JP2014110776A - 変異グリコシドハイドロラーゼ - Google Patents
変異グリコシドハイドロラーゼ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014110776A JP2014110776A JP2012266731A JP2012266731A JP2014110776A JP 2014110776 A JP2014110776 A JP 2014110776A JP 2012266731 A JP2012266731 A JP 2012266731A JP 2012266731 A JP2012266731 A JP 2012266731A JP 2014110776 A JP2014110776 A JP 2014110776A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- glycoside hydrolase
- acid sequence
- seq
- acid residue
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 title claims abstract description 181
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 title claims abstract description 157
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 120
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 77
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 65
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 118
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 50
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 49
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 38
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 38
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 31
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 29
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 28
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 28
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 27
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 26
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 23
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 22
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 22
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 20
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 19
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 18
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 17
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 17
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 108010076363 licheninase Proteins 0.000 claims description 14
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 13
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims description 12
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 11
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 8
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 51
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 23
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- 125000005702 oxyalkylene group Chemical group 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002773 nucleotide Chemical group 0.000 description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 11
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 8
- 239000002585 base Substances 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 6
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000592795 Paenibacillus sp. Species 0.000 description 6
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 6
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 6
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 6
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 6
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 6
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 6
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002097 Lichenin Polymers 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 4
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 4
