JP2012095550A - 細胞分取装置、細胞分取チップ及び細胞分取方法 - Google Patents

Abstract

【課題】分岐流路間で圧力差が生じることはなく、正確な細胞の分取を行うことができる細胞分取装置、細胞分取チップ及び細胞分取方法を提供すること。
【解決手段】
この細胞分取チップは、基板と、流路と、第１及び第２の分岐流路と、細胞保持部と、流出部とを具備する。流路は、基板に設けられ、細胞を含む流体が流れる。第１及び第２の分岐流路は、基板に設けられ、流路より分岐する。細胞保持部は、第１の分岐流路に設けられ、第１の分岐流路を流れる流体に含まれる細胞を保持する。流出部は、第１の分岐流路と第２の分岐流路とを結合し、第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させるためのものである。
【選択図】図６

Description

本発明は、目的とする細胞を分取するための細胞分取装置、細胞分取チップ及び細胞分取方法に関する。

細胞を分取する装置として、蛍光フローサイトメータやセルソータが知られている。これらの装置では、各細胞が適切な振動条件（一般には、出口流速は数ｍ／ｓであり、振動数は数１０ｋＨｚである。）の下で周囲流体によって吐出口にて気液界面に閉じ込めら、同時に各細胞には電荷を与えられる。各細胞は、静電場が印加された空中を荷電量に応じた方向へ液滴として飛翔し、最終的に流路外に設けた分取用容器内に分取される。

この技術は流速が前述のように比較的速い場合において有用であるが、流速の遅いフローサイトメータや誘電サイトメータにおいては、液滴化および吐出条件を満足することは困難である。このため、むしろ分岐を設けた流路内で分取動作を行い、その後段で細胞を保持することが望ましい。
分岐後の細胞を容器に導入する方法として、例えば特許文献１に記載されているように、配管を介して細胞を含む流れを装置外に引き出す方法がある。

しかしながら、配管を介して細胞を含む流れを装置外に引き出す場合には、一般に送液経路が長くなり容器に達するために長時間を要し、液量の消費量も大きい。

特表２００３−５０７７３９号公報（図３８など参照）

そこで、本発明者等は、何らかの細胞分別情報を基にして細胞の流路内分取を行う細胞分取方法を提唱している。この方法を実現する装置では、細胞分別情報を基に流路内に細胞の行路を変更して細胞を分取するために細胞に駆動力を印加する分取駆動力印加部を設ける。さらに、この装置では、分取駆動力印加部より下流に２つの分岐流路と、各分岐流路を流れる流体を滞留させる液溜部とを設けている。

しかしながら、このような装置では、各液溜部での水頭差等が容易に発生し、この影響が分岐流路を介して取駆動力印加部にまで圧力変動として伝播し、取駆動力印加部による正確な細胞の分取を妨げてしまう可能性があった。

本発明の目的は、分岐流路間で圧力差が生じることはなく、正確な細胞の分取を行うことができる細胞分取装置、細胞分取チップ及び細胞分取方法を提供することにある。

本発明に係る細胞分取装置は、分岐部と、結合部と、流出部とを具備する。
分岐部は、細胞を含む流体が流れる流路を第１の分岐流路と第２の分岐流路とに分岐する。
結合部は、第１の分岐流路と第２の分岐流路とを結合する。
流出部は、結合部により結合された第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させるためのものである。

本発明では、一旦分岐した第１の分岐流路と第２の分岐流路とが再び結合部により結合されているので、第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を流出部より外部に流出させる際にこれらの分岐流路間で圧力差が生じることはなく、正確な細胞の分取を行うことができる。

本発明の一形態として、さらに、前記第１の分岐流路に設けられ、前記細胞を保持する細胞保持部を具備し、前記細胞が前記細胞保持部を通過する間に前記細胞が沈降する距離が前記第１の分岐流路の高さよりも大きくなるよう、前記細胞保持部の長さ及び前記細胞保持部の平均断面積と前記第１の分岐流路の平均断面積との比が設定されていてもよい。

