JP2012205928A - ポリアニオン性多糖類と疎水性生物吸収ポリマーを含む組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】疎水性生物吸収ポリマーに結合したポリアニオン性多糖類を含む生体親和性組成物を提供した。
【選択図】なし
Description
ポリアニオン性多糖類とその塩類は様々な、一般の商業的製造業者から入手することができる。水不溶性ポリアニオン性多糖類ゲルやフィルムおよび発泡体は、本発明で用いる、いずれの方法によっても調製することができよう。ゲルは、前述したように、糖鎖分子間あるいは分子内に共有的交差結合を形成させることによって作製することができる(例えば、「Sparerら、上記; DeBelderら、上記;Balazsら、上記;Malsonら、上記; Prestwichら、欧州特許公開0416250号, 1991年」)。この他、「Hamiltonら、米国特許第4,937,270号; Burnsら、米国特許第5,017,229号, 米国出願番号(U.S.S.N.) 07/703,254と、07/833,973」(これらはこの点に関して参照とした)に述べられている方法を用いれば、ポリアニオン性多糖分子間の共有結合的な交差結合を持たない水不溶性ゲルを作製することもできよう。
HA(5.5 g、13.7モル、分子量2,350,000)とCMC(2.5 g、9.7モル、分子量 250,000)の水(1L)溶液を0.1M HClでpH4.74に調整した後、1-(-3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド(10.6 g 55.5モル)を加えた。0.1M HClを加えながら、溶液のpHを4.6-5.1の間に1時間維持した。この反応溶液を、チューブ型の膜(カットオフ分子量12-14,000)の中に入れ、pH4.0の脱イオン水に対して、24時間透析を行った。精製した、化学的修飾されたHA/CMC溶液をステンレス製の平型容器に注ぎ込んで、凍結乾燥して固形状の発泡体シートにした。生成物の温度を、厳密に0.1 ℃/minの速度で-20℃まで下げた。次に、乾燥過程は150 mTorrに設定した真空状態の下で、設定温度を0.1 ℃/minの速度で0℃まで上げた。そして、温度を0℃に900分間保った後、0.1 ℃/minの速度で27℃まで上げた。発泡体はその後、脱水加熱処理(24時間、105℃、200μmHg)を施して強化した。そして、この発泡体は、コーティングする前に重さを測ってからポリプロピレン製の枠に中に入れた。
[実施例2]
本実施例においては、米国特許4、937、270号の方法に従って作製された,修飾されたHA/CMCの粉末(4.5 g)を、高速ブレンダー(1000 rpmで20分間)で蒸留水(450 ml)に懸濁した。この懸濁液をテフロン(登録商標)でコーティングしたスチール製の平型容器に注ぎ入れ、凍結乾燥させて固形の発泡シートにした。凍結乾燥は、実施例1に示されるようにして行われた。
本実施例において、修飾されたHA/CMCの粉末(4.5 g)を、高速ブレンダー(1000 rpmで20分間)を用いて、蒸留水(450 ml)に懸濁した。100%PGA膜の切片を、テフロンでコーティングしたステンレス製の平型容器の中に置いた。HA/CMCの懸濁液を平型容器に流し込んで、実施例1で述べた手順に従って、凍結乾燥して、固形の発泡シートにした。発泡体と膜組成物を圧縮して(1メートルトンの圧力で15秒間、スペーサーの厚さは0.25 mm)薄膜状にして、脱水加熱処理(100℃、6時間)して強化した。組成物の湿潤伸展性を評価して、表2に示した。組成物を濡らしたときの強度は、元の発泡体の強度よりずっと優れていた。
[実施例4]
ヒアルロン酸(5.5 g、13.7モル、分子量2,350,000)とカルボキシメチルセルロース(2.5 g、9.7モル、分子量250,000)を1リットルの水に溶かし、溶液のpHを0.1 M HClで4.75に調整した。そして、1-(-3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド(10.6 g、55.5モル)を加えた溶液に、0.1 M HClを加えて、1時間、pHを4.6-5.1の間に維持した。次に、この反応溶液をpH 4.0の蒸留水に対して透析した(分子量12-14,000を除去)。精製した反応混合液は、ポリスチレン製の平型容器に2.2 g HA/CMC/ft2 の密度になるよう流し込んだ。
[実施例5]
哺乳動物の細胞を、有形の基質に接種して育てる手順は、当業者には公知である。この基質の目的は、細胞を支持すること、細胞が基質を通って移動できるようにすること、細胞を移植するための取扱いを容易にすることと移植した細胞をその場所に固定するのに役立てることである。本発明に係る、新しいPAS合成物をこの目的に合った基質として利用することができる。一例として、実施例2で述べたところに従って作製された、PAS誘導体の疎水性生物吸収基質を細胞培養皿の大きさと形に切る。皮膚からトリプシン処理によって分離するか、標準的な細胞系として入手した(例えば、ATCCから入手可能である)哺乳類の線維芽細胞を、約95-100%の相対湿度で5%二酸化炭素を含む環境下、37℃で培養する。細胞が成長したところで、これらの線維芽細胞をトリプシン処理して培養器から取り出して、ウシ胎児血清を入れた培養液で洗浄する。細胞密度を約104から106細胞数/mlに調整する。
