JP2011068643A - Antiallergic drug for oral administration, containing lactic acid bacteria and antigenic substance - Google Patents

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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a drug and a method useful for preventing development and/or amelioration of symptoms of allergy diseases safely with no burden on patients. <P>SOLUTION: There are provided the antiallergic drug for oral administration, containing lactic acid bacteria and antigenic substances, a method of treating allergy diseases including orally administering a composition containing lactic acid bacteria and antigenic substances, and the use of lactic acid bacteria and antigenic substances in the production of antiallergic drugs. More specifically, as lactic acid bacteria, lactic acid bacteria having the effect of enhancing the development of inhibitory stimulus molecules PD-L2 on antigen presentation cells, for example, Lactobacillus paracasei KW3110 are used. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&INPIT

Description

本発明は、乳酸菌および抗原物質を含み、口腔内に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤に関する。より詳しくは、本発明は、Lactobacillus paracasei KW3110および抗原物質を含み、口腔内に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤に関する。本発明はまた、乳酸菌および抗原物質を口腔内に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法に関する。より詳しくは、本発明は、Lactobacillus paracasei KW3110および抗原物質を口腔内に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法に関する。さらに本発明は、乳酸菌および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用に関する。より詳しくは、本発明は、Lactobacillus paracasei KW3110および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用に関する。   The present invention relates to an antiallergic agent comprising a lactic acid bacterium and an antigenic substance and administered into the oral cavity. More specifically, the present invention relates to an antiallergic agent characterized by containing Lactobacillus paracasei KW3110 and an antigen substance and being administered into the oral cavity. The present invention also relates to a method for treating allergic diseases, characterized in that lactic acid bacteria and an antigenic substance are coadministered into the oral cavity. More specifically, the present invention relates to a method for treating allergic diseases, characterized in that Lactobacillus paracasei KW3110 and an antigen substance are coadministered into the oral cavity. The invention further relates to the use of lactic acid bacteria and antigenic substances in the production of antiallergic agents. More particularly, the present invention relates to the use of Lactobacillus paracasei KW3110 and antigenic substances in the manufacture of antiallergic agents.

アレルギー疾患は、その発症機構によりI型からIV型の4種類に大別される。近年、アレルギー疾患の中でも、I型アレルギー疾患に分類されるアレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、食品アレルギー、花粉症などの患者数が増加している。I型アレルギーは、外界から侵入したアレルゲンに特異的なイムノグロブリンE抗体（以下、IgEと略称する）が関与することで引き起こされるアレルギーである。IgEの産生には、免疫応答調節機能を有するヘルパーT細胞であって液性免疫に関与するTh2細胞が産生するサイトカインであるIL-4、IL-5、IL-13が関与する。外界から侵入したアレルゲンは、まず樹状細胞やマクロファージなどの抗原提示細胞に貪食されてその一部が主要組織適合性複合体（MHC）分子と結合して抗原提示細胞上に提示される。一方、抗原提示細胞から産生されるプロスタグランジンE2などによりナイーブT細胞から分化誘導されたTh2細胞が、抗原提示細胞上に提示されたアレルゲンを認識して活性化する。そして、活性化Th2細胞から産生されたサイトカインにより、B細胞がIgE産生細胞へと分化し、IgEが産生される。一度、アレルゲンにより刺激を受けて活性化したTh2細胞は、その寿命が長いために長期間生体内で維持され、再度同じアレルゲンが侵入すると迅速に応答し、IgE産生に寄与する。このような生体内で長期間維持される抗原特異的Th2細胞をメモリーTh2細胞と称する。産生されたIgEは、肥満細胞や好塩基球などのエフェクター細胞の細胞表面上に存在するIgE受容体（FcεR1）に結合する。さらに、エフェクター細胞表面上のFcεR1がアレルゲンの結合により架橋されると、ヒスタミン、ロイコトリエンC4、血小板活性化因子（PAF）、好酸球走化因子などの化学伝達物質が細胞から遊離され、アレルギー症状が発現する。   Allergic diseases are roughly classified into four types, from type I to type IV, depending on the onset mechanism. In recent years, among allergic diseases, the number of patients with allergic rhinitis, allergic asthma, atopic dermatitis, food allergy, hay fever and the like classified as type I allergic diseases is increasing. Type I allergy is allergy caused by the involvement of an immunoglobulin E antibody (hereinafter abbreviated as IgE) specific to an allergen that has invaded from the outside world. The production of IgE involves IL-4, IL-5, and IL-13, which are cytokines produced by Th2 cells, which are helper T cells having an immune response regulating function and involved in humoral immunity. Allergens that invade from the outside world are first phagocytosed by antigen-presenting cells such as dendritic cells and macrophages, and part of them are bound to major histocompatibility complex (MHC) molecules and presented on antigen-presenting cells. On the other hand, Th2 cells differentiated from naive T cells by prostaglandin E2 produced from antigen-presenting cells recognize and activate allergens presented on antigen-presenting cells. Then, B cells are differentiated into IgE-producing cells by the cytokines produced from the activated Th2 cells, and IgE is produced. Once activated by stimulation with allergens, Th2 cells are maintained in vivo for a long time because of their long lifespan, and when the same allergen enters again, they respond quickly and contribute to IgE production. Such antigen-specific Th2 cells that are maintained for a long time in vivo are referred to as memory Th2 cells. The produced IgE binds to an IgE receptor (FcεR1) present on the cell surface of effector cells such as mast cells and basophils. Furthermore, when FcεR1 on the effector cell surface is cross-linked by allergen binding, chemical mediators such as histamine, leukotriene C4, platelet activating factor (PAF), and eosinophil chemotactic factor are released from the cell, causing allergic symptoms. Is expressed.

I型アレルギー疾患の患者数は年々増加傾向にあり、新たな予防法および根本的治療法の確立が望まれている。近年、唯一の根治療法として免疫療法（減感作療法）が注目されてきた。しかしながら、現在のアレルギーに対する免疫療法は抗原を皮下投与する方法（抗原特異的減感作療法）が多く用いられており、痛み、通院の必要性、重篤な副作用発症の可能性といった患者の負担の大きさや医療実施機関の問題から、患者の負担が少なく、安全に行える根治療法の開発に強く期待がよせられている。   The number of patients with type I allergic diseases is increasing year by year, and establishment of new preventive methods and fundamental treatment methods is desired. In recent years, immunotherapy (desensitization therapy) has attracted attention as the only radical treatment. However, immunotherapy for allergies currently involves the subcutaneous administration of antigens (antigen-specific desensitization therapy), which is a burden on patients such as pain, necessity of going to hospital, and the possibility of serious side effects. Due to the size of the hospital and the problems of medical institutions, there are strong expectations for the development of radical treatment methods that can be safely performed with less burden on patients.

免疫療法の一つとして、舌下免疫療法が検討されている。舌下部は頸部リンパ節に近く、該リンパ節にはアレルギー反応に関係のある免疫機能があるために、舌下免疫療法は鼻やのどなどの免疫細胞に集中的に作用し効果が高いとして注目されている。アレルギー分野においても、スギ花粉症患者に対しスギ花粉標準液を用いた舌下減感作療法が臨床開発段階にある。しかしながら、実用化に向けて高い抑制効果の誘導が不可欠であり、有効なアジュバントの開発も行われている。   As one of immunotherapy, sublingual immunotherapy is being studied. The lower tongue is close to the cervical lymph node, and the lymph node has an immune function related to allergic reaction, so sublingual immunotherapy is highly effective because it concentrates on immune cells such as the nose and throat. Attention has been paid. In the field of allergies, sublingual desensitization therapy using cedar pollen standard solution is in the clinical development stage for cedar pollinosis patients. However, induction of a high inhibitory effect is indispensable for practical use, and an effective adjuvant is being developed.

一方、免疫療法の一環として、食品が有する免疫賦活化作用が期待されている。例えば、免疫調節機能食品である加熱処理乳酸菌を用いてアレルギー性鼻炎モデルマウスのアレルギー症状の緩和効果が検討され、加熱処理乳酸菌を経口摂取したマウスにおいて症状の緩和効果が得られたことが報告されている。そのため、現在、加熱処理乳酸菌を含む経口摂取用の錠剤などがサプリメントとして市販されている。また、加熱処理乳酸菌により、ヒトでダニ抗原により引き起こされるアレルギー性鼻炎が緩和されたことが報告されている（非特許文献1）。さらに、乳酸菌発酵により製造されたヨーグルトなどの機能食品により、ヒトのアレルギー性鼻炎が緩和されたことが報告されている（特許文献1、並びに非特許文献2および3）。しかしながら、このような免疫調節機能食品により免疫療法としての予防効果を得るためには、年単位での長期間多量連続摂取が必要である。また、気道アレルギー患者を対象にその改善効果の有無について検討はされているが、効果はきわめて限定されてものでありアレルギー治療に対して充分なコンセンサスは得られておらず、ヒトにおけるアレルギー疾患の予防および改善薬は未だ開発されていない。   On the other hand, as part of immunotherapy, the immunostimulatory action of foods is expected. For example, allergic rhinitis model mice were examined for allergic symptom relief effects using heat-treated lactic acid bacteria, which are immunomodulatory foods, and it was reported that symptomatic relief effects were obtained in mice that were orally ingested heat-treated lactic acid bacteria. ing. Therefore, tablets for oral intake containing heat-treated lactic acid bacteria are currently marketed as supplements. It has also been reported that heat-treated lactic acid bacteria alleviated allergic rhinitis caused by mite antigens in humans (Non-patent Document 1). Furthermore, it has been reported that human allergic rhinitis was alleviated by functional foods such as yogurt produced by lactic acid bacteria fermentation (Patent Document 1, and Non-Patent Documents 2 and 3). However, in order to obtain a preventive effect as an immunotherapy with such an immunoregulatory functional food, it is necessary to ingest a large amount continuously over a long period in units of years. In addition, the presence or absence of the improvement effect has been studied for patients with airway allergies, but the effect is extremely limited, and sufficient consensus for allergy treatment has not been obtained. Prophylactic and ameliorating drugs have not been developed yet.

再公表特許WO2004/096246号。Republished patent WO2004 / 096246.

Peng G.C. et al., (2005) The efficacy and safety of heat-killed Lactobacilus paracasei for treatment of perennial allergic rhinitis induced by house-dust mite. Pediart Allergy Immunol. 16(5), 433-438.Peng G.C. et al., (2005) The efficacy and safety of heat-killed Lactobacilus paracasei for treatment of perennial allergic rhinitis induced by house-dust mite. Pediart Allergy Immunol. 16 (5), 433-438. Kawase M. et al., (2009) Effect of fermented milk prepared with two probiotic strains on Japanese cedar pollinosis in a double-blind placebo-controlled clinical study. International Journal of Food Microbiology. 128, 429-434.Kawase M. et al., (2009) Effect of fermented milk prepared with two probiotic strains on Japanese cedar pollinosis in a double-blind placebo-controlled clinical study.International Journal of Food Microbiology. 128, 429-434. Ishida Y. et al., (2005) Clinical Effects of Lactobacillus acidophilus Strain L-92 on Perennial Allergic Rhinitis: A Double-Blind, Placebo-Controlled Study. J. Daily Sci. 88, 527-533.Ishida Y. et al., (2005) Clinical Effects of Lactobacillus acidophilus Strain L-92 on Perennial Allergic Rhinitis: A Double-Blind, Placebo-Controlled Study.J. Daily Sci. 88, 527-533.

本発明の課題は、患者の負担が少なく、安全に行えるアレルギー疾患の発症予防および／または症状改善のための有用な薬剤および方法を提供することである。   An object of the present invention is to provide a useful drug and method for preventing the onset of allergic diseases and / or improving symptoms that can be safely performed with less burden on the patient.

本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意研究を行った。本発明者らは、I型アレルギー疾患の中でも、近年患者数が著しく増加しているアレルギー性鼻炎や花粉症などの気道アレルギーに着目した。そして、気道アレルギーにおける炎症反応に特に頸部リンパ節が関与すると考え、代表的な気道アレルギー疾患モデルとしてアレルギー性鼻炎マウスを用いてその発症や症状を緩和する方法を検討した。その結果、アレルギー感作成立後のマウスにアレルギー性鼻炎を誘発すると同時に抗原と共に乳酸菌を舌下投与法にて摂取させると、口腔粘膜を介して乳酸菌および抗原が口腔粘膜下の樹状細胞に捕食され頸部リンパ節に移行すること、また、アレルギー性鼻炎の発症が緩和され、血清中の抗原特異的抗体の産生が減少することを見出した。さらに、in vitroにおいてヒト末梢血由来の樹状細胞におよびマウス骨髄由来の樹状細胞に乳酸菌を抗原刺激に加えて培養すると、抗原単独刺激よりもTh1型サイトカイン産生をより強く誘導し、局所リンパ節へ移行するのに必須であるケモカインレセプターCCR7および活性化Th2細胞の抑制刺激であるPD-1分子に対するリガンドであるPD-L2(B7-DC)分子の発現をより増強させることを見出した。さらに、ヒト花粉症患者において、スギ花粉抗原エキスと乳酸菌とを共に舌下に投与する舌下減感作療法を実施した結果、それらを投与していない症例と比較して、発症および臨床症状の緩和が観察された。これら知見から、抗原と乳酸菌との共刺激により抑制型樹状細胞を効率的に誘導し、炎症局所へ移行させることにより、アレルギー疾患の発症予防および／または症状改善の効果が得られることを実証し、本発明を達成した。   The present inventors have intensively studied to solve the above problems. The present inventors have focused on airway allergies such as allergic rhinitis and hay fever, which have been increasing in number in recent years, among type I allergic diseases. The cervical lymph nodes were considered to be particularly involved in the inflammatory reaction in airway allergies, and a method for alleviating the onset and symptoms using allergic rhinitis mice as a representative airway allergic disease model was examined. As a result, when allergic rhinitis is induced in mice after the creation of an allergic sensation and lactic acid bacteria are ingested together with the antigen by the sublingual administration method, the lactic acid bacteria and the antigen are predated by the dendritic cells under the oral mucosa via the oral mucosa It was found that the cervical lymph node was transferred to the cervical lymph node, and that the development of allergic rhinitis was alleviated and the production of antigen-specific antibodies in the serum was reduced. Furthermore, when lactic acid bacteria were cultured in vitro on human peripheral blood-derived dendritic cells and mouse bone marrow-derived dendritic cells in addition to antigen stimulation, Th1-type cytokine production was more strongly induced than in antigen-stimulated stimulation. We found that the expression of PD-L2 (B7-DC) molecule, which is a ligand for PD-1 molecule, which is an inhibitory stimulus of chemokine receptor CCR7 and activated Th2 cells, which are essential for node transition, was further enhanced. Furthermore, as a result of sublingual desensitization therapy in which both cedar pollen antigen extract and lactic acid bacteria are administered sublingually in patients with human hay fever, the onset and clinical symptoms Relaxation was observed. Based on these findings, it is demonstrated that effective induction of allergic diseases and / or symptom improvement can be achieved by efficiently inducing inhibitory dendritic cells by co-stimulation of antigen and lactic acid bacteria and transferring them to the local area of inflammation. The present invention has been achieved.