本発明では、このように設定することにより、分取した目的とする細胞が流出部に流れることなく細胞保持部により保持されるので、分取した細胞を細胞保持部から確実に外部に取り出すことが可能となる。
本発明に係る細胞分取チップは、基板と、流路と、第１及び第２の分岐流路と、細胞保持部と、流出部とを具備する。
流路は、基板に設けられ、細胞を含む流体が流れる。
第１及び第２の分岐流路は、基板に設けられ、流路より分岐する。
細胞保持部は、第１の分岐流路に設けられ、第１の分岐流路を流れる流体に含まれる細胞を保持する。
流出部は、第１の分岐流路と第２の分岐流路とを結合し、第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させるためのものである。

本発明では、一旦分岐した第１の分岐流路と第２の分岐流路とが再び結合しているので、第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を流出部より外部に流出させる際にこれらの分岐流路間で圧力差が生じることはなく、正確な細胞の分取を行うことができ、分取した細胞を細胞保持部から外部に取り出すことが可能となる。

本発明の一形態として、細胞保持部は、外部より穿孔可能な膜状の部位を有していてもよい。
本発明では、細胞保持部が外部より穿孔可能な膜状の部位を有するので、膜状の部位を介して細胞保持部内へピペットを差し込む等により、細胞保持部に保持された細胞をピペット等により簡単に外部に取り出すことが可能である。

本発明に係る細胞分取方法は、細胞を含む流体が流れる流路を第１の分岐流路と第２の分岐流路とに分岐する。
次に、記第１の分岐流路と第２の分岐流路とを結合する。
そして、記結合された第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させる。
本発明では、一旦分岐した第１の分岐流路と第２の分岐流路とが再び結合しているので、第１の分岐流路及び第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させる際にこれらの分岐流路間で圧力差が生じることはなく、正確な細胞の分取を行うことができる。

本発明によれば、一旦分岐した第１の分岐流路と第２の分岐流路とが再び結合しているので、分岐流路間で圧力差が生じることはなく、正確な細胞の分取を行うことができる。

本発明に係る細胞機能分析・分取システムの概念的な図である。 図１に示した細胞機能分析・分取システムに適用することが可能な細胞分取チップの構成を示す斜視図である。 図２に示した分取部の構成（分取信号オフ）を示す平面図である。 図３のＡ−Ａ断面図である。 図２に示した分取部の構成（分取信号オン）を示す平面図である。 図２に示した細胞保持部及び流出部の構成を示す平面図である。 図６のＡ−Ａ断面図である。 図６に示した細胞保持部の概略断面図である。 本発明に関連する作用効果を説明するための図である。

以下、本発明の実施の形態を図面に基づき説明する。
（細胞機能分析・分取システムの概略）
図１は本発明の一実施形態に係る細胞機能分析・分取システムの概念的な図である。

図１に示すように、細胞機能分析・分取システム１は、マイクロ流路（以下、単に「流路」と呼ぶ。）２に沿って、その上流より投入部３、測定部４、分取部５、細胞保持部６、７、流出部１０が設けられている。分取部５は、電場印加部８と、分岐部９とを有する。
Ｃは、サンプリングされた細胞Ｃを含む液体が例えばポンプなどを使った圧力容器（図示を省略）を介して投入される。

流路２は、投入部３より投入された液体が流れる。流路２は、分岐部９において分岐流路２ａと分岐流路２ｂとに分岐される。一旦分岐された分岐流路２ａと分岐流路２ｂとは、流出部１０において再度結合される。流出部１０は、このような結合部としての機能を有するが、結合部が流出部と別に設けられていても構わない。細胞保持部６は分岐流路２ａの途中に設けられ、細胞保持部７は分岐流路２ｂの途中に設けられている。

測定部４は、流路２中を流れる一個一個の細胞Ｃに対して、細胞Ｃの誘電緩和現象が起こる周波数範囲（例えば０．１ ＭＨｚから５０ ＭＨｚ）の多点周波数（３点以上、典型的には１０から２０点程度）にわたり、それらの細胞Ｃの複素誘電率を測定する。測定部４は、測定した細胞Ｃの複素誘電率に基づき分取すべき細胞Ｃかを判断し、分取すべき細胞Ｃの場合には分取信号を出力する。測定部４ではなく、例えば電極対から構成される信号検出部と、検出された信号に基づき細胞Ｃの機能を分析する細胞機能分析部とから構成してもよい。
分取部５は、投入部３から投入された複数種類の細胞Ｃのうち、所望とする細胞Ｃを細胞保持部５に、それ以外の細胞Ｃを細胞保持部６に分取する。

