならびにそれぞれ配列番号６〜８に示される、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１、２、および３配列（すなわち、ＭＭ−１２１のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ）を含む抗体である。さらなる非限定的な例となる抗ＥｒｂＢ３抗体およびＥｒｂＢ３阻害剤の他の形態は、上の小節Ｉに詳述される。

ＥｒｂＢ３阻害剤は、患者への阻害剤の効果的な送達に好適な任意の経路によって、患者に投与することができる。例えば、多くの小分子阻害剤は、経口投与に好適である。抗体および他の生物学的作用物質は、典型的には、非経口的、例えば、静脈内、腹腔内、皮下的、または筋肉内投与される。本明細書に提供される方法における使用に好適な様々な投与経路、用量、および薬学的製剤が、以下でさらに詳述される。

さらなる態様では、本明細書に記載される方法は、エストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化リン酸化を阻害する（例えば、少なくとも部分的な遮断）方法を含む。これらの方法は、そのようなリン酸化を阻害するための、ヘレグリンのＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体への結合を阻害することができる１つ以上の抗体の使用に関する。ある実施形態では、そのような方法は、エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤を含むホルモン調節薬の任意の同時投与をさらに含む。

Ｖ．薬学的組成物
別の態様では、本明細書に開示される方法において使用することができる薬学的組成物、すなわち、ホルモン不応性乳癌腫瘍を治療するための薬学的組成物が提供される。

一実施形態では、ホルモン不応性乳癌を治療するための薬学的組成物は、ＥｒｂＢ３阻害剤および薬学的担体を含む。ＥｒｂＢ３阻害剤を、薬学的担体とともに、薬学的組成物に製剤化することができる。さらに、薬学的組成物は、例えば、ホルモン不応性乳癌腫瘍の患者を治療するための組成物の使用に関する指示を含んでもよい。

一実施形態では、組成物中のＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体、例えば、ＭＭ−１２１、またはＥｒｂＢ３の免疫特異的結合を提供するように、ＭＭ−１２１に存在するＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲと同一の相対的順序で抗体内に位置するＭＭ−１２１のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲを含む抗体である。さらなる非限定的な例となる抗ＥｒｂＢ３抗体およびＥｒｂＢ３阻害剤の他の形態は、上の小節Ｉに詳述される。

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、任意およびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝剤、ならびに生理学的に相溶性の他の賦形剤を含む。好ましくは、担体は、非経口、経口、または局所投与に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、例えば、小分子または生物学的作用物質は、酸作用および化合物を不活性化し得る他の自然条件から化合物を保護するように、材料でコーティングされてもよい。

薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注入溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末、ならびに錠剤、丸剤、カプセル等の調製用の従来の賦形剤を含む。薬学的に活性な物質を製剤化するためのそのような媒体および作用物質の使用は、本技術分野で既知である。任意の従来の媒体または作用物質が、活性化合物と適合しない場合を除いて、本明細書に提供される薬学的組成物におけるそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物を組成物に組み込むこともできる。

薬学的に許容される担体は、薬学的に許容される抗酸化剤を含むことができる。薬学的に許容される抗酸化剤の例として、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等、（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等、および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が挙げられる。

本明細書に提供される薬学的組成物に用いることができる好適な水性および非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの好適な混合物、ならびにオレイン酸エチル等の注入可能な有機エステルが挙げられる。必要な場合に、例えば、レシチン等のコーティング材料の使用によって、分散剤の場合、必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、マンニトール等のポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注入可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。

これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等の機能的賦形剤も含有してもよい。

治療組成物は、典型的には、製造および保管の条件下で滅菌であり、非発熱性であり、かつ安定していなければならない。該組成物を、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の秩序構造として製剤化することができる。

滅菌注入溶液を、上に列挙される成分の１つまたは組み合わせとともに、適切な溶媒中に必要な量の活性化合物を組み込み、必要に応じて、その後に滅菌、例えば、精密濾過することによって調製することができる。概して、分散液は、基本的な分散媒体および上に列挙されるもののうち必要とされる他の成分を含有する滅菌媒体に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注入溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、事前に滅菌濾過されたその溶液から、活性成分に加えて、任意のさらなる所望の成分の粉末を産生する、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）を含む。活性剤（複数可）は、滅菌条件下で、追加の薬学的に許容される担体（複数可）および必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤、または推進剤と混合されてもよい。

微生物の存在の防止を、上記の滅菌手順、ならびに様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノール等の包含によって確実にすることができる。糖類、塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に含むことも望ましくあり得る。さらに、注入可能な薬学的形態の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を遅延させる作用物質の包含によってもたらされ得る。

ＥｒｂＢ３阻害剤を含む薬学的組成物を、単独または併用療法で投与することができる。例えば、併用療法は、ＥｒｂＢ３阻害剤および少なくとも１つ以上の追加の治療薬、例えば、以下の小節ＩＶでさらに詳述される本技術分野において既知の１つ以上の化学療法薬を含む、本明細書に提供される組成物を含んでもよい。薬学的組成物は、放射線療法および／または外科手術と併せて投与することもできる。

投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調製される。例えば、単一のボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割用量が長期間かけて投与されてもよく、または治療状況の要件によって示されるように、用量を比例的に増減させてもよい。

抗体投与の例となる用量範囲は、１０〜１０００ｍｇ（抗体）／ｋｇ（患者の体重）、１０〜８００ｍｇ／ｋｇ、１０〜６００ｍｇ／ｋｇ、１０〜４００ｍｇ／ｋｇ、１０〜２００ｍｇ／ｋｇ、３０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、３０〜８００ｍｇ／ｋｇ、３０〜６００ｍｇ／ｋｇ、３０〜４００ｍｇ／ｋｇ、３０〜２００ｍｇ／ｋｇ、５０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、５０〜８００ｍｇ／ｋｇ、５０〜６００ｍｇ／ｋｇ、５０〜４００ｍｇ／ｋｇ、５０〜２００ｍｇ／ｋｇ、１００〜１０００ｍｇ／ｋｇ、１００〜９００ｍｇ／ｋｇ、１００〜８００ｍｇ／ｋｇ、１００〜７００ｍｇ／ｋｇ、１００〜６００ｍｇ／ｋｇ、１００〜５００ｍｇ／ｋｇ、１００〜４００ｍｇ／ｋｇ、１００〜３００ｍｇ／ｋｇ、および１００〜２００ｍｇ／ｋｇを含む。例となる投薬スケジュールは、３日毎に１回、５日毎に１回、７日毎に１回（すなわち、週に１回）、１０日毎に１回、１４日毎に１回（すなわち、２週間毎に１回）、２１日毎に１回（すなわち、３週間毎に１回）、２８日毎に１回（すなわち、４週間毎に１回）、および１ヶ月に１回を含む。

投与の容易さおよび用量の均一性のために、非経口製剤を単位用量形態で製剤化することが有利であり得る。本明細書で使用される単位用量形態は、治療される患者の単一用量に適した物理的に個別の単位を指し、各単位は、任意の必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果をもたらすように計算された既定量の活性薬剤を含有する。単位用量形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個人における感受性を治療するためにそのような活性化合物を配合する技術に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。

本明細書に開示される薬学的組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、患者に有害になることなく、所望の治療応答を達成するために特定の患者、組成、および投与方法に有効な量の活性成分を得るように変化させてもよい。投与の文脈において本明細書で使用される「非経口」とは、腸内および局所投与以外の投与方法、通常、注入による投与方法を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、ならびに胸骨内注射および注入を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口投与される」という表現は、腸内（すなわち、消化管を介する）および局所投与以外の投与方法、通常、注射または注入による投与方法を指し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、ならびに胸骨内注射および注入を含むが、これらに限定されない。静脈内注射および注入、抗体投与のために使用される場合が多い（が排他的ではない）。

本明細書に提供される作用物質が薬剤としてヒトまたは動物に投与されるとき、それらは、単独で投与されるか、または例えば、活性成分の０．００１〜９０％（より好ましくは、０．００５〜７０％、例えば、０．０１〜３０％）を含有する薬学的組成物として、薬学的に許容される担体と組み合わせて投与されてもよい。

ＶＩ．併用療法
ある実施形態では、ホルモン不応性乳癌細胞の成長を抑制するため、またはホルモン不応性***腫瘍を有する患者を治療するための本明細書に提供される方法および使用は、ＥｒｂＢ３阻害剤、およびＥｒｂＢ３阻害剤ではない少なくとも１つの追加の抗癌剤の投与を含み得る。

一実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、少なくとも１つの化学療法薬を含む。そのような化学療法薬の非限定的な例として、白金系化学療法薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、タキサン（例えば、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ＥｎｄｏＴＡＧ−１（商標）（正荷電脂質系複合体で被包されたパクリタキセル製剤、ＭｅｄｉＧｅｎｅ（登録商標））、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（アルブミンに結合されたパクリタキセル製剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブ／Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、スニチニブ／Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）、ダサチニブ／Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））、およびそれらの組み合わせが挙げられる。

別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、抗ＥＧＦＲ抗体またはＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤等のＥＧＦＲ阻害剤を含む。例となる抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）である。抗ＥＧＦＲ抗体の他の例として、ＭＭ−１５１（２０１１年７月５日に出願されたＢｕｋｈａｌｉｄらの同時係属中の譲受人共通の米国特許出願第６１／５０４，６３３号にさらに記載される）、Ｓｙｍ００４（Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ，Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊａｎｕａｒｙ １５，２０１０ ７０；５８８、米国特許第７，８８７，８０５号も参照）、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）；Ａｍｇｅｎ）、ニモツズマブ（ＴｈｅｒａＣＩＭ（商標））、およびｍＡｂ８０６が挙げられる。ＥＧＦＲシグナル伝達経路の例となる小分子阻害剤は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａおよびＴｅｖａから市販されているゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））である。ＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤の他の例として、エルロチニブＨＣＬ（ＯＳＩ−７７４、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）、ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａ）、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カネルチニブ（カネルチニブ二塩酸塩、Ｐｆｉｚｅｒ）、ペリチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＤ１５８７８０、アファチニブ（Ｔｏｍｔｏｖｏｋ（登録商標）、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ）、およびＡＧ１４７８（４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）が挙げられる。

さらに別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、ＶＥＧＦ阻害剤を含む。例となるＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔａｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）等の抗ＶＥＧＦ抗体を含む。

別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、抗ＥＧＦＲ抗体またはＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤等のＩＧＦ１Ｒ阻害剤を含む。抗ＩＧＦ１Ｒ阻害剤の例として、ダロツズマブ（Ｍｅｒｃｋ、同様にＭＫ−０６４６）、ＡＭＧ−４７９（Ａｍｇｅｎ）、Ｒ１５０７（Ｒｏｃｈｅ）、フィギツムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩＭＣ−Ａ１２（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）、およびＭＭ−１４１、二重特異性ＥｒｂＢ３／ＩＧＦ１Ｒ阻害剤（２０１１年１０月１１日に出願されたＬｕｇｏｖｓｋｏｙらの同時係属中の譲受人共通の米国特許出願第６１／５５８，１９２号にさらに記載される）が挙げられる。小分子ＩＧＦ１Ｒ阻害剤の例として、ＸＬ２２８（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）およびＢＭＳ−７５４８０７（ＢＭＳ）が挙げられる。

実施例１：ＥＲ＋ホルモン不応性***腫瘍のＭＭ−１２１による治療
ＭＣＦ７ヒト***癌細胞のタモキシフェン耐性変異型の異種移植片を使用して、ＥＲ＋ホルモン不応性***腫瘍担持マウスのＭＭ−１２１による治療の抗腫瘍効果および忍容性の分析を行う。タモキシフェン耐性ヒト***癌細胞系であるＴＡＭＲ−１、ＴＡＭＲ−７、およびＴＡＭＲ−８細胞は、Ａ．Ｅ．Ｌｙｋｋｅｓｆｅｌｄｔ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｉｓｈ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ．Ｓｔｒａｎｄｂｏｕｌｅｖａｒｄｅｎ ４９，ＤＫ−２１００ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ ０，Ｄｅｎｍａｒｋ）の研究室から得られる。Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから得た雌の無胸腺ｎｕ＋／ｎｕ＋ヌードマウスに異種移植片としてこれらを成長させる。Ａｒｉｚｏｎａ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｃｏｌｏｎｙ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺから得られるＳＣＩＤマウス（Ｃ．Ｂ．−１７／ＩｃｒＡＣＣｓｃｉｄ）も適している。マウスは、温度と湿度が調節された部屋に置かれたＴｅｃｎｉｐｌａｓｔ（登録商標）の個別に換気されたポリカーボネート（Ｍａｃｒｏｌｏｎ（登録商標））ケージ（ＩＶＣ）に収容され、食餌と酸性水に自由にアクセスできる。全身麻酔下、マウスに〜（約）１０^７個のＴＡＭＲ−１、ＴＡＭＲ−７、またはＴＡＭＲ−８細胞を側腹部に皮下的に、または***脂肪体の中のいずれかに注射する。

単剤療法における抗腫瘍効果を詳しく調べるために、ＭＭ−１２１または媒体対照（１００μＬ）を、３日毎に腹腔内注入によって、６００μｇ／マウス（ＰＢＳ中の６ｍｇ／ｍＬ溶液としてＭＭ−１２１）で、担癌マウス（すなわち、細胞注入後の腫瘍成長の１４日後）に与える。対照マウスは、ＰＢＳ媒体のみを受ける。効果を、抗体で処置されたマウスと媒体対照マウスとの間の腫瘍成長を比較することによって決定し、中央相対腫瘍体積の実験対対照比（Ｔ／Ｃ値）で表す。５０％を下回る最小Ｔ／Ｃ値が、治療が有効であると評価するための前提条件である。対照群および実験群はそれぞれ、それぞれ１つの腫瘍を担持する１０匹のマウスを含有する。無作為化のために同様の大きさの腫瘍を担持するマウスを３０匹得るために、４０匹のマウスが１つの腫瘍を片側に移植される。

