JP2013221009A - Heart rate reducer comprising porcini mushroom-derived ingredient - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a heart rate reducer having a heart rate-reducing effect not only in a subject with a heart rate that is higher than a normal value but also in a subject with normal heart rate, and easy to make an intake in ordinary dietary life, and enabling long-term continuous use.SOLUTION: A heart rate reducer includes porcini mushroom carpophore or its extract as an active ingredient. The heart rate reducer not only exhibits a significant heart rate-reducing effect in a subject with a heart rate higher than normal value but also exhibits a mild and stable heart rate-reducing effect in a subject with normal heart rate, thereby capable of providing a safe heart rate-reducing means, even if used continuously for a long period of time.

Description

本発明は、ポルチーニ由来成分を含有する心拍数低下剤に関し、より具体的にはポルチーニ子実体又はその抽出物を有効成分とする心拍数低下剤に関する。
に関する。 The present invention relates to a heart rate reducing agent containing a porcini-derived component, and more specifically to a heart rate reducing agent containing a porcini fruit body or an extract thereof as an active ingredient.
About.

ストレスは、不安性障害等の神経症や、胃炎等の消化器系疾患、狭心症等の循環器系障害、心身症といった様々な疾患の引き金になることが知られている。近年、うつ病等のストレス性疾患患者の増加等、ストレスは益々深刻な問題となってきており、リラックスした状態を作り出しストレスをうまく解消することが重要となっている。   It is known that stress triggers various diseases such as neuropathies such as anxiety disorders, digestive system diseases such as gastritis, circulatory system disorders such as angina pectoris, and psychosomatic disorders. In recent years, stress has become an increasingly serious problem, such as an increase in patients with stress-related diseases such as depression, and it has become important to create a relaxed state and successfully eliminate the stress.

心拍数低下はリラックスした状態と関連する可能性があると考えられている。非特許文献１には、リラックスした状態では副交感神経が優位になり心拍数が低下することが記載されている。また非特許文献２及び３には、カモミール茶やテアニンの摂取によりリラックスし、心拍数が低下することが記載されている。   It is believed that heart rate reduction may be associated with a relaxed state. Non-Patent Document 1 describes that in a relaxed state, parasympathetic nerves predominate and the heart rate decreases. Non-patent documents 2 and 3 describe that the intake of chamomile tea or theanine relaxes and the heart rate decreases.

一方、非特許文献４には、安静時心拍数の高い人は、心血管系死亡率が高いだけでなく、全死亡率が高いことが報告されている。また、非特許文献５には、80 bpmを越える心拍数が心血管系の合併症、罹患率、及び死亡率のリスクを増加させること、また80〜85 bpm以上の心拍数を頻脈の基準と考えるべきであることが記載されている。さらに、非特許文献６には、健常者の安静時心拍数は、ほぼ80 bpm未満であることが記載されている。従って、頻脈の基準は80 bpm以上が妥当であり、このような人では、安静時心拍数を低下させることにより死亡率が低下する可能性がある。   On the other hand, Non-Patent Document 4 reports that a person with a high resting heart rate not only has a high cardiovascular mortality rate but also a high total mortality rate. Non-patent document 5 states that heart rate exceeding 80 bpm increases the risk of cardiovascular complications, morbidity, and mortality, and heart rate above 80-85 bpm is a criterion for tachycardia. It should be considered that. Furthermore, Non-Patent Document 6 describes that the resting heart rate of a healthy person is approximately less than 80 bpm. Therefore, a tachycardia criterion of 80 bpm or more is appropriate, and in such a person, mortality may be reduced by reducing the resting heart rate.

従来より、キノコ類の中には、薬理作用を有する物質を含むものがあることが知られているが、心拍数低下効果に関する報告は多くない。非特許文献７には、自然発症高血圧（SHR）ラットにおいて血圧上昇に伴い心拍数の増加が認められるが、ヒメマツタケ熱水抽出物0.05 g/kg/日の投与により血圧が低下し、それに伴って心拍数の低下が生じたことが記載されている。ただし、降圧効果と心拍数低下は必ずしも相関がある訳ではなく、例えば、特許文献１には、エリンギ細胞融合株乾燥子実体の熱水抽出物（用量：10、15、20 g/60 kg/日）の継続摂取により、血圧は低下したが、心拍数は低下しなかったことが記載されている。またキノコ類全般が心拍数低下効果を有するという訳でもなく、例えば非特許文献８には、シイタケ菌糸体エキスは血圧や心拍数に大きな影響を与えなかったことが記載されている。   Conventionally, some mushrooms are known to contain substances having a pharmacological action, but there are not many reports on the heart rate lowering effect. Non-Patent Document 7 shows that heart rate increases with spontaneous blood pressure increase in spontaneously hypertensive (SHR) rats, but blood pressure decreases with administration of Himematsutake hot water extract 0.05 g / kg / day. It is described that a decrease in heart rate occurred. However, the antihypertensive effect and the heart rate decrease are not necessarily correlated. For example, Patent Document 1 discloses a hot water extract of a dried fruiting body of an Eringi cell fusion strain (dose: 10, 15, 20 g / 60 kg / It is described that the blood pressure decreased but the heart rate did not decrease by continuous ingestion. In addition, mushrooms in general do not have a heart rate lowering effect. For example, Non-Patent Document 8 describes that shiitake mycelium extract did not significantly affect blood pressure and heart rate.

