JP2014178403A - デジタル顕微鏡装置、情報処理方法、および情報処理プログラム - Google Patents

Abstract

【課題】適切にシェーディング補正係数を得ることが出来る情報処理装置、情報処理方法、および情報処理プログラムを提供する。
【解決手段】照明光を出射する照明光学系と、前記照明光を透過可能な開口部を有し、この開口部の位置に合わせてプレパラートを載置可能なステージと、前記照明光学系と前記ステージを挟んで対向して配置され、像を拡大する対物レンズと、この対物レンズにより拡大された像を撮像する撮像素子とを含む拡大撮像部と、前記プレパラートの前記開口部を開放させ、前記照明光学系の結像点を前記拡大撮像部の前記対物レンズの焦点に合わせた状態で、前記照明光学系より前記照明光を出射させ、前記拡大撮像部の前記撮像素子に結像した像を白画像として取得する白画像取得部と、撮像された前記白画像を用いてシェーディング補正係数を算出する算出部とを具備する。
【選択図】図３

Description

本技術は、デジタル顕微鏡装置におけるシェーディング補正に関する。

デジタル顕微鏡装置において、病理スライド（プレパラートＰＲＴ）から病理画像を取得する際に、シェーディング補正を適切に行うことは重要である。シェーディング補正を適切に行う為には、シェーディング補正用に、生体サンプルＳＰＬの写っていない画像（以下、全白画像または白画像という）を適切に撮像することが重要である。

シェーディング補正を行う際に全白画像を撮像する方法として、ステージ上に試料を配置せずに全白画像を撮像することで、光源、照明光学系、結像光学系の全てのムラ要因だけが重畳された全白画像を得る方法が開示されている（例えば、特許文献１参照）。

また、デジタル顕微鏡装置が撮像する病理スライドの病理画像におけるコントラストの不適切な低下を防ぐ為には、照明光学系が適切に合焦していなければならない。

そこで、位相差ＡＦ（オートフォーカス）方式を用いて、照明光学系を自動的かつ適切に合焦させる技術がある（例えば、特許文献２参照）。

特開２０１１−１２４９４８号公報 特開２０１２−８４５０号公報

しかし、デジタル顕微鏡装置では、大量の検体の画像を可及的に高い品質でかつ高速に取得したいという要望があるものの、未だ十分な解決には至っていない。

以上のような事情に鑑み、本技術の目的は、大量の検体の画像を可及的に高い品質でかつ高速に取得することのできるデジタル顕微鏡装置、情報処理方法、および情報処理プログラムを提供することにある。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るデジタル顕微鏡装置は、照明光を出射する照明光学系と、前記照明光を透過可能な開口部を有し、この開口部の位置に合わせてプレパラートを載置可能なステージと、前記照明光学系と前記ステージを挟んで対向して配置され、像を拡大する対物レンズと、この対物レンズにより拡大された像を撮像する撮像素子とを含む拡大撮像部と、前記ステージの前記開口部を開放させ、前記照明光学系の結像点を前記拡大撮像部の前記対物レンズの焦点に合わせた状態で、前記照明光学系より前記照明光を出射させ、前記拡大撮像部の前記撮像素子に結像した像を白画像として取得する白画像取得部と、撮像された前記白画像を用いてシェーディング補正係数を算出する算出部とを具備する。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るデジタル顕微鏡装置では、前記拡大撮像部のデフォーカス情報を検出するデフォーカス検出部と、前記照明光学系の光軸方向の位置を調整する調整部とを更に具備し、前記白画像取得部は、前記デフォーカス情報をもとに、前記照明光の視野絞りの像が前記拡大撮像部の前記撮像素子の前記撮像面に結像するように前記調整部を動作させる構成でもよい。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るデジタル顕微鏡装置では、前記調整部による前記調整は、前記照明光学系を、前記ステージ上に前記プレパラートが載置されている状態での位置から、所定量だけ前記ステージ側へ移動させることにより行われる構成でもよい。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るデジタル顕微鏡装置では、前記白画像取得部は、前記移動のとき、前記ステージを、前記プレパラートが載置されている状態での位置から、前記所定量だけ同方向へ移動させる構成でもよい。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るデジタル顕微鏡装置では、前記所定量は、以下の数式で求めてもよい。
ｄ（ｎ−１）／ｎ （但し、ｄは前記プレパラートの厚み、ｎは前記プレパラートの屈折率）

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るデジタル顕微鏡装置では、前記白画像取得部は、前記ステージ上に前記プレパラートが載置された状態での前記拡大画像撮像時に設定する前記照明光の強度を第１の強度として、前記白画像撮像時の前記照明光の強度を、前記第１の強度より低い第２の強度に設定する構成でもよい。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係る情報処理方法では、白画像取得部が、照明光学系からの照明光を透過する開口部を有し当該開口部に跨がるようにプレパラートを載置可能なステージ上に前記プレパラートが載置されていない状態で、前記照明光学系の視野絞りの像が、前記ステージ上の所定の領域の拡大像を撮像する撮像部の撮像素子の撮像面に結像するように、前記照明光学系の焦点位置を調整する調整部に前記照明光学系の焦点位置を調整させ、前記撮像部に、前記拡大像を白画像として撮像させ、算出部が、撮像された前記白画像に基づきシェーディング補正係数を算出する。

上記目的を達成するため、本技術の一形態に係る情報処理プログラムは、照明光学系からの照明光を透過する開口部を有し当該開口部に跨がるようにプレパラートを載置可能なステージ上に前記プレパラートが載置されていない状態で、前記照明光学系の視野絞りの像が、前記ステージ上の所定の領域の拡大像を撮像する撮像部の撮像素子の撮像面に結像するように、前記照明光学系の焦点位置を調整する調整部に前記照明光学系の焦点位置を調整させ、前記撮像部に、前記拡大像を白画像として撮像させる白画像取得部および撮像された前記白画像に基づきシェーディング補正係数を算出する算出部としてコンピュータを機能させる。