電場印加部８は、流体が流れる方向Ｘとは異なる方向、例えばＸ方向とは直交するＹ方向に勾配を有する電場を印加することが可能である。例えば、電場印加部８は、分取信号を入力されていないときには電場を印加しないが、分取信号を入力すると、電場を印加する。

分岐部９は、電場印加部８で電場が印加されない細胞Ｃについては細胞保持部７に流れるように分岐し、電場印加部８で電場が印加された細胞Ｃについては細胞保持部６に流れるように分岐する。
細胞保持部６、７を通過した液体は流出部１０より例えばポンプを使った圧力容器を介して外部に排出される。投入部３の加圧と流出部１０の減圧によって、流路２に圧力差が生じるようになっている。

この細胞機能分析・分取システム１では、予め何らかの別の手法による測定部ないし測定値解析部から発せられる分取信号に応じて、電場をオン・オフまたは振幅変調して印加し、細胞径や物性にばらつきを持った細胞群であっても、分取対象である細胞Ｃについてのみ、十分な誘電泳動力によって分取する。

（細胞機能分析・分取用のチップ）
図２は図１に示した細胞機能分析・分取システムに適用する細胞分取チップの構成を示す斜視図である。
図２に示すように、チップ１１は、基板１２及び高分子膜等からなるシート状の部材１３を有する。基板１２には、流路２、投入部３としての液体投入部３ａ、分岐部９、細胞保持部６、７、流出部１０が設けられている。これらは、基板１２の表面に溝などを形成し、その表面をシート状の部材１３で覆うことで構成される。細胞Ｃを含め液体が投入される細胞投入部３ｂは、シート状の部材１３の微細な孔を設けて構成され、その上にピペットで細胞Ｃを含む液体を垂らすと、微細な孔を介して流路２を流れる液体に巻き込まれるように流路２の下流に流れていく。微細な孔であることから、細胞Ｃは複数まとめて流路２に流れ込むことなく、１個ずつ流路２に流れ込んでいく。

微細な孔を挟むように一対の信号検出電極４ａ、４ｂが設けれている。一方の信号検出電極４ａはシート状の部材１３の表面に、他方の信号検出電極４ｂはシート状の部材１３の裏面に設けられている。電場印加部８を構成する電極対（後述する）もシート状の部材１３の裏面に設けられている。

細胞保持部６、７はその上部が外部より穿孔可能な膜状の部位としてのシート状の部材１３により覆われているが、シート状の部材１３にピペットを刺してピペットを介して細胞Ｃが取り出される。

電極パッド１４は信号検出電極４ａ、４ｂで検出された信号を外部に取り出す。取り出された信号は例えば細胞機能分析部（図示を省略する。）に送られる。電極パット１５は細胞機能分析部から出力される分取信号が入力される。入力された分取信号は電場印加部８を構成する電極対に送られる。
貫通孔２６は、チップ１１が細胞機能分析部等を有する装置本体に装着されたときの位置決め用の孔である。

（分取部の構成）
図３は図２に示した分取部５の構成を示す平面図、図４は図３の断面図である。
図３及び図４に示すように、分取部５は、電場印加部８と、分岐部９とを有する。
電場印加部８は、流路２の所定の位置に設けられた電極１６、１７を有する。電極１６と電極１７とが流路２を流れる流体の方向（Ｘ方向）とは異なる例えばＹ方向に流路２を挟むように対向して配置されている。電極１６、１７は、シート状の部材１３の裏面（流路２内の天面）に設けられている。電極１６は、例えば信号が印加される電極で、電極１７に向けて多数の電極指１６ａが突出するように構成される。電極１７は、例えばコモン電極で、電極１６に対して凹凸を持たないように構成される。以下では、一つの電極指１６ａと電極１７との組み合わせを電極対１８と呼ぶ。このように電極対１８を構成することで、電極１６、１７に信号が印加されたときに、各電極対１８でそれぞれＹ方向に勾配を有する電場が印加される。