ポルチーニは、スープやパスタの材料として、またはそのままソテーして食される、食用キノコである。独特の上品な香りを有しており、特にヨーロッパにおいて食材としてよく使用されている。また菌根菌であるため、人工栽培が成功しておらず、高級食材として扱われている。
これまでに、ポルチーニの有する生理活性として抗酸化活性が知られているが、心拍数低下効果を有するか否かについては知られていない。 Boletus is an edible mushroom that can be eaten as a soup or pasta ingredient or sauteed as it is. It has a unique and elegant fragrance and is often used as a food, especially in Europe. Moreover, since it is a mycorrhizal fungus, artificial cultivation has not succeeded and it is treated as a high-class food.
So far, antioxidant activity is known as a physiological activity of porcini, but it is not known whether it has a heart rate lowering effect.

特開2002-176975号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2002-176975

FoodStyle21, 10, 5, 41-43, 2006FoodStyle21, 10, 5, 41-43, 2006 バイオフィードバック研究, 28, 62-70, 2001Biofeedback research, 28, 62-70, 2001 Biol Psychol, 74, 39-45, 2007Biol Psychol, 74, 39-45, 2007 Am Heart J, 125, 1148-1154, 1993Am Heart J, 125, 1148-1154, 1993 Prog Cardiovasc Dis, 52, 6-10, 2009Prog Cardiovasc Dis, 52, 6-10, 2009 日本未病システム学会雑誌, 11, 51-53, 2005Journal of Japan Mibyou System Association, 11, 51-53, 2005 和漢医薬学雑誌, 16, 201-207, 1999Wakahan Journal of Pharmaceutical Sciences, 16, 201-207, 1999 応用薬理, 23, 661-667, 1982Applied pharmacology, 23, 661-667, 1982

本発明は、正常値よりも高い心拍数の対象のみならず正常心拍数の対象においても心拍数低下効果を有し、かつ通常の食生活において摂取しやすく長期連用が可能な心拍数低下剤を提供することを目的とする。   The present invention provides a heart rate lowering agent which has a heart rate lowering effect not only in a subject having a heart rate higher than a normal value but also in a subject having a normal heart rate, and is easy to take in a normal diet and can be used for a long time. The purpose is to provide.

本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意検討した結果、正常値よりも心拍数が高い自然発症高血圧ラットのみならず正常心拍数のラットに対しても、ポルチーニ由来の成分が心拍数低下効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to achieve the above-mentioned object, the present inventors have found that a component derived from porcini reduces heart rate not only in spontaneously hypertensive rats having a heart rate higher than the normal value but also in rats with normal heart rate. It has been found that it has an effect, and the present invention has been completed.

即ち、本発明は以下の通りである。
［１］ポルチーニ子実体又はその抽出物を有効成分とする心拍数低下剤。
［２］経口投与用であり、投与量がポルチーニ乾燥子実体換算で0.1 g/60 kg/日〜20 g/60 kg/日である、［１］に記載の剤。
［３］経口投与用であり、投与量がポルチーニ乾燥子実体換算で2.5 g/60 kg/日〜10 g/60 kg/日である、［１］又は［２］に記載の剤。
［４］抽出物が熱水抽出物である、［１］〜［３］のいずれかに記載の剤。 That is, the present invention is as follows.
[1] A heart rate lowering agent comprising a porcini fruit body or an extract thereof as an active ingredient.
[2] The agent according to [1], which is for oral administration and has a dose of 0.1 g / 60 kg / day to 20 g / 60 kg / day in terms of dried porcini fruit body.
[3] The agent according to [1] or [2], which is for oral administration and has a dose of 2.5 g / 60 kg / day to 10 g / 60 kg / day in terms of dried porcini fruit body.
[4] The agent according to any one of [1] to [3], wherein the extract is a hot water extract.

本発明の心拍数低下剤は、正常値よりも高い心拍数の対象において顕著な心拍数低下効果を示すだけでなく、正常心拍数の対象に対しても穏やかな安定した心拍数低下効果を示す。そのため、長期連用しても安全な、心拍数低下手段を提供することができる。   The heart rate lowering agent of the present invention not only shows a significant heart rate lowering effect in subjects with a heart rate higher than the normal value, but also shows a mild and stable heart rate lowering effect on subjects with a normal heart rate. . Therefore, it is possible to provide a heart rate lowering means that is safe even after long-term continuous use.

図１は、ポルチーニ抽出物投与開始後の心拍数の推移を示す。FIG. 1 shows changes in heart rate after the start of administration of boletus extract. 図２は、図１のデータを元に算出した心拍数の時間曲線下面積（AUC）を示す。FIG. 2 shows the area under the time curve (AUC) of the heart rate calculated based on the data of FIG.

本発明におけるポルチーニは、イタリア料理、ポーランド料理などでよく使用されている、食用キノコである。その形態は、傘の裏にひだの代わりにスポンジ状の構造があることにより特徴付けられる。また乾燥しても消失しない独特の芳香を有する。本発明におけるポルチーニは、上記形態的特徴及び芳香を有し、市場においてポルチーニとして取引されるものであれば特に限定されない。またポルチーニは、樹木の根に菌根を作って共生する菌根菌であり、通常、ハラタケ目（Agaricales）イグチ科（Boletaceae）ヤマドリタケ属（Boletus spp.）に分類される、Boletus edulis、B. aereus、B. aestivalis、B. pinophilus、B. reticulatusなどの複数の種を含む一群の担子菌である（Hall R et al., Economic Botany, 52, 44-56, 1998; Dentinger BTM et al., Mol Phylogenet Evol, 57, 276-1292, 2010）。また同じ種名が与えられた担子菌の中には、その由来（採取された地域）の違いにより更に複数のグループに分類される複数の担子菌が含まれる。ポルチーニはヨーロッパ、アジア、北米、中米、北アフリカ等、様々な地域で天然に採取されるが、本発明におけるポルチーニはいずれの地域で採取されたものであってもよく、またそれらの変異体であってもよい。尚、本明細書中、ポルチーニは、通常菌の分類上の名称を指すが、文脈によりその子実体（キノコ）を意味する場合もある。 The boletus in the present invention is an edible mushroom often used in Italian cuisine, Polish cuisine and the like. Its morphology is characterized by a sponge-like structure instead of pleats on the back of the umbrella. It also has a unique fragrance that does not disappear when dried. The boletus in the present invention is not particularly limited as long as it has the above morphological characteristics and aroma and is traded as boletus in the market. Boletus is a mycorrhizal fungus that coexists by forming mycorrhiza in the roots of trees, and is usually classified into the genus Agaricales (Boletaceae) and Boletus spp., Boletus edulis , B. aereus A group of basidiomycetes including multiple species such as B. aestivalis , B. pinophilus , B. reticulatus (Hall R et al., Economic Botany, 52, 44-56, 1998; Dentinger BTM et al., Mol Phylogenet Evol, 57, 276-1292, 2010). In addition, the basidiomycetes given the same species name include a plurality of basidiomycetes that are further classified into a plurality of groups depending on their origins (collected areas). Boletus is naturally collected in various regions such as Europe, Asia, North America, Central America, North Africa, etc., but the boletus in the present invention may be collected in any region, and mutants thereof. It may be. In the present specification, boletus usually refers to the name of a bacterium according to the classification, but it may mean a fruit body (mushroom) depending on the context.

