JP2010520222A

JP2010520222A - Use of pyrimidine-2,4-diamine derivatives and pyrimidine-2,4-diamine derivatives as JAK2 kinase inhibitors

Info

Publication number: JP2010520222A
Application number: JP2009551869A
Authority: JP
Inventors: ハリプラサードヴァンカヤラパティ，; シャオ−ホイリュー，; デイビッドジェイ．ビアーズ，
Original assignee: スーパージェン，インコーポレイテッド
Priority date: 2007-03-01
Filing date: 2008-02-29
Publication date: 2010-06-10
Also published as: US20080214558A1; MX2009009117A; WO2008106635A1; AU2008221278A1; BRPI0807897A2; TW200843776A; KR20090129434A; CA2679489A1; EP2121634A1

Abstract

ＪＡＫ２キナーゼ阻害薬としての活性を有するピリミジン−２，４−ジアミン誘導体が、製薬組成物ならびに癌および他のＪＡＫ２キナーゼ関連状態の治療で上記ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体を使用する方法と同様に開示される。本発明は一般に、化合物（本明細書では、ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体とも呼ばれる）、および前記化合物を含む製薬組成物に関し、その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む化合物は一般構造（Ｉ）または（ＩＩ）：（Ｒ^１、Ｗ^１、Ｗ^２、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｙ^１、Ｙ^２およびＺは明細書で定義する通りである。）を有する。Pyrimidine-2,4-diamine derivatives having activity as JAK2 kinase inhibitors are similar to pharmaceutical compositions and methods of using the pyrimidine-2,4-diamine derivatives in the treatment of cancer and other JAK2 kinase-related conditions. Disclosed. The present invention generally relates to compounds (also referred to herein as pyrimidine-2,4-diamine derivatives) and pharmaceutical compositions comprising said compounds, wherein the compounds comprising their stereoisomers and pharmaceutically acceptable salts are: It has the general structure (I) or (II): (R ¹ , W ¹ , W ² , X ¹ , X ² , Y ¹ , Y ² and Z are as defined in the specification).

Description

（関連出願への相互参照）
本出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００７年３月１日に出願された米国仮特許出願第６０／８９２，３８５号および２００７年４月１３日に出願された同第６０／９１１，７７６号の利益を主張し、これらの仮出願は、本明細書中でその全体を参考として援用される。 (Cross-reference to related applications)
This application is filed under United States Patent Act §119 (e), US Provisional Patent Application No. 60 / 892,385, filed March 1, 2007, and No. 60, filed April 13, 2007. No. 911,776, and these provisional applications are incorporated herein by reference in their entirety.

（背景）
（技術分野）
本発明は、一般に、プロテインキナーゼ活性を阻害する化合物、ならびにそれに関連する組成物および方法に関するものである。 (background)
(Technical field)
The present invention relates generally to compounds that inhibit protein kinase activity, and compositions and methods related thereto.

（関連技術の説明）
ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）は、哺乳動物中に４種類（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２）存在して、インターロイキン、インターフェロンを含む細胞外サイトカインはもちろんのこと、多くのホルモンからの信号伝達に不可欠であるキナーゼのファミリである（Ａｒｉｎｇｅｒ，Ｍら、ＬｉｆｅＳｃｉ、１９９９．６４（２４）：ｐ．２１７３−８６；Ｂｒｉｓｃｏｅ，Ｊ．ら、ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＲＳｏｃＬｏｎｄＢＢｉｏｌＳｃｉ、１９９６．３５１（１３３６）：ｐ．１６７−７１；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．，ＳｅｍｉｎＩｍｍｕｎｏｌ、１９９５．７（４）：ｐ．２４７−５４；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．，ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＲＳｏｃＬｏｎｄＢＢｉｏｌＳｃｉ、１９９６．３５１（１３３６）：ｐ．１５９−６６；Ｆｉｒｍｂａｃｈ−Ｋｒａｆｔ，Ｉ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９０．５（９）：ｐ．１３２９−３６；Ｈａｒｐｕｒ，Ａ．Ｇ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９２．７（７）：ｐ．１３４７−５３；Ｒａｎｅ，Ｓ．Ｇ．ａｎｄＥ．Ｐ．Ｒｅｄｄｙ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９４．９（８）：ｐ．２４１５−２３；Ｗｉｌｋｓ，Ａ．Ｆ．、ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ、１９９１．２００：ｐ．５３３−４６）。これらの非受容体型チロシンキナーゼは、各種のサイトカイン受容体と結合して、ＳＴＡＴ（シグナル伝達性転写因子）分子をホスホリル化することによって、シグナルを細胞外リガンド−受容体結合から細胞質へ変換するように作用して、次にＳＴＡＴは核に進入して、成長と増殖に関与する各種の標的遺伝子の転写を指示する（Ｂｒｉｓｃｏｅ，Ｊ．ら；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．（１９９５）；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．（１９９６）；Ｒａｗｌｉｎｇｓ，Ｊ．Ｓ．、Ｋ．Ｍ．ＲｏｓｌｅｒａｎｄＤ．Ａ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ、ＪＣｅｌｌＳｃｉ、２００４．１１７（Ｐｔ８）：ｐ．１２８１−３．）。細胞生存でのこれらのキナーゼの重要性は、ＪＡＫの消失が動物モデルでの免疫不全および生存不能を伴うことが多いという事実によって明らかとなっている（Ａｒｉｎｇｅｒ，Ｍ．ら）。酵素のＪＡＫファミリは、カルボキシ末端タンパク質チロシンキナーゼドメイン（ＪＨ１）と、ＪＨ１ドメインの活性を制御すると考えられている隣接キナーゼ様ドメイン（ＪＨ２）とを含む、いくつかのＪＡＫ相同（ＪＨ）ドメインを特徴としている（Ｈａｒｐｕｒ，Ａ．Ｇ．ら）。４種のＪＡＫアイソフォームは、あるサイトカイン受容体と特異的に結合されて、下流遺伝子のサブセットを活性化することによって、異なるシグナルを変換する。たとえばＪＡＫ２は、インターロイキン−３（Ｓｉｌｖｅｎｎｏｉｎｅｎ，Ｏ．ら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、１９９３．９０（１８）：ｐ．８４２９−３３）、エリスロポエチン（Ｗｉｔｔｈｕｈｎ，Ｂ．Ａ．ら、Ｃｅｌｌ、１９９３．７４（２）：ｐ．２２７−３６）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｓ．Ｅ．ら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、１９９４．９１（８）：ｐ．２９８５−８）、および成長ホルモン（Ａｒｇｅｔｓｉｎｇｅｒ，Ｌ．Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ、１９９３．７４（２）：ｐ．２３７−４４）に特異的なサイトカイン受容体と結合する。 (Description of related technology)
There are four types of Janus kinase (JAK) in mammals (JAK1, JAK2, JAK3 and TYK2), and they are essential for signal transduction from many hormones as well as extracellular cytokines including interleukins and interferons. A family of kinases (Aringer, M et al., Life Sci, 1999.64 (24): p. 2173-86; Briscoe, J. et al., Philos Trans R Soc London B Biol Sci, 1996.351 (1336): p.167-71; Ihle, JN, Semin Immunol, 19955.7 (4): p.247-54; Ihle, JN, Philos Trans R Soc London B Biol Sci, 1996.351 (1336). ): P.159 Firmach-Kraft, I. et al., Oncogene, 1990.5 (9): p.1329-36; Harpur, AG et al., Oncogene, 19922.7 (7): p.1347-53; S. G. and EP Reddy, Oncogene, 1994. 4.9 (8): p. 2415-23; Wilks, A. F., Methods Enzymol, 1991. 200: p. 533-46). These non-receptor tyrosine kinases bind to various cytokine receptors and phosphorylate STAT (signal transduction transcription factor) molecules to convert signals from extracellular ligand-receptor binding to cytoplasm. STAT then enters the nucleus and directs the transcription of various target genes involved in growth and proliferation (Briscoe, J. et al .; Ihle, JN (1995); Ihle, J Rawlings, JS, KM Rosler and DA Harrison, J Cell Sci, 2004.117 (Pt 8): p.1281-3.). The importance of these kinases in cell survival is evidenced by the fact that loss of JAK is often accompanied by immunodeficiency and non-viability in animal models (Aringer, M. et al.). The JAK family of enzymes features several JAK homology (JH) domains, including a carboxy terminal protein tyrosine kinase domain (JH1) and an adjacent kinase-like domain (JH2) that is thought to regulate the activity of the JH1 domain. (Harpur, AG et al.). The four JAK isoforms specifically bind to certain cytokine receptors and transduce different signals by activating a subset of downstream genes. For example, JAK2 is interleukin-3 (Silvennoinen, O. et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1993.90 (18): p. 8429-33), erythropoietin (Witthuhn, BA et al., Cell, 1993). .74 (2): p.227-36), granulocyte colony stimulating factor (Nicholson, SE et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1994.91 (8): p. 2985-8), and It binds to a cytokine receptor specific for growth hormone (Argetsinger, LS et al., Cell, 1993.74 (2): p.237-44).

酵素のＪＡＫファミリは、各種の血液および免疫障害の興味深い一連の標的となっている；ＪＡＫ２は特に、増殖に関与する下流エフェクタ遺伝子のその活性化のために、腫瘍性疾患、特に白血病およびリンパ腫（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）はもちろんのこと、固形腫瘍（非特許文献５）、ならびに他の骨髄増殖性疾患、たとえば真性多血球血症（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）の実現可能な標的として現在研究されている。ＪＡＫ２は、それがサイトカイン受容体へのリガンド結合をもはや必要とせず、代わりに構成的活性化の状態であるように、血液悪性腫瘍において変異することも公知である。これはＪＡＫ２遺伝子とＥＴＶ６、ＢＣＲまたはＰＣＭ１タンパク質をコードする遺伝子との間の転座によって起こることが可能であり（非特許文献１０；非特許文献１１）、慢性骨髄性白血病で見られるＢＣＲ−ＡＢＬタンパク質に類似した腫瘍形成融合タンパク質を生成する。ＪＡＫ２の過剰活性化も、ＪＡＫ２配列自体の突然変異によって起こることが可能である；たとえば、骨髄増殖性疾患の真性多血球血症は、アミノ酸６１７でバリン−フェニルアラニン置換を引き起こす点突然変異に関連している（ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）（Ｗａｌｚ，Ｃ．ら）。腫瘍性および骨髄増殖性障害とのその関連性ならびに腫瘍性および骨髄増殖性障害における調節解除のため、ヒト悪性腫瘍の治療用の小分子ＪＡＫ２阻害物質は大いに興味深い。 The JAK family of enzymes has become an interesting set of targets for a variety of blood and immune disorders; JAK2 is particularly responsible for its activation of downstream effector genes involved in proliferation due to its activation of neoplastic diseases, particularly leukemias and lymphomas ( Non-patent document 1; Non-patent document 2; Non-patent document 3; Non-patent document 4), as well as solid tumors (non-patent document 5), as well as other myeloproliferative diseases such as Non-patent document 7; Non-patent document 8; Non-patent document 9) are currently being studied as feasible targets. JAK2 is also known to mutate in hematologic malignancies such that it no longer requires ligand binding to the cytokine receptor, but instead is in a state of constitutive activation. This can occur by translocation between the JAK2 gene and the gene encoding ETV6, BCR or PCM1 protein (Non-patent document 10; Non-patent document 11), and BCR-ABL found in chronic myeloid leukemia Produces an oncogenic fusion protein similar to the protein. Overactivation of JAK2 can also occur by mutations in the JAK2 sequence itself; for example, myeloproliferative disorder polycythemia is associated with a point mutation that causes a valine-phenylalanine substitution at amino acid 617. (JAK2 V617F) (Walz, C. et al.). Small molecule JAK2 inhibitors for the treatment of human malignancies are of great interest because of their association with neoplastic and myeloproliferative disorders and deregulation in neoplastic and myeloproliferative disorders.

多数のヒト悪性腫瘍におけるその関与に基づく、ＪＡＫ２キナーゼタンパク質が介在および／または関連する癌および他の状態の治療のための特異的および選択的阻害物質の設計への要求がある。本発明は、これらの要求を実現して、他の関連する利点を与える。 There is a need for the design of specific and selective inhibitors for the treatment of cancer and other conditions mediated and / or associated with JAK2 kinase protein, based on its involvement in many human malignancies. The present invention fulfills these needs and provides other related advantages.

Ｂｅｎｅｋｌｉ，Ｍ．ら、Ｂｌｏｏｄ、２００３．１０１（８）：ｐ．２９４０−５４Benekli, M .; Et al., Blood, 2003.101 (8): p. 2940-54 Ｐｅｅｔｅｒｓ，Ｐ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７．９０（７）：ｐ．２５３５−４０Peters, P.A. Et al., Blood, 1997.90 (7): p. 2535-40 Ｒｅｉｔｅｒ，Ａら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、２００５．６５（７）：ｐ．２６６２−７Reiter, A et al., Cancer Res, 2005.65 (7): p. 2662-7 Ｔａｋｅｍｏｔｏ，Ｓ．ら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、１９９７．９４（２５）：ｐ．１３８９７−９０２Takemoto, S.M. Et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1997.94 (25): p. 13897-902 Ｗａｌｚ，Ｃ．ら、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ、２００６．２８１（２６）：ｐ．１８１７７−８３Walz, C.I. J Biol Chem, 2006.281 (26): p. 18177-83 Ｂａｘｔｅｒ，Ｅ．Ｊ．ら、Ｌａｎｃｅｔ、２００５．３６５（９４６４）：ｐ．１０５４−６１Baxter, E .; J. et al. Et al., Lancet, 2005.365 (9464): p. 1054-61 Ｊａｍｅｓ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２００５．４３４（７０３７）：ｐ．１１４４−８James, C.I. Et al., Nature, 2005.434 (7037): p. 1144-8 Ｌｅｖｉｎｅ，Ｒ．Ｌ．ら、ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ、２００５．７（４）：ｐ．３８７−９７Levine, R.M. L. Et al., Cancer Cell, 2005. 7 (4): p. 387-97 Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｋ．およびＲ．Ａ．ＶａｎＥｔｔｅｎ，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ、２００５．７（４）：ｐ．２９１−３Shannon, K. et al. And R.A. A. Van Etten, Cancer Cell, 2005. 7 (4): p. 291-3 Ｐｅｅｔｅｒｓ，Ｐ．ら；Ｒｅｉｔｅｒ，Ａ．ら；Ｇｒｉｅｓｉｎｇｅｒ，Ｆ．ら、ＧｅｎｅｓＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓＣａｎｃｅｒ、２００５．４４（３）：ｐ．３２９−３３Peters, P.A. Reiter, A. et al. Griesinger, F. et al. Et al., Genes Chromosomes Cancer, 2005.44 (3): p. 329-33 Ｌａｃｒｏｎｉｑｕｅ，Ｖ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９７．２７８（５３４１）：ｐ．１３０９−１２Lacronique, V.M. Science, 1997.278 (5341): p. 1309-12

本発明は一般に、化合物（本明細書では、ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体とも呼ばれる）、および前記化合物を含む製薬組成物に関し、その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む化合物は次の一般構造（Ｉ）または（ＩＩ）： The present invention generally relates to compounds (also referred to herein as pyrimidine-2,4-diamine derivatives) and pharmaceutical compositions comprising said compounds, wherein the compounds comprising their stereoisomers and pharmaceutically acceptable salts are: The following general structure (I) or (II):

を有し、Ｒ^１、Ｗ^１、Ｗ^２、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｙ^１、Ｙ^２およびＺは以下で定義する通りである。

And R ¹ , W ¹ , W ² , X ¹ , X ² , Y ¹ , Y ² and Z are as defined below.

これらの化合物は、広範囲の治療用途にわたって有用性を有し、ＪＡＫ２プロテインキナーゼが（少なくとも一部は）介在および／または関連する癌などの疾患を治療するために使用されることがある。したがって、本発明の一態様において、本明細書に記載する化合物は、その必要がある対象への投与のための製薬的に許容される組成物として調合される。 These compounds have utility over a wide range of therapeutic applications and may be used to treat diseases such as cancers in which JAK2 protein kinase is (at least in part) mediated and / or associated. Accordingly, in one aspect of the invention, the compounds described herein are formulated as pharmaceutically acceptable compositions for administration to a subject in need thereof.

別の態様において、本発明は、癌などのＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在疾患を治療または予防する方法を提供し、方法は、このような治療が必要な患者に本明細書に記載する化合物または前記化合物を含む製薬的に許容される組成物の治療的有効量を投与するステップを含む。 In another aspect, the invention provides a method of treating or preventing a JAK2 protein kinase mediated disease such as cancer, wherein the method comprises administering a compound described herein or said compound to a patient in need of such treatment. Administering a therapeutically effective amount of a pharmaceutically acceptable composition comprising.

別の態様は、生体サンプルにおけるＪＡＫ２プロテインキナーゼ活性を阻害することに関し、方法は、生体サンプルに本明細書に記載する化合物、または前記化合物を含む製薬的に許容される組成物を接触させるステップを含む。 Another aspect relates to inhibiting JAK2 protein kinase activity in a biological sample, the method comprising contacting the biological sample with a compound described herein, or a pharmaceutically acceptable composition comprising said compound. Including.

別の態様は、患者のＪＡＫ２プロテインキナーゼ活性を阻害する方法に関し、方法は、患者に本明細書に記載する化合物または前記化合物を含む製薬的に許容される組成物を投与するステップを含む。 Another aspect relates to a method of inhibiting JAK2 protein kinase activity in a patient, the method comprising administering to the patient a compound described herein or a pharmaceutically acceptable composition comprising said compound.

本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細な説明を参照すれば明らかになるであろう。そのために、ある特許および他の文書が本明細書で引用されて、本発明の各種の態様をより詳細に記述する。これらの文書はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される。 These and other aspects of the invention will be apparent upon reference to the following detailed description. To that end, certain patents and other documents are cited herein to describe various aspects of the invention in greater detail. Each of these documents is hereby incorporated by reference in its entirety.

本発明の一般的な態様により、ＪＡＫ２プロテインキナーゼとして有用な化合物はもちろんのこと、それに関連する組成物および方法も提供される。その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む、本発明の化合物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）： In accordance with the general aspects of the invention, there are provided compositions and methods related thereto as well as compounds useful as JAK2 protein kinases. The compounds of the present invention, including their stereoisomers and pharmaceutically acceptable salts, have the formula (I) or (II):

で示す構造を有し、式中：
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；
Ｗ^１およびＷ^２は独立して、直接結合、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ−であり；
Ｒ^１は、−Ｈ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＣＨＦ_２、−ＯＣＨ_３、−ＣＨ_３、−ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２またはハロゲンであり；
Ｘ^１およびＸ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＣＨＦ_２、−ＯＣＨ_３、−ＣＨ_３、−ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、ハロゲンまたは

In the formula:
Z is CH or N;
W ¹ and W ² are independently a direct bond, —C (═O) — or —O (CH ₂ ) _n —;
R ¹ is —H, —CF ₃ , —OCF ₃ , —OCHF ₂ , —OCH ₃ , —CH ₃ , —OH, —NO ₂ , —NH ₂ or halogen;
X ¹ and X ² are independently —H, —CF ₃ , —OCF ₃ , —OCHF ₂ , —OCH ₃ , —CH ₃ , —OH, —NO ₂ , —NH _2, halogen or

であり、Ｑは、ＯまたはＮであり、Ｒは存在しないか、またはＲは−Ｃ_１−６アルキルである。ただし、Ｘ^１またはＸ^２の一方が

And Q is O or N and R is absent or R is —C _1-6 alkyl. However, the one of ^{X 1} or ^{X 2}

である；
Ｙ^１およびＹ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である。ただし、Ｙ^１およびＹ^２は、両方とも−Ｈというわけではない；
ｎは、１、２、または３である。

Is
Y ¹ and Y ² are independently a C _1-4 alkyl group substituted with —H, —CN, halogen or —CN. Provided that Y ¹ and Y ² are not both -H;
n is 1, 2 or 3.

別途指摘しない限り、明細書および特許請求の範囲で使用した以下の用語は、下で議論する意味を有する：
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード、通例はフルオロまたはクロロを意味する。 Unless otherwise indicated, the following terms used in the specification and claims have the meanings discussed below:
“Halogen” means fluoro, chloro, bromo, or iodo, typically fluoro or chloro.

「Ｃ_１−６アルキル」は、１〜６個の炭素原子の飽和直鎖または分枝、飽和または不飽和、環式または非環式炭化水素ラジカルを指し、これに対して「Ｃ_１−４アルキル」は同じ意味を有するが、１〜４個の炭素原子を含有する。飽和直鎖または分枝Ｃ_１−４アルキルおよびＣ_１−６アルキルの代表的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられ、Ｃ_１−６アルキルの場合には、さらにｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、および対応する分枝鎖が挙げられる。代表的な飽和環式シクロアルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、−ＣＨ_２シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられる。不飽和環式アルキルとしては、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどが挙げられる。不飽和アルキルは、隣接炭素原子間に少なくとも１個の２重または３重結合を含有する（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれる）。代表的な直鎖および分枝アルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニルなどが挙げられるが、代表的な直鎖および分枝アルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどが挙げられる。 “C _1-6 alkyl” refers to a saturated straight or branched, saturated or unsaturated, cyclic or acyclic hydrocarbon radical of 1 to 6 carbon atoms, versus “C _1-4 “Alkyl” has the same meaning but contains 1 to 4 carbon atoms. Representative examples of saturated straight or branched C _1-4 alkyl and C _1-6 alkyl include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, and tert-butyl. And in the case of C _1-6 alkyl, further includes n-pentyl, n-hexyl, and the corresponding branched chain. Representative saturated cyclic cycloalkyls include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, —CH ₂ cyclopentyl, cyclohexyl, and the like. Examples of unsaturated cyclic alkyl include cyclopentenyl, cyclohexenyl and the like. Unsaturated alkyl contains at least one double or triple bond between adjacent carbon atoms (referred to as “alkenyl” or “alkynyl”, respectively). Representative straight and branched alkenyls include ethylenyl, propylenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, isobutenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-methyl-1-butenyl, 2-methyl-2-butenyl, 2,3-dimethyl-2-butenyl and the like, but typical linear and branched alkynyl include acetylenyl, propynyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 1-pentynyl, 2-pentynyl, 3-methyl -1-butynyl and the like can be mentioned.

上記の構造（Ｉ）および（ＩＩ）のさらに詳細な態様において、ＺはＣＨであり、その立体異性体および製薬的許容される塩を含む化合物は、下記の構造（ＩＩＩ）または（ＩＶ）： In a more detailed embodiment of structures (I) and (II) above, Z is CH, and the compounds including stereoisomers and pharmaceutically acceptable salts thereof have the following structure (III) or (IV):

によって表される。

Represented by

上記の構造（Ｉ）および（ＩＩ）のさらに詳細な態様において、ＺはＮであり、その立体異性体および製薬的許容される塩を含む化合物は、下記の構造（Ｖ）または（ＶＩ）： In a more detailed aspect of structures (I) and (II) above, Z is N, and the compounds including stereoisomers and pharmaceutically acceptable salts thereof have the following structure (V) or (VI):

によって表される。

Represented by

構造（ＩＩＩ）および（Ｖ）のさらに詳細な実施形態において、Ｘ^１はピペラジニルであり、Ｒはメチルであり、Ｗ^１およびＷ^２はどちらも直接結合であり、化合物は構造（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）によってそれぞれ表される： In a more detailed embodiment of structures (III) and (V), X ¹ is piperazinyl, R is methyl, W ¹ and W ² are both direct bonds, and the compounds have the structures (VII) and ( VIII) respectively:

構造（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）のさらに詳細な実施形態において、Ｘ^２は−Ｆであり、化合物は構造（ＩＸ）および（Ｘ）によってそれぞれ表される：

In more detailed embodiments of structures (VII) and (VIII), X ² is —F and the compound is represented by structures (IX) and (X), respectively:

構造（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）の他のさらに詳細な実施形態において、Ｘ^２は−Ｈであり、化合物は構造（ＸＩ）および（ＸＩＩ）によってそれぞれ表される：

In other more detailed embodiments of structures (VII) and (VIII), X ² is —H and the compound is represented by structures (XI) and (XII), respectively:

構造（ＩＩＩ）の他の詳細な実施形態において、Ｘ^２はピペラジニルであり、Ｒはメチルであり、Ｗ^２は−Ｏ（ＣＨ_２）_３−であり、Ｗ^１は直接結合であり、化合物は構造（ＸＩＩＩ）によって表される：

In other detailed embodiments of structure (III), X ² is piperazinyl, R is methyl, W ² is —O (CH ₂ ) ₃ —, W ¹ is a direct bond, and the compound is Represented by structure (XIII):

構造（ＸＩＩＩ）のさらなる詳細な実施形態において、Ｘ^１は−ＯＣＨ_３である。

In a more detailed embodiment of structure (XIII), X ¹ is —OCH ₃ .

構造（ＩＩＩ）の他の詳細な実施形態において、Ｘ^１はピペラジニルであり、Ｗ^１は−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｗ^２は直接結合であり、化合物は構造（ＸＩＶ）によって表される： In another detailed embodiment of structure (III), X ¹ is piperazinyl, W ¹ is —C (═O) —, W ² is a direct bond, and the compound is represented by structure (XIV):

構造（ＸＩＶ）のさらなる詳細な実施形態において、Ｘ^２は−Ｈであり、Ｒはメチルであるか、またはＲはシクロヘキシルである。

In a more detailed embodiment of structure (XIV), X ² is —H and R is methyl or R is cyclohexyl.

構造（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、および（ＸＩＶ）の詳細な実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２はハロゲンであり、さらに詳細にはＹ^１はクロロであり、Ｙ^２はフルオロである。 Structures (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), ( In detailed embodiments of XIII) and (XIV), Y ¹ and Y ² are halogen, more particularly Y ¹ is chloro and Y ² is fluoro.

構造（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）の詳細な実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２は、−ＣＮおよびハロゲンであり、さらに詳細にはＹ^１は−ＣＮであり、Ｙ^２はフッ素である。 In detailed embodiments of structures (I), (III), (V), (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), Y ¹ and Y ² are -CN and halogen, more particularly Y ¹ is -CN and Y ² is fluorine.

構造（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、および（ＸＩＶ）の詳細な実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２は、−Ｈおよび−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基であり、さらに詳細にはＹ^１は−ＣＨ_２ＣＮであり、Ｙ^２はＨである。 Structures (I), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), (XIII), and In specific embodiments of (XIV), Y ¹ and Y ² are C _1-4 alkyl groups substituted with —H and —CN, and more particularly Y ¹ is —CH ₂ CN, Y ² is H.

構造（ＩＩ）、（ＩＶ）および（ＶＩ）の詳細な実施形態において、Ｒ^１は−Ｆであり、Ｒ^１は−ＣＦ_３である。 In detailed embodiments of structures (II), (IV) and (VI), R ¹ is —F and R ¹ is —CF ₃ .

同じ分子式を有するが、その原子の性質または結合の順位あるいは空間におけるその原子の配置が異なる化合物は、「異性体」と呼ばれる。空間におけるその原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。相互の鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、重ね合わすことができない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物がたとえば不斉中心を有して、４個の異なる基に結合されているとき、１対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは、その不斉中心の絶対配置によって特徴付けることが可能であり、ＣａｈｎおよびＰｒｅｌｏｇのＲ−およびＳ−順位則（Ｃａｈｎ，Ｒ．，Ｉｎｇｏｌｄ，Ｃ．、およびＰｒｅｌｏｇ，Ｖ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．７８：４１３−４７、１９６６；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．５：３８５−４１５、５１１、１９６６）によって、または分子が偏光面を回転させる方法によって説明され、右旋性または左旋性（すなわち、それぞれ（＋）または（−）−異性体）と呼ばれる。キラル化合物は、個々のエナンチオマーまたはその混合物のどちらかとして存在する可能性がある。エナンチオマーを等しい割合で含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。 Compounds that have the same molecular formula but differ in the nature or order of bonding of their atoms or the arrangement of their atoms in space are termed “isomers”. Isomers that differ in the arrangement of their atoms in space are termed “stereoisomers”. Stereoisomers that are not mirror images of one another are termed “diastereomers” and those that are non-superimposable mirror images are termed “enantiomers”. A pair of enantiomers is possible when the compound has, for example, an asymmetric center and is attached to four different groups. Enantiomers can be characterized by the absolute configuration of their asymmetric centers, and Cahn and Prelog R- and S-rank rules (Cahn, R., Ingold, C., and Prelog, V. Angew. Chem. 78). Angew.Chem.Internat.Ed.Eng.5: 385-415, 511, 1966), or by the method by which the molecule rotates the plane of polarized light, ie dextrorotatory or levorotatory (ie , Respectively (+) or (−)-isomer). A chiral compound can exist as either individual enantiomer or as a mixture thereof. A mixture containing equal proportions of enantiomers is called a “racemic mixture”.

本発明の化合物は、１個以上の不斉中心を所有しうる；したがって、このような化合物は個別の（Ｒ）立体異性体または（Ｓ）立体異性体として、あるいはその混合物として生成されうる。別途指摘しない限り、明細書および特許請求の範囲における特定の化合物の説明またはネーミングは、両方の個々のエナンチオマーおよび混合物、そのラセミ体または非ラセミ体を含むものとする。立体化学の決定および立体異性体の分離の方法は、当分野で周知である（Ｃｈ．４ｏｆＡＤＶＡＮＣＥＤＯＲＧＡＮＩＣＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，４^ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ、ニューヨーク、１９９２の議論を参照）。 The compounds of the present invention can possess one or more asymmetric centers; thus, such compounds can be produced as individual (R) stereoisomers or (S) stereoisomers, or as mixtures thereof. Unless otherwise indicated, the description or naming of a particular compound in the specification and claims is intended to include both individual enantiomers and mixtures, racemic or non-racemic thereof. Methods for determining stereochemistry and separation of stereoisomers are well known in the art (see discussion in Ch. 4 of ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 4 ^th edition, March, J., John Wiley and Sons, New York, 1992). ).

本発明の化合物は、互変異性および構造異性の現象を示すことがある。本発明は、ＪＡＫ２−２キナーゼ活性を調節する能力を持ついずれの互変異性または構造異性形およびその混合物も含み、いずれかの１つの互変異性または構造異性形に限定されない。 The compounds of the present invention may exhibit phenomena of tautomerism and structural isomerism. The present invention includes any tautomeric or structural isomer form and mixtures thereof capable of modulating JAK2-2 kinase activity and is not limited to any one tautomeric or structural isomer form.

本発明の化合物は、ヒトなどの生物の体内で酵素によって代謝されて、プロテインキナーゼの活性を調節可能な代謝産物を産生することが考えられる。このような代謝産物は本発明の範囲内である。 It is conceivable that the compound of the present invention is metabolized by an enzyme in an organism such as a human to produce a metabolite capable of regulating the activity of protein kinase. Such metabolites are within the scope of the present invention.

本発明の化合物またはその製薬的に許容される塩は、ヒトを含む患者にそれ自体として投与することが可能であるか、あるいは上述の物質が適切な担体または（複数の）賦形剤と混合された製薬組成物として投与することが可能である。薬物の調合および投与の技法はたとえばＲＥＭＩＮＧＴＯＮ‘ＳＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．、イーストン、ペンシルベニア州、最新版で見ることができる。 The compounds of the invention or pharmaceutically acceptable salts thereof can be administered as such to patients, including humans, or the above substances can be mixed with a suitable carrier or excipient (s). Administered as a pharmaceutical composition. Drug formulation and administration techniques are described, for example, by REMINGTON'S PHARMALOGICAL SCIENCES, Mack Publishing Co. Easton, Pennsylvania, can be seen in the latest edition.

「製薬組成物」は、本明細書に記載する化合物の１つ以上の混合物、またはその製薬的に許容される塩と、製薬的に許容される賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。製薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を促進することである。 A “pharmaceutical composition” is a mixture of one or more of the compounds described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and other chemical ingredients such as pharmaceutically acceptable excipients. Point to. The purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration of a compound to an organism.

「製薬的に許容される賦形剤」は、化合物の投与をさらに促進するために製薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種の糖およびデンプンの類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが挙げられる。 “Pharmaceutically acceptable excipient” refers to an inert substance added to a pharmaceutical composition to further facilitate administration of a compound. Examples of excipients include but are not limited to calcium carbonate, calcium phosphate, various sugars and starches, cellulose derivatives, gelatin, vegetable oils and polyethylene glycols.

「製薬的に許容される塩」は、親化合物の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。このような塩としては：（１）親化合物の遊離塩基と、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸との、または酢酸、シュウ酸、（Ｄ）−または（Ｌ）−リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸との、好ましくは塩酸または（Ｌ）−リンゴ酸との反応によって得られる酸付加塩；あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、たとえばアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアルミニウムイオンで置換されるとき；あるいはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基を配位するときのどちらかで形成される塩が挙げられるであろう。 “Pharmaceutically acceptable salt” refers to a salt that retains the biological effectiveness and properties of the parent compound. Such salts include: (1) the free base of the parent compound and an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, and perchloric acid, or acetic acid, oxalic acid, (D )-Or (L) -malic acid, maleic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, salicylic acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid, preferably hydrochloric acid or (L) -acid addition salts obtained by reaction with malic acid; or (2) acidic protons present in the parent compound are replaced with metal ions, such as alkali metal ions, alkaline earth metal ions, or aluminum ions. Sometimes; or coordinate an organic base such as ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, tromethamine, N-methylglucamine Kino would include salts formed either.

「治療的有効量」は、治療されている障害の症状の１つ以上をある程度まで軽減するであろう、投与されている化合物の量を指す。癌の治療に関連して、治療的有効量は、（１）腫瘍のサイズを縮小する；（２）腫瘍転移を抑制する；（３）腫瘍成長を抑制する；および／または（４）癌に関連する１つ以上の症状を軽減する効果を有する量を指す。
「ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在状態」または「疾患」という用語は、本明細書で使用するように、ＪＡＫ２プロテインキナーゼが役割を果たすことが公知である、いずれの疾患または他の有害な状態も意味する。「ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在状態」または「疾患」という用語は、以下でより詳細に議論されるような癌を含む、ＪＡＫ２プロテインキナーゼ阻害物質による治療によって緩和される疾患または状態も意味する。 “Therapeutically effective amount” refers to the amount of a compound being administered that will relieve to some extent one or more of the symptoms of the disorder being treated. In the context of cancer treatment, a therapeutically effective amount (1) reduces tumor size; (2) inhibits tumor metastasis; (3) inhibits tumor growth; and / or (4) in cancer An amount that has the effect of reducing one or more associated symptoms.
The term “JAK2 protein kinase-mediated condition” or “disease” as used herein means any disease or other deleterious condition in which JAK2 protein kinase is known to play a role. The term “JAK2 protein kinase-mediated condition” or “disease” also means those diseases or conditions that are alleviated by treatment with a JAK2 protein kinase inhibitor, including cancer as discussed in more detail below.

本明細書で使用するように、「投与する」または「投与」は、プロテインキナーゼ関連疾患の予防または治療の目的のための、生物への本発明の化合物またはその製薬的に許容される塩の、あるいは本発明の化合物またはその製薬的に許容される塩を含有する製薬組成物の送達を指す。 As used herein, “administering” or “administration” refers to the administration of a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof to an organism for the purpose of prevention or treatment of a protein kinase-related disease. Or delivery of a pharmaceutical composition containing a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

適切な投与経路としては、限定されないが、経口、経直腸、経粘膜または腸投与あるいは筋肉内、皮下、髄内、くも膜下腔、直接脳室内、静脈内、硝子体内、腹腔内、鼻内、または眼内注射が挙げられる。ある実施形態において、投与経路は経口および静脈内である。 Suitable routes of administration include, but are not limited to, oral, rectal, transmucosal or enteral administration or intramuscular, subcutaneous, intramedullary, subarachnoid, direct intraventricular, intravenous, intravitreal, intraperitoneal, intranasal, Or intraocular injection is mentioned. In certain embodiments, the route of administration is oral and intravenous.

あるいは、化合物を全身方式でなく局所方式で、たとえばしばしばデポーまたは持続放出製剤での固形腫瘍中への化合物の直接注射によって投与することがある。 Alternatively, the compound may be administered in a local rather than systemic manner, for example by direct injection of the compound into a solid tumor, often in a depot or sustained release formulation.

さらに化合物を標的化送達システムで、たとえば腫瘍特異的抗体によってコートしたリポソームで投与することがある。このようにして、リポソームは腫瘍に標的化されて、腫瘍によって選択的に摂取される可能性がある。 In addition, the compound may be administered in a targeted delivery system, for example, in a liposome coated with a tumor specific antibody. In this way, the liposomes can be targeted to and taken up selectively by the tumor.

本発明の製薬組成物は、当分野で周知の工程によって、たとえば従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥工程によって製造されることがある。 The pharmaceutical compositions of the present invention may be manufactured by processes well known in the art, for example, by conventional mixing, dissolving, granulating, dragee making, wet grinding, emulsifying, encapsulating, encapsulating or lyophilizing processes.

本発明による使用のための製薬組成物は、賦形剤および製薬的に使用可能である調製物への活性化合物の処理を促進する助剤を含む、１つ以上の生理学的に許容される担体を使用する、いずれの従来方式によっても調合されるであろう。適正な調合は、選択された投与経路によって変わる。 A pharmaceutical composition for use according to the present invention comprises one or more physiologically acceptable carriers comprising excipients and auxiliaries that facilitate the processing of the active compound into a pharmaceutically usable preparation. Would be prepared by any conventional method using Proper formulation will vary depending upon the route of administration chosen.

注射の場合、本発明の化合物は、水性溶液中で、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩緩衝液などの生理学的に許容される緩衝液中で調合されることがある。経粘膜投与では、浸透されるバリアに適した浸透剤が調合に使用される。このような浸透剤は当分野で一般に公知である。 For injection, the compounds of the invention may be formulated in aqueous solutions, preferably in physiologically acceptable buffers such as Hanks's solution, Ringer's solution, or physiological saline buffer. For transmucosal administration, penetrants appropriate to the barrier to be permeated are used in the formulation. Such penetrants are generally known in the art.

経口投与では、化合物は、活性化合物を当分野で周知の製薬的に許容される担体と組合せることによって調合可能である。このような担体は、患者による経口摂取のために、本発明の化合物が錠剤、丸剤、菱形錠、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリ剤、懸濁剤などとして調合されるようにする。経口使用のための製薬調合は、固体賦形剤を使用して、場合により得られた混合物を粉砕し、所望ならば、適切な助剤を添加した後に顆粒の混合物を処理して錠剤または糖衣錠コアを得て作製することができる。有用な賦形剤は特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの充填剤、たとえばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプンおよびジャガイモデンプンなどのセルロース調製物、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニル−ピロリドン（ＰＶＰ）などの他の物質である。所望ならば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸などの崩壊剤が添加されることもある。アルギン酸ナトリウムなどの塩も使用されることがある。 For oral administration, the compounds can be formulated by combining the active compounds with pharmaceutically acceptable carriers well known in the art. Such carriers are formulated as tablets, pills, rhombus tablets, dragees, capsules, solutions, gels, syrups, slurries, suspensions, etc. for oral ingestion by patients. So that Pharmaceutical formulations for oral use use solid excipients, optionally milling the resulting mixture and, if desired, processing the granule mixture after adding the appropriate auxiliaries to give tablets or dragees A core can be obtained and produced. Useful excipients are in particular fillers such as lactose, sucrose, mannitol or sugars including sorbitol, cellulose preparations such as corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch, gelatin, tragacanth gum, methylcellulose, hydroxypropyl Other materials such as methyl-cellulose, sodium carboxymethylcellulose, and / or polyvinyl-pyrrolidone (PVP). If desired, disintegrating agents may be added, such as cross-linked polyvinyl pyrrolidone, agar, or alginic acid. Salts such as sodium alginate may also be used.

糖衣錠コアは、適切なコーティング剤が施されている。この目的で、場合によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または有機混合物を含有することがある濃縮糖溶液が使用されるであろう。識別のために、または活性化合物用量の各種の組合せを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠コーティング剤に染料または顔料が添加されることがある。 Dragee cores are provided with suitable coatings. For this purpose, gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, carbopol gel, polyethylene glycol and / or titanium dioxide, lacquer solutions and concentrated sugar solutions which may contain suitable organic solvents or mixtures are used. It will be. Dyestuffs or pigments may be added to the tablets or dragee coatings for identification or to characterize different combinations of active compound doses.

経口的に使用可能な製薬組成物としては、ゼラチンより成る押込み式カプセル剤はもちろんのこと、ゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤より成る軟質の密封カプセル剤も挙げられる。押込み式カプセル剤は、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、場合により安定剤と混合された活性成分を含有することができる。軟カプセル剤では、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解または懸濁されることがある。これらの調合物には、安定剤も添加されることがある。また使用されるであろう製薬組成物には、硬ゼラチンカプセルがある。カプセル剤または丸剤は、活性化合物を光から保護するために褐色ガラス瓶またはプラスチック瓶に包装されることがある。活性化合物カプセル剤調合物を含有する容器は、好ましくは制御された室温（１５〜３０℃）で貯蔵する。 Pharmaceutical compositions that can be used orally include push-fit capsules made of gelatin, as well as soft, sealed capsules made of gelatin and a plasticizer, such as glycerol or sorbitol. Indented capsules can contain active ingredients mixed with fillers such as lactose, binders such as starch, and / or lubricants such as talc or magnesium stearate, and optionally stabilizers. In soft capsules, the active compounds may be dissolved or suspended in suitable liquids, such as fatty oils, liquid paraffin, or liquid polyethylene glycols. Stabilizers may also be added to these formulations. Pharmaceutical compositions that would also be used include hard gelatin capsules. Capsules or pills may be packaged in brown glass or plastic bottles to protect the active compound from light. The container containing the active compound capsule formulation is preferably stored at a controlled room temperature (15-30 ° C.).