以上のように、本技術によれば、大量の検体の画像を可及的に高い品質でかつ高速に取得することが出来る。

本実施形態に係るデジタル顕微鏡装置１００の全体構成を示したブロック図である。 統合制御部５１において、制御を実現するための機能を示した機能ブロック図である。 本実施形態のデジタル顕微鏡装置１００における、シェーディング補正用の補正係数を算出するまでの処理の流れと、個々の拡大画像の撮像からシェーディング補正までの処理の流れについて説明するフローチャートである。 白画像のＸ方向における輝度情報の分布を表したグラフである。 白画像の各ピクセルのＲＧＢ輝度値に、シェーディング補正係数ＬＲ、ＬＧ、ＬＢをそれぞれ掛けることにより、各ピクセルの輝度値がターゲット輝度値Ｌとなる様子を示すグラフである。 撮像された拡大画像のＸ方向の輝度分布の例を示すグラフである。 図６に示した輝度分布をシェーディング補正した結果を示すグラフである。 白画像撮像時（プレパラートＰＲＴ無し、図左側）には、拡大画像撮像時（プレパラート有り、図右側）と比べて、コンデンサレンズ２２ａ、光源２１、およびステージ４０のＺ方向の位置がΔＺだけ対物レンズ２３側に移動している様子を示す図である。

以下、本技術に係る実施形態を、図面を参照しながら説明する。
＜第１の実施形態＞
図１は、本実施形態に係るデジタル顕微鏡装置１００の全体構成を示したブロック図である。

［概要］
本技術では、シェーディング補正用の白画像を撮像する際、顕微鏡のステージの開口部上にプレパラートが無い状態で撮像する。プレパラートが無いと、プレパラートを構成するスライドガラスが無い分、光源から撮像素子までの光路長が変わってくる。そのため、ステージ上にプレパラートが無い状態で照明光学系の焦点位置をピントが合うように調整する。それ故、照明光学系のピントが合った状態で白画像を適切に撮像することが出来、適切に撮像された白画像に基づくことにより、適切にシェーディング補正を行うことが出来る。

［全体構成］
このデジタル顕微鏡装置１００は、俯瞰画像撮像部１０と、拡大画像撮像部（撮像部）２０と、位相差像撮像部３０と、ステージ４０と、制御部５０とを有する。

俯瞰画像撮像部１０は、生体サンプルＳＰＬが配設されるプレパラートＰＲＴ全体の画像（以下、この画像を「俯瞰画像」と称する。）を撮像する。

拡大画像撮像部２０は、生体サンプルＳＰＬが所定倍率で拡大された画像（以下、この画像を「拡大画像」と称する。）を撮像する。

位相差像撮像部３０は、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３の焦点とプレパラートＰＲＴ上の生体サンプルＳＰＬとの光軸方向のずれの量と向きをデフォーカス量として検出する。また、位相差像撮像部３０は、コンデンサレンズ２２ａの光軸方向のずれの量と向きをデフォーカス量として検出する。

ステージ４０は、プレパラートＰＲＴを載置して俯瞰画像撮像部１０による撮像位置および拡大画像撮像部２０による撮像位置に移動させるためのものである。ステージ４０は、ステージ駆動機構４１により、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３の光軸の方向（Ｚ軸方向）と、光軸の方向に対して直交する方向（Ｘ軸−Ｙ軸方向）に移動自在とされている。

なお、プレパラートＰＲＴは、血液等の結合組織、上皮組織又はそれらの双方の組織などの組織切片又は塗抹細胞からなる生体サンプルＳＰＬを、所定の固定手法によりスライドガラスに固定したものである。これらの組織切片又は塗抹細胞には、必要に応じて各種の染色が施される。この染色には、ＨＥ（ヘマトキシリン・エオシン）染色、ギムザ染色、パパニコロウ染色、チール・ネールゼン染色、グラム染色等に代表される一般染色のみならず、ＦＩＳＨ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎ−Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）や酵素抗体法等の蛍光染色が含まれる。

また、このデジタル顕微鏡装置１００には、サンプルＳＰＬを含むプレパラートＰＲＴを蓄積し、蓄積されたプレパラートＰＲＴを一つずつステージ４０の上にローディングするプレパラートストック・ローダ７０が付設されている。なお、プレパラートストック・ローダ７０はデジタル顕微鏡装置１００に組み込まれたものであってもよい。

次に、上述の俯瞰画像撮像部１０と、拡大画像撮像部２０と、位相差像撮像部３０の詳細について説明する。

［俯瞰画像撮像部１０］
俯瞰画像撮像部１０は、図に示したように、光源１１と、対物レンズ１２と、撮像素子１３とを有する。

光源１１は、ステージ４０のプレパラート配置面とは逆の面側に設けられる。

俯瞰画像撮像部１０には、プレパラートＰＲＴに貼付されたラベルに記載されている付帯情報を撮像するための光を照射するラベル光源（図示せず）が別途設けられていてもよい。

対物レンズ１２は、プレパラートＰＲＴ配置面における俯瞰画像撮像部１０の基準位置の法線を光軸ＳＲとして、ステージ４０のプレパラートＰＲＴ配置面側に配設される。ステージ４０上に載置されたプレパラートＰＲＴを透過した透過光は、この対物レンズ１２によって集光されて、対物レンズ１２の後方（すなわち、照明光の進行方向）に設けられた撮像素子１３に結像する。

撮像素子１３には、ステージ４０のプレパラート配置面に載置されたプレパラートＰＲＴ全体を包括する撮影範囲の光（換言すれば、プレパラートＰＲＴ全体を透過した透過光）が結像する。この撮像素子１３上に結像した像が、プレパラートＰＲＴ全体を撮像した顕微鏡画像である俯瞰画像となる。

［拡大画像撮像部］
拡大画像撮像部２０は、図に示したように、光源２１と、コンデンサレンズ（照明光学系）２２と、対物レンズ２３と、撮像素子２４と、コンデンサレンズ駆動機構２５を有する。

光源２１は、照明光を照射するものである。光源２１はステージ４０のプレパラート配置面とは逆の面側に設けられる。

コンデンサレンズ２２ａは、光源２１から照射された照明光を集光して、ステージ４０上のプレパラートＰＲＴに導くレンズである。このコンデンサレンズ２２ａは、プレパラートＰＲＴ配置面における拡大画像撮像部２０の基準位置の法線を光軸ＥＲとして、光源２１とステージ４０との間に配設される。

なお、図１に示されないが、光源２１とコンデンサレンズ２２ａとの間には、光源２１から出射した照明光を集光する集光光学系２２ｃ、視野絞り２２ｂなども設けられる。
以降、上記の集光光学系２２ｃ、視野絞り２２ｂおよびコンデンサレンズ２２ａを「照明光学系」と呼ぶ。