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710166469 Endoglucanase Proteins 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical group CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000007852 inverse PCR Methods 0.000 description 3
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 3
- ZMJBYMUCKBYSCP-UHFFFAOYSA-N (+)-Erythro-hydroxycitric acid Natural products OC(=O)C(O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O ZMJBYMUCKBYSCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMGQYMWWDOXHJM-JTQLQIEISA-N (+)-α-limonene Chemical compound CC(=C)[C@@H]1CCC(C)=CC1 XMGQYMWWDOXHJM-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CFPOJWPDQWJEMO-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-dicarboxyethoxy)butanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)OC(C(O)=O)CC(O)=O CFPOJWPDQWJEMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SVTBMSDMJJWYQN-UHFFFAOYSA-N 2-methylpentane-2,4-diol Chemical compound CC(O)CC(C)(C)O SVTBMSDMJJWYQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000126078 Paenibacillus vortex V453 Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 2
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 2
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 108010005400 cutinase Proteins 0.000 description 2
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N decane Chemical compound CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N m-xylene Chemical group CC1=CC=CC(C)=C1 IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 2
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 2
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 108010087558 pectate lyase Proteins 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000013606 secretion vector Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 2
- FRPJTGXMTIIFIT-UHFFFAOYSA-N tetraacetylethylenediamine Chemical compound CC(=O)C(N)(C(C)=O)C(N)(C(C)=O)C(C)=O FRPJTGXMTIIFIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- KQTIIICEAUMSDG-UHFFFAOYSA-N tricarballylic acid Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)CC(O)=O KQTIIICEAUMSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIYFAKIEWZDVMP-UHFFFAOYSA-N tridecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCC IIYFAKIEWZDVMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 2
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 2
- 235000020138 yakult Nutrition 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CIOXZGOUEYHNBF-UHFFFAOYSA-N (carboxymethoxy)succinic acid Chemical compound OC(=O)COC(C(O)=O)CC(O)=O CIOXZGOUEYHNBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N (dimethylsulfonio)acetate Chemical compound C[S+](C)CC([O-])=O PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- CRSBERNSMYQZNG-UHFFFAOYSA-N 1 -dodecene Natural products CCCCCCCCCCC=C CRSBERNSMYQZNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAQWICRLNQSPPW-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrachloronaphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C21 NAQWICRLNQSPPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAYXUHPQHDHDDZ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-butoxyethoxy)ethanol Chemical compound CCCCOCCOCCO OAYXUHPQHDHDDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJVNVNLFZQFJHU-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylmethoxyethoxy)ethanol Chemical compound