分岐部９は、流路２の電場印加部８より下流の所定の位置で、電場印加部８により電場が印加されて誘電泳動力によって流れ方向が変わった細胞Ｃを分岐流路２ａと分岐流路２ｂとに分岐する。分岐部９は、流路２がＹ字状に分岐して構成され、一つは分岐流路２ａを介して細胞保持部６に向けて分岐し、もう一つは分岐流路２ｂを介して細胞保持部７に向けて分岐する。例えば、投入部３においては細胞Ｃが細胞保持部７側の偏った位置に投入される。このように細胞保持部７側の偏った位置に投入された細胞Ｃは、分取対象でない細胞Ｃが電場印加部８を通過するときには電場印加部８で電場が印加されず（ｎｏｎ−ａｃｔｉｖｅ）、図３に示したように、流路２をその偏った位置側を流れそのまま細胞保持部７に流れる。しかし、分取対象の細胞Ｃが電場印加部８を通過するときには電場印加部８で電場が印加され(ａｃｔｉｖｅ)て細胞Ｃに誘電泳動力が与えられ、図５に示すように、細胞Ｃの流れ方向が細胞保持部６側に変わり、その分取対象の細胞Ｃは分岐部９により細胞保持部６側に分岐される。

このように構成された電場印加部８では、各電極対１８でそれぞれＹ方向に勾配を有する電場が印加されるので、電場印加部８を通過する細胞Ｃが徐々に行路を変えて細胞保持部６側に分岐することが可能となる。

（細胞保持部及び流出部の構成）
図６は細胞保持部及び流出部の構成を示す平面図、図７はその断面図である。
図６及び図７に示すように、分岐流路２ａの途中には、細胞保持部６が設けれ、分岐流路２ｂの途中には細胞保持部７が設けられている。分岐流路２ａの終端と分岐流路２ｂの終端とは、流出部１０において再び結合している。従って、分岐流路２ａを流れる液体は、細胞保持部６を通り流出部１０流れ、分岐流路２ｂを流れる液体は、細胞保持部７を通り流出部１０に流れるようになっている。
各細胞保持部６、７は、流路急拡大部として作用し、細胞Ｃが流出部１０に流れ込むことはなくこれらの細胞保持部６、７に保持される。

例えば各細胞保持部６、７は、分岐流路２ａ、２ｂよりも十分に深さが深く、しかも分岐流路２ａ、２ｂの幅よりも十分に直径の大きい円筒形状の有底孔によって構成される。

このように、細胞保持部６、７は、液体の流れ方向（Ｘ方向）に垂直な面の平均的な断面積が分岐流路２ａ、２ｂの流れ方向に垂直な面の断面積に対して十分に大きいため、流れ方向への細胞Ｃの流速ｕに比して細胞Ｃの沈降速度ｖが大きくなる。

細胞保持部６、７を適切に設計することにより、流体自体は常に流出部１０から装置外の容器へと流れ出るにもかかわらず、細胞保持部６、７に沈降した細胞Ｃは細胞保持部６、７に発生する再循環領域や死水領域に留まり、流出部１０へと流れ出ることはない。すなわち、そのためには、細胞Ｃが細胞保持部６、７を通過する間に細胞Ｃが沈降する距離が分岐流路２ａ、２ｂの高さよりも大きくなるよう、細胞保持部６、７の長さ及び細胞保持部６、７の平均断面積と分岐流路２ａ、２ｂの平均断面積との比が設定されていればよい。

ここで、図８に示すように、細胞Ｃが細胞保持部６、７を通過する時間をｔ、細胞Ｃの分岐流路２ａ、２ｂ内の主流方向（Ｘ方向）の平均流速をｕ_１、高さ方向（Ｚ方向（重力方向を正とする））の平均流速をｖ１、細胞Ｃの細胞保持部６、７内の主流方向（Ｘ方向）の平均流速をｕ_２、高さ方向（Ｚ方向（重力方向を正とする））の平均流速をｖ_２とする。また、主流方向（Ｘ方向）に垂直な面について、分岐流路２ａ、２ｂの平均断面積をＡ_１、細胞保持部６、７の平均断面積をＡ_２とし、分岐流路２ａ、２ｂ内の流路高さをｈ、細胞保持部６、７の主流方向長さをＬとする。

重力方向への沈降速度は、ストークスの式、より厳密には一様流中での球に働く抗力から求められ、これをｖ_ｓとすると、ｖ_ｓは主流方向の流速に因らないのでｖ_１＝ｖ_２＝ｖ_ｓである。
さて、細胞Ｃが細胞保持部６、７を通過するために必要な時間ｔは次のように求まる。
ｔ＝Ｌ／ｕ_２＝Ｌ／ｕ_１・Ａ_２／Ａ_１
このとき、ｔの間に細胞Ｃが沈降する距離ｚ_ｓは次のようになる。
ｚ_ｓ＝ｖ_ｓｔ

ｚ_ｓが流路高さｈよりも大きければ、細胞Ｃは細胞保持部６、７の下方に存在する循環流や死水域に捕捉され、流出部１０へと流れずに細胞保持部６、７に留まる。すなわち、その条件は、
ｚ_ｓ＝ｖ_ｓｔ＞ｈ
であればよい。
さらに具体的な数値を用いて説明する。

細胞Ｃの例としての白血球の比重ρ_ｃｅｌｌは、１．０６３〜１．０８５であり、その代表値を１．０７とする。この細胞Ｃの径を１０（μｍ）、つまり細胞Ｃの半径ｒは５（μｍ）とする。
流体の例としての水の密度ρ_Ｈ２Ｏは、２０（℃）において、１０００（ｋｇ／ｍ^３）、粘性係数μは、２０（℃）において、０．００１Ｐａ・Ｓとする。
そうすると、重力方向への沈降速度ｖ_ｓは、ストークスの式から、
ｖ_ｓ＝２／９・（ρ_ｃｅｌｌ−ρ_Ｈ２Ｏ）ｇｒ^２／μ
＝２．２（μｍ／ｓ）
となる。
また、重力方向への沈降速度ｖ_ｓは、より一般的な球の抗力式から、
ｖ_ｓ＝３．８（μｍ／ｓ）
となる。
ここで、細胞保持部６、７の主流方向長さＬを、Ｌ＝５（ｍｍ）、
分岐流路２ａ、２ｂの平均断面積Ａ_１と細胞保持部６、７の平均断面積Ａ_２との比Ｓ_ｒ（Ａ_１：Ａ_２）を、Ｓ_ｒ＝１００、
細胞Ｃの分岐流路２ａ、２ｂ内の主流方向（Ｘ方向）の平均流速ｕ_１を、ｕ_１＝１０（μｍ／ｓ）のとき、
分岐流路２ａ、２ｂ内の流路高さｈは、ｈ＝５０（μｍ）、
細胞Ｃが細胞保持部６、７を通過する時間ｔは、ｔ＝５０（ｓ）であるとすると、
このｔ時間の間に細胞Ｃが沈降する距離ｚ_ｓは、ｚ_ｓ＝ｖ_ｓｔ＝３．８（μｍ／ｓ）＊５０（ｓ）＝１９０（μｍ）となり、

これは、ｚ_ｓ＞ｈであるので、細胞Ｃは細胞保持部６、７の下方に存在する循環流や死水域に捕捉され、流出部１０へと流れずに細胞保持部６、７に留まる。また、細胞径のばらつきを±２（μｍ）としても、最小径細胞について同様に計算しても、ｚ_ｓ＝１３０（μｍ）＞ｈとなり、この場合であっても細胞Ｃは細胞保持部６、７の下方に存在する循環流や死水域に捕捉され、流出部１０へと流れずに細胞保持部６、７に留まる。
以上より、チップ１１の実用上の寸法と、この装置で用いる分取速度を考慮した場合、達成可能な設計解が存在することが分かる。
（作用効果）

図９に示すように、何らかの細胞分別情報を基にして細胞の流路内分取を行うためには、流路２内に少なくとも分取部５、その下流に分岐流路２ａ、２ｂ、流出部１０ａ、１０ｂを備えている必要がある。また、予め安定的な送液が実現されている必要がある。
ポンプ等を使った圧力容器を用いて圧力差により流路内に流体を送出する方法は、密閉構造にすることにより外気圧から隔離できるため、本質的に脈動の存在するポンプによる送液に比して、安定的な送液が可能である。この場合、分岐部９から各流出部１０ａ、１０ｂへと流出する流体に関して、各流出部１０ａ、１０ｂでの静圧は安定であり、かつ各流出部１０ａ、１０ｂにおける静圧は等しく、または所望の比率に、常に厳密に保たれなければなければならない。なぜならば、各流出部１０ａ、１０ｂでの静圧が変化すると、主流から分岐部９を経て各分岐流路２ａ、２ｂへと流れ込む各流量は、分岐部９における静圧と各流出部１０ａ、１０ｂにおける静圧との差圧の比率に応じて変化するからである。各流量が変化してしまえば細胞の流れ込む分岐流路２ａ、２ｂは容易に移ろい、如何に分岐部９手前で細胞そのももあるいは細胞を含む流体全体に対して分取のための駆動力を印加しようとも、最早所望の流出部１０ａ、１０ｂへと細胞を送り込むことは不可能である。
そこで、本実施形態では、圧力駆動する場合、各流出部を一に結合し、低圧側圧力容器に外部に排出することによって、圧力変動のない安定的な送液が可能となる。すなわち、本実施形態によれば、各分岐流路２ａ、２ｂ間で圧力差が生じず、流路２内での細胞分取に必須である安定的な送液を容易に実現できる。また、チップ１１内の細胞保持部６、７に分取後の細胞Ｃが留まり、空中を飛ばすことはおろか、別途配管や容器を準備する必要さえないため、コンタミフリーを容易かつ安価に実現でき、再生医療への応用が可能である。
なお、本発明は、上記の実施形態には限定されず、その技術思想の範囲内で様々な変形が可能あり、その変形の範囲も本発明の技術的範囲に属するものである。

例えば、上記の実施形態では、結合部と流出部とが一体になった例を示したが、結合部と流出部とが別に存在してもよい。例えば、２つの分岐流路を一旦結合部で結合し、共通の流路を介して流出部につながるように構成しても構わない。
上記の実施形態では、分岐流路が２つの場合を例示しが、３つ以上の分岐流路を設けても構わない。
上記の実施形態では、細胞保持部を各分岐流路に設けた例を示したが、細胞の分取を行う分岐流路のみに細胞保持部を設けるように構成しても構わない。
細胞保持部の形状や大きさ等は、上記実施形態に限定されず、もちろん様々な態様にて実施可能である。

２ 流路
２ａ、２ｂ 分岐流路
６、７ 細胞保持部
９ 分岐部
１０ 流出部
１１ 細胞分取チップ
１２ 基板
１３ シート状の部材
Ｃ 細胞

Claims (5)

1. 細胞を含む流体が流れる流路を第１の分岐流路と第２の分岐流路とに分岐する分岐部と、
   前記第１の分岐流路と前記第２の分岐流路とを結合する結合部と、
   前記結合部により結合された前記第１の分岐流路及び前記第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させるための流出部と
   を具備する細胞分取装置。
2. 請求項１に記載の細胞分取装置であって、さらに、
   前記第１の分岐流路に設けられ、前記細胞を保持する細胞保持部を具備し、
   前記細胞が前記細胞保持部を通過する間に前記細胞が沈降する距離が前記第１の分岐流路の高さよりも大きくなるよう、前記細胞保持部の長さ及び前記細胞保持部の平均断面積と前記第１の分岐流路の平均断面積との比が設定されている
   細胞分取装置。
3. 基板と、
   基板に設けられ、細胞を含む流体が流れる流路と、
   前記基板に設けられ、前記流路より分岐する第１及び第２の分岐流路と、
   前記第１の分岐流路に設けられ、前記第１の分岐流路を流れる流体に含まれる細胞を保持する細胞保持部と、
   前記第１の分岐流路と前記第２の分岐流路とを結合し、前記第１の分岐流路及び前記第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させるための流出部と
   を具備する細胞分取チップ。
4. 請求項３に記載の細胞分取チップであって、
   前記細胞保持部は、外部より穿孔可能な膜状の部位を有する
   細胞分取チップ。
5. 細胞を含む流体が流れる流路を第１の分岐流路と第２の分岐流路とに分岐し、
   前記第１の分岐流路と前記第２の分岐流路とを結合し、
   前記結合された前記第１の分岐流路及び前記第２の分岐流路より流れる液体を外部に流出させる
   細胞分取方法。

Images