即ち、本発明は以下に関する：
1. 乳酸菌および抗原物質を含み、口腔内に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤、
2. 前記乳酸菌が、抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現を増強する機能を有する乳酸菌である前記1.の抗アレルギー剤、
3. 前記乳酸菌がLactobacillus paracasei KW3110である前記1.または2.の抗アレルギー剤、
4. 前記抗原物質が花粉抗原である前記1.から3.のいずれかの抗アレルギー剤、
5. 花粉抗原がスギ花粉抗原である前記4.の抗アレルギー剤、
6. 舌下に投与されることを特徴とする前記1.から5.のいずれかの抗アレルギー剤、
7. 気道アレルギー疾患を対象に投与されることを特徴とする前記1.から6.のいずれかの抗アレルギー剤、
8. 気道アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎である前記7.の抗アレルギー剤、
9. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を含み、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤、
10. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を含み、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に投与される抗アレルギー剤であって、該Lactobacillus paracasei KW3110の用量が50mg／日であり、該スギ花粉抗原の用量が4〜2000JAU／日であることを特徴とする抗アレルギー剤、
11. 乳酸菌および抗原物質を口腔内に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法、
12. 前記乳酸菌が抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現を増強する機能を有する乳酸菌である前記11.のアレルギー疾患治療方法、
13. 前記乳酸菌がLactobacillus paracasei KW3110である前記11または12.のアレルギー疾患治療方法、
14. 前記抗原物質が花粉抗原である前記11.から13.のいずれかのアレルギー疾患治療方法、
15. 花粉抗原がスギ花粉抗原である前記14.のアレルギー疾患治療方法、
16. 乳酸菌および抗原物質を舌下に併用投与することを特徴とする前記11.から15.のいずれかのアレルギー疾患治療方法、
17. 乳酸菌および抗原物質を気道アレルギー疾患を対象に併用投与することを特徴とする前記11.から16.のいずれかのアレルギー疾患治療方法、
18. 気道アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎である前記17.のアレルギー疾患治療方法、
19. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法、
20. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法であって、該Lactobacillus paracasei KW3110の用量が50mg／日であり、該スギ花粉抗原の用量が4〜2000JAU／日であるアレルギー疾患治療方法、
21. 乳酸菌および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用、
22. 前記乳酸菌が抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現を増強する機能を有する乳酸菌である前記21.の使用、
23. 前記乳酸菌がLactobacillus paracasei KW3110である前記21または22.の使用、
24. 前記抗原物質が花粉抗原である前記21.から23.のいずれかの使用、
25. 花粉抗原がスギ花粉抗原である前記24.の使用、
26. 抗アレルギー剤が舌下に投与される抗アレルギー剤である前記21.から25.のいずれかの使用、
27. 抗アレルギー剤が気道アレルギー疾患を対象に投与される抗アレルギー剤である前記21.から26.のいずれかの使用、
28. 気道アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎である前記27.の使用、
29. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原の、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に舌下に投与される抗アレルギー剤の製造における使用。 That is, the present invention relates to:
1. an antiallergic agent containing lactic acid bacteria and an antigenic substance, and administered to the oral cavity,
2. The antiallergic agent according to 1. above, wherein the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium having a function of enhancing expression of a suppressive stimulating molecule PD-L2 on an antigen-presenting cell,
3. The antiallergic agent according to 1 or 2 above, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus paracasei KW3110,
4. The antiallergic agent according to any one of 1 to 3 above, wherein the antigenic substance is a pollen antigen,
5. The antiallergic agent according to 4 above, wherein the pollen antigen is a cedar pollen antigen,
6. The antiallergic agent according to any one of 1 to 5 above, which is administered sublingually,
7. The antiallergic agent according to any one of 1 to 6 above, which is administered to a subject for airway allergic disease,
8. The antiallergic agent according to 7 above, wherein the airway allergic disease is allergic rhinitis,
9. An antiallergic agent, which comprises heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen, and is administered sublingually for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen,
10. An antiallergic agent that is administered sublingually for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigens, including heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen, and the dose of Lactobacillus paracasei KW3110 is 50 mg / day An antiallergic agent, wherein the dose of the cedar pollen antigen is 4 to 2000 JAU / day,
11. A method for treating allergic diseases, characterized by co-administering lactic acid bacteria and an antigenic substance in the oral cavity,
12. The method for treating allergic disease according to 11., wherein the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium having a function of enhancing the expression of a suppressive stimulating molecule PD-L2 on an antigen-presenting cell,
13. The method for treating allergic disease according to 11 or 12, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus paracasei KW3110,
14. The method for treating allergic disease according to any one of 11 to 13, wherein the antigenic substance is a pollen antigen,
15. The method for treating allergic disease according to 14 above, wherein the pollen antigen is a cedar pollen antigen,
16. The method for treating allergic disease according to any one of the above 11 to 15, wherein a lactic acid bacterium and an antigenic substance are administered in combination under the tongue,
17. The method for treating allergic disease according to any one of the above 11 to 16, wherein a lactic acid bacterium and an antigenic substance are administered in combination for airway allergic disease,
18. The method for treating allergic disease according to 17., wherein the airway allergic disease is allergic rhinitis,
19. A method for treating allergic diseases, characterized in that heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen are administered sublingually for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen,
20. A method for treating allergic diseases characterized by administering a heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and a cedar pollen antigen under the tongue in combination with allergic rhinitis caused by a cedar pollen antigen, comprising the Lactobacillus paracasei KW3110 A method for treating allergic diseases, wherein the dose is 50 mg / day, and the dose of the cedar pollen antigen is 4 to 2000 JAU / day,
21. Use of lactic acid bacteria and antigenic substances in the production of antiallergic agents,
22. The use according to 21 above, wherein the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium having a function of enhancing expression of a suppressive stimulating molecule PD-L2 on an antigen-presenting cell.
23. The use according to 21 or 22 above, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus paracasei KW3110,
24. The use according to any one of 21 to 23, wherein the antigenic substance is a pollen antigen,
25. The use according to 24 above, wherein the pollen antigen is a cedar pollen antigen,
26. The use according to any one of 21 to 25 above, wherein the antiallergic agent is an antiallergic agent administered sublingually,
27. The use according to any one of 21 to 26 above, wherein the antiallergic agent is an antiallergic agent administered to airway allergic diseases.
28. Use of the above 27, wherein the airway allergic disease is allergic rhinitis,
29. Use of heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen in the manufacture of an antiallergic agent administered sublingually for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen.

本発明により、乳酸菌および抗原物質を含み、口腔内に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤、乳酸菌および抗原物質を口腔内に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法、並びに乳酸菌および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用を提供できる。   According to the present invention, an antiallergic agent characterized by containing lactic acid bacteria and an antigenic substance and administered into the oral cavity, a method for treating allergic diseases characterized by co-administration of lactic acid bacteria and an antigenic substance in the oral cavity, and lactic acid bacteria and The use of an antigenic substance in the manufacture of an antiallergic agent can be provided.

本発明によれば、アレルギー疾患において、乳酸菌および抗原物質を口腔内に併用投与することで、頸部リンパ節において抗原特異的なTh2型免疫炎症反応を効率よく抑制することができる。そのため、本発明により、例えば、アレルギー性鼻炎や花粉症などの気道アレルギー疾患の口腔粘膜免疫療法を実施することができ、該疾患の発症予防／または症状改善を可能にする。   According to the present invention, in an allergic disease, an antigen-specific Th2-type immunoinflammatory reaction can be efficiently inhibited in the cervical lymph node by co-administering lactic acid bacteria and an antigen substance into the oral cavity. Therefore, according to the present invention, for example, oral mucosal immunotherapy for airway allergic diseases such as allergic rhinitis and hay fever can be performed, and the onset prevention / symptom improvement of the disease can be achieved.

また、本発明の薬剤は、従来の経口摂取薬剤よりも投与量が減少できており、その上緩和効果がより高く得られるため、対費用効果が高い。   In addition, the drug of the present invention can be reduced in dose compared to conventional orally ingested drugs, and moreover, a higher relaxation effect can be obtained, so that it is cost effective.

このように、本発明により、アレルギー疾患の発症予防および／または症状改善を、患者に負担を掛けることなく、安全に行うことができる。   Thus, according to the present invention, it is possible to safely prevent the onset of allergic diseases and / or improve the symptoms without burdening the patient.

スギ花粉特異的メモリーTh2細胞の増加に対する加熱処理乳酸菌の抑制効果を示す図である。スギ花粉の飛散前から加熱処理乳酸菌50mgを含むカプセルを、スギ花粉感作発症患者に連日摂取させた。乳酸菌としてLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）を用いた。スギ花粉の飛散前および飛散後に、スギ花粉感作発症患者より末梢血単核細胞（PBMC）を採取し、スギ花粉ペプチドCS712で刺激して、IL-4、IL-5、およびIL-13の各サイトカイン分泌細胞数を測定した。一方、乳酸菌を摂取しないスギ花粉感作発症患者（図中、Placeboと表示する）についても同様に試験を実施した。メモリーTh2細胞の増加は、花粉飛散前の各サイトカイン分泌細胞数に対する花粉飛散後の該細胞数の割合として算出した。（実施例1）It is a figure which shows the inhibitory effect of heat processing lactic acid bacteria with respect to the increase in a cedar pollen specific memory Th2 cell. Capsules containing 50 mg of heat-treated lactic acid bacteria were ingested daily by cedar pollen sensitized patients before the cedar pollen was scattered. Lactobacillus paracasei KW3110 (indicated as KW in the figure) was used as a lactic acid bacterium. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were collected from cedar pollen sensitized patients before and after cedar pollen scatter, stimulated with cedar pollen peptide CS712, and IL-4, IL-5, and IL-13 Each cytokine secreting cell number was measured. On the other hand, a test was similarly conducted on cedar pollen sensitized patients (indicated as Placebo in the figure) who did not take lactic acid bacteria. The increase in memory Th2 cells was calculated as a ratio of the number of cells after pollen scattering to the number of cytokine-secreting cells before pollen scattering. (Example 1) スギ花粉抗原Cry j 1および加熱処理乳酸菌で共刺激したヒト未熟樹状細胞からのIL-6産生は、乳酸菌の種類により差異が認められなかったことを示す図である。図中、KW、L92、およびBB536は、それぞれ加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110、Lactobacillus acidophilus L92およびBifidobacterium longum BB536を意味する。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「n.d」は、検出されなかったことを示す。（実施例2）It is a figure which shows that the difference was not recognized by IL-6 production from the human immature dendritic cell costimulated by the cedar pollen antigen Cry j 1 and the heat processing lactic acid bacteria according to the kind of lactic acid bacteria. In the figure, KW, L92, and BB536 mean Lactobacillus paracasei KW3110, Lactobacillus acidophilus L92, and Bifidobacterium longum BB536, respectively, that were heat-treated. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “n.d” indicates that it was not detected. (Example 2) スギ花粉抗原Cry j 1および加熱処理乳酸菌で共刺激したヒト未熟樹状細胞からのIL-12（p70）産生は、乳酸菌としてLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）を用いたときに強く認められたことを示す図である。図中、L92およびBB536は、それぞれ加熱処理したLactobacillus acidophilus L92およびBifidobacterium longum BB536を意味する。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例2）IL-12 (p70) production from human immature dendritic cells co-stimulated with cedar pollen antigen Cry j 1 and heat-treated lactic acid bacteria is strong when Lactobacillus paracasei KW3110 (labeled KW in the figure) is used as lactic acid bacteria It is a figure which shows having been recognized. In the figure, L92 and BB536 mean Lactobacillus acidophilus L92 and Bifidobacterium longum BB536, respectively, which were heat-treated. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 2) ヒト未熟樹状細胞をフルオレセインイソチオシアネート（FITC）標識したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KW3110Fと表示する）で刺激すると、該細胞の52.5％がKWを取り込んだことを示す図である。左上パネルは、フローサイトメトリーにより前方散乱（FSC）と側方散乱（SSC）とを検出して樹状細胞の解析を行った結果を示す。右上パネルは、フローサイトメトリーによりKW3110Fと樹状細胞表面マーカーCD11cとを検出して樹状細胞の解析を行った結果を示す。左下パネルは、フローサイトメトリーによりKW3110Fを検出して樹状細胞の解析を行った結果を示す。右下パネルは、樹状細胞が多数のKW3110Fを取り込んだこと示す蛍光顕微鏡写真である。（実施例2）When human immature dendritic cells are stimulated with fluorescein isothiocyanate (FITC) -labeled Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW3110F in the figure), it shows that 52.5% of the cells have taken up KW. The upper left panel shows the results of analyzing dendritic cells by detecting forward scatter (FSC) and side scatter (SSC) by flow cytometry. The upper right panel shows the results of analyzing dendritic cells by detecting KW3110F and dendritic cell surface marker CD11c by flow cytometry. The lower left panel shows the results of analyzing dendritic cells by detecting KW3110F by flow cytometry. The lower right panel is a fluorescence micrograph showing that dendritic cells have taken up a large number of KW3110F. (Example 2) ヒト未熟樹状細胞をスギ花粉抗原Cry j 1および加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激すると、細胞上の抑制刺激分子PD-L2の発現が、Cry j 1およびLPSの共刺激、または、Cry j 1およびLactobacillus acidophilus L92の共刺激と比較して、増大したことを示す図である。これら共刺激の間で、細胞上のHLA-DR発現やCD11c発現に差異は認められなかった。（実施例2）When human immature dendritic cells were co-stimulated with cedar pollen antigen Cry j 1 and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (indicated as KW in the figure), the expression of the inhibitory stimulating molecule PD-L2 on the cells was reduced to Cry j 1 and It is a figure which shows having increased compared with the costimulation of LPS or the costimulation of Cry j 1 and Lactobacillus acidophilus L92. There was no difference in HLA-DR expression or CD11c expression on cells between these costimulations. (Example 2) 卵白アルブミン（OVA）および加熱処理乳酸菌で共刺激したマウス未熟樹状細胞からのIL-6産生は、乳酸菌の種類により差異が認められなかったことを示す図である。図中、KWおよびL92は、それぞれ加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110およびLactobacillus acidophilus L92を意味する。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「n.d」は、検出されなかったことを示す。（実施例3）It is a figure which shows that the difference was not recognized by IL-6 production from the mouse immature dendritic cell costimulated with ovalbumin (OVA) and the heat processing lactic acid bacteria according to the kind of lactic acid bacteria. In the figure, KW and L92 mean Lactobacillus paracasei KW3110 and Lactobacillus acidophilus L92 which were heat-treated, respectively. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “n.d” indicates that it was not detected. (Example 3) 卵白アルブミン（OVA）および加熱処理乳酸菌で共刺激したマウス未熟樹状細胞からのIL-12（p70）産生は、乳酸菌としてLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）を用いたときに強く認められたことを示す図である。図中、L92は加熱処理したLactobacillus acidophilus L92を意味する。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例3）IL-12 (p70) production from immature dendritic cells co-stimulated with ovalbumin (OVA) and heat-treated lactic acid bacteria was strongly observed when Lactobacillus paracasei KW3110 (labeled KW in the figure) was used as the lactic acid bacterium. FIG. In the figure, L92 means heat-treated Lactobacillus acidophilus L92. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 3) マウス未熟樹状細胞を卵白アルブミン（OVA）および加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激すると、細胞上の抑制刺激分子PD-L2およびホーミングケモカインレセプター分子CCR7の発現が、OVAおよびLPSの共刺激、または、OVAおよびLactobacillus acidophilus L92の共刺激と比較して、増大したことを示す図である。これら共刺激の間で、細胞上のHLA-DR発現やCD11c発現に差異は認められなかった。（実施例3）Co-stimulation of mouse immature dendritic cells with ovalbumin (OVA) and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (indicated as KW in the figure) resulted in the expression of inhibitory stimulating molecule PD-L2 and homing chemokine receptor molecule CCR7 on the cells. FIG. 6 shows that the increase was compared with costimulation of OVA and LPS, or costimulation of OVA and Lactobacillus acidophilus L92. There was no difference in HLA-DR expression or CD11c expression on cells between these costimulations. (Example 3) 卵白アルブミン（OVA）および加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激したマウス未熟樹状細胞が、Th2細胞からのIL-5産生を低減させたことを示す図である。図中、L92は加熱処理したLactobacillus acidophilus L92を意味する。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例4）It is a figure showing that mouse immature dendritic cells co-stimulated with ovalbumin (OVA) and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW in the figure) reduced IL-5 production from Th2 cells. . In the figure, L92 means heat-treated Lactobacillus acidophilus L92. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 4) 卵白アルブミン（OVA）および加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激したマウス未熟樹状細胞が、Th2細胞からのIL-13産生を低減させたことを示す図である。図中、L92は加熱処理したLactobacillus acidophilus L92を意味する。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例4）It is a figure showing that mouse immature dendritic cells co-stimulated with ovalbumin (OVA) and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW in the figure) reduced IL-13 production from Th2 cells. . In the figure, L92 means heat-treated Lactobacillus acidophilus L92. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 4) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、頸部リンパ節（CLN）の細胞中にIgG産生細胞が高頻度で認められたことを示す。図の縦軸は、106細胞当たりの抗原提示細胞の数（Number of APCs（per 106））を示す。図中、BMは骨髄、Spleenは脾臓を意味する。また、Boostとは、追加免疫を意味する。（実施例5）This shows that IgG producing cells were frequently observed in cervical lymph node (CLN) cells in ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice. The vertical axis of the figure indicates the number of antigen-presenting cells per 10 6 cells (Number of APCs (per 10 6 )). In the figure, BM means bone marrow and Spleen means spleen. Boost means additional immunity. (Example 5) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、頸部リンパ節（CLN）の細胞中にIgE産生細胞が高頻度で認められたことを示す。図の縦軸は、106細胞当たりの抗原提示細胞の数（Number of APCs（per 106））を示す。図中、BMは骨髄、Spleenは脾臓を意味する。また、Boostとは、追加免疫を意味する。（実施例5）This shows that IgE-producing cells were frequently observed in cervical lymph node (CLN) cells in ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice. The vertical axis of the figure indicates the number of antigen-presenting cells per 10 6 cells (Number of APCs (per 10 6 )). In the figure, BM means bone marrow and Spleen means spleen. Boost means additional immunity. (Example 5) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、OVAと加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激した樹状細胞を、鼻炎誘導前に口腔粘膜下に移入することにより、鼻炎症状が抑制されたことを示す図である。左、中央、および右のパネルはそれぞれ、くしゃみ（Sneezing）、鼻かき（Nasal Rubbing）、および血清IgE抗体価を示す。くしゃみ（Sneezing）および鼻かき（Nasal Rubbing）は5分間当たりの回数（Counts per 5min）で示す。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例5）In ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice, dendritic cells co-stimulated with OVA and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW in the figure) were transferred to the oral mucosa before induction of rhinitis It is a figure which shows that the nasal inflammation state was suppressed by doing. Left, middle and right panels show Sneezing, Nasal Rubbing, and serum IgE antibody titers, respectively. Sneezing and Nasal Rubbing are expressed as Counts per 5 min. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 5) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、OVAと加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激した樹状細胞を、鼻炎誘導前に口腔粘膜下に移入すると、頸部リンパ節中のCD4T細胞からのTh2サイトカイン産生が抑制されたことを示す図である。左、中央、および右のパネルはそれぞれ、IL-4、IL-5、およびIL-13の産生を示す。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例5）In ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice, dendritic cells co-stimulated with OVA and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW in the figure) were transferred to the oral mucosa before induction of rhinitis Then, it is a figure which shows that Th2 cytokine production from the CD4T cell in a cervical lymph node was suppressed. The left, middle, and right panels show IL-4, IL-5, and IL-13 production, respectively. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 5) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、OVAと加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激した樹状細胞を抗PD-L2抗体でキャップしてから、鼻炎誘導前に口腔粘膜下に移入することにより、樹状細胞による鼻炎症状抑制効果が消失したことを示す図である。抗体（図中、Abと表示する）として、抗PD-L2抗体の代わりにコントロール抗体（図中、Contと表示する）を用いたときは、このような消失は認められなかった。左、中央、および右のパネルはそれぞれ、くしゃみ（Sneezing）、鼻かき（Nasal Rubbing）、および血清IgE抗体価を示す。くしゃみ（Sneezing）および鼻かき（Nasal Rubbing）は5分間当たりの回数（Counts per 5min）で示す。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例6）In ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice, capped dendritic cells with OVA and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW in the figure) were capped with anti-PD-L2 antibody It is a figure which shows that the nasal inflammation suppression effect by dendritic cells disappeared by transferring to the oral mucosa before induction of rhinitis. Such disappearance was not observed when a control antibody (shown as Cont in the figure) was used as an antibody (shown as Ab in the figure) instead of the anti-PD-L2 antibody. Left, middle and right panels show Sneezing, Nasal Rubbing, and serum IgE antibody titers, respectively. Sneezing and Nasal Rubbing are expressed as Counts per 5 min. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 6) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、OVAと加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激した樹状細胞を抗PD-L2抗体でキャップしてから、鼻炎誘導前に口腔粘膜下に移入すると、頸部リンパ節中のCD4T細胞からのTh2サイトカイン産生に対する樹状細胞の抑制効果が消失したことを示す図である。抗体（図中、Abと表示する）として、抗PD-L2抗体の代わりにコントロール抗体（図中、Contと表示する）を用いたときは、このような消失は認められなかった。左、中央、および右のパネルはそれぞれ、IL-4、IL-5、およびIL-13の産生を示す。LPSは、陽性コントロールとして用いたリポポリサッカライドを意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例6）In ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice, capped dendritic cells with OVA and heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (shown as KW in the figure) were capped with anti-PD-L2 antibody FIG. 3 is a graph showing that the dendritic cell inhibitory effect on Th2 cytokine production from CD4 T cells in cervical lymph nodes disappeared when transferred to the oral mucosa before induction of rhinitis. Such disappearance was not observed when a control antibody (shown as Cont in the figure) was used as an antibody (shown as Ab in the figure) instead of the anti-PD-L2 antibody. The left, middle, and right panels show IL-4, IL-5, and IL-13 production, respectively. LPS means lipopolysaccharide used as a positive control. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 6) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激した樹状細胞を、鼻炎誘導後に舌下投与（図中、Sub.と表示する）することにより、鼻炎症状が抑制されたことを示す図である。一方、KWを鼻炎誘導後に経胃管投与（図中、Intragulletと表示する）したときには、鼻炎症状の抑制は認められなかった。左、中央、および右のパネルはそれぞれ、くしゃみ（Sneezing）、鼻かき（Nasal Rubbing）、および血清IgE抗体価を示す。くしゃみ（Sneezing）および鼻かき（Nasal Rubbing）は5分間当たりの回数（Counts per 5min）で示す。図中、PはKWを投与しなかったことを示す。また、Boostとは、追加免疫を意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例7）In ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice, dendritic cells co-stimulated with heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (indicated as KW in the figure) were administered sublingually after induction of rhinitis (in the figure, Sub It is a figure which shows that the nasal inflammation state was suppressed by displaying. On the other hand, when KW was administered via gastric tube after induction of rhinitis (indicated as Intragullet in the figure), suppression of nasal inflammation was not observed. Left, middle and right panels show Sneezing, Nasal Rubbing, and serum IgE antibody titers, respectively. Sneezing and Nasal Rubbing are expressed as Counts per 5 min. In the figure, P indicates that KW was not administered. Boost means additional immunity. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 7) 卵白アルブミン（OVA）抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）で共刺激した樹状細胞を、鼻炎誘導後に舌下投与（図中、Sub.と表示する）することにより、頸部リンパ節中のCD4T細胞からのTh2サイトカイン産生が抑制されたことを示す図である。一方、KWを鼻炎誘導後に経胃管投与（図中、Intragulletと表示する）したときには、Th2サイトカイン産生の抑制は認められなかった。左、中央、および右のパネルはそれぞれ、IL-4、IL-5、およびIL-13の産生を示す。図中、PはKWを投与しなかったことを示す。また、Boostとは、追加免疫を意味する。また、「*」は有意差が認められたことを、「n.d」は検出されなかったことを示す。（実施例7）In ovalbumin (OVA) antigen-induced allergic rhinitis model mice, dendritic cells co-stimulated with heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (indicated as KW in the figure) were administered sublingually after induction of rhinitis (in the figure, Sub FIG. 3 shows that Th2 cytokine production from CD4 T cells in cervical lymph nodes was suppressed. On the other hand, when KW was administered via gastric tube after induction of rhinitis (indicated as Intragullet in the figure), suppression of Th2 cytokine production was not observed. The left, middle, and right panels show IL-4, IL-5, and IL-13 production, respectively. In the figure, P indicates that KW was not administered. Boost means additional immunity. In addition, “*” indicates that a significant difference was recognized, and “n.d” indicates that it was not detected. (Example 7) スギ花粉抗原エキスおよび加熱処理乳酸菌を用いてスギ花粉症患者に実施した舌下減感作療法の投与プロトコルの概略を示す図である。（実施例8）It is a figure which shows the outline of the administration protocol of the sublingual desensitization therapy implemented to the cedar pollinosis patient using the cedar pollen antigen extract and the heat processing lactic acid bacteria. (Example 8) 加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（図中、KWと表示する）タブレットおよびスギ花粉抗原エキスの舌下投与により、スギ花粉症患者の症状薬物スコア（symptom-medication score；SMSと略称する。）がプラセボ（Placebo）投与群と比較して緩和されたことを示す図である。SMSによる評価は2月1日より開始して隔日に行った。縦軸はSMSを示し、横軸は評価開示日からの日数（days）を示す。図中、SLITはスギ花粉抗原エキスの投与による舌下減感作療法（SubLingual ImmunoTherapy）を意味する。また、seasonは、花粉の飛散している時期を示す。（実施例9）By sublingual administration of heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 (indicated as KW in the figure) tablet and cedar pollen antigen extract, the symptom-medication score (symptom-medication score; abbreviated as SMS) of patients with cedar pollinosis is placebo. It is a figure which shows having been relieved compared with the placebo administration group. SMS assessment was started every other day starting on February 1st. The vertical axis indicates SMS, and the horizontal axis indicates the number of days since the evaluation disclosure date. In the figure, SLIT means sublingual desensitization therapy (SubLingual ImmunoTherapy) by administration of cedar pollen antigen extract. The season indicates the time when pollen is scattered. (Example 9)

本発明は、乳酸菌および抗原物質を含む抗アレルギー剤に関する。本発明に係る抗アレルギー剤は、口腔内に投与されることを特徴とする。また、本発明は、乳酸菌および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用を提供する。   The present invention relates to an antiallergic agent containing lactic acid bacteria and an antigenic substance. The antiallergic agent according to the present invention is administered into the oral cavity. The present invention also provides the use of lactic acid bacteria and antigenic substances in the production of antiallergic agents.

本発明は、I型アレルギー疾患、好ましくは気道アレルギー疾患の治療に有効である。I型アレルギー疾患とは、外界から侵入した抗原物質に特異的なIgE抗体が関与することで引き起こされるアレルギー疾患であり、該抗原物質に特異的に引き起こされることを特徴とする。用語「抗原物質に特異的なIgE抗体」とは、特定の抗原物質に対して結合するが別の抗原物質に対しては結合しないIgE抗体をいう。用語「抗原物質に特異的に引き起こされる」とは、特定の抗原物質により引き起こされるが、他の抗原物質では引き起こされないことをいう。I型アレルギー疾患の臨床症状は、全身アナフィラキシーおよび局所アナフィラキシーに分けられ、局所アナフィラキシーには、アレルギー性気管支喘息、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹などの皮膚炎、アレルギー性胃腸炎などが含まれる。用語「気道アレルギー疾患」とは、外来抗原によるI型アレルギー反応により、該外来抗原特異的に、鼻、咽頭、口頭などの上気道や、気管および気管支で炎症反応が生じる疾患をいう。気道アレルギー疾患として、アレルギー性鼻炎、花粉症、アレルギー性気管支喘息などを例示できる。用語「アレルギー性鼻炎」は、ホコリ、ダニ、花粉などの吸入性抗原の吸入により、鼻部位における炎症症状、すなわちくしゃみ、鼻みず、鼻づまりなどの臨床症状が生じる疾患をいう。   The present invention is effective for the treatment of type I allergic diseases, preferably airway allergic diseases. A type I allergic disease is an allergic disease caused by the involvement of an IgE antibody specific to an antigenic substance invading from the outside world, and is characterized by being specifically caused by the antigenic substance. The term “IgE antibody specific for an antigenic substance” refers to an IgE antibody that binds to a specific antigenic substance but does not bind to another antigenic substance. The term “specifically caused by an antigenic substance” means that it is caused by a specific antigenic substance but not by other antigenic substances. Clinical symptoms of type I allergic diseases are divided into systemic anaphylaxis and local anaphylaxis, and local anaphylaxis includes allergic bronchial asthma, allergic rhinitis, dermatitis such as urticaria, allergic gastroenteritis and the like. The term “respiratory tract allergic disease” refers to a disease in which an inflammatory reaction occurs in the upper respiratory tract such as the nose, pharynx, or oral cavity, trachea, and bronchi due to a type I allergic reaction caused by a foreign antigen. Examples of airway allergic diseases include allergic rhinitis, hay fever and allergic bronchial asthma. The term “allergic rhinitis” refers to a disease in which inhalation of inhalable antigens such as dust, mites, pollen, etc. causes inflammatory symptoms in the nasal region, that is, clinical symptoms such as sneezing, nasal congestion and nasal congestion.

用語「抗アレルギー剤」は、抗アレルギー効果を有し、アレルギー疾患の治療に使用される薬剤を意味する。用語「抗アレルギー効果」は、アレルギー疾患の発症を抑制する作用、および／または、アレルギー疾患における臨床症状を低減または消失させる作用を意味する。用語「アレルギー疾患の治療」は、アレルギー疾患の発症を予防すること、および、アレルギー疾患における臨床症状を改善することを含む。すなわち、抗アレルギー剤は、アレルギー疾患の治療剤、アレルギー疾患の予防剤、アレルギー疾患の改善剤のいずれでもあり得る。また、抗アレルギー剤は、免疫療法、例えば抗原特異的減感作療法に使用し得る免疫療法剤であることができる。抗原特異的減感作療法に使用し得る免疫療法剤を、ワクチンと称することがある。   The term “antiallergic agent” means a drug that has an antiallergic effect and is used to treat allergic diseases. The term “antiallergic effect” means an action of suppressing the onset of allergic diseases and / or an action of reducing or eliminating clinical symptoms in allergic diseases. The term “treatment of allergic diseases” includes preventing the development of allergic diseases and improving clinical symptoms in allergic diseases. That is, the antiallergic agent can be any of a therapeutic agent for allergic diseases, a prophylactic agent for allergic diseases, and an improving agent for allergic diseases. The antiallergic agent can also be an immunotherapeutic agent that can be used for immunotherapy, such as antigen-specific desensitization therapy. An immunotherapeutic agent that can be used for antigen-specific desensitization therapy is sometimes referred to as a vaccine.

「乳酸菌」は、代謝により乳酸を生成する細菌と定義される。乳酸菌はその形態や発酵産物などの特性から、ラクトバシラス（Lactobacillus）属、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属、エンテロコッカス（Enterococcus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ペディオコッカス（Pediococcus）属、リューコノストック（Leuconostoc）属などに分類される。また、それぞれの属には、casei種、brevis種、johnsonii種など様々な種が存在する。さらに、一つの種の中には無数の株が存在し、多種多様な集団を形成している。   “Lactic acid bacteria” are defined as bacteria that produce lactic acid by metabolism. Lactic acid bacteria are characterized by their morphology, fermentation products, and other characteristics. It is classified into the genus of stock (Leuconostoc). Each genus includes various species such as casei, brevis, and johnsonii. In addition, there are innumerable strains in one species, forming a wide variety of populations.

本発明において使用される乳酸菌としては、Lactobacillus属、Bifidobacterium属、Enterococcus属、Lactococcus属、Pediococcus属、Leuconostoc属に属する乳酸菌を例示できるが、これらに限定されない。好ましくはLactobacillus属に属する乳酸菌、より好ましくはLactobacillus paracasei、より具体的には Lactobacillus paracase KW3110を例示できる。その他、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus buchneri、Lactobacillus casei、Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus kefiri、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus salibarius、Lactococcus lactis、Lactococcus plantarum、Lactococcus raffinolactis、Leuconostoc lactis、Leuconostoc mesenteroides、Enterococcus faecalis、Enterococcus faeciumなどを例示できる。   Examples of the lactic acid bacteria used in the present invention include, but are not limited to, the genus Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus, Lactococcus, Pediococcus, and Leuconostoc. Preferred examples include lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, more preferably Lactobacillus paracasei, and more specifically Lactobacillus paracase KW3110. Other, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus kefiri, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salibarius, Lactococcus lactis, Lactococcus plantarum, Lactococcus raffinolactis, Leuconostoc lactis, Leuconostoc mesenteroides, Enterococcus faecalis, Examples include Enterococcus faecium.