本発明において、ポルチーニは、好ましくは、ヤマドリタケ属に属する担子菌である。対象とする担子菌がヤマドリタケ属に属するか否かは、例えば、Internal Transcribed Spacers（ITS）領域（ITS1-5.8S rRNA-ITS2）の塩基配列データと既知種の配列データとを比較し系統解析を行って決定することができる。系統解析及び系統樹の作成方法は、例えば以下の手順に従って行なう。   In the present invention, the porcini is preferably a basidiomycete belonging to the genus Boletus. Whether the target basidiomycete belongs to the genus Mushroom, for example, by comparing the sequence data of the internal Transcribed Spacers (ITS) region (ITS1-5.8S rRNA-ITS2) with the sequence data of known species Can go and decide. The phylogenetic analysis and the phylogenetic tree creation method are performed, for example, according to the following procedure.

まず当該担子菌から鋳型となるゲノムDNAを抽出する。担子菌からDNAを抽出する方法は公知であり、いずれの方法を使用してもよい。市販の試薬やキット（例えば、DNeasy Blood & Tissue Kit（Qiagen社））なども好適に使用され得る。   First, genomic DNA as a template is extracted from the basidiomycete. Methods for extracting DNA from basidiomycetes are known and any method may be used. Commercially available reagents and kits (for example, DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen)) and the like can be suitably used.

次にポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によりITS領域を増幅する。PCRにおいて使用されるプライマーの配列は、少なくともヤマドリタケ属に属する全ての既知担子菌のITS領域が増幅されるよう適宜設計することができるが、生物種を超えて保存された配列からなるプライマー（ユニバーサルプライマー）を使用することもできる。またPCRの条件は特に限定されず、通常用いられる範囲内で適宜選択することができる。市販のPCR用試薬（例えば、Takara Ex Taq （タカラバイオ社）など）を使用して、添付の説明書に従って反応を行うことができる。   Next, the ITS region is amplified by polymerase chain reaction (PCR). The primer sequence used in PCR can be designed as appropriate so that at least the ITS region of all known basidiomycetes belonging to the genus Amanita mushroom can be amplified, but a primer composed of a sequence conserved across species (universal) Primers) can also be used. The PCR conditions are not particularly limited, and can be appropriately selected within the range usually used. The reaction can be carried out using a commercially available PCR reagent (for example, Takara Ex Taq (Takara Bio Inc.)) according to the attached instructions.

PCRで増幅されたDNA断片は、必要に応じてスピンカラムなどを用いて精製されたのち、その塩基配列が決定される。塩基配列の決定は定法に従って行なうことができる。   A DNA fragment amplified by PCR is purified using a spin column or the like, if necessary, and its base sequence is determined. The base sequence can be determined according to a standard method.

決定された塩基配列は、適当な遺伝子配列データベースおよび相同性検索プログラムを用いて、既知の担子菌ITS領域の塩基配列またはその部分配列とのホモロジー検索を行うことにより、最も高い相同性を示す既知配列を抽出することができる。例えば、National Center for Biotechnology Information（NCBI）のホームページを通じて、BLASTが利用できる。プログラムとしてblastnを選択し、決定された塩基配列をクエリーとして検索を実施すれば、高い相同性を示す既知配列が抽出され出力される。担子菌のITS領域の塩基配列のデータセットを含む限り、いかなる他の遺伝子配列データベースも利用することができる。また、上記以外の自体公知の相同性検索プログラムを用いることもできる。   The determined base sequence is known to show the highest homology by performing a homology search with a base sequence of a known basidiomycete ITS region or a partial sequence thereof using an appropriate gene sequence database and homology search program. Sequences can be extracted. For example, BLAST can be used through the National Center for Biotechnology Information (NCBI) homepage. When blastn is selected as a program and a search is performed using the determined base sequence as a query, a known sequence showing high homology is extracted and output. Any other gene sequence database can be used as long as it includes a base sequence data set of the basidiomycete ITS region. Other than the above-mentioned homology search programs known per se can also be used.