吸入による投与の場合、本発明による使用のための化合物は、多くの既存の技法によりエアゾールスプレーの形で好都合に送達されることがある。たとえばエアゾールスプレーは、加圧パックまたはネブライザおよび適切な噴霧剤、たとえば限定されないが、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラ−フルオロエタンまたは二酸化炭素を利用することがある。加圧エアゾールの場合、投薬単位は、計量された量を送達するための弁を設けることによって制御されることがある。吸入器または吹入器で使用するための、化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末ベースとの粉末ミックスを含有する、たとえばゼラチンのカプセルまたはカートリッジを処方することができる。あるいは、化合物は噴霧剤を含まないエアゾール形で送達されることがある。 For administration by inhalation, the compounds for use according to the present invention may be conveniently delivered in the form of an aerosol spray by a number of existing techniques. For example, aerosol sprays may utilize pressurized packs or nebulizers and suitable propellants such as, but not limited to, dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetra-fluoroethane or carbon dioxide. In the case of a pressurized aerosol, the dosage unit may be controlled by providing a valve to deliver a metered amount. For example, gelatin capsules or cartridges can be formulated containing a powder mix of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch for use in an inhaler or insufflator. Alternatively, the compound may be delivered in an aerosol form that does not contain a propellant.

化合物は、たとえばボーラス注入または持続注入による非経口投与用に調合されることもある。注射用調合物は、添加された保存料を含む、たとえばアンプルまたは複数回用量容器での単位投薬形で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤または乳剤などの形を取ることが可能であり、懸濁化剤、安定剤および／または分散化剤などの調合材料を含有することができる。 The compounds may be formulated for parenteral administration, eg, by bolus injection or continuous infusion. Injectable formulations can be presented in unit dosage form, eg, in ampoules or multiple dose containers, with added preservatives. The compositions can take the form of suspensions, solutions or emulsions in oily or aqueous vehicles and may contain formulated materials such as suspending, stabilizing and / or dispersing agents. it can.

非経口投与用の製薬組成物としては、活性化合物の、限定されないが、塩などの水溶形の水溶液が挙げられる。さらに、活性化合物の懸濁剤は親油性ビヒクルで調製されることがある。適切な親油性ビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルおよびトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームなどの物質が挙げられる。水性注射用懸濁剤は、懸濁剤の粘度を上昇させる物質、たとえばカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含有することがある。場合により、懸濁剤は、適切な安定剤および／または化合物の溶解性を上昇させて高度に濃縮された溶液が調製できるようにする薬剤も含有することがある。 Pharmaceutical compositions for parenteral administration include, but are not limited to, aqueous solutions of the active compound in aqueous form such as salts. In addition, suspensions of the active compounds may be prepared with lipophilic vehicles. Suitable lipophilic vehicles include fatty oils such as sesame oil, synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate and triglycerides, or substances such as liposomes. Aqueous injection suspensions may contain substances that increase the viscosity of the suspension, such as carboxymethyl cellulose, sorbitol, or dextran. In some cases, suspensions may also contain suitable stabilizers and / or agents that increase the solubility of the compound so that a highly concentrated solution can be prepared.

あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル、たとえば滅菌性の、発熱物質を含まない水によって構成するための粉末形である場合もある。 Alternatively, the active ingredient may be in powder form for constitution with a suitable vehicle, eg, sterile, pyrogen-free water, before use.

化合物は、たとえばココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤ベースを使用して、坐剤または留置浣腸剤などの直腸組成物として調合されることもある。 The compounds may be formulated as rectal compositions such as suppositories or indwelling enemas using conventional suppository bases such as cocoa butter or other glycerides.

上述した調合物に加えて、化合物はデポー調製物としても調合されることがある。このような長期作用調合物は、（たとえば皮下または筋肉内への）植え込みによって、または筋肉内注入によって投与することができる。本発明の化合物は、この投与経路のために、適切なポリマーまたは疎水性物質を用いて（たとえば薬理学的に許容される油を用いた乳剤で）、イオン交換樹脂を用いて、または限定されないが、難溶性塩などの難溶性誘導体として調合されることがある。 In addition to the formulations described above, the compounds may be formulated as a depot preparation. Such long acting formulations can be administered by implantation (for example subcutaneously or intramuscularly) or by intramuscular injection. The compounds of the invention are not limited for this route of administration, using appropriate polymers or hydrophobic substances (eg in emulsions with pharmacologically acceptable oils), using ion exchange resins, or May be formulated as poorly soluble derivatives such as poorly soluble salts.

本発明の化合物の製薬的担体の非制限的な例は、ＶＰＤ共溶媒系などのベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマーおよび水相を含む共溶媒系である。ＶＰＤは、無水エタノール中で規定の体積とした、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００の溶液である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は、５％デキストロース水溶液で１：１に希釈したＶＰＤより成る。この共溶媒系は化合物を十分に溶解させ、それ自体は全身投与時に低い毒性を生じる。もちろん、このような溶媒系の割合は、その溶解性および毒性特徴を損なうことなく相当変化する可能性がある。さらに、共溶媒成分の同一性も変化することがある：たとえば、他の低毒性非極性界面活性剤は、ポリソルベート８０の代わりに使用されることがあり、ポリエチレングリコールの分画サイズは変化することがあり、他の生体適合性ポリマー、たとえばポリビニルピロリドンがポリエチレングリコールに代わることがあり、他の糖または多糖類がデキストロースに代わることがある。 Non-limiting examples of pharmaceutical carriers for the compounds of the present invention are cosolvent systems comprising benzyl alcohol, a nonpolar surfactant, a water-miscible organic polymer, and an aqueous phase, such as the VPD cosolvent system. VPD is a solution of 3% w / v benzyl alcohol, 8% w / v nonpolar surfactant polysorbate 80, and 65% w / v polyethylene glycol 300 in a defined volume in absolute ethanol. . The VPD co-solvent system (VPD: D5W) consists of VPD diluted 1: 1 with a 5% dextrose aqueous solution. This co-solvent system dissolves the compound well and itself produces low toxicity upon systemic administration. Of course, the proportion of such solvent systems can vary considerably without compromising its solubility and toxicity characteristics. In addition, the identity of the co-solvent components may also vary: for example, other low toxicity nonpolar surfactants may be used in place of polysorbate 80, and the fraction size of polyethylene glycol may vary. Other biocompatible polymers such as polyvinylpyrrolidone may replace polyethylene glycol and other sugars or polysaccharides may replace dextrose.

あるいは、製薬化合物の他の送達系が利用される可能性がある。リポソームおよび乳剤は、疎水性薬の送達ビヒクルまたは担体の周知の例である。加えて、ジメチルスルホキシドなどのある有機溶媒も利用されることがあるが、より高い毒性と引き換えになることが多い。 Alternatively, other delivery systems for pharmaceutical compounds may be utilized. Liposomes and emulsions are well known examples of hydrophobic drug delivery vehicles or carriers. In addition, some organic solvents such as dimethyl sulfoxide may be utilized, but often at the expense of higher toxicity.

さらに、化合物は、治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスなどの持続放出システムを使用して送達されることがある。各種の持続放出物質が確立されており、当業者に周知である。持続放出カプセル剤は、その化学的性質に応じて、化合物を数週間〜最大１００日間にわたって放出する。 In addition, the compounds may be delivered using a sustained release system such as a semi-permeable matrix of a solid hydrophobic polymer containing a therapeutic agent. Various sustained-release materials have been established and are well known by those skilled in the art. Sustained release capsules release the compound over several weeks up to a maximum of 100 days, depending on its chemical nature.

本明細書の製薬組成物は、適切な固体またはゲル相担体あるいは賦形剤を含むことがある。このような担体または賦形剤の例としては、これに限定されるわけではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。 The pharmaceutical compositions herein may comprise a suitable solid or gel phase carrier or excipient. Examples of such carriers or excipients include, but are not limited to, polymers such as calcium carbonate, calcium phosphate, various sugars, starch, cellulose derivatives, gelatin, and polyethylene glycol.

本発明のＪＡＫ２プロテインキナーゼ調節化合物の多くは生理学的に許容される塩として提供されることがあり、そこで化合物は負または正に帯電した種を形成する可能性がある。化合物が正に帯電した部分を形成する塩の例としては、限定されないが、塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、およびコハク酸塩が挙げられる。本発明の化合物が負に帯電した種を形成する塩としては、限定されないが、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が挙げられる。 Many of the JAK2 protein kinase modulating compounds of the invention may be provided as physiologically acceptable salts, where the compounds may form negatively or positively charged species. Examples of salts where the compound forms a positively charged moiety include, but are not limited to, hydrochloride, sulfate, carbonate, lactate, tartrate, malate, maleate, and succinate. . Salts from which the compounds of the present invention form negatively charged species include, but are not limited to, sodium salts, potassium salts, calcium salts, and magnesium salts.

本発明での使用に適切な製薬組成物としては、所期の目的、たとえばＪＡＫ２プロテインキナーゼ活性の調節ならびに／あるいはＪＡＫ２プロテインキナーゼ関連障害の治療または予防を達成するのに十分な量で活性成分が含有されている組成物が挙げられる。 Pharmaceutical compositions suitable for use in the present invention include the active ingredient in an amount sufficient to achieve the intended purpose, eg, modulation of JAK2 protein kinase activity and / or treatment or prevention of a JAK2 protein kinase related disorder. The contained composition is mentioned.

さらに詳細には、治療的有効量とは、疾患の症状を予防、緩和または改善するのに、あるいは治療される対象の生存を延長するのに有効な化合物の量を意味する。治療的有効量の決定は、特に本明細書で提供する詳細な開示を考慮して、当業者の能力の十分な範囲内にある。本発明の方法で使用するいずれの化合物でも、治療的有効量または用量は、最初に細胞培養アッセイから概算することができる。次に、細胞培養で決定されたようなＩＣ_５０（すなわちプロテインキナーゼ活性の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するために、動物モデルで使用するための投薬量を調合することが可能である。このような情報は次に、ヒトでの有用な用量をより正確に決定するために使用できる。 More particularly, a therapeutically effective amount means an amount of a compound that is effective to prevent, alleviate or ameliorate symptoms of disease or prolong the survival of the subject being treated. Determination of a therapeutically effective amount is well within the capability of those skilled in the art, especially in light of the detailed disclosure provided herein. For any compound used in the method of the invention, the therapeutically effective dose or dose can be estimated initially from cell culture assays. Next, a dosage for use in an animal model to achieve a circulating concentration range that includes an IC ₅₀ (ie, the concentration of the test compound that achieves half-maximal inhibition of protein kinase activity) as determined in cell culture. Can be formulated. Such information can then be used to more accurately determine useful doses in humans.

本明細書で記載する化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物の標準製薬的手順によって、たとえば対象化合物のＩＣ_５０およびＬＤ_５０を決定することによって決定可能である。これらの細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータは、ヒトで使用するための一連の投薬量を調合するのに使用可能である。投薬量は、採用した投薬形および利用する投薬経路に応じて変化することがある。正確な調合、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して、個々の医師によって選択可能である。（たとえばＧＯＯＤＭＡＮＡＮＤＧＩＬＭＡＮ‘ＳＴＨＥＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬＢＡＳＩＳＯＦＴＨｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈ．３，９^ｔｈｅｄ．，Ｅｄ．ｂｙＨａｒｄｍａｎ，Ｊ．，ａｎｄＬｉｍｂａｒｄ，Ｌ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ニューヨーク、１９９６，ｐ．４６を参照）。 Toxicity and therapeutic efficacy of the compounds described herein can be determined by cell culture or standard pharmaceutical procedures in experimental animals, for example, by determining the IC ₅₀ and LD ₅₀ of the subject compound. The data obtained from these cell culture assays and animal studies can be used to formulate a series of dosages for use in humans. The dosage may vary depending on the dosage form employed and the route of administration utilized. The exact formulation, route of administration and dosage can be chosen by the individual physician in view of the patient's condition. (See, eg, GOODMAN AND GILMAN'S THE PHARMALOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Ch. 3, 9 ^th ed., Ed. By Hardman, J., and Limbard, L., McGraw-Hill, New York, 1996, p. 46). .

投薬量および間隔は、ＪＡＫ２キナーゼ調節効果を維持するのに十分である活性種の血漿レベルを与えるために個別に調整される可能性がある。これらの血漿レベルは、最小有効濃度（ＭＥＣ）と呼ばれる。ＭＥＣは各化合物で変わるであろうが、インビトロデータから概算可能であり、たとえばキナーゼの５０〜９０％阻害を達成するのに必要な濃度は、本明細書に記載するアッセイを使用して確認されるであろう。ＭＥＣを達成するのに必要な投薬量は、個人の特徴および投与経路によって変わるであろう。ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用して血漿濃度を決定できる。 Dosage amount and interval may be adjusted individually to provide plasma levels of active species that are sufficient to maintain JAK2 kinase modulating effects. These plasma levels are called the minimum effective concentration (MEC). The MEC will vary for each compound, but can be estimated from in vitro data, for example, the concentration required to achieve 50-90% inhibition of the kinase is confirmed using the assays described herein. It will be. The dosage required to achieve MEC will vary depending on individual characteristics and route of administration. Plasma concentrations can be determined using HPLC assays or bioassays.

投薬間隔もＭＥＣ値を使用して決定可能である。化合物は、期間の１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％にわたって血漿レベルをＭＥＣより上に維持するレジメンを使用して投与されるべきである。 Dosage intervals can also be determined using the MEC value. The compound should be administered using a regimen that maintains plasma levels above the MEC for 10-90%, preferably 30-90%, most preferably 50-90% of the period.

現在、本発明の化合物の治療的有効量は１日当り約２．５ｍｇ／ｍ^２〜１５００ｍｇ／ｍ^２におよぶ可能性がある。さらなる例証的な量は、０．２〜１０００ｍｇ／ｑｉｄ、２〜５００ｍｇ／ｑｉｄ、および２０〜２５０ｍｇ／ｑｉｄにおよぶ。 Currently, a therapeutically effective amount of a compound of the present invention is likely to range per day to about ^{^{2.5mg / m 2 ~1500mg / m 2}} . Further illustrative amounts range from 0.2 to 1000 mg / qid, 2 to 500 mg / qid, and 20 to 250 mg / qid.

局所投与または選択的取込みの場合、薬物の有効局所濃度は血漿濃度と関連付けられないことがあり、正しい投薬量および間隔を決定するために、当分野で公知の他の手順が利用される可能性がある。 In cases of local administration or selective uptake, the effective local concentration of the drug may not be related to plasma concentration, and other procedures known in the art may be utilized to determine the correct dosage and interval There is.

投与された組成物の量はもちろん、治療されている対象、病気の重症度、投与方式、処方医師の判断などによって変わるであろう。 The amount of composition administered will, of course, vary depending on the subject being treated, the severity of the affliction, the manner of administration, the judgment of the prescribing physician, and the like.

組成物は所望ならば、活性成分を含有する１回以上の単位投薬形を含有することができる、ＦＤＡ承認キットなどのパックまたはディスペンサ器具で提供されることがある。パックはたとえば、金属またはプラスチックフォイル、たとえばプリスターパックを含むことがある。パックまたはディスペンサ器具には、投与の説明書が付属していることがある。パックまたはディスペンサには、医薬品の製造、使用または販売を規制する行政機関によって規定された形の、容器に対応した通知も添付されていることがあり、通知は組成物の、あるいはヒトまたは動物への投与の形の機関による承認を示すものである。このような通知はたとえば、米国食品医薬品局によって処方薬について承認されたラベリングであるか、または承認製品の挿入物であるだろう。適合性の製薬用担体と調合された本発明の化合物を含む組成物も、調製され、適切な容器に入れられ、表示された状態の治療に関してラベル貼付されることがある。 The composition may be provided in a pack or dispenser device, such as an FDA approved kit, which may contain one or more unit dosage forms containing the active ingredients, if desired. The pack may include, for example, a metal or plastic foil, such as a prestar pack. The pack or dispenser device may be accompanied by instructions for administration. The pack or dispenser may also be accompanied by a notice corresponding to the container, in a form prescribed by the government that regulates the manufacture, use or sale of the medicinal product. It shows the approval by the institution in the form of administration. Such a notification could be, for example, a labeling approved for a prescription by the US Food and Drug Administration or an insert of an approved product. A composition comprising a compound of the invention formulated with a compatible pharmaceutical carrier may also be prepared, placed in a suitable container and labeled for the treatment of the indicated condition.

上述のように、本発明の化合物および組成物は、ＪＡＫ２プロテインキナーゼが介在する幅広い疾患および状態に有用性が見出されるであろう。このような疾患としては、一例として、そして限定されないが、血液癌（たとえば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ））、肺癌、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）、燕麦細胞癌、骨癌、膵癌、皮膚癌、***性皮膚線維肉腫、頭頸部癌、皮膚または眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肛門部の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、婦人科腫瘍（たとえば子宮肉腫、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌または外陰癌）、ホジキン病、肝細胞癌、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌（たとえば甲状腺、膵臓、副甲状腺または副腎の癌）、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、精巣癌、前立腺癌（特にホルモン抵抗性）、慢性または急性白血病、小児固形腫瘍、過好酸球増加症、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌（たとえば腎細胞癌、腎盂癌）、小児悪性腫瘍、中枢神経系の新生物（たとえば原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸索腫瘍、髄芽腫、脳幹グリオーマまたは下垂体腺腫）、バレット食道（前癌症候群）、腫瘍性皮膚疾患、乾癬、菌状息肉腫、および良性前立腺肥大などの癌、糖尿病、糖尿病網膜症、網膜虚血、および網膜血管新生などの糖尿病関連疾患、肝硬変、血管新生、アテローム性動脈硬化などの心血管疾患、自己免疫疾患などの免疫疾患および腎臓疾患が挙げられる。 As mentioned above, the compounds and compositions of the invention will find utility in a wide range of diseases and conditions mediated by JAK2 protein kinase. Such diseases include, by way of example and not limitation, blood cancers (eg, acute myeloid leukemia (AML) and chronic myeloid leukemia (CML)), lung cancer, NSCLC (non-small cell lung cancer), oat cell carcinoma, Bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, raised dermal fibrosarcoma, head and neck cancer, skin or intraocular melanoma, uterine cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, anal cancer, stomach cancer, colon cancer, breast cancer, gynecological tumor (Eg uterine sarcoma, fallopian tube cancer, endometrial cancer, cervical cancer, vaginal cancer or vulvar cancer), Hodgkin's disease, hepatocellular carcinoma, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine cancer (eg thyroid, pancreas, parathyroid gland) Or adrenal cancer), soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, testicular cancer, prostate cancer (especially hormone resistant), chronic or acute leukemia, childhood solid tumor, hypereosinocytosis, lymphocytic lymphoma, bladder Cancer, renal or ureteral cancer Renal cell carcinoma, renal pelvic cancer), childhood malignancy, central nervous system neoplasm (eg, primary CNS lymphoma, spinal axon tumor, medulloblastoma, brainstem glioma or pituitary adenoma), Barrett's esophagus (precancerous syndrome) Cancer, such as neoplastic skin disease, psoriasis, mycosis fungoides, and benign prostatic hypertrophy, diabetes-related diseases such as diabetes, diabetic retinopathy, retinal ischemia, and retinal neovascularization, cirrhosis, angiogenesis, atherosclerosis And cardiovascular diseases, immune diseases such as autoimmune diseases and kidney diseases.

本発明の化合物は、１種類以上の他の化学治療剤と組合せで使用することが可能である。本発明の化合物の投薬量は、何らかの薬物−薬物反応について調節されることがある。一実施形態において、化学療法剤は、***抑制剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞サイクル阻害薬、酵素、カンプトサール（イリノテカン）などのトポイソメラーゼ阻害薬、生物学的応答調節物質、抗ホルモン、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９およびＣＯＸ−２阻害薬などの血管新生阻害剤、抗アンドロゲン、白金配位錯体（シスプラチンなど）、ヒドロキシ尿素などの置換尿素；プロカルバジンなどのメチルヒドラジン誘導体；副腎皮質抑制剤、たとえばミトタン、アミノグルテチミド、副腎皮質ステロイド（たとえばプレドニゾン）、プロゲスチン（たとえばカプロン酸ヒドロキシプロゲステロン）、エストロゲン（たとえばジエチルスチルベストロール）などのホルモンおよびホルモン拮抗剤、タモキシフェンなどの抗エストロゲン、アンドロゲン、たとえばプロピオン酸テストステロン、およびアナストロゾールなどのアロマターゼ阻害剤、ならびにアロマシン（エキセメスタン）から成る群より選択される。 The compounds of the present invention can be used in combination with one or more other chemotherapeutic agents. The dosage of the compounds of the invention may be adjusted for any drug-drug reaction. In one embodiment, the chemotherapeutic agent comprises a mitotic inhibitor, an alkylating agent, an antimetabolite, a cell cycle inhibitor, an enzyme, a topoisomerase inhibitor such as camptosar (irinotecan), a biological response modifier, an antihormone, Angiogenesis inhibitors such as MMP-2, MMP-9 and COX-2 inhibitors, antiandrogens, platinum coordination complexes (cisplatin and the like), substituted ureas such as hydroxyurea; methylhydrazine derivatives such as procarbazine; adrenal cortex inhibitors Hormones and hormone antagonists such as, for example, mitotan, aminoglutethimide, corticosteroids (eg prednisone), progestins (eg hydroxyprogesterone caproate), estrogens (eg diethylstilbestrol), antiestrogens such as tamoxifen, an Androgenic, for example aromatase inhibitors such as testosterone propionate, and anastrozole and is selected from the group consisting of Aromasin (exemestane).

組合せて上記の方法が実施可能であるアルキル化剤の例としては、限定されないが、単独の、またはさらにロイコボリンと組合されたフルオロウラシル（５−ＦＵ）；ＵＦＴ、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビンなどの他のピリミジン類似物質、スルホン酸アルキル、たとえばブスルファン（慢性顆粒球性白血病の治療で使用される）、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、たとえばベンゾデパ、カルボコン、メツレデパおよびウレデパ；エチレンイミンおよびメチルメラミン、たとえばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロールメラミン；ならびにナイトロジェンマスタード、たとえばクロランブシル（慢性リンパ球性白血病、原発性マクログロブリン血症および非ホジキンリンパ腫の治療で使用される）、シクロホスファミド（ホジキン病、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療で使用される）、エストラムスチン、イホスファミド、ノベンブリチン、プレドニムスチンおよびウラシルマスタード（原発性血小板血症、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病および卵巣癌の治療で使用される）；ならびにトリアジン、たとえばダカルバジン（軟組織肉腫の治療で使用される）が挙げられる。 Examples of alkylating agents with which the above methods can be performed in combination include, but are not limited to, fluorouracil (5-FU), alone or further in combination with leucovorin; UFT, capecitabine, gemcitabine and cytarabine Pyrimidine analogs, alkyl sulfonates such as busulfan (used in the treatment of chronic granulocytic leukemia), improsulfan and pipersulfan; aziridines such as benzodepa, carbocon, metuledepa and uredepa; ethyleneimine and methylmelamine such as altretamine, Triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide and trimethylolmelamine; and nitrogen mustard, such as chlorambucil (chronic lymphocytic leukemia) Used in the treatment of primary macroglobulinemia and non-Hodgkin lymphoma), cyclophosphamide (Hodgkin's disease, multiple myeloma, neuroblastoma, breast cancer, ovarian cancer, lung cancer, Wilms tumor and rhabdomyosarcoma) Estramustine, ifosfamide, nobenbritin, prednimustine and uracil mustard (used in the treatment of primary thrombocythemia, non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's disease and ovarian cancer); and triazines such as dacarbazine ( Used in the treatment of soft tissue sarcomas).

組合せて上記の方法が実施可能である代謝拮抗化学療法剤の例としては、限定されないが、葉酸類似物質、たとえばメトトレキサート（急性リンパ球性白血病、絨毛癌、菌状息肉腫、乳癌、頭頸部癌および骨原性肉腫の治療で使用される）およびプテロプテリン；ならびに急性顆粒球性白血病、急性リンパ球性白血病および慢性顆粒球性白血病に治療で用途が見出されるメルカプトプリンおよびチオグアニンなどのプリン類似物質がある。 Examples of antimetabolite chemotherapeutic agents that can be combined to perform the above methods include, but are not limited to, folic acid analogs such as methotrexate (acute lymphocytic leukemia, choriocarcinoma, mycosis fungoides, breast cancer, head and neck cancer And pteropterin; and purine analogs such as mercaptopurine and thioguanine that find use in the treatment of acute granulocytic leukemia, acute lymphocytic leukemia and chronic granulocytic leukemia is there.

組合せて上記の方法が実施可能である天然物ベースの化学療法剤の例としては、限定されないが、ビンカアルカロイド、たとえばビンブラスチン（乳癌および精巣癌の治療で使用される）、ビンクリスチンおよびビンデシン；エピポドフィロトキシン、たとえばエトポシドおよびテニポシド（どちらも精巣癌およびカポジ肉腫の治療で有用である）；抗生化学療法剤、たとえばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン（胃癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、膀胱癌および膵癌を治療するために使用される）、ダクチノマイシン、テモゾロミド、プリカマイシン、ブレオマイシン（皮膚癌、食道癌および尿生殖路癌の治療で使用される）；およびＬ−アスパラギナーゼなどの酵素化学療法剤が挙げられる。 Examples of natural product-based chemotherapeutic agents that can be combined to perform the above methods include, but are not limited to, vinca alkaloids such as vinblastine (used in the treatment of breast and testicular cancer), vincristine and vindesine; Dofilotoxins such as etoposide and teniposide (both useful in the treatment of testicular cancer and Kaposi's sarcoma); antibiotic chemotherapeutic agents such as daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, mitomycin (gastric cancer, cervical cancer, colon cancer, breast cancer, bladder Used to treat cancer and pancreatic cancer), dactinomycin, temozolomide, pricamycin, bleomycin (used in the treatment of skin cancer, esophageal cancer and genitourinary tract cancer); and enzymatic chemistry such as L-asparaginase Therapeutic agents.

有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例としては、バイオックス、セレブレックス（セレコキシブ）、バルデコキシブ、パラコキシブ、ロフェコキシブ、およびＣｏｘ１８９が挙げられる。 Examples of useful COX-II inhibitors include biox, celebrex (celecoxib), valdecoxib, paracoxib, rofecoxib, and Cox 189.

有用なマトリクスメタロプロテイナーゼ阻害薬の例は、ＷＯ９６／３３１７２（１９９６年１０月２４日に公開）、ＷＯ９６／２７５８３（１９９６年３月７日公開）、欧州特許出願公開第９７３０４９７１．１号（１９９７年７月８日出願）、欧州特許出願公開第９９３０８６１７．２号（１９９９年１０月２９日出願）、ＷＯ９８／０７６９７（１９９８年２月２６日公開）、ＷＯ９８／０３５１６（１９９８年１月２９日公開）、ＷＯ９８／３４９１８（１９９８年８月１３日公開）、ＷＯ９８／３４９１５（１９９８年８月１３日公開）、ＷＯ９８／３３７６８（１９９８年８月６日公開）、ＷＯ９８／３０５６６（１９９８年７月１６日公開）、欧州特許第６０６，０４６号（１９９４年７月１３日公開）、欧州特許第９３１，７８８号（１９９９年７月２８日公開）、ＷＯ９０／０５７１９（１９９０年５月３１日公開）、ＷＯ９９／５２９１０（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ９９／５２８８９（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ９９／２９６６７（１９９９年６月１７日公開）、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＩＢ９８／０１１１３（１９９８年７月２１日出願）、欧州特許出願公開第９９３０２２３２．１号（１９９９年３月２５日出願）、英国特許第９９１２９６１．１号（１９９９年６月３日出願）、米国特許第５，８６３，９４９号（１９９９年１月２６日発行）、米国特許第５，８６１，５１０号（１９９９年１月１９日発行）、および欧州特許第７８０，３８６号（１９９７年６月２５日公開）に記載されており、そのすべては参照によりその全体が本明細書に援用されている。好ましいＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９阻害薬は、ＭＭＰ−１を阻害する活性がほとんどまたは全くない阻害薬である。残りのマトリクスメタロプロテイナーゼ（すなわちＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、およびＭＭＰ−１３）と比較して、ＭＭＰ−２および／またはＭＭＰ−９を選択的に阻害するものがより好ましい。 Examples of useful matrix metalloproteinase inhibitors are WO 96/33172 (published 24 October 1996), WO 96/27583 (published 7 March 1996), European Patent Application Publication No. 97304971.1 ( (Filed on July 8, 1997), European Patent Application Publication No. 99308617.2 (filed on October 29, 1999), WO 98/07697 (published February 26, 1998), WO 98/03516 (1998 1) Published on Aug. 29), WO 98/34918 (published on August 13, 1998), WO 98/34915 (published on Aug. 13, 1998), WO 98/33768 (published on Aug. 6, 1998), WO 98 / 30566 (published July 16, 1998), European Patent No. 606,046 (published July 13, 1994), European Patent No. 931,788 (published July 28, 1999), WO 90/05719 (published May 31, 1990), WO 99/52910 (published October 21, 1999), WO 99/52889 (1999 October 10) Published on May 21), WO 99/29667 (published on June 17, 1999), PCT international application PCT / IB98 / 01113 (filed on July 21, 1998), European Patent Application Publication No. 993022232.1 (1999) Filed on Mar. 25), British Patent No. 9912961.1 (filed on June 3, 1999), US Pat. No. 5,863,949 (issued on Jan. 26, 1999), US Pat. No. 5,861, 510 (issued January 19, 1999) and European Patent 780,386 (published June 25, 1997), all of which are described in Entirety of which is incorporated herein by irradiation. Preferred MMP-2 and MMP-9 inhibitors are those that have little or no activity inhibiting MMP-1. The remaining matrix metalloproteinases (ie, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12, and MMP- Compared with 13), those that selectively inhibit MMP-2 and / or MMP-9 are more preferred.

本発明で有用なＮＭＰ阻害剤の一部の具体的な例としては、ＡＧ−３３４０、ＲＯ３２−３５５５、ＲＳ１３−０８３０、ならびに：３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロペンチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−エキソ−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；（２Ｒ，３Ｒ）１−［４−（２−クロロ−４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド；４−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロブチル）−アミノ］−プロピオン酸；４−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミド］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；（Ｒ）３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；（２Ｒ，３Ｒ）１−［４−（４−フルオロ−２−メチルベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−［［（４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル）−（１−ヒドロキシカルバモイル−１−メチル−エチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（４−ヒドロキシカルバモイル−テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−アミノ］−プロピオン酸；３−エキソ−３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−エンド−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；および（Ｒ）３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミドより選択される化合物；ならびにこれらの化合物の製薬的に許容される塩および溶媒和物である。 Some specific examples of NMP inhibitors useful in the present invention include AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830, and: 3-[[4- (4-Fluoro-phenoxy) -benzene. Sulfonyl]-(1-hydroxycarbamoyl-cyclopentyl) -amino] -propionic acid; 3-exo-3- [4- (4-fluoro-phenoxy) -benzenesulfonylamino] -8-oxa-bicyclo [3.2. 1] Octane-3-carboxylic acid hydroxyamide; (2R, 3R) 1- [4- (2-chloro-4-fluoro-benzyloxy) -benzenesulfonyl] -3-hydroxy-3-methyl-piperidine-2- Carboxylic acid hydroxyamide; 4- [4- (4-fluoro-phenoxy) -benzenesulfonylamino] -tetrahydro-pyran 4- [carboxylic acid hydroxyamide; 3-[[4- (4-fluoro-phenoxy) -benzenesulfonyl]-(1-hydroxycarbamoyl-cyclobutyl) -amino] -propionic acid; 4- [4- (4-chloro -Phenoxy) -benzenesulfonylamide] -tetrahydro-pyran-4-carboxylic acid hydroxyamide; (R) 3- [4- (4-chloro-phenoxy) -benzenesulfonylamino] -tetrahydro-pyran-3-carboxylic acid hydroxy (2R, 3R) 1- [4- (4-Fluoro-2-methylbenzyloxy) -benzenesulfonyl] -3-hydroxy-3-methyl-piperidine-2-carboxylic acid hydroxyamide; 3-[[( 4- (4-Fluoro-phenoxy) -benzenesulfonyl)-(1-hydroxycarbamo 1-methyl-ethyl) -amino] -propionic acid; 3-[[4- (4-fluoro-phenoxy) -benzenesulfonyl]-(4-hydroxycarbamoyl-tetrahydro-pyran-4-yl) -amino] -Propionic acid; 3-exo-3- [4- (4-chloro-phenoxy) -benzenesulfonylamino] -8-oxa-bicyclo [3.2.1] octane-3-carboxylic acid hydroxyamide; 3-endo -3- [4- (4-Fluoro-phenoxy) -benzenesulfonylamino] -8-oxa-bicyclo [3.2.1] octane-3-carboxylic acid hydroxyamide; and (R) 3- [4- ( 4-Fluoro-phenoxy) -benzenesulfonylamino] -tetrahydro-furan-3-carboxylic acid hydroxyamide As well as pharmaceutically acceptable salts and solvates of these compounds.

他の抗血管新生剤、他のＣＯＸ−ＩＩ阻害薬および他のＮＭＰ阻害薬も本発明で使用可能である。 Other anti-angiogenic agents, other COX-II inhibitors and other NMP inhibitors can also be used in the present invention.

本発明の化合物は、他のシグナル伝達阻害剤、たとえばＥＧＦＲ抗体、ＥＧＦ抗体、およびＥＧＦＲ阻害薬である分子などの、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）応答を阻害することができる薬剤；ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）阻害薬；ならびにハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）などの、ｅｒｂＢ２受容体に結合する有機分子または抗体などのｅｒｂＢ２受容体阻害薬と共に使用することが可能である。ＥＧＦＲ阻害薬はたとえばＷＯ９５／１９９７０（１９９５年７月２７日公開）、ＷＯ９８／１４４５１（１９９８年４月９日公開）、ＷＯ９８／０２４３４（１９９８年１月２２日公開）、および米国特許第５，７４７，４９８号（１９９８年５月５日発行）に記載されており、このような物質は本明細書に記載されているように本発明で使用することが可能である。 The compounds of the present invention are agents that can inhibit the EGFR (epidermal growth factor receptor) response, including other signaling inhibitors, eg, EGFR antibodies, EGF antibodies, and molecules that are EGFR inhibitors; VEGF (vascular It can be used with erbB2 receptor inhibitors, such as organic molecules or antibodies that bind to the erbB2 receptor, such as endothelial growth factor) inhibitors; and Herceptin (Genentech, Inc., South San Francisco, Calif.). EGFR inhibitors are described, for example, in WO 95/19970 (published July 27, 1995), WO 98/14451 (published April 9, 1998), WO 98/02434 (published January 22, 1998), and US patents. No. 5,747,498 (issued May 5, 1998), and such materials can be used in the present invention as described herein.

ＥＧＦＲ阻害薬としては、これに限定されるわけではないが、モノクローナル抗体Ｃ２２５および抗ＥＧＦＲ２２Ｍａｂ（ＩｍＣｌｏｎｅＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，ニューヨーク、ニューヨーク州）、化合物ＺＤ−１８３９（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＩＢＸ−１３８２（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＭＤＸ−４４７（ＭｅｄａｒｅｘＩｎｃ．，アナンデール、ニュージャージー州）、ならびにＯＬＸ−１０３（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，ホワイトハウスステーション、ニュージャージー州）、ならびにＥＧＦ融合毒素（ＳｅｒａｇｅｎＩｎｃ．，ホプキントン、マサチューセッツ州）が挙げられる。 EGFR inhibitors include, but are not limited to, monoclonal antibody C225 and anti-EGFR 22 Mab (ImClone Systems, Inc., New York, NY), Compound ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim) ), MDX-447 (Medarex Inc., Annandale, NJ), and OLX-103 (Merck & Co., White House Station, NJ), and EGF fusion toxin (Seragen Inc., Hopkinton, MA). It is done.

これらおよび他のＥＧＦＲ阻害剤が本発明で使用できる。ＶＥＧＦ阻害剤、たとえばＳＵ−５４１６およびＳＵ−６６６８（ＳｕｇｅｎＩｎｃ．，サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）も本発明の化合物と組合せることが可能である。ＶＥＧＦ阻害剤はたとえば、ＷＯ０１／６０８１４Ａ３（２００１年８月２３日公開）、ＷＯ９９／２４４４０（１９９９年５月２０日公開）、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＩＢ９９／００７９７（１９９９年５月３日出願）、ＷＯ９５／２１６１３（１９９５年８月１７日公開）、ＷＯ９９／６１４２２（１９９９年１２月２日公開）、米国特許第５，８３４，５０４号（１９９８年１１月１０日発行）、ＷＯ０１／６０８１４、ＷＯ９８／５０３５６（１９９８年１１月１２日公開）、米国特許第５，８８３，１１３号（１９９９年３月１６日発行）、米国特許第５，８８６，０２０号（１９９９年３月２３日発行）、米国特許第５，７９２，７８３号（１９９８年８月１１日発行）、ＷＯ９９／１０３４９（１９９９年３月４日公開）、ＷＯ９７／３２８５６（１９９７年９月１２日公開）、ＷＯ９７／２２５９６（１９９７年６月２６日公開）、ＷＯ９８／５４０９３（１９９８年１２月３日公開）、ＷＯ９８／０２４３８（１９９８年１月２２日）、ＷＯ９９／１６７５５（１９９９年４月８日公開）、およびＷＯ９８／０２４３７（１９９８年１月２２日公開）に記載されており、そのすべては参照によりその全体が本明細書に援用されている。本発明で有用なある具体的なＶＥＧＦ阻害剤の他の例は、ＩＭ８６２（ＣｙｔｒａｎＩｎｃ．，カークランド、ワシントン州）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．の抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体；およびリボザイム（ボールダー、コロラド州）およびカイロン（エメリビル、カリフォルニア州）からの合成リボザイムのアンギオザイムである。これらおよび他のＶＥＧＦ阻害剤は、本明細書に記載されているように本発明で使用することが可能である。ＧＷ−２８２９７４（ＧｌａｘｏＷｅｌｌｃｏｍｅｐｌｃ）、ならびにモノクローナル抗体ＡＲ−２０９（ＡｒｏｎｅｘＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＩｎｃ．，ウッドランズ、テキサス州）および２Ｂ−１（カイロン）などのｐＥｒｂＢ２受容体阻害剤、たとえば参照によりその全体が本明細書にすべて援用されているＷＯ９８／０２４３４（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ９９／３５１４６（１９９９年７月１５日公開）、ＷＯ９９／３５１３２（１９９９年７月１５日公開）、ＷＯ９８／０２４３７（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ９７／１３７６０（１９９７年４月１７日公開）、ＷＯ９５／１９９７０（１９９５年７月２７日公開）、米国特許第５，５８７，４５８号（１９９６年１２月２４日発行）、および米国特許第５，８７７，３０５号（１９９９年３月２日発行）に示されているものはさらに、本発明の化合物と組合せることが可能である。本明細書で有用なｅｒｂＢ２受容体阻害剤も、参照により本明細書にその全体が援用されている米国特許第６，２８４，７６４号（２００１年９月４日発行）に記載されている。ＰＣＴ出願、米国特許および米国仮出願に記載されたｅｒｂＢ２受容体阻害剤化合物および物質はもちろんのこと、ｅｒｂＢ２受容体を阻害する他の化合物および物質も、本発明に従って本発明の化合物と共に使用可能である。 These and other EGFR inhibitors can be used in the present invention. VEGF inhibitors such as SU-5416 and SU-6668 (Sugen Inc., South San Francisco, Calif.) Can also be combined with the compounds of the present invention. Examples of VEGF inhibitors include WO 01/60814 A3 (published on August 23, 2001), WO 99/24440 (published on May 20, 1999), PCT International Application PCT / IB99 / 00797 (May 3, 1999). Application), WO 95/21613 (published on August 17, 1995), WO 99/61422 (published on December 2, 1999), US Pat. No. 5,834,504 (issued on November 10, 1998), WO 01/60814, WO 98/50356 (published on November 12, 1998), US Pat. No. 5,883,113 (issued on March 16, 1999), US Pat. No. 5,886,020 (1999) Issued on Mar. 23), US Pat. No. 5,792,783 (issued on Aug. 11, 1998), WO 99/10349 (Mar. 4, 1999) Published), WO 97/32856 (published on September 12, 1997), WO 97/22596 (published on June 26, 1997), WO 98/54093 (published on December 3, 1998), WO 98/02438 (published on December 3, 1998) (January 22, 1998), WO 99/16755 (published April 8, 1999), and WO 98/02437 (published January 22, 1998), all of which are incorporated by reference in their entirety. Which is incorporated herein by reference. Other examples of certain specific VEGF inhibitors useful in the present invention include IM862 (Cytran Inc., Kirkland, WA); Genentech, Inc. Anti-VEGF monoclonal antibodies; and ribozyme (Boulder, Colorado) and angiozyme, a synthetic ribozyme from Chiron (Emeriville, Calif.). These and other VEGF inhibitors can be used in the present invention as described herein. GW-282974 (Glaxo Wellcome plc), and pErbB2 receptor inhibitors such as monoclonal antibodies AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc., Woodlands, Tex.) And 2B-1 (Chiron), for example by reference in its entirety. WO 98/02434 (published on January 22, 1998), WO 99/35146 (published on July 15, 1999), WO 99/35132 (published on July 15, 1999), WO 98/02437 (published on January 22, 1998), WO 97/13760 (published on April 17, 1997), WO 95/19970 (published on July 27, 1995), US Pat. No. 5,587,458 (Issued December 24, 1996), And those shown in U.S. Patent No. 5,877,305 (issued March 2, 1999) further can be combined with the compounds of the present invention. Useful erbB2 receptor inhibitors herein are also described in US Pat. No. 6,284,764 (issued September 4, 2001), which is hereby incorporated by reference in its entirety. Other compounds and substances that inhibit erbB2 receptors can be used with the compounds of the invention in accordance with the present invention, as well as erbB2 receptor inhibitor compounds and substances described in PCT applications, US patents, and US provisional applications. is there.

本発明の化合物は、これに限定されるわけではないが、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性リンパ球抗原４）などの抗腫瘍免疫応答を向上させることが可能な薬剤、およびＣＴＬＡ４を遮断する他の薬剤；ならびに他のファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤、たとえば米国特許第６，２５８，８２４Ｂ１号の「背景技術」の部分に引用された参考文献に記載されているファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害薬などの抗増殖剤を含む、癌を治療するのに有用な他の薬剤と共に使用することも可能である。 The compounds of the present invention include, but are not limited to, agents that can improve anti-tumor immune responses such as CTLA4 (cytotoxic lymphocyte antigen 4) and other agents that block CTLA4; As well as other farnesyl protein transferase inhibitors, for example anti-proliferative agents such as the farnesyl protein transferase inhibitors described in the references cited in the “Background” section of US Pat. No. 6,258,824 B1. It can also be used with other drugs useful for treating cancer.

上記の方法は放射線療法と組合せて実施することも可能であり、放射線療法と組合される本発明の化合物の量は、上記の疾患を治療するのに有効である。 The above methods can also be performed in combination with radiation therapy, and the amount of the compound of the present invention in combination with radiation therapy is effective to treat the above diseases.

放射線療法を投与する技法は当分野で公知であり、これらの技法は本明細書に記載する併用療法で使用することが可能である。本併用療法での本発明の化合物の投与は、本明細書に記載するように決定することが可能である。 Techniques for administering radiation therapy are known in the art, and these techniques can be used in the combination therapy described herein. Administration of the compounds of the invention in the combination therapy can be determined as described herein.

本発明は、以下の非制限的な実施例を考慮するとさらに理解されるであろう。 The invention will be further understood in view of the following non-limiting examples.

（実施例１）
計算に基づくリードの同定
テンプレートとしてのＰａｎ−Ｊａｎｕｓキナーゼ阻害剤（ＰＤＢＩＤ：２Ｂ７Ａ）との複合体におけるＪＡＫ２キナーゼの結晶構造に基づいて、仮想スクリーニング計算を実施した。約２００種の所内の、ならびに仮想ライブラリからの約２３０万種の重点化されたおよび／または多様な薬物様化合物のコンピュータスクリーニングによって、ＯｔａｖａＣｈｅｍｉｃａｌｓ（ｗｗｗ．Ｏｔａｖａｃｈｅｍｉｃａｌｓ．ｃｏｍ）より購入したライブラリから候補化合物を選択した。所内からは３つの化合物が低分子量範囲で活性であることが見出され（＜４２ｎＭ〜１．２５μＭ）、Ｏｔａｖａ化合物の１つが直接ＪＡＫ２キナーゼ結合アッセイで＜１０μＭ活性であることが見いだされた。特異的ＪＡＫ２キナーゼ活性に重要な分子量領域の同定で最も活性な化合物が、ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体に属することが見出された。下の表１に示すように、このようなスクリーニングから選択された化合物は、結合様式、ＱｉｋＰｒｏｐ（溶解性、浸透性）Ｌｉｐｉｎｓｋｉ様基準および所望のファルマコフォア基の存在に基づいてフィルタリングした。 Example 1
Calculation-based lead identification Based on the crystal structure of JAK2 kinase in complex with Pan-Janus kinase inhibitor (PDB ID: 2B7A) as a template, a virtual screening calculation was performed. Candidate compounds from a library purchased from Otta Chemicals (www.Otachemicals.com) by computer screening of about 200,000 focused and / or diverse drug-like compounds from about 200 sites and from virtual libraries Selected. From in-house, three compounds were found to be active in the low molecular weight range (<42 nM to 1.25 μM) and one of the Otaba compounds was found to be <10 μM active in the direct JAK2 kinase binding assay. It has been found that the most active compounds in the identification of molecular weight regions important for specific JAK2 kinase activity belong to the pyrimidine-2,4-diamine derivatives. As shown in Table 1 below, compounds selected from such screens were filtered based on binding mode, QikProp (solubility, permeability) Lipinski-like criteria and the presence of the desired pharmacophore group.

（実施例２）
ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体の一般的合成
本発明の化合物は、次の一般的な反応スキームによってと同様に、通常の合成手順を使用して当業者によって作製されるであろう。

(Example 2)
General Synthesis of Pyrimidine-2,4-diamine Derivatives Compounds of the invention will be made by those skilled in the art using conventional synthetic procedures, as well as by the following general reaction scheme.

一般反応スキーム： General reaction scheme:

簡潔には、２，４−ジクロロピリミジン（１）を適切に置換されたアニリン（２）と反応させて、中間体（３）を得る。次に中間体（３）をさらに適切に置換されたアミン（４）と反応させて、構造（Ｉ）の化合物を得る。あるいは、中間体（３）を適切に置換されたアミン（５）とさらに反応させて、構造（ＩＩ）の化合物を得る。特に記載がなければ、すべての溶媒および試薬はＡｌｄｒｉｃｈまたはＶＷＲｃｈｅｍｉｃａｌｓから入手可能であり、供給されたまま使用されるか、または必要に応じて標準の実験室的方法によって精製されることがある。

Briefly, 2,4-dichloropyrimidine (1) is reacted with an appropriately substituted aniline (2) to give intermediate (3). Intermediate (3) is then further reacted with an appropriately substituted amine (4) to give a compound of structure (I). Alternatively, intermediate (3) is further reacted with an appropriately substituted amine (5) to give a compound of structure (II). Unless otherwise noted, all solvents and reagents are available from Aldrich or VWR chemicals and may be used as supplied or may be purified by standard laboratory methods as needed.

（実施例３）
ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体の合成
Ａ．２−クロロ−４−置換ピリミジン（３）を調製するための一般手順 (Example 3)
Synthesis of pyrimidine-2,4-diamine derivatives General procedure for preparing 2-chloro-4-substituted pyrimidines (3)

イソプロパノール（ＩＰＡ）３０ｍＬ中に２，４−ジクロロピリミジン（１）（１０ｍｍｏｌ）、アニリン（２）（１０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１．５ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物を一晩還流させた。溶媒を除去して、ＣｏｍｂｉｆｌａｓｈＣｏｍｐａｎｉｏｎシステム（１０％〜７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）を使用して残渣を精製し、所望の２−クロロ−４−置換ピリミジン（３）を得た。

A reaction mixture containing 2,4-dichloropyrimidine (1) (10 mmol), aniline (2) (10 mmol) and diisopropylethylamine (DIPEA) (1.5 mmol) in 30 mL of isopropanol (IPA) was refluxed overnight. The solvent was removed and the residue was purified using a Combiflash Companion system (10% -70% hexane / EtOAc) to give the desired 2-chloro-4-substituted pyrimidine (3).

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７） 2-Chloro-N- (3-chloro-4-fluorophenyl) pyrimidin-4-amine (7)

２−プロパノール（２０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（１）（１ｇ、６．７１ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、３−クロロ−４−フルオロアニリン（６）（０．９７７ｇ、６．７１ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３．４７ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）の反応混合物を１８時間還流させた。溶媒を蒸発させて、７０％ヘキサン〜純ジクロロメタン（ＤＣＭ）および２０％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈＣｏｍｐａｎｉｏｎ（４０ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐＦｌａｓｈカラム、ランタイム５０分間）によって精製し、化合物（７）（０．８ｇ）を得た。（ＴＬＣ，Ｒｆ＝０．６，ＥｔＯＡｃ）。白色固体、収率４６．２％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１０．１８（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ２５８．０（１００％），２５９．９（７８％），２６１．９（１８％）。

2,4-Dichloropyrimidine (1) (1 g, 6.71 mmol, Sigma-Aldrich), 3-chloro-4-fluoroaniline (6) (0.977 g, 6.71 mmol, Sigma) in 2-propanol (20 mL) -Aldrich) and diisopropylethylamine (DIPEA) (3.47 g, 26.8 mmol) were refluxed for 18 hours. The solvent was evaporated and purified by Combiflash Companion (40 g normal phase RediSep Flash column, runtime 50 min) using 70% hexane to pure dichloromethane (DCM) and 20% ethyl acetate (EtOAc) solvent system to give compound (7) (0.8 g) was obtained. (TLC, Rf = 0.6, EtOAc). White solid, yield 46.2%. ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 10.18 (s, 1H), 8.20 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.90 (m, 1H), 7.50 (m , 1H), 7.43 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 5.8 Hz, 1H). ESI / MS m / z 258.0 (100%), 259.9 (78%), 261.9 (18%).

５−（２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）−２−フルオロベンゾニトリル（９） 5- (2-Chloropyrimidin-4-ylamino) -2-fluorobenzonitrile (9)

２−プロパノール（５０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（１）（１ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）、５−アミノ−２−フルオロベンゾニトリル（８）（０．９１４ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ１ｍＬの反応混合物を一晩還流させた。溶媒を蒸発させて、粗物質をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇ、ＤＣＭ約１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製し、化合物（９）３１８ｍｇ（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．１、６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。白色固体、収率１９％。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．１５（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝９．２３Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ２４８．９（１００％），２５０．９（３３％）。

2,4-dichloropyrimidine (1) (1 g, 6.71 mmol), 5-amino-2-fluorobenzonitrile (8) (0.914 g, 6.71 mmol) and 2-mL DIPEA in 2-propanol (50 mL) The reaction mixture was refluxed overnight. The solvent was evaporated and the crude material was purified by Combiflash (12 g, DCM ca. 10% MeOH / DCM) to give 318 mg (TLC, Rf = 0.1, 6% MeOH / DCM) of compound (9). White solid, 19% yield. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 8.15 (m, 2H), 7.89 (m, 1H), 7.35 (t, J = 9.23 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 5.6 Hz, 1 H). ESI / MS m / z 248.9 (100%), 250.9 (33%).

２−（３−アミノフェニル）アセトニトリル（１１） 2- (3-Aminophenyl) acetonitrile (11)

３−ニトロフェニルアセトニトリル（１０）を濃ＨＣｌ（１５ｍｌ）およびエタノール（１５ｍｌ）の混合物に溶解させた。ＳｎＣｌ_２二水和物のエタノール（２５ｍｌ）による溶液を氷冷しながら徐々に滴下して、混合物を室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１）Ｒｆ＝０．１によって８０％完了が示された。溶媒を蒸発させた後に、残渣をＮａＯＨで処理してｐＨ９とした。ＥｔＯＡｃによる抽出およびｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇ、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ１０％〜５０％、７０分間）によって、化合物（１１）１．１８２ｇを黄色油として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ，ＣＤＣｌ_３）７．１２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｍ，３Ｈ），３．７２（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），３．６４（ｓ，２Ｈ）。

3-Nitrophenylacetonitrile (10) was dissolved in a mixture of concentrated HCl (15 ml) and ethanol (15 ml). A solution of SnCl ₂ dihydrate in ethanol (25 ml) was slowly added dropwise with ice cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. TLC (EtOAc / Hexane 1: 1) Rf = 0.1 showed 80% completion. After evaporating the solvent, the residue was treated with NaOH to pH 9. Extraction with EtOAc and combiflash (12 g, hexane / EtOAc 10% to 50%, 70 min) afforded 1.182 g of compound (11) as a yellow oil. ¹ H-NMR (400 Mhz, CDCl ₃ ) 7.12 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.65 (m, 3H), 3.72 (br-s, 1H), 3.64 (s , 2H).

２−（３−（２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（１２） 2- (3- (2-Chloropyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (12)

２−プロパノール（４０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（１）（１．１２７ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）、２−（３−アミノフェニルアセトニトリル（１１）（１ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）１５ｍｍｏｌの反応混合物を２日間還流させた。溶媒を蒸発させて、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇ、２回、ＣＨＣｌ_３）によって精製し、化合物（１２）９３２ｍｇを薄緑色結晶として得た。収量：５０％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．１６（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｍ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ）。

2,4-dichloropyrimidine (1) (1.127 g, 7.57 mmol), 2- (3-aminophenylacetonitrile (11) (1 g, 7.57 mmol) and triethylamine (TEA) in 2-propanol (40 mL) . the reaction mixture 15mmol was refluxed for 2 days the solvent was evaporated, Combiflash (12 g, 2 times, CHCl ₃₎ to afford compound (12) 932 mg as a pale green crystals ^yield:.. 50% ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 8.16 (d, J = 6.15 Hz, 1H), 7.41 (m, 1H), 7.33 (m, 2H), 7.18 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.96 (br-s, 1H), 6.58 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H).

Ｂ．２，４−二置換ピリミジン（Ｉ）を調製する一般手順 B. General procedure for preparing 2,4-disubstituted pyrimidines (I)

イソプロパノール７ｍＬ中の２−クロロ−４−置換ピリミジン（３）（０．２５ｍｍｏｌ）、アミン（４）またはアミン（５）（ＡｐｏｌｌｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄＢｉｏｎｅｔＢｕｉｌｄｉｎｇＢｌｏｃｋｓ、英国）（０．２５ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．５ｍｍｏｌ）の反応混合物を一晩還流させた。反応混合物が室温まで冷却された後に、ＮａＯＨ（０．６ｍｍｏｌ）を添加した。溶媒を除去して、残渣をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（４ｇ、ＤＣＭ約２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製し、下に示すように構造（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を得た。

2-Chloro-4-substituted pyrimidine (3) (0.25 mmol), amine (4) or amine (5) (Apollo Scientific and Bionet Building Blocks, UK) (0.25 mmol) and TFA (0. 5 mmol) of the reaction mixture was refluxed overnight. After the reaction mixture was cooled to room temperature, NaOH (0.6 mmol) was added. The solvent was removed and the residue was purified by Combiflash (4 g, DCM ca 20% MeOH / DCM) to give compounds of structure (I) or (II) as shown below.

Ｎ４−（３−クロロフェニル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−１） N4- (3-Chlorophenyl) -N2- (4- (trifluoromethyl) phenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-1)

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロフェニル）ピリミジン−４−アミン（１３）（１００ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液に４−（トリフルオロメチル）アニリン（１４）（６７．１ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）を添加し、続いて触媒トリフルオロ酢酸を添加して、還流温度にて一晩撹拌した。溶媒を蒸発させて、ＤＣＭおよび５％ＭｅＯＨ溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈＣｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐＦｌａｓｈカラム、１８ｍｌ／分のフローでランタイム５０分間）によって残渣を精製し、化合物１−１（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．４、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．０８（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．８（ｓ，２Ｈ），３．３９（ｍ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．１８Ｈｚ，１Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ３６５．０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

To a solution of 2-chloro-N- (3-chlorophenyl) pyrimidin-4-amine (13) (100 mg, 0.417 mmol) in 2-propanol (10 mL) was added 4- (trifluoromethyl) aniline (14) (67.1 mg). 0.417 mmol), followed by the addition of catalytic trifluoroacetic acid and stirring at reflux temperature overnight. The solvent was evaporated and the residue was purified by Combiflash Companion (4g normal phase RediSep Flash column, 18 ml / min flow at runtime 50 min) using DCM and 5% MeOH solvent system to give compound 1-1 (TLC, Rf = 0.4, 10% MeOH / DCM). ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 8.08 (d, J = 6.15 Hz, 1H), 7.8 (s, 2H), 3.39 (m, 1H), 7.82 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.2 Hz) , 1H), 7.15 (d, J = 8.18 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 6.15 Hz, 1H) ESI / MS m / z 365.0 (M + H) ⁺ .

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−フルオロフェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−２） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (4-fluorophenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-2)

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液に４−フルオロアニリン（１５）（２５．８ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を添加し、続いて触媒トリフルオロ酢酸を添加して、還流温度にて一晩撹拌した。反応混合物にトリエチルアミンを添加し、続いて１時間撹拌すると、ＴＬＣによって反応完了が示された。溶媒を蒸発させて、ヘキサン７０％およびＤＣＭ溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈＣｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐＦｌａｓｈカラム、１８ｍｌ／分のフローでランタイム５０分間）によって残渣を精製し、化合物１−２（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．３５、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．０１（ｍ，２Ｈ），７．６４（ｍ，２Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝８．２３Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｍ，２Ｈ），６．２２（ｍ，１Ｈ），ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ３３３．０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

To a solution of 2-chloro-N- (3-chloro-4-fluorophenyl) pyrimidin-4-amine (7) (60 mg, 0.232 mmol) in 2-propanol (10 mL) was added 4-fluoroaniline (15) (25. 8 mg, 0.232 mmol) was added followed by catalytic trifluoroacetic acid and stirred at reflux temperature overnight. Triethylamine was added to the reaction mixture, followed by stirring for 1 hour, TLC indicated complete reaction. The solvent was evaporated and the residue was purified by Combiflash Companion (4 g normal phase RediSep Flash column, 18 ml / min flow at runtime 50 min) using 70% hexane and DCM solvent system to give compound 1-2 (TLC, Rf = 0.35, 5% MeOH / DCM). ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 8.01 (m, 2H), 7.64 (m, 2H), 3.39 (m, 2H), 7.49 (m, 1H), 7.35 (T, J = 8.23 Hz, 1H), 7.11 (m, 2H), 6.22 (m, 1H), ESI / MS m / z 333.0 (M + H) ⁺ .

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−モルホリノフェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−３） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (4-morpholinophenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-3)

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液に４−モルホリノアニリン（１６）（４１．４ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を添加し、続いて触媒トリフルオロ酢酸を添加して、還流温度にて一晩撹拌した。ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨの溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈＣｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐＦｌａｓｈカラム、２６ｍＬ／分のフローでランタイム４０分間）によって粗残渣を精製して、化合物１−３（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．４５、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。ＨＰＬＣ＝９４％。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．０３（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．５４Ｈｚ，２Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ，２Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｍ，４Ｈ），３．１０（ｓ，４Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４００．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

To a solution of 2-chloro-N- (3-chloro-4-fluorophenyl) pyrimidin-4-amine (7) (60 mg, 0.232 mmol) in 2-propanol (10 mL) was added 4-morpholinoaniline (16) (41. 4 mg, 0.232 mmol) was added followed by catalyst trifluoroacetic acid and stirred at reflux temperature overnight. The crude residue was purified by Combiflash Companion using a solvent system of 10% MeOH in DCM (4 g normal phase RediSep Flash column, 26 mL / min flow for 40 min runtime) to give compound 1-3 (TLC, Rf = 0.0). 45, 10% MeOH / DCM). HPLC = 94%. ¹ HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 8.03 (m, 1H), 7.90 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 7.31 (d, J = 8.54 Hz, 2H ), 6.98 (d, J = 8.55 Hz, 2H), 6.33 (d, J = 6.83 Hz, 1H), 3.74 (m, 4H), 3.10 (s, 4H) ESI / MS m / z 400.1 (M + H) ^<+> .

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−４） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-4)

１−ブタノール中の２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）（１００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（１７）（７４．１ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ、ＡｐｏｌｌｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国より購入）、ＤＩＰＥＡ（２ｍＬ、１１．４８ｍｍｏｌ）、およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を一晩還流させた。ＴＬＣ（６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１００％ＥｔＯＡｃ）によって、リンモリブデン酸染色で紫色である化合物１−４７ｍｇを得た。収量：４８％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）９．４５（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｍ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｍ，３Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．１０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｍ，４Ｈ），２．４３（ｍ，４Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４１３．３（１００％），４１５．２（３３％）。

2-Chloro-N- (3-chloro-4-fluorophenyl) pyrimidin-4-amine (7) (100 mg, 0.387 mmol), 4- (4-methylpiperazin-1-yl) aniline in 1-butanol (17) (74.1 mg, 0.387 mmol, Apollo Scientific, purchased from UK), DIPEA (2 mL, 11.48 mmol), and dimethylaminopyridine (DMAP) were refluxed overnight. TLC (6% MeOH / DCM) showed complete reaction. Concentration and CombiFlash purification (4 g, DCM ca. 100% EtOAc) gave 7 mg of compound 1-4 that was purple with phosphomolybdic acid staining. Yield: 48%. ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 9.45 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.08 (m, 1H), 7.98 (d, J = 4.5 Hz) , 1H), 7.45 (m, 3H), 7.30 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.10 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.04 (m, 4H), 2.43 (m, 4H), 2.20 (s, 3H). ESI / MS m / z 413.3 (100%), 415.2 (33%).

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−メトキシ−３−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−５） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (4-methoxy-3- (3- (4-methylpiperazin-1-yl) propoxy) phenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1- 5)

ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍＬ）中の２−メトキシ−５−ニトロフェノール（１８）（２ｇ、１１．８２ｍｍｏｌ）、３−クロロフェニルブロミド（２．２３４ｇ、２３．６５ｍｍｏｌ）の混合物にＫ_２ＣＯ_３（３．２７ｇ）を添加して、得られた反応混合物を８０℃まで３時間加熱した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）によって反応が完了したことが示された。反応混合物を次に水（１５０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）で分配した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３で洗浄して、次にＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過した。溶液を濃縮して、１９を薄黄色固体（３．９ｇ）として得た。１９（１．５ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）に１，４−ジオキサン２０ｍＬおよびヨウ化ナトリウム（１．３７３ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）中のＮ−メチルピペラジンを添加して、得られた反応混合物を１００℃まで３０時間加熱した。オレンジ色混合物を濃縮して、１，４−ジオキサンを処理し、次に酢酸エチル５０ｍＬで希釈した。０．５時間撹拌した後、濾過して、塩を除去した。有機層をＮａＯＨ溶液（２０ｍＬ）および水（３×２０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ_４での乾燥および濃縮によって、化合物２０をオレンジ色油（１．００ｇ）として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．９０（ｄｄ，Ｊ１＝２．３Ｈｚ，Ｊ２＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），２．５８（ｍ，１０Ｈ），２．４３（ｂｒ−ｓ，３Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ）。

To a mixture of 2-methoxy-5-nitrophenol (18) (2 g, 11.82 mmol), 3-chlorophenyl bromide (2.234 g, 23.65 mmol) in dimethylformamide (DMF) (20 mL) was added K ₂ CO ₃ ( 3.27 g) was added and the resulting reaction mixture was heated to 80 ° C. for 3 hours. TLC (EtOAc) indicated that the reaction was complete. The reaction mixture was then partitioned with water (150 mL) and ethyl acetate (100 mL). The organic layer was washed with saturated NaHCO ₃ and then dried over MgSO ₄ and filtered. The solution was concentrated to give 19 as a pale yellow solid (3.9 g). 19 (1.5 g, 6.11 mmol) was added 20 mL of 1,4-dioxane and N-methylpiperazine in sodium iodide (1.373 g, 9.16 mmol) and the resulting reaction mixture was brought to 100 ° C. Heated for 30 hours. The orange mixture was concentrated to treat 1,4-dioxane and then diluted with 50 mL of ethyl acetate. After stirring for 0.5 hour, the salt was removed by filtration. The organic layer was washed with NaOH solution (20 mL) and water (3 × 20 mL). Drying over MgSO ₄ and concentration gave compound 20 as an orange oil (1.00 g). ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 7.90 (dd, J1 = 2.3 Hz, J2 = 8.9 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.88 (D, J = 8.8 Hz, 1H), 4.14 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 2.58 (m, 10H), 2.43 (br-s, 3H), 2.03 (m, 2H).

化合物２０は、Ｐａｒｒ震盪器内のイソプロパノール中１０％Ｐｄ／Ｃの存在下で水素添加を５時間受けさせた。ＴＬＣ（１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。セライトによる濾過および濃縮によって、化合物２１（１ｇ）を褐色油として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）６．６８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２０（ｄｄ，Ｊ１＝２．４Ｈｚ，Ｊ２＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｂｒ−ｍ，１０Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｍ，２Ｈ）。 Compound 20 was hydrogenated for 5 hours in the presence of 10% Pd / C in isopropanol in a Parr shaker. TLC (15% MeOH / DCM) showed complete reaction. Filtration through celite and concentration gave compound 21 (1 g) as a brown oil. ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 6.68 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.20 (dd, J1 = 2. 4 Hz, J2 = 8.2 Hz, 1H), 3.99 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.46 (s, 3H), 2.55 (br−) m, 10H), 2.32 (s, 3H), 2.01 (m, 2H).

ＴＦＡ（１ｍＬ）および２−プロパノール（１０ｍＬ）中に２１（１００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）および７（１０８ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物を一晩還流させた。ＴＬＣ（６％ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって７の完全消費が示された。反応混合物を濃縮して、ＭｅＯＨ中に再溶解させた。ＮａＯＨ添加によってＴＦＡを反応停止させた。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−５２１９ｍｇを褐色泡として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）９．４９（ｓ，１Ｈ），９．０１（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｍ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｓ，８Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），１．８３（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ，５０１．２（１００％），５０３．３（３３％）。 The reaction mixture containing 21 (100 mg, 0.387 mmol) and 7 (108 mg, 0.387 mmol) in TFA (1 mL) and 2-propanol (10 mL) was refluxed overnight. TLC (6% DCM / MeOH) showed complete consumption of 7. The reaction mixture was concentrated and redissolved in MeOH. The TFA was quenched by the addition of NaOH. Concentration and CombiFlash purification (4 g, DCM ca 15% MeOH / DCM) gave 219 mg of compound 1-5 as a brown foam. ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 9.49 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.04 (m, 1H), 8.00 (d, J = 5.8 Hz) , 1H), 7.4 (br-s, 1H), 7.29 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.20 (m, 2H), 6.85 (d, J = 8.8 Hz). , 1H), 6.13 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.86 (t, J = 6.15 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.48 (s, 8H) ), 2.35 (s, 3H), 1.83 (m, 2H). ESI / MS m / z, 501.2 (100%), 503.3 (33%).

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−６） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (6- (trifluoromethyl) pyridin-3-yl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-6)

２−プロパノール（１０ｍＬ）中の７（１００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）および５−アミノ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（２２）（６２．８ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）の混合物にＴＥＡを添加して、反応混合物を２４時間還流させた。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．３）によって反応完了が示された。混合物を濃縮してイソプロパノールを除去して、メタノールに再溶解させた。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。さらなる濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ１５％〜９０％、５０分間）によって、化合物１−６１０６ｍｇを固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，３Ｈ），６．４９（ｓ，１Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ，３８４．０（１００％），３８６．０（３３％）
２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−７）

TEA was added to a mixture of 7 (100 mg, 0.387 mmol) and 5-amino-2- (trifluoromethyl) pyridine (22) (62.8 mg, 0.387 mmol) in 2-propanol (10 mL), The reaction mixture was refluxed for 24 hours. TLC (EtOAc, Rf = 0.3) indicated complete reaction. The mixture was concentrated to remove isopropanol and redissolved in methanol. NaOH was added to neutralize the TFA. Further concentration and CombiFlash purification (4 g, Hexane / EtOAc 15% -90%, 50 min) gave 106 mg of compound 1-6 as a solid. ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 8.69 (s, 1H), 8.42 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7 .59 (m, 1H), 7.53 (m, 1H), 7.15 (m, 3H), 6.49 (s, 1H), 6.19 (d, J = 5.5 Hz, 1H). ESI / MS m / z, 384.0 (100%), 386.0 (33%)
2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-7)

化合物１２（１００ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）および１７（７８ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ、ＡｐｏｌｌｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）を２−プロパノール１０ｍＬに溶解させて、ＴＥＡ（１ｍＬ）を添加した。得られた反応物を一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加すると、白色沈殿が生成した。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（０〜２５％ＮｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−７（１８６ｍｇ）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲによって、おそらく多少のアニリンが内部にあることが示された。収量：１１４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８８（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．８６Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｍ，３Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．２７（ｍ，４Ｈ），２．９６（ｍ，４Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ，４００．１（１００％）。

Compounds 12 (100 mg, 0.409 mmol) and 17 (78 mg, 0.409 mmol, Apollo Scientific, UK) were dissolved in 10 mL 2-propanol and TEA (1 mL) was added. The resulting reaction was refluxed overnight. TLC (20% MeOH / DCM) showed complete reaction. Upon addition of NaOH, a white precipitate formed. Concentration and CombiFlash purification (0-25% MeOH / DCM) provided compound 1-7 (186 mg) as a white solid. ¹ HNMR probably indicated some aniline inside. Yield: 114%. ¹ H-NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 7.88 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.44 (m, 3H), 7.27 (t, J = 7.86 Hz, 1H), 7.00 (m, 3H), 6.15 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.27 (m, 4H) , 2.96 (m, 4H), 2.59 (s, 3H). ESI / MS m / z, 400.1 (100%).

２−（３−（２−（４−メトキシ−３−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−８） 2- (3- (2- (4-Methoxy-3- (3- (4-methylpiperazin-1-yl) propoxy) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-8)

２−プロパノール（１０ｍＬ）中の１２（１００ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）および２１（１１４ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）の混合物にＴＦＡを添加して、これを一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。ＮａＯＨの添加によって白色沈殿が生じた。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（０〜２５％ＮｅＯＨ：ＤＣＭ）によって化合物１−８（２３６ｍｇ）を固体泡として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：７．９０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｍ，３Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），２．７１（ｂｒ−ｍ，２Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ，４８８．２（１００％）。

To a mixture of 12 (100 mg, 0.409 mmol) and 21 (114 mg, 0.409 mmol) in 2-propanol (10 mL) was added TFA and refluxed overnight. TLC (20% MeOH / DCM, Rf = 0.1) indicated complete reaction. A white precipitate formed upon addition of NaOH. Concentration and CombiFlash purification (0-25% Neo: DCM) gave compound 1-8 (236 mg) as a solid foam. ¹ H-NMR (400 MHz, CD ₃ OD): 7.90 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.2 Hz, 1H) 7.26 (m, 2H), 6.98 (m, 3H), 6.16 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 3.91 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3 .84 (s, 3H), 3.74 (s, 2H), 3.34 (s, 2H), 2.71 (br-m, 2H), 2.56 (s, 3H), 1.96 ( m, 2H). ESI / MS m / z, 488.2 (100%).

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−９） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (4- (trifluoromethyl) phenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-9)

２−プロパノール（７ｍＬ）中の７（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）および１４（３７．５ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の混合物にＴＦＡを添加して、これを一晩還流させた。ＴＬＣ（６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１５）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。粗生成物の濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、５０分間）によって、化合物１−９（７０ｍｇ）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄｄ，Ｊ_１＝２．７Ｈｚ，Ｊ_２＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ，３８３．１（１００％），３８５．１（３３％）。

To a mixture of 7 (60 mg, 0.232 mmol) and 14 (37.5 mg, 0.232 mmol) in 2-propanol (7 mL) was added TFA and refluxed overnight. TLC (6% MeOH / DCM, Rf = 0.15) indicated complete reaction. NaOH was added to neutralize the TFA. Concentration of the crude product and CombiFlash purification (4 g, 0-10% MeOH / DCM, 50 min) gave compound 1-9 (70 mg) as a white solid. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 7.9 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.95 (dd, J ₁ = 2.7 Hz, J ₂ = 6.8 Hz, 1H), 7. 79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.44 (m, 1H), 7.17 (t, J = 8.9 Hz, 1H) ), 6.23 (d, J = 5.8 Hz, 1H). ESI / MS m / z, 383.1 (100%), 385.1 (33%).

２−フルオロ−５−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）ベンゾニトリル（化合物１−１０） 2-Fluoro-5- (2- (4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) benzonitrile (Compound 1-10)

化合物９（６０ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）および１７（４６．２ｍｇ、０．４２１ｍｍｏｌ、ＡｐｏｌｌｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）を２−プロパノール１０ｍＬに溶解させて、触媒ＴＥＡを添加した。得られた混合物を一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐＦｌａｓｈカラム、２６ｍＬ／分のフローでランタイム４０分間、０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、化合物１−１０（８２ｍｇ、８４％）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．３５（ｍ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｍ，４Ｈ），２．７０（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４０４．１（Ｍ＋Ｈ）
２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１１）

Compounds 9 (60 mg, 0.241 mmol) and 17 (46.2 mg, 0.421 mmol, Apollo Scientific, UK) were dissolved in 10 mL of 2-propanol and catalyst TEA was added. The resulting mixture was refluxed overnight. TLC (20% MeOH / DCM, Rf = 0.1) indicated complete reaction. NaOH was added to neutralize the TFA. Concentration and CombiFlash purification (4 g normal phase RediSep Flash column, 26 mL / min run time 40 min, 0-20% MeOH / DCM) afforded compound 1-10 (82 mg, 84%) as a white solid. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 8.35 (m, 1H), 7.92 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.40 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.23 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.12 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.23 (m, 4H), 2.70 (br-s, 4H), 2.40 (s, 3H). ESI / MS m / z 404.1 (M + H)
2- (3- (2- (3-Fluoro-4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-11)

２−プロパノール（７ｍＬ）中の１２（６０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）および３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（２３）（５１．３ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、ＡｐｏｌｌｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫより購入）の混合物および触媒ＴＦＡを一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．２）によって反応完了が示された。ＮａＯＨの添加によって白色沈殿が生じた。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、０〜２０％ＮｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１１（１１５ｍｇ）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ_１＝２．４Ｈｚ，Ｊ_２＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｍ，２Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．１６（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．９２（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４１８．１（Ｍ＋Ｈ）。

12 (60 mg, 0.245 mmol) and 3-fluoro-4- (4-methylpiperazin-1-yl) aniline (23) (51.3 mg, 0.245 mmol, Apollo Scientific, UK in 2-propanol (7 mL) More purchased) and catalytic TFA were refluxed overnight. TLC (20% MeOH / DCM, Rf = 0.2) indicated complete reaction. A white precipitate formed upon addition of NaOH. Concentration and CombiFlash purification (4 g, 0-20% MeOH / DCM) provided compound 1-11 (115 mg) as a white solid. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 7.93 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.61 (dd, J ₁ = 2.4 Hz, J ₂ = 4.7 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.9 Hz, 1H) ), 7.00 (m, 2H), 6.20 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.16 (br-s, 4H), 2.92 ( br-s, 4H), 2.56 (s, 3H). ESI / MS m / z 418.1 (M + H).

２−（３−（２−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１２） 2- (3- (2- (6- (4-Methylpiperazin-1-yl) pyridin-3-ylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-12)

２−プロパノール（７ｍＬ）中の１２（６０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）および６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−アミン（２４）（４７．１ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、ＢｉｏｎｅｔＢｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋｓ、ＵＫより購入）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、０〜２０％ＮｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１２（９７ｍｇ）を固体として得た。収量：９８％。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．３５（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄｄ，Ｊ_１＝２．７Ｈｚ，Ｊ_２＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．５ＨＺ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．６１（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．８７（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ）
Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−１３）

12 (60 mg, 0.245 mmol) and 6- (4-methylpiperazin-1-yl) pyridin-3-amine (24) (47.1 mg, 0.245 mmol, Bionet Building blocks, 2-propanol (7 mL), (Purchased from UK) and catalyst TFA were refluxed for 24 hours. TLC (20% MeOH / DCM, Rf = 0.1) indicated complete reaction. NaOH was added to neutralize the TFA. Concentration and CombiFlash purification (4 g, 0-20% MeOH / DCM) provided compound 1-12 (97 mg) as a solid. Yield: 98%. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 8.35 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7 .76 (dd, J ₁ = 2.7 Hz, J ₂ = 9.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.9 Hz, 1H) ), 7.01 (d, J = 7.5HZ, 1H), 6.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.81 (S, 2H), 3.61 (br-s, 4H), 2.87 (br-s, 4H), 2.56 (s, 3H)
N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (6- (4-methylpiperazin-1-yl) pyridin-3-yl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-13)

２−プロパノール（７ｍＬ）中の７（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）および２４（４４．７ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加して、混合物を濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製を実施し（４ｇ、１００％ＤＣＭ約２５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）、化合物１−１３（８６．７ｍｇ）を白色固体として得た。収率：９０％。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．２３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ１＝９．２Ｈｚ，Ｊ２＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．９０（ｍ，４Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４１４．１（Ｍ＋Ｈ）。

A mixture of 7 (60 mg, 0.232 mmol) and 24 (44.7 mg, 0.232 mmol) and catalyst TFA in 2-propanol (7 mL) was refluxed for 24 hours. TLC (20% MeOH / DCM) showed complete reaction. NaOH was added and the mixture was concentrated and CombiFlash purification was performed (4 g, 100% DCM ca. 25% MeOH / DCM) to give compound 1-13 (86.7 mg) as a white solid. Yield: 90%. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 8.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.92 (m, 1H), 7.90 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7 .82 (dd, J1 = 9.2 Hz, J2 = 2.7 Hz, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.12 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.61 (br-s, 4H), 2.90 (m, 4H), 2.59 (s, 3H) ESI / MS m / z 414.1 (M + H).

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−イル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−１４） N4- (3-Chloro-4-fluorophenyl) -N2- (3-fluoro-4- (4-methylpiperazinyl) phenyl) pyrimidine-2,4-diamine (Compound 1-14)

２−プロパノール（７ｍＬ）中の７（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）および２３（４４．７ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた後に、ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。室温での３日間の後、多少の白色固体（１０３ｍｇ）が形成された。濾過および^１ＨＮＭＲによって、生成物がＴＦＡ塩であることが示された。ＮａＯＨを添加して、混合物を濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈｃｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ、ＤＣＭ約２５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１−１４（８８．８ｍｇ）を白色固体として得た。収率は８９％であった。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９０（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｍ，２Ｈ），７，２７（ｄｄ，Ｊ１＝９．６Ｈｚ，Ｊ２＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．７５（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４３１．０（Ｍ＋Ｈ）。

A mixture of 7 (60 mg, 0.232 mmol) and 23 (44.7 mg, 0.232 mmol) in 2-propanol (7 mL) and catalytic TFA were refluxed for 24 h before TLC (20% MeOH / DCM, Rf = 0.1) showed that the reaction was complete. After 3 days at room temperature, some white solid (103 mg) was formed. Filtration and ¹ H NMR indicated that the product was a TFA salt. NaOH was added and the mixture was concentrated and purified by CombiFlash companion (4 g, DCM ca. 25% MeOH) to give compound 1-14 (88.8 mg) as a white solid. The yield was 89%. ¹ H NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 7.90 (m, 2H), 7.47 (m, 2H), 7, 27 (dd, J1 = 9.6 Hz, J2 = 2.4 Hz, 1H), 7 .14 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 6.99 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.10 (br− s, 4H), 2.75 (br-s, 4H), 2.43 (s, 3H). ESI / MS m / z 431.0 (M + H).

（４−（４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（化合物１−１５） (4- (4- (3-Chloro-4-fluorophenylamino) pyrimidin-2-ylamino) phenyl) (4-methylpiperazin-1-yl) methanone (Compound 1-15)

４−ニトロベンゾイルクロライド（２５）（１ｇ、５．３９ｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（５０ｍＬ）溶液を１−メチルピペラジン（２６）によって１０℃にて１０分間処理した。反応混合物をさらに１時間撹拌して、続いてＴＥＡ（１．４９ｍＬ、２当量）を添加して、さらに３０分間撹拌した。反応混合物を氷冷水（１５０ｍＬ）で処理して、ＥｔＯＡｃ（４×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させて、濃縮し、（４−メチルピペラジン−１−イル）（４−ニトロフェニル）メタノン２７１．１ｇ（収率８２％）を黄色固体として得た。ＴＬＣ：１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ，Ｒｆ＝０．６．^１ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．２８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），３．４６（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ２５０．０（Ｍ＋Ｈ）
エタノール２０ｍＬ中に（４−メチルピペラジン−１−イル）（４−ニトロフェニル）メタノン（２７）（２００ｍｇ、０．８０２ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（６０ｍｇ）を含有する混合物をＨ_２（６０ｐｓｉ）下で４時間震盪した。反応完了および濾過の後に、濃縮により２８（８３．８ｍｇ、収率４８％）を薄黄色油として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ，ＣＤ３ＯＤ）７．１９（ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），６．６８（ｄｄ，Ｊ１＝２．７Ｈｚ，Ｊ２＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４４（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ２２０．０（Ｍ＋Ｈ）。

A solution of 4-nitrobenzoyl chloride (25) (1 g, 5.39 mol) in CH ₃ CN (50 mL) was treated with 1-methylpiperazine (26) at 10 ° C. for 10 minutes. The reaction mixture was stirred for an additional hour followed by addition of TEA (1.49 mL, 2 eq) and stirred for an additional 30 minutes. The reaction mixture was treated with ice cold water (150 mL) and extracted with EtOAc (4 × 150 mL). The organic layer was dried over MgSO ₄ and concentrated to give 1.1 g (82% yield) of (4-methylpiperazin-1-yl) (4-nitrophenyl) methanone 27 as a yellow solid. TLC: 10% MeOH / DCM, Rf = 0.6. ¹ NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 8.28 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.88 (br-s, 4H), 3 .46 (br-s, 4H), 2.40 (s, 3H) ESI / MS m / z 250.0 (M + H)
A mixture containing (4-methylpiperazin-1-yl) (4-nitrophenyl) methanone (27) (200 mg, 0.802 mmol) and 10% Pd / C (60 mg) in 20 mL of ethanol was H ₂ (60 psi). Shake for 4 hours underneath. After completion of the reaction and filtration, concentration gave 28 (83.8 mg, 48% yield) as a pale yellow oil. ¹ H-NMR (400 Mhz, CD3OD) 7.19 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 6.5 Hz, 2H), 6.68 (dd, J1 = 2.7 Hz, J2 = 6.5 Hz, 2H) 3.64 (br-s, 4H), 2.44 (br-s, 4H), 2.31 (s, 3H) ESI / MS m / z 220.0 (M + H).

２−プロパノール（５ｍＬ）中の７（５０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）および２８（３３ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを１５０℃にて１時間マイクロ波処理した。ＴＬＣによって反応完了が示された。ＨＰＬＣは考えられる主な新しいスポットを示した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１５３２ｍｇを半固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９８（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｍ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．５４，２Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ，Ｊ２＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４８（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４４１．２（Ｍ＋Ｈ）。 A mixture of 7 (50 mg, 0.194 mmol) and 28 (33 mg, 0.150 mmol) and catalyst TFA in 2-propanol (5 mL) was microwaved at 150 ° C. for 1 hour. TLC showed complete reaction. HPLC showed the main new spots considered. CombiFlash purification (4 g, DCM ca 15% MeOH / DCM) gave 32 mg of compound 1-15 as a semi-solid. ¹ H-NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 7.98 (d, J = 6.15 Hz, 1H), 7.94 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.54, 2H), 7.36 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 6.8 Hz, 2H), 7.19 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 8.8 Hz, 2H), 6.21 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.65 (br-s, 4H), 2.48 (br-s, 4H), 2.34 (s, 3H) ESI / MS m / z 441.2 (M + H).

２−（３−（２−（４−（４−シクロヘキシルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１６） 2- (3- (2- (4- (4-cyclohexylpiperazine-1-carbonyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-16)

２−プロパノール（５ｍＬ）中の１２（５０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、（４−アミノフェニル）（４−シクロヘキシルピペラジノメタノン（２９）（５８．７ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＮａＯＨを添加すると、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって多少の開始物質とさらなる新しいスポットが示された。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１６（９５ｍｇ）を褐色固体として得た。^１ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｍ，３Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，３Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２４（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．６９９ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．７５（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４８（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），１．９５（ｂｒ−ｓ，２Ｈ），１．８３（ｂｒ−ｓ，２Ｈ），１．６５（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．２９（ｂｒ−ｓ，４Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４９６．１（Ｍ＋Ｈ）。

A mixture of 12 (50 mg, 0.204 mmol), (4-aminophenyl) (4-cyclohexylpiperazinomethanone (29) (58.7 mg, 0.204 mmol) and catalyst TFA in 2-propanol (5 mL). Refluxed for 24 hours Upon addition of NaOH, TLC (10% MeOH / DCM) showed some starting material and further new spots Concentration and CombiFlash purification (4 g, DCM ca 15% MeOH / DCM) compound 1-16 (95 mg) was obtained as a brown solid ¹ NMR (400 MHz, CD ₃ OD) 7.9 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.73 (m, 3H), 7.55 ( d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.35 (m, 3H), 7.05 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.24. d, J = 6.2 Hz, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.699 br-s, 4H), 2.75 (br-s, 4H), 2.48 (br-s, 1H) 1.95 (br-s, 2H), 1.83 (br-s, 2H), 1.65 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 1.29 (br-s, 4H) ESI / MS m / z 496.1 (M + H).

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１７） 2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazine-1-carbonyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-17)

２−プロパノール（５ｍＬ）中の１２（５０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）および２８（４４．８ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＮａＯＨを添加すると、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって多少の開始物質とさらなる新しい化合物スポットが示された。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１７（５２ｍｇ）を黄色固体として得た。^１ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）９．５３（ｓ，１Ｈ），９．４０（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｍ，３Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｂｒ−ｍ，４Ｈ），２．４２（ｂｒ−ｍ，４Ｈ），２．２８（ｂｒ−ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４２８．２（Ｍ＋Ｈ）。

A mixture of 12 (50 mg, 0.204 mmol) and 28 (44.8 mg, 0.204 mmol) and catalyst TFA in 2-propanol (5 mL) was refluxed for 24 hours. Upon addition of NaOH, TLC (10% MeOH / DCM) showed some starting material and additional new compound spots. Concentration and CombiFlash purification (4 g, DCM ca 15% MeOH / DCM) afforded compound 1-17 (52 mg) as a yellow solid. ¹ NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 9.53 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.06 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.78 (m, 3H) ), 7.58 (s, 1H), 7.31 (m, 3H), 6.98 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.48 (br-m, 4H), 2.42 (br-m, 4H), 2.28 (br-s, 3H) ESI / MS m / z 428.2 (M + H).

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１８） 2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazin-1-yl) -3- (trifluoromethyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile (Compound 1-18)

２−プロパノール（５ｍＬ）中の１２（５０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）および４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）アニリン（２９）（４６．６ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを１３０℃にて２．５時間マイクロ波処理した。ＴＬＣによって新たなスポットの存在が確認された。反応混合物はＮａＯＨの添加によって反応停止させ、濃縮して、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、Ｃ−１８、５％〜１００％水／ＣＨ_３ＣＮ）によって精製し、画分をＨＰＬＣによって確認した。純画分を合せ、濃縮して、化合物１−１８４．５ｍｇを薄白色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ−（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３−ＣＤ_３ＯＤ）７．６２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｓ，２Ｈ），７．０２（ｍ，２Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｓ，１Ｈ），３．３５（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｓ，２Ｈ），２．６１（ｓ，４Ｈ），２．２９（ｓ，４Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４６８．３６（Ｍ＋Ｈ）。

12 (50 mg, 0.204 mmol) and 4- (4-methylpiperazin-1-yl) -3- (trifluoromethyl) aniline (29) (46.6 mg, 0.409 mmol) in 2-propanol (5 mL) And the catalyst TFA were microwaved at 130 ° C. for 2.5 hours. TLC confirmed the presence of a new spot. The reaction mixture was quenched by addition of NaOH, concentrated and purified by CombiFlash purification (4g, C-18,5% ~100 % water / _CH 3 CN), to confirm the fraction by HPLC. Pure fractions were combined and concentrated to give 4.5 mg of compound 1-18 as a pale white solid. ¹ H-NMR- (300 MHz, CDCl ₃ -CD ₃ OD) 7.62 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.46 (d, J = 9 Hz, 1H) ), 7.24 (s, 2H), 7.02 (m, 2H), 6.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.45 (s, 1H), 3.35 (s, 1H), 3.03 (s, 2H), 2.61 (s, 4H), 2.29 (s, 4H), 2.05 (s , 3H). ESI / MS m / z 468.36 (M + H).

（実施例４）
代表的な化合物の塩形
化合物１−１１および１−１８の代表的な塩形（すなわちＨＣｌ、硫酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩形）を以下の手順に従って調製して、下の表２に示した。 Example 4
Representative Compound Salt Forms Representative salt forms of compounds 1-11 and 1-18 (ie, HCl, sulfate, mesylate, besylate forms) were prepared according to the following procedure, as shown in Table 2 below. It was shown to.

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルジヒドロクロライド（化合物１−１１２ＨＣｌ）
化合物１−１１（２．０６ｇ）を２−プロパノール１２５ｍＬに懸濁させた。濃ＨＣｌ（２．４７ｍＬ、６当量）を添加した。透明溶液が得られるまで混合物を加熱した。溶液を室温に冷却してから、溶液を−２０℃の冷凍庫に移した。３日後、アルゴン下での濾過およびエーテルでの洗浄により、化合物１−１１のビス−ＨＣｌ塩を黄色粉末１．８２３ｇとして得た、収率７０％。 2- (3- (2- (3- (Fluoro-4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile dihydrochloride (Compound 1-11 2HCl)
Compound 1-11 (2.06 g) was suspended in 125 mL of 2-propanol. Concentrated HCl (2.47 mL, 6 eq) was added. The mixture was heated until a clear solution was obtained. After the solution was cooled to room temperature, the solution was transferred to a −20 ° C. freezer. After 3 days, filtration under argon and washing with ether gave the bis-HCl salt of compound 1-11 as 1.823 g of a yellow powder, 70% yield.

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル硫酸塩（化合物１−１１硫酸塩）
化合物１−１１３５０ｍｇをアセトン３５ｍＬに溶解させて、Ｈ_２ＳＯ_４０．１２２ｍＬ（２．５当量）を添加した。沈殿がすぐに形成された。混合物を室温にて一晩貯蔵した。濾過によって黄色吸湿性粉末３９４ｍｇを得た。固体をエタノール中に１時間懸濁させて、濾過により白色粉末３５０ｍｇを得た、収率６８％（吸湿性ではない）。^１Ｈ−ＮＭＲ３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９４（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｍ，３Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝１２．４５Ｈｚ，４Ｈ），３．４２（ｍ，４Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），^１９Ｆ−ＮＭＲ（３００Ｍｈｚ，ＣＤ_３ＯＤ）−１８６．９９Ｈｚ．元素分析、計算値：Ｃ，４５．０２；Ｈ，４．６０；Ｎ，１５．９８；Ｓ，１０．４５，実測値：Ｃ，４５．６８；Ｈ，４．３０；Ｎ，１５．９６；Ｓ，９．３９。 2- (3- (2- (3- (Fluoro-4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile sulfate (Compound 1-11 sulfate)
350 mg of compound 1-11 was dissolved in 35 mL of acetone, and 0.122 mL (2.5 equivalents) of H ₂ SO ₄ was added. A precipitate formed immediately. The mixture was stored at room temperature overnight. Filtration gave 394 mg of a yellow hygroscopic powder. The solid was suspended in ethanol for 1 hour and filtered to give 350 mg of white powder, yield 68% (not hygroscopic). ¹ H-NMR 300 MHz, CD ₃ OD) 7.94 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7 .49 (m, 2H), 7.29 (m, 3H), 6.57 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.74 (t, J = 12 .45 Hz, 4H), 3.42 (m, 4H), 3.12 (s, 3H), ¹⁹ F-NMR (300 Mhz, CD ₃ OD) -186.99 Hz. Elemental analysis, calculated values: C, 45.02; H, 4.60; N, 15.98; S, 10.45, measured values: C, 45.68; H, 4.30; N, 15.96 S, 9.39.

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルメタンスルホナート（化合物１−１１メシル酸塩）
化合物１−１１（４００ｍｇ）のＩＰＡ４０ｍＬ溶液にメチルスルホン酸（０．１８６ｍＬ、３当量）を添加した。透明溶液が徐々に濁り、混合物を−２０℃で貯蔵した。残渣をＮ_２下で濾過して、真空下で乾燥させ、白色粉末４００ｍｇを得た、収率６８％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８３（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｍ，３Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝１１．２３Ｈｚ，４Ｈ），３．３７（ｍ，４Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，３Ｈ），２．７１（ｓ，６Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ４９．２５，Ｈ５．２９，Ｎ１６．０８，Ｓ１０．５２，実測値：Ｃ４８．７５，Ｈ５．５０，Ｎ１５．１３，Ｓ１０．５１。 2- (3- (2- (3- (Fluoro-4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile methanesulfonate (Compound 1-11 mesylate)
Methylsulfonic acid (0.186 mL, 3 equivalents) was added to a solution of compound 1-11 (400 mg) in 40 mL IPA. The clear solution gradually became cloudy and the mixture was stored at -20 ° C. The residue was filtered under N ₂ and dried under vacuum to give 400 mg of white powder, 68% yield. ¹ H-NMR (300 MHz, CD ₃ OD) 7.83 (d, J = 7.08 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.55 Hz, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.19 (m, 3H), 6.43 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 3.85 (s, 2H), 3.62 (d, J = 11.23 Hz, 4H), 3.37 (m, 4H), 3.18 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.71 (s, 6H). Elemental analysis, calculated values: C 49.25, H 5.29, N 16.08, S 10.52, found values: C 48.75, H 5.50, N 15.13, S 10.51.

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルベンゼンスルホナート（化合物１−１１ベシル酸塩）
化合物１−１１（４００ｍｇ）のエタノール３０ｍＬ溶液にベンゼンスルホン酸（４５５ｍｇ、３当量）を添加した。透明溶液が形成された後に、白色沈殿がすぐに現れた。残渣をＮ_２下で一晩濾過して、真空下で乾燥させ、白色固体５２０ｍｇを得た、収率７４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ−ＣＤＣｌ_３）７．９３（ｍ，３Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），７．４９Ｍ，５Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝９．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３９（ｓ，４Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ５７．２８，Ｈ４．９４，Ｎ１３．３６，Ｓ８．７４，実測値：Ｃ５７．０６，Ｈ４．８６，Ｎ１３．２０，Ｓ８．６６。 2- (3- (2- (3- (Fluoro-4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile benzenesulfonate (compound 1-11 besylate)
Benzenesulfonic acid (455 mg, 3 equivalents) was added to a 30 mL ethanol solution of compound 1-11 (400 mg). A white precipitate immediately appeared after a clear solution was formed. The residue was filtered overnight under N ₂ and dried under vacuum to give 520 mg of white solid, 74% yield. ¹ H-NMR (300 MHz, CD ₃ OD-CDCl ₃ ) 7.93 (m, 3H), 7.82 (d, J = 7.08 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.49M , 5H), 7.27 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 9.04 Hz, 1H), 7.04 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6 .49 (d, J = 7.32 Hz, 1H), 3.85 (s, 2H), 3.67 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 3.63 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 3.39 (s, 4H), 3.03 (s, 3H). Elemental analysis, calculated values: C 57.28, H 4.94, N 13.36, S 8.74, found values: C 57.06, H 4.86, N 13.20, S 8.66.

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルヒドロクロライド（化合物１−１８ＨＣｌ）
化合物１−１８（５００ｍｇ）は、ＩＰＡ４０ｍＬに完全に溶解するのが困難であった。しかしＨＣｌ（０．４４６ｍＬ、５当量）の添加および加熱の後に、透明黄色溶液を得た。溶液を室温まで冷却して、−２０℃の冷凍庫に２日間移した。濾過および真空下での乾燥によって、粉末５７０ｍｇを得た、収率８４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８７（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，２Ｈ），７．６０（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｍ，３Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｍ，４Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．３５Ｈｚ，６Ｈ，ＩＰＡ）．元素分析、計算値：Ｃ，５３．１７；Ｈ，６．０６；Ｎ，１５．５０；Ｃｌ，１１．２１，実測値：Ｃ，５３．２７；Ｈ，６．３７；Ｎ，１４．８４；Ｃｌ，１０．８１。 2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazin-1-yl) -3- (trifluoromethyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile hydrochloride (Compound 1-18 HCl)
Compound 1-18 (500 mg) was difficult to dissolve completely in 40 mL of IPA. However, after addition of HCl (0.446 mL, 5 eq) and heating, a clear yellow solution was obtained. The solution was cooled to room temperature and transferred to a −20 ° C. freezer for 2 days. Filtration and drying under vacuum gave 570 mg of powder, 84% yield. ¹ H-NMR (300 MHz, CD ₃ OD) 7.87 (d, J = 7.32 Hz, 1H), 7.81 (s, 2H), 7.60 (m, 3H), 7.36 (m, 1H), 7.22 (d, J = 7.82 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 3.89 (m, 3H), 3.60 (d, J = 7.57 Hz, 2H), 3.25 (m, 4H), 2.99 (s, 3H), 1.14 (d, J = 6.35 Hz, 6H, IPA). Elemental analysis, calculated values: C, 53.17; H, 6.06; N, 15.50; Cl, 11.21, measured values: C, 53.27; H, 6.37; N, 14.84 Cl, 10.81.

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル硫酸塩（化合物１−１８硫酸塩）
化合物１−１８（４００ｍｇ）のＩＰＡ５０ｍＬ溶液にＨ_２ＳＯ_４（０．１３７ｍＬ、３当量）を添加した。沈殿がすぐに形成された。Ｎ_２下での週末にわたっての濾過によって、黄色粉末４０７ｍｇを得た、収率６８％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８９（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６０（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，４Ｈ），３，２１（ｓ，３Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ，４４．１５；Ｈ，４．６５；Ｎ，１４．１３；Ｓ，９．２４，実測値：Ｃ，４４．２０；Ｈ，４．６５；Ｎ，１３．９８；Ｓ，９．１６。 2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazin-1-yl) -3- (trifluoromethyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile sulfate (Compound 1-18 sulfate) )
H ₂ SO ₄ (0.137 mL, 3 equivalents) was added to a solution of compound 1-18 (400 mg) in 50 mL IPA. A precipitate formed immediately. Filtration over the weekend under N ₂ gave 407 mg of yellow powder, 68% yield. ¹ H-NMR (300 MHz, CD ₃ OD) 7.89 (d, J = 7.32 Hz, 1H), 7.78 (m, 2H), 7.60 (m, 3H), 7.36 (t, J = 7.32 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 7.08 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 3. 60 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 3.27 (m, 4H), 3, 21 (s, 3H). Elemental analysis, calculated values: C, 44.15; H, 4.65; N, 14.13; S, 9.24, measured values: C, 44.20; H, 4.65; N, 13.98 S, 9.16.

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルメタンスルホナート（化合物１−１８メシル酸塩）
化合物１−１８（４００ｍｇ）のアセトン２０ｍＬ溶液（ほぼ透明）にメチルスルホン酸（０．１３９ｍＬ、２．５当量）を添加した。溶液は濁った。混合物を週末にわたって−２０℃で貯蔵した。アセトンを注ぎ出した。固体を洗浄して、真空下で乾燥させ、黄色粉末４２９ｍｇを得た、収率７４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，４Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．７２（ｓ，６Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ，４６．０８；Ｈ，５．０６；Ｎ，１４．４７；Ｓ，９．４６，実測値：Ｃ，４６．０８；Ｈ，４．９３；Ｎ，１４．１６；Ｓ，１０．２５。 2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazin-1-yl) -3- (trifluoromethyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile methanesulfonate (compound 1-18 mesyl) Acid salt)
Methylsulfonic acid (0.139 mL, 2.5 equivalents) was added to a solution of compound 1-18 (400 mg) in 20 mL of acetone (almost transparent). The solution became cloudy. The mixture was stored at −20 ° C. over the weekend. Acetone was poured out. The solid was washed and dried under vacuum to give 429 mg of yellow powder, 74% yield. ¹ H-NMR (300 MHz, CD ₃ OD) 7.88 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.78 (m, 2H), 7.59 (m, 3H), 7.35 (t, J = 7.32 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 7.08 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 3. 60 (d, J = 7.57 Hz, 2H), 3.27 (m, 4H), 2.99 (s, 3H), 2.72 (s, 6H). Elemental analysis, calculated values: C, 46.08; H, 5.06; N, 14.47; S, 9.46, measured values: C, 46.08; H, 4.93; N, 14.16 S, 10.25.

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルベンゼンスルホナート（化合物１−１８ベシル酸塩）
化合物１−１８（４００ｍｇ）のＩＰＡ３０ｍＬ高温懸濁液にベンゼンスルホン酸（４０６ｍｇ、３当量）を添加した。これを室温で冷却して、−２０℃で一晩貯蔵した。Ｎ_２下での濾過によって、黄色粉末５１６ｍｇを得た、収率７２％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８１（ｍ，７Ｈ），７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４３（ｍ，７Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｄ，２Ｈ），３．２３（ｍ，５Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ）， ^１９Ｆ−ＮＭＲ（３００Ｍｚ，ＣＤ_３ＯＤ）−１２６．５８．元素分析、計算値：Ｃ，５１．６０；Ｈ，５．０５；Ｎ，１１．７０；Ｓ，７．６５，実測値：Ｃ，５１．５７；Ｈ，４．９６；Ｎ，１０．９８；Ｓ，７．６１。 2- (3- (2- (4- (4-Methylpiperazin-1-yl) -3- (trifluoromethyl) phenylamino) pyrimidin-4-ylamino) phenyl) acetonitrile benzenesulfonate (compound 1-18 besyl) Acid salt)
Benzenesulfonic acid (406 mg, 3 eq) was added to a 30 mL hot suspension of compound 1-18 (400 mg) in IPA. This was cooled at room temperature and stored at −20 ° C. overnight. Filtration under N ₂ gave 516 mg of yellow powder, 72% yield. ¹ H-NMR (300 MHz, CD ₃ OD) 7.81 (m, 7H), 7.58 (m, 3H), 7.43 (m, 7H), 7.19 (d, J = 7.57 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.58 (d, 2H), 3.23 (m, 5H), 2.97 (s) , 3H), ¹⁹ F-NMR (300 Mz, CD ₃ OD) -126.58. Elemental analysis, calculated values: C, 51.60; H, 5.05; N, 11.70; S, 7.65, measured values: C, 51.57; H, 4.96; N, 10.98 S, 7.61.

（実施例５）
代表的な化合物の活性
Ａ．ＪＡＫ２キナーゼ阻害アッセイ
ＪＡＫ２キナーゼ活性を決定することができる１つの例証的な方式は、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，マディソン、ウィスコンシン州）などの、インビトロＪＡＫ２キナーゼ反応後に溶液中に残存するＡＴＰの量を定量することによる。キナーゼ反応後に溶液中に残存するＡＴＰの量は、ルシフェラーゼがルシフェリンを触媒してオキシルシフェリンおよび光子１個とするための基質として作用する。それゆえＬｕｍｉｎｏｓｋａｎＡｓｃｅｎｔＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎＣｏｒｐ．，ミルフォード、マサチューセッツ州）によって読取られた発光シグナルは、キナーゼ反応後に存在するＡＴＰの量と相関し、キナーゼ活性の量と逆相関している。本アッセイは、ＪＡＫ２キナーゼに対するキナーゼ阻害薬のＩＣ_５０値を決定するのに十分である。これらのアッセイは、白色平底９６ウェルプレートにて体積５０ｕｌで２回分準備する。阻害薬を１×キナーゼ緩衝液、６ｕＭＡＴＰ、６２．５ｕＭＪＡＫ２特異的基質、活性ＪＡＫ２酵素３０ｎｇ、および水の溶液に、マイクロモル〜ナノモル濃度におよぶ連続希釈で添加する。本溶液を３０℃にて３６０ｒｐｍで２時間インキュベートする。インキュベート後、キナーゼ−Ｇｌｏ試薬５０ｕｌをすべての正および負の対照ウェルを含む各ウェルに添加して、室温で１５分間インキュベートした。プレートを次にＬｕｍｉｎｏｓｋａｎＡｓｃｅｎｔ装置によって読取り、結果をＡｓｃｅｎｔＳｏｆｔｗａｒｅバージョン２．６によって表示する。次に試験した各阻害薬についてＩＣ_５０値を計算することができる。

(Example 5)
Activity of representative compounds JAK2 Kinase Inhibition Assay One illustrative manner in which JAK2 kinase activity can be determined remains in solution after an in vitro JAK2 kinase reaction, such as the Kinase-Glo assay kit (Promega, Inc., Madison, Wis.). By quantifying the amount of ATP. The amount of ATP remaining in solution after the kinase reaction acts as a substrate for luciferase to catalyze luciferin to oxyluciferin and one photon. Therefore, the luminescence signal read by the Luminoskan Ascent Instrument (Thermo Electron Corp., Milford, Mass.) Correlates with the amount of ATP present after the kinase reaction and inversely with the amount of kinase activity. This assay is sufficient to determine the IC ₅₀ value of a kinase inhibitor against JAK2 kinase. These assays are prepared in two 50 ul volumes in white flat bottom 96 well plates. Inhibitors are added to 1 × kinase buffer, 6 uM ATP, 62.5 uM JAK2 specific substrate, active JAK2 enzyme 30 ng, and water in serial dilutions ranging from micromolar to nanomolar. This solution is incubated at 30 ° C. and 360 rpm for 2 hours. After incubation, 50 ul of kinase-Glo reagent was added to each well including all positive and negative control wells and incubated for 15 minutes at room temperature. The plate is then read by a Luminoskan Ascent instrument and the results are displayed by Ascent Software version 2.6. IC ₅₀ values can then be calculated for each inhibitor tested.