コンデンサレンズ駆動機構２５は、コンデンサレンズ２２ａを光軸ＥＲ方向に沿って駆動することによって、コンデンサレンズ２２ａの光軸ＥＲ上の位置を変える。

対物レンズ２３は、プレパラートＰＲＴ配置面における拡大画像撮像部２０の基準位置の法線を光軸ＥＲとして、ステージ４０のプレパラートＰＲＴ配置面側に配設される。拡大画像撮像部２０では、この対物レンズ２３を適宜交換することで、生体サンプルＳＰＬを様々な倍率に拡大して撮像することが可能となる。ステージ４０上に載置されたプレパラートＰＲＴを透過した透過光は、この対物レンズ２３によって集光されて、対物レンズ２３の後方（すなわち、照明光の進行方向）に設けられた撮像素子２４に結像する。

対物レンズ２３と撮像素子２４との間の光軸ＥＲ上にはビームスプリッター３１が設けられる。ビームスプリッター３１は、対物レンズ２３を透過した透過光の一部を位相差像撮像部３０へと導く。

撮像素子２４には、撮像素子２４の画素サイズ及び対物レンズ２３の倍率に応じて、ステージ４０のプレパラートＰＲＴ配置面上における所定の横幅及び縦幅からなる撮影範囲（以下、小領域と呼ぶ）の像が結像される。なお、対物レンズ２３により生体サンプルＳＰＬの一部が拡大されるため、上述の撮影範囲は、撮像素子１３の撮影範囲に比べて十分に狭い範囲となる。

なお、図１に示されないが、光源２１とコンデンサレンズ２２ａとの間には、光源２１からステージ４０上のプレパラートＰＲＴに照射される照明光の範囲を制限する視野絞り２２ｂ（図８参照）が設けられる。コンデンサレンズ２２ａの焦点を合わせる場合、この視野絞り２２ｂのエッジ部分を目安に焦点位置合わせが行われる。

［位相差像撮像部］
位相差像撮像部３０は、図に示したように、ビームスプリッター３１と、フィールドレンズ３２と、セパレータレンズ３３と、撮像素子３４とを有する。

ビームスプリッター３１は、先に説明したように、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３と撮像素子２４との間の光軸ＥＲ上に設けられており、対物レンズ２３を透過した透過光の一部を反射させる。換言すれば、ビームスプリッター３１によって、対物レンズ２３を透過した光は、撮像素子２４へと向かう反射光と、位相差像撮像部３０内のフィールドレンズ３２へと向かう透過光とに分岐される。

ビームスプリッター３１によって分岐された透過光の進行方向側には、フィールドレンズ３２が設けられる。このフィールドレンズ３２は、ビームスプリッター３１によって分岐された透過光を集光して、フィールドレンズ３２の後方（透過光の進行方向側）に設けられたセパレータレンズ３３へと導く。

セパレータレンズ３３は、フィールドレンズ３２から導光された光束を２つの光束へと分割する。分割された光束は、セパレータレンズ３３の後方（透過光の進行方向側）に設けられた撮像素子３４の結像面に対して、１組の被写体像を形成する。

撮像素子３４には、セパレータレンズ３３を透過した光がそれぞれ結像する。その結果、撮像素子３４の撮像面には、１組の被写体像が形成されることとなる。なお、ここでは２つのセパレータレンズ３３を透過した光は、単一の撮像素子３４において撮像されるとしたが、セパレータレンズ３３を透過した光それぞれを２つの撮像素子３４により撮像する構成でもよい。セパレータレンズ３３には、フィールドレンズ３２を射出した様々な方向の光束が入射するため、形成される１組の被写体像間には、位相差が存在する。以下では、この１組の被写体像を「位相差像」と称する。

なお、以上の説明では、対物レンズ２３と撮像素子２４との間にビームスプリッター３１が設けられる場合について説明したが、光線を分岐するための光線分岐手段はビームスプリッターに限定されるわけではなく、可動式ミラー等を利用することも可能である。また、拡大画像撮像部２０の鏡筒と位相差像撮像部３０の鏡筒とを切り替える機構を利用することも可能である。

また、前述の説明では、位相差像撮像部３０内の位相差ＡＦ（Auto Focus）光学系としてフィールドレンズ３２、セパレータレンズ３３及び撮像素子３４を有する構成を示したが、かかる例に限定されるわけではない。かかる位相差ＡＦ光学系は、例えば、フィールドレンズ及びセパレータレンズの代わりにコンデンサレンズ及び２眼レンズを利用したりするなど、同等の機能を実現可能なものであれば、他の光学系であってもよい。
また、俯瞰画像撮像部１０、拡大画像撮像部２０及び位相差像撮像部３０それぞれに設けられる撮像素子は、１次元撮像素子であってもよく、２次元撮像素子であってもよい。

また、以上の説明では、位相差像撮像部３０を対物レンズ２３の光軸ＥＲ上に配置し、拡大画像撮像部２０の撮像素子２４をビームスプリッター３１にて分岐された反射光が入射される位置に配置した。しかし、逆に、拡大画像撮像部２０の撮像素子２４を対物レンズ２３の光軸ＥＲ上に配置し、位相差像撮像部３０をビームスプリッター３１にて分岐された反射光が入射される位置に配置してもよい。

［制御部５０］
制御部５０は、統合制御部５１と、照明制御部５２と、ステージ制御部５３と、コンデンサレンズ駆動制御部５４と、位相差像撮像制御部５５と、俯瞰画像撮像制御部５６と、拡大画像撮像制御部５７と、記憶部５８と、現像処理部５９と、画像符号化部６０とを有する。

統合制御部５１は、例えば、ＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）と、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）と、ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）とを含むコンピュータのハードウェア要素で構成される。あるいはＦＰＧＡ（ｆｉｅｌｄ ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ ｇａｔｅ ａｒｒａｙ）などの専用ＩＣによって構成されてもよい。統合制御部５１は、照明制御部５２、ステージ駆動制御部５３、コンデンサレンズ駆動制御部５４、位相差像撮像制御部５５、俯瞰画像撮像制御部５６、拡大画像撮像制御部５７、記憶部５８、現像処理部５９、画像符号化部６０、通信部６１との間で各種信号をやりとりして、検体の拡大像を取得するための様々な演算処理および制御を実行する。ＲＡＭには、そのための各種のプログラムおよびデータがロードされ、ＣＰＵはＲＡＭにロードされたプログラムを実行する。ＲＯＭには、ＲＡＭにロードされるプログラムやデータなどが格納される。

照明制御部５２、ステージ駆動制御部５３、コンデンサレンズ駆動制御部５４、位相差像撮像制御部５５、俯瞰画像撮像制御部５６および拡大画像撮像制御部５７は、例えば、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭなどを含むコンピュータのハードウェア要素で構成されてもよいし、ＦＰＧＡなどの専用ＩＣによって構成されてもよい。