マウスを無作為化し、十分な数の個々の腫瘍が約２００ｍｍ^３の体積に成長した時点で処置を開始する。腫瘍をデジタルカリパス測定によって測定し（Ｌ×Ｗ）、式π／６（Ｗ^２×Ｌ）を用いて腫瘍体積を計算する。最初の用量は、０日目（無作為化当日）または１日後のいずれかに投与される。

最終用量の投与から約２４時間後、すべてのマウスを出血させて血清を調製し、加えて、急速冷凍およびパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）のために同一のマウスから腫瘍を収集する（それぞれ１／２腫瘍）。

動物実験の規則に従って、腫瘍体積が１８００ｍｍ^３を超える場合（１腫瘍／マウス）、マウスを屠殺する。マウスの腫瘍がそのサイズに成長するまでであるが、６０日を超えない間、マウスを監視および投薬する。その後、マウスを試料収集のために屠殺する。

研究の最後に、最終用量の投与から約２４時間後、研究対象のすべてのマウスを舌下出血させて、血清調製用の最大量の血液を得る。血清を、２つの試験管にそれぞれ約２５０μＬで分注する。

さらに、すべてのマウス由来の腫瘍を即刻切除して、液体窒素中で急速冷凍し（半分の腫瘍、試料を保存するためのＣＯＶＡＲＩＳバッグが提供される）、１０％緩衝ホルマリン中で２４時間未満固定した後、脱水およびパラフィン包埋する（半分の腫瘍）。

動物の体重および腫瘍の直径（ＷおよびＬ）を１週間に２回測定し、腫瘍体積を式π／６（Ｗ^２×Ｌ）を用いて計算する。腫瘍成長曲線をプロットする。２倍増および４倍増時間の腫瘍阻害および絶対成長遅延を計算する。

実質的に記載の通りに行われた実験の結果は、ＭＭ−１２１による治療が腫瘍成長を阻害または停止させ、いくつかの例では腫瘍の大きさを減少させることを示す。

実施例２：生体外でのＨＲＧ誘発ＥＲリン酸化のＭＭ−１２１阻害
ＭＣＦ７細胞は、未処理またはＭＭ−１２１（２５０ｎＭ）で１時間、前処理されるかのいずれかである。次いで、細胞は、ヘレグリンβ１（ＥＧＦドメイン、１０ｎＭ Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、ベータセルリン（２０ｎＭ、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはエストロゲン（βエストラジオール−１００ｎＭ、Ｓｉｇｍａ）で３０分間刺激されるか、または刺激されないままである。細胞のライセートを、ｐＥＲおよびｐＥｒｂＢ３に関してプローブしたウエスタンブロットにより分析する。

ＭＭ−１２１がエストロゲン受容体のヘレグリン誘発活性化を減少させる能力を示すために、上述の方法またはその慣用的な変形を使用して、ＥＲ^＋、ＰＲ^＋、ＥｒｂＢ２^＋癌細胞系ＭＣＦ７で処置法を試験した。細胞は、未処理またはＭＭ−１２１で前処理されるかのいずれかであった。未処理および前処理した細胞を、ヘレグリン、ベータセルリン、またはエストロゲンで刺激した。ＥｒｂＢ３およびエストロゲン受容体のリン酸化形態に関して、ウエスタンブロットにより細胞ライセートを分析した。

図１（ウエスタンブロット）および図２（図１のデータの密度測定）に示されるように、未処理のヘレグリン刺激細胞およびより少ない程度（約２／３少ない）の未処理のベータセルリン刺激細胞は、エストロゲン受容体およびＥｒｂＢ３の両方のリン酸化を呈した。逆に、ＭＭ−１２１で前処理されたヘレグリン刺激細胞は、ｐＥｒｂＢ３およびｐＥＲの量に実質的な（約２／３）減少を呈した。結果は、エストロゲン受容体のヘレグリン誘発活性化は、ＥｒｂＢ３によって媒介され、ＭＭ−１２１が、この様式のエストロゲン受容体活性化を阻害することができることを示す。意外にも、ヘレグリン刺激は、エストロゲンよりも高いレベルのＥＲリン酸化を劇的に（少なくとも４倍）誘発した。