相同性検索の結果、対象とする担子菌のITS領域の配列が、ヤマドリタケ属に属さない担子菌の既知配列よりもヤマドリタケ属に属する担子菌の既知配列とより高い相同性を示す場合、当該担子菌をヤマドリタケ属に属する担子菌として同定することができる。例えば、後述の実施例に記載のポルチーニは、ITS領域において、ヤマドリタケ属に属する担子菌Boletus aestivalis (=reticulatus)の既知配列と99％の高い相同性を示すため、ヤマドリタケ属に属する担子菌として同定される。 If, as a result of homology search, the sequence of the ITS region of the target basidiomycete shows higher homology with the known sequence of the basidiomycete belonging to the genus B. genus than the known sequence of the basidiomycete not belonging to the genus B. The fungus can be identified as a basidiomycete belonging to the genus Amanita. For example, the porcini described in the examples below will be identified as a basidiomycete belonging to the genus Mushroom, because it shows 99% high homology with the known sequence of the basidiomycete Boletus aestivalis (= reticulatus ) belonging to the genus Mushroom. Is done.

或いは、増幅したDNAの塩基配列に基づき分子進化系統樹を推定し、対象とする担子菌の分類学的位置を特定することもできる。分子進化系統樹解析ソフトはインターネット等でも公開されており、それらを利用することができる（CLUSTAL W等）。系統樹解析の結果、対象とする担子菌がヤマドリタケ属に属する担子菌と同じクラスターにある場合、当該担子菌をヤマドリタケ属に属する担子菌として同定することができる。   Alternatively, a molecular evolutionary phylogenetic tree can be estimated based on the base sequence of the amplified DNA, and the taxonomic position of the target basidiomycete can be specified. Molecular evolutionary phylogenetic tree analysis software is also available on the Internet and can be used (CLUSTAL W etc.). As a result of the phylogenetic tree analysis, when the basidiomycete as a target is in the same cluster as the basidiomycete belonging to the genus Amanita, the basidiomycete can be identified as a basidiomycete belonging to the genus Amanita.

本発明の心拍数低下剤（以下、本発明の剤とも称する）は、ポルチーニ子実体又はその抽出物を有効成分とする。
本発明において子実体とは、通常傘と柄とを有する、菌類が胞子形成のために作る構造である。いわゆるキノコであり、食用とされる部分である。本発明におけるポルチーニ子実体は、人工栽培したものであっても天然から採取されたものであってもよい。ただし、ポルチーニは菌根菌であり、これまでその子実体の純粋培養は成功しておらず、現在のところ入手可能な子実体は全て天然から採取されたものである。ポルチーニ子実体は、生のものであっても乾燥したもの（例えば、水分5％以下）であってもよいが、入手の容易さから通常乾燥したものが使用される。ポルチーニ乾燥子実体は更に粉砕して粉末としてもよい。またポルチーニ子実体には、適宜殺菌処理（例えば90℃以上、6.5分間の蒸気殺菌など）を施してもよい。
ポルチーニ乾燥子実体は、料理材料として容易に商業的に入手可能である。 The heart rate lowering agent of the present invention (hereinafter also referred to as the agent of the present invention) contains a porcini fruit body or an extract thereof as an active ingredient.
In the present invention, the fruiting body is a structure that a fungus usually has an umbrella and a handle to make for sporulation. It is a so-called mushroom and is an edible part. The porcini fruiting body in the present invention may be artificially cultivated or collected from nature. However, boletus is a mycorrhizal fungus, and until now, pure cultivation of its fruiting bodies has not been successful, and all fruiting bodies currently available have been collected from nature. The porcini fruit body may be raw or dried (for example, water 5% or less), but usually dried for ease of availability. The dried porcini fruit body may be further pulverized into a powder. The porcini fruit body may be appropriately sterilized (for example, steam sterilization at 90 ° C. or higher for 6.5 minutes).
Porcini dry fruiting bodies are readily commercially available as cooking ingredients.

ポルチーニ子実体の抽出物は、自体公知の方法により調製することができる。例えば、粉砕などにより組織を破壊したポルチーニ子実体（例えば、乾燥粉末）に、抽出溶媒を加えて適宜撹拌し、ろ過や遠心分離により抽出液と残渣に分離することにより行なうことができる。抽出溶媒としては、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノールなど）が挙げられるが、好ましくは水またはアルコールであり、最も好ましくは水である。抽出は、常温下で行なってもよいが、抽出効率を高めるため、加熱下（例えば、80℃で2時間）で行なうことが好ましく、特に抽出溶媒が水である場合には加熱下で抽出を行なうこと（即ち、熱水抽出）が好ましい。加熱下で抽出を行なった場合、抽出効率を高めるため、そのまま室温まで放冷するのが好ましい。また抽出は、常圧下で行なっても加圧下で行なってもよい。
残渣から分離した抽出液は、そのまま本発明の剤の有効成分とすることができるが、更に濃縮するか又は溶媒を除去して乾燥させてもよい。濃縮又は溶媒の除去は、自体公知の方法で行うことができ、例えば、凍結乾燥、スプレードライなどにより行なうことができる。また濃縮又は乾燥後の抽出物に所望の量の溶媒（例えば、水など）を添加して、所望の濃度に調整してもよい。 The extract of the porcini fruit body can be prepared by a method known per se. For example, it can be carried out by adding an extraction solvent to a porcini fruit body (for example, dry powder) whose structure has been destroyed by pulverization or the like, stirring it appropriately, and separating it into an extract and a residue by filtration or centrifugation. Examples of the extraction solvent include water and alcohol (for example, methanol, ethanol, isopropanol and the like), preferably water or alcohol, and most preferably water. Extraction may be performed at room temperature, but is preferably performed under heating (for example, at 80 ° C. for 2 hours) in order to increase extraction efficiency, particularly when the extraction solvent is water. It is preferred to perform (ie hot water extraction). When extraction is carried out under heating, it is preferable to cool to room temperature as it is in order to increase extraction efficiency. The extraction may be performed under normal pressure or under pressure.
The extract separated from the residue can be used as an active ingredient of the agent of the present invention as it is, but may be further concentrated or dried after removing the solvent. Concentration or solvent removal can be performed by a method known per se, for example, freeze drying, spray drying, or the like. Further, a desired amount of a solvent (for example, water) may be added to the extract after concentration or drying to adjust to a desired concentration.