Claims (85)
- 疎水性生物吸収ポリマーに結合したポリアニオン性多糖類を含む、水不溶性生体親和性組成物。
- 請求項1の組成物において、ポリアニオン性多糖類が水不溶性誘導体の形状で存在する組成物。
- 請求項1または2の組成物において、ポリアニオン性多糖類が、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルアミロース、ヒアルロン酸、コンドロイチン-6-硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸またはデルマタン硫酸の中から選択される組成物。
- 請求項3の組成物において、カルボキシメチルアミロースがポリアニオン性多糖類である組成物。
- 請求項3の組成物において、ポリアニオン性多糖類がカルボキシメチルセルロースである組成物。
- 請求項3の組成物において、ヒアルロン酸がポリアニオン性多糖類である組成物。
- 請求項2の組成物において、生体親和性組成物が2種以上のポリアニオン性多糖類を含む組成物。
- 請求項7の組成物において、2種のポリアニオン性多糖類がヒアルロン酸とカルボキシメチルセルロースである組成物。
- 請求項1または2の組成物において、疎水性生物吸収ポリマーがポリグリコリド、ポリラクチド、ポリジオキサノン類、ポリエステルカーボネート類、ポリヒドロキシアルコネート類、ポリラクトン類および、これらの共ポリマーの中から選択されたものである組成物。
- 請求項9の組成物において、ポリグリコリドが疎水性生物吸収ポリマーである組成物。
- 請求項9の組成物において、ポリラクチドが疎水性生物吸収ポリマーである組成物。
- 請求項9の組成物において、ポリグリコリドとポリラクチドの共ポリマーが疎水性生物吸収ポリマーである組成物。
- 請求項9の組成物において、ポリグリコリド/ポリカプロラクトンの共ポリマーが疎水性生物吸収ポリマーである組成物。
- 請求項9の組成物において、ポリラクチド/ポリカプロラクトンの共ポリマーが疎水性生物吸収ポリマーである組成物。
- 請求項1または2の組成物において、膜の形状をもつ組成物。
- 請求項1または2の組成物において、発泡体の形状にある組成物。
- 請求項2の組成物において、繊維の形状にある組成物。
- 請求項1または2の組成物において、さらに薬剤を含む組成物。
- 請求項18の組成物において、薬剤がタンパク質、生物ポリマー、ステロイド、非ステロイド系抗炎症剤、細胞毒性因子、抗生物質またはオリゴヌクレオチドの中から選ばれたものである組成物。
- 請求項7の組成物において、さらに薬剤を含む組成物。
- 請求項20の組成物において、薬剤がタンパク質、生物ポリマー、ステロイド、非ステロイド系抗炎症剤、細胞毒性因子、抗生物質またはオリゴヌクレオチドの中から選ばれたものである組成物。
- 請求項2の組成物において、さらに生物の細胞を含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞と混合された組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞を浸透させた組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が哺乳類に由来する組成物。
- 請求項25の組成物において、哺乳類がヒトである組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が線維芽細胞を含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が骨細胞を含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が軟骨細胞を含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞がケラチノサイトを含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が腱細胞を含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が未分化の間葉細胞を含む組成物。
- 請求項22の組成物において、細胞が2種以上の細胞型の混合物である組成物。
- 請求項22の組成物において、さらに薬剤を含む組成物。
- 請求項34の組成物において、薬剤が成長因子である組成物。
- 請求項34の組成物において、薬剤が抗生物質である組成物。
- 請求項7の組成物において、さらに生物の細胞を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞と混合された組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞を浸透させた組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が哺乳類に由来する組成物。
- 請求項40の組成物において、哺乳類がヒトである組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が線維芽細胞を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が骨細胞を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が軟骨細胞を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞がケラチノサイトを含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が腱細胞を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が未分化の間葉細胞を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、細胞が2種以上の細胞型の混合物を含む組成物。
- 請求項37の組成物において、さらに薬剤を含む組成物。
- 請求項49の組成物において、薬剤が成長因子である組成物。
- 請求項49の組成物において、薬剤が抗生物質である組成物。
- 組成物を形成するのに適した条件下で、ポリアニオン性多糖類を疎水性生物吸収ポリマーに結合することを含む、生体親和性組成物の製造方法。
- 請求項52の方法において、ポリアニオン性多糖類がフィルムあるいは発泡体の形状である方法。
- 請求項52の方法において、ポリアニオン性多糖類が水不溶性誘導体の形状である方法。
- 請求項53または54の方法において、ポリアニオン性多糖類を疎水性生物吸収ポリマーでコーティングして結合させることを含む方法。
- 請求項53または54の方法において、ポリアニオン性多糖類に疎水性生物吸収ポリマーをスプレーしてコーティングすることを含む方法。
- 請求項54の方法において、水不溶性のポリアニオン性多糖類の誘導体に疎水性生物吸収ポリマーを塗ってコーティングすることを含む方法。
- 請求項54の方法において、水不溶性のポリアニオン性多糖類誘導体を疎水性生物吸収ポリマーに浸漬してコーティングすることを含む方法。
- 請求項53または54の方法において、水不溶性のポリアニオン性多糖類誘導体の片側だけにコーティングを施すことを含む方法。
- 請求項52の方法において、疎水性生物吸収ポリマーの繊維をポリアニオン性多糖類の懸濁液に拡散させて結合させることを含む方法。
- 請求項53または54の方法において、疎水性生物吸収ポリマーのフィルムをポリアニオン性多糖類上に圧縮して結合することを含む方法。
- 生体外で細胞の成長と増殖を促す方法において、細胞のサンプルを得、該細胞を、疎水性生物吸収ポリマーに結合したポリアニオン性多糖の水不溶性誘導体を含む生体親和性基質と混合し、さらに該混合物を、細胞の成長を促進し細胞が基質に浸透するのに適した条件の下で培養することを含む方法。
- 哺乳類の生体の傷害部位で細胞成長と増殖を促すための組成物において、当該傷害部位の治癒を促進することができ、疎水性生物吸収ポリマーに結合したポリアニオン性多糖類の水不溶性誘導体を含む生体親和性基質と混合した細胞のサンプルを含む組成物。
- 請求項63の組成物において、哺乳類の傷害部位に用いる前に、当該混合物を、細胞の成長を促し、該細胞が基質に浸透して行くのに適した条件の下で培養した組成物。
- 請求項63の組成物において、細胞が線維芽細胞を含む組成物。
- 請求項63の組成物において、細胞が骨細胞を含む組成物。
- 請求項63の組成物において、細胞が軟骨細胞を含む組成物。
- 請求項63の組成物において、細胞がケラチノサイトを含む組成物。
- 請求項63の組成物において、細胞が腱細胞を含む組成物。
- 請求項63の組成物において、細胞が未分化の間葉細胞を含む組成物。
- 請求項63の組成物において、さらに水不溶性基質に充填された薬剤を含む組成物。
- 請求項71の組成物において、薬剤が、哺乳類の傷害部位における、細胞の成長と増殖を一層促進することができる成長因子である組成物。
- 請求項72の組成物において、生長因子がTGF-β2である組成物。
- 請求項71の組成物において、薬剤が抗生物質である組成物。
- 請求項1の組成物において、ポリアニオン性多糖類が、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルアミロース、ヒアルロン酸、コンドロイチン-6-硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸またはデルマタン硫酸の中から選択される組成物。
- 請求項75の組成物において、ポリアニオン性多糖類がカルボキシメチルアミロースである組成物。
- 請求項75の組成物において、ポリアニオン性多糖類がカルボキシメチルセルロースである組成物。
- 請求項75の組成物において、ポリアニオン性多糖類がヒアルロン酸である組成物。
- 請求項1の組成物において、生体親和性組成物が2種以上のポリアニオン性多糖類を含む組成物。
- 請求項79の組成物において、2種以上のポリアニオン性多糖類がヒアルロン酸とカルボキシメチルセルロースである組成物。
- 請求項1の組成物において、生物吸収性ポリマーが、ポリマーポリグリコリド、ポリラクチド、ポリジオキサノン、ポリエステルカーボネート、ポリヒドロキシアルコネート、ポリラクトンあるいはこれらの共ポリマーの中から選択される組成物。
- 請求項1の組成物において、膜状である組成物。
- 請求項1の組成物において、発泡体状である組成物。
- 請求項1の組成物において、繊維状である組成物。
- 請求項1の組成物において、さらに薬剤を含む組成物。
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