実施例３：ＭＭ−１２１との同時投与によるアロマターゼ阻害剤に対する反応性の回復および／または耐性の防止
アロマターゼ阻害剤（ＡＩ）治療は、患者によって良好に忍容され、療法は、比較的長期間有効である。しかしながら、ＡＩ治療に最初に応答する患者は、薬物に耐性となる可能性がある。ＡＩ耐性のメカニズムを検証するために、ＥＲ＋の閉経後の乳癌に対応する異種移植片モデルが開発された。卵巣摘出された無胸腺マウスにおいてエストロゲン生成の非卵巣源を提供するために、この腫瘍内アロマターゼ異種移植片モデルの腫瘍を、ヒト胎盤アロマターゼ遺伝子を安定的にトランスフェクトしたＭＣＦ７ヒト***腺癌細胞から成長させる（ＭＣＦ−７ＣＡ、例えば、Ｂｒｏｄｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ８８４ｓ Ｖｏｌ．１１，８８４ｓ −８８８ｓ，Ｊａｎｕａｒｙ１５，２００５（Ｓｕｐｐｌ．）を参照）。その増殖および腫瘍形成を刺激するために、十分なエストロゲンがＭＣＦ７−ＣＡ細胞によって（注入されたアンドロステンジオンの芳香族化から）生成される。これは、アロマターゼを発現する腫瘍を有する閉経後の乳癌患者のモデルであり、ゴナドトロピンフィードバック制御を含まない。

ＭＣＦ−７ＣＡ腫瘍：
ＭＣＦ−７ＣＡ細胞を、５％のウシ胎児血清およびネオマイシンを含有するイーグル最小必須培地中で培養した。培養培地を週２回交換した。サブコンフルエントのＭＣＦ−７ＣＡ細胞をハンクス液の中にかき落とし、４℃で２分間、１，０００ｒｐｍで遠心分離した。次いで、細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）（１０ｍｇ／ｍｌ）に再懸濁し、２〜５×１０^７細胞／ｍｌの細胞懸濁液を作製した。４〜６週齢の卵巣摘出した雌のＢＡＬＢ／ｃ無胸腺マウス（体重２０〜２２ｇ）が、光と湿度が制御された状態下、病原体のいない環境に収容され、食餌と水を自由に摂取した。それぞれのマウスは、０．１ｍｌの細胞懸濁液を皮下的に（ｓ．ｃ．）接種された。次いで、動物は、０．１ｍｇのアンドロステンジオン／マウスを毎日ｓ．ｃ．注射された。成長速度は、カリパスで毎週腫瘍を測定することにより決定された。腫瘍体積は、球体（４／３ｒ１２．ｒ２）の式に従い計算された。腫瘍が測定可能な大きさに達したとき、マウスを同じ腫瘍体積（３００ｍｍ^３）の１０匹の動物群に分けた。マウスを０．３％のヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）中の０．１ｍｌの化合物で６週間処置した。

レトロゾール耐性モデルにおけるレトロゾール対レトロゾール＋ＭＭ１２１
レトロゾール耐性異種移植モデルにおいて、レトロゾールと併用したＭＭ−１２１の有効性を示すために、腫瘍担持マウスを上述のように調製し、それぞれ１０匹のマウスの３つの群と、１群３０匹のマウスに無作為化し、それぞれの群は、類似する大きさの腫瘍分布を有するマウスを含んだ。耐性の発現が予想される期間中の初期処置において、１つの群は、対照としてＰＢＳ、Ｑ３Ｄ、腹腔内投与で処置され、１つの群は、ＭＭ−１２１単独（３日毎に２ｍｌのＰＢＳ中６００μｇ／マウスのＭＭ１２１腹腔内投与）で処置され、３０匹のマウス群は、レトロゾール単独（１０μｇ／マウス／日）で処置され、最後の群は、レトロゾールとＭＭ−１２１の両方で処置された。腫瘍は毎週測定され、腫瘍体積が計算された。腫瘍が約１４００〜１７００ｍｍ^３を超える体積に成長し続けた場合、マウスを犠牲死させた。レトロゾール単独で処置されたマウス群の腫瘍が耐性となり、体積が約６００ｍｍ^３を超えたとき、それぞれ１０匹のマウスの３つの群に細分した。これらの耐性腫瘍に対するＭＭ−１２１併用療法の効果を検証するために、これらの３つの群の処置を次のように継続した：１つの群はレトロゾール（１０μｇ／マウス／日）単独を受容し続け、１つの群は、毎日のレトロゾールの受容が停止され、ＭＭ−１２１（６００μｇ Ｑ３Ｄ、腹腔内投与）単独で処置され、１つの群は、レトロゾール（１０μｇ／マウス／日）とＭＭ−１２１（６００μｇ Ｑ３Ｄ、腹腔内投与）の併用で処置された。