現像処理部５９および画像符号化部６０は、例えば、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭなどを含むコンピュータのハードウェア要素で構成される。あるいはＧＰＵ（Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）によって構成されてもよい。

照明制御部５２は、統合制御部５１から与えられる、検体ＳＰＬの照明方法の指示をもとに光源１１、２１の制御を行う。例えば、照明制御部５２は、統合制御部５１からの指示に従って、光源１１、２１の照明光の強度や、明視野用の光源、暗視野用の光源など、光源の種類の選択等を行う。明視野用の光源としては、例えば、可視光を照明するものなどが想定される。明視野用の光源としては、例えば、特殊染色で用いられる蛍光マーカを励起可能な波長を含む光を照明するものなどが挙げられる。

ステージ駆動制御部５３は、例えば、統合制御部５１から俯瞰画像を撮像する指示が与えられると、プレパラートＰＲＴ全体が撮像素子１３の撮影範囲に入るようにステージ駆動機構４１を駆動して、ステージ面方向（Ｘ―Ｙ軸方向）にステージ４０を移動させる。ステージ制御部５３は、プレパラートＰＲＴ全体に対物レンズ１２の焦点が合うようにステージ駆動機構４１を駆動して、ステージ４０をＺ軸方向に移動させる。

また、ステージ制御部５３は、統合制御部５１から拡大画像を撮像する指示が与えられると、その指示されたサンプルＳＰＬの撮影範囲（小領域）が撮像素子２４の撮影範囲に入るように、ステージ駆動機構４１を駆動して、ステージ面方向（Ｘ―Ｙ軸方向）にステージ４０を移動させる。ステージ制御部５３は、サンプルＳＰＬに対物レンズ２３の焦点が合うように、ステージ駆動機構４１を駆動して、ステージ４０をＺ軸方向に移動させる。

コンデンサレンズ駆動制御部５４は、統合制御部５１からの、光源２１からの照明光の視野絞りのデフォーカス量に関する情報に基づいてコンデンサレンズ駆動機構２５の制御を行うことで、コンデンサレンズ２２ａのピントを合わせ、光源２１からの照明光をサンプルＳＰＬの観察範囲にだけ当たるように調整する。視野絞りに関する情報はデフォーカス量とデフォーカスの向きを含む。これらの情報は、位相差像撮像部３０により生成される一組の位相差像の距離をもとに求められる。

位相差像撮像制御部５５は、位相差像撮像部３０に設けられた撮像素子３４の結像面に結像した一組の位相差像の信号を取得し、統合制御部５１に供給する。統合制御部５１は、その中のメインメモリにロードされたプログラムに従って、位相差像撮像制御部５５より取得した一組の位相差像の距離をもとに、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３の焦点のサンプルＳＰＬに対するデフォーカス量とデフォーカスの向きを算出する。

統合制御部５１は、これらの情報をもとにステージ４０の制御情報を生成し、ステージ制御部５３に供給する。ステージ制御部５３は、統合制御部５１からの制御情報をもとにステージ４０をＺ軸方向に移動させるようにステージ駆動機構４１を駆動する。これにより、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３の焦点をサンプルＳＰＬに合わせる位相差ＡＦが行われる。

俯瞰画像撮像制御部５６は、俯瞰画像撮像部１０の撮像素子１３の結像面に結像した俯瞰画像に対応する信号をもとに当該俯瞰画像に対応するデータを生成して統合制御部５１に供給する。統合制御部５１は、その中のメインメモリにロードされたプログラムに従って、俯瞰画像撮像制御部５６から取得した俯瞰画像からサンプルＳＰＬが存在する領域を特定する処理などを行う。この領域を「小領域」と呼ぶ。

拡大画像撮像制御部５５は、拡大画像撮像部２０の撮像素子２４の結像面に結像した小領域毎の観察像に対応する信号をもとに当該小領域毎の観察像に対応するＲＡＷデータを生成して統合制御部５１に供給する。統合制御部５１は、拡大画像撮像制御部５５より取得した小領域毎のＲＡＷデータを現像処理部５９に供給して現像処理を実行させる。統合制御部５１は、現像処理部５９にて現像された小領域毎の拡大像のデータを接続して検体ＳＰＬ単位の大画像を生成し、生成された検体ＳＰＬ単位の大画像をタイルと呼ばれる所定の解像度の単位に分割する処理などを行う。さらに、統合制御部５１は、生成された各々のタイルを画像符号化部６０に供給して、所定の圧縮符号化形式の画像データを生成させ、記憶部５８に保存させる。

記憶部５８は、デジタル顕微鏡装置１００を制御するための各種設定情報やプログラム、さらには所定の圧縮符号化形式のタイル群などを格納する。

現像部５９は、観察像撮像部２０によって撮像された小領域毎の観察像のＲＡＷデータを現像する。

画像符号化部６０は、タイル毎の画像データを所定の画像圧縮形式に符号化する。ここで、画像圧縮形式として、例えば、ＪＰＥＧ（Ｊｏｉｎｔ Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｅｘｐｅｒｔｓ Ｇｒｏｕｐ）などが採用される。勿論、ＪＰＥＧ以外の圧縮符号化形式が採用されてもよい。

記憶部５８に記憶された各タイルは、通信部６１によってネットワーク６２を通じて画像管理サーバ６３に蓄積される。画像管理サーバ６３は、ビューワ端末６４からのリクエストに応じて該当する１以上のタイルをビューワ端末６４に応答する。ビューワ端末６４は、画像管理サーバ６３より取得した１以上のタイルを用いて表示用の観察像を生成して、ビューワ端末６４の表示部に表示させる。

［拡大画像撮像部の対物レンズのオートフォーカス］
この実施形態のデジタル顕微鏡装置１００には、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３のオートフォーカス方式として、位相差オートフォーカス方式およびコントラストオートフォーカス方式が搭載されている。

位相差オートフォーカス方式を用いる場合、統合制御部５１は位相差像撮像制御部５５に位相差像を撮像させるように指示を出す。位相差像撮像制御部５５は、この指示を受けると、位相差像撮像部３０から、撮像素子３４の撮像面に並んで結像された一組の位相差像の信号を取り込み、２つの位相差像の位相差を求める。

ここで、対物レンズ２３の焦点が適切な面から遠ざかると、２つの位相差像上における観測面の同一の領域は、撮像素子２４の外側方向に向かって互いに離れるように移動する。逆に、対物レンズ２３の焦点が適切な面よりも近くなると、２つの位相差像上における観測面の同一の領域は撮像素子２４の内側方向に向かって互いに近づくように移動する。統合制御部５１は、２つの位相差像上における観測面の同一の領域間の距離を、上記の位相差として求める。