本発明において使用される乳酸菌は、抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現、および局所リンパ節へのホーミングケモカインCCR7発現を増強する機能を有する。したがって、本機能を指標にして本発明に用いる乳酸菌を選択することが可能である。PD-L2発現およびCCR7発現の測定は、ヒト、あるいは非ヒト動物、例えばマウスから採取した細胞から調製した樹状細胞やマクロファージなどの抗原提示細胞を用い、乳酸菌のみとまたは乳酸菌と適当な抗原物質と共にインキュベーションすることにより刺激した後、細胞表面上のPD-L2発現およびCCR7発現をそれぞれ抗PD-L2抗体および抗CCR7抗体を用いて検出することにより実施できる（実施例2および3を参照）。PD-L2分子はPD-1の第2のリガンドであり、PD-1はT細胞活性化を阻害する役割を果たす共刺激分子である。CCR7分子は、リンパ球や樹状細胞の細胞表面上に発現し、CCR7リガンドの結合により、これら細胞のリンパ節へのホーミングに関与する。また、CCR7リガンドの作用により、樹状細胞は、リンパ節への移動に先立って、炎症局所における抗原物質の取り込みが誘導される（Yanagawa Y. et al., (2003) CCR7 ligands induce rapid endocytosis in mature dendritic cells with concomitant up-regulation of Cdc42 and Rac activities. Blood, 101(12), 4923-4929.）。したがって、抗原物質と共に乳酸菌で刺激することにより、PD-L2分子とCCR7分子とを発現する発現抑制型樹状細胞を誘導して効率的に炎症局所へ移行させることができ、その結果、Th2細胞活性化を抑制することができるため、Th2細胞が関与するアレルギー疾患を改善することができる。例えば、気道アレルギー疾患などのTh2型気道疾患において、抗原物質と共に加熱処理乳酸菌を口腔内投与すると、気道で誘導された抗原特異的なTh2型免疫炎症反応を局所リンパ節で効率よく抑制することができる。そのため、本アレルギー剤は、患者が自ら手軽にアレルギーの発症を予防できる口腔粘膜ワクチンとして提供することが可能である。   The lactic acid bacteria used in the present invention have a function of enhancing the expression of suppressive stimulating molecule PD-L2 on antigen-presenting cells and the expression of homing chemokine CCR7 to local lymph nodes. Therefore, it is possible to select lactic acid bacteria used in the present invention using this function as an index. PD-L2 expression and CCR7 expression are measured using antigen-presenting cells such as dendritic cells and macrophages prepared from cells collected from humans or non-human animals such as mice. After stimulation by incubation with, PD-L2 expression and CCR7 expression on the cell surface can be performed by detecting with anti-PD-L2 antibody and anti-CCR7 antibody, respectively (see Examples 2 and 3). PD-L2 molecule is the second ligand of PD-1, which is a costimulatory molecule that plays a role in inhibiting T cell activation. CCR7 molecules are expressed on the cell surface of lymphocytes and dendritic cells and are involved in homing of these cells to the lymph nodes by binding of CCR7 ligands. In addition, the action of CCR7 ligand induces dendritic cells to take up antigenic substances in the inflamed area prior to migration to the lymph nodes (Yanagawa Y. et al., (2003) CCR7 ligands induce rapid endocytosis in mature dendritic cells with concomitant up-regulation of Cdc42 and Rac activities. Blood, 101 (12), 4923-4929.). Therefore, by stimulating with lactic acid bacteria together with antigenic substances, expression-suppressed dendritic cells expressing PD-L2 molecule and CCR7 molecule can be induced and efficiently transferred to the local area of inflammation. Since the activation can be suppressed, allergic diseases involving Th2 cells can be improved. For example, in Th2-type respiratory tract diseases such as airway allergic diseases, when heat-treated lactic acid bacteria are administered into the oral cavity together with antigenic substances, antigen-specific Th2-type immune inflammatory reactions induced in the respiratory tract can be efficiently suppressed in local lymph nodes. it can. Therefore, this allergic agent can be provided as an oral mucosal vaccine that allows patients to easily prevent the onset of allergy by themselves.

乳酸菌は、乳酸菌培養の常法に従い任意の条件で培養し、得られた培養物から遠心分離等の集菌手段によって分離することにより製造できる。本発明において使用される乳酸菌は、生菌体であってもよく、死菌体であってもよい。好ましくは乳酸菌の死菌体を使用する。乳酸菌の死菌体は、加熱処理により容易に製造できる。加熱処理は、100℃で30分間から60分間程度処理することにより実施できる。本明細書において、加熱処理した乳酸菌を「加熱処理乳酸菌」と称することがある。乳酸菌、例えばLactobacillus paracase KW3110の培養方法および加熱処理の具体例を次に示す。乳酸菌の培養には、培養用培地（グルコース1％、酵母エキスＳ（キリンフードテック株式会社製）1％、MgSO4・7H2O 50ppm、MnSO4・5H2O 50ppm）を使用する。前培養は、Lactobacillus paracase KW3110を培養用培地10mlに接種し、37℃で20〜24時間静置して行う。本培養は、前培養液0.6mlを120mlの培養用培地に接種し、200ml容ファーメンター（モデルBMJ-25、エイブル社製）を用いて、28℃にて培養する。通気量は0.12L／分、攪拌速度は500rpmとする。pHは25％ NaOH溶液を用いてpH4.5以下にならないように制御する。培養は48時間行う。培養終了後、8500g、10分間の遠心分離により、菌体を集菌する。30mlの滅菌蒸留水に懸濁し、8500g、10分間の遠心分離により、菌体を集菌する。この洗浄操作を3回繰り返し、培地由来成分を除去する。洗浄菌体を、10mlの滅菌水に懸濁し、オートクレーブにて100℃、30分間処理した後、凍結乾燥する。以上の方法により、最終的に乳酸菌乾燥菌体50〜70mgが得られる。 Lactic acid bacteria can be produced by culturing under arbitrary conditions according to a conventional method of lactic acid bacteria culture and separating the resulting culture by means of collection of bacteria such as centrifugation. The lactic acid bacteria used in the present invention may be live cells or dead cells. Preferably, dead lactic acid bacteria are used. Dead cells of lactic acid bacteria can be easily produced by heat treatment. The heat treatment can be carried out by treating at 100 ° C. for about 30 minutes to 60 minutes. In the present specification, heat-treated lactic acid bacteria may be referred to as “heat-treated lactic acid bacteria”. Specific examples of the culture method and heat treatment of lactic acid bacteria such as Lactobacillus paracase KW3110 are shown below. For culture of lactic acid bacteria, a culture medium (glucose 1%, yeast extract S (manufactured by Kirin Foodtech Co., Ltd.) 1%, MgSO 4 .7H 2 O 50 ppm, MnSO 4 · 5H 2 O 50 ppm) is used. Pre-culture is performed by inoculating 10 ml of culture medium with Lactobacillus paracase KW3110 and allowing to stand at 37 ° C. for 20 to 24 hours. In the main culture, 0.6 ml of the preculture solution is inoculated into 120 ml of the culture medium and cultured at 28 ° C. using a 200 ml fermenter (model BMJ-25, manufactured by Able). The aeration rate is 0.12 L / min, and the stirring speed is 500 rpm. The pH is controlled using a 25% NaOH solution so that the pH does not fall below 4.5. Incubate for 48 hours. After completion of the culture, the cells are collected by centrifugation at 8500 g for 10 minutes. Suspend in 30 ml of sterile distilled water and collect cells by centrifugation at 8500 g for 10 minutes. This washing operation is repeated 3 times to remove the medium-derived components. The washed cells are suspended in 10 ml of sterilized water, treated at 100 ° C. for 30 minutes in an autoclave, and then lyophilized. By the above method, 50 to 70 mg of dried lactic acid bacteria are finally obtained.

用語「抗原物質」とは、体内に入って免疫応答を発生させるもととなる原因物質を意味する。抗原物質のうち、生体内においてアレルギー反応を誘発する物質をアレルゲンと称することがある。アレルゲンはアレルギー疾患を持っている人の抗体と特異的に反応する。   The term “antigen substance” means a causative substance that enters the body and generates an immune response. Among antigenic substances, substances that induce allergic reactions in vivo may be referred to as allergens. Allergens react specifically with antibodies from people with allergic diseases.

本発明において使用される抗原物質は、生体内においてアレルギー反応を誘発する原因物質であれば特に制限されないが、スギ花粉、イネ科花粉、およびキク科花粉などの植物花粉、ダニの虫体や糞などを主体とするハウスダスト、イヌやネコなどの動物のフケを主体とする皮屑、真菌、小麦粉や木材加工の際の粉塵などの植物性微細物質、卵、大豆、牛乳などの食物が例示される。好ましくは、花粉やハウスダストなど、吸入によりアレルギー性鼻炎、気管支喘息、および花粉症などの気道アレルギーを引き起こす抗原物質が使用される。抗原物質は、花粉やハウスダストなどの抗原物質自体であってもよく、当該抗原物質から抽出された物質、例えば抽出エキス、タンパク質、またはペプチドなどであってもよい。例えば、花粉抽出エキス、スギ花粉ペプチドであるCry j 1、Cry j 1およびCS712など、ブタクサ花粉ペプチドであるAmb a 1、ダニ抗原ペプチドであるDer p 1およびDer f 1などを挙げることができる。本発明において使用される抗原物質として、好ましくはスギ花粉抗原、より具体的にはスギ花粉抗原エキスを例示できる。スギ花粉抗原エキスは、スギ花粉から自体公知の調製方法により取得できるが、市販されているもの（例えば、鳥居薬品株式会社製）を使用することもできる。本明細書において、花粉自体、花粉抽出エキス、花粉から抽出されたタンパク質またはペプチドなど、抗原物質として作用する花粉由来の物質を「花粉抗原」と総称する。   The antigenic substance used in the present invention is not particularly limited as long as it is a causal substance that induces an allergic reaction in vivo, but plant pollen such as cedar pollen, grass pollen, and asteraceae pollen, mite parasites and feces. Examples include house dust mainly composed of foods such as flesh, animal dust such as dogs and cats, fungi, fine plant substances such as flour and dust in processing wood, foods such as eggs, soybeans and milk. Is done. Preferably, antigenic substances that cause airway allergies such as allergic rhinitis, bronchial asthma, and hay fever by inhalation, such as pollen and house dust, are used. The antigen substance may be an antigen substance itself such as pollen or house dust, or may be a substance extracted from the antigen substance, such as an extract, protein, or peptide. Examples include pollen extract, cedar pollen peptides Cry j 1, Cry j 1 and CS712, ragweed pollen peptides Amb a 1, mite antigen peptides Der p 1 and Der f 1 and the like. The antigenic substance used in the present invention is preferably a cedar pollen antigen, more specifically a cedar pollen antigen extract. The cedar pollen antigen extract can be obtained from cedar pollen by a publicly known preparation method, but commercially available products (for example, manufactured by Torii Pharmaceutical Co., Ltd.) can also be used. In the present specification, pollen-derived substances acting as antigenic substances such as pollen itself, pollen extract, protein or peptide extracted from pollen are collectively referred to as “pollen antigen”.

本発明に係る抗アレルギー剤は、一種類の抗原物質および一種類の乳酸菌を含む薬剤であってもよく、また、複数種類の抗原物質および複数種類の乳酸菌を組み合わせて含む薬剤であってもよい。   The antiallergic agent according to the present invention may be a drug containing one type of antigenic substance and one type of lactic acid bacteria, or may be a drug containing a combination of a plurality of types of antigenic substances and a plurality of types of lactic acid bacteria. .

本発明に係る抗アレルギー剤は、乳酸菌および抗原物質を含んでなる薬剤として提供できる。また、乳酸菌を含む薬剤および抗原物質を含む薬剤を組み合わせてなるアレルギー治療用キットとして提供することもできる。   The antiallergic agent according to the present invention can be provided as a drug comprising lactic acid bacteria and an antigen substance. It can also be provided as an allergy treatment kit comprising a combination of a drug containing lactic acid bacteria and a drug containing an antigenic substance.

用語「口腔」は、口から喉までの間の空間をいう。口腔内への薬剤の投与とは、口から喉までの間の空間に薬剤を投与することであり、薬剤は嚥下せずに口腔内で作用させる。口腔内へ投与された薬剤は、口腔粘膜から吸収され、口腔粘膜組織や口腔周辺リンパ節に存在する細胞に作用する。また、口腔粘膜は吸収に好都合の薄い上皮と豊富な血管分布を有するため、薬剤は豊富な血管を介して全身性に作用する。   The term “oral cavity” refers to the space between the mouth and the throat. The administration of the drug into the oral cavity means that the drug is administered into the space between the mouth and the throat, and the drug acts in the oral cavity without swallowing. Drugs administered into the oral cavity are absorbed from the oral mucosa and act on cells present in the oral mucosal tissue and lymph nodes around the oral cavity. In addition, since the oral mucosa has a thin epithelium favorable for absorption and an abundant distribution of blood vessels, the drug acts systemically through the abundant blood vessels.

口腔内への投与は、舌下剤、バッカル剤、トローチ、口内スプレー剤、付着剤などを用いて実施できる。剤形としては、錠剤、顆粒剤、粉末剤、液剤、シロップ剤、乳剤、けん濁剤、軟膏などを例示できる。これらの製剤は、通常行われている手法により、薬学的に許容される担体とともに製剤化することができる。なお、製剤化にあたっては、本発明に係る抗アレルギー剤がその機能を生体内において適時的且つ効果的に発揮できるよう、持続性または徐放性剤形、溶出開始時間が制御された剤形、湿度に対する安定性を高めた剤形、例えば、コーティング剤や積層剤などとして製造できる。薬学的に許容される担体としては、製剤の使用形態に応じて通常使用される、充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤および賦形剤を例示できる。より具体的には、水、医薬的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトースを例示できる。これらは、本薬剤の剤形に応じて適宜1種類または2種類以上を組み合わせて使用される。その他、安定化剤、殺菌剤、緩衝剤、等張化剤、キレート剤、界面活性剤、およびpH調整剤等を適宜使用することもできる。安定化剤は、例えばヒト血清アルブミンや通常のL−アミノ酸、糖類、セルロース誘導体を例示できる。L−アミノ酸は、特に限定はなく、例えばグリシン、システイン、グルタミン酸等のいずれでもよい。糖類も特に限定はなく、例えばグルコース、マンノース、ガラクトース、果糖等の単糖類、マンニトール、イノシトール、キシリトール等の糖アルコール、ショ糖、マルトース、乳糖等の二糖類、デキストラン、ヒドロキシプロピルスターチ、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸等の多糖類等およびそれらの誘導体等のいずれでもよい。セルロース誘導体も特に限定はなく、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のいずれでもよい。界面活性剤も特に限定はなく、イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤のいずれも使用できる。界面活性剤には、例えばポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル系、ポリオキシエチレンアルキルエーテル系、ソルビタンモノアシルエステル系、脂肪酸グリセリド系等が包含される。緩衝剤は、ホウ酸、リン酸、酢酸、クエン酸、ε−アミノカプロン酸、グルタミン酸および／またはそれらに対応する塩（例えばそれらのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩）を例示できる。等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、糖類、グリセリンを例示できる。キレート剤は、例えばエデト酸ナトリウム、クエン酸を例示できる。また、適宜、嬌味剤や香料などの助剤を添加することもできる。   Administration into the oral cavity can be performed using a sublingual agent, buccal agent, troche, mouth spray, adhesive or the like. Examples of the dosage form include tablets, granules, powders, solutions, syrups, emulsions, suspensions, ointments and the like. These preparations can be formulated with a pharmaceutically acceptable carrier by a commonly used technique. In formulating, the antiallergic agent according to the present invention can exert its function in vivo in a timely and effective manner, a sustained or sustained release dosage form, a dosage form with controlled elution start time, It can be produced as a dosage form having improved stability against humidity, for example, a coating agent or a laminating agent. Examples of pharmaceutically acceptable carriers include fillers, extenders, binders, moisturizers, disintegrants, lubricants, diluents and excipients that are commonly used depending on the form of use of the preparation. it can. More specifically, water, pharmaceutically acceptable organic solvents, collagen, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, carboxyvinyl polymer, sodium alginate, water-soluble dextran, sodium carboxymethyl starch, pectin, xanthan gum, gum arabic, casein, Examples include gelatin, agar, glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, petrolatum, paraffin, stearyl alcohol, stearic acid, human serum albumin, mannitol, sorbitol, and lactose. These may be used alone or in combination of two or more according to the dosage form of the drug. In addition, stabilizers, bactericides, buffers, isotonic agents, chelating agents, surfactants, pH adjusters, and the like can be used as appropriate. Examples of the stabilizer include human serum albumin, ordinary L-amino acids, saccharides, and cellulose derivatives. The L-amino acid is not particularly limited, and may be any of glycine, cysteine, glutamic acid and the like. The saccharide is not particularly limited, for example, monosaccharides such as glucose, mannose, galactose, and fructose, sugar alcohols such as mannitol, inositol, and xylitol, disaccharides such as sucrose, maltose, and lactose, dextran, hydroxypropyl starch, chondroitin sulfate, Any of polysaccharides such as hyaluronic acid, and derivatives thereof may be used. The cellulose derivative is not particularly limited, and may be any of methyl cellulose, ethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, carboxymethyl cellulose sodium and the like. There is no particular limitation on the surfactant, and either an ionic surfactant or a nonionic surfactant can be used. Examples of the surfactant include polyoxyethylene glycol sorbitan alkyl ester, polyoxyethylene alkyl ether, sorbitan monoacyl ester, and fatty acid glyceride. Buffering agents include boric acid, phosphoric acid, acetic acid, citric acid, ε-aminocaproic acid, glutamic acid and / or salts thereof (for example, alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt, calcium salt, magnesium salt, etc. An alkaline earth metal salt). Examples of the isotonic agent include sodium chloride, potassium chloride, saccharides and glycerin. Examples of the chelating agent include sodium edetate and citric acid. Moreover, auxiliary agents, such as a flavoring agent and a fragrance | flavor, can also be added suitably.

本発明に係る薬剤中に含まれる抗原物質および乳酸菌の量は、広範囲から適宜選択される。通常約0.00001〜70重量％、好ましくは0.0001〜5重量％程度の範囲とするのが適当である。   The amounts of the antigenic substance and lactic acid bacteria contained in the drug according to the present invention are appropriately selected from a wide range. Usually, it is suitable to be in the range of about 0.00001 to 70% by weight, preferably about 0.0001 to 5% by weight.

本発明に係る薬剤の用量範囲は特に限定されず、含有される成分の有効性、投与形態、投与経路、疾患の種類、対象の性質（体重、年齢、病状および他の医薬の使用の有無等）、および担当医師の判断等に応じて適宜選択される。乳酸菌の用量は一般的には、例えば約0.1mg／日〜1000mg／日、好ましくは約1mg／日〜300mg／日、より好ましくは10mg／日〜100mg／日の範囲であり、さらに好ましくは50mg／日である。抗原物質の用量は、抗原の種類や投与対象の状態によって適宜決定して使用する。例えば、アレルギー治療を目的とする抗原特異的減感作療法で使用する用量に順じて用量を決定することができる。スギ花粉抗原、例えばスギ花粉抗原エキス（鳥居薬品株式会社製）を使用する場合、その用量は4〜2000JAU／日程度の範囲であることが好ましい。ここでJAU（Japanese Allergy Units）とは、日本アレルギー学会により設定されたアレルゲン活性単位を意味する（安枝浩ほか、「アレルギー」、1996年、第45巻、第4号、p.416）。本発明に係る抗アレルギー剤の投与は、1日〜6ヶ月間、より好ましくは1ヶ月〜5ヶ月間、さらに好ましくは3ヶ月間〜5ヶ月間、さらにより好ましくは5ヶ月間程度実施することにより、高い抗アレルギー効果を得ることができる。投与期間中、連日投与することができ、また、休薬日を設けることもできる。長期間にわたって本発明に係る抗アレルギー剤を使用する場合、抗原特異的減感作療法と同様に、初回投与時は強いアレルギー反応が起きないように低用量の抗原物質を使用し、その後、徐々に増量することが好ましい。具体的には、スギ花粉抗原エキス（鳥居薬品株式会社製）およびLactobacillus paracasei KW3110を使用して製造された抗アレルギー剤を5ヶ月間にわたって投与する場合、投与の1週目から3週目までは5日間連続投与して2日間休薬し、4週目以降は連日投与するプロトコルによりスギ花粉に対する抗アレルギー効果を得ることができる。このとき、スギ花粉抗原エキスの1週目の用量は、4JAU／日、8JAU／日、12JAU／日、16JAU／日、20JAU／日と、経日的に増量し、2週目の用量は40JAU／日、80JAU／日、120JAU／日、160JAU／日、200JAU／日、3週目の用量は400JAU／日、800JAU／日、1200JAU／日、1600JAU／日、2000JAU／日、そして4週目以降の用量は連日2000JAU／日とする。スギ花粉抗原エキスと同日に投与するLactobacillus paracasei KW3110の用量は、例えば50mg／日が適当である。本発明においては、このようなプロトコルを実施するためのアレルギー治療用キットを提供できる。このようなアレルギー治療用キットとして、例えばスギ花粉抗原エキスの1日用量を含む薬剤と乳酸菌の1日用量を含む薬剤とを組み合わせてなるキットを例示できる。   The dose range of the drug according to the present invention is not particularly limited, and the effectiveness of the contained components, administration form, administration route, type of disease, nature of the subject (weight, age, medical condition, presence or absence of use of other drugs, etc. ) And the judgment of the doctor in charge, etc. The dose of lactic acid bacteria is generally in the range of, for example, about 0.1 mg / day to 1000 mg / day, preferably about 1 mg / day to 300 mg / day, more preferably 10 mg / day to 100 mg / day, and even more preferably 50 mg / Day. The dose of the antigen substance is appropriately determined depending on the type of antigen and the condition of the administration target. For example, the dose can be determined in accordance with the dose used in antigen-specific desensitization therapy for the purpose of allergy treatment. When using a cedar pollen antigen, for example, a cedar pollen antigen extract (manufactured by Torii Pharmaceutical Co., Ltd.), the dose is preferably in the range of about 4 to 2000 JAU / day. Here, JAU (Japanese Allergy Units) means an allergen activity unit set by the Japanese Allergy Society (Hiroshi Yasue et al., “Allergy”, 1996, Vol. 45, No. 4, p. 416). The administration of the antiallergic agent according to the present invention should be performed for 1 day to 6 months, more preferably for 1 month to 5 months, even more preferably for 3 months to 5 months, and even more preferably for about 5 months. Thus, a high antiallergic effect can be obtained. During the administration period, it can be administered every day, and a drug holiday can be provided. When the antiallergic agent according to the present invention is used for a long period of time, as with antigen-specific desensitization therapy, a low dose of antigenic substance is used so that a strong allergic reaction does not occur at the first administration, and then gradually. It is preferable to increase the amount. Specifically, when the anti-allergic agent manufactured using cedar pollen antigen extract (manufactured by Torii Pharmaceutical Co., Ltd.) and Lactobacillus paracasei KW3110 is administered for 5 months, from the first week to the third week of administration An antiallergic effect against cedar pollen can be obtained by a protocol that is administered continuously for 5 days and then withdrawn for 2 days. At this time, the dose of the cedar pollen antigen extract in the first week is 4 JAU / day, 8 JAU / day, 12 JAU / day, 16 JAU / day, 20 JAU / day, increasing daily, and the dose in the second week is 40 JAU. / Day, 80 JAU / day, 120 JAU / day, 160 JAU / day, 200 JAU / day, doses at 3 weeks are 400 JAU / day, 800 JAU / day, 1200 JAU / day, 1600 JAU / day, 2000 JAU / day, and after 4 weeks The daily dose is 2000 JAU / day. The dose of Lactobacillus paracasei KW3110 administered on the same day as the cedar pollen antigen extract is, for example, 50 mg / day. In the present invention, an allergy treatment kit for carrying out such a protocol can be provided. An example of such an allergy treatment kit is a kit comprising a combination of a drug containing a daily dose of cedar pollen antigen extract and a drug containing a daily dose of lactic acid bacteria.

本発明に係る抗アレルギー剤は、抗原暴露前に投与することがより好ましく、それによりアレルギーの発症予防および／または症状改善を効果的に達成できる。また、本抗アレルギー剤は、好ましくは連日投与することにより、アレルギーの発症予防および／または症状改善を長期間にわたって維持できる。さらに、本抗アレルギー剤を抗原暴露前から連日投与することにより、免疫療法、例えば抗原特異的減感作療法を達成できる。例えば、花粉抗原に対するアレルギー性鼻炎を対象に投与するときは、花粉の飛散前から花粉の飛散が観察されなくなる時期まで投与することが好ましい。また、抗原物質および乳酸菌を花粉の飛散前から連日投与することにより、花粉抗原特異的減感作療法を達成できる。   The anti-allergic agent according to the present invention is more preferably administered before the antigen exposure, whereby the onset of allergy and / or symptom improvement can be effectively achieved. Moreover, the antiallergic agent is preferably administered every day, so that the prevention of allergy and / or improvement of symptoms can be maintained for a long period of time. Furthermore, immunotherapy, for example, antigen-specific desensitization therapy, can be achieved by administering this antiallergic agent daily before antigen exposure. For example, when allergic rhinitis against a pollen antigen is administered to a subject, it is preferably administered from the time before pollen scattering until the time when pollen scattering is not observed. Moreover, pollen antigen-specific desensitization therapy can be achieved by administering the antigenic substance and lactic acid bacteria every day before the pollen is scattered.

本発明に係る抗アレルギー剤として、より具体的には、加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を含み、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下投与されることを特徴とする抗アレルギー剤を例示できる。さらにより具体的には、加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を含み、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に投与される抗アレルギー剤であって、該Lactobacillus paracasei KW3110の用量が50mg／日であり、該スギ花粉抗原の用量が4〜2000JAU／日であることを特徴とする抗アレルギー剤を例示できる。   More specifically, the antiallergic agent according to the present invention includes heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen, and is administered sublingually to allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen. Examples include antiallergic agents. Even more specifically, an antiallergic agent that is administered sublingually for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen, comprising heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen, and comprising the Lactobacillus paracasei KW3110 An antiallergic agent characterized in that the dose is 50 mg / day and the dose of the cedar pollen antigen is 4 to 2000 JAU / day.

本発明はまた、乳酸菌および抗原物質を併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法に関する。本発明において、乳酸菌および抗原物質は口腔内に併用投与することを特徴とする。   The present invention also relates to a method for treating allergic diseases, which comprises administering a lactic acid bacterium and an antigen substance together. In the present invention, the lactic acid bacteria and the antigenic substance are characterized by being administered together in the oral cavity.

抗原物質と乳酸菌を併用投与するとは、抗原物質と乳酸菌とを実質的に同時に投与することを意味する。実質的に同時に投与するとは、抗原物質と乳酸菌とを混合した形態で投与すること、別個に調製された抗原物質と乳酸菌とを同時に投与すること、または抗原物質と乳酸菌とを別個に投与するが、ほぼ同時に投与することを意味する。抗原物質と乳酸菌とを別個にほぼ同時に投与するとは、一方を投与した直後に他方を投与することを意味する。抗原物質と乳酸菌とを別個にほぼ同時に投与する場合、好ましくはまず抗原物質を投与し、その直後に乳酸菌を投与する。   Administration of the antigen substance and lactic acid bacteria together means that the antigen substance and lactic acid bacteria are administered substantially simultaneously. “Substantially simultaneous administration” means that the antigenic substance and lactic acid bacteria are administered in a mixed form, the separately prepared antigenic substance and lactic acid bacteria are administered simultaneously, or the antigenic substance and lactic acid bacteria are administered separately. Means to be administered almost simultaneously. Administration of the antigenic substance and lactic acid bacteria separately and substantially simultaneously means administration of the other immediately after administration of one. When the antigenic substance and lactic acid bacteria are administered separately and almost simultaneously, the antigenic substance is preferably administered first, and the lactic acid bacteria are administered immediately thereafter.

本発明に係るアレルギー疾患治療方法に使用する抗原物質と乳酸菌とは、それらを含む薬剤として調製してもよく、それぞれを別個に含む薬剤として調製してもよい。   The antigenic substance and lactic acid bacteria used in the method for treating allergic diseases according to the present invention may be prepared as a medicine containing them, or may be prepared as a medicine containing each separately.

抗原物質は、一種類の抗原物質であってもよく、また、複数種類の抗原物質を組み合わせて用いてもよい。また、乳酸菌は、一種類の乳酸菌であってもよく、また、複数種類の乳酸菌を組み合わせて用いてもよい。   The antigen substance may be a single type of antigen substance or a combination of a plurality of types of antigen substances. In addition, the lactic acid bacterium may be a single type of lactic acid bacterium, or a combination of a plurality of types of lactic acid bacteria.

本発明に係るアレルギー疾患治療方法として、より具体的には、加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法を例示できる。さらにより具体的には、加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法であって、該Lactobacillus paracasei KW3110の用量が50mg／日であり、該スギ花粉抗原の用量が4〜2000JAU／日であるアレルギー疾患治療方法を例示できる。   As a method for treating allergic disease according to the present invention, more specifically, heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen are administered under the tongue in combination with allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen. Examples of methods for treating allergic diseases. More specifically, a method for treating allergic diseases characterized in that the heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen are administered in combination under the tongue for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen, An example of a method for treating allergic diseases in which the dose of Lactobacillus paracasei KW3110 is 50 mg / day and the dose of the cedar pollen antigen is 4 to 2000 JAU / day can be exemplified.

抗原物質および乳酸菌は、抗原暴露前に投与することがより好ましく、それによりアレルギーの発症予防および／または症状改善を効果的に達成できる。また、抗原物質および乳酸菌は、好ましくは連日投与することにより、アレルギーの発症予防および／または症状改善を長期間にわたって維持できる。さらに、抗原物質および乳酸菌を抗原暴露前から連日投与することにより、免疫療法、例えば抗原特異的減感作療法を達成できる。例えば、花粉抗原に対するアレルギー性鼻炎を対象に投与するときは、花粉の飛散前から花粉の飛散が観察されなくなる時期まで投与することが好ましい。また、抗原物質および乳酸菌を花粉の飛散前から連日投与することにより、花粉抗原特異的減感作療法を達成できる。   It is more preferable to administer the antigenic substance and lactic acid bacteria before the antigen exposure, whereby the onset of allergy and / or symptom improvement can be effectively achieved. In addition, the antigenic substance and lactic acid bacteria are preferably administered daily, so that prevention of allergy and / or improvement of symptoms can be maintained over a long period of time. Furthermore, immunotherapy, for example, antigen-specific desensitization therapy, can be achieved by administering the antigenic substance and lactic acid bacteria every day before the antigen exposure. For example, when allergic rhinitis against a pollen antigen is administered to a subject, it is preferably administered from the time before pollen scattering until the time when pollen scattering is not observed. Moreover, pollen antigen-specific desensitization therapy can be achieved by administering the antigenic substance and lactic acid bacteria every day before the pollen is scattered.

以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下に示す実施例によって何ら限定されるものではない。下記実施例において、スギ花粉症患者および該患者由来の試料を使用した検討は全て、インフォームドコンセントを行って患者の意思を確認した後に実施したものである。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example is shown and this invention is demonstrated more concretely, this invention is not limited at all by the Example shown below. In the following examples, all studies using cedar pollinosis patients and samples derived from the patients were conducted after confirming the patient's intention through informed consent.

スギ花粉症における乳酸菌摂取効果を検討した。   The effect of lactic acid bacteria intake in cedar pollinosis was examined.

スギ花粉症患者のうちスギ花粉感作発症例75人を2群に分け、一方の群には、乳酸菌50mgを含むカプセルを、もう一方の群には乳酸菌を含まないカプセル（プラセボ）を経口投与した。投与は、花粉の飛散前から飛散が観察されなくなるまでの期間に相当する12月1日から翌年4月30日まで実施し、投与開始3週目までは1週間のうち5日間連日、4週目以降は7日間連日投与した。以下、花粉の飛散が観察されなくなる時期を花粉の飛散後という。   Of cedar pollinosis patients, 75 cases of cedar pollen sensitization were divided into 2 groups, and one group was orally administered capsules containing 50 mg of lactic acid bacteria and the other group was not containing lactic acid bacteria (placebo) did. The administration is carried out from December 1 to April 30 of the following year, which corresponds to the period from when the pollen scatters until it is no longer observed. From the first day onward, administration was continued for 7 days. Hereinafter, the time when pollen scattering is not observed is referred to as after pollen scattering.

乳酸菌として加熱処理したLactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）を用いた。スギ花粉の飛散前および飛散後に、スギ花粉感作発症患者より末梢血単核細胞（PBMC）を採取し、スギ花粉ペプチドCS712で刺激して48時間後に、IL-4、IL-5、およびIL-13の各サイトカイン分泌細胞数を測定した。これらサイトカインはいずれもTh2サイトカインである。各サイトカイン分泌細胞数について、花粉飛散前から花粉飛散後の増加の割合を算出し、スギ花粉特異的メモリーTh2細胞の増加率を評価した。   Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW) that was heat-treated as lactic acid bacteria was used. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were collected from cedar pollen sensitized patients before and after cedar pollen scatter, stimulated with cedar pollen peptide CS712, and 48 hours later, IL-4, IL-5, and IL The number of -13 cytokine-secreting cells was measured. These cytokines are all Th2 cytokines. For each cytokine-secreting cell count, the rate of increase after pollen scattering was calculated and the rate of increase in cedar pollen-specific memory Th2 cells was evaluated.

その結果、IL-13分泌細胞数の増加が、KW投与群で抑制された（図1）。IL-13は、Th2サイトカインであり、アレルギー炎症局所において重要な役割を果たす。一方、IL-4分泌細胞数およびIL-5分泌細胞数の増加率は、KW投与群とプラセボ投与群で差異は認められなかった。   As a result, the increase in the number of IL-13 secreting cells was suppressed in the KW administration group (FIG. 1). IL-13 is a Th2 cytokine and plays an important role in allergic inflammation. On the other hand, the increase rate of the number of IL-4 secreting cells and the number of IL-5 secreting cells was not different between the KW administration group and the placebo administration group.

上記結果から、加熱処理したKWによる刺激は、スギ花粉特異的メモリーTh2細胞の増加を抑制すると考えることができる。   From the above results, it can be considered that stimulation by heat-treated KW suppresses the increase in cedar pollen-specific memory Th2 cells.

ヒト樹状細胞を、アレルゲンによる刺激に加えて加熱処理乳酸菌共刺激したときの、細胞表面抗原の発現およびサイトカイン産生について検討した。   We examined cell surface antigen expression and cytokine production when human dendritic cells were co-stimulated with heat-treated lactic acid bacteria in addition to allergen stimulation.

まず、未熟樹状細胞を、ヒト末梢血から調製したCD14+細胞を顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）とIL-4の存在下で培養することにより作製した。未熟樹状細胞を用いてスギ花粉抗原Cry j 1（林原研究所製）および加熱処理乳酸菌で共刺激し、24時間後に、培養上清中のサイトカインおよび細胞表面上の補助刺激分子の発現を測定した。乳酸菌として、Lactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）、Lactobacillus acidophilus L92（以下、L92と略称することがある）およびBifidobacterium longum BB536（以下、BB536と略称することがある）を用いた。また、陽性コントロールとしてリポポリサッカライド（以下、LPSと略称することがある）をCry j 1との共刺激に用いて同様の検討を行った。サイトカインの測定は、IL-6およびIL-12（p70）について実施した。 First, immature dendritic cells were prepared by culturing CD14 + cells prepared from human peripheral blood in the presence of granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and IL-4. Immature dendritic cells were co-stimulated with cedar pollen antigen Cry j 1 (manufactured by Hayashibara Laboratories) and heat-treated lactic acid bacteria, and after 24 hours, the cytokines in the culture supernatant and the expression of costimulatory molecules on the cell surface were measured. did. Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW), Lactobacillus acidophilus L92 (hereinafter sometimes abbreviated as L92) and Bifidobacterium longum BB536 (hereinafter sometimes abbreviated as BB536) were used as lactic acid bacteria. . Further, as a positive control, lipopolysaccharide (hereinafter sometimes abbreviated as LPS) was used for costimulation with Cry j 1 and the same examination was performed. Cytokine measurements were performed for IL-6 and IL-12 (p70).

また、未熟樹状細胞をフルオレセインイソチオシアネート（FITC）標識したKWで共刺激した後に、未熟樹状細胞へのKWの取り込みを、フローサイトメトリーで測定し、また、蛍光顕微鏡下で観察した。   In addition, after immature dendritic cells were costimulated with fluorescein isothiocyanate (FITC) labeled KW, the uptake of KW into immature dendritic cells was measured by flow cytometry and observed under a fluorescence microscope.

Cry j 1と加熱処理乳酸菌との共刺激により、樹状細胞からIL-6が産生され、その産生量は刺激に用いた乳酸菌の種類により差異はなかった（図2-A）。   IL-6 was produced from dendritic cells by co-stimulation of Cry j 1 and heat-treated lactic acid bacteria, and the production amount did not differ depending on the type of lactic acid bacteria used for stimulation (FIG. 2-A).

IL-12（p70）は、Cry j 1とKWとの共刺激で著しく強い産生が認められた（図2-B）。しかし、その他の加熱処理乳酸菌やLPSによる共刺激では、IL-12（p70）は産生されないか、または産生量が低かった。   IL-12 (p70) was remarkably strongly produced by costimulation of Cry j 1 and KW (FIG. 2-B). However, co-stimulation with other heat-treated lactic acid bacteria and LPS did not produce IL-12 (p70) or produced a low amount.

抑制刺激分子であるPD-L2分子の発現は、Cry j 1とKWとで共刺激された細胞において、Cry j 1およびLPSとで共刺激された細胞、または、Cry j 1およびL92とで共刺激された細胞と比較して、より高いことが判明した（図2-D）。一方、HLA-DRやCD11cの発現も、Cry j 1と加熱処理乳酸菌との共刺激により誘導されたが、その発現量は刺激に用いた乳酸菌の種類により差異はなかった。   PD-L2 molecule, an inhibitory stimulator molecule, was expressed in cells co-stimulated with Cry j 1 and KW, cells co-stimulated with Cry j 1 and LPS, or co-stimulated with Cry j 1 and L92. It was found to be higher compared to stimulated cells (Figure 2-D). On the other hand, the expression of HLA-DR and CD11c was also induced by costimulation of Cry j 1 and heat-treated lactic acid bacteria, but the expression level was not different depending on the type of lactic acid bacteria used for stimulation.

また、未熟樹状細胞をFITC標識したKWで刺激すると、細胞の52.5％がKWを取り込んだ。（図2-C）。樹状細胞内には多数のKWが取り込まれていることが判明した（図2-C）。   In addition, when immature dendritic cells were stimulated with KTC labeled with FITC, 52.5% of the cells incorporated KW. (Figure 2-C). It was found that a large number of KW was taken up into dendritic cells (FIG. 2-C).

上記結果から、ヒト樹状細胞をアレルゲンで刺激するときに、KWを共刺激に用いると該細胞からのIL-12産生が強く誘導され、そして、抑制刺激分子であるPD-L2分子の発現が上昇することが明らかになった。一方、LPSを共刺激に用いたときには、樹状細胞からIL-12が産生されるものの産生量は低く、また、樹状細胞のPD-L2分子の発現もKWによる共刺激と比較して少なかった。このことから、ヒト樹状細胞をアレルゲンとKWとで共刺激したときのIL-12産生増強およびPD-L2分子の発現は、KW刺激が寄与していると考えることができる。   From the above results, when stimulating human dendritic cells with allergens, when KW is used for costimulation, IL-12 production from the cells is strongly induced, and the expression of PD-L2 molecule, which is a suppressive stimulating molecule, is suppressed. It became clear that it rose. On the other hand, when LPS is used for costimulation, the amount of IL-12 produced from dendritic cells is low, and the expression of PD-L2 molecules in dendritic cells is also less than that of KW costimulation. It was. From this, it can be considered that KW stimulation contributes to IL-12 production enhancement and PD-L2 molecule expression when human dendritic cells are co-stimulated with allergen and KW.

IL-12は、ナイーブTh細胞をTh1細胞に分化させる機能を有するため、IL-12産生が強く誘導されると、Th1細胞による免疫応答が優位になり、アレルギーの発症に関与するTh2細胞による免疫応答が抑制されると考えることができる。また、PD-L2分子は、活性化Th2細胞の抑制刺激であるPD-1分子に対するリガンドとして作用する。そのため、樹状細胞上のPD-L2分子の発現増加は、活性化Th2細胞を抑制し、ひいてはTh2細胞が関与するアレルギー反応を抑制すると考えることができる。   Since IL-12 has a function of differentiating naive Th cells into Th1 cells, when IL-12 production is strongly induced, the immune response by Th1 cells predominates, and immunity by Th2 cells involved in the development of allergies It can be considered that the response is suppressed. PD-L2 molecule also acts as a ligand for PD-1 molecule, which is a suppressive stimulus for activated Th2 cells. Therefore, it can be considered that increased expression of PD-L2 molecules on dendritic cells suppresses activated Th2 cells, and thus suppresses allergic reactions involving Th2 cells.

マウス樹状細胞を、アレルゲンによる刺激に加えて加熱処理乳酸菌共刺激したときの、細胞表面抗原の発現およびサイトカイン産生について検討した。   Cell surface antigen expression and cytokine production were examined when mouse dendritic cells were co-stimulated with heat-treated lactic acid bacteria in addition to allergen stimulation.

まず、未熟樹状細胞を、Balb/cマウスの骨髄細胞をGM-CSFで培養することにより作製した。未熟樹状細胞を用いてOVAおよび加熱処理乳酸菌で共刺激し、24時間後に、培養上清中のサイトカインおよび細胞表面上の補助刺激分子の発現を測定した。乳酸菌として、Lactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）およびLactobacillus acidophilus L92（以下、L92と略称することがある）を用いた。また、陽性コントロールとしてリポポリサッカライド（以下、LPSと略称することがある）をOVAとの共刺激に用いて同様の検討を行った。サイトカインの測定は、IL-6およびIL-12（p70）について実施した。   First, immature dendritic cells were prepared by culturing Balb / c mouse bone marrow cells with GM-CSF. Immature dendritic cells were costimulated with OVA and heat-treated lactic acid bacteria, and 24 hours later, the expression of cytokines in the culture supernatant and costimulatory molecules on the cell surface was measured. Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW) and Lactobacillus acidophilus L92 (hereinafter sometimes abbreviated as L92) were used as lactic acid bacteria. Further, as a positive control, lipopolysaccharide (hereinafter sometimes abbreviated as LPS) was used for costimulation with OVA, and the same examination was performed. Cytokine measurements were performed for IL-6 and IL-12 (p70).

OVAと加熱処理乳酸菌との共刺激により、樹状細胞からIL-6が産生され、その産生量は刺激に用いた乳酸菌の種類により差異はなかった（図3-A）。   IL-6 was produced from dendritic cells by co-stimulation of OVA and heat-treated lactic acid bacteria, and the production amount was not different depending on the type of lactic acid bacteria used for stimulation (FIG. 3-A).

IL-12（p70）は、OVAとKWとの共刺激で著しく強い産生が認められた（図3-B）。しかし、L92やLPSによる共刺激では、IL-12（p70）の産生量は低かった。   IL-12 (p70) was remarkably produced by costimulation with OVA and KW (Fig. 3-B). However, IL-12 (p70) production was low by costimulation with L92 and LPS.

抑制刺激分子であるPD-L2分子の発現は、OVAとKWとで共刺激された細胞において、OVAとLPSとで共刺激された細胞、または、OVAおよびL92で共刺激された細胞と比較して、より高いことが判明した（図3-C）。また、リンパ節へのホーミングケモカインレセプターであるCCR7分子も、OVAとKWとで共刺激された細胞において、高い発現が認められた（図3-C）。一方、HLA-DRやCD11cの発現も、OVAと加熱処理乳酸菌との共刺激により誘導されたが、その発現量は刺激に用いた乳酸菌の種類により差異はなかった。   The expression of PD-L2 molecule, which is a suppressive stimulating molecule, was compared to cells co-stimulated with OVA and LPS, or cells co-stimulated with OVA and L92 in cells co-stimulated with OVA and KW. Was found to be higher (FIG. 3-C). In addition, CCR7 molecule, a homing chemokine receptor to lymph nodes, was also highly expressed in cells co-stimulated with OVA and KW (Fig. 3-C). On the other hand, the expression of HLA-DR and CD11c was also induced by costimulation of OVA and heat-treated lactic acid bacteria, but the expression level did not differ depending on the type of lactic acid bacteria used for stimulation.

上記結果から、マウス樹状細胞をアレルゲンで刺激するときに、KWを共刺激に用いると該細胞からのIL-12産生が強く誘導され、そして、抑制刺激分子であるPD-L2分子、およびリンパ節へのホーミングケモカインレセプターであるCCR7分子の発現が上昇することが明らかになった。IL-12は、ナイーブTh細胞をTh1細胞に分化させる機能を有するため、IL-12産生が強く誘導されると、Th1細胞による免疫応答が優位になり、アレルギーの発症に関与するTh2細胞による免疫応答が抑制されると考えることができる。また、PD-L2分子は、活性化Th2細胞の抑制刺激であるPD-1分子に対するリガンドとして作用する。そのため、樹状細胞上のPD-L2分子の発現増加は、活性化Th2細胞を抑制し、ひいてはTh2細胞が関与するアレルギー反応を抑制すると考えることができる。   From the above results, when stimulating mouse dendritic cells with allergens, when KW is used for costimulation, IL-12 production from the cells is strongly induced, and PD-L2 molecule, which is an inhibitory stimulating molecule, and lymph The expression of CCR7 molecule, a homing chemokine receptor to the node, was found to increase. Since IL-12 has a function of differentiating naive Th cells into Th1 cells, when IL-12 production is strongly induced, the immune response by Th1 cells predominates, and immunity by Th2 cells involved in the development of allergies It can be considered that the response is suppressed. PD-L2 molecule also acts as a ligand for PD-1 molecule, which is a suppressive stimulus for activated Th2 cells. Therefore, it can be considered that increased expression of PD-L2 molecules on dendritic cells suppresses activated Th2 cells, and thus suppresses allergic reactions involving Th2 cells.

アレルゲンによる刺激に加えて加熱処理乳酸菌共刺激したマウス樹状細胞の、マウスメモリーTh2細胞からのサイトカイン産生に対する影響を検討した。   We investigated the effect of mouse dendritic cells co-stimulated with heat-treated lactic acid bacteria in addition to allergen stimulation on cytokine production from mouse memory Th2 cells.

まず、未熟樹状細胞を、Balb/cマウスの骨髄細胞をGM-CSFで培養することにより作製した。メモリーTh2細胞として、Th2培養条件下で分化誘導したDO11.10マウス由来CD4+T細胞を用いた。Th2培養条件は、インターロイキン4（IL-4）、抗インターフェロンγ抗体（anti-IFNγab）および抗インターロイキン12抗体（anti-IL-12ab）の存在下での培養を意味する。DO11.10マウスは、OVA特異的T細胞抗原受容体（TCR）を発現するトランスジェニックマウスであり、CD4+T細胞はOVA特異的TCRを発現している。 First, immature dendritic cells were prepared by culturing Balb / c mouse bone marrow cells with GM-CSF. As memory Th2 cells, CD4 + T cells derived from DO11.10 mice induced to differentiate under Th2 culture conditions were used. Th2 culture conditions refer to culture in the presence of interleukin 4 (IL-4), anti-interferon γ antibody (anti-IFNγab) and anti-interleukin 12 antibody (anti-IL-12ab). DO11.10 mice are transgenic mice that express an OVA-specific T cell antigen receptor (TCR), and CD4 + T cells express an OVA-specific TCR.

未熟樹状細胞を用いてOVAおよび加熱処理乳酸菌で共刺激し、24時間後に、培養上清中のサイトカインを測定した。乳酸菌として、Lactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）およびLactobacillus acidophilus L92（以下、L92と略称することがある）を用いた。また、陽性コントロールとしてリポポリサッカライド（以下、LPSと略称することがある）をOVAとの共刺激に用いて同様の検討を行った。サイトカインの測定は、IL-4、IL-5およびIL-13について実施した。   Immature dendritic cells were costimulated with OVA and heat-treated lactic acid bacteria, and 24 hours later, cytokines in the culture supernatant were measured. Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW) and Lactobacillus acidophilus L92 (hereinafter sometimes abbreviated as L92) were used as lactic acid bacteria. Further, as a positive control, lipopolysaccharide (hereinafter sometimes abbreviated as LPS) was used for costimulation with OVA, and the same examination was performed. Cytokine measurements were performed for IL-4, IL-5 and IL-13.

メモリーTh2細胞からのOVA刺激によるIL-5およびIL-13の産生は、KWの共刺激により強く抑制された（それぞれ図4-Aおよび4-B）。一方、IL-4の産生は、OVAと加熱処理乳酸菌との共刺激により誘導されたが、その産生量は刺激に用いた乳酸菌の種類により差異はなかった。   IL-5 and IL-13 production by OVA stimulation from memory Th2 cells was strongly suppressed by KW costimulation (FIGS. 4-A and 4-B, respectively). On the other hand, IL-4 production was induced by costimulation of OVA and heat-treated lactic acid bacteria, but the production amount was not different depending on the type of lactic acid bacteria used for stimulation.

上記結果から、アレルゲンと共にKWにより共刺激した樹状細胞が、メモリーTh2細胞からのサイトカイン産生を抑制することが明らかになった。   The above results revealed that dendritic cells co-stimulated with KW together with allergens suppressed cytokine production from memory Th2 cells.

OVA抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスを用い、OVAとLactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）とで共刺激した樹状細胞を口腔粘膜下層に投与することでアレルギー性鼻炎の症状および炎症を緩和できるか検討した。   Symptoms of allergic rhinitis by administering dendritic cells co-stimulated with OVA and Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW) to the oral submucosa using OVA antigen-induced allergic rhinitis model mice And we examined whether inflammation could be alleviated.

まず、OVA誘発アレルギー性鼻炎モデルを次のように作製した。そして、このモデルマウスを用い、アレルギー性鼻炎誘導時のIgE抗体の産生部位を検討した。   First, an OVA-induced allergic rhinitis model was prepared as follows. Using this model mouse, the production site of IgE antibody at the time of allergic rhinitis induction was examined.

具体的には、Balb/cマウスにOVA抗原をアラム（Alum）と共に腹腔内に週1回の割合で3回投与することにより感作した。その後、感作マウスをOVAで7日間連続して鼻腔内刺激した。最終鼻腔刺激の後、マウスの臨床症状、および血清IgEレベルを測定した。また、骨髄（BM）、頸部リンパ節（CLN）、および脾臓（Spleen）を摘出し、IgE産生細胞の局在をELISPOT法を用いて解析した。   Specifically, the Balb / c mice were sensitized by administering OVA antigen together with Alum three times intraperitoneally once a week. Thereafter, sensitized mice were stimulated intranasally with OVA for 7 consecutive days. After the final nasal irritation, the mouse clinical symptoms and serum IgE levels were measured. In addition, bone marrow (BM), cervical lymph node (CLN), and spleen (Spleen) were removed, and the localization of IgE-producing cells was analyzed using the ELISPOT method.

その結果、感作マウスの鼻腔内OVA刺激は鼻炎の発症を誘導し、くしゃみの回数とIgEレベルが著しく増加した。IgE産生細胞は頸部リンパ節の細胞中に高頻度で認められた（図5-B）。また、IgG1産生細胞も同様に頸部リンパ節の細胞中に高頻度で認められた（図5-A）。   As a result, intranasal OVA stimulation in sensitized mice induced the onset of rhinitis, and the number of sneezing and IgE levels increased markedly. IgE-producing cells were frequently found in cervical lymph node cells (Fig. 5-B). Similarly, IgG1-producing cells were also found in the cervical lymph node cells at a high frequency (FIG. 5-A).

次に、アレルギー性鼻炎モデルマウスに、OVAとKWとで共刺激した樹状細胞を口腔粘膜下層に投与し、鼻炎症状、血清中IgE抗体価、および、Th2サイトカイン産生の変化を測定した。   Next, dendritic cells co-stimulated with OVA and KW were administered to allergic rhinitis model mice in the submucosa of the oral mucosa, and changes in nasal inflammation, serum IgE antibody titer, and Th2 cytokine production were measured.

具体的には、Balb/cマウスにOVA抗原をAlumと共に腹腔内に週1回の割合で3回投与することにより感作した後、OVAとKWまたはLPSとで共刺激した樹状細胞（以下、DCsと略称することがある）を、マウスの口腔粘膜下層に移入した。樹状細胞移入24時間後に、OVAを7日間連続して経鼻投与してアレルギー性鼻炎を発症させた。そして、マウスの鼻炎症状の観察、並びに血清IgE抗体価および頸部リンパ節中CD4+T細胞からのTh2サイトカイン産生を測定した。サイトカイン産生の測定は、頸部リンパ節から常法により分離したCD4+T細胞を抗原提示細胞と混合して48時間培養し、その培養上清中のサイトカインを測定することにより行った。 Specifically, dendritic cells co-stimulated with OVA and KW or LPS after the sensitization of Balb / c mice by administering OVA antigen together with Alum three times a week in the abdominal cavity , Sometimes abbreviated as DCs) was transferred to the oral submucosa of mice. 24 hours after dendritic cell transfer, OVA was administered nasally for 7 consecutive days to develop allergic rhinitis. The mice were observed for nasal inflammation, and the serum IgE antibody titer and Th2 cytokine production from CD4 + T cells in the cervical lymph nodes were measured. Cytokine production was measured by mixing CD4 + T cells isolated from cervical lymph nodes by conventional methods with antigen-presenting cells and culturing for 48 hours, and measuring the cytokine in the culture supernatant.

その結果、OVAとKWとで共刺激した樹状細胞を移入したマウスでは、くしゃみおよび鼻かきの著しい緩和、並びに、血清IgE抗体価の著しい低下が観察された（図6-A）。   As a result, in mice transfected with dendritic cells co-stimulated with OVA and KW, a marked relief of sneezing and nasal snuff and a marked decrease in serum IgE antibody titer were observed (FIG. 6-A).

また、OVAとKWとで共刺激した樹状細胞を移入したマウスの頸部リンパ節中CD4+T細胞からのTh2サイトカイン、すなわちIL-4、IL-5、およびIL-13の産生の著しい抑制が認められた（図6-B）。 It also markedly suppressed the production of Th2 cytokines, ie IL-4, IL-5, and IL-13, from CD4 + T cells in cervical lymph nodes of mice transfected with dendritic cells co-stimulated with OVA and KW Was observed (FIG. 6-B).

上記結果から、アレルゲンと共にKWにより共刺激した樹状細胞が、アレルギー性鼻炎抑制作用を有することが判明した。より具体的には、口腔内移入された該樹状細胞がアレルギー性鼻炎の症状を緩和すること、および、頸部リンパ節内メモリーTh2細胞からのサイトカイン産生を抑制することが明らかになった。   From the above results, it was found that dendritic cells co-stimulated with KW together with allergen have an allergic rhinitis inhibitory effect. More specifically, it was revealed that the dendritic cells transferred into the oral cavity alleviate the symptoms of allergic rhinitis and suppress cytokine production from cervical lymph node memory Th2 cells.

OVA抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスを用い、OVAとLactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）とで共刺激した樹状細胞に強く発現した抑制刺激分子PD-L2が、該樹状細胞のアレルギー性鼻炎抑制作用に関与しているかを検討した。   An inhibitory stimulating molecule PD-L2 strongly expressed in dendritic cells co-stimulated with OVA and Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW) using an OVA antigen-induced allergic rhinitis model mouse, It was investigated whether it is involved in the allergic rhinitis inhibitory action of dendritic cells.

アレルギー性鼻炎モデルマウスに、OVAとKWとで共刺激した樹状細胞を抗PD-L2抗体で処理した後に口腔粘膜下層に投与し、鼻炎症状、血清中IgE抗体価、および、Th2サイトカイン産生の変化を測定した。   Allergic rhinitis model mice were treated with anti-PD-L2 antibody co-stimulated dendritic cells with OVA and KW, and then administered to the oral mucosa, resulting in nasal inflammation, serum IgE antibody titer, and Th2 cytokine production. Changes were measured.

具体的には、Balb/cマウスにOVA抗原をAlumと共に腹腔内に週1回の割合で3回投与することにより感作した後、OVAとKWまたはLPSとで共刺激した樹状細胞を抗PD-L2抗体またはコントロール抗体で処理した後に、マウスの口腔粘膜下層に移入した。樹状細胞の移入24時間後に、OVAを7日間連続して経鼻投与してアレルギー性鼻炎を発症させた。そして、マウスの鼻炎症状の観察、並びに血清IgE抗体価および頸部リンパ節中CD4+T細胞からのTh2サイトカイン産生を測定した。サイトカイン産生の測定は、頸部リンパ節から常法により分離したCD4+T細胞を抗原提示細胞と混合して48時間培養し、その培養上清中のサイトカインを測定することにより行った。 Specifically, Balb / c mice were sensitized by administering OVA antigen together with Alum three times a week into the peritoneal cavity, and then anti-dendritic dendritic cells co-stimulated with OVA and KW or LPS were treated. After treatment with PD-L2 antibody or control antibody, it was transferred to the oral mucosa of mice. 24 hours after dendritic cell transfer, OVA was administered nasally for 7 consecutive days to develop allergic rhinitis. The mice were observed for nasal inflammation, and the serum IgE antibody titer and Th2 cytokine production from CD4 + T cells in the cervical lymph nodes were measured. Cytokine production was measured by mixing CD4 + T cells isolated from cervical lymph nodes by conventional methods with antigen-presenting cells and culturing for 48 hours, and measuring the cytokine in the culture supernatant.

その結果、OVAとKWとで共刺激した後にコントロール抗体処理した樹状細胞を移入したマウスでは、くしゃみおよび鼻かきなどの鼻炎症状の著しい緩和、および、血清IgE抗体価の著しい低下が認められた。しかし、OVAとKWとで共刺激した後に抗PD-L2抗体処理した樹状細胞を移入したマウスでは、くしゃみおよび鼻かきの緩和、および、血清IgE抗体価の低下が認められなかった（図7-A）   As a result, in mice transfected with dendritic cells treated with control antibody after co-stimulation with OVA and KW, marked relief of nasal inflammation such as sneezing and nasal snuff and a significant decrease in serum IgE antibody titer were observed. . However, mice that were co-stimulated with OVA and KW and then transfected with dendritic cells treated with anti-PD-L2 antibody did not relieve sneezing and nasal snuff and decreased serum IgE antibody titer (Figure 7). -A)

また、OVAとKWとで共刺激した後にコントロール抗体処理した樹状細胞を移入したマウスでは、頸部リンパ節中CD4+T細胞からのTh2サイトカイン、すなわちIL-4、IL-5、およびIL-13の産生の著しい抑制が認められた。しかし、OVAとKWとで共刺激した後に抗PD-L2抗体処理した樹状細胞を移入したマウスでは、これらサイトカインの産生の抑制は認められなかった（図7-B）。 In addition, in mice transfected with dendritic cells that were co-stimulated with OVA and KW and then treated with control antibody, Th2 cytokines from cervical lymph node CD4 + T cells, namely IL-4, IL-5, and IL- A marked suppression of the production of 13 was observed. However, suppression of production of these cytokines was not observed in mice transfected with dendritic cells treated with anti-PD-L2 antibody after co-stimulation with OVA and KW (FIG. 7-B).

一方、OVAとLPSとで共刺激した樹状細胞を移入したマウスでは、抗PD-L2抗体およびコントロール抗体の別なく、鼻炎症状の緩和、血清IgE抗体価の低下、および頸部リンパ節中CD4+T細胞からのIL-4、IL-5、およびIL-13の産生の抑制は認められなかった。 On the other hand, in mice transfected with dendritic cells co-stimulated with OVA and LPS, nasal inflammation was alleviated, serum IgE antibody titer decreased, and CD4 in cervical lymph nodes, regardless of anti-PD-L2 antibody and control antibody + Suppression of IL-4, IL-5, and IL-13 production from T cells was not observed.

上記結果から、アレルゲンとKWとで共刺激した樹状細胞に強く発現した抑制刺激分子PD-L2が、該樹状細胞のアレルギー性鼻炎抑制作用に関与していることが明らかになった。すなわち、KWに加えて抗原刺激することにより樹状細胞上のPD-L2分子発現が増強調節され、そしてアレルギー性炎症部位でのメモリーTh2細胞反応が低減され、ひいてはアレルギー性炎症の症状が緩和されることが示唆された。   From the above results, it was revealed that the inhibitory stimulating molecule PD-L2 strongly expressed in dendritic cells co-stimulated with allergen and KW is involved in the allergic rhinitis suppressing action of the dendritic cells. In other words, antigen stimulation in addition to KW upregulates PD-L2 molecule expression on dendritic cells, reduces memory Th2 cell responses at allergic inflammation sites, and alleviates symptoms of allergic inflammation. It was suggested that

OVA抗原誘導型アレルギー性鼻炎モデルマウスを用い、Lactobacillus paracasei KW3110（以下、KWと略称することがある）の舌下投与により、アレルギー性鼻炎の症状および炎症が緩和されるか検討した。   Using an OVA antigen-induced allergic rhinitis model mouse, whether or not symptoms of allergic rhinitis and inflammation were alleviated by sublingual administration of Lactobacillus paracasei KW3110 (hereinafter sometimes abbreviated as KW) was investigated.

具体的には、Balb/cマウスにOVA抗原をAlumと共に腹腔内に週1回の割合で3回投与することにより感作した後、OVAを7日間連続して経鼻投与し、そのとき同時に、KWを舌下に0.5mg/day、または、経胃管で5mg/day投与した。そして、マウスの鼻炎症状の観察、並びに血清IgE抗体価および頸部リンパ節中CD4+T細胞からのTh2サイトカイン産生を測定した。サイトカイン産生の測定は、頸部リンパ節から常法により分離したCD4+T細胞を抗原提示細胞と混合して48時間培養し、その培養上清中のサイトカインを測定することにより行った。 Specifically, Balb / c mice were sensitized by administering OVA antigen together with Alum three times at a rate of once a week, followed by nasal administration of OVA for 7 consecutive days. KW was administered 0.5 mg / day sublingually or 5 mg / day via transgastric tube. The mice were observed for nasal inflammation, and the serum IgE antibody titer and Th2 cytokine production from CD4 + T cells in the cervical lymph nodes were measured. Cytokine production was measured by mixing CD4 + T cells isolated from cervical lymph nodes by conventional methods with antigen-presenting cells and culturing for 48 hours, and measuring the cytokine in the culture supernatant.

その結果、経胃管投与群と比較して、舌下投与群はくしゃみ、鼻かき、および血清IgE抗体価が顕著に抑制され（図8-A）、そして、頸部リンパ節中のCD4+T細胞からのTh2サイトカイン、すなわちIL-4、IL-5、およびIL-13産生も同様に抑制された（図8-B）。   As a result, the sublingual administration group had significantly reduced sneezing, nasal throat, and serum IgE antibody titers compared to the transgastric tube administration group (Fig. 8-A), and CD4 + in the cervical lymph nodes Production of Th2 cytokines, ie, IL-4, IL-5, and IL-13 from T cells was similarly suppressed (FIG. 8-B).

上記結果から、KWの舌下投与がアレルギー性鼻炎に対する新規な口腔粘膜免疫療法として臨床的に重要であることが実証された。   The above results demonstrated that sublingual administration of KW is clinically important as a novel oral mucosal immunotherapy for allergic rhinitis.

スギ花粉症患者に対し、抗原エキスと共に加熱処理乳酸菌を舌下投与する減感作療法を実施した。   To patients with cedar pollinosis, desensitization therapy was carried out by sublingual administration of heat-treated lactic acid bacteria together with antigen extract.

抗原エキスとして、鳥居薬品株式会社製のスギ花粉標準化エキス「トリイ」を用いた。プラセボエキスとして、50％ グリセリン食塩水を用いた。また、乳酸菌は、キリンビール株式会社製のKW乳酸菌タブレット（50mg）を用いた。プラセボタブレットとして、乳酸菌タブレットと見た目も風味も同様の錠剤を用いた。   A cedar pollen standardized extract “Torii” manufactured by Torii Pharmaceutical Co., Ltd. was used as an antigen extract. As a placebo extract, 50% glycerin saline was used. Moreover, the KW lactic acid bacteria tablet (50 mg) by Kirin Brewery Co., Ltd. was used for the lactic acid bacteria. As a placebo tablet, a tablet having the same appearance and flavor as a lactic acid bacteria tablet was used.

スギ花粉症患者は4群に分け、第1群にはスギ花粉エキスと乳酸菌タブレットを、第2群にはスギ花粉エキスとプラセボタブレットを、第3群にはプラセボエキスと乳酸菌タブレットを、第4群にはプラセボエキスとプラセボタブレットを投与した。   Japanese cedar pollinosis patients are divided into 4 groups, the first group is cedar pollen extract and lactic acid bacteria tablet, the second group is cedar pollen extract and placebo tablet, the third group is placebo extract and lactic acid bacteria tablet, the fourth group Groups received placebo extract and placebo tablet.

投与は、規定量のスギ花粉エキスを舌下に滴下し、2分間保持後に吐き出した直後に、乳酸菌タブレットを舌下に投与し、噛まずになめて溶解させることにより実施した。投与は花粉の飛散前の12月1日から花粉の飛散が観察されなくなる翌年4月30日まで実施した。最初の3週間は、5日間連続投与した後に2日間休薬する投薬プロトコルを適用し、その後、連日投与を行った。投与したスギ花粉エキス濃度と、投薬プロトコルの概略を図9に示す。   The administration was carried out by dripping a prescribed amount of cedar pollen extract under the tongue, immediately after exhaling after holding for 2 minutes, administering the lactic acid bacteria tablet under the tongue, and licking and dissolving without chewing. The administration was carried out from December 1 before pollen scattering until April 30 of the following year when no pollen scattering was observed. For the first 3 weeks, a dosing protocol was applied in which 5 days of continuous administration was followed by 2 days of withdrawal, followed by daily administration. The concentration of cedar pollen extract administered and an outline of the dosing protocol are shown in FIG.

その結果、スギ花粉エキスと乳酸菌タブレットを投与したスギ花粉症患者の臨床症状が、スギ花粉エキスのみまたは乳酸菌タブレットのみを投与したスギ花粉症患者の臨床症状と比較して、著しく改善されることが明らかである。   As a result, clinical symptoms of Japanese cedar pollinosis patients who received cedar pollen extract and lactic acid bacteria tablets were significantly improved compared to clinical symptoms of Japanese cedar pollinosis patients who received only cedar pollen extracts or only lactic acid bacteria tablets. it is obvious.

スギ花粉症患者に対し、抗原エキスと共に加熱処理乳酸菌を舌下投与する減感作療法を実施し、そのアレルギー性鼻炎症状に対する加熱処理乳酸菌の効果を検討した。   We performed desensitization therapy by sublingual administration of heat-treated lactic acid bacteria together with antigen extract to patients with cedar pollinosis, and examined the effect of heat-treated lactic acid bacteria on allergic rhinitis symptoms.

抗原エキスとして、鳥居薬品株式会社製のスギ花粉標準化エキス「トリイ」を用いた。プラセボエキスとして、50％ グリセリン食塩水を用いた。また、乳酸菌は、キリンビール株式会社製のKW乳酸菌タブレット（50mg）を用いた。プラセボタブレットとして、乳酸菌タブレットと見た目も風味も同様の錠剤を用いた。   A cedar pollen standardized extract “Torii” manufactured by Torii Pharmaceutical Co., Ltd. was used as an antigen extract. As a placebo extract, 50% glycerin saline was used. Moreover, the KW lactic acid bacteria tablet (50 mg) by Kirin Brewery Co., Ltd. was used for the lactic acid bacteria. As a placebo tablet, a tablet having the same appearance and flavor as a lactic acid bacteria tablet was used.

スギ花粉症患者は4群に分け、第1群にはスギ花粉エキスと乳酸菌タブレットを、第2群にはスギ花粉エキスとプラセボタブレットを、第3群にはプラセボエキスと乳酸菌タブレットを、第4群にはプラセボエキスとプラセボタブレットを投与した。   Japanese cedar pollinosis patients are divided into 4 groups, the first group is cedar pollen extract and lactic acid bacteria tablet, the second group is cedar pollen extract and placebo tablet, the third group is placebo extract and lactic acid bacteria tablet, the fourth group Groups received placebo extract and placebo tablet.

投与は、規定量のスギ花粉エキスを舌下に滴下し、2分間保持後に吐き出した直後に、乳酸菌タブレットを舌下に投与し、噛まずになめて溶解させることにより実施した。投与は花粉の飛散前の12月8日から花粉の飛散が観察されなくなる翌年4月30日まで実施した。最初の4週間（12月8日から1月4日まで）は、5日間連続投与した後に2日間休薬する投薬プロトコルを適用し、その後、連日投与を行った。   The administration was carried out by dripping a prescribed amount of cedar pollen extract under the tongue, immediately after exhaling after holding for 2 minutes, administering the lactic acid bacteria tablet under the tongue, and licking and dissolving without chewing. The administration was carried out from December 8 before pollen scattering until April 30 of the following year when no pollen scattering was observed. For the first 4 weeks (December 8 to January 4), a dosing protocol was applied in which 5 days of continuous administration followed by 2 days of rest were applied, followed by daily administration.

アレルギー性鼻炎症状の評価は、鼻アレルギー診療ガイドライン（鼻アレルギー診療ガイドライン作成委員会、ライフサイエンス社出版）に基づき、症状の程度を5段階評価して算出した症状薬物スコア（SMS；symptom-medication score）により行った。評価は、2月1日から4月30日まで行った。   Symptom-medication score (SMS; symptom-medication score) calculated based on nasal allergy treatment guidelines (nasal allergy treatment guidelines creation committee, published by Life Sciences Inc.) ). The evaluation was conducted from February 1 to April 30.

その結果、乳酸菌タブレットとスギ花粉エキスとを投与した群は、プラセボ投与群、乳酸菌タブレット単独投与群、およびスギ花粉エキス単独投与群と比べてSMSが低下することが明らかになった（図10）。すなわち、乳酸菌タブレットおよびスギ花粉エキスの舌下投与により、スギ花粉によるアレルギー性鼻炎症状が緩和されることが判明した。   As a result, it was clarified that the group administered with lactic acid bacteria tablets and cedar pollen extract had lower SMS than the placebo group, lactic acid bacteria tablet alone group, and cedar pollen extract alone group (FIG. 10). . That is, it was found that allergic rhinitis caused by cedar pollen was alleviated by sublingual administration of lactic acid bacteria tablets and cedar pollen extract.

本発明は、乳酸菌および抗原物質を含み、口腔内に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤、乳酸菌および抗原物質を口腔内に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法、並びに乳酸菌および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用を提供する。   The present invention relates to an antiallergic agent characterized by containing lactic acid bacteria and an antigenic substance and administered into the oral cavity, a method for treating allergic diseases characterized by co-administering lactic acid bacteria and an antigenic substance in the oral cavity, and lactic acid bacteria and Provided is the use of an antigenic substance in the manufacture of an antiallergic agent.

本発明は、例えば口腔粘膜免疫療法に使用でき、年々増加しているアレルギー性鼻炎や花粉症などの気道アレルギー疾患の発症予防および／または症状改善を実施することができる。このように、本発明は医薬開発分野において極めて有用な発明である。   The present invention can be used for, for example, oral mucosal immunotherapy, and can prevent and / or improve symptoms of airway allergic diseases such as allergic rhinitis and hay fever, which are increasing year by year. Thus, the present invention is extremely useful in the field of pharmaceutical development.

Claims (29)

乳酸菌および抗原物質を含み、口腔内に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤。 An antiallergic agent comprising a lactic acid bacterium and an antigenic substance and administered into the oral cavity. 前記乳酸菌が、抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現を増強する機能を有する乳酸菌である請求項1に記載の抗アレルギー剤。 2. The antiallergic agent according to claim 1, wherein the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium having a function of enhancing the expression of a suppressive stimulating molecule PD-L2 on an antigen-presenting cell. 前記乳酸菌がLactobacillus paracasei KW3110である請求項1または2に記載の抗アレルギー剤。 The antiallergic agent according to claim 1 or 2, wherein the lactic acid bacteria is Lactobacillus paracasei KW3110. 前記抗原物質が花粉抗原である請求項1から3のいずれか1項に記載の抗アレルギー剤。 4. The antiallergic agent according to any one of claims 1 to 3, wherein the antigenic substance is a pollen antigen. 花粉抗原がスギ花粉抗原である請求項4に記載の抗アレルギー剤。 5. The antiallergic agent according to claim 4, wherein the pollen antigen is a cedar pollen antigen. 舌下に投与されることを特徴とする請求項1から5のいずれか1項に記載の抗アレルギー剤。 6. The antiallergic agent according to any one of claims 1 to 5, which is administered sublingually. 気道アレルギー疾患を対象に投与されることを特徴とする請求項1から6のいずれか1項に記載の抗アレルギー剤。 The antiallergic agent according to any one of claims 1 to 6, wherein the antiallergic agent is administered to a subject having an airway allergic disease. 気道アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎である請求項7に記載の抗アレルギー剤。 8. The antiallergic agent according to claim 7, wherein the airway allergic disease is allergic rhinitis. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を含み、スギ花粉によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に投与されることを特徴とする抗アレルギー剤。 An antiallergic agent comprising Lactobacillus paracasei KW3110 and a Japanese cedar pollen antigen, which are heat-treated, and administered sublingually to allergic rhinitis caused by Japanese cedar pollen. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を含み、スギ花粉によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に投与される抗アレルギー剤であって、該Lactobacillus paracasei KW3110の用量が50mg／日であり、該スギ花粉抗原の用量が4〜2000JAU／日であることを特徴とする抗アレルギー剤。 A heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and a cedar pollen antigen, an antiallergic agent administered sublingually to allergic rhinitis caused by cedar pollen, wherein the dose of Lactobacillus paracasei KW3110 is 50 mg / day, An antiallergic agent, wherein the dose of the cedar pollen antigen is 4 to 2000 JAU / day. 乳酸菌および抗原物質を口腔内に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法。 A method for treating allergic diseases, which comprises administering a lactic acid bacterium and an antigen substance together in the oral cavity. 前記乳酸菌が抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現を増強する機能を有する乳酸菌である請求項11に記載のアレルギー疾患治療方法。 12. The method for treating allergic disease according to claim 11, wherein the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium having a function of enhancing expression of a suppressive stimulating molecule PD-L2 on an antigen-presenting cell. 前記乳酸菌がLactobacillus paracasei KW3110である請求項11または12に記載のアレルギー疾患治療方法。 13. The method for treating allergic disease according to claim 11 or 12, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus paracasei KW3110. 前記抗原物質が花粉抗原である請求項11から13のいずれか1項に記載のアレルギー疾患治療方法。 14. The method for treating allergic diseases according to claim 11, wherein the antigenic substance is a pollen antigen. 花粉抗原がスギ花粉抗原である請求項14に記載のアレルギー疾患治療方法。 15. The method for treating allergic disease according to claim 14, wherein the pollen antigen is a cedar pollen antigen. 乳酸菌および抗原物質を舌下に併用投与することを特徴とする請求項11から15のいずれか1項に記載のアレルギー疾患治療方法。 16. The method for treating allergic disease according to any one of claims 11 to 15, wherein a lactic acid bacterium and an antigenic substance are administered in combination under the tongue. 乳酸菌および抗原物質を気道アレルギー疾患を対象に併用投与することを特徴とする請求項11から16のいずれか1項に記載のアレルギー疾患治療方法。 17. The method for treating allergic disease according to any one of claims 11 to 16, wherein a lactic acid bacterium and an antigen substance are administered in combination to an airway allergic disease. 気道アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎である請求項17に記載のアレルギー疾患治療方法。 18. The method for treating allergic disease according to claim 17, wherein the airway allergic disease is allergic rhinitis. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法。 A method for treating allergic diseases, comprising administering heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen sublingually to allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原を、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に、舌下に併用投与することを特徴とするアレルギー疾患治療方法であって、該Lactobacillus paracasei KW3110の用量が50mg／日であり、該スギ花粉抗原の用量が4〜2000JAU／日であるアレルギー疾患治療方法。 A method for treating allergic diseases characterized in that heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen are administered together under the tongue for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen, wherein the dose of Lactobacillus paracasei KW3110 is A method for treating allergic diseases, wherein the dose is 50 mg / day and the dose of the cedar pollen antigen is 4 to 2000 JAU / day. 乳酸菌および抗原物質の、抗アレルギー剤の製造における使用。 Use of lactic acid bacteria and antigenic substances in the production of antiallergic agents. 前記乳酸菌が抗原提示細胞上の抑制刺激分子PD-L2発現を増強する機能を有する乳酸菌である請求項21に記載の使用。 The use according to claim 21, wherein the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium having a function of enhancing expression of a suppressive stimulating molecule PD-L2 on an antigen-presenting cell. 前記乳酸菌がLactobacillus paracasei KW3110である請求項21または22に記載の使用。 The use according to claim 21 or 22, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus paracasei KW3110. 前記抗原物質が花粉抗原である請求項21から23のいずれか1項に記載の使用。 The use according to any one of claims 21 to 23, wherein the antigenic substance is a pollen antigen. 花粉抗原がスギ花粉抗原である請求項24に記載の使用。 The use according to claim 24, wherein the pollen antigen is a cedar pollen antigen. 抗アレルギー剤が舌下に投与される抗アレルギー剤である請求項21から25のいずれか1項に記載の使用。 26. The use according to any one of claims 21 to 25, wherein the antiallergic agent is an antiallergic agent administered sublingually. 抗アレルギー剤が気道アレルギー疾患を対象に投与される抗アレルギー剤である請求項21から26のいずれか1項に記載の使用。 27. The use according to any one of claims 21 to 26, wherein the antiallergic agent is an antiallergic agent administered to a subject having an airway allergic disease. 気道アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎である請求項27に記載の使用。 28. Use according to claim 27, wherein the airway allergic disease is allergic rhinitis. 加熱処理されたLactobacillus paracasei KW3110およびスギ花粉抗原の、スギ花粉抗原によるアレルギー性鼻炎を対象に舌下に投与される抗アレルギー剤の製造における使用。 Use of heat-treated Lactobacillus paracasei KW3110 and cedar pollen antigen in the manufacture of an antiallergic agent administered sublingually for allergic rhinitis caused by cedar pollen antigen.
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