JP2013541951A - p53アイソフォームによる幹細胞機能の操作 - Google Patents
p53アイソフォームによる幹細胞機能の操作 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013541951A JP2013541951A JP2013531927A JP2013531927A JP2013541951A JP 2013541951 A JP2013541951 A JP 2013541951A JP 2013531927 A JP2013531927 A JP 2013531927A JP 2013531927 A JP2013531927 A JP 2013531927A JP 2013541951 A JP2013541951 A JP 2013541951A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- cells
- expression
- vector
- nucleic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 40
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 title description 30
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 title description 30
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 title description 10
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 title description 10
- 230000003915 cell function Effects 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 255
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 99
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 94
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 28
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 77
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 73
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 58
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 58
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 42
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 claims description 36
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 28
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 claims description 26
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 claims description 26
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 claims description 25
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 claims description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 claims description 25
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 22
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 101001139134 Homo sapiens Krueppel-like factor 4 Proteins 0.000 claims description 18
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 claims description 18
- 102100020677 Krueppel-like factor 4 Human genes 0.000 claims description 18
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 claims description 18
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 17
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 claims description 15
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 claims description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 15
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 claims description 15
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 14
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 10
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims description 10
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 10
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 8
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 4
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 8
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 56
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 35
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 34
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 34
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 20
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 19
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 17
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 17
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 16
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 11
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 11
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 11
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 10
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- -1 UTF-1 Proteins 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 4