OCCOCCOCC1=CC=CC=C1 LJVNVNLFZQFJHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CUZKCNWZBXLAJX-UHFFFAOYSA-N 2-phenylmethoxyethanol Chemical compound OCCOCC1=CC=CC=C1 CUZKCNWZBXLAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CVLHGLWXLDOELD-UHFFFAOYSA-N 4-(Propan-2-yl)benzenesulfonic acid Chemical compound CC(C)C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 CVLHGLWXLDOELD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJRVOJKLQNSNDB-UHFFFAOYSA-N 4-dodecan-3-ylbenzenesulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(CC)C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 QJRVOJKLQNSNDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 1
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220485592 CHRNA7-FAM7A fusion protein_Q23A_mutation Human genes 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 101001096557 Dickeya dadantii (strain 3937) Rhamnogalacturonate lyase Proteins 0.000 description 1
- QEVGZEDELICMKH-UHFFFAOYSA-N Diglycolic acid Chemical compound OC(=O)COCC(O)=O QEVGZEDELICMKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBVJJBKOTRCVKF-UHFFFAOYSA-N Etidronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(O)(C)P(O)(O)=O DBVJJBKOTRCVKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYXGIOKAKDAARW-UHFFFAOYSA-N N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid Chemical compound OCCN(CC(O)=O)CC(O)=O JYXGIOKAKDAARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001193699 Paenibacillus lactis 154 Species 0.000 description 1
- 108010029182 Pectin lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N Stilbene Natural products C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- YDONNITUKPKTIG-UHFFFAOYSA-N [Nitrilotris(methylene)]trisphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CN(CP(O)(O)=O)CP(O)(O)=O YDONNITUKPKTIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 125000005211 alkyl trimethyl ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 150000001639 boron compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-ZWSAEMDYSA-N cellotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-ZWSAEMDYSA-N 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001896 cresols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUNMPGNGSSIWFP-UHFFFAOYSA-N dimethylaminopropylamine Chemical compound CN(C)CCCN IUNMPGNGSSIWFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- MSJMDZAOKORVFC-UAIGNFCESA-L disodium maleate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O MSJMDZAOKORVFC-UAIGNFCESA-L 0.000 description 1
- 229940069096 dodecene Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- DUYCTCQXNHFCSJ-UHFFFAOYSA-N dtpmp Chemical compound OP(=O)(O)CN(CP(O)(O)=O)CCN(CP(O)(=O)O)CCN(CP(O)(O)=O)CP(O)(O)=O DUYCTCQXNHFCSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- NFDRPXJGHKJRLJ-UHFFFAOYSA-N edtmp Chemical compound OP(O)(=O)CN(CP(O)(O)=O)CCN(CP(O)(O)=O)CP(O)(O)=O NFDRPXJGHKJRLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 229940051250 hexylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N imidazoline Chemical compound C1CN=CN1 MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010062085 ligninase Proteins 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N n-decene Natural products CCCCCCCCC=C AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-M naphthalene-1-sulfonate Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)[O-])=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010072638 pectinacetylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000004251 pectinacetylesterase Human genes 0.000 description 1
- 108020004410 pectinesterase Proteins 0.000 description 1
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920001444 polymaleic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229940079827 sodium hydrogen sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].NCC([O-])=O CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MWNQXXOSWHCCOZ-UHFFFAOYSA-L sodium;oxido carbonate Chemical compound [Na+].[O-]OC([O-])=O MWNQXXOSWHCCOZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N stilbene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940104261 taurate Drugs 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010083879 xyloglucan endo(1-4)-beta-D-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 239000004711 α-olefin Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Abstract
【解決手段】特定のアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列において、特定のアミノ酸配列の所定の位置又はそれらに相当する位置におけるアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸残基が置換されている変異グリコシドハイドロラーゼ。アミノ酸残基の置換によって、当該酵素の液体洗剤中での安定性、又はさらに比活性が向上する。
【選択図】なし
Description
また本発明は、上記遺伝子を含有する組換えベクターを提供する。
また本発明は、上記組換えベクターを含む形質転換体を提供する。
また本発明は、上記形質転換体を用いる変異グリコシドハイドロラーゼの製造方法を提供する。
また本発明は、上記変異グリコシドハイドロラーゼを含有する液体洗剤組成物を提供する。
さらに本発明は、配列番号2で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるグリコシドハイドロラーゼにおいて、配列番号2で示されるアミノ酸配列の表1(i)記載の位置又はこれらに相当する位置におけるアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸残基を、表1(ii)記載のアミノ酸残基に置換することを含む、グリコシドハイドロラーゼの安定性を向上させる方法を提供する。
1)等電点電気泳動法により測定された等電点が9.3である;
2)カルボキシメチルセルロースを液化型で良好に分解する;
3)基質特異性:カルボキシメチルセルース、リケナン、結晶性セルロース又はセロトリオース以上のセロオリゴ糖及を分解し、還元糖を生成する;
4)最適反応pH:少なくともpH5〜10で作用し、最適pHは8.5である;
5)最適反応温度:グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液(pH8.5)で反応を行った場合、最適反応温度は55℃である;
6)安定pH範囲:30℃、60分間で処理した場合、pH5〜11の範囲で安定である;
7)耐熱性:トリス−塩酸緩衝液(pH7.0)中、15分間の処理において、55℃まで安定である;
8)分子量:SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動法による推定分子量は、43kDaである。
23位又はこれに相当する位置には、アラニン、フェニルアラニン及びトリプトファンが好ましく、フェニルアラニン及びトリプトファンがより好ましく;
38位又はこれに相当する位置には、フェニルアラニン、グルタミン及びグルタミン酸はいずれも好ましいが、フェニルアラニン及びグルタミン酸がより好ましく;
377位又はこれに相当する位置は、アラニンであり;
24位又はこれに相当する位置は、トリプトファンであり;
154位又はこれに相当する位置には、グルタミンが好ましく;
46位又はこれに相当する位置は、イソロイシンであり;
50位又はこれに相当する位置には、イソロイシン及びグルタミンが好ましく、イソロイシンがより好ましく;
79位又はこれに相当する位置は、グルタミン酸であり;
85位又はこれに相当する位置には、システイン及びイソロイシンはいずれも好ましいが、イソロイシンがより好ましく;
95位又はこれに相当する位置には、グルタミン酸が好ましく;
110位又はこれに相当する位置は、アスパラギン酸であり;
112位又はこれに相当する位置は、プロリンであり;
137位又はこれに相当する位置には、トリプトファン及びトレオニンが好ましく、トリプトファンがより好ましく;
149位又はこれに相当する位置には、トレオニンが好ましく;
202位又はこれに相当する位置には、システインが好ましく;
242位又はこれに相当する位置には、グルタミン酸が好ましく;
261位又はこれに相当する位置は、トリプトファンであり;
262位又はこれに相当する位置は、トレオニンであり;
284位又はこれに相当する位置には、イソロイシン、トリプトファン及びトレオニンはいずれも好ましいが、トリプトファン及びトレオニンがより好ましく;
356位又はこれに相当する位置は、フェニルアラニンである。
R1O−(AO)m−H(R1=C8−C22炭化水素、AO=C2−C5オキシアルキレン基、m=16〜35)〔特開2010−275468号公報〕;
R1O−(EO)l−(AO)m−(EO)n−H(R1=C8−C18炭化水素、EO=C2オキシアルキレン基、AO=C3−C5オキシアルキレン基、l=3〜30、m=1〜5、l+n=14〜50)〔特開2010−265445号公報、特開2011−63784号公報〕;
R1O−(EO)m/(AO)n−H(R1=C8−C22炭化水素、EO=C2オキシアルキレン基、AO=C3−C5オキシアルキレン基、m=10〜30、n=0〜5、EO及びAOはランダム又はブロック結合)〔特開2010−189551号公報〕;
R1(CO)lO−(EO)m/(AO)n−R2(R1=C8−C22炭化水素、EO=C2オキシアルキレン基、AO=C3−C5オキシアルキレン基、l=0〜1、m=14〜50、n=1〜5、R2=水素(l=0)又はC1−C3アルキル基、EO及びAOはランダム又はブロック結合)〔特開2010−229385号公報〕;
R1O−(EO)m−(AO)n−H(R1=C8−C22炭化水素、EO=C2オキシアルキレン基、AO=C3−C5オキシアルキレン基、m=15〜30、n=1〜5)〔特開2010−229387号公報〕;
R1O−(AO)m/(Gly)n−H及び/又はR2−COO−(AO)p/(Gly)q−H(R1=C8−C22炭化水素基、R2=C7−C21炭化水素基、AO=C2−C3オキシアルキレン基、Gly=グリセロール基、m=0〜5、n=2〜10、p=0〜5、q=2〜10、AO及びGlyはランダム又はブロック結合)〔特開2010−254881号公報〕;
R1−COO−(PO)m/(EO)n−R2(R1=C7−C21炭化水素基,COO=カルボニルオキシ基、R2=C1−C3アルキル基、PO=オキシプロピレン基、EO=オキシエチレン基、m=0.3〜5、n=8〜25、PO及びEOはランダム又はブロック結合)〔特開2010−265333号公報〕;
R1O−(EO)l−(PO)m−(EO)n−H(R1=C8−C20炭化水素、EO=C2オキシアルキレン基、PO=オキシプロピレン基、l>=1、n>=1、0<m<l+n、EO及びPOはブロック結合)〔WO98/24865〕;
R1O−(EO)m−(PO)n−H(R1=C10−C16のアルキル基又はアルケニル基、EO=エチレンオキシド基、PO=プロピレンオキシド基、m=5〜15、n=1〜3)〔特開平8−157867号公報〕;
R1(CO)−(EO)m−OR2(R1=C11−C13直鎖又は分岐状アルキル基又はアルケニル基、R2=C1−C3アルキル基、EO=エチレンオキシド基、m=10〜20)〔特開2008−7706号公報、特開2009−7451号公報、特開2009−155594号公報、特開2009−155606号公報〕;
R1(CO)−(AO)m−OR2(R1=C9−C13直鎖又は分岐状アルキル基又はアルケニル基、AO=C2−C4オキシアルキレン基、R2=C1−C3アルキル基、m=5〜30)〔特開2009−144002号公報、特開2009−173858号公報、特開2010−189612号公報〕;
ならびに、脂肪酸アルカノールアミド、脂肪酸アルカノールグルカミド、アルキルポリグルコシド等が挙げられる。
(A)23位又はこれに相当する位置には、アラニン、フェニルアラニン及びトリプトファンが好ましく、フェニルアラニン及びトリプトファンがより好ましく;
(B)38位又はこれに相当する位置には、フェニルアラニン、グルタミン及びグルタミン酸はいずれも好ましいが、フェニルアラニン及びグルタミン酸がより好ましく;
(C)377位又はこれに相当する位置は、アラニンであり;
(D)24位又はこれに相当する位置は、トリプトファンであり;
(E)154位又はこれに相当する位置には、グルタミンが好ましく;
(L)46位又はこれに相当する位置は、イソロイシンであり;
(N)50位又はこれに相当する位置には、イソロイシン及びグルタミンが好ましく、イソロイシンがより好ましく;
(P)79位又はこれに相当する位置は、グルタミン酸であり;
(R)85位又はこれに相当する位置には、システイン及びイソロイシンはいずれも好ましいが、イソロイシンがより好ましく;
(U)95位又はこれに相当する位置には、グルタミン酸が好ましく;
(V)110位又はこれに相当する位置は、アスパラギン酸であり;
(W)112位又はこれに相当する位置は、プロリンであり;
(Y)137位又はこれに相当する位置には、トリプトファン及びトレオニンが好ましく、トリプトファンがより好ましく;
(AB)149位又はこれに相当する位置には、トレオニンが好ましく;
(AD)202位又はこれに相当する位置には、システインが好ましく;
(AI)242位又はこれに相当する位置には、グルタミン酸が好ましく;
(AM)261位又はこれに相当する位置は、トリプトファンであり;
(AN)262位又はこれに相当する位置は、トレオニンであり;
(AO)284位又はこれに相当する位置には、イソロイシン、トリプトファン及びトレオニンはいずれも好ましいが、トリプトファン及びトレオニンがより好ましく;
(AS)356位又はこれに相当する位置は、フェニルアラニンである。
(A)23位又はこれに相当する位置には、アラニン、フェニルアラニン及びトリプトファンが好ましく、フェニルアラニン及びトリプトファンがより好ましく;
(B)38位又はこれに相当する位置には、フェニルアラニン、グルタミン及びグルタミン酸はいずれも好ましいが、フェニルアラニン及びグルタミン酸がより好ましく;
(C)377位又はこれに相当する位置は、アラニンであり;
(D)24位又はこれに相当する位置は、トリプトファンであり;
(E)154位又はこれに相当する位置には、グルタミンが好ましく;
(L)46位又はこれに相当する位置は、イソロイシンであり;
(N)50位又はこれに相当する位置には、イソロイシン及びグルタミンが好ましく、イソロイシンがより好ましく;
(P)79位又はこれに相当する位置は、グルタミン酸であり;
(R)85位又はこれに相当する位置には、システイン及びイソロイシンはいずれも好ましいが、イソロイシンがより好ましく;
(U)95位又はこれに相当する位置には、グルタミン酸が好ましく;
(V)110位又はこれに相当する位置は、アスパラギン酸であり;
(W)112位又はこれに相当する位置は、プロリンであり;
(Y)137位又はこれに相当する位置には、トリプトファン及びトレオニンが好ましく、トリプトファンがより好ましく;
(AB)149位又はこれに相当する位置には、トレオニンが好ましく;
(AD)202位又はこれに相当する位置には、システインが好ましく;
(AI)242位又はこれに相当する位置には、グルタミン酸が好ましく;
(AM)261位又はこれに相当する位置は、トリプトファンであり;
(AN)262位又はこれに相当する位置は、トレオニンであり;
(AO)284位又はこれに相当する位置には、イソロイシン、トリプトファン及びトレオニンはいずれも好ましいが、トリプトファン及びトレオニンがより好ましく;
(AS)356位又はこれに相当する位置は、フェニルアラニンである。
グリコシドハイドロラーゼの調製方法について、バチルス サーキュランス(Bacillus circulans)KSM−N257株(FERMP−17473)由来のN257グリコシドハイドロラーゼを例として以下に示す。
N257グリコシドハイドロラーゼ(配列番号2)をコードする遺伝子(配列番号1)〔以下、N257グリコシドハイドロラーゼ遺伝子とも称する;塩基配列はGenBankアクセッション番号AB059267に基づき入手可能;Hakamada et al.,Biochim.Biophys.Acta.,1570,2002,p.174−180〕におけるN257グリコシドハイドロラーゼのN末端アミノ酸からターミネーター配列までをコードする核酸断片を増幅した。さらに、S237セルラーゼをコードする遺伝子(配列番号3)〔以下、S237セルラーゼ遺伝子とも称する;塩基配列はGenBankアクセッション番号AB18420に基づき入手可能;Hakamada et al.,Biosci.Biotechnol.Biochem.,64(11),2000,p.2281−2289;特開2000−210081号公報〕のプロモーター及びシグナル配列の核酸断片を増幅した。
SOE−PCRにて2つの核酸断片を連結し、シャトルベクターpHY300PLK(ヤクルト本社;Ishiwa,H.&Shibahara,H.,Jpn.J.Genet.,1985,60,p.235−243)に導入することで、N257グリコシドハイドロラーゼ遺伝子を含む発現プラスミドを作製した。
次に、バチルス サーキュランス(Bacillus circulans)KSM−N257株からゲノムDNAを常法により抽出し、これを鋳型DNAとして、表5に示すN257mat−Qster FW(配列番号6)とN257−Cryter RV(配列番号7)からなるプライマーセットを用いて、N257グリコシドハイドロラーゼ遺伝子の成熟タンパク質コード領域及びターミネーター配列(配列番号1の338番塩基以降)を含むDNA断片2を増幅した。
