JP2012041303A - チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法 - Google Patents
チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012041303A JP2012041303A JP2010184649A JP2010184649A JP2012041303A JP 2012041303 A JP2012041303 A JP 2012041303A JP 2010184649 A JP2010184649 A JP 2010184649A JP 2010184649 A JP2010184649 A JP 2010184649A JP 2012041303 A JP2012041303 A JP 2012041303A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- albumin
- thyroxine
- conjugate
- mixed solvent
- carboxyl group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 title claims abstract description 72
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 title claims abstract description 59
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 title claims abstract description 59
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 title claims abstract description 49
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 49
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 23
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 19
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 9
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 abstract description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 17
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 17
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical class IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- PCMORTLOPMLEFB-ONEGZZNKSA-N sinapic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC(OC)=C1O PCMORTLOPMLEFB-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 3
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- PCMORTLOPMLEFB-UHFFFAOYSA-N sinapinic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC(OC)=C1O PCMORTLOPMLEFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【解決手段】アルブミンと結合するためのカルボキシル基を有するチロキシンにおける上記カルボキシル基を活性エステル化させた後、上記チロキシンとアルブミンとを反応させて、チロキシンとアルブミンとの結合体を調製する工程(a);及び、上記のアルブミンと結合するためのカルボキシル基を有するチロキシンが溶解し、かつアルブミンが沈殿しない酸性の水性混合溶媒を用いて、前記結合体を精製する工程(b)を含む、チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法。
【選択図】なし
Description
(1) アルブミンと結合するためのカルボキシル基を有するチロキシンにおける上記カルボキシル基を活性エステル化させた後、上記チロキシンとアルブミンとを反応させて、チロキシンとアルブミンとの結合体を調製する工程(a);及び、
上記のアルブミンと結合するためのカルボキシル基を有するチロキシンが溶解し、かつアルブミンが沈殿しない酸性の水性混合溶媒を用いて、前記結合体を精製する工程(b)
を含む、チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法。
(2) 工程(b)において、未反応のアルブミンと結合するためのカルボキシル基を有する未反応のチロキシンを前記水性混合溶媒に溶出させることにより、前記結合体を精製する、(1)に記載の方法。
(3) 工程(b)において、工程(a)で得られた反応産物を前記水性混合溶媒中で透析することにより、前記結合体を精製する、(1)又は(2)に記載の方法。
(4) 工程(b)において、ゲル濾過法により前記結合体を精製する、(1)又は(2)に記載の方法。
(5) 前記水性混合溶媒が、水、アセトニトリル及びトリフルオロ酢酸の混合物である、(1)〜(4)のいずれかに記載の方法。
(6) 工程(a)を、中性又は塩基性の条件下で行う、(1)〜(5)のいずれかに記載の方法。
(7) (1)〜(6)のいずれかに記載の方法により得られる、チロキシンとアルブミンとの結合体。
本発明の酸性の水性混合溶媒において、「アルブミンが沈殿しない」とは、言い換えると、「アルブミンが溶解又は懸濁する」ことを意味する。
なお、本明細書で言うチロキシンとアルブミンとの結合体とは、好ましくは、チロキシンとアルブミンとが共有結合により結合している結合体である。
Lが示すリンカーは好ましくは、−O−、−NH−、−CO−、及び低級アルキレン(好ましくは、炭素数1〜4のアルキレン)から選ばれる基の組合せからなる。
上記一般式(1)で表される化合物のカルボキシル基を活性エステル化した後、該化合物とアルブミンとを反応させて、本発明のチロキシンとアルブミンとの結合体を調製することができる。
<チロキシン及び牛血清アルブミンの結合体の調製>
以下、スキーム1に従って、T4誘導体1からT4誘導体2を合成した。
反応終了後、白色の沈殿物を、遠心分離(3,300g、30 min、4℃)により除去し、上清を回収した。回収した上清を0.22μmのフィルターで濾過し、濾液を、以下に説明の通り、透析による精製に供した。
上記得られた濾液を透析膜チューブ(品名:SnakeSkin Pleated Dialysis Tubing, 10,000 MWCO, 22 mm×35フィート乾燥直径;プロダクト#:68100;Thermo Scientific社製)に投入した。5Lビーカーに0.1%トリフルオロ酢酸(TFA)を含有するイオン交換水(H2O)及びアセトニトリル(AR)(1:1)の混合溶媒5Lを投入した。テックジャム社製リール式pH試験紙(カタログ番号:商品コードNO:KN3138095)を用いて上記混合溶媒のpHを測定したところ1であった。上記濾液の入った透析膜チューブを該混合溶媒中に投入して、室温でゆっくりと攪拌した。
BSA一分子当たりに結合しているT4分子の数を、T4/BSA値として測定した。
測定は、MALDI−TOF−MS測定により行った。マトリックスとしてシナピン酸(シグマアルドリッチ社製)を用いた。0.1%TFAを含む水及びアセトニトリル(1:1)の混合液に、シナピン酸を10mg/mLの濃度で溶解してマトリックス溶液を調製した。該マトリックス溶液とT4−BSA水溶液(精製水)とを、1:1(各5μL)で混合し、マイクロチューブ中で十分ピペッテインングした。その後、MSの基盤プレート上に、該混合液を5μL滴下し、室温で自然乾燥させ、MS測定を行った。測定モードは、liner mode、positive modeで行い、分子量60,000〜100,000で測定した。
上記で得られたT4-BSA試料(凍結乾燥品)中に残存する未反応のT4誘導体を、以下に説明の通り、高速液体クロマトグラフィー法により測定した。以下、測定した値をT4残量(wt%)とする。
測定条件は以下の通りである。
・カラム:東ソー社製 TSKgelODS−100Z(4.6*250mm;ロット番号:P0103)
・ガードカラム:Waters C18
・溶離液A:H2O=100(0.1%TFA)
溶離液B:アセトニトリル=100(0.1%TFA)
※TFAは揮発性であるため、溶離液は用時調製した。
・リンス液:アセトニトリル/H2O=9/1 vol.
