JP2013506124A - 質量分析による分子の検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、サンプル中の少なくとも1種の標的分子を質量分析によって検出するための方法であって、
a)上記サンプルの上記分子をイオン化する工程と、
b)以下の工程(i)及び(ii):
(i)上記工程で得られたイオンを少なくとも1種、上記標的分子に基づいて質量分析計において選択する工程、及び、
(ii)こうして選択されたイオンを断片化セルにおいて断片化する工程
をn回(nは0、1、2、3又は4)行う工程と、
c)nが0の場合には工程a)で、又は、nが0でない場合には工程b)で得られた少なくとも2種類の異なるイオンであって、上記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有する少なくとも2種類のイオンを質量分析計において捕捉する工程と、
d)こうして捕捉された特有のイオンを上記質量分析計から放出する工程と、
e)こうして放出された特有のイオンを検出器で検出する工程と
を含む方法に関する。本発明の方法は、上記特有のイオンが、工程d)において同時に放出され、工程e)において同時に検出されることを特徴とする。
【選択図】なし
Description
i)分析対象のサンプルに存在する分子をイオン化するための、すなわち、これらの分子に正又は負の電荷を付与するためのイオン源と;
ii)イオン化された分子又は分子イオンをその質量電荷比(m/z)に基づいて分離するための質量分析計と;
iii)上記分子イオンによって直接生成されたシグナル、又は、上記分子イオンから生成したイオンによって生成されたシグナルを測定するための検出器を有する。
(i)一次フラグメントイオンと呼ばれるイオンを生成させるための、分子イオン(以下、プリカーサーイオンと称する)の断片化、及び、
(ii)質量に基づいた、一次フラグメントイオンと呼ばれるイオンの分離。
a)少なくとも1つのイオン化装置によって上記サンプルの上記分子をイオン化して、分子イオンを得る工程と、
b)以下の工程(i)及び(ii):
(i)上記工程で得られたイオンを少なくとも1種、上記標的分子に基づいて質量分析計において選択する工程、及び、
(ii)こうして選択された少なくとも1種のイオンを断片化セルにおいて断片化する工程
をn回(nは0、1、2、3又は4)行う工程と、
c)nが0の場合には工程a)で、又は、nが0でない場合には工程b)で得られた少なくとも2種類の異なるイオンであって、上記標的分子に特有で、上記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有する少なくとも2種類のイオンを質量分析計において捕捉する工程と、
d)こうして捕捉された特有のイオンを上記質量分析計から放出する工程と、
e)こうして放出された特有のイオンを検出器で検出する工程と
を含む方法を提供する。
a)少なくとも1つのイオン化装置によって上記サンプルの分子をイオン化して、分子イオンを得る工程と、
c)工程a)で得られた少なくとも2種類の異なるイオンであって、上記標的分子に特有で、上記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有する少なくとも2種類のイオンを質量分析計において捕捉する工程と、
d)こうして捕捉された特有のイオンを上記質量分析計から放出する工程と、
e)こうして放出された特有のイオンを検出器で検出する工程と
を含む。上記特有のイオンは、工程d)で同時に放出され、工程e)で同時に検出されるものと理解される。
a)少なくとも1つのイオン化装置によって上記サンプルの分子をイオン化して、分子イオンを得る工程と、
b)以下の工程(i)及び(ii):
(i)上記工程で得られたイオンを少なくとも1種(プリカーサーイオンと呼ばれる)、上記標的分子に基づいて質量分析計において選択する工程、及び、
(ii)こうして選択された少なくとも1種のイオンを断片化セルにおいて断片化して、少なくとも2種類の一次フラグメントイオンを得る工程
を1回行う工程と、
c)工程b)で得られた少なくとも2種類の異なるイオンであって、上記標的分子に特有で、上記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有する少なくとも2種類のイオンを質量分析計において捕捉する工程と、
d)こうして捕捉された特有のイオンを上記質量分析計から放出する工程と、
e)こうして放出された特有のイオンを検出器で検出する工程と
を含む。上記特有のイオンは、工程d)で同時に放出され、工程e)で同時に検出されるものと理解される。
a)少なくとも1つのイオン化装置によって上記サンプルの分子をイオン化して、分子イオンを得る工程と、
b)下記工程:
(i)上記工程で得られたイオンを少なくとも1種(プリカーサーイオンと呼ばれる)、上記標的分子に基づいて質量分析計において選択する工程、
(ii)こうして選択された少なくとも1種のイオンを断片化セルにおいて断片化して、一次フラグメントイオンを得る工程、
(iii)少なくとも1種の一次フラグメントイオンを上記標的分子に基づいて質量分析計において選択する工程、及び、
(iv)こうして選択された少なくとも1種のイオンを断片化セルにおいて断片化して、少なくとも2種類の二次フラグメントイオンを得る工程
を行う工程と、
c)工程b)で得られた少なくとも2種類の異なる二次フラグメントイオンであって、上記標的分子に特有で、上記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有する少なくとも2種類のイオンを質量分析計において捕捉する工程と、
d)こうして捕捉された特有のイオンを上記質量分析計から放出する工程と、
e)こうして放出された特有のイオンを検出器で検出する工程と
を含む。上記特有のイオンは、工程d)で同時に放出され、工程e)で同時に検出されるものと理解される。
・工程b)で用いる質量分析計は、イオントラップ又は四重極であり、
・断片化セルは、イオントラップ又は四重極である。
TP171組み換えタンパク質は、梅毒の病原菌であるTreponema pallidumの組み換えタンパク質であって、配列番号1の配列を有する。
MRGSASFSSIPNGTYRATYQDFDENGWKDFLEVTFDGGKMVQVVYDYQHKEGRFKSQDADYHRVMYASSGIGPEKAFRELADALLEKGNPEMVDVVTGATVSSQSFRRLGAALLQSARRGEKEAIISRGSSKYKYHHHHHH.
・pH=8.0の50mM重炭酸塩3ml中、最終濃度が10μg/mlとなるように、TP171溶液を希釈する。
・最終濃度が15mMとなるように、ジチオトレイトール(DTT)を添加する。
・60℃で40分間還元する。
・チューブを室温まで冷却する。
・最終濃度が25mMとなるように、ヨードアセトアミドを添加する。
・暗所で室温下、40分間アルキル化を行う。
・1/30の比でトリプシンを添加する。
・37℃で4時間消化する。
・最終濃度が10mMとなるように、DTTを添加する。
・60℃で40分間還元する。
・チューブを室温まで冷却する。
・最終濃度がそれぞれ10%(ACN)、0.5%(ギ酸)となるように、アセトニトリル(ACN)及びギ酸を添加する。
5ミリグラムのPSA(前立腺特異抗原、Scipac社(英国)製)P117−8番を実施例1のプロトコルに従って消化する。
・Dionex社(アメリカ合衆国、カリフォルニア州、サニーベール)製のクロマトグラフィーシステムUltimate 3000
・Waters社(アメリカ合衆国、マサチューセッツ州、ミルフォード)製のSymmetry C18カラム(内径2.1mm、長さ100mm、粒径3.5μm)
・溶媒A:H2O+0.1%ギ酸
・溶媒B:ACN+0.1%ギ酸
PSA溶液、及び、PSAを含まない女性の血清を実施例2のプロトコルに従って消化した。
Claims (13)
- サンプル中の少なくとも1種の標的分子を質量分析によって検出するための方法であって、
a)少なくとも1つのイオン化装置によって前記サンプルの前記分子をイオン化して、分子イオンを得る工程と、
b)以下の工程(i)及び(ii):
(i)前記工程で得られたイオンを少なくとも1種、前記標的分子に基づいて質量分析計において選択する工程、及び、
(ii)こうして選択された少なくとも1種のイオンを断片化セルにおいて断片化する工程
をn回(nは0、1、2、3又は4)行う工程と、
c)nが0の場合には工程a)で、又は、nが0でない場合には工程b)で得られた少なくとも2種類の異なるイオンであって、前記標的分子に特有で、前記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有する少なくとも2種類のイオンを質量分析計において捕捉する工程と、
d)こうして捕捉された特有のイオンを前記質量分析計から放出する工程と、
e)こうして放出された特有のイオンを検出器で検出する工程と
を含み、
前記特有のイオンは、工程d)において同時に放出され、工程e)において同時に検出されることを特徴とする方法。 - 工程c)で用いる前記質量分析計はイオントラップであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記イオントラップは、三次元型又は線形型であることを特徴とする、請求項2に記載の方法。
- 工程d)における前記特有のイオンの放出は、前記標的分子に特有の質量電荷比m/zを有するイオンを、前記イオントラップ内で無線周波数によって同時に共振させることによって行われることを特徴とする、請求項2又は3に記載の方法。
- 前記特有のイオンを捕捉した後であって、該イオンを放出及び検出する前に、前記標的分子に特有でないイオンを工程c)の前記質量分析計から取り除くことを特徴とする、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- nは1、2、3又は4であり、且つ、工程b)で用いる前記質量分析計は、イオントラップ又は四重極質量分析計であることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記断片化セルはイオントラップであることを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- 工程b)及び工程c)は同一装置、すなわちイオントラップにおいて行われることを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- nは1であり、且つ、工程c)で捕捉される前記少なくとも2種類のイオンは一次フラグメントイオンであることを特徴とする、請求項6〜8のいずれか一項に記載の方法。
- nは2であり、且つ、工程c)で捕捉される前記少なくとも2種類のイオンは二次フラグメントイオンであることを特徴とする、請求項6〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルには、精製を目的とした前処理が施されていることを特徴とする、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的分子は、タンパク質のプロテオタイピックペプチドであり、前記サンプルには、標的タンパク質からペプチドを生成させる前処理が施されていることを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 同時放出及び同時検出の後、検出された前記特有のイオンを、前記標的分子を定量するために、特に、検量線を作成するか、又は、前記標的分子に類似した分子を用いた内部較正を行って、定量することを特徴とする、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
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中西 豊文: "「質量分析の原理と応用」", 臨床化学, vol. 37, no. 3, JPN6013063192, 31 July 2008 (2008-07-31), pages 317 - 326, ISSN: 0003029091 * |
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