上記DNA断片1、2の増幅は、GeneAmp PCRシステム(アプライドバイオシステムズ)を使用し、Pyrobest DNAポリメラーゼ(タカラバイオ)と付属の試薬類を用いて、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により行った。PCRの反応液は、適宜希釈した鋳型DNAを1μL、センスプライマー及びアンチセンスプライマーを各々20pmol、及びPyrobest DNAポリメラーゼを2.5U混合し、水を加えて反応液総量を50μLにして調製した。PCR反応は、98℃で10秒間、55℃で30秒間及び72℃で1〜5分間(目的増幅産物に応じて調整したが、目安は1kb当たり1分間)の3段階の温度変化を30サイクル繰り返した後、72℃で5分間反応させる条件で行った。
上記で得られたDNA断片1及び2を鋳型として、S237セルラーゼのプロモーター及びシグナル配列とN257成熟タンパク質コード領域及びターミネーター配列とを含むDNA断片を、表5に示すS237UB1 Fw(配列番号4)とN257−Cryter Rv(配列番号7)からなるプライマーセットを用いて、SOE−PCRによって増幅した。
(1)グリコシドハイドロラーゼ蛋白量測定
培養上清中のグリコシドハイドロラーゼ蛋白量の測定は、プロテインアッセイラピッドキット(和光純薬工業)を用いて以下の通り行なった。すなわち、96穴プレートの各ウェルに、同キットの発色液250μLを加え、さらに適宜希釈した酵素液(グリコシドハイドロラーゼを含む培養上清)10μLを混和し、室温で30分間撹拌したのち、マイクロプレートリーダーVersaMax(Molecular Device社)を用いて600nmにおける吸光度を測定した。同キット付属の牛胸腺アルブミン(BSA)標準液を用いて同時に作製した検量線から、グリコシドハイドロラーゼタンパク濃度(mg/mL BSA相当)を算出した。
セルラーゼ活性測定は96穴プレートを用いて測定を行った。1.0%カルボキシメチルセルロース(CMC、日本製紙)及び50mMグリシン緩衝液(pH9.0)を調製し、基質溶液とした。この基質溶液90μLに対し、適当な濃度に希釈した酵素液(培養上清)10μLを加え、40℃で20分反応した後、ジニトロサリチル酸(DNS)溶液100μLを加えて100℃で5分間熱処理し、速やかに氷水中で冷却した。冷却した溶液100μLを96穴アッセイプレート(IWAKI)へと移し、マイクロプレートリーダー(Molecular Device社)を用いて535nmの吸光度を測定した。40℃、100℃での熱処理はDNA engine PTC−200(Bio−Rad)を使用した。また、サンプルの希釈、基質反応液への添加、DNS溶液の添加にはマルチディスペンサーEDR384S(バイオテック)を用いた。吸光度に基づいて酵素反応により生成した還元糖の量を測定し、上記条件下で1分間に1μmolのD−グルコース相当の還元糖を遊離する活性を1unit(U)として、グリコシドハイドロラーゼのセルラーゼ活性(U)を求めた。グリコシドハイドロラーゼのセルラーゼ比活性は、セルラーゼ活性(U)/タンパク質量(mg)として求めた。
酵素液として、グリコシドハイドロラーゼを含む培養上清を用いた。評価用液体洗剤としては、液体洗剤処方品(非イオン性界面活性剤〔炭素数12〜16;平均エチレンオキシド付加モル数12.0のポリオキシエチレンアルキルエーテル〕20重量%;アルキルベンジルジメチルアンモニウムクロライド〔アルキル基炭素数8〜18〕1重量%;ソフタノール70H(日本触媒製)20重量%;アクリル酸マレイン酸コポリマー1.5重量%;モノエタノールアミン1.5重量%;クエン酸1.15重量%;ブチルジグリコール5重量%;エタノール2重量%;亜硫酸ナトリウム0.2重量%;水47.65重量%)をベースに調製した溶液(液体洗剤処方品 486μL、10%亜硫酸ナトリウム 5.4μL、35%塩化カルシウム 3.1μL、プロテアーゼ 5.4μLを含有)を用いた。96穴ディープウェルプレートの各ウェルに評価用液体洗剤を500μLずつ分注し、さらに酵素液(培養上清)を43μLずつ添加し、試験サンプルとした。酵素液添加の直後と40℃にて3日間保存後に試験サンプル中のセルラーゼ活性を測定した。セルラーゼ活性の測定は、試験サンプルをイオン交換水にて10倍希釈したものを用いて、参考例2と同様の方法にて行った。酵素液添加直後の活性に対する3日間保存後の活性の割合を、酵素の残存活性とした。
プロテアーゼはバチルス エスピーKSM−KP43(FERM BP−6532)由来のアルカリプロテアーゼ 80U/mLの酵素溶液を用いた。なお、当該プロテアーゼの活性は特開2004−305175に記載の合成基質法を用いて決定した。
本発明のグリコシドハイドロラーゼ変異体の作製方法を、野生型(親)N257グリコシドハイドロラーゼ成熟酵素領域のアミノ酸配列(配列番号2)における23番目のグルタミン(Q23)をアラニンに変異させた変異体「Q23A」の作製方法を例として、以下に示す。
参考例2記載の方法にて、実施例1で得た変異グリコシドハイドロラーゼのセルラーゼ比活性を測定した。同様の方法で測定した親グリコシドハイドロラーゼ(N257グリコシドハイドロラーゼ)の比活性を100%としたときの、各変異グリコシドハイドロラーゼの相対比活性を求めた。
また、参考例3記載の方法にて、実施例1で得た変異グリコシドハイドロラーゼの3日保存後の残存セルラーゼ活性を測定した。同様の方法で測定した親グリコシドハイドロラーゼの3日保存後の残存活性を100%としたときの、各変異グリコシドハイドロラーゼの相対残存活性を求め、酵素の安定性を評価した。
結果を表7と表8に示す。全ての変異体は、親グリコシドハイドロラーゼと比較して安定性が向上していた(表7)。一部の変異体は、安定性に加えて、さらに比活性も向上していた(表8)。
Claims (20)
- 前記配列同一性が90%以上である請求項1記載の変異グリコシドハイドロラーゼ。
- 配列番号2で示されるアミノ酸配列の63位に相当する位置におけるアミノ酸残基がグルタミン酸であり、配列番号2で示されるアミノ酸配列の124位に相当する位置におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸であり、配列番号2で示されるアミノ酸配列の253位に相当する位置におけるアミノ酸残基がグルタミン酸であり、且つ配列番号2で示されるアミノ酸配列の263位に相当する位置におけるアミノ酸残基がアスパラギンである、請求項1又は2記載の変異グリコシドハイドロラーゼ。
- 前記少なくとも1つのアミノ酸残基が、(A)23位、(B)38位、(C)377位、(D)24位、(E)154位、(L)46位、(N)50位、(P)79位、(R)85位、(U)95位、(V)110位、(W)112位、(Y)137位、(AB)149位、(AD)202位、(AI)242位、(AM)261位、(AN)262位、(AO)284位及び(AS)356位、又はこれらに相当する位置におけるアミノ酸残基からなる群より選択される、請求項1〜4のいずれか1項記載の変異グリコシドハイドロラーゼ。
- 配列番号2で示されるアミノ酸配列の以下の位置又はこれらに相当する位置からなる群より選択される少なくとも1つに、下記アミノ酸残基を有する、請求項1〜5のいずれか1項記載の変異グリコシドハイドロラーゼ:
(A)23位又はこれに相当する位置:アラニン、フェニルアラニン又はトリプトファン;
(B)38位又はこれに相当する位置:フェニルアラニン、グルタミン又はグルタミン酸;
(C)377位又はこれに相当する位置:アラニン;
(D)24位又はこれに相当する位置:トリプトファン;