本発明は、ポルチーニが心拍数低下効果を有することを初めて見出したことに基くものである。ここで「心拍数低下効果」とは、被験対象の心拍数を統計学上有意に（具体的には、p<0.05）降下させるか、又は心拍数が上昇傾向にある被験対象における心拍数の上昇を抑制し統計学上有意に（具体的には、p<0.05）低いレベルに維持する効果をいう。心拍数の統計分析は、一回の測定値について行なってもよいし、一定期間の測定値に基いて算出した曲線下面積（AUC）について行なってもよい。被験対象は、正常心拍数の対象であっても、正常心拍数よりも高い心拍数の対象（頻脈の対象）であってもよいが、本発明の剤は、頻脈の対象に対してより顕著な心拍数低下効果を示す傾向がある。
ここで「正常心拍数」とは、疾患（例えば、呼吸器疾患、心疾患、精神疾患、発熱等）を有さず、死亡のリスクが少ないとされる、安静時における心拍数であり、対象の種、年齢等によって異なり得る。例えば、ヒトにおいては、50〜80 bpmの場合、正常心拍数であるといえる。対象の心拍数が、正常心拍数の範囲よりも高い場合、頻脈であるといえる。
心拍数低下効果の有無は、被験対象の心拍数を自体公知の任意の方法で測定し、コントロール（例えば、被験試料非投与群）と比較することによって調べることができる。 The present invention is based on the first discovery that porcini has a heart rate lowering effect. Here, the “heart rate lowering effect” means that the heart rate of the subject is decreased statistically significantly (specifically, p <0.05) or the heart rate of the subject whose heart rate is increasing. It refers to the effect of suppressing the increase and maintaining it at a statistically significant (specifically, p <0.05) low level. The statistical analysis of the heart rate may be performed for one measurement value, or may be performed for the area under the curve (AUC) calculated based on the measurement value for a certain period. The test subject may be a subject with a normal heart rate or a subject with a heart rate higher than the normal heart rate (a subject with tachycardia), but the agent of the present invention is suitable for a subject with tachycardia. There is a tendency to show a more remarkable heart rate lowering effect.
Here, the “normal heart rate” is a heart rate at rest that has no disease (for example, respiratory disease, heart disease, mental illness, fever, etc.) and is considered to have a low risk of death. Depending on the species, age, etc. For example, in humans, a normal heart rate can be said to be 50-80 bpm. If the subject's heart rate is higher than the normal heart rate range, it can be said to be tachycardia.
The presence or absence of a heart rate lowering effect can be examined by measuring the heart rate of a test subject by any method known per se and comparing it with a control (for example, a test sample non-administered group).

本発明の剤は、高血圧や不整脈の対象（例えば、高血圧症患者や不整脈患者など）などの頻脈の対象に対して顕著な心拍数低下効果を示し、本発明の剤を投与しない場合の心拍数と比較して、通常1〜20％程度、好ましくは3〜15％程度、より好ましくは5〜13％程度低下させる。また正常心拍数の対象に対しても心拍数低下効果を示すが、急激な低下や徐脈のような異常な低下をもたらすものではなく、穏やかな効果であり、通常1〜12％程度、好ましくは2〜10％程度、より好ましくは3〜7％程度の心拍数の低下である。心拍数を正常心拍数から1〜12％程度低下させることで、リラックスした状態を作り出し得る。従って、本発明の剤は、頻脈の対象に対して心拍数低下又は心拍数の上昇抑制に使用することができるだけでなく、正常心拍数の対象に対しても適度な心拍数低下をもたらすことでリラックスした状態を作り出すために使用することができる。   The agent of the present invention exhibits a significant heart rate lowering effect on tachycardia subjects such as hypertensive and arrhythmic subjects (for example, hypertensive patients and arrhythmic patients), and the heart rate when the agent of the present invention is not administered. Compared with the number, it is usually reduced by about 1 to 20%, preferably about 3 to 15%, more preferably about 5 to 13%. It also shows a heart rate lowering effect on subjects with normal heart rate, but does not bring about a sudden drop or abnormal reduction like bradycardia, but it is a mild effect, usually about 1-12%, preferably Is a decrease in heart rate of about 2 to 10%, more preferably about 3 to 7%. Decreasing the heart rate by about 1-12% from the normal heart rate can create a relaxed state. Therefore, the agent of the present invention can be used not only for heart rate reduction or suppression of heart rate increase for tachycardia subjects, but also for moderate heart rate reduction for normal heart rate subjects. Can be used to create a relaxed state.