- 230000010632 Transcription Factor Activity Effects 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 3
- 101100342337 Caenorhabditis elegans klf-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100257359 Caenorhabditis elegans sox-2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100257372 Caenorhabditis elegans sox-3 gene Proteins 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 3
- 101100310657 Mus musculus Sox1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100310650 Mus musculus Sox18 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100257363 Mus musculus Sox2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100257376 Mus musculus Sox3 gene Proteins 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 3
- 108010078067 RNA Polymerase III Proteins 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- 101150001847 Sox15 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000251131 Sphyrna Species 0.000 description 3
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 3
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 3
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 3
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- QCMYYKRYFNMIEC-UHFFFAOYSA-N COP(O)=O Chemical class COP(O)=O QCMYYKRYFNMIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 2
- 208000031448 Genomic Instability Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 101150072501 Klf2 gene Proteins 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 2
- 102100035593 POU domain, class 2, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710084414 POU domain, class 2, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100035591 POU domain, class 2, transcription factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710084411 POU domain, class 2, transcription factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 208000036676 acute undifferentiated leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 2
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)-N-[1-(phenylmethyl)-4-piperidinyl]-4-quinazolinamine Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010006533 ATP-Binding Cassette Transporters Proteins 0.000 description 1
- 102000005416 ATP-Binding Cassette Transporters Human genes 0.000 description 1
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 description 1
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101710189683 Alkaline protease 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710154562 Alkaline proteinase Proteins 0.000 description 1
- 101710170876 Antileukoproteinase Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 101710112538 C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 101100510263 Caenorhabditis elegans klf-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N DOSPA trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCNC(=O)C(CCCNCCCN)NCCCN)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N 0.000 description 1
- 102100036949 Developmental pluripotency-associated protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100037126 Developmental pluripotency-associated protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100189891 Dictyostelium discoideum pepd gene Proteins 0.000 description 1
- 101100084166 Drosophila melanogaster prd gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 102100030013 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010093099 Endoribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101100335612 Escherichia coli (strain K12) fucA gene Proteins 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100028072 Fibroblast growth factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100035364 Growth/differentiation factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 description 1