・タイムプログラム:
・流量:1.0mL/min
・カラム温度:40℃
・波長:検出器A 254nm
・感度:AUX 2
・注入量:10μL
・サンプル濃度:T4−BSA(凍結乾燥品)10mgをAR/H2O(1/1)の混合溶媒に溶解させた。
(プレートの作成)
150mM NaClで、上記で得られた精製試料(凍結乾燥品)を50μg/mLに調製した。該溶液100μLを96ウェルプレートの各ウェルに添加し、96ウェルプレートを、室温で、700rpm、1時間、振とうした。反応後、上澄み液を捨て、ブロッキング試薬N102(日油社製)を350μL添加し、96ウェルプレートを、室温で、700rpm、1時間、振とうした。反応終了後、上澄み液を捨て、イムノアッセイスタビライザー(ABI社製)を350μL添加し、96ウェルプレートを、室温で、700rpm、0.5時間、振とうした。その後、上澄み液を捨て、乾燥させた。
T4抗体標識蛍光粒子1%solid(1%BSA、1×PBS水溶液)を1×PBSで0.0025%に希釈した。この分散液を、上記96ウェルプレートの各ウェルに100μL添加し、96ウェルプレートを、室温で、700rpm、1時間、振とうした。反応終了後、上澄み液を捨て、PBST300μLで4回洗浄し、蛍光プレートリーダーで測定(Ex=660nm、Em=680nm)した。なお、「抗体標識蛍光粒子1%solid」とは、ラテックス粒子の固形分濃度が1wt%(1wt%=1gラテックス粒子/100mL水)を意味する。
上記実施例において、透析による精製において表2の精製条件に示す溶媒を用いた以外は、実施例と同様にして結合体を製造した。製造した結合体は、実施例と同様に、上記の各種分析に供試し、評価を行った。
以下の表2及び表3に、実施例及び比較例において製造した結合体の各ロットについて、各種分析結果を示す。また、表2に示す各ロットについて、蛍光粒子法による評価の結果を図1に示す。なお、表2における蛍光粒子法における相対シグナル値(%)は、ロットAを100%とした相対値である。さらに、表3に示す各ロットについて、T4残量(wt%)と蛍光粒子法における平均シグナル値の相関関係を図2に示す。
Claims (7)
- アルブミンと結合するためのカルボキシル基を有するチロキシンにおける上記カルボキシル基を活性エステル化させた後、上記チロキシンとアルブミンとを反応させて、チロキシンとアルブミンとの結合体を調製する工程(a);及び、
上記のアルブミンと結合するためのカルボキシル基を有するチロキシンが溶解し、かつアルブミンが沈殿しない酸性の水性混合溶媒を用いて、前記結合体を精製する工程(b)
を含む、チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法。 - 工程(b)において、アルブミンと結合するためのカルボキシル基を有する未反応のチロキシンを前記水性混合溶媒に溶出させることにより、前記結合体を精製する、請求項1に記載の方法。
- 工程(b)において、工程(a)で得られた反応産物を前記水性混合溶媒中で透析することにより、前記結合体を精製する、請求項1又は2に記載の方法。
- 工程(b)において、ゲル濾過法により前記結合体を精製する、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記水性混合溶媒が、水、アセトニトリル及びトリフルオロ酢酸の混合物である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(a)を、中性又は塩基性の条件下で行う、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法により得られる、チロキシンとアルブミンとの結合体。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010184649A JP5713602B2 (ja) | 2010-08-20 | 2010-08-20 | チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法 |
CN2011102379856A CN102372775A (zh) | 2010-08-20 | 2011-08-18 | 用于制备甲状腺素和清蛋白的结合体的方法 |
US13/213,585 US8524864B2 (en) | 2010-08-20 | 2011-08-19 | Method for producing conjugate of thyroxine and albumin |
EP11178083A EP2420254A1 (en) | 2010-08-20 | 2011-08-19 | Method for producing conjugate of thyroxine and albumin |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010184649A JP5713602B2 (ja) | 2010-08-20 | 2010-08-20 | チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012041303A true JP2012041303A (ja) | 2012-03-01 |
JP5713602B2 JP5713602B2 (ja) | 2015-05-07 |
Family
ID=44674289
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010184649A Expired - Fee Related JP5713602B2 (ja) | 2010-08-20 | 2010-08-20 | チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8524864B2 (ja) |
EP (1) | EP2420254A1 (ja) |
JP (1) | JP5713602B2 (ja) |
CN (1) | CN102372775A (ja) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07505714A (ja) * | 1992-03-30 | 1995-06-22 | アボツト・ラボラトリーズ | 流体試料中のチロキシンを検出・定量するための試薬および方法 |
JPH08233812A (ja) * | 1994-12-10 | 1996-09-13 | Behringwerke Ag | ハプテンのイムノアッセイおよびそれに使用可能なハプテントレーサー抗体複合体ならびにそれらの製造方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4040907A (en) * | 1974-06-20 | 1977-08-09 | Syva Company | Iodothyronine enzyme conjugates |
CN1294192A (zh) * | 1999-10-22 | 2001-05-09 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 具有甲状腺素5'脱碘酶活力抗体酶的制备 |