統合制御部５１は、求めた位相差から対物レンズ２３の焦点の観察対象であるサンプルＳＰＬに対するデフォーカス量とデフォーカスの向きを求める。統合制御部５１は、求めたデフォーカス量とデフォーカスの向きをもとにステージ４０の制御情報を生成し、ステージ制御部５３に供給する。ステージ制御部５３は、統合制御部５１からの制御情報をもとにステージ４０をＺ軸方向に移動させるようにステージ駆動機構４１を駆動する。これにより、拡大画像撮像部２０の対物レンズ２３の焦点をサンプルＳＰＬに合わせる位相差オートフォーカスが行われる。

一方、コントラストオートフォーカス方式は、拡大画像撮像部２０を用いて山登り方式で焦点探索を行う方式である。コントラストオートフォーカス方式を用いる場合、統合制御部５１は、対物レンズ２３の焦点位置を所定の距離ずつずらし、各々の焦点位置で拡大画像撮像部２０にサンプルＳＰＬの撮影範囲の撮像を実行させる。統合制御部５１は、撮像された画像の中でコントラストがもっとも高い画像が撮像されたときの焦点位置を最適な焦点位置として判定する。

次に、本実施形態のデジタル顕微鏡装置１００の統合制御部５１に実装されたシェーディング補正に関する機能について説明する。
本実施形態のデジタル顕微鏡装置１００では、ステージの上にプレパラートが載置されていない状態でのシェーディング補正を良好に行うことを目的の一つとする。

プレパラートにはゴミなどの異物も保持されている可能性があり、白画像撮像時とプレパラートＰＲＴの拡大画像撮像時で、ゴミの状態が異なるため、シェーディング補正に悪影響が生じるからである。プレパラートがステージに載置されていない状態でのシェーディング補正を行うことで、ゴミなどの異物による影響を受けることなく、シェーディング補正を良好に行うことができる。しかし、その場合、照明光学系のピント合わせが課題となってくる。

すなわち、白画像の輝度分布は照明光学系のピント状態に依存するため、照明光学系のピントが適切ではない状態で白画像を撮影すると、プレパラートＰＲＴごとにピントが異なるためシェーディング補正が適切に行われないからである。

［統合制御部５１について］
次に、上述した統合制御部５１の詳細について説明する。図２は、統合制御部５１において、上述した照明光学系のピント合わせを実現する機能の構成を示すブロック図である。

同図に示すように、統合制御部５１は、白画像撮像制御部（白画像取得部）５１４、補正係数算出部（算出部）５１５、シェーディング補正部５１６を備える。これらの機能は、統合制御部５１内のＣＰＵがＲＡＭにロードされたプログラムを実行することによって実現される。

白画像撮像制御部５１４は、プレパラートＰＲＴがステージ４０に載置されていない状態でのシェーディング補正を行うために必要な白画像を撮像する制御を行う。ここで、プレパラートＰＲＴがステージ４０に載置されていない状態での白画像の撮像とは、プレパラートＰＲＴの開口部４０ａがプレパラートＰＲＴによって覆われていないため、開口部４０ａを通して光源２１からの照明光の視野絞り２２ｂの像を直接、拡大画像撮像部２０の撮像素子２４により撮像することを言う。このようにして撮像された画像が「白画像」である。

白画像撮像制御部５１４は、より具体的には、プレパラートＰＲＴがステージ４０に載置されていない状態において、位相差像撮像制御部５５に対して位相差像の撮像を指示する。位相差像撮像制御部５５は、位相差像撮像部３０に撮像を実行させる。これにより、位相差像撮像部３０にて、コンデンサレンズ２２ａによって結像された照明光学系の視野絞り２２ｂの像に対する位相差像が得られ、白画像撮像制御部５１４に供給される。白画像撮像制御部５１４は、この位相差像をもとに位相差を算出し、この位相差に応じたデフォーカス情報を生成し、コンデンサレンズ駆動制御部５４に、そのデフォーカス情報に対応した制御情報を出力する。コンデンサレンズ駆動制御部５４は、制御情報をもとにコンデンサレンズ駆動機構２５を駆動する。これにより、コンデンサレンズ２２ａによって結像された照明光学系の視野絞り２２ｂの像に対物レンズ２３の焦点が合わせられる。この後、白画像撮像制御部５１４は、照明制御部５２に光源２１の点灯を指示する一方で、拡大画像撮像制御部５７に拡大画像の撮像を指示することによって、白画像が撮像される。

補正係数算出部５１５は、白画像撮像制御部５１４が撮像した白画像に基づきシェーディング補正係数を算出する。この白画像からのシェーディング補正係数の算出方法は、ステージ４０にプレパラートＰＲＴを載置した状態で撮像された画像からのシェーディング補正係数の算出方法と同じである。本技術は、シェーディング補正係数の算出方法そのものに特徴を有するものではないので、詳細な説明を省くこととする。

シェーディング補正部５１６は、補正係数算出部５１５が算出したシェーディング補正係数に基づき、拡大画像撮像制御部５７が撮像したサンプルＳＰＬの拡大画像に対してシェーディング補正を行う。

なお、補正係数算出部５１５によって算出されたシェーディング補正係数は例えば制御部５０の記憶部５８などに記憶される。シェーディング補正部５１６は、実際にサンプルＳＰＬの拡大画像の撮像時に記憶部５８からシェーディング補正係数を読み出し、拡大画像撮像制御部５７によって撮像されたサンプルＳＰＬの拡大画像に対してシェーディング補正を行う。
以上、統合制御部５１の詳細について説明した。

［全体的な処理の流れについて］
次に、本実施形態のデジタル顕微鏡装置１００における、シェーディング補正用の補正係数を算出するまでの処理の流れと、個々の拡大画像の撮像からシェーディング補正までの処理の流れについて説明する。図３は、本実施形態のデジタル顕微鏡装置１００における、シェーディング補正用の補正係数を算出するまでの処理の流れと、個々の拡大画像の撮像からシェーディング補正までの処理の流れについて説明するフローチャートである。

最初に、白画像を取得して、シェーディング補正用の補正係数を算出するまでの処理について説明する。なお、ここで説明する白画像を取得して、シェーディング補正用の補正係数を算出するまでの処理は、一定以上の頻度で行うことが望ましい。白画像により得られる輝度分布は、温度や迷光の影響などにより変化するためである。

上記の処理をプレパラートストック・ローダ７０がプレパラートＰＲＴを交換するタイミングで行えば、白画像撮像のために、わざわざプレパラートＰＲＴをステージ５０上から取り除く必要が無いので、効率的であり、撮影効率を向上させることが出来る。

まず、最初のステップとして、ステージ制御部５３が、プレパラートＰＲＴの載置されていないステージ４０の開口部４０ａが対物レンズ２３の直下に来るように、ステージ４０を移動させる（ステップＳＴ１）。

ここで言う開口部とは、プレパラートＰＲＴを撮像する際にプレパラートＰＲＴ上のサンプルＳＰＬに撮像用の光を当てるための開口部４０ａに限らない。光源２１から射出し、コンデンサレンズ２２ａを透過し、対物レンズ２３に入射する光を、プレパラートＰＲＴやスライドガラスが遮らない状態であればよい。

次のステップとして、白画像撮像制御部５１４は、位相差像撮像制御部５５に対して位相差像の撮像を指示する。この指示に従って位相差像撮像制御部５５は位相差像撮像部３０に撮像を実行させる。これにより、コンデンサレンズ２２ａにより結像された照明光学系の視野絞り２２ｂの像に対する位相差像が得られる。位相差像撮像制御部５５はこの位相差像を白画像撮像制御部５１４に供給する。白画像撮像制御部５１４は、照明光学系の視野絞り２２ｂの像に対する位相差像をもとに位相差を算出し、この位相差に応じたデフォーカス情報を生成し、コンデンサレンズ駆動制御部５４にデフォーカス情報に対応した制御情報を出力する。コンデンサレンズ駆動制御部５４は制御情報をもとにコンデンサレンズ２２ａを光軸方向に移動させるようにコンデンサレンズ駆動機構２５を制御する。これにより、照明光学系のピントが合わせられる。言い換えれば、対物レンズ２３の焦点に、コンデンサレンズ２２ａによる照明光学系の視野絞り２２ｂの像の結像点が合わせられる（ステップＳＴ２）。

ここでは、照明光学系のピントを合わせる方式として位相差ＡＦを用いたが、コントラストＡＦ方式を用いて照明光学系のピントを合わせるようにしてもよい。

なお、上記のような白画像の撮像時には、コンデンサレンズ２２ａと対物レンズ２３の間に、空気よりも屈折率の高いガラスを用いたプレパラートＰＲＴやスライドガラスが存在しないので、その分、光源２１から射出し撮像素子２４に入射する光の光路長は短くなる。そのため、光源２１を含む照明光学系は、プレパラートＰＲＴの撮像時より対物レンズ２３方向に所定の距離ΔＺだけ移動させておく必要がある。この所定の距離ΔＺについては後述する。

次に、白画像撮像制御部５１４は、光源２１を点灯させるように照明制御部５２を制御する（ステップＳＴ３）。

次のステップとして、白画像撮像制御部５１４が、拡大画像撮像制御部５７に指示を出して、白画像を撮像する（ステップＳＴ４）。

最後のステップとして、補正係数算出部５１５が、ステップＳＴ４において取得した白画像に基づき、シェーディング補正用の補正係数を算出する（ステップＳＴ５）。

白画像の輝度値は、一般的に、図４に示すような輝度分布をとる。この図は、白画像のＸ方向における輝度情報の分布を表したものである。Ｒｅｄ、Ｇｒｅｅｎ、Ｂｌｕｅ各色の輝度分布はそれぞれ独立している。各ピクセル座標位置（ｘ，ｙ）における、ＲＧＢ各色の輝度値を、それぞれWr(x,y)、Wg(x,y)、Wb(x,y)と表す。

ここで、シェーディング補正後のターゲット輝度値をＬとしたとき、各色Ｒ、Ｇ、Ｂ毎のシェーディング補正係数ＬＲ、ＬＧ、ＬＢは、それぞれ以下の計算式で算出される。
LR(x,y) = L / Wr(x,y)
LG(x,y) = L / Wg(x,y)
LB(x,y) = L / Wb(x,y)

白画像の各ピクセルのＲＧＢ輝度値に、シェーディング補正係数ＬＲ、ＬＧ、ＬＢをそれぞれ掛けることにより、各ピクセルの輝度値は、図５に示すように、ターゲット輝度値Ｌとなり、シェーディングを補正することが可能となる。なお、上記補正係数の演算手法は、上述したものに限らず、どのような方法で行っても構わない。

以上、シェーディング補正用の補正係数を算出するまでの処理の流れについて説明した。

次に、個々の拡大画像の撮像からシェーディング補正までの処理の流れについて説明する。以下の処理では、ステップＳＴ５において算出したシェーディング補正係数ＬＲ、ＬＧ、ＬＢを用いる。

最初のステップとして、プレパラートストック・ローダ７０がプレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置する（ステップＳＴ６）。

ステージ制御部５３は、載置されたプレパラートＰＲＴが対物レンズ２３の真下に来るように、ステージ４０を移動させる。

次のステップとして、統合制御部５１が、位相差像撮像制御部５５からの出力に基づき、コンデンサレンズ駆動制御部５４に指示を出して、コンデンサレンズ２２ａのピントを合わせる（ステップＳＴ７）。

ここでピントを合わせることにより、コンデンサレンズ２２ａのピントずれに起因する明度ムラの変動を防ぐことが出来る。

次のステップとして、ステージ制御部５３が、生体サンプルＳＰＬの任意の位置を拡大撮影するために、ステージ４０を移動させる（ステップＳＴ８）。

次のステップとして、照明制御部５２が、光源２１を点灯させる（ステップＳＴ９）。

次のステップとして、拡大画像撮像制御部５７が、プレパラートＰＲＴ上の生体サンプルＳＰＬの拡大画像を撮像する（ステップＳＴ１０）。

撮像された拡大画像のＸ方向の輝度分布の例を図６に示す。撮像素子２４の撮像面に、生体サンプルＳＰＬの像が写ると、その像に対応したピクセル位置では受光量が減少するので、図に示すような輝度分布となる。

なお、図６に示す輝度分布では、Ｘ方向の輝度分布曲線の中央部分が生体サンプルＳＰＬの像が写っている影響で輝度値が低下しているのに加え、画像の周辺部でも輝度値が低下している。これは、図４に示した白画像の輝度分布において、画像周辺部で輝度値が減少していることに起因する。

最後のステップとして、シェーディング補正部５１６が、ステップＳＴ１０において取得した拡大画像に対して、シェーディング補正を行う（ステップＳＴ１１）。

拡大画像のＲＧＢ各画素の輝度値に、シェーディング補正係数ＬＲ、ＬＧ、ＬＢをそれぞれ掛けることにより、シェーディング補正が行われる。図６に示した輝度分布をシェーディング補正した結果を図７に示す。図に示すように、生体サンプルＳＰＬが写っていない画像周辺部の輝度値が補正され、ターゲット輝度値Ｌになっている。シェーディング補正が行われた拡大画像は、現像処理部５９に出力される。

以上、個々の拡大画像の撮像からシェーディング補正までの処理の流れについて説明した。

［光源２１の光量調整について］
次に、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置せずに白画像を撮像する際の、光源２１の光量調整について説明する。

プレパラートＰＲＴを構成するスライドガラスに光源２１から光を照射する場合、一般的なスライドガラスでは、その表面および裏面でそれぞれ４％程度の光が反射される。そのため、光源２１の光量調整を行わない場合、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置せずに白画像を撮像する際、撮像素子２４には、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置する場合に比べ、より強い光が入射してしまう。

それ故、本技術では、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置せずに白画像を撮像する際、光源２１の光量を９２％程度まで減光する。なお、減光は光源２１の光量により行ってもよいし、開口絞り（図示せず）により行ってもよい。

この減光により、ステージ４０上のプレパラートＰＲＴの有無に関わらず、白画像と拡大画像とで同程度の信号強度の画像を得ることが出来る。

以上、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置せずに白画像を撮像する際の、光源２１の光量調整について説明した。

［白画像撮像時のコンデンサレンズ２２ａおよびステージ４０の位置調整について］
上述した、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置しない状態での白画像撮影時に、照明光学系および光源２１をΔＺだけ対物レンズ２３側に移動する点について説明する。

ΔＺの具体的な値は、例えばコンデンサレンズ２２ａを含む透過照明の光学系が対物レンズ２３側でテレセントリックをなしている場合、プレパラートＰＲＴ無しでコンデンサレンズ２２ａのピントを合わせる際には、屈折率ｎ、厚みｄのプレパラートＰＲＴを載置する場合に比べて、ΔＺ＝ｄ（ｎ−１）／ｎだけコンデンサレンズ２２ａおよび光源２１を対物レンズ２３側に移動させなければならない。この数式の根拠は、特許文献２による。

顕微鏡においては、一般的に、対物レンズ２３とステージ４０間の距離や、ステージ４０とコンデンサレンズ２２ａ間の距離を十分に確保することは難しい。

そのため、照明光学系および光源２１を対物レンズ２３側にΔＺだけ移動させる時は、コンデンサレンズ２２ａとステージ４０が衝突しないように一定以上の距離を確保するため、ステージ４０もΔＺだけ対物レンズ２３方向に移動させることが望ましい。

図８は、白画像撮像時（プレパラートＰＲＴ無し、図左側）には、拡大画像撮像時（プレパラート有り、図右側）と比べて、コンデンサレンズ２２ａ、集光光学系２２ｃ、視野絞り２２ｂ、光源２１、およびステージ４０のＺ方向の位置がΔＺだけ対物レンズ２３側に移動している様子を示す図である。

上述のとおり、白画像撮像時には、ステージ４０もΔＺだけ対物レンズ２３側に移動させることで、プレパラートＰＲＴの有無に関わらずコンデンサレンズ２２ａとステージ４０との距離を確保することが出来る。

なお、白画像撮影時には、ステージ４０がΔＺだけ対物レンズ２３に接近することになるが、プレパラートＰＲＴが載置されていない分だけ余裕となるので、ステージ４０と対物レンズ２３の間の距離を確保する事も容易となる。

以上、プレパラートＰＲＴをステージ４０上に載置しない状態での白画像撮影時に、照明光学系および光源２１をΔＺだけ対物レンズ２３側に移動する点について説明した。

［本技術により得られる効果について］
本技術では、上述した効果に加え、以下の様な効果ももたらす事が出来る。
（１）本技術では、シェーディング補正用の白画像をステージ４０上にプレパラートＰＲＴを載置しない状態で撮像する。そのため、本実施形態のように、デジタル顕微鏡装置１００が複数枚のプレパラートＰＲＴを格納するプレパラートストック・ローダ７０を有している場合、プレパラートＰＲＴを交換する時間内の任意のタイミングにおいてシェーディング補正用の補正係数を生成することが可能となる。プレパラートＰＲＴの交換と補正係数の算出とを同時並行して処理することにより、病理スライドの画像取得のスループットを向上させることが出来る。

（２）本技術では、シェーディング補正用の白画像を撮像する際、そしてプレパラートＰＲＴ上の生体サンプルＳＰＬの拡大画像を撮像する際の両方の時点において、コンデンサレンズ２２ａのピント合わせを行う。そのため、コンデンサレンズ２２ａのピントずれに起因する輝度分布ずれの影響を除去したシェーディング補正用の補正係数を生成することが出来る。

［補足事項］
その他、本技術は、上述の実施形態にのみ限定されるものではなく、本技術の要旨を逸脱しない範囲内において種々変更を加え得ることは勿論である。

［本技術の別の構成］
なお、本技術は以下のような構成も採ることができる。
（１）
照明光を出射する照明光学系と、
前記照明光を透過可能な開口部を有し、この開口部の位置に合わせてプレパラートを載置可能なステージと、
前記照明光学系と前記ステージを挟んで対向して配置され、像を拡大する対物レンズと、この対物レンズにより拡大された像を撮像する撮像素子とを含む拡大撮像部と、
前記ステージの前記開口部を開放させ、前記照明光学系の結像点を前記拡大撮像部の前記対物レンズの焦点に合わせた状態で、前記照明光学系より前記照明光を出射させ、前記拡大撮像部の前記撮像素子に結像した像を白画像として取得する白画像取得部と、
撮像された前記白画像を用いてシェーディング補正係数を算出する算出部と
を具備するデジタル顕微鏡装置。
（２）
前記（１）に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
前記拡大撮像部のデフォーカス情報を検出するデフォーカス検出部と、
前記照明光学系の光軸方向の位置を調整する調整部と
を更に具備し、
前記白画像取得部は、
前記デフォーカス情報をもとに、前記照明光の視野絞りの像が前記拡大撮像部の前記撮像素子の前記撮像面に結像するように前記調整部を動作させる
デジタル顕微鏡装置。
（３）
前記（２）に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
前記調整部による前記調整は、
前記照明光学系を、前記ステージ上に前記プレパラートが載置されている状態での位置から、所定量だけ前記ステージ側へ移動させることにより行われる
デジタル顕微鏡装置。
（４）
前記（３）に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
前記白画像取得部は、
前記移動のとき、前記ステージを、前記プレパラートが載置されている状態での位置から、前記所定量だけ同方向へ移動させる
デジタル顕微鏡装置。
（５）
前記（２）または（３）に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
前記所定量は、
ｄ（ｎ−１）／ｎ
（但し、ｄは前記プレパラートの厚み、ｎは前記プレパラートの屈折率）である
デジタル顕微鏡装置。
（６）
前記（１）から（５）のうちいずれか１つに記載のデジタル顕微鏡装置であって、
前記白画像取得部は、
前記ステージ上に前記プレパラートが載置された状態での前記拡大画像撮像時に設定する前記照明光の強度を第１の強度として、
前記白画像撮像時の前記照明光の強度を、前記第１の強度より低い第２の強度に設定する
デジタル顕微鏡装置。
（７）
白画像取得部が、照明光学系からの照明光を透過する開口部４０ａを有し当該開口部４０ａに跨がるようにプレパラートを載置可能なステージ上に前記プレパラートが載置されていない状態で、
前記照明光学系の視野絞りの像が、前記ステージ上の所定の領域の拡大像を撮像する撮像部の撮像素子の撮像面に結像するように、前記照明光学系の焦点位置を調整する調整部に前記照明光学系の焦点位置を調整させ、
前記撮像部に、前記拡大像を白画像として撮像させ、
算出部が、撮像された前記白画像に基づきシェーディング補正係数を算出する
情報処理方法。
（８）
照明光学系からの照明光を透過する開口部４０ａを有し当該開口部４０ａに跨がるようにプレパラートを載置可能なステージ上に前記プレパラートが載置されていない状態で、
前記照明光学系の視野絞りの像が、前記ステージ上の所定の領域の拡大像を撮像する撮像部の撮像素子の撮像面に結像するように、前記照明光学系の焦点位置を調整する調整部に前記照明光学系の焦点位置を調整させ、
前記撮像部に、前記拡大像を白画像として撮像させる白画像取得部および
撮像された前記白画像に基づきシェーディング補正係数を算出する算出部
としてコンピュータを機能させるための情報処理プログラム。

１０…俯瞰画像撮像部
１１…光源
１２…対物レンズ
１３…撮像素子
２０…拡大画像撮像部
２１…光源
２２ａ…コンデンサレンズ
２２ｂ…視野絞り
２２ｃ…集光光学系
２３…対物レンズ
２４…撮像素子
２５…コンデンサレンズ駆動機構
３０…位相差像撮像部
３１…ビームスプリッター
３２…フィールドレンズ
３３…セパレータレンズ
３４…撮像素子
４０…ステージ
４０ａ…開口部
４１…ステージ駆動機構
５０…制御部
５１…統合制御部
５１４…白画像撮像制御部
５１５…補正係数算出部
５１６…シェーディング補正部
５２…照明制御部
５３…ステージ制御部
５４…コンデンサレンズ駆動制御部
５５…位相差像撮像制御部
５６…俯瞰画像撮像制御部
５７…拡大画像撮像制御部
５８…記憶部
５９…現像処理部
６０…画像符号化部
７０…プレパラートストック・ローダ
１００…デジタル顕微鏡装置
ＰＲＴ…プレパラート
ＳＰＬ…生体サンプル

Claims (8)

1. 照明光を出射する照明光学系と、
   前記照明光を透過可能な開口部を有し、この開口部の位置に合わせてプレパラートを載置可能なステージと、
   前記照明光学系と前記ステージを挟んで対向して配置され、像を拡大する対物レンズと、この対物レンズにより拡大された像を撮像する撮像素子とを含む拡大撮像部と、
   前記ステージの前記開口部を開放させ、前記照明光学系の結像点を前記拡大撮像部の前記対物レンズの焦点に合わせた状態で、前記照明光学系より前記照明光を出射させ、前記拡大撮像部の前記撮像素子に結像した像を白画像として取得する白画像取得部と、
   撮像された前記白画像を用いてシェーディング補正係数を算出する算出部と
   を具備するデジタル顕微鏡装置。
2. 請求項１に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
   前記拡大撮像部のデフォーカス情報を検出するデフォーカス検出部と、
   前記照明光学系の光軸方向の位置を調整する調整部と
   を更に具備し、
   前記白画像取得部は、
   前記デフォーカス情報をもとに、前記照明光の視野絞りの像が前記拡大撮像部の前記撮像素子の前記撮像面に結像するように前記調整部を動作させる
   デジタル顕微鏡装置。
3. 請求項２に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
   前記調整部による前記調整は、
   前記照明光学系を、前記ステージ上に前記プレパラートが載置されている状態での位置から、所定量だけ前記ステージ側へ移動させることにより行われる
   デジタル顕微鏡装置。
4. 請求項３に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
   前記白画像取得部は、
   前記移動のとき、前記ステージを、前記プレパラートが載置されている状態での位置から、前記所定量だけ同方向へ移動させる
   デジタル顕微鏡装置。
5. 請求項４に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
   前記所定量は、
   ｄ（ｎ−１）／ｎ
   （但し、ｄは前記プレパラートの厚み、ｎは前記プレパラートの屈折率）である
   デジタル顕微鏡装置。
6. 請求項１に記載のデジタル顕微鏡装置であって、
   前記白画像取得部は、
   前記ステージ上に前記プレパラートが載置された状態での前記拡大画像撮像時に設定する前記照明光の強度を第１の強度として、
   前記白画像撮像時の前記照明光の強度を、前記第１の強度より低い第２の強度に設定する
   デジタル顕微鏡装置。
7. 白画像取得部が、照明光を透過可能な開口部を有するステージ上にプレパラートが載置されていない状態で、前記照明光の視野絞りの像が、拡大撮像部の撮像素子の撮像面に結像するように前記照明光の焦点位置を調整する調整部を動作させ、前記撮像素子の撮像面に結像した前記視野絞りの像を前記拡大撮像部に白画像として撮像させ、
   算出部が、撮像された前記白画像を用いてシェーディング補正係数を算出する
   情報処理方法。
8. 照明光を透過可能な開口部を有するステージ上にプレパラートが載置されていない状態で、前記照明光の視野絞りの像が、拡大撮像部の撮像素子の撮像面に結像するように前記照明光の焦点位置を調整する調整部を動作させ、前記撮像素子の撮像面に結像した前記視野絞りの像を前記拡大撮像部に白画像として撮像させる白画像取得部と、
   撮像された前記白画像を用いてシェーディング補正係数を算出する算出部
   としてコンピュータを機能させるための情報処理プログラム。

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