(E)154位又はこれに相当する位置:グルタミン;
(L)46位又はこれに相当する位置:イソロイシン;
(N)50位又はこれに相当する位置:イソロイシン又はグルタミン;
(P)79位又はこれに相当する位置:グルタミン酸;
(R)85位又はこれに相当する位置:システイン又はイソロイシン;
(U)95位又はこれに相当する位置:グルタミン酸;
(V)110位又はこれに相当する位置:アスパラギン酸;
(W)112位又はこれに相当する位置:プロリン;
(Y)137位又はこれに相当する位置:トリプトファン又はトレオニン;
(AB)149位又はこれに相当する位置:トレオニン;
(AD)202位又はこれに相当する位置:システイン;
(AI)242位又はこれに相当する位置:グルタミン酸;
(AM)261位又はこれに相当する位置:トリプトファン;
(AN)262位又はこれに相当する位置:トレオニン;
(AO)284位又はこれに相当する位置:イソロイシン、トリプトファン又はトレオニン;
(AS)356位又はこれに相当する位置:フェニルアラニン。 - セルラーゼ活性、リケナーゼ活性及びキシラナーゼ活性からなる群より選択される1つ以上の酵素活性を有する、請求項1〜6のいずれか1項記載の変異グリコシドハイドロラーゼ。
- 請求項1〜7のいずれか1項記載の変異グリコシドハイドロラーゼをコードする遺伝子。
- 請求項8記載の遺伝子を含有する組換えベクター。
- 請求項9記載の組換えベクターを含む形質転換体。
- 請求項10記載の形質転換体を用いる変異グリコシドハイドロラーゼの製造方法。
- 請求項1〜7のいずれか1項記載の変異グリコシドハイドロラーゼを含有する洗浄剤組成物。
- 前記配列同一性が90%以上である請求項13記載の方法。
- 前記グリコシドハイドロラーゼにおいて、配列番号2で示されるアミノ酸配列の63位に相当する位置におけるアミノ酸残基がグルタミン酸であり、配列番号2で示されるアミノ酸配列の124位に相当する位置におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸であり、配列番号2で示されるアミノ酸配列の253位に相当する位置におけるアミノ酸残基がグルタミン酸であり、且つ配列番号2で示されるアミノ酸配列の263位に相当する位置におけるアミノ酸残基がアスパラギンである、請求項13又は14記載の方法。
- 前記少なくとも1つのアミノ酸残基が、(A)23位、(B)38位、(C)377位、(D)24位、(E)154位、(L)46位、(N)50位、(P)79位、(R)85位、(U)95位、(V)110位、(W)112位、(Y)137位、(AB)149位、(AD)202位、(AI)242位、(AM)261位、(AN)262位、(AO)284位及び(AS)356位又はこれらに相当する位置におけるアミノ酸残基からなる群より選択される、請求項13〜16のいずれか1項記載の方法。
- 配列番号2で示されるアミノ酸配列の以下の位置又はこれらに相当する位置におけるアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸残基が、下記アミノ酸残基に置換されている、請求項13〜17のいずれか1項記載の方法:
(A)23位又はこれに相当する位置:アラニン、フェニルアラニン又はトリプトファン;
(B)38位又はこれに相当する位置:フェニルアラニン、グルタミン又はグルタミン酸;
(C)377位又はこれに相当する位置:アラニン;
(D)24位又はこれに相当する位置:トリプトファン;
(E)154位又はこれに相当する位置:グルタミン;
(L)46位又はこれに相当する位置:イソロイシン;
(N)50位又はこれに相当する位置:イソロイシン又はグルタミン;
(P)79位又はこれに相当する位置:グルタミン酸;
(R)85位又はこれに相当する位置:システイン又はイソロイシン;
(U)95位又はこれに相当する位置:グルタミン酸;
(V)110位又はこれに相当する位置:アスパラギン酸;
(W)112位又はこれに相当する位置:プロリン;
(Y)137位又はこれに相当する位置:トリプトファン又はトレオニン;
(AB)149位又はこれに相当する位置:トレオニン;
(AD)202位又はこれに相当する位置:システイン;
(AI)242位又はこれに相当する位置:グルタミン酸;
(AM)261位又はこれに相当する位置:トリプトファン;
(AN)262位又はこれに相当する位置:トレオニン;
(AO)284位又はこれに相当する位置:イソロイシン、トリプトファン又はトレオニン;
(AS)356位又はこれに相当する位置:フェニルアラニン。 - 前記グリコシドハイドロラーゼが、セルラーゼ活性、リケナーゼ活性及びキシラナーゼ活性からなる群より選択される1つ以上の酵素活性を有する、請求項13〜18のいずれか1項記載の方法。
- グリコシドハイドロラーゼの安定性及び活性を向上させる方法である、請求項17〜19のいずれか1項記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012266731A JP6081172B2 (ja) | 2012-12-05 | 2012-12-05 | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012266731A JP6081172B2 (ja) | 2012-12-05 | 2012-12-05 | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014110776A true JP2014110776A (ja) | 2014-06-19 |
JP6081172B2 JP6081172B2 (ja) | 2017-02-15 |
Family
ID=51168485
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012266731A Active JP6081172B2 (ja) | 2012-12-05 | 2012-12-05 | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6081172B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016158570A (ja) * | 2015-03-02 | 2016-09-05 | 花王株式会社 | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08501692A (ja) * | 1992-10-06 | 1996-02-27 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | セルラーゼ変異体 |
JP2001309781A (ja) * | 2000-02-25 | 2001-11-06 | Kao Corp | 新規アルカリセルラーゼ |
JP2002085078A (ja) * | 2000-09-18 | 2002-03-26 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ遺伝子 |
JP2003310270A (ja) * | 2002-04-25 | 2003-11-05 | Kao Corp | 変異アルカリセルラーゼ |
WO2004039969A1 (ja) * | 2002-10-31 | 2004-05-13 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | 界面活性剤に耐性な新規セルラーゼ |
