JP2011506334A - 免疫応答を誘導するための組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、とりわけ、（ａ）第１の抗原と、（ｂ）少なくとも第１および第２のアジュバントと（ｃ）医薬的に許容できる賦形剤とを含む免疫原性組成物を提供し、ここで第１のアジュバントは微粒子を含み、第２のアジュバントはイミダゾキノリン化合物を含み、この組成物は脊椎動物対象に投与されるときに免疫応答を誘発する。本発明は、免疫原性組成物を生成する方法および（例、処置のために）免疫原性組成物を使用する方法、その他の利益をも提供する。

Description

本発明は一般的に免疫原性組成物に関し、加えて１つまたはそれ以上の選択された抗原の免疫応答を惹起する薬剤に関する。

組換えＤＮＡ技術によって作成されるサブユニットワクチンの出現によって、安全かつ有効なアジュバント含有組成物に対する要求が強くなった。サブユニットワクチンは、安全性および生産コストの観点からは伝統的な生ワクチンおよび死滅ワクチンよりも顕著な利点を提供するが、一般的に免疫系に単離ポリペプチドまたは単離ポリペプチドの混合物を与えるために、たとえばウイルス全体、バクテリアおよびその他の微生物などに比べて免疫原性が制限される。その結果、これらのワクチンは一般的に免疫賦活性能力を有するアジュバントの利益を得ており、アジュバントはワクチンが疾患の処置における最大能力に達するのを助ける。

他方で、伝統的な生ワクチンは通常アジュバントを必要としない。さらに、死滅ワクチンは一般的にサブユニットワクチンよりも免疫原性であり、通常アジュバントを必要としない。それにもかかわらず、これらのワクチンもサブユニットワクチンと同様に免疫賦活性能力を有するアジュバントの利益を得ることができる。

本発明は免疫原性組成物を提供し、この免疫原性組成物は（ａ）第１の抗原と、（ｂ）少なくとも第１および第２のアジュバントとを含み、ここで第１のアジュバントは微粒子を含み、第２のアジュバントはイミダゾキノリン化合物を含み、この免疫原性組成物はさらに（ｃ）医薬的に許容できる賦形剤を含み、この組成物は脊椎動物対象に投与されるときに免疫応答を誘発する。

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の免疫原性組成物を含む医薬組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明に従った免疫原性組成物を含む注射可能なワクチン組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は免疫原性組成物を調製するためのキットを提供し、このキットは抗原を含む第１の容器と、イミダゾキノリン化合物を含む第２の容器と、微粒子を含む第３の容器とを含むか、または抗原を含む第１の容器と、イミダゾキノリン化合物および微粒子を含む第２の容器とを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は脊椎動物対象において免疫応答を誘発するための方法を提供し、この方法は、本発明に従った免疫原性組成物の有効量を脊椎動物対象に投与するステップを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は脊椎動物対象において細胞障害性Ｔリンパ球（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ−Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ：ＣＴＬ）応答を誘発するための方法を提供し、この方法は、本発明の免疫原性組成物の有効量を脊椎動物対象に投与するステップを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は脊椎動物対象個体において抗体の介在する免疫応答を誘発する方法を提供し、この方法は、本発明の免疫原性組成物の有効量を脊椎動物対象に投与するステップを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載されるものなどの免疫原性組成物を作成する方法を提供する。

本明細書の開示に鑑みて、通常の当業者は本発明のこれらの実施形態およびその他の実施形態を容易に考え付くであろう。

４つの異なる製剤からのイミダゾキノリン０９０放出を時間の関数として示す図である。

本発明の実施には、別様に示されない限り、当該技術の範囲内のウイルス学、化学、生化学、組換え技術、免疫学および薬理学の従来の方法が使用される。こうした技術は文献において十分に説明されている。たとえば、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編，１９９６）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ．Ｋａｐｌａｎ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版，１９８９）；およびＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編）などを参照されたい。

Ａ．定義
本明細書において用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その内容が明らかに別様を示さない限り、複数の言及を含む。

本明細書において用いられる「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、値の＋／−１０％を示す。

本明細書において用いられる「注射可能な組成物」という語句またはその変形は、脊椎動物対象への注射のために好適な医薬的に許容できる組成物を示し、この組成物は典型的に無菌であり、発熱物質を含まず、注射に好適な特定のｐＨおよび等張性の値を有する。

「医薬的に許容できる」または「薬理的に許容できる」とは、生物学的または別様に望ましくないものではない材料を意味し、たとえばその材料はいかなる望ましくない生物学的影響ももたらすことも、その材料が含まれている組成物のいずれかの構成要素と有害な態様で相互作用することもなく個体に投与されてもよい。

「脊椎動物対象」とは、限定なしに以下を含む脊索動物亜門のあらゆるメンバーを意味する：ヒトおよびその他の霊長類、たとえばチンパンジーならびにその他の類人猿およびサルの種などのヒト以外の霊長類を含む；家畜、たとえばウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマなど；家庭用の哺乳動物、たとえばイヌおよびネコなど；マウス、ラットおよびモルモットなどの齧歯動物を含む実験動物；家庭用のトリ、野生のトリおよび猟鳥を含む鳥類、たとえばニワトリ、シチメンチョウおよびその他の家禽のトリ、カモ、ガチョウなど。この用語は特定の年齢を示すものではない。よって成体および新生の個体の両方がカバーされることが意図される。

「生理的ｐＨ」または「生理的範囲のｐＨ」とは、約７．２から８．０を含む範囲、より典型的には約７．２から７．６を含む範囲のｐＨを意味する。

本明細書において用いられる「処置」とは、（ｉ）問題（たとえば癌または病原性の感染症、伝統的なワクチンの場合と同様）の状態（例、疾患または障害）の予防、（ｉｉ）問題の状態に関連する症状の低減または除去、および（ｉｉｉ）問題の状態の実質的または完全な除去のうちのいずれかを示す。処置は予防的（問題の状態の出現前）にもたらされても、治療的（問題の状態の出現後）にもたらされてもよい。

本明細書において、本発明の免疫原性組成物の「有効量」または「医薬的に有効な量」という用語は、目的とする状態の処置または診断のための免疫原性組成物の十分量を示す。必要とされる正確な量は、たとえば以下の因子などに依存して対象ごとに変動する：対象の種、年齢および全身状態；処置される状態の深刻度；目的とする特定の抗原；免疫学的応答の場合には、たとえば対象の免疫系が抗体を合成する能力および所望の保護の程度；ならびに投与のモード、その他の因子。あらゆる個別の場合における適切な「有効」量は、通常の当業者によって決定され得る。よって「治療的に有効な量」は典型的に、ルーチン試験を通じて決定できる比較的広い範囲内になる。

本明細書において用いられる「微粒子」という用語は、直径が約１０ｎｍ以下から約１５０μｍ、たとえば１０ｎｍから２５ｎｍから５０ｎｍから１００ｎｍから２５０ｎｍから５００ｎｍから１μｍから２．５μｍから５μｍから１０μｍから２５μｍから５０μｍから１００μｍから１５０μｍの範囲の粒子を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される微粒子は一般的に球形であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される微粒子は不規則な外形であり得る。

本明細書において用いられる「タンパク質粒子」という用語は少なくとも５０ｗｔ％のタンパク質を含む粒子を示し、「多糖粒子」という用語は少なくとも５０ｗｔ％の多糖を含む粒子を示し、他も同様である。

いくつかの状況下では、微粒子が凝集してより大きな塊になることがある。特定の例として、ＤＮＡが吸着された微粒子は、たとえば凍結乾燥前に直径が約０．５〜２μｍであってもよいが、凍結乾燥後には同じ粒子がたとえば直径約５〜１５μｍの凝集体になっていてもよい。微粒子は一般的に、針および毛細管を塞ぐことなく非経口または粘膜投与を可能にするような直径である。微粒子のサイズは、たとえば光子相関分光法、レーザー回折法および／または走査電子顕微鏡法などの、当該技術分野において周知の技術によって容易に決定される。本明細書において定義される微粒子を示すために「粒子」という用語も用いられることがある。

「ポリペプチド」という用語はアミノ酸残基のポリマーを示し、生成物の最小の長さに制限されない。よって、全長タンパク質、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などがこの定義に含まれる。

「ポリペプチド含有種」とは、少なくともその一部がポリペプチドであるような分子のことである。その例には、ポリペプチド、糖タンパク質、金属タンパク質およびリポタンパク質を含むタンパク質、担体タンパク質に結合体化された多糖抗原などが含まれる。本発明において用いるためのタンパク質は、全長タンパク質およびその断片を含む。特定の実施形態においては、天然の配列に対する変更、たとえば欠失、付加および置換など（一般的に性質は保存される）が用いられる。

本明細書において用いられる「断片」という用語は、生体分子の一次構造の物理的に連続した部分を示す。タンパク質の場合には、断片はそのタンパク質のアミノ酸配列の連続した部分によって定義されてもよく、少なくとも３〜５アミノ酸、少なくとも６〜１０アミノ酸、少なくとも１１〜１５アミノ酸、少なくとも１６〜２４アミノ酸、少なくとも２５〜３０アミノ酸、および少なくとも３０〜４５アミノ酸であってもよい。ポリヌクレオチドの場合には、断片はそのポリヌクレオチドの核酸配列の連続した部分によって定義され、少なくとも９〜１５ヌクレオチド、少なくとも１５〜３０ヌクレオチド、少なくとも３１〜４５ヌクレオチド、少なくとも４６〜７４ヌクレオチド、少なくとも７５〜９０ヌクレオチド、および少なくとも９０〜１３０ヌクレオチドであってもよい。いくつかの実施形態においては、生体分子の断片は免疫原性の断片である。

いくつかの実施形態において、抗原はタンパク質粒子である。タンパク質粒子は以下の物理的特徴を有していてもよい。タンパク質粒子は一般的に形が球形であり、一般的に直径が約１５０ｎｍ、約２００ｎｍから約５００ｎｍから約１μｍから約２μｍから約５μｍから約１０μｍである。タンパク質粒子は、Ｏ’Ｈａｇａｎらに対する米国特許第６，５３４，０６４号またはＯ’Ｈａｇａｎらに対する公開番号ＵＳ２００５／０１０７３２２号に記載されるとおりに形成されてもよい。

「ポリヌクレオチド」とは核酸ポリマーのことである。ポリヌクレオチドは５、６、７または８個などの少数のヌクレオチドを含んでいてもよい。さらに、「ポリヌクレオチド」は二本鎖および一本鎖配列の両方を含んでいてもよく、ウイルス、原核生物または真核生物のｍＲＮＡからのｃＤＮＡ、ウイルス（例、ＲＮＡおよびＤＮＡウイルスならびにレトロウイルス）、原核生物または真核生物からのゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配列、ならびに合成ＤＮＡ配列を示すがこれらに限定されない。この用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基類似体のいずれかを含む配列も表わす。この用語はさらに、たとえば核酸分子が抗原タンパク質をコードしているときなどの、天然配列に対するたとえば欠失、付加および置換などの変更（一般的に性質は保存される）も含む。これらの変更は、部位特異的変異誘発などによって計画的に行なわれても、抗原を生産する宿主の突然変異などによって偶発的に起こってもよい。

「ポリヌクレオチド含有種」とは、少なくともその一部がポリヌクレオチドである分子のことである。その例には、ＲＮＡベクターコンストラクト、ＤＮＡベクターコンストラクトなどが含まれる。

本明細書において用いられる「糖」という用語は、単糖、オリゴ糖および多糖を含む。「糖含有種」とは、少なくともその一部が糖である分子のことである。その例には、糖抗原、担体ペプチドに結合体化された糖を含む抗原などが含まれる。

本明細書において用いられる「単離」という用語は、化学種が天然に発生する環境とは異なる環境にあるポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体などの化学種を示す。単離された化学種は一般的に実質的に精製されている。細胞を単離する方法も当業者に周知である。

「精製」タンパク質とは、（たとえば組換えまたは合成によって）生成されるか、または天然の宿主から単離されて、組成物中に存在するタンパク質の量が粗調製物に存在するタンパク質の量よりもかなり多くなったタンパク質のことである。一般的に、精製タンパク質は少なくとも約５０％均質であり、より好ましくは少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ以上均質である。

本明細書において用いられる、抗原または組成物に対する「免疫学的応答」とは、対象において抗原または組成物に対する体液性および／または細胞性免疫応答が発達することである。本発明の目的に対して、「体液性免疫応答」とは抗体分子が介在する免疫応答を示すのに対し、「細胞性免疫応答」とはＴリンパ球および／またはその他の白血球が介在する免疫応答である。細胞性免疫の重要な局面の１つは、細胞溶解性Ｔ細胞（ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ Ｔ−ｃｅｌｌｓ）（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答を含む。ＣＴＬは、ＭＨＣによってコードされて細胞の表面に発現されるタンパク質に関連して提示されるペプチド抗原に対して特異性を有する。ＣＴＬは、細胞内微生物の細胞内破壊またはこうした微生物に感染した細胞の溶解の誘導および促進を助ける。細胞性免疫の別の局面は、表面にＭＨＣ分子に関連してペプチド抗原を表示する細胞に対する、非特異的エフェクタ細胞の機能を刺激して活性を集中させることを助けるように作用するヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答を含む。「細胞性免疫応答」は、サイトカインおよびケモカインの生成、ならびにＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含む、活性化Ｔ細胞および／またはその他の白血球によって生成されるその他のこうした分子の生成のことも示す。

「抗原」とは、免疫学的応答を誘発する１つまたはそれ以上のエピトープ（直鎖状、高次構造的、またはその両方）を含有する分子を示す。この用語は「免疫原」という用語と互いに交換可能に用いられてもよい。「エピトープ」とは、所与の種（例、抗原性分子または抗原性複合体）の免疫学的特異性を定める部分のことである。エピトープはこの抗原の定義の範囲に含まれる。通常、エピトープは天然に発生する抗原中のポリペプチドまたは多糖である。人工的な抗原におけるエピトープは、アルサニル酸誘導体などの低分子量の物質であり得る。通常、Ｂ細胞エピトープは少なくとも約５個のアミノ酸を含むが、３〜４アミノ酸などの小ささであってもよい。ＣＴＬエピトープなどのＴ細胞エピトープは典型的に少なくとも約７〜９個のアミノ酸を含み、ヘルパーＴ細胞エピトープは典型的に少なくとも約１２〜２０個のアミノ酸を含む。「抗原」という用語は、サブユニット抗原、すなわち天然においてその抗原が関連している生物または細胞全体から分離および独立した抗原に加えて、死滅、弱毒化または不活性化したバクテリア、ウイルス、真菌、寄生体もしくはその他の微生物または腫瘍細胞のことも示す。抗イディオタイプ抗体などの抗体またはその断片、および抗原または抗原決定基を模倣できる合成ペプチドミモトープも本明細書において用いられる抗原の定義によって表わされる。同様に、たとえば遺伝子療法およびＤＮＡ免疫化適用などにおいて、インビボで抗原または抗原決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドも、本明細書における抗原の定義に含まれる。

よって本発明の目的に対して、抗原はさまざまなウイルス、バクテリア、寄生体、真菌およびその他の微生物のいずれに由来してもよいし、さまざまな腫瘍抗原のいずれに由来してもよい。抗原には、インビボで抗原または抗原決定基を発現する核酸も含まれる。いくつかの特定の例として、抗原は以下のものであってもよい：ヘルペスウイルスファミリーからのタンパク質またはそれに由来するタンパク質であって、単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ：ＨＳＶ）１型および２型に由来するタンパク質、たとえばＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２糖タンパク質ｇＢ、ｇＤおよびｇＨなどを含むタンパク質；サイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ：ＣＭＶ）に由来するタンパク質であって、ＣＭＶ ｇＢおよびｇＨを含むタンパク質；Ａ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ：ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ：ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ：ＨＣＶ）、デルタ型肝炎ウイルス（ｄｅｌｔａ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ：ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ：ＨＥＶ）およびＧ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ：ＨＧＶ）を含む、ウイルスの肝炎ファミリーに由来するタンパク質；ＨＩＶ単離体のさまざまな遺伝子サブタイプＨＩＶ_ＩＩＩｂ、ＨＩＶ_ＳＦ２、ＨＩＶ_ＬＡＶ、ＨＩＶ_ＬＡＩ、ＨＩＶ_ＭＮ、ＨＩＶ−１_{ＣＭ２３５}、ＨＩＶ−１_ＵＳ４、ＨＩＶ−２のメンバーを含むＨＩＶに由来する、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、ｇｐ４１、ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇエンベロープタンパク質を含むタンパク質；サル免疫不全ウイルス（ｓｉｍｉａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ：ＳＩＶ）に由来するタンパク質；ならびにＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｙ）、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ型（ＨＩＢ）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉに由来するタンパク質；ヒト血清アルブミンおよびオボアルブミン、その他多数。

細胞性免疫応答を誘発する免疫原性組成物またはワクチンは、細胞表面におけるＭＨＣ分子に関連する抗原の提示によって、脊椎動物対象を感作する働きをしてもよい。細胞の介在する免疫応答は、表面に抗原を提示している細胞またはその近くで指示される。加えて、抗原特異的なＴリンパ球が生成されることによって、免疫化された宿主の将来的な保護を可能にしてもよい。特定の抗原が細胞の介在する免疫学的応答を刺激する能力は、たとえばリンパ球増殖（リンパ球活性化）アッセイ、ＣＴＬ細胞障害性細胞アッセイ、または感作された対象における抗原に特異的なＴリンパ球に対するアッセイなどのいくつかのアッセイによって定められてもよい。こうしたアッセイは当該技術分野において周知である。たとえば、Ｅｒｉｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）１５１：４１８９−４１９９；Ｄｏｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）２４：２３６９−２３７６などを参照されたい。よって、本明細書において用いられる免疫学的応答は、ＣＴＬの生成および／またはヘルパーＴ細胞の生成もしくは活性化を刺激するものであってもよい。目的とする抗原は、抗体の介在する免疫応答を誘発してもよい。よって、免疫学的応答は以下の効果の１つまたはそれ以上を含んでもよい：たとえばＢ細胞などだがこれに限定されないものによる抗体の生成；ならびに／または、目的とする組成物もしくはワクチンに存在する１つもしくは複数の抗原に特異的に向けられたサプレッサーＴ細胞および／もしくはγΔＴ細胞の活性化。これらの応答は、感染性を中和し、および／または抗体−補体を仲介し、または抗体依存性細胞障害（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＡＤＣＣ）を仲介することによって、免疫化された宿主に対する保護を提供する働きをしてもよい。こうした応答は、当該技術分野において周知の標準的なイムノアッセイおよび中和アッセイを用いて定めることができる。

本発明に従った抗原を含有する免疫原性組成物は、たとえば抗原が可溶性タンパク質として投与されるような異なる送達系を用いて投与された同等量の抗原によって誘発される免疫応答よりも免疫応答を誘発する能力が大きいときに、「強化された免疫原性」を示す。すなわち、免疫原性組成物またはワクチン組成物が「強化された免疫原性」を示すのは、抗原の免疫原性がより強いか、または抗原が投与される対象における免疫応答を得るために必要な抗原がより低用量もしくはより少用量であるためであり得る。こうした強化された免疫原性は、抗原組成物および抗原対照を動物に投与して、本明細書に記載される標準的なアッセイを用いてこれら２つに対する抗体価および／または細胞の介在する免疫を比較することによって定めることができる。

「アジュバント」という用語は、免疫系における抗原の作用を補助または変更するあらゆる物質を示す。アジュバントは体液性および／または細胞性の免疫を強化できる。

「賦形剤」という用語は、完成した剤形に存在し得るあらゆる本質的に補助的な物質を示す。たとえば、「賦形剤」という用語は媒体、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、懸濁／分散剤などを含む。

本明細書において用いられる「ベクターコンストラクト」という語句は一般的に、目的とする核酸配列または遺伝子の発現を指示できるあらゆる構築物を示す。「ＤＮＡベクターコンストラクト」は、目的とする核酸配列または遺伝子の発現を指示できるＤＮＡ分子を示す。１つの特定のタイプのＤＮＡベクターコンストラクトはプラスミドであり、これは宿主細胞内での自律増殖が可能な環状のエピソームＤＮＡ分子である。典型的に、プラスミドは環状の二本鎖ＤＮＡループであり、その中に付加的なＤＮＡセグメントを連結できる。ｐＣＭＶは当該技術分野において周知の特定的なプラスミドの１つである。ＲＮＡウイルスに基づいた他のＤＮＡベクターコンストラクトが公知である。これらのＤＮＡベクターコンストラクトは典型的に、真核細胞中で機能するプロモーターと、転写産物がＲＮＡベクターコンストラクト（例、アルファウイルスＲＮＡベクターレプリコン）であるｃＤＮＡ配列の５’と、３’末端領域とを含む。ベクターコンストラクトの他の例は、ＲＮＡベクターコンストラクト（例、アルファウイルスベクターコンストラクト）などを含む。本明細書において用いられる「ＲＮＡベクターコンストラクト」、「ＲＮＡベクターレプリコン」および「レプリコン」とは、典型的には標的細胞内で、インビボで自身の増幅または自己複製を指示できるＲＮＡ分子を示す。ＲＮＡベクターコンストラクトは直接使用され、細胞にＤＮＡを導入して転写が起こる核に輸送させる必要はない。宿主細胞の細胞質への直接送達のためにＲＮＡベクターを用いることによって、異種核酸配列の自律増殖および翻訳が効率的に起こる。

Ｂ．全般
本発明は免疫原性組成物を提供し、この免疫原性組成物は（ａ）第１の抗原と、（ｂ）少なくとも第１および第２のアジュバントとを含み、ここで第１のアジュバントは微粒子を含み、第２のアジュバントはイミダゾキノリンを含み、この免疫原性組成物はさらに（ｃ）医薬的に許容できる賦形剤を含み、前記組成物は脊椎動物対象に投与されるときに免疫応答を誘発する。

いくつかの実施形態において、第１の抗原は死滅または生の（例、弱毒化または不活性化した）病原性生物である。いくつかの実施形態において、第１の抗原はポリペプチド含有抗原（例、全長タンパク質、タンパク質断片など）である。いくつかの実施形態において、第１の抗原は多糖含有抗原（例、莢膜多糖、多糖−タンパク質タンパク質結合体など）である。いくつかの実施形態において、第１の抗原はポリヌクレオチド含有抗原（例、ポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列につながれたポリヌクレオチドなど）である。いくつかの実施形態において、第１の抗原は、前述の抗原の１つなどの抗原から形成される安定化した微粒子の形であり、この微粒子は、たとえばＯ’Ｈａｇａｎらに対する米国特許第６，５３４，０６４号もしくは公開番号ＵＳ２００５／０１０７３２２号に記載されるとおりに生成されてもよいし、当業者に公知のその他の手段によって生成されてもよい。こうした安定化した微粒子はウイルス様の粒子ではないが、いくつかの実施形態において、第１の抗原はウイルス様の粒子である。こうした安定化した微粒子は典型的には遊離した粒子であり、担体内に封入されていない。

本発明に従う免疫原性組成物は、脊椎動物対象において、たとえば細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答、抗体の介在する免疫応答、またはその両方などの免疫応答を誘発するための方法に用いることもでき、この方法は、免疫原性組成物を脊椎動物対象に投与するステップを含む。

いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、たとえば病原体または腫瘍を処置するために注射可能なワクチンに用いられる。

本発明に従う免疫原性組成物は、医薬組成物として調製することもできる。

本発明は、免疫原性組成物を調製するためのキットも提供する。このキットは、たとえば抗原を含む第１の容器と、微粒子およびイミダゾキノリンを含む第２の容器とを含んでもよい。このキットは、たとえば抗原を含む第１の容器と、微粒子を含む第２の容器と、イミダゾキノリンを含む第３の容器とを含んでもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は少なくとも第３のアジュバントをさらに含むことができ、いくつかの場合には３つ、４つ、５つまたはそれ以上のアジュバントを含んでもよい。

いくつかの実施形態において、この組成物は第２の抗原をさらに含む。第１の抗原と同様に、第２の抗原はたとえば死滅または生の病原性生物、ポリペプチド含有抗原、多糖含有抗原、ポリヌクレオチド含有抗原、および安定化した微粒子などであってもよい。いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は２つ、３つ、４つまたはそれ以上の抗原をさらに含むことができる。

Ｃ．イミダゾキノリン
好ましいイミダゾキノリンは次式のものであり、

ここでＲ_１およびＲ_２は以下からなる群より独立に選択される：水素、１個から１０個の炭素原子のアルキル、１個から１０個の炭素原子のヒドロキシアルキル、１個から１０個の炭素原子のアルコキシアルキル、アシルオキシ部分が１個から５個の炭素原子のアルカノイルオキシまたはベンゾイルオキシであり、かつアルキル部分が１個から６個の炭素原子を含有するアシルオキシアルキル、

ここでＲ_３およびＲ_４は、水素および１個から１０個の炭素原子のアルキルからなる群より独立に選択される、ベンジル、（フェニル）エチルおよびフェニル、ここでベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基はベンゼン環において、１個から４個の炭素原子のアルキル、１個から４個の炭素原子のアルコキシおよびハロゲンからなる群より独立に選択される１つまたは２つの部分によって任意に置換される。前述のアルキル基は直鎖、分岐鎖および／または環状であってもよい。本発明の実施のために特に好ましいイミダゾキノリンは、イミキモド、レシキモド、および

を含み、後者を本明細書においては「イミダゾキノリン０９０」とも呼ぶ。たとえば、Ｖａｌｉａｎｔｅらに対する国際公開２００６／０３１８７８号およびＳｕｔｔｏｎらに対する国際公開２００７／１０９８１０号などを参照されたい。

本発明の組成物における抗原のイミダゾキノリンに対する典型的なｗｔ／ｗｔ比は、１：１から２：１から５：１から１０：１の範囲であり、その他の可能性もある。

Ｄ．微粒子
上に示されるとおり、特定の実施形態に従う組成物は、１つまたはそれ以上の抗原および１つまたはそれ以上のイミダゾキノリンに加えて、１つまたはそれ以上のタイプの微粒子を含む。微粒子の例には、（ａ）無機微粒子（例、リン酸カルシウムを含む微粒子、アルミニウム塩［ミョウバン］、たとえば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムなどを含む微粒子）、および（ｂ）有機微粒子、たとえば低溶解度アミノ酸（例、Ｌ−チロシン微粒子など）、生分解性ポリマー（例、ＰＬＧなど）、代謝可能な油（例、ＭＦ５９など）などに基づく微粒子が含まれる。

微粒子が固体微粒子であるとき、抗原、イミダゾキノリン、およびさまざまな任意の補助的構成要素は、独立にたとえば以下のとおりであってもよい：（ａ）微粒子内に確立される、（ｂ）微粒子に付着される、たとえば微粒子の表面に吸着もしくは結合体化される、および／または（ｃ）別様でさまざまな程度に微粒子に関連付けられる、たとえば液体分散中で微粒子と混合される、固体組成物中で微粒子と混合される（例、微粒子とともに凍結乾燥される）など。抗原、イミダゾキノリン、およびさまざまな任意の補助的構成要素は、微粒子の別個の集団に吸着、結合体化または確立されてもよい。

微粒子が液体微粒子（例、水中油型エマルションにおける油小滴など）であるとき、抗原、イミダゾキノリン、およびさまざまな補助的構成要素は、独立にたとえば以下のとおりであってもよい：エマルションの油相内に溶解または分散される（油小滴の別個の集団を含む）、エマルションの水相内に溶解または分散される、および／またはエマルションの水相および油相の間の界面に配置される。

抗原、イミダゾキノリン、またはさまざまな補助的構成要素は、たとえば微粒子製造プロセスの間にこれらの種を導入することによって、微粒子内に確立されてもよい（例、微粒子中に封入、被包、溶解または分散される）。抗原、イミダゾキノリン、またはさまざまな補助的構成要素は、たとえばこれらの種を予め形成された微粒子に導入することなどによって、微粒子に付着されても、微粒子に吸着されても、別様で微粒子に関連付けられてもよい。

抗原の微粒子に対する典型的なｗｔ／ｗｔ比は、１００：１から２００：１から５００：１から１０００：１の範囲であり、その他の可能性もある。

いくつかの実施形態において、微粒子は１つまたはそれ以上の無機種を含む（例、リン酸カルシウムを含む微粒子、アルミニウム塩［ミョウバン］、たとえば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムなどを含む微粒子）。たとえば、水酸化アルミニウムおよびリン酸カルシウムは、Ｂｒｅｎｎｔａｇ Ｂｉｏｓｅｃｔｏｒ，Ｄｅｎｍａｒｋおよびその他の供給源から得られてもよい。

いくつかの実施形態において、微粒子は１つまたはそれ以上の低溶解度アミノ酸を含む（例、Ｌ−チロシン微粒子など）。Ｌ−チロシン微粒子懸濁液は、たとえばＭ．Ｓｉｎｇｈら、Ｖａｃｃｉｎｅ ２４（２００６）１６８０−１６８６およびそこに引用される文献などに記載されている。

いくつかの実施形態において、微粒子は１つまたはそれ以上の代謝可能な油を含む。代謝可能な油は通常、約６個から約３０個の炭素原子を有する油であり、アルカン、アルケン、アルキン、ならびにそれらの対応する酸およびアルコール、そのエーテルおよびエステル、ならびにその混合物を含むがこれらに限定されない。この油は直鎖または分岐鎖構造を有し得る。この油は完全に飽和していても、１つまたはそれ以上の二重結合または三重結合を有していてもよい。モノまたはポリエステルまたはエーテルに基づく油が用いられるとき、約６個から約３０個の炭素という限定は、合計炭素数ではなく個々の脂肪酸または脂肪アルコール部分に適用される。油は本質的に、宿主動物の身体で代謝可能なあらゆる植物油、魚油、動物性油または合成により調製された油であってもよい。たとえば、本発明の油構成要素は、あらゆる長鎖アルカン、アルケンもしくはアルキン、またはその酸もしくはアルコール誘導体、たとえば遊離酸など、その塩もしくはエステル、たとえばモノエステルもしくはジエステルもしくはトリエステル、たとえばトリグリセリド、１，２−プロパンジオールもしくは類似のポリヒドロキシアルコールのエステルなどであってもよい。たとえば酢酸、プロパン酸、クエン酸などのアミノ官能性または多官能性の酸を用いてアルコールをアシル化してもよい。長鎖アルコールに由来するエーテルで、本明細書において示される基準を満たす油であるものも用いられ得る。

特定の例として、多くの魚は容易に回収できる代謝可能な油を含有する。たとえば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨蝋などのクジラ油は、本発明において使用され得る魚油のいくつかを例示するものである。いくつかの分岐鎖油は５炭素イソプレン単位で生化学的に合成でき、これは一般的にテルペノイドと呼ばれる。サメ肝油は、スクアレンとして公知である分岐鎖不飽和テルペノイド、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンを含有する。スクアレンおよびスクアレンの飽和類似体であるスクアランを含む魚油は、商業的供給源から容易に入手可能であるし、当該技術分野において公知の方法によって得られてもよい。代謝可能な油は、１つまたはそれ以上の好適な界面活性剤を用いてエマルションの形で安定化されてもよい。免疫原性エマルション組成物は典型的に以下を含む：（１）約０．５から１から２から６から１０から２０体積％の油、より典型的には１から１０体積％の油、さらにより典型的には２から６体積％の油、（２）約８０から９０から９５から９８から９９から９９．５体積％の水、より典型的には９０から９９体積％の水；および（３）油小滴（微粒子）を安定化するために十分な量の１つまたはそれ以上の界面活性剤。

好ましくは、実質的にすべての油小滴が直径１ミクロンよりも小さく、より典型的には２５０ｎｍよりも小さい。「実質的にすべて」とは、少なくとも約８０％（数で）、典型的には少なくとも約９０％、より典型的には少なくとも約９５％または少なくとも９８％を意味する。こうしたエマルションを生成するためにいくつかの技術を用いることができる。たとえば市販の乳化装置が用いられてもよく、この乳化装置は、高圧下で小さい開口に流体を強制的に通すことによって発達される高い剪断力の原理によって動作してもよい。市販の乳化装置の例は、Ｍｏｄｅｌ １１０Ｙ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，Ｍａｓｓ．），Ｇａｕｌｉｎ Ｍｏｄｅｌ ３０ＣＤ（Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．，Ｅｖｅｒｅｔｔ，Ｍａｓｓ．）およびＲａｉｎｎｉｅ Ｍｉｎｉｌａｂ Ｔｙｐｅ ８．３０Ｈ（Ｍｉｒｏ Ａｔｏｍｉｚｅｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄａｉｒｙ，Ｉｎｃ．，Ｈｕｄｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を限定なしに含む。個々のエマルションとともに用いるための適切な圧力は、当業者によって容易に定められる。油小滴のサイズは、たとえば界面活性剤の油に対する比率（比率を高くすると典型的に小滴サイズが小さくなる）、動作圧力（動作圧力を高くすると典型的に小滴サイズが小さくなる）および動作温度（温度を高くすると典型的に小滴サイズが小さくなる）を変えることなどによって変更できる。乳化のときに用いられる特定の界面活性剤および油、ならびにもしあれば存在するその他の構成要素（例、イミダゾキノリン、抗原、および／または以下に考察されるあらゆる任意の追加の化合物）によっても小滴サイズが変わる。

いくつかの界面活性剤が生物学的状況のために特定的に設計されて、一般的に用いられている。たとえば、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙによる１９８７ Ｃａｔａｌｏｇ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓの３１０〜３１６頁にはこうしたいくつかの生物学的界面活性剤が列挙されている。界面活性剤は４つの基本的なタイプに分けられてもよい：アニオン性、カチオン性、双性イオン性、および非イオン性である。アニオン性界面活性剤の例は、アルギン酸、カプリル酸、コール酸、１−デカンスルホン酸、デオキシコール酸、１−ドデカンスルホン酸、ドデシル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ：ＳＤＳ）、・ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ：ＳＬＳ）、ジオクチルソジウムスルホサクシネート（ｄｉｏｃｔｙｌ ｓｏｄｉｕｍ ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎａｔｅ：ＤＳＳ）、Ｎ−ラウロイルザルコシン，およびタウロコール酸、その他を含む。カチオン性界面活性剤の例は、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）または「ＣＴＡＢ」（例、セトリミド）、ジメチルジオクトデシルアンモニウムブロミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｄｉｏｃｔｏｄｅｃｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ：ＤＤＡ）、ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ｄｉｏｌｅｏｙｌ−３−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ−ｐｒｏｐａｎｅ：ＤＯＴＡＰ）塩化ベンザルコニウム、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムクロリド、塩化セチルピリジニウム、塩化メチルベンゼトニウム、および４−ピコリンドデシル硫酸塩、その他を含む。双性イオン性界面活性剤の例は、３−［（３−コラミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホン酸塩（３−［（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｏ］−１−ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（通常ＣＨＡＰＳと略される）、３−［（コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸塩（３−［（ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｏ］−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（通常ＣＨＡＰＳＯと略される）、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸塩、およびリゾ−アルファ−ホスファチジルコリン、その他を含む。非イオン性界面活性剤の例は、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ：ＰＶＡ）、ポビドン（ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）またはＰＶＰとしても公知）、ポリソルベート、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポロキサマー、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ジエチレングリコールモノペンチルエーテル、ｎ−ドデシルベータ−Ｄ−グルコピラノシド、脂肪アルコールのエチレンオキシド縮合物（例、Ｌｕｂｒｏｌの商品名で販売されるもの）、ポリオキシエチル化グリコールモノエーテル、脂肪酸（特にＣ_１２〜Ｃ_２０脂肪酸）のポリオキシエチレンエーテル、ならびにポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）の商品名で販売される）およびソルビタン脂肪酸エステル（例、Ｓｐａｎ（登録商標）の商品名で販売される）を含むソルビタンエステル、その他を含む。

特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のソルビタン誘導体、たとえば選択されたソルビタン脂肪酸モノエステル、ソルビタン脂肪酸セスキエステル（ｓｅｓｑｕｉｅｓｔｅｒｓ）、ソルビタン脂肪酸トリエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸モノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸トリエステルなどを用いて、油微粒子を安定化してもよい。たとえば、ソルビタンエステル（例、トリオレイン酸ソルビタン）およびポリオキシエチレンソルビタンエステル（例、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）を用いて、油微粒子を安定化してもよい。

界面活性剤で安定化した微粒子組成物の特定的な例の１つはＭＦ５９であり、これは４〜５％ｗ／ｖのスクアレン微粒子を含有する油微粒子の水性分散であって、０．２５〜０．５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、０．５％ｗ／ｖのトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８５）、および任意にさまざまな量のＭＴＰ−ＰＥ（例、０〜１００μｇ／用量）によって安定化されている。界面活性剤で安定化した微粒子組成物の別の特定的な例はＳＡＦであり、これは１０％のスクアラン、０．４％のＴｗｅｅｎ ８０、５％のプルロニックブロックされたポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰ（下記を参照）を含有する。界面活性剤で安定化した微粒子組成物のさらに別の特定的な例はＲｉｂｉアジュバント系（Ｒｉｂｉ ａｄｊｕｖａｎｔ ｓｙｓｔｅｍ：ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）であり、これは２％のスクアレン、０．２％のＴｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｉｐｉｄ Ａ：ＭＰＬ）、トレハロースジミコール酸（ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ｄｉｍｙｃｏｌａｔｅ：ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｓｋｅｌｅｔｏｎ：ＣＷＳ）からなる群からの１つまたはそれ以上のバクテリア細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ）を含有する。

本発明において用いるための好適な微粒子およびそれらを形成する方法のさらなる説明については、米国特許第６，０８６，９０１号、第６，２９９，８８４号および第６，４５１，３２５号、ならびに国際公開００／５０００６号を参照されたい。

いくつかの実施形態において、微粒子は１つまたはそれ以上の生分解性ポリマーを含む。生分解性ポリマーの例には、生分解性ポリエステル、たとえばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ吉草酸、およびポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート（例、ポリアルキルシアノアクリレート（ｐｏｌｙａｌｋｙｌｃｙａｎｏａｃｒｙｌａｔｅ）または「ＰＡＣＡ」）が含まれる。より典型的には、本発明とともに用いるための微粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、たとえばポリ（ラクチド）（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ））（「ＰＬＡ」）、またはラクチドおよびグリコリドの共重合体、たとえばポリ（Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）またはポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ−ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ））（「ＰＬＧ」）などに由来するポリマー微粒子である。ポリマー微粒子は、さまざまな分子量を有し、ＰＬＧなどの共重合体の場合にはさまざまな単量体比（例、ラクチド：グリコリド）を有するさまざまなポリマー出発材料のいずれに由来してもよく、ポリマー出発材料の選択は主に、同時投与される種および望ましい分解速度に部分的に依存する選択の問題である。ラクチド／グリコリドのモル比は、たとえば１０：９０またはそれ未満から１５：８５から２５：７５から４０：６０から４５：５５から５０：５０から５５：４５から６０：４０から７５：２５から８５：１５から９０：１０またはそれ以上などの範囲であってもよく、生分解性ポリマーの分子量は、たとえば５，０００ダルトンまたはそれ未満から１０，０００ダルトンから２０，０００ダルトンから４０，０００ダルトンから５０，０００ダルトンから７０，０００ダルトンから１００，０００ダルトンから２００，０００ダルトンまたはそれ以上などの範囲であってもよい。たとえば、５０％のＤ，Ｌ−ラクチドおよび５０％のグリコリドを含有する５０：５０ＰＬＧポリマーは速く再吸収する共重合体を提供するのに対し、７５：２５ＰＬＧはラクチド成分が増えたためにもっと遅く分解し、８５：１５および９０：１０はさらにもっと遅くなる。所望の放出動力学を達成するために、さまざまなラクチド：グリコリド比を有する微粒子の混合物も本発明において使用されてもよい。本発明の微粒子の分解速度は、たとえばポリマーの分子量およびポリマーの結晶化度などの因子によっても制御できる。

さまざまなラクチド：グリコリド比および分子量を有するＰＬＧ共重合体は、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡを含むいくつかの供給源から容易に商業的に入手可能である。いくつかの例示的なＰＬＧ共重合体は以下を含む：（ａ）ＲＧ５０２、５０：５０のラクチド／グリコリドのモル比および約１２，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｂ）ＲＧ５０３、５０：５０のラクチド／グリコリドのモル比および約３４，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｃ）ＲＧ５０４、５０：５０のラクチド／グリコリドのモル比および約４８，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｄ）ＲＧ７５２、７５：２５のラクチド／グリコリドのモル比および約２２，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｅ）ＲＧ７５５、７５：２５のラクチド／グリコリドのモル比および約６８，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；および（ｆ）ＲＧ５０２Ｈ、５０／５０のラクチド／グリコリド共重合体比を有し、遊離カルボキシル末端基を有し、約７８００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ。ＰＬＧポリマーは、たとえばＴａｂａｔａら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．（１９８８）２２：８３７−８５８に記載されるものなど、当該技術分野において周知の技術を用いて、乳酸成分の簡単な重縮合によって合成することもできる。

ポリマー微粒子は、当該技術分野において周知のいくつかの方法のいずれかを用いて調製される。たとえば、いくつかの実施形態においては、米国特許第３，５２３，９０７号およびＯｇａｗａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９８８）３６：１０９５−１１０３に記載されるものなどのダブルエマルション／溶媒蒸発技術を本発明において用いて微粒子を作成できる。これらの技術は、ポリマー溶液の小滴からなる一次エマルションの形成を含み、その後この一次エマルションが粒子安定剤／界面活性剤を含有する連続的な水相と混合される。他の実施形態においては、以下の技術を用いて微粒子を形成することもできる：たとえばＴｈｏｍａｓｉｎら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（１９９６）４１：１３１；米国特許第２，８００，４５７号；Ｍａｓｔｅｒｓ，Ｋ．（１９７６）Ｓｐｒａｙ Ｄｒｙｉｎｇ 第２版、Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されるとおりの噴霧乾燥およびコアセルベーション；Ｈａｌｌら、（１９８０）Ｔｈｅ Ｗｕｒｓｔｅｒ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｔｈｅｏｒｙ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ａ．Ｆ．Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ編），Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１３３−１５４ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ、およびＤｅａｓｙ，Ｐ．Ｂ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．（１９８８）Ｓ（２）：９９−１３９に記載されるとおりのエアサスペンションコーティング技術、たとえばパンコーティングおよびＷｕｒｓｔｅｒコーティング；ならびに、たとえばＬｉｍら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８０）２１０：９０８−９１０に記載されるとおりのイオン性ゲル化。２００６年１２月１日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０６／４６２１２号に記載されるとおりの溶媒置換法を用いて、ポリマーナノ粒子を形成することもできる。

特定の実施形態においては、Ｏ’Ｈａｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）１１：９６５−９６９，Ｏ’Ｈａｇａｎらに対する国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７３０８号（国際公開００／０６１２３号）、およびＪｅｆｆｅｒｙら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２に記載されるラインに沿って、水中油中水型（ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ：ｗ／ｏ／ｗ）溶媒蒸発系を用いて微粒子を形成してもよい。一般に、ＰＬＧなど目的とするポリマーは、たとえば酢酸エチル、ジメチルクロリド（メチレンクロリドおよびジクロロメタンとも呼ばれる）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルムなどの有機溶媒に溶解されている。ポリマーは典型的に、有機溶媒中で約１〜３０％、より典型的には約２〜１５％、さらにより典型的には約３〜１０％、最も典型的には約４〜８％の溶液として与えられる。次いでポリマー溶液は第１の体積の水溶液と組合され、乳化されてｏ／ｗエマルションを形成する。水溶液はたとえば脱イオン水、生理食塩水、緩衝溶液、たとえばリン酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン四酢酸（ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ／ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（クエン酸ナトリウム／ＥＴＤＡ）緩衝溶液などであってもよい。後者の溶液は、（ａ）正常な生理的流体と本質的に同じ浸透圧すなわち重量オスモル濃度を提供でき、かつ（ｂ）正常な生理的状態に適合するｐＨを維持できる。代替的には、微粒子形成後および投与前に、本発明の組成物の浸透圧および／またはｐＨ特性を調整できる。好ましくは、ポリマー溶液の水溶液に対する体積比は約５：１から約２０：１の範囲であり、より好ましくは約１０：１である。乳化はこの作業に適したあらゆる機器を用いて行なわれ、その機器は典型的には高剪断装置、たとえばホモジナイザーなどである。

いくつかの実施形態において、１つまたはそれ以上の付加的な構成要素が微粒子内に確立される。たとえば、抗原、イミダゾキノリンおよび／または以下に記載される任意の追加構成要素を、（ａ）油溶性または油分散可能な形であるときにはポリマー溶液に加え、（ｂ）水溶性または水分散可能な形であるときには水溶液に加えることによって、導入できる。

次いで、ある体積のｏ／ｗエマルションを、より大きな第２の体積の典型的には界面活性剤を含有する水溶液と組合せる。水溶液のｏ／ｗエマルションに対する体積比は、典型的に約２：１から１０：１の範囲であり、より典型的には約４：１である。本発明の実施に対して適切な界面活性剤の例は上記に挙げている。通常の当業者は、吸着させる種のタイプに対して適切な界面活性剤を容易に選択するであろう。たとえば、アニオン性またはカチオン性界面活性剤などの帯電した界面活性剤の存在下で製造された微粒子は、表面が正味で負または正味で正の荷電を有する微粒子をもたらしてもよく、これは多様な分子を吸着できる。たとえば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアニオン性界面活性剤によって製造された微粒子、たとえばＳＤＳ−ＰＬＧ微粒子などは、正に帯電した種、たとえばタンパク質などのポリペプチド含有種などを容易に吸着する。同様に、ＣＴＡＢなどのカチオン性界面活性剤によって製造された微粒子、たとえばＣＴＡＢ−ＰＬＧ微粒子などは、負に帯電した種、たとえばＤＮＡなどのポリヌクレオチド含有種などを容易に吸着する。特定の種は、界面活性剤の組合せを有する微粒子により容易に吸着することがある。さらに、いくつかの場合には、上述の有機溶液に界面活性剤を加えることが望ましいことがある。

次いでこの混合物を均質化して安定なｗ／ｏ／ｗダブルエマルションを生成する。上述の均質化ステップの各々は典型的に室温（すなわち２５℃）またはそれ未満で行なわれ、より典型的にはたとえば氷浴中で冷却しながら室温未満で行なわれる。

次いで有機溶媒を蒸発させる。調製後の微粒子はそのまま使用されてもよいし、将来の使用のために凍結乾燥されてもよい。

製剤パラメータを操作して、０．０５μｍ（５０ｎｍ）のオーダの小さい微粒子から５０μｍまたはそれ以上のより大きな微粒子までの調製を可能にできる。たとえば、Ｊｅｆｆｅｒｙら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２−３６８；ＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照されたい。たとえば、撹拌を減少させると、典型的により大きな微粒子がもたらされ、内側相体積の増加およびポリマー濃度の増加も同様である。小さい粒子は典型的に、撹拌の増加の他に、水相体積を小さくし、エマルション安定剤の濃度を高くし、ポリマー濃度を減少させることによって生成される。

Ｅ．抗原
本発明において有用な抗原は、たとえば限定なしに以下を含む：ヘルペスウイルスファミリーに由来する抗原であって、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型および２型に由来する抗原、たとえばＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２糖タンパク質ｇＢ、ｇＤおよびｇＨなどを含む抗原；水痘帯状疱疹ウイルス（ｖａｒｉｃｅｌｌａ ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ：ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ：ＥＢＶ）およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来する抗原であって、ＣＭＶ ｇＢおよびｇＨを含む抗原；ならびにその他のヒトヘルペスウイルス、たとえばＨＨＶ６およびＨＨＶ７などに由来する抗原。（たとえば、サイトメガロウイルスのタンパク質コード内容の概説についてはＣｈｅｅら、Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｅｓ（Ｊ．Ｋ．ＭｃＤｏｕｇａｌｌ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ １９９０）ｐｐ．１２５−１６９；さまざまなＨＳＶ−１にコードされるタンパク質の考察についてはＭｃＧｅｏｃｈら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）６９：１５３１−１５７４；ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ ｇＢおよびｇＤタンパク質ならびにそれをコードする遺伝子の考察については米国特許第５，１７１，５６８号；ＥＢＶゲノムにおけるタンパク質コード配列の同定についてはＢａｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８４）３１０：２０７−２１１；ＶＺＶの概説についてはＤａｖｉｓｏｎ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８６）６７：１７５９−１８１６を参照。）
Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、デルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）およびＧ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）を含む、ウイルスの肝炎ファミリーからの抗原も、本明細書に記載される技術において便利に用いられ得る。たとえば、ＨＣＶのウイルスゲノム配列およびその配列を得るための方法が公知である。たとえば、本明細書においてその全体を引用により援用する国際公開８９／０４６６９号；国際公開９０／１１０８９号；および国際公開９０／１４４３６号を参照されたい。ＨＣＶゲノムは、以下にさらに考察されるいくつかのウイルスタンパク質をコードしている。これらのタンパク質およびその抗原性断片は、本発明において使用できる。同様に、ＨＤＶからのデルタ抗原に対する配列が公知であり（たとえば米国特許第５，３７８，８１４号を参照）、この配列も本発明において便利に使用できる。加えて、ＨＢＶに由来する抗原、たとえばコア抗原、表面抗原（ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ）ｓＡｇなど、ならびにプレ表面（ｐｒｅｓｕｒｆａｃｅ）配列ｐｒｅ−Ｓ１およびｐｒｅ−Ｓ２（以前はｐｒｅ−Ｓと呼ばれた）、ならびに上記の組合せ、たとえばｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ２、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２、およびｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２なども本発明において使用できる。たとえば、ＨＢＶ構造の考察についてはＭａｃｋｅｔｔ，Ｍ．ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，ｐｐ．１５９−１７６における“ＨＢＶ Ｖａｃｃｉｎｅｓ−ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｏ ｌｉｃｅｎｓｅ：ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ”；および本明細書においてその全体を引用により援用する米国特許第４，７２２，８４０号、第５，０９８，７０４号、第５，３２４，５１３号；Ｂｅａｍｅｓら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９５）６９：６８３３−６８３８，Ｂｉｒｎｂａｕｍら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９０）６４：３３１９−３３３０；およびＺｈｏｕら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９１）６５：５４５７−５４６４などを参照されたい。

その他のウイルスに由来する抗原も本発明において使用でき、その抗原の例には限定なしに以下が含まれる：Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例、ポリオウイルスなど）；Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ；Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例、風疹ウイルス、デング熱ウイルスなど）；Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ；Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ；Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｒｈａｂｏｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例、狂犬病ウイルスなど）；Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例、耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルスなど）；Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型およびＣ型など）；Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ；Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｄａｅ（例、ＨＴＬＶ−Ｉ；ＨＴＬＶ−ＩＩ；ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ、ｈＴＬＲなどとしても公知））のファミリーのメンバーに由来する抗原であって、以下の単離体からの抗原を含むがこれに限定されない：ＨＩＶ_ＩＩＩｂ、ＨＩＶ_ＳＶ２、ＨＩＶ_ＬＡＶ、ＨＩＶ_ＬＡＩ、ＨＩＶ_ＭＮ）；ＨＩＶ−１_{ＣＭ２３５}、ＨＩＶ−１_ＵＳ４；ＨＩＶ−２；サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、その他。加えて、抗原はヒトパピローマウイルス（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ：ＨＰＶ）およびダニ媒介性脳炎ウイルスにも由来してもよい。たとえば、これらおよびその他のウイルスの説明についてはＶｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ編、１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第２版（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編、１９９１）などを参照されたい。

より特定的には、ＨＩＶのさまざまな遺伝子サブタイプのメンバーを含む上述のＨＩＶ単離体のいずれかからのｇｐ１２０エンベロープタンパク質が公知であって報告されており（例、さまざまなＨＩＶ単離体のエンベロープ遺伝子配列の比較についてはＭｙｅｒｓら、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｄａｔａｂａｓｅ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎ．Ｍｅｘ．（１９９２）；Ｍｙｅｒｓら、Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ Ａｉｄｓ，１９９０，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎ．Ｍｅｘ．：Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；およびＭｏｄｒｏｗら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８７）６１：５７０−５７８を参照）、これらの単離体のいずれに由来する配列もこの方法において使用できる。さらに本発明は、さまざまなＨＩＶ単離体のいずれかに由来するその他の免疫原性タンパク質にも同等に適用可能であり、そのタンパク質には、たとえばｇｐ１６０、ｇｐ１４０およびｇｐ４１などのさまざまなエンベロープタンパク質のいずれか、たとえばｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇなどのｇａｇ抗原、ならびにｐｏｌ領域に由来するタンパク質が含まれる。

本発明が有用であるウイルスの別の例はインフルエンザウイルスである。特定的には、インフルエンザウイルスに由来する抗原は、インフルエンザＡ型のエンベロープ糖タンパク質ＨＡおよびＮＡを含み、これは免疫応答を生じるために特に興味深いタンパク質である。インフルエンザＡ型の多数のＨＡサブタイプが同定されている（Ｋａｗａｏｋａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９０）１７９：７５９−７６７；Ｗｅｂｓｔｅｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｙｐｅ Ａ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ，”ｐ．１２７−１６８．Ｉｎ：Ｐ．ＰａｌｅｓｅおよびＤ．Ｗ．Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ（編），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。よって、これらの単離体のいずれに由来するタンパク質も本明細書に記載される本発明において使用できる。

本明細書に記載される組成物および方法において用いるための抗原は、多数のバクテリア抗原に由来していてもよく、たとえばジフテリア、コレラ、結核、破傷風、百日咳、髄膜炎およびその他の病原性の状態をもたらす生物からの抗原であってもよく、それらの生物には、Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ Ａ、ＢおよびＣ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ型（ＨＩＢ）、ならびにＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（例、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹ、ウレアーゼなど）が限定なしに含まれる。寄生性抗原の例には、マラリアおよびライム病をもたらす生物に由来する抗原が含まれる。

さらに、本明細書に記載される組成物および方法は、さまざまな悪性癌を処置するための手段を提供する。たとえば、本発明を用いて、目的とする癌に特異的な特定のタンパク質、たとえば活性化した癌遺伝子、胎児抗原、または活性化マーカーなどに対する体液性および細胞介在型免疫応答の両方を起こすことができる。こうした腫瘍抗原は以下を含む：さまざまなＭＡＧＥ（メラノーマ関連抗原Ｅ（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ Ｅ））のいずれか、ＭＡＧＥ１、２、３、４などを含む（Ｂｏｏｎ，Ｔ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ（Ｍａｒｃｈ １９９３）：８２−８９）；さまざまなチロシナーゼのいずれか；ＭＡＲＴ １（Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ））、変異体ｒａｓ；変異体ｐ５３；ｐ９７メラノーマ抗原；ＣＥＡ（癌胎児抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ））、その他。

本発明を用いて、診断および免疫精製の目的のために多数の抗原に対する抗体を増やす他に、広範囲の疾患を予防または処置できることが容易に明らかになる。

上に説明したとおり、本発明の組成物および方法はＨＣＶ抗原を利用してもよい。Ｃ型肝炎ウイルスのゲノムは典型的に約９，６００ヌクレオチドの単一のオープンリーディングフレームを含有し、これは転写されてポリタンパク質になる。このポリタンパク質の全長配列は、本明細書においてその全体を引用により援用するヨーロッパ公開３８８，２３２号および米国特許第６，１５０，０８７号に開示されている。表１に示されるとおり、ＨＣＶポリタンパク質は切断されて少なくとも１０個の異なる産物を生成し、その順番はＮＨ_２−コア−Ｅ１−Ｅ２−ｐ７−ＮＳ２−ＮＳ３−ＮＳ４ａ−ＮＳ４ｂ−ＮＳ５ａ−ＮＳ５ｂ−ＣＯＯＨである。コアポリペプチドは、ＨＣＶ−１に関して数えた位置１〜１９１に存在する（ＨＣＶ−１ゲノムについては、Ｃｈｏｏら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２４５１−２４５５を参照されたい）。このポリペプチドはさらにプロセシングされて、アミノ酸約１〜１７３を有するＨＣＶポリペプチドを生じる。エンベロープポリペプチドＥ１およびＥ２はそれぞれ位置約１９２〜３８３および３８４〜７４６に存在する。Ｐ７ドメインは位置約７４７〜８０９に見出される。ＮＳ２はタンパク質分解活性を有する膜内在性タンパク質であり、ポリタンパク質の位置約８１０〜１０２６に見出される。ＮＳ２は単独で、またはＮＳ３（位置約１０２７〜１６５７に見出される）と組合せて、ＮＳ２−ＮＳ３シスル（ｓｉｓｓｌｅ）結合を切断し、これは次にＮＳ３ Ｎ末端を生成して、セリンプロテアーゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性の両方を含む大きなポリタンパク質を放出する。位置約１０２７〜１２０７に見出されるＮＳ３プロテアーゼは、残りのポリタンパク質をプロセシングする働きをする。ヘリカーゼ活性は位置約１１９３〜１６５７に見出される。ポリタンパク質成熟の完了は、ＮＳ３セリンプロテアーゼによって触媒されるＮＳ３−ＮＳ４ａ接合部における自己触媒的切断によって起こる。その後のＮＳ３が介在するＨＣＶポリタンパク質の切断は、別のポリペプチドのＮＳ３分子によるポリタンパク質切断接合部の認識を伴うことが示される。これらの反応において、ＮＳ３はＮＳ３補助因子（位置約１６５８〜１７１１に見出されるＮＳ４ａ）と、２つのタンパク質（位置約１７１２〜１９７２に見出されるＮＳ４ｂおよび位置約１９７３〜２４２０に見出されるＮＳ５ａ）と、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（位置約２４２１〜３０１１に見出されるＮＳ５ｂ）とを解放する。

ＨＣＶポリタンパク質産物およびそれに由来する免疫原性ポリペプチドの配列は公知である（たとえば、本明細書においてその全体を引用により援用する米国特許第５，３５０，６７１号を参照）。たとえば、ＨＣＶポリタンパク質に由来するいくつかの一般的および特定的な免疫原性ポリペプチドが記載されている。たとえば、Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、欧州公開３１８，２１６号および３８８，２３２号；ＣｈｏｏらＳｃｉｅｎｃｅ（１９８９）２４４：３５９−３６２；ＫｕｏらＳｃｉｅｎｃｅ（１９８９）２４４：３６２−３６４；ＨｏｕｇｈｔｏｎらＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１−３８８；ＣｈｉｅｎらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９２）８９：１００１１−１００１５；ＣｈｉｅｎらＪ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．Ｈｅｐａｔｏｌ．（１９９３）８：Ｓ３３−３９；Ｃｈｉｅｎら、国際公開９３／００３６５号；Ｃｈｉｅｎ，Ｄ．Ｙ．，国際公開９４／０１７７８号などを参照されたい。これらの出版物は一般的なＨＣＶならびにＨＣＶポリペプチドの免疫学的試薬の製造および使用に対する広範囲の背景を提供する。したがって、簡潔のためにこれらの出版物の開示を本明細書において引用により援用する。

あらゆる所望の抗原性ＨＣＶポリペプチドを本発明とともに用いることができ、そこにはたとえばＨＣＶのＥ１および／またはＥ２エンベロープ糖タンパク質、ならびに非共有または共有相互作用のいずれかによって関連付けられたＥ１Ｅ２複合体が含まれる。こうした複合体は、エピトープを含むＥ１およびＥ２の免疫原性断片でできていてもよい。たとえば、Ｅ１ポリペプチドの断片は、分子の約５個のアミノ酸からほぼ全長まで、たとえばＥ１ポリペプチドの６、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、１８５個またはそれ以上のアミノ酸、または記載される数の間のあらゆる整数を含み得る。同様に、Ｅ２ポリペプチドの断片は、Ｅ２ポリペプチドの６、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、または３５０個のアミノ酸、または記載される数の間のあらゆる整数を含み得る。Ｅ１およびＥ２ポリペプチドは、同じかまたは異なるＨＣＶ株からのものであってもよい。たとえば、Ｅ２の高頻度可変領域に由来するエピトープ、たとえばアミノ酸３８４〜４１０または３９０〜４１０にわたる領域などがＥ２ポリペプチドに含まれていてもよい。Ｅ２配列またはＥ１Ｅ２複合体に組み込むための特に有効なＥ２エピトープは、この領域に由来する共通配列、たとえばＨＣＶ１型ゲノムのアミノ酸３９０〜４１０に対する共通配列などを含むエピトープである。Ｅ１およびＥ２の付加的なエピトープは公知であり、たとえば本明細書においてその全体を引用により援用するＣｈｉｅｎら、国際公開９３／００３６５号などに記載されている。

さらに、Ｅ１およびＥ２ポリペプチドは膜貫通ドメインのすべてまたは一部を失っていてもよい。膜アンカー配列は、ポリペプチドを小胞体に関連付けるために機能する。通常こうしたポリペプチドは、そのタンパク質を発現する生物を培養している生育培地に分泌できる。しかし、国際公開９８／５０５５６号に記載されるとおり、こうしたポリペプチドが細胞内でも回収されてもよい。生育培地への分泌は、いくつかの検出技術を用いて容易に定められ、その技術にはたとえばポリアクリルアミドゲル電気泳動など、およびたとえば１９９６年２月１５日に公開された国際公開９６／０４３０１号などに記載されるとおりの免疫沈降アッセイなどの免疫学的技術が含まれる。Ｅ１については、一般的にアミノ酸位置約３７０およびそれ以上（ＨＣＶ１ Ｅ１の番号付けに基づく）によって終結するポリペプチドは、ＥＲによって保持されるために生育培地に分泌されない。Ｅ２については、アミノ酸位置約７３１およびそれ以上（これもＨＣＶ１ Ｅ２配列の番号付けに基づく）によって終結するポリペプチドは、ＥＲによって保持されるために分泌されない。（たとえば１９９６年２月１５日に公開された国際公開９６／０４３０１号を参照。）なお、これらのアミノ酸位置は絶対的なものではなく、ある程度変動することがある。よって本発明は、膜貫通型結合ドメインを保持するＥ１およびＥ２ポリペプチドの使用を予期しており、加えて、アミノ酸約３６９およびそれ以下で終結するＥ１ポリペプチドおよびアミノ酸約７３０およびそれ以下で終結するＥ２ポリペプチドを含む、膜貫通型結合ドメインのすべてまたは一部を失ったポリペプチドも本発明によって表わされることが意図される。さらに、Ｃ末端トランケ−ションがＮ末端に向かって膜貫通ドメインを超えて伸長してもよい。よってたとえば、３６０などよりも低い位置で起こるＥ１トランケ−ションと、７１５などよりも低い位置で起こるＥ２トランケ−ションとも本発明に包含されている。トランケートされたＥ１およびＥ２ポリペプチドが意図される目的に対する機能を残すことだけが必要である。しかし、特に好ましいトランケートされたＥ１コンストラクトは、アミノ酸約３００を超えて伸長していないものである。最も好ましいのは、位置３６０において終結しているＥ１コンストラクトである。好ましいトランケートされたＥ２コンストラクトは、Ｃ末端トランケ−ションがアミノ酸位置約７１５を超えて伸長していないものである。特に好ましいＥ２トランケ−ションは、アミノ酸７１５〜７３０のいずれか、たとえば７２５などの後ろでトランケートされた分子である。トランケートされた分子が用いられるときは、どちらもトランケートされたＥ１およびＥ２分子を用いることが好ましい。

Ｅ２は複数の種として存在し（Ｓｐａｅｔｅら、Ｖｉｒｏｌ．（１９９２）１８８：８１９−８３０；Ｓｅｌｂｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９６）７０：５１７７−５１８２；Ｇｒａｋｏｕｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９３）６７：１３８５−１３９５；Ｔｏｍｅｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９３）６７：４０１７−４０２６）、Ｅ１およびＥ２ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端においてクリッピングおよびタンパク質分解が起こることがある。よって本発明において用いるためのＥ２ポリペプチドは、全長ＨＣＶ−１ポリタンパク質に関して数えて、ＨＣＶポリタンパク質の少なくともアミノ酸４０５〜６６１、たとえば４００、４０１、４０２．．．から６６１、たとえば３８４〜６６１、３８４〜７１５、３８４〜７４６、３８４〜７４９または３８４〜８０９、または３８４から６６１〜８０９の間のあらゆるＣ末端を含んでいてもよい。同様に、本発明において用いるための好ましいＥ１ポリペプチドは、ＨＣＶポリタンパク質のアミノ酸１９２〜３２６、１９２〜３３０、１９２〜３３３、１９２〜３６０、１９２〜３６３、１９２〜３８３、または１９２から３２６〜３８３の間のあらゆるＣ末端を含み得る。

ＥｌおよびＥ２ポリペプチドならびにその複合体は、アシアロ糖タンパク質として存在してもよい。こうしたアシアロ糖タンパク質は、たとえば末端糖鎖付加が遮断された細胞の使用によるものなど、当該技術分野において公知の方法によって生成される。これらのタンパク質がこうした細胞中で発現されてＧＮＡレクチンアフィニティークロマトグラフィーによって単離されるとき、ＥｌおよびＥ２タンパク質は自発的に凝集する。これらのＥｌＥ２凝集体を生成するための詳細な方法は、たとえば本明細書においてその全体を引用により援用する米国特許第６，０７４，８５２号などに記載されている。たとえば、ＥｌＥ２複合体は組換えによって、融合タンパク質として、またはたとえば目的とするＥ１およびＥ２ポリペプチドをコードするコンストラクトを宿主細胞に同時導入することなどによって、容易に生成される。同時導入はトランスまたはシスのいずれで達成することもでき、すなわち別個のベクターを用いて達成することも、Ｅ１およびＥ２遺伝子の両方を有する単一のベクターを用いて達成することもできる。単一のベクターを用いて行なわれるとき、単一組の調節領域によって両方の遺伝子が駆動されてもよいし、代替的には、遺伝子はベクター上の別個の調節領域によって駆動される別個の発現カセット中に存在してもよい。発現に続いて、Ｅ１およびＥ２タンパク質は自発的に結合する。代替的には、精製または半精製された形の、別々に生成された別個のタンパク質を混ぜ合せることによって複合体を形成してもよいし、タンパク質が分泌されるときには、タンパク質を発現する宿主細胞が培養されている培養培地を混合することによって複合体を形成してもよい。最後に、本発明のＥ１Ｅ２複合体は、所望の部分のＥ１を所望の部分のＥ２に融合させた融合タンパク質として発現されてもよい。

さらに、Ｅ１Ｅ２複合体は、前述のとおりのクリッピングおよびタンパク質分解性の切断によって、分子のヘテロ混合物として存在することがある。よってＥ１Ｅ２複合体を含む組成物は複数種のＥ１Ｅ２を含んでもよく、たとえばアミノ酸７４６で終結するＥ１Ｅ２（Ｅ１Ｅ２_７４６）、アミノ酸８０９で終結するＥ１Ｅ２（Ｅ１Ｅ２_８０９）、または前述のその他のさまざまなＥ１およびＥ２分子のいずれか、たとえば１〜２０アミノ酸のＮ末端トランケ−ションを有するＥ２分子、たとえばアミノ酸３８７、アミノ酸４０２、アミノ酸４０３などから始まるＥ２種などを含んでもよい。

ＥｌＥ２複合体は組換えによって、融合タンパク質として、またはたとえば目的とするＥ１およびＥ２ポリペプチドをコードするコンストラクトを宿主細胞に同時導入することなどによって、容易に生成される。同時導入はトランスまたはシスのいずれで達成することもでき、すなわち別個のベクターを用いて達成することも、Ｅ１およびＥ２遺伝子の両方を有する単一のベクターを用いて達成することもできる。単一のベクターを用いて行なわれるとき、単一組の調節領域によって両方の遺伝子が駆動されてもよいし、代替的には、遺伝子はベクター上の別個の調節領域によって駆動される別個の発現カセット中に存在してもよい。発現に続いて、Ｅ１およびＥ２タンパク質は自発的に結合する。代替的には、精製または半精製された形の、別々に生成された別個のタンパク質を混ぜ合せることによって複合体を形成してもよいし、タンパク質が分泌されるときには、そのタンパク質を発現する宿主細胞が培養されている培養培地を混合することによって複合体を形成してもよい。最後に、本発明のＥ１Ｅ２複合体は、所望の部分のＥ１を所望の部分のＥ２に融合させた融合タンパク質として発現されてもよい。

培地に分泌される全長またはトランケートされたＥ１およびＥ２タンパク質、ならびに細胞内で生成されたトランケートされたタンパク質からＥ１Ｅ２複合体を生成するための方法は、当該技術分野において公知である。たとえば、こうした複合体は、以下に記載されるとおりに組換えによって生成されてもよい：米国特許第６，１２１，０２０号；Ｒａｌｓｔｏｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９３）６７：６７５３−６７６１，Ｇｒａｋｏｕｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９３）６７：１３８５−１３９５；およびＬａｎｆｏｒｄら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９３）１９７：２２５−２３５。

本発明においてその他のＨＣＶポリペプチドを用いてもよい。たとえばコア領域に由来するＨＣＶポリペプチド、たとえばアミノ酸１〜１９１；アミノ酸１０〜５３；アミノ酸１０〜４５；アミノ酸６７〜８８；アミノ酸８６〜１００；８１〜１３０；アミノ酸１２１〜１３５；アミノ酸１２０〜１３０；アミノ酸１２１〜１７０の間に見出される領域に由来するポリペプチド、ならびにたとえば本明細書においてその開示の全体を引用により援用する以下の文献などにおいて同定されるコアエピトープのいずれかを対象の組成物および方法とともに使用できる：Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、米国特許第５，３５０，６７１号；ＣｈｉｅｎらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９２）８９：１００１１−１００１５；ＣｈｉｅｎらＪ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．Ｈｅｐａｔｏｌ．（１９９３）８：Ｓ３３−３９；Ｃｈｉｅｎら、国際公開９３／００３６５号；Ｃｈｉｅｎ，Ｄ．Ｙ．，国際公開９４／０１７７８号；および米国特許第６，１５０，０８７号。

加えて、ウイルスの非構造（ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ）領域に由来するポリペプチドも本発明において使用できる。ＨＣＶポリタンパク質のＮＳ３／４ａ領域が報告されており、このタンパク質のアミノ酸配列および全体構造は、ＹａｏらＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（１９９９年１１月）７：１３５３−１３６３に開示されている。本明細書においてその全体を引用により援用するＤａｓｍａｈａｐａｔｒａらの米国特許第５，８４３，７５２号も参照されたい。上記に示すとおり、対象製剤には天然配列または免疫原性類似体のいずれが用いられてもよい。Ｄａｓｍａｈａｐａｔｒａらの米国特許第５，８４３，７５２号およびＺｈａｎｇらの米国特許第５，９９０，２７６号は、どちらもＮＳ３／４ａの類似体およびその作成方法を記載している。

さらに、対象組成物および方法において用いるためのポリペプチドは、ＨＣＶポリタンパク質のＮＳ３領域に由来していてもよい。いくつかのこうしたポリペプチドが公知であり、そこにはｃ３３ｃおよびｃ１００領域に由来するポリペプチド、ならびにｃ２５などのＮＳ３エピトープを含む融合タンパク質が含まれるがこれらに限定されない。これらおよびその他のＮＳ３ポリペプチドは本組成物において有用であり、当該技術分野において公知であり、たとえば本明細書においてその開示の全体を引用により援用するＨｏｕｇｈｔｏｎら、米国特許第５，３５０，６７１号；ＣｈｉｅｎらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９２）８９：１００１１−１００１５；ＣｈｉｅｎらＪ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．Ｈｅｐａｔｏｌ．（１９９３）８：Ｓ３３−３９；Ｃｈｉｅｎら、国際公開９３／００３６５号；Ｃｈｉｅｎ，Ｄ．Ｙ．，国際公開９４／０１７７８号；および米国特許第６，１５０，０８７号などに記載されている。

さらに、国際公開９７／４４４６９号に記載されるとおりの複数のエピトープ融合抗原（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｆｕｓｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎｓ）（「ＭＥＦＡ」と名付けられる）が本発明において用いられてもよい。こうしたＭＥＦＡは、さまざまなウイルス領域の２つまたはそれ以上に由来する複数のエピトープを含む。エピトープは好ましくは２つ以上のＨＣＶ株からのものであることによって、単一のワクチンにおいてＨＣＶの複数の株に対する保護の付加的能力を与える。

なお、利便性のために、さまざまなＨＣＶ領域は一般的に、ＨＣＶ−１ａのゲノムによってコードされるポリタンパク質に関するアミノ酸数に関して定義されており、これはＣｈｏｏら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２４５１に記載されるとおりであり、ここではイニシエータのメチオニンが位置１に指定される。しかし、本発明とともに用いるための抗原は、ＨＣＶ−１ａ配列に由来するものに限定されない。ＨＣＶのあらゆる株または単離体が、本発明とともに用いるための抗原配列を提供するための基礎となることができる。これに関して、２つの単離体からの配列を、それらの配列が最大のアライメントになるような態様で整列させることによって、別のＨＣＶ単離体中の対応する領域を容易に定めることができる。

ＨＣＶのさまざまな株および単離体が当該技術分野において公知であり、これらはヌクレオチドおよびアミノ酸配列の変化によって互いに異なっている。たとえば、単離体ＨＣＶ Ｊ１．１は、Ｋｕｂｏ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｊａｐａｎ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：１０３６７−１０３７２；Ｔａｋｅｕｃｈｉら（１９９０）Ｇｅｎｅ ９１：２８７−２９１；Ｔａｋｅｕｃｈｉら（１９９０）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７１：３０２７−３０３３；およびＴａｋｅｕｃｈｉら（１９９０）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：４６２６に記載されている。２つの独立した単離体ＨＣＶ−ＪおよびＢＫの完全なコード配列は、それぞれＫａｔｏら、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：９５２４−９５２８およびＴａｋａｍｉｚａｗａら、（１９９１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：１１０５−１１１３に記載されている。ＨＣＶ−１単離体は、Ｃｈｏｏら（１９９０）Ｂｒｉｔ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．４６：４２３−４４１；Ｃｈｏｏら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２４５１−２４５５およびＨａｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１７１１−１７１５に記載されている。ＨＣＶ単離体ＨＣ−Ｊ１およびＨＣ−Ｊ４は、Ｏｋａｍｏｔｏら（１９９１）Ｊａｐａｎ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．６０：１６７−１７７に記載されている。ＨＣＶ単離体のＨＣＴ１８．ａｂｏｕｔ．、ＨＣＴ２３、Ｔｈ、ＨＣＴ２７、ＥＣ１およびＥＣ１０は、Ｗｅｉｎｅｒら（１９９１）Ｖｉｒｏｌ．１８０：８４２−８４８に記載されている。ＨＣＶ単離体のＰｔ−１、ＨＣＶ−Ｋ１およびＨＣＶ−Ｋ２は、Ｅｎｏｍｏｔｏら（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７０：１０２１−１０２５に記載されている。ＨＣＶ単離体Ａ、Ｃ、ＤおよびＥは、Ｔｓｕｋｉｙａｍａ−Ｋｏｈａｒａら（１９９１）Ｖｉｒｕｓ Ｇｅｎｅｓ ５：２４３−２５４に記載されている。本発明の組成物および方法において用いるためのＨＣＶポリペプチドは、ＨＣＶの上記に引用された株のいずれかから得ることも、感染患者の組織または体液から単離された新たに発見された単離体から得ることもできる。

本発明において有用なその他の抗原は、ＨＩＶに由来するものである。ＨＩＶゲノムは、Ｇａｇ（ｐ５５ｇａｇ）、Ｐｏｌ、Ｖｉｆ、Ｖｐｒ、Ｔａｔ、Ｒｅｖ、Ｖｐｕ、Ｅｎｖおよび／またはＮｅｆとして公知の領域を含む。これらの領域のいずれかからのＨＩＶ抗原、ならびにたとえばＨＩＶサブタイプＢおよびＨＩＶサブタイプＣなどのさまざまなサブタイプのいずれか、ならびにさまざまな単離体のいずれかからのＨＩＶ抗原を本発明とともに使用できる。通常の当業者には、本開示の教示に鑑みて、他のＨＩＶ株または変異体（例、単離体ＨＩＶ_ＩＩＩｂ、ＨＩＶ_ＳＦ２、ＨＩＶ−１_{ＳＦ１６２}、ＨＩＶ−１_{ＳＦ１７０}、ＨＩＶ_ＬＡＶ、ＨＩＶ_ＬＡＩ、ＨＩＶ_ＭＮ、ＨＩＶ−１_{ＣＭ２３５}、ＨＩＶ−１_ＵＳ４、多様なサブタイプからのその他のＨＩＶ−１株（例、サブタイプＡからＧおよびＯ）、ＨＩＶ−２株および多様なサブタイプ、ならびにサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）（たとえば以下を参照：Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ編、１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第２版（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編、１９９１）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ Ｎ，Ｄ Ｍ Ｋｎｉｐｅ，Ｐ Ｍ Ｈｏｗｌｅｙ，編集，１９９６，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．；これらおよびその他の関連ウイルスの説明について）における対応する領域を、たとえば配列比較プログラム（例、ＢＬＡＳＴおよび本明細書に記載されるその他のプログラム）または構造的特徴の識別およびアライメント（例、さまざまな領域を識別できる、本明細書に記載される「ＡＬＢ」プログラムなどのプログラム）などを用いて、どのように定めるかが容易に明らかになる。

ＨＩＶのエンベロープタンパク質は、約１６０ｋｄの糖タンパク質（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）（ｇｐ１６０）である。宿主細胞のウイルス感染の際に、ｇｐ１６０は宿主細胞プロテアーゼによって切断されて、ｇｐ１２０および膜内在性タンパク質ｇｐ４１を形成する。ｇｐ４１部分はビリオンの膜二重層において係留されているが、ｇｐ１２０セグメントは周囲環境に突出している。ｇｐ１２０およびｇｐ４１はより共有結合的に関連しており、ビリオンおよび感染細胞の表面から遊離ｇｐ１２０が放出され得る。ｇｐ１２０ポリペプチドは、宿主細胞への進入を仲介する助けをする。最近の研究から、ＣＤ４がｇｐ１２０に結合することによって、Ｅｎｖの立体構造変化が誘導されて、共受容体（例、ケモカイン受容体）への結合およびそれに続くウイルスの細胞への進入が可能になることが示された。（Ｗｙａｔｔ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９３：７０５−７１１；Ｋｗｏｎｇ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９３：６４８−６５９。）ＣＤ４は、ｇｐ１２０の外側ドメインと、内側ドメインと、架橋シートとの界面に形成される窪みに結合される。

所望の領域が同定されてから、さまざまなＨＩＶ抗原を得るための組換え法は当該技術分野において周知である。本明細書においてその全体を引用により援用する米国特許第５，６１４，６１２号も参照されたい。

さらに、これらのＨＩＶ領域のいずれかの修正された配列、たとえば修正されたｇｐ１２０およびｐ５５ｇａｇなどを本発明において用いることができる。最適なコドン使用に対して配列を修正することによって、ヒトのコドンを模して毒性を低減できる。こうした修正配列は当該技術分野において公知であり、その配列およびその生成法は、すべて本明細書においてその全体を引用により援用する、共有される国際公開００／３９３０４号および国際公開００／３９３０２号ならびに国際公開９８／３４６４０号に詳細に記載されている。

本発明は、バクテリア性髄膜炎および敗血症の原因物質であるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓなどのＮｅｉｓｓｅｒｉａ種に由来する抗原に対しても有用である。髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉ）は、莢膜および細胞壁抗原の免疫学的特徴に基づいて血清学的な群に分けられる。現在認識されている血清群は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ−１３５、Ｘ、Ｙ、Ｚおよび２９Ｅを含む。本発明の目的に対して、髄膜炎菌抗原はさまざまな公知の血清群のいずれに由来していてもよい。これらの群のうち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ−１３５およびＹを含むいくつかから、血清群特異性の原因となる多糖が精製されている。血清群Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ１３５によってもたらされる髄膜炎菌性疾患に対する効果的な莢膜多糖ベースのワクチンが開発されており、これらのワクチン抗原のいずれも本組成物および方法において使用できる。たとえば、本発明において使用できるさまざまな髄膜炎菌タンパク質抗原の説明については、すべて本明細書においてその全体を引用により援用する国際公開９６／２９４１２号、国際公開９６／１４０８６号、国際公開９９／５７２８０号、国際公開００／２２４３０号、国際公開９９／２４５７８号、国際公開９９／３６５４４、ならびにＴｅｔｔｅｌｉｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８０９−１８１５およびＰｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８１６−１８２０を参照されたい。加えて、たとえばＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹからのものなどの糖抗原、たとえばＣｏｓｔａｎｔｉｎｏら（１９９２）Ｖａｃｃｉｎｅ １０：６９１−６９８およびＣｏｓｔａｎｔｉｎｏら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１２５１−１２６３に記載されるものなども本発明において使用できる。その他の有用なＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原には、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｒｅａに由来するもの、たとえば国際公開９９／５７２８０号、国際公開９９／２４５７８号および国際公開９９／３６５４４号に記載されるものなどが含まれる。

たとえば、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ（本明細書において「ＭｅｎＢ」と名付ける）は、米国および欧州に居住する幼児および子供のバクテリア性髄膜炎の原因として大きなパーセンテージを占める。したがって、ＭｅｎＢに由来する抗原、たとえばＭｅｎＢゲノムのさまざまなオープンリーディングフレーム（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ：ＯＲＦ）によって発現される抗原のいずれかなどは、本組成物および方法とともに特に有用である。たとえば国際公開９９／５７２８０号を参照されたい。こうした抗原の例には、ＭｅｎＢタンパク質９６１および２８７が含まれる。本発明において使用するためのその他の髄膜炎菌性抗原には、莢膜ＭｅｎＢ多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）の誘導体（本明細書において「ＭｅｎＢ ＰＳ誘導体」と名付ける）が含まれる。ＭｅｎＢ ＰＳ誘導体の例は、欧州公開５０４，２０２Ｂ号および米国特許第４，７２７，１３６号に記載されている。米国特許第６，０３０，６１９号に記載されるような、ＭｅｎＢ ＰＳの一意のエピトープの分子擬態も有用である。加えて、たとえば国際出願ＰＣＴ／ＩＢ０１／００１６６号、Ｂｊｕｎｅら（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ ３３８：１０９３−１０９６、Ｆｕｋａｓａｗａら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：２９５１−２９５８およびＲｏｓｅｎｑｕｉｓｔら（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．９２：３２３−３３３に記載されるものなどの、ＭｅｎＢからの外膜小胞調製物。上記の文献はすべて、本明細書においてその全体を引用により援用する。

ＭｅｎＢのＭＣ５８株の完全なゲノム配列が報告されている。Ｔｅｔｔｅｌｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２８７：１８０９。全ゲノム配列決定によって、血清殺菌抗体応答を誘発したいくつかのタンパク質が同定された。これらのタンパク質の多くは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの間で高度に保存された配列を有する。Ｐｉｚｚａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２８７：１８１６。したがって、こうした抗原も本発明において使用できる。

上述のとおり、いくつかの実施形態において、抗原は、Ｏ’Ｈａｇａｎらに対する米国特許第６，５３４，０６４号およびＯ’Ｈａｇａｎらに対する公開番号ＵＳ２００５／０１０７３２２号に記載されるようなタンパク質粒子の形で提供されてもよい。こうした粒子は、上述のものおよびその他から選択される好適な抗原から形成されてもよい。

たとえば、いくつかの実施形態において、抗原は以下のステップを含むプロセスによって生成される微粒子である：（ａ）水溶液から粒子を形成するステップ；（ｂ）安定化処理によって抗原粒子を安定化するステップ；および（ｃ）水溶液から抗原粒子を回収するステップ。

いくつかの実施形態において、抗原微粒子を生成するプロセスは、溶媒蒸発技術を含む。溶媒蒸発技術は当業者に公知であり、本明細書に記載されている。

いくつかの実施形態において、抗原微粒子を生成するプロセスは沈降剤の使用に基づくものであり、それはたとえば抗原の水溶液に沈降剤を加えて、得られた混合物を撹拌して粒子を形成することなどによるものである。沈降剤の例は、油、炭化水素またはコアセルベーション剤の１つまたはそれ以上を含むが、それに限定されない。いくつかの実施形態において、このプロセスはさらに酸を含み得る。酸の例は、酢酸、グリコール酸、ヒドロキシ酪酸、塩酸または乳酸を含むが、それに限定されない。

たとえば、熱処理または化学的架橋剤による処理の１つまたはそれ以上などを含み得る安定化処理が行なわれてもよい。熱処理または化学的架橋のプロセスは公知である。たとえば、Ｏ’Ｈａｇａｎらに対する米国特許第６，５３４，０６４号およびＯ’Ｈａｇａｎらに対する公開番号ＵＳ２００５／０１０７３２２号を参照されたい。

１つまたはそれ以上の生物に由来する抗原の組合せを便利に用いて、単一のワクチンにおいて複数の病原体に対する免疫を誘発できる。複数病原体ワクチン中の抗原の例は、ＭｅｎＣおよびＨｉｂに由来するバクテリア表面オリゴ糖の組合せが、たとえばＣＲＭ_１９７として公知のジフテリア毒素の非毒性変異体などの、バクテリア毒素に由来する非毒性変異体担体に結合体化されたものである。この結合体はバクテリア性髄膜炎の予防に対して有用であり、１９９６年５月１７日に公開された国際公開９６／１４０８６号に記載されている。

Ｆ．追加の構成要素
本発明の組成物は、さまざまな追加の構成要素を任意に含む。こうした任意の追加構成要素は、以下に記載されるものなどの医薬的に許容できる賦形剤および補助的な免疫学的アジュバントその他を含む。

上に示すとおり、微粒子が固体微粒子であるとき、任意の追加構成要素は、たとえば以下のとおりであってもよい：（ａ）微粒子内に確立される、たとえば微粒子の別個の集団を含む微粒子内に封入、被包、溶解または分散される、（ｂ）微粒子に付着される、たとえば微粒子の別個の集団を含む微粒子の表面に吸着もしくは結合体化される、または（ｃ）別様でさまざまな程度に微粒子に関連付けられる、たとえば液体分散中で微粒子と混合される、固体組成物中で微粒子と混合される（例、微粒子とともに凍結乾燥される）など。

微粒子が液体微粒子（例、水中油型エマルションにおける油小滴など）であるとき、任意の追加構成要素は、独立にたとえば以下のとおりであってもよい：エマルションの油相内に溶解または分散される（油小滴の別個の集団を含む）、エマルションの水相内に溶解または分散される、および／またはエマルションの水相および油相の間の界面に配置される。

任意の追加構成要素は補助的な免疫学的アジュバントを含み、この免疫学的アジュバントは免疫原性組成物の効果をさらに高めるために用いられてもよい。たとえば、こうした免疫学的アジュバントは、たとえば同じ組成物中で（例、先行する段落に記載されるとおり）、または別個の組成物中で、本発明の免疫原性組成物と同時に投与されてもよい。こうしたアジュバントは、本発明の免疫原性組成物の前または後に投与されてもよい。

補助的な免疫学的アジュバントは、以下を含むがこれらに限定されない：（１）サポニンアジュバント、たとえばＱｕｉｌ ＡまたはＱＳ２１（例、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ））が用いられてもよいし、それから生成されるＩＳＣＯＭ（免疫賦活性複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ））であってもよく、このＩＣＯＭＳは付加的な界面活性剤を欠いていてもよい、例、国際公開００／０７６２１号；（２）Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ（ＣＦＡ）およびＩｎｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ（ＩＦＡ）；（３）サイトカイン、たとえばインターロイキン（例、ＩＬ−Ｉ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（国際公開９９／４４６３６号）など）、インターフェロン（例、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ：Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ：ＴＮＦ）など；（４）リン脂質アジュバントであって、リポ多糖およびリポ糖リン酸塩アジュバント、たとえばモノホスホリルリピドＡ（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａ：ＭＰＬ）、３−Ｏ−脱アシルＭＰＬ（３−Ｏ−ｄｅａｃｙｌａｔｅｄ ＭＰＬ：３ｄＭＰＬ）などを含む、例、ＧＢ−２２２０２２１号、ＥＰ−Ａ−０６８９４５４号、任意には、肺炎球菌の糖とともに用いられるときにはミョウバンが実質的に不在である、例、国際公開００／５６３５８号；ならびに、たとえば米国特許第６，３５５，２５７号に記載されるものなどのアミノアルキルグルコサミンリン酸化合物、およびたとえば公開番号ＵＳ２００４／０２０２６６９号に記載されるものなどの直鎖アルカン基を有するリン脂質；（５）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む免疫賦活性オリゴヌクレオチド（

国際特許出願国際公開９６／０２５５５号、国際公開９８／１６２４７号、国際公開９８／１８８１０号、国際公開９８／４０１００号、国際公開９８／５５４９５号、国際公開９８／３７９１９号および国際公開９８／５２５８１号）、すなわち少なくとも１つのＣＧジヌクレオチド（シトシンヌクレオチドに続くグアノシンヌクレオチド）を含有し、シトシンの代わりに５つのメチルシトシンが任意に用いられる；（６）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル、例、国際公開９９／５２５４９号；（７）オクトキシノールと組合せたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（国際公開０１／２１２０７号）またはオクトキシノールなどの少なくとも１つの付加的な非イオン性界面活性剤と組合せたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（国際公開０１／２１１５２号）；（８）サポニンおよび免疫賦活性オリゴヌクレオチド（例、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（国際公開００／６２８００号）；（９）サポニンおよび水中油型エマルション、例、国際公開９９／１１２４１号；（１０）サポニン（例、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（任意には＋ステロール）例、国際公開９８／５７６５９号；（１１）バクテリアのＡＤＰリボシル化毒素、たとえばコレラ毒素（ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ：ＣＴ）、百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ ｔｏｘｉｎ：ＰＴ）またはＥ． ｃｏｌｉの熱不安定性毒素（ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ ｔｏｘｉｎ：ＬＴ）などの無毒化変異体、特にＬＴ−Ｋ６３（位置６３における野生型アミノ酸がリジンに置換されている）、ＬＴ−Ｒ７２（位置７２における野生型アミノ酸がアルギニンに置換されている）、ＣＴ−Ｓ１０９（位置１０９における野生型アミノ酸がセリンに置換されている）、およびＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（位置９における野生型アミノ酸がリジンに置換されており、位置１２９がグリシンに置換されている）（たとえば国際公開０９３／１３２０２号および国際公開０９２／１９２６５号などを参照）；（１２）アミノアルキルグルコサミニド４リン酸塩（ａｍｉｎｏａｌｋｙｌ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ ４−ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ：ＡＧＰ’ｓ）、例、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ．；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１９９９年８月２日；９（１５）：２２７３−８を参照；（１３）リポ多糖擬態（モノホスホリルリピドＡ擬態を含む）、たとえばＨａｗｋｉｎｓ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ ａｌ；Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２００２年２月；３００（２）：６５５−６１および米国特許第６，２９０，９７３号に記載される非糖リン脂質（例、二糖を欠く簡略化したリピドＡ類似体）など；（１４）天然または合成二本鎖ＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ）（「ｄｓＲＮＡ」）を含むアジュバントであって、一般的に断続的なリボグアニル酸−リボシチジル酸（ｒｉｂｏｇｕａｎｙｌｉｃ ａｃｉｄ−ｒｉｂｏｃｙｔｉｄｙｌｉｃ ａｃｉｄ）（［ｒＧ−ｒＣ］）およびリボアデニル酸−ポリリボウリジル酸（ｒｉｂｏａｄｅｎｙｌｉｃ ａｃｉｄ−ｐｏｌｒｉｂｏｕｒｉｄｙｌｉｃ ａｃｉｄ）（［ｒＡ−ｒＵ］）塩基対で構成される；さらなる情報については、たとえば共有される国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０２／３０４２３号を参照；（１５）ムラミルペプチド、たとえばＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−ｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ｔｈｒｅｏｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ：ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（Ｎ−ａｃｔｅｙｌ−ｎｏｒｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕａｔｍｅ：ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕａｔｍｉｎｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｉｎｅ−２−（１’−２’−ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｈｕｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｏｘｙ）−ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ：ＭＴＰ−ＰＥ）など；（１６）チオセミカルバゾン化合物、たとえば国際公開０４／６０３０８号に記載されるものなど；（１７）トリプタントリン化合物、たとえば国際公開０４／６４７５９号に記載されるものなど；（１８）ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）製剤、たとえばＡｎｄｒｉａｎｏｖら（１９９８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １９（１−３）：１０９−１１５およびＰａｙｎｅら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３１（３）：１８５−１９６などに記載されるものなど；（１９）リピドＡ誘導体であって、ＯＭ−１７４などのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉからのリピドＡの誘導体を含み、これはたとえばＭｅｒａｌｄｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：２４８５−２４９１およびＰａｊａｋら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：８３６−８４２などに記載される；ならびに（２０）組成物の有効性を高める免疫賦活剤として作用するその他の物質。

アジュバントの付加的な例については、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．およびＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９５）を参照されたい。

Ｇ．製剤および投与
上記に示すとおり、本発明の組成物の抗原、イミダゾキノリン、またはさまざまな補助的構成要素は、たとえば微粒子製造プロセスの間にこれらの種を導入することによって、固体または液体微粒子内に確立（例、封入、被包、溶解または分散）されてもよい。抗原、イミダゾキノリン、またはさまざまな補助的構成要素は、たとえばこれらの種を予め形成した微粒子に導入することによって、微粒子に付着（例、結合体化または吸着）されるか、または別様で微粒子に関連付けられてもよい。吸着およびその他の関連付けは、これらの種と微粒子とを単純に混合することによって確立されてもよい。こうした種の微粒子への結合体化は、カルボジイミド結合および溶解性プロファイルを含む、当該技術分野において公知のさまざまな結合化学に基づいていてもよい。いくつかの実施形態において、抗原、イミダゾキノリン、またはさまざまな補助的構成要素は、たとえば液体分散中で微粒子と混合されたり、固体組成物中で微粒子と混合されたり（例、微粒子とともに凍結乾燥される）などすることによって、別様でさまざまな程度に微粒子に関連付けられる。

本発明の組成物は通常、１つまたはそれ以上の医薬的に許容できる賦形剤を含む。たとえば、水、食塩水、グリセロール、エタノールなどの医薬的に許容できる媒体が用いられてもよい。たとえば湿潤剤または乳化剤、浸透圧剤、生物学的緩衝物質など、その他の賦形剤が存在してもよい。生物学的緩衝液は実質的に、薬理的に許容でき、かつ製剤に所望のｐＨすなわち生理的範囲のｐＨを提供するようなあらゆる溶液であり得る。その例には、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびヒスチジン緩衝液、ならびにリン酸緩衝食塩水、トリス緩衝食塩水、Ｈａｎｋ’ｓ緩衝食塩水などを含む食塩水緩衝液の組合せが含まれる。浸透圧剤の例は、塩、砂糖などを含む。

最終的な剤形に依存して、当該技術分野において公知のその他の賦形剤も導入されてもよく、そこには結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、グライダント（流れ促進剤）、圧縮補助剤、保存剤、懸濁／分散剤、膜形成剤／コーティングなどが含まれる。

調製後、本発明の組成物は、たとえば注射などによって非経口的に投与され得る。組成物は、皮下、腹膜内、静脈内または筋内のいずれかに注射され得る。その他の投与モードは、経口および肺投与、座薬、粘膜および経真皮適用を含む。投薬処置は単一投与計画であっても、複数投与計画であってもよい。複数投与計画においては、１〜１０個の別個の用量によって一次コースのワクチン接種が行なわれた後に、免疫応答を維持および／または強化するために選択される時間間隔にて他の用量が与えられてもよく、たとえば１〜４ヶ月にて第２の用量が与えられ、必要であれば数ヶ月後にその後の用量が与えられてもよい。投与計画は少なくとも部分的に、対象の要求することによって決定され、医師の判断に依存して決まる。さらに、疾患の予防が望まれるとき、一般的にワクチンは目的とする病原体による一次感染よりも前、または腫瘍細胞の出現よりも前に投与される。治療的処置が望まれるとき、一般的にワクチンは一次感染または腫瘍細胞の出現の後に投与される。

いくつかの実施形態において、本発明の組成物を部位特異的標的送達に用いることができる。たとえば、肺、肝臓、脾臓、血液循環または骨髄を標的とするために組成物の静脈内投与を用いることができる。

以下は、本発明を実行するための特定の実施形態の例である。実施例は例示的な目的のためにのみ提供され、いかなる態様でも本発明の範囲を限定することは意図されない。

使用される数値（例、量、温度など）に関する正確さを確実にするために努力したが、ある程度の実験誤差および偏差は当然許されるべきである。

（実施例１）
製剤調製。

この実施例に対する材料は次のとおりである：（１）ＲＧ５０３ ＰＬＧ、ラクチド／グリコリド共重合体比５０／５０を有し、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＵＳＡより得られる、（２）ＲＧ５０２Ｈ ＰＬＧ、ラクチド／グリコリド共重合体比５０／５０を有し、かつ遊離カルボキシル末端基を有し、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＵＳＡより得られる、（３）ジオクチルスルホサクシネート（ＤＳＳ）、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡより得られる、（４）イミダゾキノリン０９０（Ｖａｌｉａｎｔｅらに対する国際公開２００６／０３１８７８号およびＳｕｔｔｏｎらに対する国際公開２００７／１０９８１０号に合成が記載される）。

溶媒蒸発技術を用いて、被包されたイミダゾキノリン０９０を有するアニオン性ＰＬＧ微粒子を調製した。簡単には、ＩＫＡホモジナイザーを用いて、４ｍＬの塩化メチレン中の１５％ｗ／ｖポリマー溶液（ＲＧ５０３またはＲＧ５０２Ｈ）を１．０ｍＬのＰＢＳ１×とともに高速で乳化することによって、微粒子を調製した。イミダゾキノリン０９０は乳化前に油相に分散されており、ＰＬＧに関して１％ｗ／ｗに等しい量で微粒子製剤に用いられた。次いでこの一次エマルションを、ＤＳＳ（０．５％ｗ／ｗ）を含有する３２ｍＬの蒸留水に加え、Ｏｍｎｉホモジナイザーを用いて均質化した。その結果ｗ／ｏ／ｗエマルションが形成され、このエマルションを室温にて１２時間撹拌することによって塩化メチレンを蒸発させた。

上記の被包されたイミダゾキノリン０９０を有するＰＬＧ微粒子に抗原を吸着させることによって、製剤を形成した。抗原であるＭｅｎＢ２８７タンパク質は、実験用ロッカー（ｌａｂ ｒｏｃｋｅｒ）上で４℃にて一晩、１％ｗ／ｗＰＬＧの量で粒子に吸着させた。糖（再構成体積の４．５％のマンニトールおよび１．５％のショ糖）を加え、次いで製剤の一定分量を小さなガラスバイアルに入れて凍結乾燥した。

凍結乾燥した抗原吸着ＰＬＧ微粒子を次の手順で形成した：溶媒蒸発技術を用いてアニオン性ＰＬＧ微粒子を調製した。簡単には、ＩＫＡホモジナイザーを用いて、４ｍＬの塩化メチレン中の６％ｗ／ｖポリマー溶液（ＲＧ５０３）を１．０ｍＬのＰＢＳ１×とともに高速で乳化することによって、微粒子を調製した。次いでこの一次エマルションを、ＤＳＳ（０．０５％ｗ／ｗ）を含有する３２ｍＬの蒸留水に加え、Ｏｍｎｉホモジナイザーを用いて均質化した。その結果ｗ／ｏ／ｗエマルションが形成され、このエマルションを室温にて１２時間撹拌することによって塩化メチレンを蒸発させた。抗原であるＭｅｎＢ２８７を、実験用ロッカー上で４℃にて一晩、１％ｗ／ｗＰＬＧの量で上記アニオン性ＰＬＧ微粒子に吸着させることによって製剤を形成した。糖（再構成体積の４．５％のマンニトールおよび１．５％のショ糖）を加え、次いで製剤の一定分量を小さなガラスバイアルに入れて凍結乾燥した。

前の段落に従って、再構成した凍結乾燥抗原吸着ＰＬＧ微粒子にイミダゾキノリン０９０溶液（１００μｇ／ｍｌ）を加えることによって、可溶性イミダゾキノリン０９０製剤を形成した。１０％ｗ／ｗＰＬＧの量に可溶性イミダゾキノリン０９０を加えた。抗原用量は１μｇであった。

ＭｅｎＢ２８７タンパク質抗原を、実験用ロッカー上で４℃にて一晩、１％ｗ／ｗＰＬＧの量でイミダゾキノリン０９０吸着ＰＬＧ微粒子に吸着させることによって、共凍結乾燥されたイミダゾキノリン０９０製剤を形成した。イミダゾキノリン０９０吸着ＰＬＧ微粒子は、上述のとおり形成されたアニオン性ＰＬＧ微粒子にイミダゾキノリン０９０を吸着させることによって形成され、これはイミダゾキノリン０９０の溶液（１００ｕｇ／ｍｌ）をＰＬＧ微粒子（１μｇの抗原を含有する群に対して１０％ｗ／ｗＰＬＧ）に加えることによって行なわれ、吸着は実験用ロッカー上で４℃にて一晩行なわれた。糖（再構成体積の４．５％のマンニトールおよび１．５％のショ糖）を加え、次いで製剤の一定分量を小さなガラスバイアルに入れて凍結乾燥した。

（実施例２）
インビトロ放出プロファイル。

次の手順によってインビトロ放出を測定した：上記イミダゾキノリン０９０含有製剤の各々のバイアルを室温にてロッカー上に保持した（凍結乾燥した製剤を水中に再構成した後）。０、７日、１４日、２８日および４２日の時間にサンプルを回収して遠心分離した。ＲＰ−ＨＰＬＣによって上清中でイミダゾキノリン０９０を測定した。

結果を図１に示す。図１から分かるとおり、可溶性製剤はイミダゾキノリン０９０の即時放出を行ない、共凍結乾燥したイミダゾキノリン０９０製剤からの放出は本質的に即時的であり、被包されたイミダゾキノリン０９０（ＲＧ５０２Ｈを使用）は２８日までに本質的にすべて放出され、被包されたイミダゾキノリン０９０（ＲＧ５０３を使用）のかなりの量が４２日後にも放出されずに残った。

（実施例３）
インビボ研究。

下記の表１における群１「ＰＬＧ／２８７」に対して、実施例１と同様に調製した、動物当り０．１ｍｇのＰＬＧおよび１μｇの吸着２８７抗原を含有するＰＬＧ／２８７バイアルを、免疫化のときに注射用水（Ｗａｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）で再構成した。

下記の表１における群２「ＰＬＧ／２８７＋可溶性０９０」に対して、ＭｅｎＢ２８７（実施例１と同様に調製した、動物当り０．１ｍｇのＰＬＧに吸着した１μｇの２８７）を含有するバイアルを注射用水で再構成し、免疫化のときに可溶性イミダゾキノリン０９０を加えた（動物当り１０μｇ）。

下記の表１における群３「ＰＬＧ／共凍結乾燥０９０／２８７」に対して、実施例１と同様に調製した、ＰＬＧ（動物当り０．１ｍｇ）ならびに共凍結乾燥した吸着イミダゾキノリン０９０（動物当り１０μｇ）および吸着ＭｅｎＢ２８７（動物当り１μｇ）を含有するバイアルを、免疫化のときに注射用水で再構成した。

下記の表１における群４「ＲＧ５０３ＰＬＧ／０９０被包／２８７」に対して、実施例１と同様に調製した、ＰＬＧ ＲＧ５０３（動物当り０．１ｍｇ）と被包イミダゾキノリン０９０（動物当り１０μｇ）と吸着ＭｅｎＢ２８７（動物当り１μｇ）とを含有するバイアルを、免疫化のときに注射用水で再構成した。

下記の表１における群４「ＲＧ５０２Ｈ／０９０被包／２８７」に対して、実施例１と同様に調製した、ＰＬＧ ＲＧ５０２Ｈ（動物当り０．１ｍｇ）と被包イミダゾキノリン０９０（動物当り１０μｇ）と吸着ＭｅｎＢ２８７（動物当り１μｇ）とを含有するバイアルを、免疫化のときに注射用水で再構成した。

すべての群に対して、１０匹のメスのＣＤ−１マウスの群に０、２１日および３５日にサンプルを筋肉内注射した。３９日および５６日にＳｉｎｇｈ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２に記載されるとおりに血清ＥＬＩＳＡ力価を分析し、５６日にＰｉｚｚａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７（５４５９）：１８１６−１８２０に記載されるとおりに血清殺菌活性（ｓｅｒｕｍ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ：ＳＢＡ）を分析した。ＳＢＡ分析に用いたＭｅｎＢの株は２９９６である。

結果を下の表１に示す。表から分かるとおり、イミダゾキノリン０９０をＲＧ５０３ＰＬＧに封入する（群４）ことによって、吸着ＭｅｎＢ２８７単独（群１）および吸着ＭｅｎＢ２８７と可溶性イミダゾキノリン０９０（群２）に比べて抗体力価（ＩｇＧ）が約２倍、血清殺菌力価（ＳＢＡ）が４倍高くなった。イミダゾキノリン０９０のＲＧ５０２Ｈ ＰＬＧへの封入（群５）は、吸着ＭｅｎＢ２８７単独（群１）および吸着ＭｅｎＢ２８７と可溶性イミダゾキノリン０９０（群２）にもっと類似していた。共凍結乾燥製剤（群３）は、吸着ＭｅｎＢ２８７単独（群１）および吸着ＭｅｎＢ２８７と可溶性イミダゾキノリン０９０（群２）に類似していたが、ＳＢＡ力価は減少した。

よって、新規の組成物ならびにその使用および作成のための方法が開示される。本発明を特定の実施形態を参照して説明したが、さまざまな変更が行なわれてもよく、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく同等物が置換されてもよいことが当業者に理解されるべきである。

Claims (54)

1. 免疫原性組成物であって、（ａ）第１の抗原と、（ｂ）少なくとも第１および第２のアジュバントと、（ｃ）医薬的に許容できる賦形剤とを含み、該第１のアジュバントは微粒子を含み、該第２のアジュバントはイミダゾキノリン０９０を含み、該組成物は脊椎動物対象に投与されるときに免疫応答を誘発する、免疫原性組成物。
2. 前記第１のアジュバントは前記組成物の少なくとも５０ｗｔ％（乾燥ベース）を構成する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
3. 前記微粒子は生分解性ポリマーを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
4. 前記生分解性ポリマーはポリヒドロキシ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
5. 前記生分解性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、およびその組合せから選択されるポリ（α−ヒドロキシ酸）を含む、請求項３に記載の免疫原性組成物。
6. 前記微粒子は、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、および非イオン性界面活性剤から選択される界面活性剤を含む、請求項３に記載の免疫原性組成物。
7. 前記微粒子は沈降プロセスによって形成される、請求項３に記載の免疫原性組成物。
8. 前記微粒子は溶媒蒸発プロセスによって形成される、請求項３に記載の免疫原性組成物。
9. 前記微粒子はＬ−チロシンを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
10. 前記微粒子はリン酸カルシウムを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
11. 前記微粒子はアルミニウム塩を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
12. 前記微粒子は代謝可能な油を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
13. 前記代謝可能な油はテルペノイドである、請求項１２に記載の免疫原性組成物。
14. 前記代謝可能な油はスクアレンである、請求項１２に記載の免疫原性組成物。
15. 前記免疫原性組成物はＭＦ５９を含む、請求項１４に記載の免疫原性組成物。
16. 前記第２のアジュバントは、前記微粒子を形成する材料に関して５％ｗ／ｗから２０％ｗ／ｗを構成する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
17. 前記第２のアジュバントは前記微粒子内に確立される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
18. 前記第２のアジュバントは前記微粒子に吸着される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
19. 前記第２のアジュバントは前記微粒子と混合される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
20. 前記第１の抗原は、前記微粒子を形成する材料に関して０．５％ｗ／ｗから１０．０ｗ／ｗを構成する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
21. 前記第１の抗原は前記微粒子内に確立される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
22. 前記第１の抗原は前記微粒子に吸着される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
23. 前記第１の抗原は前記微粒子と混合される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
24. 前記第１の抗原はポリペプチド含有抗原を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
25. 前記第１の抗原は多糖含有抗原を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
26. 前記第１の抗原は結合体抗原を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
27. 前記第１の抗原はポリヌクレオチド含有抗原を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
28. 前記第１の抗原は微粒子の形である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
29. 前記第１の抗原は腫瘍細胞由来の抗原である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
30. 前記第１の抗原は病原性生物由来の抗原である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
31. 前記病原性生物は、ウイルス、バクテリア、真菌および寄生体から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
32. 前記病原性生物は、肝炎ウイルス、水痘、ポリオウイルス、麻疹、耳下腺炎、風疹、インフルエンザウイルス、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、百日咳、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス２型、百日咳、ジフテリア、破傷風、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅから選択される、請求項３１に記載の免疫原性組成物。
33. 前記病原性生物は、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、髄膜炎Ｂ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｂ型、およびインフルエンザＡウイルスから選択される、請求項３１に記載の免疫原性組成物。
34. 前記抗原は、死滅または弱毒化した病原性生物を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
35. 前記第１および第２のアジュバントとは別の第３のアジュバントをさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
36. 前記第１の抗原とは別の第２の抗原をさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
37. 前記免疫原性組成物は注射可能な組成物である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
38. 前記組成物は脊椎動物対象における細胞性免疫応答を誘発し、前記第１の抗原は腫瘍、ウイルス、バクテリア、真菌、および寄生体からなる群より選択される実体に由来する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
39. 前記脊椎動物対象はヒトである、請求項３８に記載の免疫原性組成物。
40. 前記細胞性免疫応答は細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答である、請求項３８に記載の免疫原性組成物。
41. 請求項３に記載の微粒子組成物を生成する方法であって、（ａ）水と、有機溶媒と、生分解性ポリマーと、第２のアジュバントとを含むエマルションを提供するステップと、（ｂ）該エマルションから該有機溶媒を除去して微粒子を形成するステップとを含み、該第１の抗原は該微粒子に吸着されるか、該微粒子内に確立されるか、または該微粒子と混合される、方法。
42. 第１の水相は前記第１の抗原をさらに含む、請求項４１に記載の方法。
43. 前記第１の抗原は前記微粒子に吸着される、請求項４１に記載の方法。
44. 第１の抗原と、イミダゾキノリンと、生分解性ポリマーを含む微粒子とを含む微粒子組成物を形成する方法であって、該方法は（ａ）該生分解性ポリマーと、該イミダゾキノリンと、有機溶媒とを含む有機相を、水を含む第１の水相と乳化することによって油中水型エマルションを形成するステップと；（ｂ）水を含む第２の水相をステップ（ａ）で形成されたエマルションと乳化して水中油中水型エマルションを形成するステップと；（ｃ）該水中油中水型エマルションから該有機溶媒を除去して微粒子を形成するステップとを含み、該第１の抗原は該微粒子に吸着されるか、該微粒子内に確立されるか、または該微粒子と混合される、方法。
45. 前記第１の水相は前記第１の抗原をさらに含む、請求項４４に記載の方法。
46. 前記第１の抗原は前記微粒子に吸着される、請求項４４に記載の方法。
47. 前記第２の水相は界面活性剤をさらに含む、請求項４４に記載の方法。
48. 前記界面活性剤はアニオン性界面活性剤である、請求項４７に記載の方法。
49. 脊椎動物対象中の免疫応答を惹起する方法であって、請求項１に記載の免疫原性組成物を前記脊椎動物対象に投与するステップを含む、方法。
50. 前記免疫原性組成物は、筋肉内、気管内、鼻腔内、経皮、皮内、皮下、眼内、膣、直腸、腹膜内、腸内、または吸入投与の経路によって投与される、請求項４９に記載の方法。
51. 前記第１の抗原は、肝炎ウイルス、水痘、ポリオウイルス、麻疹、耳下腺炎、風疹、インフルエンザウイルス、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、百日咳、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス２型、百日咳、ジフテリア、破傷風、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅから選択される病原性生物に由来する、請求項５０に記載の方法。
52. 請求項１に記載の免疫原性組成物を含む、医薬組成物。
53. 請求項１に記載の免疫原性組成物を調製するためのキットであって、第１の抗原を含む第１の容器と、第１のアジュバントを含む第２の容器と、微粒子を含む第３の容器とを含む、キット。
54. 請求項１に記載の免疫原性組成物を調製するためのキットであって、第１の抗原を含む第１の容器と、第１のアジュバントおよび微粒子を含む第２の容器とを含む、キット。