化合物は放射アッセイ；すなわちＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（登録商標）およびＩＣ５０Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（登録商標）アッセイサービス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｕｐｓｔａｔｅ、ダンディー、英国）を使用して試験されることもある。簡潔には、放射性標識ＡＴＰの存在下で組換えＪＡＫ２酵素に対して、化合物を単一の濃度（シングルポイント・スクリーニングの場合）またはいくつかの濃度（ＩＣ_５０決定の場合）で試験される。 Compounds may also be tested using radioassays; ie KinaseProfiler® and IC50Profiler® assay services (Millipore-Upstate, Dundee, UK). Briefly, compounds are tested at a single concentration (for single point screening) or several concentrations (for IC ₅₀ determinations) against recombinant JAK2 enzyme in the presence of radiolabeled ATP.

ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異アイソフォームは最近、腫瘍性形質転換におけるその役割で注目されるようになってきた。それゆえ化合物は、ＪＡＫ２の野生種およびＶ６１７Ｆ変異アイソフォームの両方を含む、ＳｅｌｅｃｔＳｃｒｅｅｎ（登録商標）アッセイサービス（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，カールスバッド、カリフォルニア州）を使用して試験されることもある。これらの酵素は、タンパク質のＪＨ１およびＪＨ２相同領域を両方含み、アミノ酸６１７のみにて異なる。 The JAK2 V617F mutant isoform has recently gained attention for its role in neoplastic transformation. Therefore, compounds may be tested using the SelectScreen® assay service (Invitrogen Corporation, Carlsbad, Calif.), Which includes both JAK2 wild type and V617F mutant isoforms. These enzymes contain both the JH1 and JH2 homology regions of the protein and differ only at amino acid 617.

Ｂ．細胞ベースＪＡＫ２キナーゼ阻害薬アッセイ
細胞培養ベースアッセイを使用して、本発明の化合物が癌細胞増殖および／生存などの１つ以上の細胞活性を阻害する能力を判定することができる。多くの癌細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）および他の供給元から得ることができる。簡潔には、細胞を９６ウェル組織培養処理した不透明白色プレート（ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ、ヴァンター、フィンランド）に、適切な増殖培地（ＡＴＣＣが決定）１００ｕｌ中の、細胞増殖の速度に応じた１ウェル当り６００〜１４０００の細胞を播種する。細胞を次に適切な濃度の薬物に曝露させて、その存在下で９６時間増殖させる。この後に、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．、マディソン、ウィスコンシン州）１００ｕｌを各ウェルに添加する。プレートを次に室温にて２分間震盪して細胞を溶解させ、室温にて１０分間インキュベートして発光シグナルを安定させた。ＰｒｏｍｅｇａのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイ試薬と同様に、この試薬はルシフェラーゼ酵素およびその基質ルシフェリンの両方を含有している。ルシフェラーゼは、細胞溶解物中でＡＴＰにより活性化されて、光を生成する反応であるルシフェリンのオキシルシフェリンへの変換を触媒する。生成される光の量は細胞溶解物中のＡＴＰの量に比例し、ＡＴＰの量自体は細胞数に比例して、細胞増殖の指標を与える。 B. Cell-Based JAK2 Kinase Inhibitor Assay Cell culture-based assays can be used to determine the ability of a compound of the invention to inhibit one or more cellular activities such as cancer cell proliferation and / or survival. Many cancer cell lines can be obtained from the American Type Culture Collection (ATCC) and other sources. Briefly, in an opaque white plate (Thermo Electron, Vantaa, Finland) with cells treated in 96-well tissue culture, in an appropriate growth medium (determined by ATCC) in 100 ul, from 600-well per well depending on the rate of cell growth. Seed 14,000 cells. The cells are then exposed to the appropriate concentration of drug and allowed to grow in the presence for 96 hours. This is followed by the addition of 100 ul Cell-Titer-Glo reagent (Promega, Inc., Madison, Wis.) To each well. The plate was then shaken for 2 minutes at room temperature to lyse the cells and incubated for 10 minutes at room temperature to stabilize the luminescent signal. Similar to Promega's Kinase-Glo assay reagent, this reagent contains both the luciferase enzyme and its substrate luciferin. Luciferase is activated by ATP in cell lysates to catalyze the conversion of luciferin to oxyluciferin, a reaction that produces light. The amount of light produced is proportional to the amount of ATP in the cell lysate, and the amount of ATP itself is proportional to the number of cells and gives an indication of cell proliferation.

細胞培養物中でのＪＡＫ２酵素の特異的阻害を検出するために、ウェスタンブロットアッセイが実施されることもある。このために、潜在的なＪＡＫ２阻害薬によって処理された細胞は、タンパク質の単離および貯蔵に特異的な緩衝液（１％ＮｏｎｉｄｅｔＰ−４０、１２０ｍＭＮａＣｌ、３０ｍＭＴｒｉｓｐＨ７．４、１：１００プロテアーゼ阻害薬カクテルＩＩＩ［Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ／ＥＭＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ］、１：１００ホスファターゼ阻害薬カクテル１［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州］、１：１００ホスファターゼ阻害薬カクテル２［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州］）によって溶解される。これらの溶解物中のタンパク質の独活を次に、ＢＣＡプロテインアッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して定量する。タンパク質の既知量、たとえば５０ｕｇを１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに添加して、還元性、変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥに触れさせる。電気泳動させたタンパク質をニトロセルロース膜に移し、次にＳＴＡＴ５、ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４）、ＳＴＡＴ３、およびｐＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）に対する抗体でプローブする。ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ３はそれぞれチロシン６９４およびチロシン７０５においてＪＡＫ２の基質であるため、処理細胞内のこれらの部位におけるホスホリル化の量を測定することによって、ＪＡＫ２阻害薬の有効性を評価する手段が与えられる。 Western blot assays may be performed to detect specific inhibition of the JAK2 enzyme in cell culture. To this end, cells treated with potential JAK2 inhibitors are treated with a buffer specific for protein isolation and storage (1% Nonidet P-40, 120 mM NaCl, 30 mM Tris pH 7.4, 1: 100. Protease Inhibitor Cocktail III [Calbiochem / EMD Biosciences], 1: 100 Phosphatase Inhibitor Cocktail 1 [Sigma-Aldrich, St. Louis, MO], 1: 100 Phosphatase Inhibitor Cocktail 2 [Sigma-Aldrich, St. Louis, MO]) Is dissolved. The sole activity of the proteins in these lysates is then quantified using the BCA protein assay kit (Pierce). A known amount of protein, eg 50 ug, is added to a 10% SDS-polyacrylamide gel to touch the reducing, denaturing SDS-PAGE. The electrophoresed protein is transferred to a nitrocellulose membrane and then probed with antibodies against STAT5, pSTAT5 (Tyr 694), STAT3, and pSTAT3 (Tyr 705). Since STAT5 and STAT3 are substrates for JAK2 at tyrosine 694 and tyrosine 705, respectively, measuring the amount of phosphorylation at these sites in treated cells provides a means to assess the effectiveness of JAK2 inhibitors.

Ｃ．ＪＡＫ２キナーゼ特異的活性データ
化合物番号１−４、１−７、１−１１および１−１７をＪＡＫ２阻害薬として３００ｎＭ〜１０ｎＭの希釈範囲でスクリーニングして、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイを使用して生存パーセントを決定した。これらの化合物はそれぞれ阻害薬濃度に対する生存％値を与え、そこからＩＣ_５０値を計算した。これらの化合物は多くの癌細胞株で１０ｎＭ未満のＩＣ_５０値を生じた。 C. JAK2 kinase specific activity data Compound numbers 1-4, 1-7, 1-11 and 1-17 were screened as JAK2 inhibitors in a dilution range of 300 nM to 10 nM and survived using the Cell-Titer-Glo assay The percentage was determined. Each of these compounds gave a% survival value relative to the inhibitor concentration, from which IC ₅₀ values were calculated. These compounds produced IC ₅₀ values of less than 10 nM in many cancer cell lines.

ＪＡＫ２キナーゼに対するＩＣ_５０値（ＰｒｏｍｅｇａＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイを使用する）を化合物番号化合物番号１−４、１−７、１−１１および１−１７で測定した。これらの化合物はそれぞれ１ｕＭ未満のＩＣ_５０値を有することがわかった。 IC ₅₀ values for JAK2 kinase (using Promega Kinase-Glo assay) were measured with compound numbers compound numbers 1-4, 1-7, 1-11 and 1-17. Each of these compounds was found to have an IC ₅₀ value of less than 1 uM.

ＩＣ_５０Ｐｒｏｆｉｌｅ（登録商標）データは化合物番号１−４、１−７、１−１１および１−１７で１ｕＭ未満のＩＣ_５０値を示したが、野生種（ＪＡＫ２ＷＴ）およびミュータントＪＡＫ２キナーゼ（ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）に対してＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＳｅｌｅｃｔＳｃｒｅｅｎ（登録商標）を使用してスクリーニングした化合物からのデータもこれら４種類の化合物について１μＭ未満のＩＣ_５０値を示した。 IC ₅₀ Profile® data showed IC ₅₀ values of less than 1 uM for compound numbers 1-4, 1-7, 1-11 and 1-17, but wild species (JAK2 WT) and mutant JAK2 kinase (JAK2) Data from compounds screened using Invitrogen SelectScreen® against V617F) also showed IC ₅₀ values of less than 1 μM for these four compounds.

（実施例６）
代表的な化合物がＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５を調節する
Ａ．化合物１−４がＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５ホスホリル化を阻害する
本例では、化合物１−４がＡＧＳ胃癌細胞株でのＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５のＪＡＫ２依存性ホスホリル化を低下させることが示される。簡潔には、ＡＧＳ細胞を２５ｃｍ^２組織培養フラスコに播種して、各種濃度の化合物１−４の存在下で２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、細胞を溶解して、全タンパク質を単離および定量した。全タンパク質５０μｇを電気泳動させて、ニトロセルロース膜に移し、その時点でＳＴＡＴ３−ホスホ−Ｙ７０５およびＳＴＡＴ５−ホスホ−Ｙ６９４に対する抗体を使用してウェスタンブロット分析を実施した。全ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５との比較も行った。これらの処理細胞中のＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５ホスホリル化の量を定量するために濃度分析を実施した。ホスホ−ＳＴＡＴ３およびホスホＳＴＡＴ５を全ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５と比較して、未処置対照に対するＳＴＡＴホスホリル化の割合を決定した。低マイクロモル濃度（５〜１０ｕＭ）の化合物番号１によって処置した細胞は、ＳＡＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５ホスホリル化レベルの低下を示した。 (Example 6)
Representative compounds modulate STAT3 and STAT5 A. Compound 1-4 Inhibits STAT3 and STAT5 Phosphorylation This example shows that Compound 1-4 reduces JAK2-dependent phosphorylation of STAT3 and STAT5 in AGS gastric cancer cell lines. Briefly, AGS cells were seeded in 25 cm ² tissue culture flasks and incubated for 24 hours in the presence of various concentrations of compound 1-4. Following incubation, cells were lysed and total protein was isolated and quantified. 50 μg of total protein was electrophoresed and transferred to a nitrocellulose membrane, at which time Western blot analysis was performed using antibodies against STAT3-phospho-Y705 and STAT5-phospho-Y694. A comparison with all STAT3 and STAT5 was also made. Concentration analysis was performed to quantify the amount of STAT3 and STAT5 phosphorylation in these treated cells. Phospho-STAT3 and phosphoSTAT5 were compared to total STAT3 and STAT5 to determine the percentage of STAT phosphorylation relative to untreated controls. Cells treated with low micromolar (5-10 uM) Compound No. 1 showed reduced levels of SATAT3 and STAT5 phosphorylation.

Ｂ．化合物１−４はＳＴＡＴ３活性を低下させる
ＳＴＡＴ３がＪＡＫ２によってホスホリル化されるときに、ＳＴＡＴ３はホモダイマーを形成して、核に転位されて、細胞増殖に関与するいくつかの標的遺伝子の転写を生じさせる。ＡＧＳ胃癌細胞を９６ウェルプレートに播種して、化合物１−４５μＭの存在下で１、５、または２４時間インキュベートした。インキュベート後、ＳＴＡＴ３ＨｉｔＫｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して細胞を染色し、ＡｒｒａｙＳｃａｎＶＴｉハイコンテントスクリーニング装置（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）でＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎＢｉｏＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを使用して検出した。核は青色に偽染色され（Ｈｏｅｃｈｓｔ）、ＳＴＡＴ３は緑色に偽染色された（ＦＩＴＣ）。 B. Compound 1-4 reduces STAT3 activity When STAT3 is phosphorylated by JAK2, STAT3 forms a homodimer and is translocated to the nucleus, resulting in transcription of several target genes involved in cell proliferation . AGS gastric cancer cells were seeded in 96 well plates and incubated for 1, 5, or 24 hours in the presence of Compound 1-4 5 μM. After incubation, the cells were stained using STAT3 HitKit (Thermo-Fisher) and detected using an MolecularScan VTi high-content screening device (Thermo-Fisher) using Molecular Translation BioApplication. Nuclei were pseudostained blue (Hoechst) and STAT3 was pseudostained green (FITC).

未処置細胞では、ＳＴＡＴ３は核内にかなりの程度で見出され、ＳＴＡＴ３がホスホリル化され、活性であり、転写を誘発することが示された。しかし、化合物１−４によって処置された細胞では、ＳＴＡＴ３染色は核外部に限定され、ＳＴＡＴ３がホスホリル化されず、不活性であり、ＪＡＫ２の阻害薬から予想された効果であることが示された。核ＳＴＡＴ３は、未処置サンプルの核ＳＴＡＴ３レベルと比較すると、化合物１−４での処理の２４時間後に５０％を超えて減少した。 In untreated cells, STAT3 was found to a significant extent in the nucleus, indicating that STAT3 is phosphorylated, active, and induces transcription. However, in cells treated with compound 1-4, STAT3 staining was restricted to the outside of the nucleus, indicating that STAT3 was not phosphorylated, was inactive, and the effect expected from an inhibitor of JAK2. . Nuclear STAT3 was reduced by more than 50% after 24 hours of treatment with compound 1-4 as compared to nuclear STAT3 levels in untreated samples.

Ｃ．化合物１−４および１−７がＪａｋ２を発現する細胞（Ｖ６１７Ｆ）でのＳＴＡＴ５ホスホリル化を減少させる
本実施例において、化合物１−４、１−７、１−１１および１−１７は、ＪＡＫ２のＶ６１７Ｆミュータントを発現する細胞におけるＳＴＡＴ５のＪＡＫ２依存性ホスホリル化を低減することが示されている。簡潔には、ＨＥＬ細胞を２５ｃｍ^２組織培養フラスコに播種して、各種濃度の化合物１または２の各種濃度の存在下で２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、細胞を溶解して、全タンパク質を単離および定量した。全タンパク質５０μｇを電気泳動して、ニトロセルロース膜に移し、その時点でＳＴＡＴ５−ホスホ−Ｙ６９４に対する抗体を使用してウェスタンブロット分析を実施した。全ＳＴＡＴ５に対する比較を行った。これらの処理細胞中のＳＴＡＴ５ホスホリル化の量を定量するために濃度分析を実施した。このアッセイから、ＥＣ_５０値は、化合物１−４では２９９ｎＭ、化合物１−７では４ｎＭ、化合物１−１１では６５．８ｎＭ、化合物１−１７では２６６ｎＭであると決定された。 C. Compounds 1-4 and 1-7 reduce STAT5 phosphorylation in cells expressing Jak2 (V617F) In this example, compounds 1-4, 1-7, 1-11 and 1-17 are of JAK2 It has been shown to reduce JAK2-dependent phosphorylation of STAT5 in cells expressing the V617F mutant. Briefly, HEL cells were seeded in 25 cm ² tissue culture flasks and incubated for 24 hours in the presence of various concentrations of Compound 1 or 2 at various concentrations. Following incubation, cells were lysed and total protein was isolated and quantified. 50 μg of total protein was electrophoresed and transferred to a nitrocellulose membrane, at which time Western blot analysis was performed using an antibody against STAT5-phospho-Y694. A comparison was made to all STAT5. Concentration analysis was performed to quantify the amount of STAT5 phosphorylation in these treated cells. From this assay, EC ₅₀ values were determined to be 299 nM for compound 1-4, 4 nM for compound 1-7, 65.8 nM for compound 1-11, and 266 nM for compound 1-17.

本明細書で引用したおよび／または出願データシートに挙げた上記の米国特許、米国特許出願公報、米国特許出願、米国以外の外国特許、米国以外の外国特許出願、および非特許文献はすべて、その全体が参照により本明細書に援用されている。 All of the above U.S. patents, U.S. patent application publications, U.S. patent applications, non-US foreign patents, non-US foreign patent applications, and non-patent documents cited herein and / or listed in the application data sheet are The entirety of which is incorporated herein by reference.

上記より、本発明の具体的な実施形態が例証の目的で本明細書で説明されてきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく各種の変更形態が行われうることが認識されるであろう。したがって本発明は、添付請求項によるところを除いて限定されない。 From the foregoing, it will be appreciated that, although specific embodiments of the invention have been described herein for purposes of illustration, various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention. Will. Accordingly, the invention is not limited except as by the appended claims.

Claims

その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む、次の式（Ｉ）：

を有する化合物
（式中：
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；
Ｗ^１およびＷ^２は独立して、直接結合、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ−であり；
Ｘ^１およびＸ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＣＨＦ_２、−ＯＣＨ_３、−ＣＨ_３、−ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、ハロゲンまたは

であり、Ｑは、ＯまたはＮであり、Ｒは存在しないか、またはＲは−Ｃ_１−６アルキルであり、ただし、Ｘ^１またはＸ^２の一方が

であり、Ｙ^１およびＹ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基であり、ただし、Ｙ^１およびＹ^２は、両方とも−Ｈというわけではなく；
ｎは、１、２、または３である）。 The following formula (I), including its stereoisomers and pharmaceutically acceptable salts:

A compound having the formula:
Z is CH or N;
W ¹ and W ² are independently a direct bond, —C (═O) — or —O (CH ₂ ) _n —;
X ¹ and X ² are independently —H, —CF ₃ , —OCF ₃ , —OCHF ₂ , —OCH ₃ , —CH ₃ , —OH, —NO ₂ , —NH _2, halogen or

And Q is O or N, R is absent, or R is —C _1-6 alkyl, provided that ^one of X ¹ or X ² is

And Y ¹ and Y ² are independently a C _1-4 alkyl group substituted with —H, —CN, halogen or —CN, provided that both Y ¹ and Y ² are —H Not;
n is 1, 2 or 3.

ＺがＣＨである、請求項１の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 The compound of claim 1, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein Z is CH.

Ｘ^２がハロゲンである、請求項２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 The compound of claim 2, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein X ² is halogen.

Ｙ^２が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項３の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 Y ² is a -CN, C _1-4 alkyl group substituted with halogen or -CN, compounds of claim 3, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.

Ｙ^１が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項３の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 4. The compound of claim 3, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein Y < ¹ > is a _C1-4 alkyl group substituted with -CN, halogen or -CN.

Ｘ^２が−Ｈである、請求項２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 X ² is -H, the compound according to claim 2, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.

Ｙ^１が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項６の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 7. The compound of claim 6, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein Y < ¹ > is a _C1-4 alkyl group substituted with -CN, halogen or -CN.

Ｙ^２が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項６の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 Y ² is a -CN, C _1-4 alkyl group substituted with halogen or -CN, compounds of claim 6, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.

より選択される請求項２に記載の化合物、あるいはその立体異性体、またはその製薬的に許容される塩。

The compound according to claim 2, which is more selected, or a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

ＺがＮである、請求項１の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 2. The compound of claim 1, wherein Z is N, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.

Ｘ^２が−Ｈである、請求項１１の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 X ² is -H, the compound according to claim 11, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.

Ｙ^２が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項１２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 Y ² is a -CN, _{C 1-4} alkyl group substituted with halogen or -CN, compounds of claim 12, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.

Ｙ^１が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項１２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。 13. The compound of claim 12, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein Y < ¹ > is a _C1-4 alkyl group substituted with -CN, halogen or -CN.

より選択される請求項１１に記載の化合物、あるいはその立体異性体、またはその製薬的に許容される塩。

The compound according to claim 11, or a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

製薬的に許容される賦形剤と組合せて請求項１の化合物を含む組成物。 A composition comprising the compound of claim 1 in combination with a pharmaceutically acceptable excipient.

請求項１６に記載の組成物の治療的有効量をその必要がある対象に投与するステップを含む、ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在疾患を治療する方法。 17. A method of treating a JAK2 protein kinase mediated disease comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the composition of claim 16.

ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在疾患が癌である、請求項１７に記載の方法。 18. The method of claim 17, wherein the JAK2 protein kinase mediated disease is cancer.

癌が結腸癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、膵癌、白血病またはリンパ腫である、請求項１７に記載の方法。 18. The method of claim 17, wherein the cancer is colon cancer, prostate cancer, testicular cancer, lung cancer, uterine cancer, ovarian cancer, gastric cancer, breast cancer, pancreatic cancer, leukemia or lymphoma.