-
2010
- 2010-08-20 JP JP2010184649A patent/JP5713602B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-08-18 CN CN2011102379856A patent/CN102372775A/zh active Pending
- 2011-08-19 EP EP11178083A patent/EP2420254A1/en not_active Withdrawn
- 2011-08-19 US US13/213,585 patent/US8524864B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07505714A (ja) * | 1992-03-30 | 1995-06-22 | アボツト・ラボラトリーズ | 流体試料中のチロキシンを検出・定量するための試薬および方法 |
JPH08233812A (ja) * | 1994-12-10 | 1996-09-13 | Behringwerke Ag | ハプテンのイムノアッセイおよびそれに使用可能なハプテントレーサー抗体複合体ならびにそれらの製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6014026271; Scand. J. Clin. Lab. Invest. Vol.36, No.1, 197601, p.95-101 * |
JPN6014026272; Bioconjugate Chem. Vol.5, No.5, 199410, p.459-462 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US8524864B2 (en) | 2013-09-03 |
US20120046447A1 (en) | 2012-02-23 |
JP5713602B2 (ja) | 2015-05-07 |
CN102372775A (zh) | 2012-03-14 |
EP2420254A1 (en) | 2012-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9206225B2 (en) | Materials and methods for isolating phosphopeptides | |
JP2003531213A (ja) | 金属キレート化複合物 | |
JP6524272B2 (ja) | 両性イオン性試薬 | |
CA1217478A (en) | Aminomethylfluorescein derivatives | |
JP4913195B2 (ja) | 親水性修飾剤を有するアクリジニウムエステル標識 | |
JP2866419B2 (ja) | 希土類クリプテート及びその製造方法とその合成中間体とその蛍光トレーサーとしての利用方法 | |
JP2019073533A (ja) | 両性イオン含有アクリジニウム化合物 | |
JPH06322000A (ja) | 免疫学的に活性な複合体およびそれらの製造方法 | |
JP4068137B2 (ja) | ビオチニル化した化学発光性標識、結合体、測定法及び測定法キット | |
JP5503969B2 (ja) | 迅速に発光する安定なアクリジニウムエステル | |
JP5713602B2 (ja) | チロキシンとアルブミンとの結合体を製造する方法 | |
US20070087383A1 (en) | Immunoassay | |
JPH0717672B2 (ja) | コバラミン―酸ヒドラジド,その製造法およびコバラミン接合体 | |
US4820860A (en) | Novel thyronine derivatives | |
JP2004502784A (ja) | インスリン誘導体とその合成 | |
EP3585438B1 (en) | Chemiluminescent androstenedione conjugates | |
WO2007092847A2 (en) | Solid phase synthesis of acridinium derivatives | |
JPS63246382A (ja) | ビオチニル試薬及びそれを用いるビオチニル化法 | |
WO2023231889A1 (zh) | 一种抗体缀合物及其应用 | |
DK158224B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling indolderivater | |
US20060223998A1 (en) | Synthetic LSD metabolite for preparing haptens used in an LSD metabolite immunoassay | |
Pandurangi et al. | Chemistry of Bifunctional Photoprobes: 4. Synthesis of the Chromogenic, Cleavable, Water Soluble, and Heterobifunctional Sulfosuccinimidyl (N-methylamino Perfluoroaryl Azido Benzamido)-ethyl-1, 3′-Dithiopropionate: An Efficient Protein Cross-Linking Agent | |
EP0016594A2 (en) | Steroidal phosphonothioate compounds, process for preparing them, compositions containing said compounds, process for preparing said compositions, method of producing an antiserum and method of radioimmunoassay | |
CN117903190A (zh) | 硅罗丹明类化合物或其互变异构体和应用 | |
CN116930478A (zh) | 一种甲状腺素荧光偶联物及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130125 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140624 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140822 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150224 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150310 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5713602 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |