JP2011524747A - 真菌起源の感染および炎症プロセスを治療するためのｃｄ５医薬組成物 - Google Patents
真菌起源の感染および炎症プロセスを治療するためのｃｄ５医薬組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011524747A JP2011524747A JP2011514054A JP2011514054A JP2011524747A JP 2011524747 A JP2011524747 A JP 2011524747A JP 2011514054 A JP2011514054 A JP 2011514054A JP 2011514054 A JP2011514054 A JP 2011514054A JP 2011524747 A JP2011524747 A JP 2011524747A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fungal
- extracellular domain
- soluble
- cells
- zymosan
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 title claims abstract description 75
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 title description 5
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 206010058872 Fungal sepsis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 90
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 claims description 28
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 21
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 18
- 101100273730 Homo sapiens CD5 gene Proteins 0.000 claims description 16
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 claims description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 5
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 4
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 78
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 39
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 21
- 102100025131 T-cell differentiation antigen CD6 Human genes 0.000 description 21
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 17
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 17
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 17
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 16
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 15
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 14
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 14
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 14
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 12
- 108091005725 scavenger receptor cysteine-rich superfamily Proteins 0.000 description 12
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 11
- FYGDTMLNYKFZSV-WFYNLLPOSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3s,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-WFYNLLPOSA-N 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 10
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 10
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 10
- 102000000185 SRCR domains Human genes 0.000 description 9
- 108050008568 SRCR domains Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 8
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 8
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 7
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 102100024210 CD166 antigen Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 6
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 6
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 5
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 5
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 5
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 5
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 4
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 4
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010075348 Activated-Leukocyte Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 102100032814 ATP-dependent zinc metalloprotease YME1L1 Human genes 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000195619 Euglena gracilis Species 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 239000012741 Laemmli sample buffer Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 101800000795 Proadrenomedullin N-20 terminal peptide Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- PIRWNASAJNPKHT-SHZATDIYSA-N pamp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)C1=CC=CC=C1 PIRWNASAJNPKHT-SHZATDIYSA-N 0.000 description 2
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 2
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 102000035013 scavenger receptor class A Human genes 0.000 description 2
- 108091005451 scavenger receptor class A Proteins 0.000 description 2
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 241001659321 ANME-2 cluster Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 108090000044 Complement Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102100035431 Complement factor I Human genes 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 102100031262 Deleted in malignant brain tumors 1 protein Human genes 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241001269524 Dura Species 0.000 description 1
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 101000844721 Homo sapiens Deleted in malignant brain tumors 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001018258 Homo sapiens Macrophage receptor MARCO Proteins 0.000 description 1
- 101000684887 Homo sapiens Scavenger receptor class A member 5 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100033272 Macrophage receptor MARCO Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004940 SCARA5 Human genes 0.000 description 1
- 206010058556 Serositis Diseases 0.000 description 1
- -1 Spα Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- GGWBHVILAJZWKJ-UHFFFAOYSA-N dimethyl-[[5-[2-[[1-(methylamino)-2-nitroethenyl]amino]ethylsulfanylmethyl]furan-2-yl]methyl]azanium;chloride Chemical compound Cl.[O-][N+](=O)C=C(NC)NCCSCC1=CC=C(CN(C)C)O1 GGWBHVILAJZWKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001317 epifluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000010502 episomal replication Effects 0.000 description 1
- 108700010919 epstein-barr-virus proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108090001082 glucan-binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108010071602 haptoglobin-hemoglobin complex Proteins 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 210000000428 immunological synapse Anatomy 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 108091005446 macrophage receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091005485 macrophage scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Oncology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本発明は、可溶性CD5細胞外ドメインを含む医薬組成物、および真菌感染および/または真菌敗血症、ならびに真菌起源の炎症性疾患を予防および/または治療するためのその使用に関する。
Description
本発明は真菌感染の分野に属する。具体的には、本発明は、真菌感染および/または真菌敗血症、ならびに真菌起源の炎症性疾患を予防および/または治療するための可溶性CD5細胞外ドメインを含む医薬組成物に関する。
先天性免疫系による病原体の認識は、宿主によって共有されていない、その生存に必須な保存された微生物構造、いわゆる病原体関連分子パターン(PAMP)を同定するために進化した、限られた数の固定された生殖系列(germline)にコードされたレセプターに依存する(1、2)。PAMPの例には、グラム陰性菌由来のリポ多糖(LPS)、グラム陽性菌由来のリポテイコ酸(LTA)およびペプチドグリカン(PGN)、ミコバクテリア(抗酸菌)由来のリポアラビノマンナン、および真菌由来のβ-グルカンおよびマンナンがある。種々の宿主防御経路を誘導する種々の構造的および機能的に多様なクラスのパターン認識レセプター(PRR)が存在する。パターン認識に関与するタンパク質ドメインには、特に、樹状細胞(DC)レクチン由来のC型レクチンドメイン、Toll様レセプター(TLR)由来のロイシンリッチリピート(LRR)、およびスカベンジャーレセプターシステインリッチ(SRCR)が含まれる(2)。後者は、マウスタイプIクラスAマクロファージスカベンジャーレセプター(SR-AI)のクローニングに関して最初に記載された(3)。種々の他のタンパク質、例えばウニスペラクトレセプター、ヒトおよびマウスCD5、および補体因子Iとの配列比較から、SRCR-SFと名付けたタンパク質レセプターの新規スーパーファミリーの保存された100アミノ酸長モチーフの存在がわかった。このファミリーは、現在、下等無脊椎動物から哺乳動物までのほとんどの動物門に典型的な30以上の種々の細胞表面および/または分泌タンパク質からなる(4)。SRCR-SFのメンバーは、2グループに分けられ、グループAのメンバーは6個のシステインからなるSRCRドメインを含み、2つのエクソンによりコードされるが、グループBのメンバーは8個のシステインを含み、1つのエクソンによりコードされる。しかしながら、最近の構造データは、両グループAおよびBのSRCRドメインが同様の骨格(scaffold)(2つの逆平行βシートおよび1つのαらせんにより形成される中心コア)を共有し、主な違いは連結ループにみられる(5)。この状況は、進化が落ち着いた、多種多様な異なるタンパク質(例えば免疫グロブリンドメイン)を構築する免疫系の他の2、3の有効なタンパク質モジュールのそれを思い起こさせる。これらの保存されたドメインの多様性は、ドメイン構造を安定化させる重要な残基が進化を通して保存されるが、他は自由に進化し(特に外部ループのもの)大きな機能的多様性を生じる点にある(6)。したがって、高度の構造的および系統発生学的保存性にもかかわらず、SRCRドメインに対する統一的機能は報告されていない。それらのあるものはタンパク質-タンパク質相互作用に関与し、その最も良く研究された例は、CD6リンパ球レセプターとIgスーパーファミリーに属する貫膜接着分子であるCD166/ALCAMの相互作用(7、8)、およびCD163/M130マクロファージレセプターとヘモグロビン-ハプトグロビン複合体との相互作用(9)である。両グループA (すなわち、SR-AI/II、MARCO、およびSCARA5)およびB(すなわち、DMBT1、Spα、およびCD6)SRCR-SFの2、3のメンバーは、細菌表面、例えばLPS、LTA、およびPGN上に存在するPAMPと相互作用することも知られている。これら相互作用は、最初はSRCRドメインの外側にマップされていたが、最近の証拠は、それにSRCRドメインが直接関与することを示す(11-14)。したがって、病原体のスカベンジングがSRCR-SFのすべてのメンバーが共有するか、またはそのメンバーの選択したグループにのみ共有される一般的特性であるか否かはまだ分析されていない。
貫膜タイプIレセプターのCD5およびCD6は、SRCR-SFの2つのリンパ系グループBメンバーである。どちらも構造および機能的レベルで重要な類似性を共有し、共通の先祖遺伝子の複製に由来すると考えられる同じ染色体領域中の隣接遺伝子によりコードされる(15、16)。CD5およびCD6は、胸腺細胞にその発生の初期段階から発現し、成熟末梢T細胞、ならびにある種の自己免疫疾患およびB細胞慢性リンパ球性白血病において増大する多反応性天然抗体の産生に関与する成熟B細胞の小サブセットであるB1a細胞に発現する(17)。CD5およびCD6の細胞外領域は、もっぱら3連続グループB SRCRドメインのみからなり、広範囲に及ぶアミノ酸配列同一性を示す(5)。CD5とCD6の主な違いは、大きな細胞質領域にみられ、いずれも固有の触媒活性を欠くが、情報伝達における機能に適合する種々の構造的モチーフを含む(18、19)。その点で、CD5およびCD6は、T(TCR)およびB(BCR)細胞上に存在する抗原特異的複合体と物理的に結合し(20、21)、免疫学的シナプスの中心でそれと同時に局在する(21、22)。したがって、CD5およびCD6は、まだよくわかっていない抗原特異的レセプター(22〜26)および複合体情報伝達経路(23、27〜29)により生じる活性化および分化シグナルを正または負に調節するように良く位置している。これは、種々の細胞表面カウンターレセプターによるCD5およびCD6細胞外ドメインの関与を通して達成されよう。一方、CD6がCD166/ALCAMと結合することは十分証明されているが(30)、真正なCD5リガンドは依然検討中である(31-35)。興味深いことにCD5およびCD6は、CD166/ALCAMと結合するのに重要な残基が異なるようである(36)。
以前の研究では、血清中で循環する可溶性型として存在することも知られている(37、38)CD5およびCD6細胞外ドメインの細菌結合能が検討された。報告されたデータは、CD5ではなくCD6の可溶性型および膜型はいずれも特異的PAMP(すなわち、それぞれLPSおよびLTA)の認識を通してグラム陰性およびグラム陽性細菌の表面に結合することを示した(39)。
他の研究は、表面にCD5レセプターを発現するそれらの細胞、T細胞またはB細胞が多かれ少なかれC. neoformansおよびC. albicansの正常な発生を認識し、影響を及ぼす能力があることを示した(48、49)。
しかしながら、このレセプターが真菌細胞を認識し、または真菌細胞との親和性を有するメカニズムは記載も示唆もされていない。
ところで、本発明者らは、これらの研究を真菌構造に対するCD5およびCD6の認識および結合特性の分析に広げ、CD6に比べてCD5細胞外ドメインは真菌細胞表面上の保存された成分の認識によく適していることを示し、これはCD5レセプターから単離した該細胞外領域がC. neoformansおよびC. albicansなどの一般的真菌感染に対してそれ自身がin vivoでの予防をもたらすことができることを最初に示したものである。
本発明者らは、真菌細胞が可溶性型のCD5細胞外ドメインにより特異的に認識され、結合し、凝集することを示した。これは、可溶性CD5細胞外ドメインによる真菌細胞壁の保存された構造成分であるβ-グルカンの認識を通してなされる。
さらに、本発明者らは、驚くべきことに可溶性CD5細胞外ドメインがザイモサン誘発敗血性ショック様症候群のマウスモデルにおいて防御効果を有することをみいだした。
これらの結果は、真菌起源の敗血性ショック症候群または他の炎症過程を治療するための可溶性ヒトCD5細胞外ドメインの注入の治療的有用性を裏付ける。
(発明の目的)
本発明の目的は、CD5リンパ球レセプターの可溶性細胞外ドメインおよび少なくとも1の医薬的賦形剤を含む医薬組成物である。
本発明の目的は、CD5リンパ球レセプターの可溶性細胞外ドメインおよび少なくとも1の医薬的賦形剤を含む医薬組成物である。
また、本発明の目的は、真菌β-グルカンの結合および/または認識のための可溶性CD5細胞外ドメインの使用である。
本発明の別の目的は、真菌細胞および/またはβ-グルカンリッチ真菌細胞壁成分を凝集するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用である。
最後に、本発明の目的は、真菌感染および/または真菌敗血症および/またはそれと関連するあらゆる炎症性疾患を予防および/または治療するための医薬を製造するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用である。
(発明の詳細な説明)
(発明の詳細な説明)
本発明者らは、真菌細胞表面、すなわちβ-グルカン上の保存された成分の認識を介して真菌細胞と結合し、凝集することを示した。
したがって、第1の局面において、本発明は、可溶性形の全CD5細胞外ドメインまたはその部分と少なくとも1の医薬的賦形剤、例えばグリセロール、サッカロースなどを含む医薬組成物に関する。
細胞外ドメインは、細胞外スペース(細胞の外側のスペース)に広がる膜タンパク質の部分である。CD5の細胞外領域は、3種の連続グループB SRCRドメイン(CD5.D1、CD5.DII、およびCD5.DIII)からなる。CD5の3種全ての個々のSRCR細胞外ドメインは真菌細胞表面と相互作用する能力を保持した。したがって、本発明の文脈において、「可溶性CD5細胞外ドメイン」は、CD5.DI、CD5.DII、およびCD5.DIIIドメインまたはそのいずれかを含む組み合わせであると考えられる。
本発明の医薬組成物は、好ましくは静脈内または腹腔内に全身的に注入または注射することにより投与することができよう。好ましい態様において、可溶性CD5細胞外ドメインの医薬組成物は注射可能形である。
可溶性CD5細胞外ドメインの注入は、真菌感染および/または真菌起源の敗血症を予防および/または治療するのに有益である。さらに、可溶性CD5細胞外ドメインは、活発な臨床感染(または敗血症)が起きないにもかかわらず真菌成分によって引き起こされる炎症過程の予防および/または治療にも有用である。真菌壁成分は、臨床感染が継続するかしないかに関わらず、炎症反応を引き起こし、その場合には、可溶性CD5細胞外ドメインも炎症作用を予防するように働くので有効でありうる。
したがって、本発明の別の局面は、真菌感染および/または敗血症および/またはそれと関連するあらゆる炎症性疾患、例えばSIRSまたは全身性炎症反応症候群、無菌性漿膜炎などを予防および/または治療するための可溶性CD5細胞外ドメイン医薬組成物に関する。
該感染および/または敗血症および/または該炎症性疾患は腐生および非腐生真菌種により引き起こされる。具体的態様において、該真菌種はCandida albicansまたはCriptococcus neoformansである。
本発明の別の局面は、β-グルカンを結合および/または認識するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用に関する。
該可溶性CD5細胞外ドメインの結合は、用量依存性で飽和可能であり、Ca2+により著しく促進される。
別の局面は、種々の真菌種(腐生性もしくは病原性)の真菌細胞および/またはβ-グルカンリッチ真菌細胞壁成分を凝集するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用に関する。
CD5の可溶性細胞外ドメインが真菌細胞と結合するだけでなく凝集するという事実は、凝集は先天性免疫系のコンポーネントが用いる一般的戦略であるから、病原体の伝搬しにくさと食細胞による病原体のクリアランスの促進に関連する。
本発明の別の局面は、真菌感染および/または敗血症および/または真菌成分によって引き起こされるあらゆる炎症性疾患を予防および/または治療するための医薬を製造するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用に関する。
該感染および/または敗血症および/または該炎症性疾患は、腐生および非腐生真菌細胞種によって引き起こされる。具体的態様において、これら真菌種は、Candida albicansまたはCriptococcus neoformansである。
組換え可溶性ヒトCD5 DIII細胞外ドメイン(rshCD5.DIII)の製造は以前に記載されている(5)。
現在、本発明者らは、組換え可溶性ヒトCD5 DIおよびDII細胞外ドメイン(rshCD5.DIおよびrshCD5.DII)のための発現構築物を製造するための新規プライマーを開発した。rshCD5 DI細胞外ドメインを増幅するためのオリゴヌクレオチドは配列番号1および配列番号2であり、rshCD5 DIIを増幅するためのオリゴヌクレオチドは配列番号3および配列番号4である。
したがって、本発明の別の局面は、以下を含む組換え可溶性ヒトCD5 DI細胞外ドメイン(rshCD5.DI)を含む方法に関する：
a)配列番号1および配列番号2の配列のプライマーを用いてDI細胞外ドメインをPCR増幅し、
b)増幅断片を発現ベクターにクローンし、
c)可溶性ヒト組換えCD5 DI細胞外ドメインを発現および精製する。
a)配列番号1および配列番号2の配列のプライマーを用いてDI細胞外ドメインをPCR増幅し、
b)増幅断片を発現ベクターにクローンし、
c)可溶性ヒト組換えCD5 DI細胞外ドメインを発現および精製する。
好ましい態様において、該増幅断片を適切に消化したpCEP-Puベクターにクローンする(Kohfeldt et al、1997)。
別の好ましい態様において、可溶性ヒト組換えCD5 DI細胞外ドメインの発現はHEK 293-EBNA細胞中である。
最後に、本発明の別の局面は、以下を含む組換え可溶性CD5 DII細胞外ドメインを含む方法に関する：
a)配列番号3および配列番号4のプライマーを用いてDII細胞外ドメインをPCR増幅し、
b)増幅断片を発現ベクターにクローンし、
c)組換えCD5 DII細胞外ドメインを発現および精製する。
a)配列番号3および配列番号4のプライマーを用いてDII細胞外ドメインをPCR増幅し、
b)増幅断片を発現ベクターにクローンし、
c)組換えCD5 DII細胞外ドメインを発現および精製する。
好ましい態様において、該増幅断片を適切に消化したpCEP-Puベクターにクローンする。
別の好ましい態様において、可溶性ヒト組換えCD5 DII細胞外ドメインの発現はHEK 293-EBNA細胞中である。
限定ではなく例示のために以下の実施例に本発明を示す。
ヒトCD5のSRCR細胞外ドメインは全真菌細胞浮遊物と結合する。
ヒトCD5およびCD6リンパ球レセプターの細胞外ドメインの微生物結合特性に関する研究をさらに拡大するために(39)、本発明者らは真菌に対する直接タンパク質結合アッセイを行った。これについて、一定量(15μg)の、ヒトCD5 (rshCD5)またはヒトCD6 (rshCD6)の3つのSRCR細胞外ドメインを含むアフィニティ精製組換え可溶性タンパク質のビオチン標識調製物を4℃で一夜、108個のS. pombe、C. albicans、またはC. neoformans細胞とインキュベーションした。これらrshCD5およびrshCD6タンパク質は、正常ヒト血清中に存在する等価な循環型と区別できない(見掛けの分子量、抗体反応性、および細胞結合特性)ことが以前に示されている(33、39)。徹底的に洗浄した後、タンパク質結合物をLaemmli試料緩衝液で可溶化してSDS/PAGEゲルに流し、さらにホースラディッシュパーオキシダーゼ標識ストレプトアビジン(HRP-SAv)に対してウエスタンブロッティングし、さらに化学ルミネセンスにより発光させた。結果は、rshCD5は試験した腐生(S. pombe)および病原性(C. albicans、C. neoformans)真菌細胞種と結合するが、rsCD6は腐生細菌細胞種とのみ結合することを示した(図1A)。種々の量(1〜20μg)のビオチン標識rshCD5のC. albicansに対する結合は、図1Aに示すように分析した。5mM EDTA存在下の20μgのビオチン標識rshCD5の結合も示す。rshCD5の結合は、用量依存性で飽和可能であることを示し、結合の減少がEDTAの添加後にみられたのでCa2＋により著しく促進された(図1B)。同じタンパク質調製物について108個のグラム陰性(E. coli)またはグラム陽性(S. aureus)細菌との結合を試験すると、以前に報告されたデータに一致してrshCD5について結合はほとんどまたは全くみられなかった(図1C)(39)。これは、CD6とは反対に、CD5の細胞外領域は、細菌細胞壁構造ではなく真菌細胞壁構造の認識に十分適していることを示す。
ヒトCD5およびCD6リンパ球レセプターの細胞外ドメインの微生物結合特性に関する研究をさらに拡大するために(39)、本発明者らは真菌に対する直接タンパク質結合アッセイを行った。これについて、一定量(15μg)の、ヒトCD5 (rshCD5)またはヒトCD6 (rshCD6)の3つのSRCR細胞外ドメインを含むアフィニティ精製組換え可溶性タンパク質のビオチン標識調製物を4℃で一夜、108個のS. pombe、C. albicans、またはC. neoformans細胞とインキュベーションした。これらrshCD5およびrshCD6タンパク質は、正常ヒト血清中に存在する等価な循環型と区別できない(見掛けの分子量、抗体反応性、および細胞結合特性)ことが以前に示されている(33、39)。徹底的に洗浄した後、タンパク質結合物をLaemmli試料緩衝液で可溶化してSDS/PAGEゲルに流し、さらにホースラディッシュパーオキシダーゼ標識ストレプトアビジン(HRP-SAv)に対してウエスタンブロッティングし、さらに化学ルミネセンスにより発光させた。結果は、rshCD5は試験した腐生(S. pombe)および病原性(C. albicans、C. neoformans)真菌細胞種と結合するが、rsCD6は腐生細菌細胞種とのみ結合することを示した(図1A)。種々の量(1〜20μg)のビオチン標識rshCD5のC. albicansに対する結合は、図1Aに示すように分析した。5mM EDTA存在下の20μgのビオチン標識rshCD5の結合も示す。rshCD5の結合は、用量依存性で飽和可能であることを示し、結合の減少がEDTAの添加後にみられたのでCa2＋により著しく促進された(図1B)。同じタンパク質調製物について108個のグラム陰性(E. coli)またはグラム陽性(S. aureus)細菌との結合を試験すると、以前に報告されたデータに一致してrshCD5について結合はほとんどまたは全くみられなかった(図1C)(39)。これは、CD6とは反対に、CD5の細胞外領域は、細菌細胞壁構造ではなく真菌細胞壁構造の認識に十分適していることを示す。
CD5の細胞外領域の3つのSRCRドメイン(CD5.DI、CD5.DII、およびCD5.DIII)のどれが真菌結合、さらに全真菌細胞結合アッセイに関与するかを確認するため、rshCD5の個々の可溶性SRCRドメインを発現するHEK 293-EBNAトランスフェクタント(形質移入体)から得られる細胞培養上清を4℃で一夜108個のC. albicansまたはC. neoformansとインキュベーションした。非結合タンパク質(NB)を洗浄して除去し、10％トリクロロ酢酸(TCA)で沈殿させた。TCAで沈殿する細胞結合(B)タンパク質をSDS-PAGEゲル中で電気泳動し、ウサギポリクローナル抗CD5抗血清＋HRP標識ヒツジ抗ウサギ抗血清を用いてウエスタンブロットで分析し、さらに化学ルミネセンスにより発光させた。図1Dに示すように、CD5の3つすべての個々のSRCR細胞外ドメインが真菌細胞表面と相互作用する能力を保持した。これは、CD5の3つすべてのSRCR細胞外ドメインが共有する保存された構造モチーフが真菌の除去(scavenging)に関与していることを示す。
可溶性CD5細胞外ドメインによる真菌細胞凝集の誘導。
ヒトCD5細胞外ドメイ上の複数の結合部位の存在が真菌の凝集をもたらすか否かを検討するため、FITC標識C. albicans細胞浮遊液を5または10μgの可溶性無標識タンパク質(BSA、rshCD5、およびrshCD6)と4℃で一夜インキュベーションし、次いで、落射蛍光顕微鏡で分析した。この条件下で、rshCD5は用量依存性に真菌細胞凝集をもたらしたが、rsCD6とBSAはいずれもそのような減少をもたらすことができなかった(図2、上段および中段パネル)。同じ結果がC. neoformans 真菌細胞をアッセイしたときにも得られた。興味深いことに、rshCD5誘導真菌細胞凝集は、アッセイを過剰量(20μg)のザイモサン(S. cerevisiae由来)またはβ-グルカン(オオムギ由来)存在下で行うと顕著に減少したがマンナン(S. cerevisiae由来)では減少はみられなかった(図2、下段パネル)。これは、rshCD5による真菌細胞の結合および凝集が特異的であり、真菌細胞壁、例えばβ-グルカンの特定の成分の認識によって仲介されるらしいことを示した。
ヒトCD5細胞外ドメイ上の複数の結合部位の存在が真菌の凝集をもたらすか否かを検討するため、FITC標識C. albicans細胞浮遊液を5または10μgの可溶性無標識タンパク質(BSA、rshCD5、およびrshCD6)と4℃で一夜インキュベーションし、次いで、落射蛍光顕微鏡で分析した。この条件下で、rshCD5は用量依存性に真菌細胞凝集をもたらしたが、rsCD6とBSAはいずれもそのような減少をもたらすことができなかった(図2、上段および中段パネル)。同じ結果がC. neoformans 真菌細胞をアッセイしたときにも得られた。興味深いことに、rshCD5誘導真菌細胞凝集は、アッセイを過剰量(20μg)のザイモサン(S. cerevisiae由来)またはβ-グルカン(オオムギ由来)存在下で行うと顕著に減少したがマンナン(S. cerevisiae由来)では減少はみられなかった(図2、下段パネル)。これは、rshCD5による真菌細胞の結合および凝集が特異的であり、真菌細胞壁、例えばβ-グルカンの特定の成分の認識によって仲介されるらしいことを示した。
可溶性CD5細胞外ドメインの細菌細胞壁ではなく真菌細胞壁の保存成分に対する直接結合。
可溶性ヒトCD5細胞外ドメインの真菌結合能をさらに確認し特徴づけるため、その精製真菌細胞壁調製物に対する直接結合を評価した。これについて、BSA、ザイモサン、LPS、PGN、またはLTAでコートした96ウェルELISAプレートを増加する量(0.01〜2μg)のビオチン標識rshCD5とインキュベーションした。結合タンパク質をHRP-SAvを加えて検出し、さらに３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン液体基質で発光させた。吸光度を450nmで測定した。図1に示す真菌および細菌細胞結合実験によれば、ビオチン標識rshCD5は、ザイモサンでコートした(コート)プレート(S. cerevisiae)と用量依存性に結合したが(図3A、上段)、LPS、LTA、またはPGNでコートしたプレートは結合しなかった(図3A、下段)。並行アッセイにおいて、ビオチン標識rshCD6は、予測通り(39)、LPS、LTA、またはPGNでコートしたプレートと用量依存性に結合した(図3B、下段)。同様な用量依存性がrshCD6についてザイモサンコートプレートに対してみられたが、吸光度値は常にrshCD5について得られるものより低かった(図3Bおよび3A、上段)。これは、細菌細胞壁成分ではなく真菌細胞壁成分の除去におけるヒトCD6細胞外ドメインと比較したヒトCD5細胞外ドメインの適合性に関する上記の記載を強める。
可溶性ヒトCD5細胞外ドメインの真菌結合能をさらに確認し特徴づけるため、その精製真菌細胞壁調製物に対する直接結合を評価した。これについて、BSA、ザイモサン、LPS、PGN、またはLTAでコートした96ウェルELISAプレートを増加する量(0.01〜2μg)のビオチン標識rshCD5とインキュベーションした。結合タンパク質をHRP-SAvを加えて検出し、さらに３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン液体基質で発光させた。吸光度を450nmで測定した。図1に示す真菌および細菌細胞結合実験によれば、ビオチン標識rshCD5は、ザイモサンでコートした(コート)プレート(S. cerevisiae)と用量依存性に結合したが(図3A、上段)、LPS、LTA、またはPGNでコートしたプレートは結合しなかった(図3A、下段)。並行アッセイにおいて、ビオチン標識rshCD6は、予測通り(39)、LPS、LTA、またはPGNでコートしたプレートと用量依存性に結合した(図3B、下段)。同様な用量依存性がrshCD6についてザイモサンコートプレートに対してみられたが、吸光度値は常にrshCD5について得られるものより低かった(図3Bおよび3A、上段)。これは、細菌細胞壁成分ではなく真菌細胞壁成分の除去におけるヒトCD6細胞外ドメインと比較したヒトCD5細胞外ドメインの適合性に関する上記の記載を強める。
さらに競合ELISAアッセイを行って、ヒトCD5細胞外ドメインとの相互作用に関与する真菌細胞壁成分の特異性を検討した。これについて、一定量(2μg)のビオチン標識rshCD5およびrshCD6を、増加する量(0.01〜20μg)の無標識競合物(β-D-グルカン、ザイモサン、マンナン、またはBSA)の存在下または非存在下でザイモサンコートELISAプレートとインキュベーションした。結合タンパク質をHRP-SAvを加えて検出し、さらに３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン液体基質で発光させた。吸光度を450nmで測定した。図2左に示す真菌凝集成績によれば、マンナンではなくβ-D-グルカンおよびザイモサンは、ビオチン標識rshCD5のザイモサンに対する結合に用量依存性に競合することができた(図4A、左)。反対に、同じアッセイをビオチン標識rshCD6を用いて行うと、ザイモサンのみが結合に競合することができた(図4A、右)。
次に、ヒトCD5細胞外ドメインの真菌細胞壁構造物に対する結合と競合する、種々のβ-グルカン含有調製物の能力を分析した。これについて、一定量のビオチン標識rshCD5(15 μg)の全真菌細胞に対する結合は、増加する濃度のオオムギから精製したβ-グルカン、Euglena gracilisから精製したβ-1,3-グルカン、およびS. cerevisiae由来グルカン、ならびにそれぞれ陽性および陰性コントロールとして用いたザイモサンまたはマンナン(共にS. cerevisiae由来)と競合した。徹底的に洗浄した後、結合タンパク質を可溶化し、SDS-PAGEにかけた。ビオチン標識rshCD5の検出は、HRP-SAvを用いるウエスタンブロットにより行い、さらに化学ルミネセンスにより発光させた。図4Bに示すように、用いたすべてのグルカンは、ビオチン標識rshCD5のC .albicansおよびC. neoformans両方の細胞浮遊液に対する結合と用量依存性に競合した。これらの結果は、ヒトCD5細胞外ドメインと真菌との相互作用が真菌細胞壁の高度に保存された豊富な成分であるβ-1,3-グルカンの認識によって仲介されるようであることを示した。
ザイモサンは膜結合CD5と結合し、MAPKカスケードのCD5介在性活性化を誘導する。
次に、本発明者らは、膜結合形のヒトCD5レセプターも真菌細胞壁成分と相互作用することができるか否かを取り上げた。これについて、増加する量のFITC標識ザイモサンの非トランスフェクト(形質移入)2G5細胞またはCD5トランスフェクト2G5細胞(CD5およびCD6の両レセプターの発現欠損について選択したJurkat細胞誘導体)に対する結合が観察された(40)。増加する量(1〜30μg)のFITC標識ザイモサンを、非トランスフェクト2G5 Jurkat細胞、または野生型膜CD5レセプター(2G5-CD5.WT)を発現するトランスフェクト2G5 Jurkat細胞とインキュベーションした。染色細胞の蛍光強度はフローサイトメトリーで分析した。図5Aに示すように、野生型膜結合型のCD5(2G5-CD5.WT)を安定に発現する2G5細胞の蛍光強度は、非トランスフェクト親2G5細胞に比べて高かった。結果のさらなる確認は、一定量のFITC標識ザイモサン(15μg)が増加する量の(1〜30μg)の非標識ザイモサン(S. cerevisiae)、β-D-グルカン(オオムギ)およびマンナン(S. cerevisiae)と競合する2G5-CD5.WT安定トランスフェクタントを用いる競合結合実験から得られた。染色細胞の蛍光強度はフローサイトメトリーで分析した。図5Bに示すように、マンナンではなくβ-グルカンまたはザイモサンは、FITC標識ザイモサンの結合と用量依存性に競合することができた。これらの結果は、rshCD5について得られた結果を確認するものであり、CD5発現細胞が保存された真菌細胞壁成分の存在を感知するであろうことを示す。
次に、本発明者らは、膜結合形のヒトCD5レセプターも真菌細胞壁成分と相互作用することができるか否かを取り上げた。これについて、増加する量のFITC標識ザイモサンの非トランスフェクト(形質移入)2G5細胞またはCD5トランスフェクト2G5細胞(CD5およびCD6の両レセプターの発現欠損について選択したJurkat細胞誘導体)に対する結合が観察された(40)。増加する量(1〜30μg)のFITC標識ザイモサンを、非トランスフェクト2G5 Jurkat細胞、または野生型膜CD5レセプター(2G5-CD5.WT)を発現するトランスフェクト2G5 Jurkat細胞とインキュベーションした。染色細胞の蛍光強度はフローサイトメトリーで分析した。図5Aに示すように、野生型膜結合型のCD5(2G5-CD5.WT)を安定に発現する2G5細胞の蛍光強度は、非トランスフェクト親2G5細胞に比べて高かった。結果のさらなる確認は、一定量のFITC標識ザイモサン(15μg)が増加する量の(1〜30μg)の非標識ザイモサン(S. cerevisiae)、β-D-グルカン(オオムギ)およびマンナン(S. cerevisiae)と競合する2G5-CD5.WT安定トランスフェクタントを用いる競合結合実験から得られた。染色細胞の蛍光強度はフローサイトメトリーで分析した。図5Bに示すように、マンナンではなくβ-グルカンまたはザイモサンは、FITC標識ザイモサンの結合と用量依存性に競合することができた。これらの結果は、rshCD5について得られた結果を確認するものであり、CD5発現細胞が保存された真菌細胞壁成分の存在を感知するであろうことを示す。
ザイモサンの膜結合型CD5に対する結合に関するさらなる証拠は、野生型(2G5-CD5.WT)または細胞質側末端切断(2G5-CD5.K384stop)型のCD5を発現する安定な2G5トランスフェクタントにおけるMAPK情報伝達カスケードのメンバーの活性化から得られた(41)。これについて、2x106個の非トランスフェクトまたはトランスフェクト2G5細胞を37℃で40μg/mlのザイモサンにて種々の時間(0〜30分間)パルスした。次に、細胞溶解物試料をSDS-PAGE中で電気泳動し、ポリクローナルウサギ抗リン酸化ERK1/2(pERK1/2)、モノクローナルマウス抗リン酸化MEK(pMEK)、およびポリクローナルウサギ抗cdk4抗血清(後者はローディングコントロールとして用いる)を用いるウエスタンブロットにより分析した。徹底的に洗浄した後、膜を、それぞれHRP標識ヒツジ抗ウサギまたは抗マウスIg抗血清を用いる化学ルミネセンスにより発光させた。図6Aに示すように、ザイモサンに対する暴露は、非トランスフェクト親2G5細胞ではなく2G5-CD5.WT細胞中でMEKおよびERK1/2両方の時間依存性リン酸化をもたらした。興味深いことに、MEKおよびERK1/2両方のザイモサン誘発リン酸化は、ほとんどC末端88アミノ酸を欠く細胞質側末端切断CD5型を発現する2G5-CD5.K384stopトランスフェクタント(図6A、右)には観察されなかった(41)。これは、2G5細胞中のザイモサンによるMAPKカスケードの活性化がCD5の発現ならびにその細胞質ドメインの完全性に依存することを示す。
ザイモサンはCD5介在性サイトカイン放出を引き起こす。
真菌細胞壁成分の膜結合CD5との結合の生物学的結果をさらに検討するため、本発明者らはその後のサイトカイン放出現象を分析することにした。残念ながら、親2G5細胞および安定なトランスフェクト2G5細胞のいずれを刺激しても、種々の時点で顕著なサイトカイン放出は生じなかった。この不応答性は、高濃度のザイモサンへの暴露後、ならびに抗CD3および抗CD28mAbの組み合わせなどの強力なT細胞特異刺激への暴露後にみられ、2G5細胞のサイトカイン放出の遮断が存在するらしいことを示唆した。
真菌細胞壁成分の膜結合CD5との結合の生物学的結果をさらに検討するため、本発明者らはその後のサイトカイン放出現象を分析することにした。残念ながら、親2G5細胞および安定なトランスフェクト2G5細胞のいずれを刺激しても、種々の時点で顕著なサイトカイン放出は生じなかった。この不応答性は、高濃度のザイモサンへの暴露後、ならびに抗CD3および抗CD28mAbの組み合わせなどの強力なT細胞特異刺激への暴露後にみられ、2G5細胞のサイトカイン放出の遮断が存在するらしいことを示唆した。
これらの観察結果から、膜結合型のCD5は非リンパ系哺乳動物細胞系であるヒト胚腎(HEK)293細胞に発現した。親HEK 293細胞、ならびにザイモサンのよく知られたレセプターであるTLR2を安定に発現するHEK293細胞トランスフェクタントを、野生型(CD5.WT)および細胞質側末端切断(CD5.K384stop)のヒトCD5を発現させるために一時的にトランスフェクトした。次に、細胞を24時間ザイモサン(20μg/ml)に暴露し、細胞培養上清(100μl)中のIL-8濃度をELISAで測定した。図6Bに示すように、CD5.WT発現HEK 293細胞では非トランスフェクト細胞またはCD5.K384stop切断分子を発現する細胞に比べて有意なIL-8放出がみられた。興味深いことに、CD5.WT発現HEK 293細胞で検出されたIL-8レベルは、陽性コントロールとして用いたTLR2発現トランスフェクタントでみられたものと同様であった。さらに、CD5.WTおよびTLR2の同時発現は、ザイモサンに暴露後に相加効果や相乗効果をもたらさなかった。まとめると、これらの結果は、膜結合型のCD5は真菌細胞壁成分の存在を感知し、これがサイトカイン放出を生じる独立した情報伝達カスケードを開始することを示唆する。
可溶性CD5細胞外ドメインの注入は、マウスのザイモサン誘発敗血症性ショック様症候群から保護する。
CD5細胞外ドメインの真菌細胞壁成分との結合に対するさらなるin vivoでの検証は、ザイモサンにより誘発される敗血症性ショック様症候群のマウスモデルから得られた(42)。rshCD5が単高用量のザイモサン(500mg/kg)をi.p.投与後に誘発される全身性炎症および多臓器不全を予防できるか否かを評価した。これらの条件下で、ザイモサンは、18時間以内に急性腹膜炎および臓器損傷と、12日間にわたりマウスの死亡率の増加をもたらした。このために、CD1マウスを以下の群に割り当てた：BSA、BSA(25μg；i.p.)のみを注入されたマウス；BSA＋ZYM、ザイモサン(500mg/kg；i.p.)注入前にBSA(25μg；i.p.)で前処置したマウス；rshCD5＋ZYM、ザイモサン(500mg/kg；i.p.)注入前にrshCD5(25μg；i.p.)で前処置したマウス。図7A-Eに示すように、ザイモサン攻撃の1時間前にマウスに25μgの単回i.p.用量のrshCD5を投与すると、18時間における毒性スコア(図7A)、腹腔の総白血球数(図7B)、IL-6およびIL-1β血漿レベル(図7C)、およびミエロペルオキシダーゼ(MPO)活性により測定した肝臓の好中球浸潤(図7D)の有意な減少をもたらした。別の実験において、マウスの生存をモニターし、コントロールに比べて観察期間(12日間)の終了時の有意な増加(45%対15%)が、ザイモサン攻撃前にrshCD5の単回i.p.用量を投与された動物でみられた(図7E)。まとめると、これらの結果は、rshCD5でマウスを前処置するとザイモサンにより誘発される有害な全身性炎症を予防し、真菌性敗血症性ショックに対するrshCD5の治療的可能性が明らかであることを示す。
材料と方法
CD5細胞外ドメインの真菌細胞壁成分との結合に対するさらなるin vivoでの検証は、ザイモサンにより誘発される敗血症性ショック様症候群のマウスモデルから得られた(42)。rshCD5が単高用量のザイモサン(500mg/kg)をi.p.投与後に誘発される全身性炎症および多臓器不全を予防できるか否かを評価した。これらの条件下で、ザイモサンは、18時間以内に急性腹膜炎および臓器損傷と、12日間にわたりマウスの死亡率の増加をもたらした。このために、CD1マウスを以下の群に割り当てた：BSA、BSA(25μg；i.p.)のみを注入されたマウス；BSA＋ZYM、ザイモサン(500mg/kg；i.p.)注入前にBSA(25μg；i.p.)で前処置したマウス；rshCD5＋ZYM、ザイモサン(500mg/kg；i.p.)注入前にrshCD5(25μg；i.p.)で前処置したマウス。図7A-Eに示すように、ザイモサン攻撃の1時間前にマウスに25μgの単回i.p.用量のrshCD5を投与すると、18時間における毒性スコア(図7A)、腹腔の総白血球数(図7B)、IL-6およびIL-1β血漿レベル(図7C)、およびミエロペルオキシダーゼ(MPO)活性により測定した肝臓の好中球浸潤(図7D)の有意な減少をもたらした。別の実験において、マウスの生存をモニターし、コントロールに比べて観察期間(12日間)の終了時の有意な増加(45%対15%)が、ザイモサン攻撃前にrshCD5の単回i.p.用量を投与された動物でみられた(図7E)。まとめると、これらの結果は、rshCD5でマウスを前処置するとザイモサンにより誘発される有害な全身性炎症を予防し、真菌性敗血症性ショックに対するrshCD5の治療的可能性が明らかであることを示す。
材料と方法
構築物。可溶性タンパク質rshCD5(43)、rshCD5.DIII(5)、およびrshCD6(22)に対する発現構築物の製造は他に記載している。rshCD5の細胞外ドメインDIおよびDIIは、以下のプライマーを用いてPCR増幅した：DIフォワード(配列番号1)およびリバース(配列番号2)。DIIフォワード(配列番号3)およびリバース(配列番号4)。該PCRをNheIおよびBamHIで制限し、適切に消化したpCEP-Puベクター中にクローンした。得られた構築物を以前に記載された様にHEK 293-EBNA細胞中にトランスフェクトした(44、45)。野生型(pHβ-CD5.WT)および細胞質側末端切断(pHβ-CD5.K384STOP)膜結合型のCD5をコードする発現構築物(41)をLipofectamine(登録商標)2000試薬(Invitrogen Life Technologies、Paisley、U.K.)を用い、使用説明書にしたがってHEK 293細胞中に一時的に導入した。
細胞。CD5-およびCD6-陰性2G5細胞をJurkat細胞のセルソーティング、さらにクローニングにより得(40)、次いで37℃、5％CO2で10% FCS(Invitrogen Life Technologies)、100U/mlペニシリンG(Laboratorios ERN、Barcelona、Spain)、および50μg/mlストレプトマイシン(Laboratorios Normon、Madrid、Spain)添加BioWhittaker RPMI 1640培地(Lonza、Verviers、Belgium)中でインキュベーションした。Epstein-Barrウイルスタンパク質EBNA-1を構成的に発現し、pCEP-Puベクターのエピソーム性複製を可能にするヒト胚腎HEK 293-EBNA細胞は、Dr. T. SasakiおよびDr. Timplの好意で分与された(Max Planck Institute for Biochemistry、Martinsried、Germany)。該細胞は、10% FCS、100U/mlペニシリンG、50μg/mlゲンタマイシン、および250μg/mlジェネテシン添加DMEM/F12(G418、Sigma、St Louis、MO)中で増殖させた。HEK 293細胞およびTLR2を安定に発現するHEK 293(HEK 293-TLR2)は、Dr. Golenbock(University of Massachusetts Medical School、Worcester、MA)の好意で分与された。プロマイシン(50μg/mL；Sigma)を、安定なHEK 293-EBNA/pCEP-PuおよびHEK 293-TLR2トランスフェクタントを選択するために培養液に加えた。
組換えタンパク質の発現、アフィニティ精製、およびビオチン標識。すべての組換え可溶性ヒトタンパク質rshCD5、rshCD6、rshCD5.DI、rshCD5.DII、およびrshCD5.DIIIを、エピソーマル発現系のpCEP-Pu/HEK 293-EBNAを用いて発現させた。rshCD5およびrshCD6タンパク質は、特異抗体を用いるアフィニティクロマトグラフィにより培養上清から精製した(22、43)。rshCD5の個々の細胞外ドメインは、成熟タンパク質由来のアミノ酸R1-L113(DI)、A135-F271(DII)、およびF271-D369(DIII)を含み、非分画無血清培養上清として用いた。タンパク質のビオチン化は、EZ-Link PEO-マレイミド活性化ビオチン(Pierce/Perbo Science、Cheshire、U.K.)を使用説明書にしたがって用いて行った。
細菌および真菌結合試験。この試験で用いた細菌株(S.aureusおよびE.coli)および真菌株(C. albicansおよびC. neoformans)は、Department of Microbiology of the Hospital Clinic of Barcelonaが標準的生化学的方法を用いて特徴づけた臨床分離株である。真菌株S. pombeは、Department of Cell Biology and Pathology of the University of Barcelonaの好意で分与された。細菌または真菌を、30〜37℃でLuria Bertoniブロス(LB)中で通気しながら一夜増殖させ、次いで3,500xgで10分間遠心して回収した。細菌または真菌ペレットを、TBS(20mM Tris-HCl、pH7.5、150mM NaCl)に最終密度細菌1010個/mlまたは真菌108個/mlとなるよう再浮遊させた。細菌/真菌希釈液を寒天に播いて定量した。組換え可溶性タンパク質(rshCD5、rshCD6)の結合を先に記載のごとく分析した(14)。
競合アッセイのために15μgのrshCD5を、種々の濃度の、S. cerevisiaeから精製したザイモサン(Sigma)、Euglena gracilis由来β-1-3-グルカン(Sigma)、S. cerevisiae由来グルカン(Sigma)、およびオオムギ由来β-D-グルカン(Sigma)、またはS. cerevisiae由来マンナン(Sigma)と4℃で1時間、前インキュベーションし、次いで細菌または真菌浮遊液とインキュベーションした。rshCD5細胞外ドメインDI、DII、およびDIIIを用いる真菌結合試験は、回転させながら4℃で一夜108個の真菌と1mlの各培養上清をインキュベーションして行った。非結合タンパク質は10％TCA沈殿により評価した。これら試料と結合タンパク質試料をLaemmli試料用緩衝液で可溶化し、SDS-PAGEで電気泳動し、自家製ウサギ抗CD5ポリクローナル抗血清＋HRP標識ヒツジ抗ウサギIg抗血清(DAKO、Carpinteria、CA)を用いるウエスタンブロットにより分析した。
ELISAアッセイ。96ウェルマイクロタイタープレート(Nunc、Roskilde、Denmark)を、コーティング緩衝液(100mM NaHCO3、pH9.5)中の、20μgのLPS(E.coli O55：B5、Sigmaから精製)、リポテイコ酸(LTA；Sigma)、ペプチドグリカン(PGN；Sigma)、またはザイモサン(ZYM；Sigma)と4℃で一夜コートした。プレートを、3％BSA(Sigma)含有PBSで室温(RT)で1時間ブロックした。次に、種々の濃度のビオチン標識BSA、rshCD5、またはrshCD6をウェルに加え、室温で2時間インキュベーションした。結合タンパク質を、室温で1時間、1:2000希釈のHRP標識SAv(Roche Diagnostics GmbH、Mannheim、Germany)を加えて検出した。各インキュベーション工程の間に非結合タンパク質を、PBS 0,01% Tween-20で3回洗浄除去した。ELISAを３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン液体基質(TMB；Sigma)を加えて発光させ、吸光度を450nmで測定した。
競合ELISAアッセイは、ザイモサンコートプレートに加える前に、2μgのビオチン標識rshCD5またはrshCD6を種々の濃度のザイモサン、β-D-グルカン、またはマンナンと4℃で1時間プレインキュベーションする以外は上記のごとく行った。
IL-6およびIL-1βの血清レベルを決定するためのELISAは製造業者のプロトコール(R&D Systems、Minneapolis、MN)に従って行った。
真菌凝集アッセイ。種々の真菌株の蛍光標識は、100mM FITCで室温で1時間インキュベーションすることにより行った。細胞を3,000xgで5分間遠心して回収し、PBSで数回洗浄して非結合FITCを除去した後、真菌を300μl PBSに再浮遊させた。5または10μgのrshCD5またはrshCD6を加え、静かに軌道回転させながら4℃で一夜インキュベーションした。競合のために、10μgのrshCD5またはrshCD6を4℃で1時間、20μgのザイモサン、β-D-グルカン、またはマンナンとプレインキュベーションした。10μlの浮遊液をガラススライドに移し、蛍光顕微鏡(Leica Microsystems、Mannheim、Germany)で可視化した。画像をPhotoshop7.0(Adobe Systems、San Jose、CA)で分析した。
フローサイトメトリー分析。ザイモサンの2G5または2G5-CD5.WT細胞に対する結合は、2x105細胞をブロック用緩衝液(PBS、10%ヒトAB血清、2% FCS、および0.02%アジ化ナトリウム)中の種々の量のFITC標識S. cerevisiae由来ザイモサン(Sigma)とインキュベーションすることにより行った。4℃で1時間インキュベーションした後、細胞をPBS、2%FCS、および0.02%アジ化ナトリウムで洗浄し、次いでFACScan(Becton Dickinson、Mountain View、CA)で分析した。競合アッセイは、種々の量(1〜30μg)の非標識ザイモサン、β-D-グルカン、またはマンナン存在下、2G5-CD5.WT細胞を20μgのFITC標識ザイモサンとインキュベーションして行った。
IL-8サイトカイン放出アッセイ。HEK 293細胞およびTLR2を安定して発現するHEK 293をpHβ-CD5.WTまたはpHβ-CD5.H418STOPで、Lipofectamine(登録商標)2000試薬(Invitrogen)を使用説明書に従って用いてトランスフェクトした。トランスフェクション後24時間で培地を増殖培地(上記参照)に交換した。タンパク質の発現をSDS-PAGEおよびウサギポリクローナル抗CD5抗血清を用いるウエスタンブロットにより評価し、HRP標識ヒツジ抗ウサギ抗血清(DAKO)を用いる化学ルミネセンスにより発光させた。トランスフェクト細胞を20μg/mlのザイモサンで24時間パルスし、上清試料(100μl)を回収し、使用説明書に従ってELISA(BD OptEIA(登録商標)、ヒトIL-8 ELISAセット、BD Biosciencies、San Diego、CA)によりIL-8をアッセイした。
MAPキナーゼアッセイ。刺激のために、2x107 2G5、2G5-CD5.WT、または2G5-CD5.H418STOP細胞をFCS不含RPMI1640培地中で24時間飢餓させた。次に、細胞を37℃で10分間、300μlのRPMI1640培地に浮遊させ、次いで37℃で0、5、15、および30分間、40μg/mlのザイモサンで刺激した。細胞を、溶解用緩衝液(0.5μg/mlアプロチニン、10μg/mlロイペプチン、および1mM PMSF含有50mM Tris-HCl、pH7.6、50mM NaCl、1mM EDTA、および0.1%Triton X-100)中で崩壊させた。細胞抽出物中のタンパク質含有量をBradfordの方法(Bio-Rad Laboratories、Inc. Hercules、CA)により測定し、20〜30μgのタンパク質試料を、SDS-PAGEで分析し、ニトロセルロース膜(Millipore、Bedfore、MA)上に移した。シートを室温で1時間、5%脱脂乳粉末含有TBS-T(20mM Tris-HCl、pH7.5、150mM NaCl、0.05% Tween-20)とインキュベーションし、次いで振盪させながら、4℃で一夜、ウサギポリクローナル抗pERK1/2(sc-101760、1:1000希釈；Santa Cruz Biotechnology、Santa Cruz、CA)、マウスモノクローナル抗pMEK(sc-81503、1:1000希釈、Santa Cruz)、またはウサギポリクローナル抗cdk4(sc-260、1:200希釈；Santa Cruz)抗体でプローブした。TBS-Tで3回洗浄後、膜を室温で45分間、対応するHRP標識ヒツジポリクローナル抗マウスまたは抗ウサギIg抗血清(1:2000希釈；DAKO)とインキュベーションした。それをTBS-Tで3回、TBSで1回洗浄し、Super Signal West Dura Extended Duration基質(Pierce)を用いて化学ルミネセンスを増加させ、次いで、X-OMATフィルム(Kodak、Rochester、NY)に暴露して可視化した。
ザイモサン誘発敗血症性ショック用症候群。体重20〜22gの雄CD1マウス(Charles River、Milan、Italy)に250μlの無菌生理食塩水溶液中のザイモサン(500mg/kg)をi.p.注射した(46)。単回i.p.用量25μgのrshCD5またはBSAをザイモサン攻撃の1時間前に投与した。第3群のマウスには25μgのBSAを前投与した後、同容量の無菌生理食塩水溶液を投与した。ザイモサン攻撃後18時間に全身毒性の臨床的重症度を0〜3の範囲の主観的尺度でスコア付けした(ここで、0＝なし、1＝軽度、2＝中等度、3＝重度)。マウスで観察される各毒性兆候(昏睡、下痢、逆立った毛皮(ruffled fur)、および結膜炎)についてレンジングスケール(ranging scale)を用いた。各群の各毒性兆候値を加えて最終スコアを得た。
腹膜中の総白血球数を評価するため、5mlのPBSを白線を切開して腹腔に注射し、腹腔を10秒間マッサージした後に同量を回収した。自動細胞カウンター(Micros 60、ABX Diagnostics、Montpellier、France)を用いて測定した。肝臓試料を先に記載のごとく(47)ミエロペロキシダーゼ活性(MPO)の評価に用いるまで液体窒素中で凍結した。
各グループの死亡率を12日間にわたりモニターし、生存マウスのパーセンテージで表した。実験方法は、University of Barcelonaの倫理委員会により承認され、スペイン(RD 1201/2005)および欧州(86/609)の規制、およびＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ’ｓ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ（国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関する指針)に適合する実験動物管理ガイドラインに従って行った。
統計分析。結果は平均値±SEMで表す。対応のないt検定を統計的有意差を決定するために用いた。生存はlogrank検定により分析した。p値＜0.05を統計的に有意とみなした。
参考文献
参考文献
1. Janeway, C.A., Jr., and R. Medzhitov. 2002. Innate immune recognition. Annu Rev Immunol 20:197-216.
2. Gordon, S. 2002. Pattern recognition receptors: doubling up for the innate immune response. Cell 111:927-930.
3. Freeman, M., J. Ashkenas, D.J. Rees, D.M. Kingsley, N.G. Copeland, N.A. Jenkins, and M. Krieger. 1990. An ancient, highly conserved family of cysteine-rich protein domains revealed by cloning type I and type II murine macrophage scavenger receptors. Proc Natl Acad Sci U S A 87:8810-8814.
4. Sarrias, M.R., J. Gronlund, O. Padilla, J. Madsen, U. Holmskov, and F. Lozano. 2004. The Scavenger Receptor Cysteine-Rich (SRCR) domain: an ancient and highly conserved protein module of the innate immune system. Crit Rev Immunol 24:1-37.
5. Rodamilans, B., I.G. Munoz, E. Bragado-Nilsson, M.R. Sarrias, O. Padilla, F.J. Blanco, F. Lozano, and G. Montoya. 2007. Crystal structure of the third extracellular domain of CD5 reveals the fold of a group B scavenger cysteine-rich receptor domain. J Biol Chem 282:12669-12677.
6. Liu, Y., and S. Shaw. 2001. The human genome: an immuno-centric view of evolutionary strategies. Trends Immunol 22:227-229.
7. Bodian, D.L., J.E. Skonier, M.A. Bowen, M. Neubauer, A.W. Siadak, A. Aruffo, and J. Bajorath. 1997. Identification of residues in CD6 which are critical for ligand binding. Biochemistry 36:2637-2641.
8. Skonier, J.E., D.L. Bodian, J. Emswiler, M.A. Bowen, A. Aruffo, and J. Bajorath. 1997. Mutational analysis of the CD6 ligand binding domain. Protein Eng 10:943-947.
9. Kristiansen, M., J.H. Graversen, C. Jacobsen, O. Sonne, H.J. Hoffman, S.K. Law, and S.K. Moestrup. 2001. Identification of the haemoglobin scavenger receptor. Nature 409:198-201.
10. Doi, T., K. Higashino, Y. Kurihara, Y. Wada, T. Miyazaki, H. Nakamura, S. Uesugi, T. Imanishi, Y. Kawabe, H. Itakura, and et al. 1993. Charged collagen structure mediates the recognition of negatively charged macromolecules by macrophage scavenger receptors. J Biol Chem 268:2126-2133.
11. Elomaa, O., M. Sankala, T. Pikkarainen, U. Bergmann, A. Tuuttila, A. Raatikainen-Ahokas, H. Sariola, and K. Tryggvason. 1998. Structure of the human macrophage MARCO receptor and characterization of its bacteria-binding region. J Biol Chem 273:4530-4538.
12. Jiang, Y., P. Oliver, K.E. Davies, and N. Platt. 2006. Identification and characterization of murine SCARA5, a novel class A scavenger receptor that is expressed by populations of epithelial cells. J Biol Chem 281:11834-11845.
13. Peiser, L., P.J. Gough, T. Kodama, and S. Gordon. 2000. Macrophage class A scavenger receptor-mediated phagocytosis of Escherichia coli: role of cell heterogeneity, microbial strain, and culture conditions in vitro. Infect Immun 68:1953-1963.
14. Sarrias, M.R., S. Rosello, F. Sanchez-Barbero, J.M. Sierra, J. Vila, J. Yelamos, J. Vives, C. Casals, and F. Lozano. 2005. A role for human Sp alpha as a pattern recognition receptor. J Biol Chem 280:35391-35398.
15. Lecomte, O., J.B. Bock, B.W. Birren, D. Vollrath, and J.R. Parnes. 1996. Molecular linkage of the mouse CD5 and CD6 genes. Immunogenetics 44:385-390.
16. Padilla, O., J. Calvo, J.M. Vila, M. Arman, I. Gimferrer, L. Places, M.T. Arias, M.A. Pujana, J. Vives, and F. Lozano. 2000. Genomic organization of the human CD5 gene. Immunogenetics 51:993-1001.
17. Berland, R., and H.H. Wortis. 2002. Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5. Annu Rev Immunol 20:253-300.
18. Jones, N.H., M.L. Clabby, D.P. Dialynas, H.J. Huang, L.A. Herzenberg, and J.L. Strominger. 1986. Isolation of complementary DNA clones encoding the human lymphocyte glycoprotein T1/Leu-1. Nature 323:346-349.
19. Aruffo, A., M.B. Melnick, P.S. Linsley, and B. Seed. 1991. The lymphocyte glycoprotein CD6 contains a repeated domain structure characteristic of a new family of cell surface and secreted proteins. J Exp Med 174:949-952.
20. Lankester, A.C., G.M. van Schijndel, J.L. Cordell, C.J. van Noesel, and R.A. van Lier. 1994. CD5 is associated with the human B cell antigen receptor complex. Eur J Immunol 24:812-816.
21. Gimferrer, I., M. Farnos, M. Calvo, M. Mittelbrunn, C. Enrich, F. Sanchez-Madrid, J. Vives, and F. Lozano. 2003. The accessory molecules CD5 and CD6 associate on the membrane of lymphoid T cells. J Biol Chem 278:8564-8571.
22. Gimferrer, I., M. Calvo, M. Mittelbrunn, M. Farnos, M.R. Sarrias, C. Enrich, J. Vives, F. Sanchez-Madrid, and F. Lozano. 2004. Relevance of CD6-mediated interactions in T cell activation and proliferation. J Immunol 173:2262-2270.
23. Lozano, F., M. Simarro, J. Calvo, J.M. Vila, O. Padilla, M.A. Bowen, and K.S. Campbell. 2000. CD5 signal transduction: positive or negative modulation of antigen receptor signaling. Crit Rev Immunol 20:347-358.
24. Brossard, C., M. Semichon, A. Trautmann, and G. Bismuth. 2003. CD5 Inhibits Signaling at the Immunological Synapse Without Impairing Its Formation. J Immunol 170:4623-4629.
25. Hassan, N.J., A.N. Barclay, and M.H. Brown. 2004. Frontline: Optimal T cell activation requires the engagement of CD6 and CD166. Eur J Immunol 34:930-940.
26. Zimmerman, A.W., B. Joosten, R. Torensma, J.R. Parnes, F.N. van Leeuwen, and C.G. Figdor. 2006. Long-term engagement of CD6 and ALCAM is essential for T cell proliferation induced by dendritic cells. Blood 107:3212-3120.
27. Raman, C. 2002. CD5, an important regulator of lymphocyte selection and immune tolerance. Immunol Res 26:255-263.
28. Ibanez, A., M.R. Sarrias, M. Farnos, I. Gimferrer, C. Serra-Pages, J. Vives, and F. Lozano. 2006. Mitogen-activated protein kinase pathway activation by the CD6 lymphocyte surface receptor. J Immunol 177:1152-1159.
29. Hassan, N.J., S.J. Simmonds, N.G. Clarkson, S. Hanrahan, M.J. Puklavec, M. Bomb, A.N. Barclay, and M.H. Brown. 2006. CD6 regulates T-cell responses through activation-dependent recruitment of the positive regulator SLP-76. Mol Cell Biol 26:6727-6738.
30. Castro, M.A., M.I. Oliveira, R.J. Nunes, S. Fabre, R. Barbosa, A. Peixoto, M.H. Brown, J.R. Parnes, G. Bismuth, A. Moreira, B. Rocha, and A.M. Carmo. 2007. Extracellular isoforms of CD6 generated by alternative splicing regulate targeting of CD6 to the immunological synapse. J Immunol 178:4351-4361.
31. Van de Velde, H., I. von Hoegen, W. Luo, J.R. Parnes, and K. Thielemans. 1991. The B-cell surface protein CD72/Lyb-2 is the ligand for CD5. Nature 351:662-665.
32. Biancone, L., M.A. Bowen, A. Lim, A. Aruffo, G. Andres, and I. Stamenkovic. 1996. Identification of a novel inducible cell-surface ligand of CD5 on activated lymphocytes. J Exp Med 184:811-819.
33. Calvo, J., L. Places, O. Padilla, J.M. Vila, J. Vives, M.A. Bowen, and F. Lozano. 1999. Interaction of recombinant and natural soluble CD5 forms with an alternative cell surface ligand. Eur J Immunol 29:2119-2129.
34. Pospisil, R., M.G. Fitts, and R.G. Mage. 1996. CD5 is a potential selecting ligand for B cell surface immunoglobulin framework region sequences. J Exp Med 184:1279-1284.
35. Haas, K.M., and D.M. Estes. 2001. The identification and characterization of a ligand for bovine CD5. J Immunol 166:3158-3166.
36. Hohenester, E., T. Sasaki, and R. Timpl. 1999. Crystal structure of a scavenger receptor cysteine-rich domain sheds light on an ancient superfamily. Nat Struct Biol 6:228-232.
37. Calvo, J., L. Places, G. Espinosa, O. Padilla, J.M. Vila, N. Villamor, M. Ingelmo, T. Gallart, J. Vives, J. Font, and F. Lozano. 1999. Identification of a natural soluble form of human CD5. Tissue Antigens 54:128-137.
38. Ramos-Casals, M., J. Font, M. Garcia-Carrasco, J. Calvo, L. Places, O. Padilla, R. Cervera, M.A. Bowen, F. Lozano, and M. Ingelmo. 2001. High circulating levels of soluble scavenger receptors (sCD5 and sCD6) in patients with primary Sjogren's syndrome. Rheumatology (Oxford) 40:1056-1059.
39. Sarrias, M.R., M. Farnos, R. Mota, F. Sanchez-Barbero, A. Ibanez, I. Gimferrer, J. Vera, R. Fenutria, C. Casals, J. Yelamos, and F. Lozano. 2007. CD6 binds to pathogen-associated molecular patterns and protects from LPS-induced septic shock. Proc Natl Acad Sci U S A 104:11724-11729.
40. Simarro, M., C. Pelassy, J. Calvo, L. Places, C. Aussel, and F. Lozano. 1997. The cytoplasmic domain of CD5 mediates both TCR/CD3-dependent and -independent diacylglycerol production. J Immunol 159:4307-4315.
41. Calvo, J., J.M. Vilda, L. Places, M. Simarro, O. Padilla, D. Andreu, K.S. Campbell, C. Aussel, and F. Lozano. 1998. Human CD5 signaling and constitutive phosphorylation of C-terminal serine residues by casein kinase II. J Immunol 161:6022-6029.
42. Genovese, T., R. Di Paola, P. Catalano, J.H. Li, W. Xu, E. Massuda, A.P. Caputi, J. Zhang, and S. Cuzzocrea. 2004. Treatment with a novel poly(ADP-ribose) glycohydrolase inhibitor reduces development of septic shock-like syndrome induced by zymosan in mice. Crit Care Med 32:1365-1374.
43. Sarrias, M.R., O. Padilla, Y. Monreal, M. Carrascal, J. Abian, J. Vives, J. Yelamos, and F. Lozano. 2004. Biochemical characterization of recombinant and circulating human Spalpha. Tissue Antigens 63:335-344.
44. Nischt, R., J. Pottgiesser, T. Krieg, U. Mayer, M. Aumailley, and R. Timpl. 1991. Recombinant expression and properties of the human calcium-binding extracellular matrix protein BM-40. Eur J Biochem 200:529-536.
45. Kohfeldt, E., P. Maurer, C. Vannahme, and R. Timpl. 1997. Properties of the extracellular calcium binding module of the proteoglycan testican. FEBS Lett 414:557-561.
46. Genovese, T., R. Di Paola, P. Catalano, J.H. Li, W. Xu, E. Massuda, A.P. Caputi, J. Zhang, and S. Cuzzocrea. 2004. Treatment with a novel poly(ADP-ribose) glycohydrolase inhibitor reduces development of septic shock-like syndrome induced by zymosan in mice. Crit Care Med 32:1365-1374.
47. Mota, R.A., D. Hernandez-Espinosa, L. Galbis-Martinez, A. Ordonez, A. Minano, P. Parrilla, V. Vicente, J. Corral, and J. Yelamos. 2008. Poly (ADP-ribose) polymerase-1 inhibition increases expression of heat shock proteins and attenuates heat stroke-induced liver injury. Crit Care Med 36: 526-534
48. Santoni G. et al: “Immune cell−mediated protection against vaginal candidiasis: evidence for a major role of vaginal CD4+ T cells and possible participation of other local lymphocyte effectors” Infect. Immun. Vol. 70(9), (2002):4791-4797
49. Levitz S.M. et al: “Phenotypic and functional characterization of human lymphocytes activated by interleukin 2 to directly inhibit growth of Cryptococcus neoformans in vitro” J. Clini. Invest. (1993) Viol.91: 1490−1498
2. Gordon, S. 2002. Pattern recognition receptors: doubling up for the innate immune response. Cell 111:927-930.
3. Freeman, M., J. Ashkenas, D.J. Rees, D.M. Kingsley, N.G. Copeland, N.A. Jenkins, and M. Krieger. 1990. An ancient, highly conserved family of cysteine-rich protein domains revealed by cloning type I and type II murine macrophage scavenger receptors. Proc Natl Acad Sci U S A 87:8810-8814.
4. Sarrias, M.R., J. Gronlund, O. Padilla, J. Madsen, U. Holmskov, and F. Lozano. 2004. The Scavenger Receptor Cysteine-Rich (SRCR) domain: an ancient and highly conserved protein module of the innate immune system. Crit Rev Immunol 24:1-37.
5. Rodamilans, B., I.G. Munoz, E. Bragado-Nilsson, M.R. Sarrias, O. Padilla, F.J. Blanco, F. Lozano, and G. Montoya. 2007. Crystal structure of the third extracellular domain of CD5 reveals the fold of a group B scavenger cysteine-rich receptor domain. J Biol Chem 282:12669-12677.
6. Liu, Y., and S. Shaw. 2001. The human genome: an immuno-centric view of evolutionary strategies. Trends Immunol 22:227-229.
7. Bodian, D.L., J.E. Skonier, M.A. Bowen, M. Neubauer, A.W. Siadak, A. Aruffo, and J. Bajorath. 1997. Identification of residues in CD6 which are critical for ligand binding. Biochemistry 36:2637-2641.
8. Skonier, J.E., D.L. Bodian, J. Emswiler, M.A. Bowen, A. Aruffo, and J. Bajorath. 1997. Mutational analysis of the CD6 ligand binding domain. Protein Eng 10:943-947.
9. Kristiansen, M., J.H. Graversen, C. Jacobsen, O. Sonne, H.J. Hoffman, S.K. Law, and S.K. Moestrup. 2001. Identification of the haemoglobin scavenger receptor. Nature 409:198-201.
10. Doi, T., K. Higashino, Y. Kurihara, Y. Wada, T. Miyazaki, H. Nakamura, S. Uesugi, T. Imanishi, Y. Kawabe, H. Itakura, and et al. 1993. Charged collagen structure mediates the recognition of negatively charged macromolecules by macrophage scavenger receptors. J Biol Chem 268:2126-2133.
11. Elomaa, O., M. Sankala, T. Pikkarainen, U. Bergmann, A. Tuuttila, A. Raatikainen-Ahokas, H. Sariola, and K. Tryggvason. 1998. Structure of the human macrophage MARCO receptor and characterization of its bacteria-binding region. J Biol Chem 273:4530-4538.
12. Jiang, Y., P. Oliver, K.E. Davies, and N. Platt. 2006. Identification and characterization of murine SCARA5, a novel class A scavenger receptor that is expressed by populations of epithelial cells. J Biol Chem 281:11834-11845.
13. Peiser, L., P.J. Gough, T. Kodama, and S. Gordon. 2000. Macrophage class A scavenger receptor-mediated phagocytosis of Escherichia coli: role of cell heterogeneity, microbial strain, and culture conditions in vitro. Infect Immun 68:1953-1963.
14. Sarrias, M.R., S. Rosello, F. Sanchez-Barbero, J.M. Sierra, J. Vila, J. Yelamos, J. Vives, C. Casals, and F. Lozano. 2005. A role for human Sp alpha as a pattern recognition receptor. J Biol Chem 280:35391-35398.
15. Lecomte, O., J.B. Bock, B.W. Birren, D. Vollrath, and J.R. Parnes. 1996. Molecular linkage of the mouse CD5 and CD6 genes. Immunogenetics 44:385-390.
16. Padilla, O., J. Calvo, J.M. Vila, M. Arman, I. Gimferrer, L. Places, M.T. Arias, M.A. Pujana, J. Vives, and F. Lozano. 2000. Genomic organization of the human CD5 gene. Immunogenetics 51:993-1001.
17. Berland, R., and H.H. Wortis. 2002. Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5. Annu Rev Immunol 20:253-300.
18. Jones, N.H., M.L. Clabby, D.P. Dialynas, H.J. Huang, L.A. Herzenberg, and J.L. Strominger. 1986. Isolation of complementary DNA clones encoding the human lymphocyte glycoprotein T1/Leu-1. Nature 323:346-349.
19. Aruffo, A., M.B. Melnick, P.S. Linsley, and B. Seed. 1991. The lymphocyte glycoprotein CD6 contains a repeated domain structure characteristic of a new family of cell surface and secreted proteins. J Exp Med 174:949-952.
20. Lankester, A.C., G.M. van Schijndel, J.L. Cordell, C.J. van Noesel, and R.A. van Lier. 1994. CD5 is associated with the human B cell antigen receptor complex. Eur J Immunol 24:812-816.
21. Gimferrer, I., M. Farnos, M. Calvo, M. Mittelbrunn, C. Enrich, F. Sanchez-Madrid, J. Vives, and F. Lozano. 2003. The accessory molecules CD5 and CD6 associate on the membrane of lymphoid T cells. J Biol Chem 278:8564-8571.
22. Gimferrer, I., M. Calvo, M. Mittelbrunn, M. Farnos, M.R. Sarrias, C. Enrich, J. Vives, F. Sanchez-Madrid, and F. Lozano. 2004. Relevance of CD6-mediated interactions in T cell activation and proliferation. J Immunol 173:2262-2270.
23. Lozano, F., M. Simarro, J. Calvo, J.M. Vila, O. Padilla, M.A. Bowen, and K.S. Campbell. 2000. CD5 signal transduction: positive or negative modulation of antigen receptor signaling. Crit Rev Immunol 20:347-358.
24. Brossard, C., M. Semichon, A. Trautmann, and G. Bismuth. 2003. CD5 Inhibits Signaling at the Immunological Synapse Without Impairing Its Formation. J Immunol 170:4623-4629.
25. Hassan, N.J., A.N. Barclay, and M.H. Brown. 2004. Frontline: Optimal T cell activation requires the engagement of CD6 and CD166. Eur J Immunol 34:930-940.
26. Zimmerman, A.W., B. Joosten, R. Torensma, J.R. Parnes, F.N. van Leeuwen, and C.G. Figdor. 2006. Long-term engagement of CD6 and ALCAM is essential for T cell proliferation induced by dendritic cells. Blood 107:3212-3120.
27. Raman, C. 2002. CD5, an important regulator of lymphocyte selection and immune tolerance. Immunol Res 26:255-263.
28. Ibanez, A., M.R. Sarrias, M. Farnos, I. Gimferrer, C. Serra-Pages, J. Vives, and F. Lozano. 2006. Mitogen-activated protein kinase pathway activation by the CD6 lymphocyte surface receptor. J Immunol 177:1152-1159.
29. Hassan, N.J., S.J. Simmonds, N.G. Clarkson, S. Hanrahan, M.J. Puklavec, M. Bomb, A.N. Barclay, and M.H. Brown. 2006. CD6 regulates T-cell responses through activation-dependent recruitment of the positive regulator SLP-76. Mol Cell Biol 26:6727-6738.
30. Castro, M.A., M.I. Oliveira, R.J. Nunes, S. Fabre, R. Barbosa, A. Peixoto, M.H. Brown, J.R. Parnes, G. Bismuth, A. Moreira, B. Rocha, and A.M. Carmo. 2007. Extracellular isoforms of CD6 generated by alternative splicing regulate targeting of CD6 to the immunological synapse. J Immunol 178:4351-4361.
31. Van de Velde, H., I. von Hoegen, W. Luo, J.R. Parnes, and K. Thielemans. 1991. The B-cell surface protein CD72/Lyb-2 is the ligand for CD5. Nature 351:662-665.
32. Biancone, L., M.A. Bowen, A. Lim, A. Aruffo, G. Andres, and I. Stamenkovic. 1996. Identification of a novel inducible cell-surface ligand of CD5 on activated lymphocytes. J Exp Med 184:811-819.
33. Calvo, J., L. Places, O. Padilla, J.M. Vila, J. Vives, M.A. Bowen, and F. Lozano. 1999. Interaction of recombinant and natural soluble CD5 forms with an alternative cell surface ligand. Eur J Immunol 29:2119-2129.
34. Pospisil, R., M.G. Fitts, and R.G. Mage. 1996. CD5 is a potential selecting ligand for B cell surface immunoglobulin framework region sequences. J Exp Med 184:1279-1284.
35. Haas, K.M., and D.M. Estes. 2001. The identification and characterization of a ligand for bovine CD5. J Immunol 166:3158-3166.
36. Hohenester, E., T. Sasaki, and R. Timpl. 1999. Crystal structure of a scavenger receptor cysteine-rich domain sheds light on an ancient superfamily. Nat Struct Biol 6:228-232.
37. Calvo, J., L. Places, G. Espinosa, O. Padilla, J.M. Vila, N. Villamor, M. Ingelmo, T. Gallart, J. Vives, J. Font, and F. Lozano. 1999. Identification of a natural soluble form of human CD5. Tissue Antigens 54:128-137.
38. Ramos-Casals, M., J. Font, M. Garcia-Carrasco, J. Calvo, L. Places, O. Padilla, R. Cervera, M.A. Bowen, F. Lozano, and M. Ingelmo. 2001. High circulating levels of soluble scavenger receptors (sCD5 and sCD6) in patients with primary Sjogren's syndrome. Rheumatology (Oxford) 40:1056-1059.
39. Sarrias, M.R., M. Farnos, R. Mota, F. Sanchez-Barbero, A. Ibanez, I. Gimferrer, J. Vera, R. Fenutria, C. Casals, J. Yelamos, and F. Lozano. 2007. CD6 binds to pathogen-associated molecular patterns and protects from LPS-induced septic shock. Proc Natl Acad Sci U S A 104:11724-11729.
40. Simarro, M., C. Pelassy, J. Calvo, L. Places, C. Aussel, and F. Lozano. 1997. The cytoplasmic domain of CD5 mediates both TCR/CD3-dependent and -independent diacylglycerol production. J Immunol 159:4307-4315.
41. Calvo, J., J.M. Vilda, L. Places, M. Simarro, O. Padilla, D. Andreu, K.S. Campbell, C. Aussel, and F. Lozano. 1998. Human CD5 signaling and constitutive phosphorylation of C-terminal serine residues by casein kinase II. J Immunol 161:6022-6029.
42. Genovese, T., R. Di Paola, P. Catalano, J.H. Li, W. Xu, E. Massuda, A.P. Caputi, J. Zhang, and S. Cuzzocrea. 2004. Treatment with a novel poly(ADP-ribose) glycohydrolase inhibitor reduces development of septic shock-like syndrome induced by zymosan in mice. Crit Care Med 32:1365-1374.
43. Sarrias, M.R., O. Padilla, Y. Monreal, M. Carrascal, J. Abian, J. Vives, J. Yelamos, and F. Lozano. 2004. Biochemical characterization of recombinant and circulating human Spalpha. Tissue Antigens 63:335-344.
44. Nischt, R., J. Pottgiesser, T. Krieg, U. Mayer, M. Aumailley, and R. Timpl. 1991. Recombinant expression and properties of the human calcium-binding extracellular matrix protein BM-40. Eur J Biochem 200:529-536.
45. Kohfeldt, E., P. Maurer, C. Vannahme, and R. Timpl. 1997. Properties of the extracellular calcium binding module of the proteoglycan testican. FEBS Lett 414:557-561.
46. Genovese, T., R. Di Paola, P. Catalano, J.H. Li, W. Xu, E. Massuda, A.P. Caputi, J. Zhang, and S. Cuzzocrea. 2004. Treatment with a novel poly(ADP-ribose) glycohydrolase inhibitor reduces development of septic shock-like syndrome induced by zymosan in mice. Crit Care Med 32:1365-1374.
47. Mota, R.A., D. Hernandez-Espinosa, L. Galbis-Martinez, A. Ordonez, A. Minano, P. Parrilla, V. Vicente, J. Corral, and J. Yelamos. 2008. Poly (ADP-ribose) polymerase-1 inhibition increases expression of heat shock proteins and attenuates heat stroke-induced liver injury. Crit Care Med 36: 526-534
48. Santoni G. et al: “Immune cell−mediated protection against vaginal candidiasis: evidence for a major role of vaginal CD4+ T cells and possible participation of other local lymphocyte effectors” Infect. Immun. Vol. 70(9), (2002):4791-4797
49. Levitz S.M. et al: “Phenotypic and functional characterization of human lymphocytes activated by interleukin 2 to directly inhibit growth of Cryptococcus neoformans in vitro” J. Clini. Invest. (1993) Viol.91: 1490−1498
Claims (18)
- 可溶性CD5細胞外ドメインおよび少なくとも1の医薬的賦形剤を含む医薬組成物。
- 注射可能形の請求項1記載の組成物。
- 真菌感染および/または真菌敗血症および/または真菌成分によって引き起こされるあらゆる炎症性疾患を予防および/または治療するための請求項1または2に記載の組成物。
- 該感染および/または敗血症および/または該炎症性疾患がCandida albicansまたはCriptococcus neoformansによって引き起こされる請求項1記載の組成物。
- β-グルカンを結合および/または認識するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用。
- 真菌細胞および/またはβ-グルカンリッチ真菌細胞壁成分を凝集させるための可溶性CD5細胞外ドメインの使用。
- 真菌感染および/または真菌敗血症および/または真菌成分によって引き起こされるあらゆる炎症性疾患を予防および/または治療するための医薬を製造するための可溶性CD5細胞外ドメインの使用。
- 該感染および/または敗血症および/または該炎症性疾患がCandida albicansまたはCriptococcus neoformansによって引き起こされる請求項7記載の使用。
- 以下を含む組換え可溶性ヒトCD5 DI細胞外ドメインを得る方法：
a) 配列番号1および配列番号2の配列のプライマーを用いてDI細胞外ドメインをPCR増幅、
b) 増幅した断片を発現ベクター内にクローニング、および
c) 可溶性ヒト組み換えCD5 DI細胞外ドメインを発現および精製。 - 発現ベクターがpCEP-Puである請求項9記載の方法。
- 可溶性ヒト組換えCD5 DI細胞外ドメインがHEK 293-EBNA細胞中で発現する請求項10記載の方法。
- 以下を含む組換え可溶性CD5 DII細胞外ドメインを得る方法：
a) 配列番号3および配列番号4の配列のプライマーを用いてDII細胞外ドメインをPCR増幅、
b) 増幅した断片を発現ベクター内にクローニング、および
c) 組換えCD5 DII細胞外ドメインを発現および精製。 - 発現ベクターがpCEP-Puである請求項12記載の方法。
- 可溶性ヒト組換えCD5 DII細胞外ドメインがHEK 293-EBNA細胞中で発現する請求項13記載の方法。
- 配列番号1で示される配列を有するオリゴヌクレオチド。
- 配列番号2で示される配列を有するオリゴヌクレオチド。
- 配列番号3で示される配列を有するオリゴヌクレオチド。
- 配列番号4で示される配列を有するオリゴヌクレオチド。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200801860A ES2336752B1 (es) | 2008-06-20 | 2008-06-20 | Composiciones farmaceuticas de cd5. |
| ESP200801860 | 2008-06-20 | ||
| PCT/EP2009/057649 WO2009153336A1 (en) | 2008-06-20 | 2009-06-19 | Cd5 pharmaceutical compositions for the treatment of infectious and inflammatory processes of fungal origin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2011524747A true JP2011524747A (ja) | 2011-09-08 |
Family
ID=41165160
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2011514054A Pending JP2011524747A (ja) | 2008-06-20 | 2009-06-19 | 真菌起源の感染および炎症プロセスを治療するためのｃｄ５医薬組成物 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8404633B2 (ja) |
| EP (1) | EP2307043B1 (ja) |
| JP (1) | JP2011524747A (ja) |
| CA (1) | CA2728496A1 (ja) |
| ES (2) | ES2336752B1 (ja) |
| WO (1) | WO2009153336A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2143436B1 (en) * | 2007-03-28 | 2015-07-29 | Universidad de Barcelona | Cd6 product for treatment of infectious diseases and related inflammatory processes |
| US9445582B2 (en) | 2011-05-26 | 2016-09-20 | Fundacio Clinic Per A La Recerca Biomedica | Soluble protein CD5 or CD6 for the treatment of cancer or tumor or for use as an adjuvant |
| JP2019535834A (ja) * | 2016-11-18 | 2019-12-12 | ユニベルシタ デ バルセロナ | 感染症及び関連炎症プロセスの処置のためのｃｄ６及びイミペネムの併用療法 |
-
2008
- 2008-06-20 ES ES200801860A patent/ES2336752B1/es not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-06-19 EP EP09765915.5A patent/EP2307043B1/en active Active
- 2009-06-19 WO PCT/EP2009/057649 patent/WO2009153336A1/en active Application Filing
- 2009-06-19 ES ES09765915T patent/ES2429426T3/es active Active
- 2009-06-19 CA CA2728496A patent/CA2728496A1/en not_active Abandoned
- 2009-06-19 US US13/000,005 patent/US8404633B2/en active Active
- 2009-06-19 JP JP2011514054A patent/JP2011524747A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JPN5011006589; ＣＡＬＶＯ ＪＡＶＩＥＲ: 'ＩＮＴＥＲＡＣＴＩＯＮ ＯＦ ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴ ＡＮＤ ＮＡＴＵＲＡＬ ＳＯＬＵＢＬＥ ＣＤ５ ＦＯＲＭＳ ＷＩＴＨ ＡＮ ＡＬＴＥＲＮＡＴＩＶＥ ＣＥＬＬ ＳＵＲＦＡＣＥ ＬＩＧＡＮＤ' ＥＵＲＯＰＥＡＮ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ Ｖ２９ Ｎ７, 199907, Ｐ２１１９-２１２９ * |
| JPN5011006590; ＣＡＬＶＯ Ｊ: 'ＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ Ａ ＮＡＴＵＲＡＬ ＳＯＬＵＢＬＥ ＦＯＲＭ ＯＦ ＨＵＭＡＮ ＣＤ５' ＴＩＳＳＵＥ ＡＮＴＩＧＥＮＳ Ｖ５４ Ｎ２, 19990801, Ｐ１２８-１３７ * |
| JPN6013014688; ＪＩ，Ｖｏｌ．１７３（２００４）ｐ．２９２８-２９３２ * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2728496A1 (en) | 2009-12-23 |
| EP2307043B1 (en) | 2013-06-12 |
| EP2307043A1 (en) | 2011-04-13 |
| WO2009153336A1 (en) | 2009-12-23 |
| ES2336752B1 (es) | 2011-05-11 |
| US8404633B2 (en) | 2013-03-26 |
| ES2336752A1 (es) | 2010-04-15 |
| US20110195894A1 (en) | 2011-08-11 |
| ES2429426T3 (es) | 2013-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20200254058A1 (en) | Therapeutic trem-1 peptides | |
| Lacruz et al. | Diseases caused by mutations in ORAI1 and STIM1 | |
| Schaefer et al. | Absence of decorin adversely influences tubulointerstitial fibrosis of the obstructed kidney by enhanced apoptosis and increased inflammatory reaction | |
| Brandt et al. | Role of the complement membrane attack complex (C5b-9) in mediating experimental mesangioproliferative glomerulonephritis | |
| CN104619352B (zh) | 含有hc-ha/ptx3复合物的组合物及其使用方法 | |
| DE60219801T3 (de) | KOMPLEMENT-INHIBITOREN DIE AN C5 UND C5a BINDEN OHNE DIE BILDUNG VON C5b ZU HEMMEN | |
| Huber-Lang et al. | Changes in the novel orphan, C5a receptor (C5L2), during experimental sepsis and sepsis in humans | |
| Nolan et al. | Mechanisms of ANCA-mediated leukocyte-endothelial cell interactions in vivo | |
| DE60038675T2 (de) | Rekombinantes plättchenkollagenrezeptorglykoprotein und dessen pharmazeutische verwendung | |
| Brun et al. | Effects of calprotectin in avridine‐induced arthritis | |
| DE60004015T2 (de) | Inhibitoren für homöostase und immunfunktion | |
| JP2011524747A (ja) | 真菌起源の感染および炎症プロセスを治療するためのｃｄ５医薬組成物 | |
| CN101516910A (zh) | Bst2抑制剂的作用 | |
| EP2143436B1 (en) | Cd6 product for treatment of infectious diseases and related inflammatory processes | |
| CN108368155A (zh) | 人源性免疫抑制蛋白和肽作为药物的应用 | |
| DE69836679T2 (de) | Peptide zur behandlung des systemischen lupus erythematosus | |
| DE60028407T2 (de) | Proteine und für diese kodierende dna | |
| Tesař et al. | Recent progress in the pathogenesis of nephrotic proteinuria | |
| DE202006007499U1 (de) | Verwendung einer Zusammensetzung, die Plexin-A1-DAP12-Interaktion inhibiert, zur Behandlung von Entzündungs-, Autoimmun- oder Knochenresorptionserkrankungen | |
| US20210364500A1 (en) | Rat Model of IgA Nephropathy Induced with a Multimeric Recombinant IgA Fragment | |
| Kastner et al. | Periodic fever syndromes | |
| Jiang et al. | Intrapulmonary expression of scavenger receptor and CD14 and their relation to local inflammatory responses to endotoxemia in mice | |
| DE102018120016B4 (de) | Modulatoren der Funktion von Faktor H-verwandtem Protein 1 und deren Verwendungen in der Kontrolle von Entzündung | |
| Lösch | [How do antibodies get into the chicken egg?][Article in German] | |
| EP2011515A1 (de) | Verwendung von Antagonisten von G Protein gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130402 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130626 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130703 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20131008 |