結果を図３に示す。本明細書に示されるように、ＭＭ−１２１処置（三角形）およびＰＢＳのみの対照（正方形）マウスの腫瘍は、これらの群の最終測定であった５週間にわたって急速に成長した。腫瘍成長は、レトロゾール処置のみ（逆矢印）を受容した３つの群、およびＭＭ−１２１とレトロゾール（ひし形）の併用処置を受容した群ではゆっくり進行した。

レトロゾール処置を受容したマウス群におけるレトロゾール耐性は、腫瘍体積が６００ｍｍ^３に増加する時点と定義された。この腫瘍体積は、約１４週の毎日のレトロゾール処置後、レトロゾールのみを受容する群で到達した。レトロゾール単独またはＭＭ−１２１単独のいずれかを受容するマウスの腫瘍は、経時的に体積が増加し続けたが、ＭＭ−１２１とレトロゾールの併用を受容するマウスの腫瘍は、６００ｍｍ^３耐性閾値をはるかに下回って減少し、残りの研究（１９週）を通して減少体積を維持し、よって、併用処置が獲得レトロゾール耐性を克服することを示す。

レトロゾールのみを受容したマウスとは対照的に、処置の開始からレトロゾールとＭＭ−１２１の両方を受容した群（ひし形）は、レトロゾール耐性腫瘍を発現せず（即ち、腫瘍は一度も６００ｍｍ^３の体積に達しなかった）、よって、併用処置がレトロゾール耐性の発現を防止することを示す。

実施例４：ＭＭ−１２１のｍＴＯＲ阻害剤およびアロマターゼ阻害剤との同時投与
ＥＲ＋乳癌の治療において、ＭＭ−１２１＋エキセメスタン＋エベロリムスの３種併用がエキセメスタン単独またはエベロリムスとエキセメスタンの併用のいずれかよりも有効であるか否かを示すために、患者をＭＭ−１２１のみ、エキセメスタンのみ、エベロリムスのみ、エベロリムスとエキセメスタンの併用、およびＭＭ−１２１とエベロリムスとエキセメスタンの併用で投薬する。ＭＭ−１２１は、例えば、第１週目に４０ｍｇ／ｋｇの負荷量で、続いて週１回静脈内点滴として６０分にわたって投与される２０ｍｇ／ｋｇの毎週維持量で投薬され、エキセメスタンは、１日１回経口的に投与される２５ｍｇで投薬され、エベロリムスは、１日１回経口的に投与される１０ｍｇで投薬される。患者は、かれらの疾病の放射線学的および臨床的進行が記述されるまで治療される。結果は、ＭＭ−１２１＋エキセメスタン＋エベロリムスの３種併用がＥＲ＋乳癌患者の治療においてエキセメスタン単独またはエベロリムスとエキセメスタンの併用よりも有効であることを示す。

等価物
当業者であれば、日常の実験のみを用いて、本明細書に記載される特定の実施形態の多くの等価物を認識するか、または解明することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。従属の特許請求の範囲に開示される実施形態の任意の組み合わせは、本発明の範囲内であると企図される。

参照による組み込み
本明細書において言及されるあらゆる発行済みの特許、特許出願、および出版物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列一覧の要約

Claims (60)

