JP2012503170A - 側方流動イムノアッセイにおけるインサイツでの細胞の溶解 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図5A
Description
1.高効率性。デバイスに移す前に溶解した細胞は、本質的に回復率を低下させる。したがって、さらなる移動工程を回避することで、効率性と感度を高める。
2.高安定性。多くの細胞内検体は不安定である。 インサイツでの溶解設定中に抗体および抗原との相互作用にかかる時間を著しく減少させることによって、この不安定さは克服することができる。
3.さらに迅速な検査と結果。インサイツでの溶解は、別の外部の溶解工程の必要性を取り除き、ポイント・オブ・ケア検査シナリオにおける検査結果の迅速さが増す。
4.干渉の減少。適切な「阻止領域」を用いて、細胞片または細胞に結合した材料が、アッセイ反応領域に到達するのを阻止することができる。所望の検体が細胞内にあり、かつ、阻止される必要のある細胞壁または細胞片を伴うタンパク質であり、アッセイの抗体が保護されている場合、溶解剤の下流およびアッセイの上流の阻止領域が干渉を減らすために用いられてもよい。
1以上の溶解剤を側方流動ストリップのサンプル塗布領域上で乾燥させる。ストリップごとに、溶解剤は、5%のCHAPSと、150mMの塩化ナトリウムを含む2%のNP−40と、0.1%のBSAと、および、0.1%のアジ化ナトリウム(すべての割合が重量/容量)とを含む、約2マイクロリットルの100mMのHEPES緩衝液(pH8.0)で作られる。インサイツで溶解させるために、最大で10マイクロリットルの白血球をその後、サンプル塗布領域に加える。MxAタンパク質は白血球の内部から放出されることで、目に見えるタグ(コロイド金または目に見えるラテックスビーズ)の付いたMxAモノクローナル抗体と反応する。この複合体は、トリトンX100を含有する使用中の緩衝液を横断し、ニトロセルロース膜の検査ラインで固定されたMxAモノクローナル抗体によって捕捉される。検査ラインでのこの結合が、目に見える表示を生じさせる。
Claims (29)
- サンプル中の標的を検出するためのデバイスであって、
前記デバイスは、
(a)前記デバイスにサンプルを塗布するためのサンプル塗布領域と、
(b)前記サンプル塗布領域の下流に配された検出領域と、
(c)溶出培地とともに移動することが可能な少なくとも1つの標識結合パートナーを含む複合体領域とを備え、
前記複合体領域は、前記サンプルが前記デバイス上でのアッセイ実行中に、前記標識結合パートナーと遭遇するような位置で前記デバイス上に配され、
前記デバイスはさらに、
(d)少なくとも1つの溶解剤を含む溶解領域を備え、
前記溶解領域が、
(i)前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
(ii)前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なる位置、
(iii)前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、および、
(iv)前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なるとともに、前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とするデバイス。 - 前記複合体領域が前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間に配されることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。
- 前記標的が、病原体、アレルギー関連成分、および、核酸からなる群から選択され、
前記標的が体液からのものであることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。 - 前記溶解剤が、前記デバイスの前記溶解領域上に事前に載せられていることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。
- 前記デバイスが側方流動イムノアッセイデバイスであることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。
- 前記デバイスが、クロマトグラフィー検査ストリップであることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。
- 障壁を含む阻止領域をさらに備え、前記障壁が、前記障壁よりも空隙率の高い溶解材料を効率的に遅くしたりまたは止めたりすることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。
- 前記障壁が、物理的障壁および生物学的障壁からなる群から選択されることを特徴とする、請求項7に記載のデバイス。
- 前記阻止領域は、前記溶解領域の下流に配されるとともに、
(a)前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
(b)前記複合体領域と前記検出領域との間、および、
(c)前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とする、請求項7に記載のデバイス。 - 前記溶解剤は、
(a)少なくとも1つの塩、
(b)少なくとも1つの両性剤、
(c)少なくとも1つのイオン性洗剤
(d)少なくとも1つの非イオン性洗剤
(e)少なくとも1つの酵素、
(f)尿素、および、
(g)(a)乃至(f)の任意の組み合わせ
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載のデバイス。 - サンプル中の少なくとも1つの標的を検出するための方法であって、
前記方法は、
(a)溶解していないサンプルをサンプル分析デバイスのサンプル塗布領域上に移動させる工程と、
(b)前記サンプル塗布領域から検出領域まで前記サンプルを移動させるために、前記サンプル分析デバイスに溶出培地を塗布する工程とを備え、
前記サンプルが前記検出領域に到達する前に溶解されるように、前記サンプルは前記サンプル分析デバイス上または前記溶出培地中で少なくとも1つの溶解剤と遭遇し、
前記方法は、さらに、
(c)前記サンプルを分析する工程を備え、
前記サンプル塗布領域、前記溶解剤、および、前記検出領域は、クロマトグラフィー検査ストリップ上にあり、
前記クロマトグラフィー検査ストリップはさらに複合体領域を備え、
前記複合体領域は、溶出培地とともに移動することが可能な少なくとも1つの標識結合パートナーを含み、および、
前記サンプルが前記サンプル塗布領域から前記検出領域へと移動する間に、前記標識結合パートナーは前記サンプルと遭遇することを特徴とする方法。 - (d)工程(a)で前記サンプルを移動させる20分以内に、工程(c)で行われる分析の少なくとも1つの結果を決定する工程をさらに備えることを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 前記結果が、工程(a)で前記サンプルを移動させる10分以内に決定されることを特徴とする、請求項12に記載の方法。
- 前記結果が、工程(b)で前記溶出培地を塗布する1乃至5分以内に決定されることを特徴とする、請求項12に記載の方法。
- 前記標的が、病原体および/またはアレルギー関連成分からなる群から選択される標的であり、
前記サンプルが体液からのものであることを特徴とする、請求項11に記載の方法。 - 前記複合体領域が、前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間に配されることを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 工程(a)の前に、前記デバイスの溶解領域上に前記溶解剤を事前に載せるともに乾燥させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 工程(a)の前に、前記デバイスの溶解領域上で前記溶解剤を吸収し、吸着し、埋め込み、および、捕捉することからなる群から選択される方法を用いて、前記デバイスの前記溶解領域上に前記溶解剤を事前に載せる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 工程(a)の前に、(i)前記溶解剤のフリーズドライおよび凍結乾燥からなる群から選択される方法を用いて、前記溶解剤を事前に乾燥させる工程と、(ii)前記溶解剤を前記デバイス上に事前に載せる工程とを、さらに含むことを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 前記サンプル分析デバイスは、前記溶解剤を含む溶解領域をさらに備え、
前記溶解領域は、
(i)前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
(ii)前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なる位置、
(iii)前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、および、
(iv)前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なるとともに、前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とする、請求項11に記載の方法。 - 前記デバイスは、障壁を含む阻止領域をさらに備え、
前記障壁は、前記障壁よりも空隙率の高い溶解材料を効率的に遅くしたりまたは止めたりすることを特徴とする、請求項11に記載の方法。 - 前記障壁が、物理的障壁または生物学的障壁からなる群から選択されることを特徴とする、請求項21に記載のデバイス。
- 前記阻止領域は、前記溶解剤の下流に配されるとともに、
(a)前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
(b)前記複合体領域と前記検出領域との間、および、
(c)前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とする、請求項21に記載のデバイス。 - 前記溶解剤は、
(a)少なくとも1つの塩、
(b)少なくとも1つの両性剤、
(c)少なくとも1つのイオン性洗剤
(d)少なくとも1つの非イオン性洗剤
(e)少なくとも1つの酵素、
(f)尿素、および、
(g)(a)乃至(f)の任意の組み合わせ
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項11に記載の方法。 - サンプル中の標的を検出するためのデバイスであって、
前記デバイスは、
(a)前記デバイスにサンプルを塗布するためのサンプル塗布領域と、
(b)前記サンプル塗布領域の下流に配された検出領域と、
(c)溶出培地とともに移動することが可能な少なくとも1つの標識結合パートナーを含む複合体領域とを備え、
前記複合体領域は、前記サンプルが前記デバイス上でのアッセイ実行中に、前記標識結合パートナーと遭遇するような位置で前記デバイス上に配され、
前記溶出培地は少なくとも1つの溶解剤を含むことを特徴とするデバイス。 - 前記複合体領域が前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間に配されることを特徴とする、請求項25に記載のデバイス。
- サンプル中の標的を検出するための側方流動イムノアッセイデバイスであって、
前記デバイスは、前記側方流動イムノアッセイデバイスに事前に載せられた少なくとも1つの溶解剤を備えることを特徴とするデバイス。 - 側方流動イムノアッセイデバイスを用いて、サンプル中の少なくとも1つの標的を検出するための方法であって、
前記方法は、
(a)前記側方流動イムノアッセイデバイスのサンプル塗布領域に、溶解していないサンプルを移動させる工程と、
(b)前記側方流動イムノアッセイデバイスでアッセイを実行中に、前記サンプルを溶解する工程とを含むことを特徴とする方法。 - 工程(b)は、前記側方流動イムノアッセイデバイスに事前に載せられた少なくとも1つの溶解剤に、前記サンプルをさらすことによって、達成されることを特徴とする、請求項28に記載の方法。
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