本発明の剤の投与量は、対象の年齢、性別、体重等を考慮して決められるが、通常ポルチーニ乾燥子実体換算で0.1 g/60 kg/日以上、好ましくは1 g/60 kg/日以上、より好ましくは2.5 g/60 kg/日以上である。投与量が0.1 g/60 kg/日未満であると、心拍数低下効果が得られにくくなる傾向がある。また、投与量の上限値には特に限定はないが、通常 20 g/6O kg/日以下、好ましくは10 g/6O kg/日以下である。20 g/6O kg/日を超えると、心拍低下効果が飽和する傾向がある。従って、本発明の剤の投与量は、通常0.1 g/60 kg/日〜20 g/6O kg/日、好ましくは2.5 g/60 kg/日〜10 g/6O kg/日である。
ここで本発明の剤の有効成分がポルチーニ子実体の抽出物である場合、「ポルチーニ乾燥子実体換算」とは、本発明の剤の重量を、本発明の剤に含まれる当該抽出物の調製に供した乾燥子実体の重量に換算することを意味する。 The dosage of the agent of the present invention is determined in consideration of the age, sex, body weight, etc. of the subject, but is usually 0.1 g / 60 kg / day or more, preferably 1 g / 60 kg / day in terms of dried porcini fruit body. More preferably, it is 2.5 g / 60 kg / day or more. When the dose is less than 0.1 g / 60 kg / day, the effect of lowering the heart rate tends to be difficult to obtain. The upper limit of the dose is not particularly limited, but is usually 20 g / 6O kg / day or less, preferably 10 g / 6O kg / day or less. Above 20 g / 6O kg / day, the effect of reducing heart rate tends to saturate. Therefore, the dosage of the agent of the present invention is usually 0.1 g / 60 kg / day to 20 g / 6O kg / day, preferably 2.5 g / 60 kg / day to 10 g / 6O kg / day.
Here, when the active ingredient of the agent of the present invention is an extract of a porcini fruit body, “calculation of the dried porcini” means that the weight of the agent of the present invention is the preparation of the extract contained in the agent of the present invention. This means that it is converted to the weight of the dried fruit body subjected to the above.

本発明の剤は、種々の形態、例えば、医薬品、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、いわゆる健康食品、サプリメント又は飼料として提供することができる。また本発明の剤を、添加剤（例えば食品添加剤）として所望の飲食品に添加することもできる。
ここで特定保健用食品は、その食品が持つ健康機能の表示が認められる食品（食品毎に厚生労働省の許可を必要とする）をいい、栄養機能食品は、栄養成分の機能を明記できる食品（厚生労働省が作成した規格基準を満たす必要がある）をいい、いわゆる健康食品は、上記保健機能食品以外の食品一般を意味し、健康補助食品等を含む。 The agent of the present invention can be provided in various forms, for example, as pharmaceuticals, health functional foods (specific health foods, nutritional functional foods), so-called health foods, supplements, or feeds. Moreover, the agent of this invention can also be added to desired food-drinks as an additive (for example, food additive).
Here, food for specified health use refers to food that is allowed to display the health function of the food (requires permission from the Ministry of Health, Labor and Welfare for each food). The so-called health food means general foods other than the above health functional foods, and includes health supplements and the like.

本発明の剤は、既知製剤又は将来開発される製剤の形態、例えば、経口投与又は非経口投与の形態で投与されるが、経口投与が簡便で好ましい。経口投与剤としては、散剤、顆粒剤、錠剤、（マイクロ）カプセル剤等の固形剤や、シロップ・ジュース等の溶液剤や乳・懸濁剤等が例示される。また、非経口投与剤としては、注射、経腸、経皮、吸入用の製剤が例示される。   The agent of the present invention is administered in the form of a known preparation or a future-developed preparation, for example, oral administration or parenteral administration. Oral administration is convenient and preferred. Examples of the orally administered agent include solid agents such as powders, granules, tablets and (micro) capsules, solutions such as syrup and juice, and milk and suspensions. In addition, examples of parenteral agents include preparations for injection, enteral, transdermal, and inhalation.

これらの製剤の製造には、自体公知の方法又は将来開発される方法を適宜に採用することができる。製剤の製造に際しては、各製剤の剤型に応じて、適宜の医薬上許容される担体、例えば通常の製剤用物質を補助剤として使用することができる。製剤用物質としては、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を挙げることが出来る。   For the production of these preparations, a method known per se or a method developed in the future can be appropriately employed. In the preparation of the preparation, an appropriate pharmaceutically acceptable carrier, for example, an ordinary preparation substance can be used as an auxiliary agent depending on the dosage form of each preparation. Examples of pharmaceutical substances include excipients, diluents, additives, disintegrants, binders, coating agents, lubricants, lubricants, lubricants, flavors, sweeteners, solubilizers, and the like. I can do it.

本発明の剤が経口投与用である場合には、本発明の効果を妨げない範囲内で、例えば以下のような添加物を配合してもよい：糖質（グルコース、スクロース、でん粉など）、脂質（植物油、魚油、動物脂など）、タンパク質（大豆タンパク、乳タンパクなど）、ミネラル（カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩などの無機塩類）、ビタミン類（チアミン、ナイシン、ビタミンＣ、カロテンなど）等の栄養成分；食品としての機能（味、食感、安全性など）を付与するのに適当なスクロース、アスパルテーム、アセスルファムK、グルタミン酸ナトリウム等の嬌味成分；顆粒化、粉末化、固体化して摂取し易くするなどの目的での糖質、無機塩類等の賦形成分；エチルアルコール、酢酸、酢酸ナトリウム、グリシンなどの静菌性成分；カラメル色素、アナトー色素、ベニバナ色素、パプリカ色素、紅麹色素、ブドウ色素などの天然物由来色素、各種合成色素などの色素。また、本発明の剤をより経口投与しやすい食品形態として提供するために、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、みりん、粉末酒、砂糖、食塩、各種エキス、各種エキス粉末などの調味料素材と配合して提供することも可能である。これらに限らず、その他の、当該分野で常用されている添加物や食品素材を配合することもできる。   When the agent of the present invention is for oral administration, the following additives may be blended, for example, within a range that does not interfere with the effects of the present invention: carbohydrates (glucose, sucrose, starch, etc.) Lipid (vegetable oil, fish oil, animal fat, etc.), protein (soy protein, milk protein, etc.), mineral (inorganic salts such as potassium salt, sodium salt, calcium salt), vitamins (thiamine, nisin, vitamin C, carotene, etc.) Nutritional ingredients such as sucrose, aspartame, acesulfame K, sodium glutamate, etc. suitable for imparting food functions (taste, texture, safety, etc.); granulated, powdered, solidified Formation of carbohydrates and inorganic salts for the purpose of facilitating ingestion; bacteriostatic components such as ethyl alcohol, acetic acid, sodium acetate, glycine; Pigments such as natural pigments such as red pigment, annatto pigment, safflower pigment, paprika pigment, sockeye pigment, grape pigment, and various synthetic pigments. In addition, in order to provide the agent of the present invention as a food form that can be more orally administered, seasoning materials such as soy sauce, powdered soy sauce, miso, powdered miso, mirin, powdered liquor, sugar, salt, various extracts, various extract powders, etc. It is also possible to provide a blended product. In addition to these, other additives and food materials commonly used in the field can also be blended.

以下に実施例を示して、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。   EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but these do not limit the scope of the present invention.

方法
ポルチーニ抽出物の調製法
ポルチーニ乾燥子実体粉末（雲南緑華食品有限公司）10 gと滅菌水600 mlをリービッヒ冷却管付き三角フラスコに加え、80℃の湯浴中で2時間抽出後、室温まで放冷した。この溶液をろ紙でろ過し、ろ液を凍結乾燥した（抽出効率46.2％）。凍結乾燥物を、抽出前のポルチーニ乾燥子実体換算で、2.5、5、および10 g/600 mlとなるよう精製水にて溶解し、各濃度の熱水抽出物とした。
尚、当該ポルチーニ乾燥子実体のITS領域の塩基配列は、Boletus aestivalis (=reticulatus) SU90のDNA塩基配列（GenBankアクセション番号：DQ131611）と99％の相同性を示した。従って、当該ポルチーニ乾燥子実体は、ヤマドリタケ属に属する担子菌の子実体であることが確認された。 Method
Preparation method of boletus extract 10 g of dried boletus fruit powder (Yunnan Ryuka Foods Co., Ltd.) and 600 ml of sterilized water are added to an Erlenmeyer flask with a Liebig condenser and extracted in a hot water bath at 80 ° C for 2 hours. Allowed to cool. This solution was filtered through filter paper, and the filtrate was freeze-dried (extraction efficiency 46.2%). The freeze-dried product was dissolved in purified water so that it would be 2.5, 5, and 10 g / 600 ml in terms of dried porcini before extraction to obtain hot water extracts of various concentrations.
The base sequence of the ITS region of the dried Boletini fruit body showed 99% homology with the DNA base sequence of Boletus aestivalis (= reticulatus ) SU90 (GenBank accession number: DQ131611). Therefore, it was confirmed that the dried porcini fruit body is a fruit body of a basidiomycete belonging to the genus Mushroom.

継続投与試験
日本チャールスリバー（株）より購入した6週齢、体重約160 gの雄性自然発症高血圧ラット（SHR）および正常血圧のウィスター京都ラット（WKY）を、MF粉末（オリエンタル酵母工業（株）製）に8％NaClを添加した飼料で2週間予備飼育した。その後、各個体の血圧値を測定し、SHRラットおよびWKYラットのそれぞれについて平均値がほぼ等しくなるように、SHRラットでは1群5頭の4群、またWKYラットでは1群5頭の2群に割り付けた。対照区（0 g/体重60 kg）として抽出物を含まない精製水を用い、SHRラットに対しては、体重100 g当り1 mlの2.5、5、または10 g/600 mlの抽出物（それぞれ2.5、5、10 g抽出前ポルチーニ量/体重60 kgに相当、以後2.5、5、10 g/60 kgと記載）、また、WKYラットに対しては、10 g/600 mlの抽出物（10 g/60 kg）を毎日1回ゾンデにより胃内経口投与した。群分け後は、NaCl無添加のMF粉末飼料と飲料水を自由摂取させ、26週齢（投与18週目）まで飼育し、毎週1回心拍数を測定した。飼育室の環境は、温度26±2℃、湿度50％、白色蛍光灯で1日12時間の採光下（7〜19時明期）とした。 Continuous administration test 6-week-old male spontaneously hypertensive rats (SHR) and normal blood pressure Wistar Kyoto rats (WKY) purchased from Nippon Charles River Co., Ltd., MF powder (Oriental Yeast Co., Ltd.) Manufactured) and supplemented with 8% NaCl for 2 weeks. Thereafter, the blood pressure value of each individual was measured, and SHR rats and WKY rats were divided into 4 groups, 5 groups per group and 2 groups of 5 groups per group, so that the average values were almost equal for each of SHR rats and WKY rats. Assigned. Using purified water without extract as a control (0 g / 60 kg body weight), for SHR rats, 1 ml of 2.5, 5, or 10 g / 600 ml extract (each of 100 g body weight) 2.5, 5 and 10 g equivalent to the amount of boletus before extraction / weight 60 kg, hereinafter referred to as 2.5, 5, 10 g / 60 kg), and for WKY rats, 10 g / 600 ml extract (10 g / 60 kg) was orally administered to the stomach once a day using a sonde. After grouping, MF powder feed and drinking water without addition of NaCl were freely ingested, raised to 26 weeks of age (18 weeks after administration), and the heart rate was measured once a week. The environment of the breeding room was a temperature of 26 ± 2 ° C., a humidity of 50%, and white fluorescent lighting for 12 hours a day (7-19 o'clock light period).

心拍数測定
各ラットを38℃の加温器中で数分間加温し順応させた後、非観血式自動血圧測定装置（ソフトロン社製BP-98A）を用いて、ラットの尾脈波から心拍数を測定した。測定値は3回測定した値の平均値とした。測定は、抽出物を投与する前に実施した。 Heart rate measurement After each rat was warmed and acclimated in a 38 ° C warmer for several minutes, the tail pulse wave of the rat was measured using a non-invasive automatic blood pressure measurement device (BP-98A manufactured by Softron). From which heart rate was measured. The measured value was the average of the values measured three times. Measurements were performed before administering the extract.