- 101000804948 Homo sapiens Developmental pluripotency-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000881868 Homo sapiens Developmental pluripotency-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001060274 Homo sapiens Fibroblast growth factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001023986 Homo sapiens Growth/differentiation factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001094700 Homo sapiens POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000825079 Homo sapiens Transcription factor SOX-13 Proteins 0.000 description 1
- 101000976622 Homo sapiens Zinc finger protein 42 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000799057 Homo sapiens tRNA-specific adenosine deaminase 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 description 1
- 101150092727 KLF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150023743 KLF9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150061181 Klf6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010017123 Kruppel-Like Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004434 Kruppel-Like Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 101100011750 Mus musculus Hsp90b1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100137157 Mus musculus Pou5f1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100366231 Mus musculus Sox12 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310648 Mus musculus Sox17 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100043050 Mus musculus Sox4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100043062 Mus musculus Sox7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100043067 Mus musculus Sox8 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091057508 Myc family Proteins 0.000 description 1
- 108700026495 N-Myc Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102100030124 N-myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100026466 POU domain, class 2, transcription factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710084413 POU domain, class 2, transcription factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100026459 POU domain, class 3, transcription factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710133394 POU domain, class 3, transcription factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100026456 POU domain, class 3, transcription factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710133393 POU domain, class 3, transcription factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100026450 POU domain, class 3, transcription factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710133389 POU domain, class 3, transcription factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101150054854 POU1F1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- 201000007902 Primary cutaneous amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710150336 Protein Rex Proteins 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 101150020367 SOX11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150073471 SOX14 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150106167 SOX9 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007365 Sialoglycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010032838 Sialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101150117830 Sox5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 102100036831 Steroid hormone receptor ERR2 Human genes 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150016368 TAD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150080074 TP53 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102100022435 Transcription factor SOX-13 Human genes 0.000 description 1
- 101710101305 Transducin-like enhancer protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039362 Transducin-like enhancer protein 1 Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710185494 Zinc finger protein Proteins 0.000 description 1
- 102100023550 Zinc finger protein 42 homolog Human genes 0.000 description 1
- 102100023597 Zinc finger protein 816 Human genes 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000227 bioadhesive Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010428 chromatin condensation Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010502 episomal replication Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108091008558 estrogen-related receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000052178 fibroblast growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000052983 human POU5F1 Human genes 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 102000041788 p53 family Human genes 0.000 description 1
- 108091075611 p53 family Proteins 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 101150055666 sox6 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 102100034045 tRNA-specific adenosine deaminase 2 Human genes 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 101150117196 tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- JFALSRSLKYAFGM-UHFFFAOYSA-N uranium(0) Chemical compound [U] JFALSRSLKYAFGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、その出願があらゆる目的で参照により本明細書に組み入れられる2010年10月1日に提出された米国仮出願第61/389,134号に対する優先権の恩典を主張するものである。
p53の活性は、正常幹細胞および癌幹細胞の自己再生および多能性、ならびに人工多能性幹(iPS)細胞のリプログラミング効率を調節する(例えば、Mario et al., Nature 460: 1149, 2009(非特許文献1);Hong et al., Nature 460:1132, 2009(非特許文献2);Cicalese et al., Cell 138:1083, 2009(非特許文献3)を参照されたい)。天然のヒトp53アイソフォームであるΔ133p53およびp53βは、それぞれp53活性の生理的インヒビターおよびエンハンサーである(例えば、Fujita et al, Nat. Cell Biol. 11:1135, 2009(非特許文献4)を参照されたい)。
本発明は、部分的に、ヒト胚性幹細胞(hESC)が正常ヒト線維芽細胞または癌細胞株よりもはるかに豊富にΔ133p53タンパク質を発現しているという発見、さらにはΔ133p53の過剰発現がiPS細胞の作製の効率を向上させるという発見に基づいている。したがって、一局面において、本発明は、iPS細胞を獲得するためにリプログラミングを受けている細胞から得られる人工多能性幹(iPS)細胞の数を増加させる方法を提供し、該方法は、体細胞においてΔ133p53の発現のレベルを増加させ、それによって開始細胞集団から得られるiPS細胞の数を増加させる工程を含む。いくつかの態様において、Δ133p53の発現のレベルは、体細胞においてΔ133p53をコードする組換え核酸配列を発現させることによって増加する。いくつかの態様において、Δ133p53をコードする組換え核酸配列は、誘導性プロモーターに機能的に連結されている。いくつかの態様において、Δ133p53をコードする核酸はRNA分子である。いくつかの態様において、細胞内に導入される核酸は、ベクター、例えばプラスミドベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または他の任意の種類のウイルスベクターに含有されている。いくつかの態様において、組換え核酸はlox組換え部位を含む発現カセット内に存在する。
定義
本明細書において用いるとき、「多能性の」または「多能性」という用語は、三胚葉(内胚葉、中胚葉、および外胚葉)のすべてからの細胞系統に関連した特徴を集合的に示す細胞種への分化を適切な条件下で受け得る子孫を生み出す能力を有する、細胞を表す。多能性幹細胞は、出生前、出生後、または成体の動物の多くまたはすべての組織に寄与し得る。8〜12週齢のSCIDマウスにおけるテラトーマ形成能等の当技術分野で認められた標準的試験を用いて、細胞集団の多能性を規定することができるが、しかしながら、様々な多能性幹細胞の特徴の同定を用いて多能性細胞を検出することもできる。細胞の多能性とは、例えば胚性幹細胞およびiPSCなどの、胚のあらゆる細胞を正しく形成し得る完全な多能性を有する細胞から、三胚葉すべての細胞を形成し得るものの、完全な多能性を有する細胞の特徴のすべて、例えば生殖細胞系列伝達や生命体全体を作り出す能力等を示すことはできない不完全なまたは部分的な多能性を有する細胞までに及ぶ、連続体である。本発明の特定の態様において、細胞の多能性を、不完全なもしくは部分的な多能性を有する細胞から多能性をより有する細胞へ、またはある態様では、完全な多能性を有する細胞へ上昇させる。多能性は、例えばテラトーマ形成、生殖細胞系列伝達、および四倍体胚補完法によって評価され得る。いくつかの態様において、本明細書における他の部分で述べられているように、多能性遺伝子または多能性マーカーの発現を用いて細胞の多能性を評価することができる。
序論
本発明は、多能性幹細胞を獲得する効率を増大させる方法を提供し、該方法は、多能性細胞を獲得するためにリプログラミングを受けている細胞においてΔ133p53を発現させる工程を含む。本明細書において記載される典型的な態様において、リプログラミングされる対象となる体細胞は、部分的または完全に分化した細胞(例えば、血液細胞、真皮細胞、線維芽細胞、上皮細胞、角化細胞など)である。リプログラミングされる対象となる細胞は、1種または複数種の多能性誘導因子、例えばOct3/4、Sox2, Klf4、c-Myc、Lin28、またはNanogを発現している。細胞に化合物を接触させて誘導形態の発現を増加させる工程、および/または細胞において外因性誘導因子を発現させることによって発現を高める工程を含む多様な方法を用いて、リプログラミングのために細胞を誘導することができる。
一般的に、Δ133p53もしくはp53βをコードする核酸配列および関連する核酸配列ホモログを、cDNAライブラリーからクローニングすることができ、または典型的にはオリゴヌクレオチドプライマーを用いた増幅技術を用いて単離する。
本発明の方法において、任意の動物を体細胞の供給源として用いてiPSを獲得することができる。典型的には、体細胞はヒト細胞であるが、他の動物由来の細胞を用いることもできる。したがって、例えば、いくつかの態様において、細胞は哺乳類細胞である。例示的な哺乳類細胞には、ヒト細胞、ヒト以外の霊長類細胞、例えばラット、マウス、ブタ、ウシ、ヒツジ、イヌ、およびネコの細胞、ならびに霊長類細胞(例えば、アカゲザル(rhesus monkey)、チンパンジー、マカク(macaque)など)が含まれるが、これらに限定されない。
別の局面において、本発明は、Δ133p53の発現のレベルを減少させることによって、癌幹細胞の増殖を阻害する方法を提供する。したがって、癌幹細胞をΔ133p53抑制のための標的とし、それによって細胞の増殖を阻害することができる。例えば、Δ133p53を標的とする阻害性RNA分子を用いることによって、抑制を実施することができる。
Δ133p53(およびiPSを誘導する転写因子等の他のタンパク質)の発現は、当技術分野において周知の技術を用いることによって実施される。したがって、本発明は、組換え遺伝学の分野における慣用の技術に依存している。本発明における使用についての一般的方法を開示している基礎的テキストとしては、Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A laboratory manual 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press;およびCurrent Protocols in Molecular Biology (2010) John Wiley and Sonsが挙げられる。
ある態様において、プラスミドベクターは、宿主細胞を形質転換するための使用に関して考慮される。一般的に、宿主細胞に適合する種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターを、これらの宿主と組み合わせて用いる。真核生物ウイルス由来の調節エレメントを含有する発現ベクターは、典型的には真核生物発現ベクター、例えばSV40ベクター、パピローマウイルスベクター、およびエプスタイン−バールウイルス由来のベクターに用いられる。例示的な他の真核生物ベクターには、pMSG、pAV009/A+、pMTO10/A+、pMAMneo-5、バキュロウイルスpDSVE、および、SV40初期プロモーター、SV40後期プロモーター、メタロチオネイン(metallothionine)プロモーター、マウス乳癌ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞における発現に有効であることが示されている他のプロモーターの指揮下でタンパク質の発現を可能にする他の任意のベクターが含まれる。いくつかの態様において、Δ133p53核酸および/またはiPSを誘導するための転写因子を発現させるために用いられるプロモーターは、抗生物質に基づくプロモーター(例えば、tetプロモーター)等の誘導性プロモーターであってよい。そのようなプロモーターは、当技術分野において公知である。
あるウイルスが細胞に感染するかまたは受容体介在性エンドサイトーシスを介して細胞に侵入する能力、および、宿主細胞のゲノム内に組み込まれてウイルス遺伝子を安定的かつ効率的に発現させる能力は、該ウイルスを細胞(例えば、哺乳類細胞)内への外来核酸の移行のための魅力的な候補とする。本発明の核酸を送達するために用いられ得るウイルスベクターの非限定的な例を以下に記載する。本発明における使用のためのベクターには、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター等のレトロウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターなどが含まれる。
本発明での使用のための、細胞、組織、または生命体の形質転換のための核酸送達に適した方法には、本明細書において記載されるまたは当業者に公知であると考えられる、核酸(例えば、DNA)を細胞、組織、または生命体内に導入し得る事実上任意の方法が含まれると考えられる。そのような方法には、任意でFugene6(Roche)またはリポフェクタミン(Invitrogen)を用いたエクスビボ・トランスフェクションによる(Wilson et al., Science, 244:1344-1346, 1989、Nabel and Baltimore, Nature 326:711-713, 1987);微量注入および遺伝子銃注入(Harland and Weintraub, J. Cell Biol, 101:1094-1099, 1985;参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,789,215号)を含む注入による(それぞれが参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,994,624号、第5,981,274号、第5,945,100号、第5,780,448号、第5,736,524号、第5,702,932号、第5,656,610号、第5,589,466号、および第5,580,859号);エレクトロポレーションによる(参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,384,253号;Tur-Kaspa et al., Mol. Cell Biol., 6:716-718, 1986;Potter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81:7161-7165, 1984);リン酸カルシウム沈殿による(Graham and Van Der Eb, Virology, 52:456-467, 1973;Chen and Okayama, Mol. Cell Biol., 7(8):2745-2752, 1987;Rippe et al., Mol. Cell Biol., 10:689-695, 1990); DEAEデキストランの後にポリエチレングリコールを用いることによる(Gopal, Mol. Cell Biol., 5:1188-1190, 1985);直接超音波負荷による(Fechheimer et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 84:8463-8467, 1987);リポソームを介したトランスフェクション(Nicolau and Sene, Biochim. Biophys. Acta, 721:185-190, 1982;Fraley et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 76:3348-3352, 1979;Nicolau et al., Methods Enzymol., 149:157-176, 1987;Wong et al., Gene, 10:87-94, 1980;Kaneda et al., Science, 243:375-378, 1989;Kato et al., J Biol. Chem., 266:3361-3364, 1991);ならびに受容体を介したトランスフェクションによる(Wu and Wu, Biochemistry, 27:887-892, 1988;Wu and Wu, J. Biol. Chem., 262:4429-4432, 1987;それぞれが参照により本明細書に組み入れられる)等のDNAの直接送達が含まれるが、それらに限定されない。阻害性核酸を説明している節において以下に記載される方法を用いることによっても、核酸を細胞内に導入することができる。さらに、そのような方法の任意の組み合わせを利用してもよい。
iPS細胞を獲得するためにリプログラミングを受けている細胞を、当技術分野において公知の任意の方法に従って培養することができる。様々な技術が公知である(例えば、WO/2010/059775;WO/2010/077955;WO/2010/002846;Warren et al, 2010,前記;および本明細書において引用されている参考文献を参照されたい)。培養培地は、当技術分野において公知の培養培地の他の任意の成分を含んでよい。いくつかの態様において、細胞は低酸素条件下で培養される。培養物は、血清を含んでも無血清であってもよい。
本発明の方法を用いて得られたiPS細胞を、臨床応用および研究応用を含む多くの応用に用いることができる。いくつかの態様において、細胞は、その細胞種に対する薬の影響を評価するために用いられる分化した細胞種であってよい。いくつかの態様において、細胞をインビボで利用することができる。iPS細胞を、神経細胞、心筋細胞、肝臓の肝細胞、および肺の呼吸上皮細胞等の多くの細胞種に分化させることができる。
本発明のいくつかの局面において、癌幹細胞等の幹細胞においてΔ133p53の内在的発現を阻止すること、またはp53βの内在的発現を阻止することが望ましい。Δ133p53およびp53βに対する、siRNA、shRNA、リボザイム、またはアンチセンス分子等の阻害性核酸を、当技術分野において公知の方法を用いることによって合成および細胞内に導入することができる。分子を、インビトロで化学的もしくは酵素的に合成することができ(Micura, Agnes Chem. Int. Ed. Emgl. 41:2265-9 (2002);Paddison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:1443-8 2002)、またはshRNAの形態で細胞内で内在的に発現させることができる(Yu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:6047-52 (2002);McManus et al., RNA 8, 842-50 (2002))。核内低分子RNAプロモーターであるRNAポリメラーゼIII U6もしくはH1、またはRNAポリメラーゼII U1を用いたプラスミドに基づく発現システムが、shRNAの内在的発現に用いられている(Brummelkamp et al., Science, 296:550-3 (2002);Sui et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:5515-20 (2002);Novarino et al., J. Neurosci., 24:5322-30 (2004))。エレクトロポレーションによってまたは親油性物質を用いることによって、合成siRNAを送達することができる(McManus et al., RNA 8, 842-50 (2002);Kishida et al., J. Gene Med., 6:105-10 (2004))。あるいは、プラスミドシステムを用いて、標的遺伝子の抑制のための低分子ヘアピンRNAを安定的に発現させることができる(Dykxhoorn et al., Nat. Rev. Mol. Biol, 4:457-67 (2003))。トランスフェクションするのが困難である細胞内にshRNA発現カセットを送達するための様々なウイルス送達システムが開発されている(Brummelkamp et al., Cancer Cell, 2:243-7 (2002);Rubinson et al., Nat. Genet., 33:401-6 2003)。さらに、siRNAを生きた動物内に送達することもできる(Hasuwa et al., FEBS Lett., 532, 227-30 (2002);Carmell et al., Nat. Struct. Biol, 10:91-2 (2003);Kobayashi et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 308:688-93 (2004))。
ヒト胚性幹細胞をΔ133p53タンパク質の発現について評価した。タンパク質溶解物をヒト胚性幹細胞のUC06およびWA09から単離した。結果(図1)は、未分化型および胚様体がΔ133p53を発現していることを示した。対照の線維芽細胞は、Δ133p53のわずかな発現を示した。結腸癌細胞のHCT116は、胚性幹細胞と比較してより低いレベルの発現を示した。
図2は、内在性全長p53の下方調節または内在性Δ133p53の上方調節のいずれかがiPSCリプログラミングと関連していたことを示すさらなるデータを提供している。本実験において解析されたiPS細胞クローンは、4因子(OCT4、KLF4、SOX2、およびc-Myc)によって誘導された。
Δ133p53を発現するレンチウイルス構築物を、pLenti6/V5-DEST発現ベクター(Invitrogen)を用いて作製した。図5は、Δ133p53ベクターの2つのバージョンが該タンパク質を効率的に発現したことを示すデータを提供している。
Claims (26)
- 少なくとも1種のリプログラミング因子を発現している体細胞から得られる人工多能性幹(iPS)細胞の数を増加させる方法であって、該体細胞においてΔ133p53の発現のレベルを増加させ、それによって該体細胞から得られるiPSの数を増加させる工程を含む、方法。
- 前記体細胞においてΔ133p53をコードする組換え核酸配列を発現させることによってΔ133p53の発現のレベルを増加させる、請求項1記載の方法。
- Δ133p53をコードする前記組換え核酸配列が誘導性プロモーターに機能的に連結されている、請求項2記載の方法。
- 前記組換え核酸配列がプラスミドベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターに含まれている、請求項2記載の方法。
- 前記レトロウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項4記載の方法。
- 前記組換え核酸が、lox組換え部位を含む発現カセット内に存在する、請求項2記載の方法。
- 前記体細胞が線維芽細胞である、請求項1記載の方法。
- 前記細胞内に外因性Δ133p53を導入することによってΔ133p53の発現のレベルを増加させる、請求項1記載の方法。
- 前記リプログラミング因子がOCT4、KLF4、SOX2、およびc-mycからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 前記体細胞がOCT4、KLF4、およびSOX2を発現している、請求項1記載の方法。
- 体細胞がOCT4、KLF4、SOX2、およびc-mycを発現している、請求項1記載の方法。
- 組換えΔ133p53をコードする発現ベクターを含む単離されたiPS細胞であって、少なくとも1種のリプログラミング成長因子を発現している、単離されたiPS細胞。
- Δ133p53をコードする前記組換え核酸配列が誘導性プロモーターに機能的に連結されている、請求項12記載の単離されたiPS細胞。
- 前記発現ベクターがプラスミドベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターである、請求項12記載の単離されたiPS細胞。
- 前記レトロウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項14記載の単離されたiPS細胞。
- 前記リプログラミング因子がOCT4、KLF4、SOX2、およびc-mycからなる群より選択される、請求項12記載の単離されたiPS細胞。
- 前記体細胞がOCT4、KLF4、およびSOX2を発現している、請求項12記載の単離されたiPS細胞。
- 前記体細胞がOCT4、KLF4、SOX2、およびc-mycを発現している、請求項12記載の単離されたiPS細胞。
- 前記発現ベクターがlox組換え部位を含む、請求項12記載の単離されたiPS細胞。
- Δ133p53の発現を抑制する工程を含む、請求項19記載のiPS細胞を分化させる方法。
- creリコンビナーゼを発現させてΔ133p53の発現を阻止する工程を含み、Δ133p53をコードする核酸がlox組換え部位を含む、請求項20記載の方法。
- Δ133p53の発現を阻害する工程を含む、癌幹細胞の増殖を阻害する方法。
- 前記細胞にΔ133p53の機能または発現を阻害する作用物質を接触させ、それによって前記癌幹細胞の増殖を阻害する工程を含む、請求項22記載の方法。
- 前記作用物質がsiRNAである、請求項23記載の方法。
- 前記siRNAがshRNAである、請求項24記載の方法。
- 前記作用物質がリボザイムである、請求項23記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US38913410P | 2010-10-01 | 2010-10-01 | |
US61/389,134 | 2010-10-01 | ||
PCT/US2011/054304 WO2012044979A2 (en) | 2010-10-01 | 2011-09-30 | Manipulation of stem cell function by p53 isoforms |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013541951A true JP2013541951A (ja) | 2013-11-21 |
Family
ID=44993159
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013531927A Pending JP2013541951A (ja) | 2010-10-01 | 2011-09-30 | p53アイソフォームによる幹細胞機能の操作 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130267029A1 (ja) |
EP (1) | EP2622065B1 (ja) |
JP (1) | JP2013541951A (ja) |
AU (1) | AU2011308567B2 (ja) |
CA (1) | CA2812300A1 (ja) |
WO (1) | WO2012044979A2 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016120495A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Delta133p53beta and delta133p53gamma isoforms are biomarkers of cancer stem cells |
JP2018509890A (ja) * | 2015-01-30 | 2018-04-12 | センター ナショナル ド ラ ルシェルシュ サイエンティフィーク | 人工多能性幹細胞(iPSC)の生産を再プログラムする方法 |
US10221395B2 (en) | 2016-06-16 | 2019-03-05 | Cedars-Sinai Medical Center | Efficient method for reprogramming blood to induced pluripotent stem cells |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009157593A1 (en) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
Family Cites Families (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4987071A (en) | 1986-12-03 | 1991-01-22 | University Patents, Inc. | RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
US5384253A (en) | 1990-12-28 | 1995-01-24 | Dekalb Genetics Corporation | Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes |
WO1993004169A1 (en) | 1991-08-20 | 1993-03-04 | Genpharm International, Inc. | Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs |
US5702932A (en) | 1992-07-20 | 1997-12-30 | University Of Florida | Microinjection methods to transform arthropods with exogenous DNA |
US6447796B1 (en) | 1994-05-16 | 2002-09-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Sustained release hydrophobic bioactive PLGA microspheres |
US5656610A (en) | 1994-06-21 | 1997-08-12 | University Of Southern California | Producing a protein in a mammal by injection of a DNA-sequence into the tongue |
US5736524A (en) | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
US5843780A (en) | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5780448A (en) | 1995-11-07 | 1998-07-14 | Ottawa Civic Hospital Loeb Research | DNA-based vaccination of fish |
US5945100A (en) | 1996-07-31 | 1999-08-31 | Fbp Corporation | Tumor delivery vehicles |
US5981274A (en) | 1996-09-18 | 1999-11-09 | Tyrrell; D. Lorne J. | Recombinant hepatitis virus vectors |
US5994624A (en) | 1997-10-20 | 1999-11-30 | Cotton Incorporated | In planta method for the production of transgenic plants |
MXPA01009073A (es) | 1999-03-10 | 2002-05-06 | Phogen Ltd | Suministro de acidos nucleicos y proteinas a las celulas. |
US6984522B2 (en) | 2000-08-03 | 2006-01-10 | Regents Of The University Of Michigan | Isolation and use of solid tumor stem cells |
US20020130430A1 (en) | 2000-12-29 | 2002-09-19 | Castor Trevor Percival | Methods for making polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins and other products |
US7060498B1 (en) | 2001-11-28 | 2006-06-13 | Genta Salus Llc | Polycationic water soluble copolymer and method for transferring polyanionic macromolecules across biological barriers |
US7141540B2 (en) | 2001-11-30 | 2006-11-28 | Genta Salus Llc | Cyclodextrin grafted biocompatible amphilphilic polymer and methods of preparation and use thereof |
US20050222064A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | Polycationic compositions for cellular delivery of polynucleotides |
DE60332277D1 (de) | 2002-11-26 | 2010-06-02 | Univ Massachusetts | Verabreichung von sirnas |
CN1906308B (zh) | 2003-12-19 | 2011-09-14 | 诺华疫苗和诊断公司 | 小干扰rna的细胞转染制剂、相关组合物以及制备和使用方法 |
MXPA06012076A (es) | 2004-04-20 | 2007-01-25 | Nastech Pharm Co | Metodos y composiciones para mejorar el suministro de arn bicatenario o un acido nucleico hibrido bicatenario para regular la expresion genetica en celulas de mamifero. |
US7514530B2 (en) | 2004-04-26 | 2009-04-07 | Centre National De La Recherche Scientifique | Peptide carrier for delivering siRNA into mammalian cells |
US8278104B2 (en) * | 2005-12-13 | 2012-10-02 | Kyoto University | Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2 |
WO2009029054A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Agency For Science, Technology And Research | P53 isoform gene(s) and uses thereof |
EP2217706B1 (en) * | 2007-11-12 | 2015-05-27 | The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Therapeutic applications of p53 isoforms in regenerative medicine, aging and cancer |
US9497943B2 (en) * | 2008-06-13 | 2016-11-22 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Nucleic acid constructs encoding reprogramming factors linked by self-cleaving peptides |
KR101829310B1 (ko) | 2008-06-30 | 2018-02-14 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 만능 줄기 세포의 분화 |
US8703413B2 (en) | 2008-09-22 | 2014-04-22 | Children's Medical Center Corporation | Detection of human somatic cell reprogramming |
US20100124781A1 (en) | 2008-11-20 | 2010-05-20 | Shelley Nelson | Pluripotent Stem Cell Culture on Micro-Carriers |
US20110300111A1 (en) | 2008-11-20 | 2011-12-08 | Cedars-Sinai Medical Center | Generation of induced pluripotent stem cells without the use of viral vectors |
CN102317442B (zh) | 2008-12-17 | 2014-08-13 | 斯克里普斯研究所 | 干细胞的产生和保持 |
US20120076762A1 (en) * | 2009-03-25 | 2012-03-29 | The Salk Institute For Biological Studies | Induced pluripotent stem cell generation using two factors and p53 inactivation |
-
2011
- 2011-09-30 EP EP11771334.7A patent/EP2622065B1/en not_active Not-in-force
- 2011-09-30 AU AU2011308567A patent/AU2011308567B2/en not_active Ceased
- 2011-09-30 US US13/877,100 patent/US20130267029A1/en not_active Abandoned
- 2011-09-30 JP JP2013531927A patent/JP2013541951A/ja active Pending
- 2011-09-30 CA CA2812300A patent/CA2812300A1/en not_active Abandoned
- 2011-09-30 WO PCT/US2011/054304 patent/WO2012044979A2/en active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009157593A1 (en) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
BOURDON, J.-C., ET AL., GENES & DEVELOPMENT, vol. 19, JPN6015039829, 2005, pages 2122 - 2137, ISSN: 0003168395 * |
BOURDON, J.-C., ET AL.: "p53 Family Pathway in Cancer", THE CANCER HANDBOOK, vol. 2nd Edition, JPN6015039825, 2007, pages 1 - 10, ISSN: 0003168393 * |
KAWAMURA, T., ET AL., NATURE, vol. 460, JPN6015039822, 2009, pages 1140 - 1144, ISSN: 0003168392 * |
SOUSSI, T., ONCOGENE, vol. 26, JPN6015039827, 2007, pages 2145 - 2156, ISSN: 0003168394 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2011308567A1 (en) | 2013-04-04 |
US20130267029A1 (en) | 2013-10-10 |
AU2011308567B2 (en) | 2015-09-03 |
EP2622065A2 (en) | 2013-08-07 |
WO2012044979A2 (en) | 2012-04-05 |
EP2622065B1 (en) | 2016-09-07 |
CA2812300A1 (en) | 2012-04-05 |
WO2012044979A3 (en) | 2012-07-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US12012615B2 (en) | Method of making induced pluripotent stem cells using p53 inhibitors | |
EP3070163B1 (en) | Method for preparing induced pluripotent stem cell, composition used in method, and uses thereof | |
US9404124B2 (en) | Method of producing induced pluripotent stem cells using inhibitors of P53 | |
US20120076762A1 (en) | Induced pluripotent stem cell generation using two factors and p53 inactivation | |
JP5626619B2 (ja) | 効率的な核初期化方法 | |
JP2012507258A (ja) | 人工多能性幹細胞の作製方法 | |
JP2013510576A (ja) | iPS細胞の生成および調節のための方法およびその組成物 | |
JP2015522257A (ja) | 多能性幹細胞を調製する方法 | |
JP5794588B2 (ja) | 効率的な人工多能性幹細胞の樹立方法 | |
CA2788635A1 (en) | Enhanced efficiency of induced pluripotent stem cell generation | |
US10077429B2 (en) | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells | |
JP5987063B2 (ja) | 分化多能性幹細胞の製造方法 | |
JP6460482B2 (ja) | 多能性幹細胞から生殖細胞への分化誘導方法 | |
SG176222A1 (en) | Generation of genetically corrected disease-free induced pluripotent stem cells | |
EP2622065B1 (en) | Manipulation of stem cell function by p53 isoforms | |
WO2017126616A1 (ja) | ユーイング肉腫ファミリー腫瘍モデル細胞とそれを用いた抗腫瘍剤のスクリーニング方法 | |
AU2015264813A1 (en) | Manipulation of stem cell function by p53 isoforms |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20140702 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140702 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140807 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140925 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20150529 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151005 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160104 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160405 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160831 |