JP2007529993A (ja) * | 2003-07-02 | 2007-11-01 | シンジェンタ パーティシペーションズ アーゲー | グルカナーゼ、それらをコードする核酸並びにそれらを製造及び使用する方法 |
WO2011070101A1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-16 | Novozymes A/S | Methods of producing gh8 xylanase variants |
WO2011111836A1 (ja) * | 2010-03-12 | 2011-09-15 | 花王株式会社 | 変異アルカリセルラーゼ |
JP2013141437A (ja) * | 2012-01-11 | 2013-07-22 | Kao Corp | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
-
2012
- 2012-12-05 JP JP2012266731A patent/JP6081172B2/ja active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08501692A (ja) * | 1992-10-06 | 1996-02-27 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | セルラーゼ変異体 |
JP2001309781A (ja) * | 2000-02-25 | 2001-11-06 | Kao Corp | 新規アルカリセルラーゼ |
JP2002085078A (ja) * | 2000-09-18 | 2002-03-26 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ遺伝子 |
JP2003310270A (ja) * | 2002-04-25 | 2003-11-05 | Kao Corp | 変異アルカリセルラーゼ |
WO2004039969A1 (ja) * | 2002-10-31 | 2004-05-13 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | 界面活性剤に耐性な新規セルラーゼ |
JP2007529993A (ja) * | 2003-07-02 | 2007-11-01 | シンジェンタ パーティシペーションズ アーゲー | グルカナーゼ、それらをコードする核酸並びにそれらを製造及び使用する方法 |
WO2011070101A1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-16 | Novozymes A/S | Methods of producing gh8 xylanase variants |
WO2011111836A1 (ja) * | 2010-03-12 | 2011-09-15 | 花王株式会社 | 変異アルカリセルラーゼ |
JP2013141437A (ja) * | 2012-01-11 | 2013-07-22 | Kao Corp | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6015041862; Kim J. Y., UniProt[online], 2011年9月21日, Database Accession No.Q83ZQ6, [2015年10月13日検索], イン * |
JPN6015041863; Lucas S. et al, UniProt[online], 2011年12月14日, Database Accession No.D3EBL0, [2015年10月13日検索] * |
JPN6015041864; Harkins D. M. et al., UniProt[online], 2011年12月14日, Database Accession No.F3MHN7, [2015年10月13 * |
JPN6015041865; Lucas S. et al., UniProt[online], 2011年12月14日, Database Accession No.G4HHG4, [2015年10月13日検索 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016158570A (ja) * | 2015-03-02 | 2016-09-05 | 花王株式会社 | 変異グリコシドハイドロラーゼ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6081172B2 (ja) | 2017-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK2546339T3 (en) | MUTERED ALKALIC CELLULASE | |
EP4183859A1 (en) | Amylase-incorporated cleaning agent composition | |
JP6067409B2 (ja) | アルカリプロテアーゼの溶解性向上方法 | |
US20230313164A1 (en) | Alpha-amylase variant | |
WO2017213168A1 (ja) | 変異アルカリプロテアーゼ | |
JP7245676B2 (ja) | 変異プロテアーゼ | |
JP6289711B2 (ja) | 変異アルカリプロテアーゼ | |
JP5977029B2 (ja) | 変異グリコシドハイドロラーゼ | |
JP6081172B2 (ja) | 変異グリコシドハイドロラーゼ | |
JP6603462B2 (ja) | 変異グリコシドハイドロラーゼ | |
JP6144483B2 (ja) | 変異グリコシドハイドロラーゼ | |
JP7510309B2 (ja) | α-アミラーゼ変異体 | |
WO2024024527A1 (ja) | 変異プロテアーゼ | |
WO2023190938A1 (ja) | α-アミラーゼ変異体 | |
WO2023120594A1 (ja) | アミラーゼ配合洗浄剤組成物 | |
JP2021069321A (ja) | 変異セルラーゼ | |
WO2023176970A1 (ja) | α-アミラーゼ変異体 | |
JP2022060158A (ja) | α-アミラーゼ変異体 | |
JP2023138320A (ja) | α-アミラーゼ変異体 | |
JP5698460B2 (ja) | 変異アルカリセルラーゼ | |
JP5666816B2 (ja) | 変異アルカリセルラーゼ | |
JP5714830B2 (ja) | 変異アルカリセルラーゼ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150929 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A132 Effective date: 20160726 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160916 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170104 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170118 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 6081172 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |