JP2011142904A - 抗酸化物質の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 ゴマ種子またはセサミンを加えたゴマ種子に乳酸菌を接種して発酵させ、これを加熱することによって抗酸化物質を製造する方法である。乳酸菌としてはラクトバチルス・カゼイ又はラクトバチルス・ロイテリが用いられる。また、ゴマ種子を50〜200メッシュに摩砕したのち乳酸菌発酵し、60〜200℃で加熱するのが望ましい。
【選択図】 図2
Description
5,10,15,30,50,70,100mgの市販のセサミン(フィトファーマ株式会社製の「セサミン-90」)に、乳酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、グルコン酸をそれぞれ1mlずつ加えて、ボルテクス(IWATA Tube mixer TM2000)で10分間高速攪拌した後、超音波を1時間与えて溶解実験を行った。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用いてセサミンの溶解度を測定した。また、セサミン各15mgに乳酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、グルコン、水を1ml加え、50℃で約2時間加熱した場合のセサモールの転化率を測定した。転化率は、加熱前のセサミン含有量に対するHPLCで測定した加熱後のセサモール含有量の割合である。
カラム:DevelosilODS10(野村化学株式会社製)
移動相:メタノール:水(V/V)=6:4
流速:3ml/min
検出法:290nm
注入量:10μl
カラム温度:40℃
上記した市販の「セサミン‐90」15mgに1mlの乳酸又は酢酸をそれぞれ加え、60,80,100,120,150,180,200℃にそれぞれ保って2時間処理した。HPLCを用いてセサミンの残存率を測定すると共にセサモールへの転化率を測定した。測定は実施例1と同じ方法で行なった。
上記した市販の「セサミン‐90」15mgに1mlの乳酸又は酢酸をそれぞれ加え、60,80,100,120,150,180,200℃にそれぞれ保って2時間処理した。HPLCを用いてセサミノールとエピセサミンの転化率をそれぞれ測定した。測定は実施例1と同じ方法で行なった。
摩砕した未発酵の黒ゴマを25メッシュ、50メッシュ、100メッシュ、200メッシュで篩い分け、その各1gに50mlの乳酸を入れて80℃で約2時間加熱した後、10分間超音波を加え、さらに60rpmで60分攪拌したのちに抽出した。
摩砕した未発酵の黒ゴマを25メッシュ、50メッシュ、100メッシュ、200メッシュで篩い分けた。また、異なるメッシュで篩い分けた未発酵の黒ゴマ各1gに、乳酸50mlと上記した市販の「セサミン‐90」を、5〜45mgまで2.5mg刻みでそれぞれ加え、約2時間加熱した後、10分間超音波を加え、さらに60rpmで60分攪拌したのちに溶解度を測定した。
100メッシュで篩い分けた生黒ゴマ1kgに、水3lとグルコース30gを加えて加熱滅菌した後、予備培養しておいた乳酸菌培養液(ラクトバチルス・カゼイ)をゴマ混合液に対して1%接種し、35℃で72時間静置培養した。その後、80℃で2時間加熱してゴマ発酵物を得た。このゴマ発酵物を60℃以下で24時間乾燥した後に乳鉢で粉末化し、この粉末を測定サンプルとして使用して、大久保一良らのXYZ微弱発光法(ジャパンフードサイエンス、第38巻、8号、18−21頁(1999))によるラジカル消去能を測定することにより、ゴマ発酵物の抗酸化活性を調べた。
実施例6で得られた乳酸菌発酵ゴマを60℃以下で24時間乾燥させたのち乳鉢で粉末化し、この粉末を測定サンプルとして使用し、この乳酸菌発酵ゴマについての抗酸化活性を測定した。抗酸化活性は、食品の抗酸化機能を評価する方法として一般的な方法であるDPPH(1,1−ジフェニルル−2−ピクリルヒドラジル)分光測定法により測定した。
実施例6で得られた乳酸菌発酵ゴマを60℃以下で24時間乾燥させたのち乳鉢で粉末化し、この粉末を測定サンプルとして使用し、この乳酸菌発酵ゴマについて、下記のようにしてインターロイキン-12(IL−12)産生量を測定した。IL−12は免疫賦活作用を有する物質である。
A:試薬
・IL−12アッセイキット(和光純薬工業株式会社)
・Hank’s液(ペニシリン、ストレプトマイシン含有)
・10%FCS含有RPMI1640溶液(RPMI1640(和光純薬工業株式会社)溶液と、牛胎児血清(FCS)とを容量比9:1で混合したもの)
・リポポリサッカライド(LPS:和光純薬工業株式会社)溶液(10%FCS含有RPMI1640溶液を用いて100ng/mlに調製したもの)
本実施例で得られた乳酸菌発酵ゴマ200mgを乳鉢で粉砕した後、Hank’s液1.8mlに溶解した。これを15mlチューブに移し、室温にて1時間静置した。その後、1000rpmで10分間遠心分離し、上清0.5mlを回収した。回収した0.5mlを原液とし、Hank’s液4mlを加えてサンプル液とした。比較のため未発酵ゴマを用い、同様にサンプル液を調製した。
C57BL/6マウス(メス6週齢、n=8)を1週間予備飼育した。7週齢の実験マウスの腹腔内に、調製した各サンプル液をそれぞれ0.5ml投与した(この実験においてコントロール群にはHank’s液のみを投与)。サンプル液の投与から18時間後に腹腔内細胞を回収した。回収した細胞を10%FCS含有RPMI1640溶液にて洗浄し、溶血バッファーにて赤血球を除去した後、細胞数を算定し、10%FCS含有PRMI1640溶液を用いて、1×106cells/mlに調製し、24穴カルチャープレートにて培養した。その際に、100ng/mlのLPSを10μl加えた場合と加えなかった場合との2通りで培養した。LPS添加から18時間後に培養上清を回収し、IL−12アッセイキットを用い、その製品プロトコールに準じてIL−12産生量を測定した。
サンプル液を投与したマウスの細胞毎に、LPSを加えて培養した細胞におけるIL−12産生量と、LPSを加えずに培養した細胞におけるIL−12産生量の差を求め、その平均値を検体とした乳酸菌発酵ゴマのIL−12産生量とした。
Claims (8)
- セサミンを主要成分とする原料に乳酸菌を接種して発酵させ、これを加熱することによって抗酸化物質を製造する方法。
- セサミンを主要成分とする原料に有機酸を加え、これを加熱することによって抗酸化物質を製造する方法。
- ゴマ種子に乳酸菌を接種して発酵させ、これを加熱することによって抗酸化物質を製造する方法。
- セサミンを加えたゴマ種子に乳酸菌を接種して発酵させ、これを加熱することによって抗酸化物質を製造する方法。
- 前記有機酸が乳酸又は酢酸である請求項2に記載の抗酸化物質を製造する方法。
- 前記乳酸菌がラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)又はラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)である請求項1、3又は4に記載の抗酸化物質を製造する方法。
- 前記ゴマ種子が50〜200メッシュで粉砕処理されている請求項3又4に記載の抗酸化物質を製造する方法。
- 前記加熱する温度が60〜200℃、好ましくは60〜150℃である請求項1乃至4のいずれかに記載の抗酸化物質を製造する方法。
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