JP2013255474A - Method for transferring selected molecule into target cell and selected molecule transfer device used for the same - Google Patents

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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for transferring a selected molecule into a target cell, by which the selected molecule can more efficiently be transferred than before, and a damage given to the target cell can be reduced, and to provide a selected molecule transfer device used for the same.SOLUTION: A method for transferring a selected molecule into a target cell or target tissue includes a transport step for passing a first liquid through an inner portion or outer surface of a voltage-applied electrode to act an electric field on the first liquid and transporting it to a container, wherein the first liquid contains at least one selected from a group consisting of a transfer liquid which is a liquid containing the selected molecule, the target cell or target tissue, and a culture liquid; and the selected molecule is brought into contact with the target cell or target tissue before or after the transport step.

Description

本発明は、標的細胞への核酸、蛋白質、低分子化合物などの選定分子の導入方法、および、それに用いる選定分子導入装置に関する。   The present invention relates to a method for introducing a selected molecule such as a nucleic acid, a protein, and a low molecular compound into a target cell, and a selected molecule introducing apparatus used therefor.

近年、ヒトゲノムおよびマウスゲノムの解読がなされ、医学、薬学などの分野において、分子生物学関連の研究開発や医薬品開発を行なう際に、DNA、RNAなどのポリヌクレオチドまたはその誘導体、シグナル伝達蛋白質や転写調節因子などの蛋白質やその誘導体などの高分子化合物、低分子生理活性物質、薬剤候袖品などの分子を標的細胞内に導入し、標的細胞内での遺伝子の機能や生理活性分子の生理的な活性を試験する必要が増している。   In recent years, the human genome and mouse genome have been deciphered, and in the fields of medicine and pharmacy, when conducting molecular biology-related research and drug development, polynucleotides such as DNA and RNA or derivatives thereof, signal transduction proteins and transcription Introducing molecules such as proteins such as regulatory factors and high molecular compounds such as derivatives thereof, low molecular weight biologically active substances, and drug-sleeving products into target cells, and the functions of genes in the target cells and physiologically active physiological molecules There is an increasing need to test for new activity.

現在のところ、標的細胞への選定分子の導入方法としては、エレクトロポレーション法、ジーンガン法、リポソーム法、細胞融合法、ウイルスベクター法などの方法が用いられているが、必ずしも十分に選定分子を細胞内に導入できるものではないという問題がある。   At present, methods such as electroporation, gene gun method, liposome method, cell fusion method, and viral vector method are used as methods for introducing selected molecules into target cells. There is a problem that it cannot be introduced into cells.

たとえば、エレクトロポレーション法やジーンガン法においては、多くの種類の標的細胞に応用できるが、操作が煩雑であり、ハイスループットスクリーニング化(本明細書において、HTS化とも記載する)することが難しいという問題がある。また、リポソーム法や細胞融合法においては、応用できる標的細胞の種類が限定されるといった問題がある。さらに、ウイルスベクター法においては、ベクターの構築に非常に多くの時間と労力とコストを要し、選定分子を導入された細胞に癌化などの異常が起こるなどの問題があり、いずれの方法においても細胞への障害性が高く、細胞の変性や死亡率が高い。   For example, the electroporation method and the gene gun method can be applied to many types of target cells, but the operation is complicated and it is difficult to perform high-throughput screening (also referred to as HTS in this specification). There's a problem. In addition, the liposome method and the cell fusion method have a problem that the types of target cells that can be applied are limited. Furthermore, in the viral vector method, it takes a lot of time, labor and cost to construct a vector, and there is a problem that abnormalities such as canceration occur in cells into which a selected molecule has been introduced. Are highly damaging to cells and have high cell degeneration and mortality.

そして、いずれの方法も高価であるため、仮にHTS化できたとしても、その方法のランニングコストが非常に高価なものとなるか、あるいは、その方法に用いる装置が非常に高価なものとなるという問題がある。また、いずれの方法においても、すべての標的細胞への選定分子の導入効率が必ずしも十分に満足できる水準ではないという問題もある。   And since each method is expensive, even if it can be converted to HTS, the running cost of the method becomes very expensive, or the apparatus used for the method becomes very expensive. There's a problem. In addition, in any of the methods, there is a problem that the efficiency of introducing the selected molecule into all target cells is not always sufficiently satisfactory.

しかし、ヒトゲノムおよびマウスゲノムの解読がほぼ完了し、機能未知な遺伝子の機能解析が急務となっている昨今の社会情勢の中で、HTS化された標的細胞への選定分子の導入方法が必要不可欠な技術として、医薬品業界をはじめとする産業界からその開発を強く求められる状況となっている。   However, in recent social situations where the human genome and mouse genome have been almost completely decoded and functional analysis of genes with unknown functions is urgently needed, a method for introducing selected molecules into HTS target cells is indispensable. As a new technology, there is a strong demand for development from the pharmaceutical industry and other industries.

ここで、標的細胞への選定分子の導入方法をHTS化するためには、標的細胞への選定分子の導入効率を高めることが必要である。また、標的細胞への選定分子の導入方法を用いてさまざまな遺伝子の機能解析を可能にするためには、特定の限られた種類の標的細胞への遺伝子の導入が可能であるだけではなく、さまざまな種類の標的細胞への高効率な遺伝子の導入が可能である、標的細胞への選定分子の導入方法の開発が必要である。   Here, in order to make the method of introducing a selected molecule into a target cell into HTS, it is necessary to increase the efficiency of introducing the selected molecule into the target cell. In addition, in order to enable functional analysis of various genes using the method of introducing selected molecules into target cells, it is not only possible to introduce genes into specific limited types of target cells, It is necessary to develop a method for introducing a selected molecule into a target cell that enables highly efficient gene introduction into various types of target cells.

しかし、産業界からの強い要望にも関わらず、多種類の標的細胞への障害を伴わず高効率な選定分子の導入が可能である、標的細胞への選定分子の導入方法は、未だ公知のものとはなっていないのが現状である。   However, despite the strong demand from the industry, a method for introducing a selected molecule into a target cell that can introduce a highly efficient selected molecule without causing any obstacles to many types of target cells is still known. The current situation is not.

近年、分子生物学関連の研究開発や医薬品開発を行なう際に、同種のまたは異種の標的細胞を融合させることにより、さまざまな標的細胞の機能を試験する必要も同様に増しつつある。   In recent years, when performing molecular biology-related research and drug development, the need to test the functions of various target cells by fusing the same or different types of target cells is also increasing.

現在のところ、標的細胞への選定分子の導入方法としては、不活性化したセンダイウイルス、麻疹ウイルス、ニューカッスル病ウイルスなどを用いる方法、リゾレシチン、グリセロールオレイン酸エステル、ポリエチレングジコール(PEG)などを用いる方法、エレクトロポレーション法などの方法が用いられているが、必ずしも十分に選定分子を導入することができるものではないという問題がある。   Currently, methods for introducing selected molecules into target cells include methods using inactivated Sendai virus, measles virus, Newcastle disease virus, lysolecithin, glycerol oleate, polyethylene gudicol (PEG), etc. Although methods such as the method and the electroporation method are used, there is a problem that the selected molecule cannot be sufficiently introduced.

たとえば、エレクトロポレーション法においては、特に細胞への障害性が高く、細胞の変性や死亡率が高く、また、多くの種類の標的細胞に応用できるが、操作が煩雑であり、HTS化することが難しいという問題がある。また、不活性化したウイルスを用いる方法においては、応用できる標的細胞の種類が限定されるといった問題がある。   For example, in electroporation, cell damage is particularly high, cell degeneration and mortality are high, and it can be applied to many types of target cells. There is a problem that is difficult. In addition, the method using an inactivated virus has a problem that the types of target cells that can be applied are limited.

さらに、いずれの方法も高価であるため、仮にHTS化できたとしても、その方法のランニングコストが非常に高価なものとなるか、あるいは、その方法に用いる装置が非常に高価なものとなるという問題がある。また、いずれの方法においても、標的細胞への選定分子の導入効率は必ずしも十分に満足できる水準ではなかった。   Furthermore, since both methods are expensive, even if HTS can be realized, the running cost of the method becomes very expensive, or the apparatus used for the method becomes very expensive. There's a problem. In any of the methods, the efficiency of introducing the selected molecule into the target cell is not always sufficiently satisfactory.

ここで、標的細胞の細胞融合方法をHTSイヒするためには、標的細胞への選定分子の導入効率を高めることが必要である。また、標的細胞への選定分子の導入方法を用いてさまざまな標的細胞の機能解析を可能にするためには、特定の限られた種類の標的細胞への選定分子の導入が可能であるだけではなく、さまざまな種類の標的細胞への選定分子の導入が可能である、標的細胞への選定分子の導入方法の開発が必要である。   Here, in order to perform the cell fusion method of the target cell by HTS, it is necessary to increase the efficiency of introducing the selected molecule into the target cell. In addition, in order to enable functional analysis of various target cells using the method for introducing selected molecules into target cells, it is not only possible to introduce selected molecules into specific limited types of target cells. However, it is necessary to develop a method for introducing a selected molecule into a target cell that can introduce the selected molecule into various types of target cells.

かかる状況において、国際公開第2002/064767号(特許文献1)、国際公開第2004/015101号(特許文献2)には、細胞や選定分子を低温ガスプラズマで処理することにより細胞の近傍に存在する選定分子を細胞内に導入する方法、および、細胞を低温ガスプラズマで処理することにより細胞を融合する方法が開示されている。しかし、かかる方法は低温ガスプラズマの発生装置が必要であり、ガスを吹きつけるために細胞が乾燥し死滅してしまう場合もあるため、必ずしも十分なものとはいえず、革新的な新手法が必要な状況にあった。   Under such circumstances, International Publication No. 2002/064767 (Patent Document 1) and International Publication No. 2004/015101 (Patent Document 2) exist in the vicinity of cells by treating cells and selected molecules with low-temperature gas plasma. A method for introducing a selected molecule into a cell and a method for fusing a cell by treating the cell with cold gas plasma are disclosed. However, this method requires a low-temperature gas plasma generator, and the cells may dry out and die due to the blowing of gas. The situation was necessary.

国際公開第2002/064767号International Publication No. 2002/064767 国際公開第2004/015101号International Publication No. 2004/015101

本発明は、従来より、さらに効率的に選定分子を導入することができ、かつ、標的細胞に与える障害が少ない標的細胞への選定分子の導入方法、および、それに用いる選定分子導入装置を提供することを目的とする。   The present invention provides a method for introducing a selected molecule into a target cell that can introduce a selected molecule more efficiently and has less damage to the target cell, and a selected molecule introduction device used therefor. For the purpose.

本発明は、標的細胞または標的組織への選定分子の導入方法であって、
第1の液体を、電圧を印加した電極の内部または外表面を通過させることにより、前記第1の液体に電界を作用させながら、容器に移送する移送ステップを含み、
前記第1の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含み、
前記移送ステップの前または後に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させる、選定分子の導入方法である。
The present invention is a method for introducing a selected molecule into a target cell or tissue,
A transfer step of transferring the first liquid to a container while allowing an electric field to act on the first liquid by passing through an inside or an outer surface of an electrode to which a voltage is applied;
The first liquid includes at least one selected from the group consisting of an introduction liquid that is a liquid containing the selected molecule, the target cell or target tissue, and a culture solution,
In the method for introducing a selected molecule, the selected molecule is brought into contact with the target cell or target tissue before or after the transfer step.

前記第1の液体は、前記標的細胞または標的組織および/または前記導入液を含むことが好ましい。また、前記第1の液体は、前記標的細胞または標的組織を含むことがより好ましい。   The first liquid preferably contains the target cell or target tissue and / or the introduction liquid. More preferably, the first liquid contains the target cell or target tissue.

前記第1の液体は、前記標的細胞または標的組織および前記導入液を含み、
前記移送ステップの前に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させることがさらに好ましい。
The first liquid includes the target cell or target tissue and the introduction liquid,
More preferably, the selected molecule is brought into contact with the target cell or target tissue before the transferring step.

前記第1の液体が前記容器に移送される前に、前記容器には第2の液体が収容されており、
前記第2の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組容器織、および、培養液のうち前記第1の液体に含まれるものを除く群から選択される少なくとも1つを含むことが好ましい。
Before the first liquid is transferred to the container, the container contains a second liquid;
The second liquid is at least selected from the group excluding the introduction liquid that is a liquid containing the selected molecule, the target cell or target assembly container, and the culture liquid contained in the first liquid. Preferably one is included.

前記電極は、前記第1の溶液を収容するバレルに接続され、前記容器とは離間して設置されていることが好ましい。   It is preferable that the electrode is connected to a barrel that stores the first solution and is spaced apart from the container.

また、本発明は、上記の導入方法に用いられる選定分子導入装置であって、
前記第1の液体を移送するための移送機構と、
移送された前記第1の液体を収容するための容器と、
前記電極に電圧を印加するための電圧印加機構とを備える、選定分子導入装置にも関する。
Further, the present invention is a selected molecule introduction apparatus used in the introduction method described above,
A transfer mechanism for transferring the first liquid;
A container for containing the transferred first liquid;
The present invention also relates to a selected molecule introduction device including a voltage application mechanism for applying a voltage to the electrode.

前記電圧印加機構は、前記電極と、前記容器の前記電極とは反対側に設けられた対向電極と、前記電極および前記対向電極に接続された直流または交流の電源とを備えることが好ましい。   It is preferable that the voltage application mechanism includes the electrode, a counter electrode provided on the opposite side of the electrode of the container, and a DC or AC power source connected to the electrode and the counter electrode.

本発明によれば、標的細胞や選定分子が、電極に生じる電界の作用を受けることにより、従来よりも効率的に選定分子を導入することができ、かつ、標的細胞に与える障害が少なく、本来持つ標的細胞の機能を失わせることなく、導入後の標的細胞の生存率も高く維持することのできる標的細胞への選定分子の導入方法、および、それに用いる選定分子導入装置が提供される。   According to the present invention, the target cell and the selected molecule are subjected to the action of the electric field generated on the electrode, so that the selected molecule can be introduced more efficiently than before, and there are few obstacles to the target cell. Provided are a method for introducing a selected molecule into a target cell and a selected molecule introducing device used therefor, which can maintain a high survival rate of the target cell after introduction without losing the function of the target cell.

これにより、HTS化が可能である。また、さまざまな種類の標的細胞へのさまざまな種類の選定分子の高効率な導入が可能である。   Thereby, HTS conversion is possible. In addition, various types of selected molecules can be efficiently introduced into various types of target cells.

本発明の選定分子導入装置の一例の概要を示す模式図である。It is a schematic diagram which shows the outline | summary of an example of the selection molecule introduction apparatus of this invention. 実施例における導入率の比較を示すグラフである。It is a graph which shows the comparison of the introduction rate in an Example.

<標的細胞または標的組織内への選定分子の導入方法>
本発明の標的細胞または標的組織への選定分子の導入方法は、第1の液体を、電圧を印加した電極の内部または外表面を通過させることにより、前記第1の液体に電界を作用させながら、容器に移送する移送ステップを含むことを特徴とする。前記第1の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含む。本方法では、前記移送ステップの前または後に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させる。
<Method of introducing selected molecule into target cell or target tissue>
In the method for introducing a selected molecule into a target cell or target tissue of the present invention, an electric field is applied to the first liquid by passing the first liquid through the inside or the outer surface of an electrode to which a voltage is applied. A transfer step of transferring to the container. The first liquid includes at least one selected from the group consisting of an introduction liquid that is a liquid containing the selected molecule, the target cell or target tissue, and a culture solution. In the method, the selected molecule is brought into contact with the target cell or target tissue before or after the transfer step.

(標的細胞)
本発明の選定分子の導入方法において用いる標的細胞とは、選定分子を導入する標的となる細胞のことを示し、特に特定の種類の細胞に限定されるものではない。このような標的細胞の具体例としては、ヒトを含む動物細胞、ヒト以外の動物個体、ヒトの個体から採取された細胞、ヒトの個体内の細胞、ヒトの個体、植物細胞、微生物細胞などが挙げられる。これらの標的細胞は、単一の種類を用いてもよいし、二種以上を混合して用いてもよい。
(Target cell)
The target cell used in the method for introducing a selected molecule of the present invention refers to a target cell into which a selected molecule is introduced, and is not particularly limited to a specific type of cell. Specific examples of such target cells include animal cells including humans, non-human animal individuals, cells collected from human individuals, cells within human individuals, human individuals, plant cells, microbial cells, and the like. Can be mentioned. These target cells may be used as a single type or as a mixture of two or more types.

なお、上記のヒトの個体から採取された細胞には、医薬品の研究開発などに用いられるヒトの個体に戻すことを前提としない細胞と、再生医療などに用いられるヒトの個体に戻すことを前提とする細胞とが含まれる。また、上記のヒトの個体から採取された細胞には、ヒトの個体から採取された細胞から培養された細胞も含まれる。   The cells collected from the above-mentioned human individuals are assumed not to be returned to human individuals used for pharmaceutical research and development, and to be returned to human individuals used for regenerative medicine. And cells. Further, the cells collected from the above-mentioned human individuals include cells cultured from cells collected from human individuals.

さらに、上記のヒト以外の動物細胞および植物細胞には、個体内に存在する細胞と、組織内に存在する細胞と、個体や組織から採取された細胞と、個体や組織から採取された細胞から培養された細胞とが含まれる。   Furthermore, the above non-human animal cells and plant cells include cells existing in individuals, cells existing in tissues, cells collected from individuals and tissues, and cells collected from individuals and tissues. And cultured cells.

ここで、上記とは別の側面から捉えれば、本発明に用いる標的細胞には、大腸菌、放線菌、枯草菌などの原核細胞や、酵母、ヒト以外の動物細胞、ヒトの個体から採取された細胞、ヒトの個体に含まれる細胞、植物細胞などの真核細胞が含まれる。   Here, from another aspect, the target cells used in the present invention were collected from prokaryotic cells such as Escherichia coli, actinomycetes, Bacillus subtilis, yeast, animal cells other than humans, and human individuals. Examples include eukaryotic cells such as cells, cells contained in human individuals, and plant cells.

さらに、本発明に用いる標的細胞には、赤血球ゴーストやリポソームなどの脂質二重膜構造をもつものも含まれる。   Furthermore, the target cells used in the present invention include those having a lipid bilayer structure such as erythrocyte ghosts and liposomes.

また、本発明に用いる標的細胞は、特に処理を施されていないものであってもよいが、選定分子の導入効率を向上するためには、遺伝子導入の際に一般的に用いられる、コンピータント細胞としての処理を施されたものであってもよい。具体例としては、塩化カルシウムで処理され、細胞膜の構造が変化してDNA分子を透析しやすくなった大腸菌のコンピータント細胞などが挙げられる。   In addition, the target cells used in the present invention may not be particularly treated, but in order to improve the efficiency of introducing the selected molecule, a competent that is generally used during gene introduction. It may have been treated as a cell. Specific examples include E. coli competent cells that have been treated with calcium chloride and the structure of the cell membrane has changed to facilitate dialysis of DNA molecules.

なお、本発明においては、複数の標的細胞に同時に選定分子の導入を行うこともできる。この場合、複数の標的細胞は、同種の細胞であってもよく、異種の細胞であってもよい。また、この標的細胞は、ヒト以外の動物細胞、ヒト以外の動物個体、ヒトの個体から採取された細胞、ヒトの個体内の細胞、ヒトの個体、植物細胞、微生物細胞からなる群より選ばれる1種以上であることが望ましい。   In the present invention, the selected molecule can be simultaneously introduced into a plurality of target cells. In this case, the plurality of target cells may be the same type of cells or different types of cells. The target cell is selected from the group consisting of non-human animal cells, non-human animal individuals, cells collected from human individuals, cells within human individuals, human individuals, plant cells, and microbial cells. One or more types are desirable.

標的細胞は予め前培養されることが好ましい。標的細胞の前培養の方法は、特に限定されないが、プレートなどの細胞培養容器上で培養した培養接着細胞や、培養液中に懸濁した状態で標的細胞を培養する方法が挙げられる。前培養に用いる培地は、標的細胞を培養することのできる組成の培地であれば特に限定されるものではないが、たとえば寒天培地をはじめとする固体培地や試験管やフラスコ内の液体培地などが挙げられる。   The target cells are preferably pre-cultured in advance. The method of pre-culturing the target cells is not particularly limited, and examples thereof include cultured adherent cells cultured on a cell culture container such as a plate, and a method of culturing target cells in a suspended state in a culture solution. The medium used for the pre-culture is not particularly limited as long as it is a medium capable of culturing the target cells. For example, a solid medium including an agar medium, a liquid medium in a test tube or a flask, etc. Can be mentioned.

次に、前培養された標的細胞、たとえば、プレートなどの細胞培養容器上で培養した培養接着細胞や、培養液中に懸濁している標的細胞を遠心分離または濾過などの操作により分離して、培養液を除去する。得られた標的細胞に必要に応じて水等を添加して使用する。なお、標的細胞の代わりに標的組織を用いる場合は、例えば、切除してきた組織切片あるいは直接組織上に選定分子を含む微量の水溶液を添加する。   Next, pre-cultured target cells, for example, cultured adherent cells cultured on a cell culture container such as a plate, or target cells suspended in a culture solution are separated by an operation such as centrifugation or filtration, Remove the culture medium. Water or the like is added to the obtained target cells as necessary. In addition, when using a target tissue instead of a target cell, for example, a minute amount of an aqueous solution containing a selected molecule is added to a tissue section that has been excised or directly on the tissue.

(標的組織)
一方、本発明に用いられる標的組織とは、選定分子を導入する標的となる組織のことを示し、特に特定の種類の組織に限定されるものではない。このような標的組織の具体例としては、移植に用いられるドナーからの臓器、再生医療の方法を用いて再構成された皮膚や歯根などの組織、カルス培養で構築された植物に分化前の組織、などが挙げられる。これらの標的組織は、単一の種類を用いてもよいし、二種以上を混合して用いてもよい。
(Target tissue)
On the other hand, the target tissue used in the present invention indicates a target tissue into which the selected molecule is introduced, and is not particularly limited to a specific type of tissue. Specific examples of such target tissues include organs from donors used for transplantation, tissues such as skin and tooth roots reconstructed using a method of regenerative medicine, tissues pre-differentiated into plants constructed by callus culture , Etc. A single kind of these target tissues may be used, or two or more kinds may be mixed and used.

(選定分子)
本発明の標的細胞または標的組織内への選定分子の導入方法において用いる選定分子とは、標的細胞または標的組織に導入するために選定した分子のことを示し、特に特定の種類の分子に限定されるものではない。このような選定分子の具体例としては、DNA、RNAなどのポリヌクレオチドまたはその誘導体、シグナル伝達蛋白質や転写調節因子などの蛋白質やペプチドとその誘導体などの高分子化合物があげられる。
(Selected molecule)
The selected molecule used in the method for introducing a selected molecule into a target cell or tissue of the present invention refers to a molecule selected for introduction into the target cell or target tissue, and is particularly limited to a specific type of molecule. It is not something. Specific examples of such selected molecules include polynucleotides such as DNA and RNA or derivatives thereof, and high molecular compounds such as proteins such as signaling proteins and transcriptional regulators, peptides and derivatives thereof.

また、上記のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの誘導体には、ベクター、アンチセンスポリヌクレオチド、デコイポリヌクレオチド、リボザイム、RNAi、siRNAなどが含まれる。ポリヌクレオチドの分子量は特に限定されない。   In addition, the above-mentioned polynucleotides or polynucleotide derivatives include vectors, antisense polynucleotides, decoy polynucleotides, ribozymes, RNAi, siRNA and the like. The molecular weight of the polynucleotide is not particularly limited.

さらに、上記の蛋白質分子、蛋白質分子誘導体には、シグナル伝達因子や、転写調節因子、各種酵素、各種受容体、抗体あるいは抗体のFab部分などが含まれる。   Furthermore, the above protein molecules and protein molecule derivatives include signal transduction factors, transcriptional regulatory factors, various enzymes, various receptors, antibodies, or Fab portions of antibodies.

他の選定分子としては、低分子生理活性物質、薬剤候補品などが挙げられ、これらの中でも医薬品などの生理活性な低分子化合物であって、他の導入方法では組織内あるいは細胞内に導入されづらい低分子化合物が好ましい。他の導入方法では組織内あるいは細胞内に導入されづらい低分子化合物とは、分子量が1000Da以上の低分子、膜透過性の低い分子、などである。   Other selected molecules include low molecular weight biologically active substances, drug candidates, etc. Among these, physiologically active low molecular weight compounds such as pharmaceuticals, which are introduced into tissues or cells by other introduction methods. Hard low molecular weight compounds are preferred. Low molecular weight compounds that are difficult to be introduced into tissues or cells by other introduction methods include low molecular weight molecules having a molecular weight of 1000 Da or more, and molecules having low membrane permeability.

なお、上述の各種選定分子は、単一の種類を用いてもよいし、二種以上を混合して用いてもよい。   In addition, a single kind may be used for the above-mentioned various selection molecules, and two or more kinds may be mixed and used.

(第1の液体)
第1の液体は、選定分子を含む液体である導入液、標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含む。
(First liquid)
The first liquid includes at least one selected from the group consisting of an introduction liquid that is a liquid containing a selected molecule, a target cell or target tissue, and a culture solution.

選定分子を含む液体(導入液)は、特に限定されるものではないが、たとえば選定分子を含む水溶液または懸濁液であることが好ましい。また、該水溶液または懸濁液の溶媒または分散媒としては、たとえば生理食塩水やpH緩衝溶液などが挙げられる。   The liquid containing the selected molecule (introducing liquid) is not particularly limited, but is preferably an aqueous solution or suspension containing the selected molecule, for example. Examples of the solvent or dispersion medium of the aqueous solution or suspension include physiological saline and pH buffer solution.

培養液は、標的細胞または標的組織を培養できるものであれば特に限定されず、種々公知のものを用いることができる。一例としては、市販品のD−MEM、RPMIが挙げられる。   The culture solution is not particularly limited as long as it can cultivate target cells or target tissues, and various known ones can be used. As an example, commercially available D-MEM and RPMI can be mentioned.

本方法では、移送ステップの前または後に、選定分子と、標的細胞または標的組織とを接触させる。すなわち、第1の液体が、導入液(選定分子を含む液体)と標的細胞または標的組織との両者を含む場合は、これらの混合時に、選定分子と、標的細胞または標的組織とが接触する。一方、第1の液体に導入液(選定分子を含む液体)と標的細胞または標的組織とのいずれか一方が含まれ、第2の液体に他方が含まれる場合は、移送ステップの後に、選定分子と、標的細胞または標的組織とが接触する。   In this method, the selected molecule is contacted with the target cell or target tissue before or after the transfer step. That is, when the first liquid contains both the introduction liquid (liquid containing the selected molecule) and the target cell or target tissue, the selected molecule and the target cell or target tissue come into contact with each other during mixing. On the other hand, when the first liquid contains either the introduction liquid (liquid containing the selected molecule) and the target cell or target tissue, and the second liquid contains the other, the selected molecule is used after the transfer step. And the target cell or target tissue come into contact.

第1の液体は、標的細胞または標的組織および/または導入液を含むことが好ましく、標的細胞または標的組織を含むことがより好ましく、標的細胞または標的組織および導入液を含むことが最も好ましい。第1の液体が標的細胞または標的組織および導入液を含む場合、移送ステップの前に、選定分子と標的細胞または標的組織とが接触することになり、両者が接触した状態で電極による電界の作用を受けることとなる。   The first liquid preferably contains a target cell or target tissue and / or introduction solution, more preferably contains a target cell or target tissue, and most preferably contains a target cell or target tissue and introduction solution. When the first liquid contains a target cell or target tissue and an introduction solution, the selected molecule and the target cell or target tissue come into contact with each other before the transfer step, and the action of the electric field by the electrode in the state where both are in contact with each other. Will receive.

(容器)
第1の液体が移送される容器は、少なくとも移送された第1の液体を収容することのできる構造であれば特に限定されるものではないが、たとえば、プレート、シャーレ、チューブ、試験管、フラスコなどが挙げられる。
(container)
The container to which the first liquid is transferred is not particularly limited as long as the container can accommodate at least the transferred first liquid. For example, a plate, a petri dish, a tube, a test tube, and a flask are used. Etc.

(第2の液体)
第1の液体が容器に移送される前に、容器には第2の液体が収容されていることが好ましい。ここで、第2の液体は、選定分子を含む液体である導入液、標的細胞または標的組織、および、培養液のうち第1の液体に含まれるものを除く群から選択される少なくとも1つを含む液体である。例えば、第1の液体が標的細胞または標的組織および導入液を含む場合、第2の液体は、培養液または緩衝液などである。
(Second liquid)
Before the first liquid is transferred to the container, the container preferably contains the second liquid. Here, the second liquid is at least one selected from the group excluding those contained in the first liquid among the introduction liquid, the target cell or the target tissue, and the culture liquid, which is a liquid containing a selected molecule. Contains liquid. For example, when the first liquid includes a target cell or target tissue and an introduction solution, the second liquid is a culture solution or a buffer solution.

(電極への電圧印加)
電極への電圧印加方法としては、電極の内部または外表面(第1の液体が通過する領域)に電界を発生させるものであれば特に限定されない。例えば、電極と対向電極(底面電極)との間に電圧を印加することにより、電極の内部または外表面を通過する第1の液体に電界を作用させることができる。この電界が第1の液体に含まれる標的細胞または標的組織や、導入液中の選定分子に作用を及ぼすことにより、選定分子の標的細胞または標的組織への導入効率が向上し、標的細胞または標的組織の死滅率を低減することが可能となる。
(Voltage applied to electrode)
A method for applying a voltage to the electrode is not particularly limited as long as an electric field is generated inside or on the outer surface of the electrode (region through which the first liquid passes). For example, by applying a voltage between the electrode and the counter electrode (bottom electrode), an electric field can be applied to the first liquid that passes through the inside or the outer surface of the electrode. This electric field affects the target cell or target tissue contained in the first liquid or the selected molecule in the introduction liquid, thereby improving the efficiency of introduction of the selected molecule into the target cell or target tissue. It becomes possible to reduce the death rate of the tissue.

電極に印加される電圧は、数kV〜数十kV程度であることが好ましく、さらに好ましくは2kV〜30kVであり、最も好ましくは5〜20kVである。数十kVよりも高い電圧で電流を流すと、標的細胞または標的組織の死滅率が高くなってしまい、逆に、数kVよりも低い電圧で電流を流すと選定分子の導入率を向上させる効果を得ることができない。   The voltage applied to the electrode is preferably about several kV to several tens of kV, more preferably 2 kV to 30 kV, and most preferably 5 to 20 kV. If a current is applied at a voltage higher than several tens of kV, the kill rate of the target cell or target tissue increases, and conversely, if a current is applied at a voltage lower than a few kV, the introduction rate of the selected molecule is improved. Can't get.

第1の溶液を電極の内部または外表面を通過させるために、電極はパイプ状か、棒または板状のもの、あるいは、棒または板状のものに第1の溶液を通過させるための案内を施したものであることが好ましい。ただし、電極の構成はこれらに限定されない。   In order to pass the first solution through the inner or outer surface of the electrode, the electrode is in the form of a pipe, rod or plate, or a guide for passing the first solution through the rod or plate. It is preferable that it has been applied. However, the configuration of the electrodes is not limited to these.

パイプ状の電極としては、第1の液体を排出する排出口と、それに連通した内孔を有し、該内孔が第1の液体の収容部と接続できるものであれば、特に限定されるものではないが、例えば、中空パイプ状の形状が挙げられる。   The pipe-shaped electrode is not particularly limited as long as it has a discharge port for discharging the first liquid and an inner hole communicating therewith, and the inner hole can be connected to the first liquid container. Although it is not a thing, the shape of a hollow pipe is mentioned, for example.

電極が金属パイプである場合、第1の液体は、金属パイプ内を通過して、所定流量で容器へ移送される。金属パイプの外径は100μm以下であることが好ましい。移送ステップでの第1の液体の移送量が、100sccm以下であることが好ましい。   When the electrode is a metal pipe, the first liquid passes through the metal pipe and is transferred to the container at a predetermined flow rate. The outer diameter of the metal pipe is preferably 100 μm or less. It is preferable that the transfer amount of the first liquid in the transfer step is 100 sccm or less.

なお、本発明においては、さらに、他の付加的なステップが備わっていてもよい。例えば、選定分子が導入された標的細胞を後培養してもよい。また、後培養の後に、さらに選定分子の導入された標的細胞をスクリーニングしてもよい。   In the present invention, other additional steps may be further provided. For example, target cells into which a selected molecule has been introduced may be post-cultured. Further, after the post-culture, target cells into which the selected molecule has been introduced may be screened.

<選定分子導入装置>
本発明の選定分子導入装置は、上記の選定分子の導入方法に用いられるものであって、
前記第1の液体を移送するための移送機構と、
移送された前記第1の液体を収容するための容器と、
前記電極に電圧を印加するための電圧印加機構とを備える。
<Selected molecule introduction device>
The selected molecule introduction apparatus of the present invention is used for the above-described method for introducing a selected molecule,
A transfer mechanism for transferring the first liquid;
A container for containing the transferred first liquid;
A voltage application mechanism for applying a voltage to the electrode.

図1は、本発明の選定分子導入装置の一例の概要を示す模式図である。ただし、本発明の導入装置の構造は、図1に示す構造に限定されるものではない。   FIG. 1 is a schematic diagram showing an outline of an example of a selected molecule introduction apparatus of the present invention. However, the structure of the introducing device of the present invention is not limited to the structure shown in FIG.

図1に示す本発明の選定分子導入装置では、移送機構は注射器であり、電極は該注射器の注射針である。ただし、本発明に用いられる移送機構は、これに限定されるものではなく、例えば、インクジェット方式の印刷機に用いられるような液体の移送機構も好適に用いることができる。   In the selected molecule introduction apparatus of the present invention shown in FIG. 1, the transfer mechanism is a syringe, and the electrode is an injection needle of the syringe. However, the transfer mechanism used in the present invention is not limited to this, and for example, a liquid transfer mechanism used in an ink jet printer can also be suitably used.

また、電圧印加機構は、注射針(電極)と、容器の注射針とは反対側に設けられた対向電極と、注射針および対向電極に接続された直流または交流の電源とを備える。   The voltage application mechanism includes an injection needle (electrode), a counter electrode provided on the opposite side of the container from the injection needle, and a DC or AC power source connected to the injection needle and the counter electrode.

すなわち、図1に示す選定分子導入装置は、バレル11、プランジャー12および注射針13からなる注射器1と、注射針(電極)13に接続された電圧供給手段(電源)2と、容器4と、金属メッシュからなる対向電極(底面電極)5とを備えており、電圧供給手段2により、注射針13と底面電極5との間に所定の電圧を印加することができる。なお、容器4はシャーレである。   That is, the selected molecule introduction device shown in FIG. 1 includes a syringe 1 including a barrel 11, a plunger 12 and an injection needle 13, a voltage supply means (power source) 2 connected to the injection needle (electrode) 13, a container 4, A counter electrode (bottom electrode) 5 made of a metal mesh is provided, and a predetermined voltage can be applied between the injection needle 13 and the bottom electrode 5 by the voltage supply means 2. The container 4 is a petri dish.

バレル11の内部には、上記第1の液体が予め収容されている。プランジャー12を下側(図の矢印の方向)に押し下げることにより、所定の流量で注射針13の先端(排出口)から、第1の液体3が容器4に向けて噴出される。   The first liquid is stored in the barrel 11 in advance. By pushing down the plunger 12 downward (in the direction of the arrow in the figure), the first liquid 3 is ejected from the distal end (discharge port) of the injection needle 13 toward the container 4 at a predetermined flow rate.

なお、電圧供給手段2としては、特に限定されるものではないが、たとえば高圧電源FP1000(パール工業株式会社製)などの電源供給装置が挙げられる。電源が交流電源である場合の交流波の波形は、正弦波、半波整流、全波整流、パルスのいずれも用いることができる。また、電圧供給手段2は、例えば、信号発生器、リニアアンプ、整合回路および昇圧トランスを備えていてもよい。   The voltage supply means 2 is not particularly limited, and examples thereof include a power supply device such as a high voltage power supply FP1000 (manufactured by Pearl Industry Co., Ltd.). When the power source is an AC power source, any of a sine wave, half-wave rectification, full-wave rectification, and pulse can be used as the waveform of the AC wave. Further, the voltage supply means 2 may include, for example, a signal generator, a linear amplifier, a matching circuit, and a step-up transformer.

本発明の選定分子導入装置は、基本的に、電圧供給手段と、電極と、電圧供給手段と電極を接続する導電線とを備えている。また、電源は、信号発生器、リニアアンプ、整合回路、昇圧トランスなどを備えていてもよく、その場合、それらと電極または対向電極とは導電線で互いに電気的に接続されているため、電極間電圧、電極距離、周波数、パルス周期(パルス周波数)、Dutyなどのパラメータを種々の条件に設定することができる。なお、電源供給手段2と電極(電極または対向電極)とを接続する接続回路に整流器、抵抗、コイルまたはコンデンサを有することが好ましい。   The selected molecule introduction device of the present invention basically includes a voltage supply means, an electrode, and a conductive wire connecting the voltage supply means and the electrode. In addition, the power source may include a signal generator, a linear amplifier, a matching circuit, a step-up transformer, and the like. In that case, since the electrode and the counter electrode are electrically connected to each other through a conductive line, the electrode Parameters such as inter-voltage, electrode distance, frequency, pulse period (pulse frequency), and duty can be set to various conditions. In addition, it is preferable to have a rectifier, a resistor, a coil, or a capacitor in the connection circuit that connects the power supply means 2 and the electrode (electrode or counter electrode).

本発明の選定分子導入装置においては、標的細胞の種類、あるいは選定分子の種類に応じて、上記の電極間電圧、電極距離、周波数、パルス周期、Dutyなどのパラメータを変化させることができる。   In the selected molecule introduction apparatus of the present invention, the parameters such as the interelectrode voltage, electrode distance, frequency, pulse period, and duty can be changed according to the type of target cell or the type of selected molecule.

電極および対向電極(底面電極)の材質は、特に限定されるものではないが、タングステン、モリブデンなどが挙げられ、腐食しにくい材質や、金、銀、プラチナ等の殺菌効果のある材質であることが好ましい。   The material of the electrode and the counter electrode (bottom electrode) is not particularly limited, and examples thereof include tungsten, molybdenum, and the like, which are not easily corroded and have a bactericidal effect such as gold, silver, platinum, etc. Is preferred.

本発明においては、単数または複数の電極の先端の下側の所定領域のみに第1の液体を移送することができ、選定分子が導入される標的細胞の範囲の調節等を行うことができる。電極の先端と、容器の第1の液体が移送される部分の表面との最短の距離は、50mm以下に設定されることが好ましい。   In the present invention, the first liquid can be transferred only to a predetermined region below the tip of the electrode or electrodes, and the range of target cells into which the selected molecule is introduced can be adjusted. The shortest distance between the tip of the electrode and the surface of the portion where the first liquid of the container is transferred is preferably set to 50 mm or less.

電極の数は、単数であっても複数であってもよい。多数の電極を具備する場合、多数の標的細胞へ同時に選定分子の導入が可能となる。   The number of electrodes may be singular or plural. When a large number of electrodes are provided, the selected molecules can be simultaneously introduced into a large number of target cells.

また、上記容器は、第1の液体を移送するための単数または複数の試料保持部を有していてもよく、この場合、この試料保持部に対応する位置に単数または複数の電極が設置される。   The container may have one or a plurality of sample holders for transferring the first liquid. In this case, one or a plurality of electrodes are installed at positions corresponding to the sample holders. The

また、この電極とこの容器とを相対的に上下に駆動させる上下駆動機構を含むことが好ましい。すなわち、導入液の収容容器の位置調節手段、および/または、電極の位置調節手段を含んでいることが好ましい。これにより、電極の先端と導入液との間の距離を最適化することができる。   Moreover, it is preferable to include a vertical drive mechanism that drives the electrode and the container relatively up and down. That is, it preferably includes a position adjusting means for the container for introducing the introduction liquid and / or a position adjusting means for the electrode. Thereby, the distance between the tip of the electrode and the introduction liquid can be optimized.

上記容器が、標的細胞を保持するための複数の試料保持部を有する容器(多穴ウェル等)である場合、一度に多くの標的細胞への選定分子の導入を行なうことができ、選定分子の導入方法をハイスループット化することができる。この場合、選定分子導入装置は、複数の電極を、多穴ウェル型の容器の複数の試料保持部内に出し入れすることのできる電極の駆動機構あるいは多穴ウェル型の容器の駆動機構を備えていることが好ましい。   When the container is a container (multi-well, etc.) having a plurality of sample holding parts for holding target cells, the selected molecules can be introduced into many target cells at one time. The introduction method can achieve high throughput. In this case, the selected molecule introduction apparatus includes an electrode driving mechanism or a multi-well well-type container driving mechanism that allows a plurality of electrodes to be taken in and out of a plurality of sample holders of the multi-well type container. It is preferable.

なお、選定分子導入装置は、容器を固定するための固定手段を備えることが好ましい。固定手段としては、例えば、導入液および標的細胞を収容する容器を載置する試料台(ステージ)が挙げられる。   In addition, it is preferable that the selected molecule introduction device includes a fixing means for fixing the container. Examples of the fixing means include a sample stage (stage) on which a container containing the introduction liquid and target cells is placed.

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated in detail, this invention is not limited to these.

(実施例1)
本実施例では、図1を用いて説明したような構成を有する選定分子導入装置を使用した。注射器(マイクロシリンダー)1のバレル11内部には、予め標的細胞(COS7)と選定分子としてDNA(pCX−EGFP)を含む溶液、培養液(D−MEM、FBSおよびペニシリンの混合液(混合比100:10:1)、または、リン酸緩衝液(PBS))のいずれかを含む液体(第1の液体)0.52mLを収容した。また、シャーレには、これらのうち第1の液体とは異なるものを含む液体(第2の液体)を収容した。第1の液体と第2の液体の組み合せは、図2の下欄に記号で示す通りの9種類とした(なお、何も記載のない箇所はリン酸緩衝液であることを示している。)。
Example 1
In this example, the selected molecule introduction apparatus having the configuration described with reference to FIG. 1 was used. Inside the barrel 11 of the syringe (microcylinder) 1, a solution containing a target cell (COS7) and DNA (pCX-EGFP) as a selected molecule in advance, a mixed solution (D-MEM, FBS and penicillin mixed solution (mixing ratio 100) : 10: 1) or 0.52 mL of liquid (first liquid) containing either phosphate buffer (PBS)). Moreover, the petri dish accommodated the liquid (2nd liquid) containing the thing different from the 1st liquid among these. Combinations of the first liquid and the second liquid were nine types as indicated by symbols in the lower column of FIG. 2 (where nothing is shown indicates a phosphate buffer solution). ).

設定した速さ(34.4μL/s。すなわち、全量を押し出すまでの経過時間は15.1s)でプランジャー12を押し下げた。そして、そのサンプルを金属製の注射針(外径0.60mm、内径0.43mm)を通過させシャーレへ滴下する。   The plunger 12 was pushed down at the set speed (34.4 μL / s. That is, the elapsed time until the entire amount was pushed out was 15.1 s). Then, the sample is passed through a metal injection needle (outer diameter 0.60 mm, inner diameter 0.43 mm) and dropped onto the petri dish.

プランジャー12の押し下げの開始と同時に、注射針に正直流電圧及び正弦波交流電圧(14kHz)を印加した。樹脂製のシャーレの下に配置した金属メッシュは接地しておいた。注射針とシャーレとの間の距離は15〜20mmに設定し、注射針と金属メッシュ間の電圧(電極間電圧)は3〜4kVとした。高電圧を注射針に印加することにより、第1の液体は注射針先端で耐電し、相互斥力により小さな液滴に***しながらシャーレへ噴霧される。24時間培養後、顕微鏡を用いて蛍光観察を行い、遺伝子導入効率を求めた。   Simultaneously with the start of the depression of the plunger 12, a positive DC voltage and a sinusoidal AC voltage (14 kHz) were applied to the injection needle. The metal mesh placed under the resin petri dish was grounded. The distance between the injection needle and the petri dish was set to 15 to 20 mm, and the voltage between the injection needle and the metal mesh (interelectrode voltage) was 3 to 4 kV. By applying a high voltage to the injection needle, the first liquid is withstood at the tip of the injection needle and sprayed onto the petri dish while breaking up into small droplets by mutual repulsion. After culturing for 24 hours, fluorescence observation was performed using a microscope to determine gene transfer efficiency.

図2に、第1の液体と第2の液体の組み合わせと、遺伝子導入率との関係を示す。図2に示す結果では、予め注射器内に収容された第1の液体が、導入液(DNA溶液)および標的細胞を含む液であり、予めシャーレに収容された第2の液体が培養液である場合(図2の「GC→M」の場合)に、遺伝子導入効率が最も高い結果が得られた。   FIG. 2 shows the relationship between the combination of the first liquid and the second liquid and the gene transfer rate. In the results shown in FIG. 2, the first liquid previously stored in the syringe is a liquid containing an introduction solution (DNA solution) and target cells, and the second liquid previously stored in the petri dish is a culture solution. In the case (in the case of “GC → M” in FIG. 2), the result with the highest gene transfer efficiency was obtained.

1 注射器(マイクロシリンダー)、11 バレル(外筒)、12 プランジャー、13 注射針、2 電圧供給手段(電源)、3 第1の液体、4 容器、5 対向電極(底面電極)。   DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Syringe (microcylinder), 11 barrel (outer cylinder), 12 plunger, 13 injection needle, 2 voltage supply means (power supply), 3 1st liquid, 4 container, 5 counter electrode (bottom electrode).

Claims (8)

標的細胞または標的組織への選定分子の導入方法であって、
第1の液体を、電圧を印加した電極の内部または外表面を通過させることにより、前記第1の液体に電界を作用させながら、容器に移送する移送ステップを含み、
前記第1の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含み、
前記移送ステップの前または後に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させる、選定分子の導入方法。
A method of introducing a selected molecule into a target cell or target tissue,
A transfer step of transferring the first liquid to a container while allowing an electric field to act on the first liquid by passing through an inside or an outer surface of an electrode to which a voltage is applied;
The first liquid includes at least one selected from the group consisting of an introduction liquid that is a liquid containing the selected molecule, the target cell or target tissue, and a culture solution,
A method for introducing a selected molecule, wherein the selected molecule is brought into contact with the target cell or target tissue before or after the transfer step.
前記第1の液体は、前記標的細胞または標的組織および/または前記導入液を含む、請求項1に記載の導入方法。   The introduction method according to claim 1, wherein the first liquid includes the target cell or target tissue and / or the introduction liquid. 前記第1の液体は、前記標的細胞または標的組織を含む、請求項2に記載の導入方法。   The introduction method according to claim 2, wherein the first liquid includes the target cell or the target tissue. 前記第1の液体は、前記標的細胞または標的組織および前記導入液を含み、
前記移送ステップの前に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させる、請求項3に記載の導入方法。
The first liquid includes the target cell or target tissue and the introduction liquid,
The introduction method according to claim 3, wherein the selected molecule is brought into contact with the target cell or target tissue before the transferring step.
前記第1の液体が前記容器に移送される前に、前記容器には第2の液体が収容されており、
前記第2の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組容器織、および、培養液のうち前記第1の液体に含まれるものを除く群から選択される少なくとも1つを含む、請求項1〜4のいずれかに記載の導入方法。
Before the first liquid is transferred to the container, the container contains a second liquid;
The second liquid is at least selected from the group excluding the introduction liquid that is a liquid containing the selected molecule, the target cell or target assembly container, and the culture liquid contained in the first liquid. The introduction method according to claim 1, comprising one.
前記電極は、前記第1の溶液を収容するバレルに接続され、前記容器とは離間して設置されている、請求項1〜5のいずれかに記載の導入方法。   The introduction method according to claim 1, wherein the electrode is connected to a barrel that contains the first solution, and is disposed apart from the container. 請求項1に記載の導入方法に用いられる選定分子導入装置であって、
前記第1の液体を移送するための移送機構と、
移送された前記第1の液体を収容するための容器と、
前記電極に電圧を印加するための電圧印加機構とを備える、選定分子導入装置。
A selected molecule introduction device used in the introduction method according to claim 1,
A transfer mechanism for transferring the first liquid;
A container for containing the transferred first liquid;
A selected molecule introduction device comprising a voltage application mechanism for applying a voltage to the electrode.
前記電圧印加機構は、前記電極と、前記容器の前記電極とは反対側に設けられた対向電極と、前記電極および前記対向電極に接続された直流または交流の電源とを備える、請求項7に記載の選定分子導入装置。   The voltage application mechanism includes the electrode, a counter electrode provided on a side opposite to the electrode of the container, and a DC or AC power source connected to the electrode and the counter electrode. The selected molecule introduction device described.
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