統計解析
各データは、平均値±標準誤差で示し、統計解析にはSPSS13.0J（日本アイ・ビー・エム株式会社）を用いた。SHRラットを用いた評価とWKYラットを用いた評価について、それぞれで分散分析を行った。これにより、有意差が認められた場合、SHRラットを用いた評価では、各時間について0 g/60 kgを対照として群間でDunnet検定を行い、WKYラットを用いた評価では、各時間について群間でt検定を実施した。統計学的有意水準は、p<0.05とした。 Statistical analysis Each data is shown as an average value ± standard error, and SPSS13.0J (IBM Japan Ltd.) was used for statistical analysis. An analysis of variance was performed for each of the evaluation using the SHR rat and the evaluation using the WKY rat. As a result, when a significant difference is observed, Dunnett's test was performed between groups using 0 g / 60 kg as the control for each time in the evaluation using SHR rats, and in the evaluation using WKY rats, the group for each time was used. A t-test was performed between them. The statistical significance level was p <0.05.

結果
図１に熱水抽出物投与開始後の心拍数の推移を示した。SHRラットを用いた評価では、二元配置分散分析で有意差が認められた（p=0.035）。図１中、投与群に対して有意差が認められた非投与群（0 g/60 kg）のデータを、a（vs. 2.5 g/60 kg）、b（vs. 5 g/60 kg）、c（vs. 10 g/60 kg）で示した。SHRラットにおける心拍数は、2.5 g/60 kgでは投与10週目において、5 g/60 kgでは投与2、3、5、7、9〜18週目において、10 g/60 kgでは投与3、5、7、9〜16、18週目において、0 g/60 kgに対し有意に低値を示した。一方、WKYラットを用いた評価では、二元配置分散分析で有意差は認められなかった（p=0.727）。 Results FIG. 1 shows changes in heart rate after the start of hot water extract administration. In evaluation using SHR rats, a two-way analysis of variance showed a significant difference (p = 0.035). In FIG. 1, the data of the non-administration group (0 g / 60 kg) in which a significant difference was observed with respect to the administration group are shown as a (vs. 2.5 g / 60 kg) and b (vs. 5 g / 60 kg). , C (vs. 10 g / 60 kg). Heart rate in SHR rats was 10 weeks at 2.5 g / 60 kg, 2 3, 5, 7, 9 to 18 weeks at 5 g / 60 kg, 3 at 10 g / 60 kg, At 5, 7, 9-16 and 18 weeks, the value was significantly lower than 0 g / 60 kg. On the other hand, in the evaluation using WKY rats, no significant difference was found in two-way analysis of variance (p = 0.727).

図２に、図１のデータを元に算出した心拍数の時間曲線下面積（AUC）を示した。SHRラットを用いた評価では、一元配置分散分析で有意差が認められ（p<0.001）、0 g/60 kgに対し、全ての用量で有意に低値を示した（図２中、*（p<0.05）及び***（p<0.001））。WKYラットを用いた評価においても群間に有意差が認められ、0 g/60 kgに対し、10 g/60 kgは有意に低値を示した（図２中、*（p<0.05））。   FIG. 2 shows the area under the time curve (AUC) of the heart rate calculated based on the data of FIG. In the evaluation using SHR rats, a one-way analysis of variance showed a significant difference (p <0.001), showing a significantly lower value at all doses compared to 0 g / 60 kg (in Fig. 2, * ( p <0.05) and *** (p <0.001)). In the evaluation using WKY rats, a significant difference was observed between the groups, and 10 g / 60 kg was significantly lower than 0 g / 60 kg (* (p <0.05) in FIG. 2). .

以上の結果から、本発明の心拍数低下剤は、頻脈の対象に対して優れた心拍数低下効果を示す一方、正常心拍数の対象に対しては急激な心拍数の低下や徐脈のような異常な低下ではなく、適度な心拍数低下をもたらすことが示された。   From the above results, the heart rate lowering agent of the present invention has an excellent heart rate lowering effect on tachycardia subjects, while sudden heart rate reduction or bradycardia is observed on normal heart rate subjects. It has been shown to produce a moderate heart rate reduction rather than such an abnormal decrease.

本発明の心拍数低下剤は、心拍数が高い対象の心拍数を低下させるか、心拍数が上昇傾向にある対象の心拍数の上昇を予防するか、又は正常心拍数の対象の心拍数を適度に低く維持するための、医薬品、保健機能食品などの原料として有用である。   The heart rate lowering agent of the present invention reduces the heart rate of a subject having a high heart rate, prevents an increase in the heart rate of a subject whose heart rate tends to increase, or reduces the heart rate of a subject having a normal heart rate. It is useful as a raw material for pharmaceuticals, health functional foods, etc. to keep it moderately low.

Claims (4)

ポルチーニ子実体又はその抽出物を有効成分とする心拍数低下剤。   A heart rate lowering agent comprising a porcini fruit body or an extract thereof as an active ingredient. 経口投与用であり、投与量がポルチーニ乾燥子実体換算で0.1 g/60 kg/日〜20 g/60 kg/日である、請求項１に記載の剤。   The agent according to claim 1, which is for oral administration and has a dosage of 0.1 g / 60 kg / day to 20 g / 60 kg / day in terms of dried porcini fruit body. 経口投与用であり、投与量がポルチーニ乾燥子実体換算で2.5 g/60 kg/日〜10 g/60 kg/日である、請求項１又は２に記載の剤。   The agent according to claim 1 or 2, which is for oral administration and has a dose of 2.5 g / 60 kg / day to 10 g / 60 kg / day in terms of dried porcini fruit body. 抽出物が熱水抽出物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の剤。   The agent according to any one of claims 1 to 3, wherein the extract is a hot water extract.