1. エストロゲン受容体陽性または陰性のホルモン不応性乳癌を治療するためのＥｒｂＢ３阻害剤。
2. エストロゲン受容体陽性または陰性のホルモン不応性乳癌細胞の成長を抑制する方法であって、前記細胞を有効量のＥｒｂＢ３阻害剤と接触させることを含む、方法。
3. 患者におけるエストロゲン受容体陽性または陰性のホルモン不応性乳癌腫瘍の成長を抑制する方法であって、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を前記患者に投与することを含む、方法。
4. エストロゲン受容体陽性または陰性のホルモン不応性乳癌腫瘍に対して患者を治療する方法であって、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を前記患者に投与することを含む、方法。
5. 患者における乳癌腫瘍を治療する方法であって、
   エストロゲン受容体陽性または陰性のホルモン不応性乳癌腫瘍を有する患者を選択することと、
   有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を前記患者に投与すること
   とを含む、方法。
6. 前記ＥｒｂＢ３阻害剤が、抗ＥｒｂＢ３抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記抗ＥｒｂＢ３抗体が、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を含む、請求項６に記載の方法。
8. 前記抗ＥｒｂＢ３抗体が、それぞれ配列番号４２および４３に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を含む、請求項６に記載の方法。
9. 抗ＥｒｂＢ３抗体が、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号３〜５に示されるＶ_ＨＣＤＲ１、２、および３配列と、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号６〜８に示されるＶ_ＬＣＤＲ１、２、および３配列とを含む、請求項６に記載の方法。
10. ＥｒｂＢ３阻害剤ではない少なくとも１つの追加の抗癌剤の有効量を前記患者に同時投与することをさらに含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、少なくとも１つの化学療法薬を含む、請求項１０に記載の方法。
12. 前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、白金系化学療法薬、タキサン、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼ阻害剤、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥｒｂＢ２抗体、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１０に記載の方法。
13. 前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、ＥＧＦＲ阻害剤を含む、請求項１０に記載の方法。
14. 前記ＥＧＦＲ阻害剤が、抗ＥＧＦＲ抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
15. 前記抗ＥＧＦＲ抗体が、セツキシマブを含む、請求項１４に記載の方法。
16. 前記ＥＧＦＲ阻害剤が、ＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤である、請求項１３に記載の方法。
17. 前記ＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤が、アファチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、ペリチニブ、エルロチニブ、ＰＫＩ−１６６、ＰＤ１５８７８０、およびＡＧ １４７８から成る群から選択される、請求項１６に記載の方法。
18. 前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、ＶＥＧＦ阻害剤を含む、請求項１０に記載の方法。
19. 前記ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体を含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記抗ＶＥＧＦ抗体が、ベバシズマブである、請求項１９に記載の方法。
21. 前記ホルモン不応性乳癌が、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
22. エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方を同時投与することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
23. 前記エストロゲン受容体拮抗薬が、ラロキシフェン、タモキシフェン、アフィモキシフェン（４−ヒドロキシタモキシフェン）、アルゾキシフェン、ラソフォキソン（lasofoxone）、トレミフェン、およびフルベストラントから選択され、前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールから選択される、請求項２２に記載の方法。
24. 前記アロマターゼ阻害剤が、レトロゾールである、請求項２２に記載の方法。
25. ｍＴＯＲ阻害剤およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方を同時投与することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
26. 前記ｍＴＯＲ阻害剤が、テムシロリムス、エベロリムス、シロリムス、およびリダフォロリムスから選択され、前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールから選択される、請求項２５に記載の方法。
27. 前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタンである、請求項２６に記載の方法。
28. 前記ｍＴＯＲ阻害剤が、エベロリムスである、請求項２６に記載の方法。
29. 腫瘍細胞内のエストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化を阻害する方法であって、
    （１）悪性腫瘍に対して抗エストロゲン療法で治療され、そのような療法に耐性となったヒト患者を選択することであって、前記患者が悪性腫瘍を有し、前記腫瘍が、前記患者が耐性となった後に前記患者から採取された腫瘍生検材料の分析により、エストロゲン受容体陽性でありかつＨＥＲ２を過剰発現し、前記活性化がエストロゲン受容体のリン酸化を含むことと、
    （２）そのように選択された前記患者に、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗体を投与することであって、前記抗体が、生体外でＭＣＦ７細胞内のヘレグリン誘発エストロゲン受容体リン酸化を少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、または少なくとも７０％阻害するのに十分な濃度である、前記患者の血流中の前記抗体の濃度をもたらす用量で投与され、前記用量での前記投与が前記腫瘍を治療するのに有効であること
    とを含む、方法。
30. 前記悪性腫瘍が、***、卵巣、肺、または皮膚の腫瘍である、請求項２９に記載の方法。
31. 前記ＨＥＲ２の過剰発現が、ＨＥＲ２^＋＋もしくはＨＥＲ２^＋＋＋またはＨＥＲ２ＦＩＳＨ陽性を試験する前記腫瘍生検によって示される、請求項２９に記載の方法。
32. 前記抗エストロゲン療法が、エストロゲン受容体遮断剤を用いた治療およびアロマターゼ阻害剤を用いた治療のいずれか、または両方である、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記投与が、静脈内注射または点滴によるものである、請求項３２に記載の方法。
34. 前記抗体が、抗ＥｒｂＢ２抗体である、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
35. 前記抗体が、抗ＥｒｂＢ３抗体である、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の方法。
36. 前記抗体が、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を含む、請求項３５に記載の方法。
37. 前記抗ＥｒｂＢ３抗体が、それぞれ配列番号４２および４３に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域を含む、請求項３５に記載の方法。
38. 前記抗体が、抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体である、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の方法。
39. 前記二重特異性抗体が、ＡＬＭ、Ａ５−ＨＳＡ−ＭＬ３．９、Ａ５−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２、Ｂ１２−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２、Ａ５−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、Ｈ３−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、Ｆ４−ＨＳＡ−Ｆ５Ｂ６Ｈ２、およびＨ３−ＨＳＡ−Ｂ１Ｄ２から成る群から選択される、請求項３８に記載の方法。
40. 前記抗体の前記投与が、前記腫瘍の成長、侵襲性、および転移のうちの１つ以上を阻害する、請求項２９〜３９のいずれか１項に記載の方法。
41. エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方の同時投与をさらに含む、請求項２９〜４０のいずれか１項に記載の方法。
42. 前記エストロゲン受容体拮抗薬が、ラロキシフェン、タモキシフェン、アフィモキシフェン（４−ヒドロキシタモキシフェン）、アルゾキシフェン、ラソフォキソン、トレミフェン、およびフルベストラントから選択され、前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールから選択される、請求項４１に記載の方法。
43. 前記アロマターゼ阻害剤が、レトロゾールである、請求項４２に記載の方法。
44. エストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化を阻害するための組成物であって、前記阻害が、悪性腫瘍に対して抗エストロゲン療法で治療され、そのような療法に耐性となったヒト患者を選択することに続き、前記患者が悪性腫瘍を有し、前記腫瘍が、前記患者が耐性となった後に前記患者から採取された腫瘍生検材料の分析により、エストロゲン受容体陽性でありかつＥｒｂＢ２を過剰発現し、前記活性化がエストロゲン受容体のリン酸化を含み、前記組成物がＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ３抗体を含む、組成物。
45. エストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化を阻害するための組成物であって、前記阻害が、悪性腫瘍に対して抗エストロゲン療法で治療され、そのような療法に耐性となったヒト患者を選択することに続き、前記患者が悪性腫瘍を有し、前記腫瘍が、前記患者が耐性となった後に前記患者から採取された腫瘍生検材料の分析により、エストロゲン受容体陽性でありかつＥｒｂＢ２を過剰発現し、前記活性化がエストロゲン受容体のリン酸化を含み、前記組成物が、ＥｒｂＢ２に結合してＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２抗体を含む、組成物。
46. 前記抗ＥｒｂＢ２抗体が、ペルツズマブである、請求項４５に記載の組成物。
47. エストロゲン受容体のヘレグリン媒介活性化を阻害するための組成物であって、前記阻害が、悪性腫瘍に対して抗エストロゲン療法で治療され、そのような療法に耐性となったヒト患者を選択することに続き、前記患者が悪性腫瘍を有し、前記腫瘍が、前記患者が耐性となった後に前記患者から採取された腫瘍生検材料の分析により、エストロゲン受容体陽性でありかつＥｒｂＢ２を過剰発現し、前記活性化がエストロゲン受容体のリン酸化を含み、前記組成物がＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体を含む、組成物。
48. ホルモン不応性エストロゲン受容体陽性癌を治療するための組成物であって、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ３抗体を含む、組成物。
49. ホルモン不応性エストロゲン受容体陽性癌を治療するための組成物であって、ＥｒｂＢ２に結合してＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２抗体を含む、組成物。
50. エストロゲン受容体拮抗薬およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方と同時投与するための、請求項４４〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
51. 前記抗ＥｒｂＢ２抗体が、ペルツズマブである、請求項４５に記載の組成物。
52. ホルモン不応性エストロゲン受容体陽性癌を治療するための組成物であって、ＥｒｂＢ２／ＥｒｂＢ３ヘテロ二量体へのヘレグリンの結合を阻害する抗ＥｒｂＢ２／抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体を含む、組成物。
53. 前記エストロゲン受容体拮抗薬が、ラロキシフェン、タモキシフェン、アフィモキシフェン（４−ヒドロキシタモキシフェン）、アルゾキシフェン、ラソフォキソン、トレミフェン、およびフルベストラントから選択され、前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールから選択される、請求項５０に記載の組成物。
54. 前記アロマターゼ阻害剤が、レトロゾールである、請求項５３に記載の組成物。
55. 前記二重特異性抗体が、配列番号４４を含む抗体である、請求項３８に記載の方法。
56. 前記二重特異性抗体が、配列番号４４を含む抗体である、請求項４７または５２に記載の組成物。
57. ｍＴＯＲ阻害剤およびアロマターゼ阻害剤のいずれか、または両方と同時投与するための、請求項４４〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
58. 前記ｍＴＯＲ阻害剤が、テムシロリムス、エベロリムス、シロリムス、およびリダフォロリムスから選択され、前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタン、およびファドロゾールから選択される、請求項５７に記載の組成物。
59. 前記アロマターゼ阻害剤が、エキセメスタンである、請求項５８に記載の方法。
60. 前記ｍＴＯＲ阻害剤が、エベロリムスである、請求項５８に記載の方法。

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