JP2010520222A - ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体およびｊａｋ２キナーゼ阻害剤としてのピリミジン−２，４−ジアミン誘導体の使用 - Google Patents

Abstract

ＪＡＫ２キナーゼ阻害薬としての活性を有するピリミジン−２，４−ジアミン誘導体が、製薬組成物ならびに癌および他のＪＡＫ２キナーゼ関連状態の治療で上記ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体を使用する方法と同様に開示される。本発明は一般に、化合物（本明細書では、ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体とも呼ばれる）、および前記化合物を含む製薬組成物に関し、その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む化合物は一般構造（Ｉ）または（ＩＩ）：（Ｒ^１、Ｗ^１、Ｗ^２、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｙ^１、Ｙ^２およびＺは明細書で定義する通りである。）を有する。

Description

（関連出願への相互参照）
本出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００７年３月１日に出願された米国仮特許出願第６０／８９２，３８５号および２００７年４月１３日に出願された同第６０／９１１，７７６号の利益を主張し、これらの仮出願は、本明細書中でその全体を参考として援用される。

（背景）
（技術分野）
本発明は、一般に、プロテインキナーゼ活性を阻害する化合物、ならびにそれに関連する組成物および方法に関するものである。

（関連技術の説明）
ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）は、哺乳動物中に４種類（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２）存在して、インターロイキン、インターフェロンを含む細胞外サイトカインはもちろんのこと、多くのホルモンからの信号伝達に不可欠であるキナーゼのファミリである（Ａｒｉｎｇｅｒ，Ｍら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ、１９９９．６４（２４）：ｐ．２１７３−８６；Ｂｒｉｓｃｏｅ，Ｊ．ら、Ｐｈｉｌｏｓ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ、１９９６．３５１（１３３６）：ｐ．１６７−７１；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．，Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９５．７（４）：ｐ．２４７−５４；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．，Ｐｈｉｌｏｓ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ、１９９６．３５１（１３３６）：ｐ．１５９−６６；Ｆｉｒｍｂａｃｈ−Ｋｒａｆｔ，Ｉ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９０．５（９）：ｐ．１３２９−３６； Ｈａｒｐｕｒ，Ａ．Ｇ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９２．７（７）：ｐ．１３４７−５３；Ｒａｎｅ，Ｓ．Ｇ．ａｎｄ Ｅ．Ｐ．Ｒｅｄｄｙ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９４．９（８）：ｐ．２４１５−２３； Ｗｉｌｋｓ，Ａ．Ｆ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１９９１．２００：ｐ．５３３−４６）。これらの非受容体型チロシンキナーゼは、各種のサイトカイン受容体と結合して、ＳＴＡＴ（シグナル伝達性転写因子）分子をホスホリル化することによって、シグナルを細胞外リガンド−受容体結合から細胞質へ変換するように作用して、次にＳＴＡＴは核に進入して、成長と増殖に関与する各種の標的遺伝子の転写を指示する（Ｂｒｉｓｃｏｅ，Ｊ．ら；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．（１９９５）；Ｉｈｌｅ，Ｊ．Ｎ．（１９９６）；Ｒａｗｌｉｎｇｓ，Ｊ．Ｓ．、Ｋ．Ｍ．Ｒｏｓｌｅｒ ａｎｄ Ｄ．Ａ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ、２００４．１１７（Ｐｔ ８）：ｐ．１２８１−３．）。細胞生存でのこれらのキナーゼの重要性は、ＪＡＫの消失が動物モデルでの免疫不全および生存不能を伴うことが多いという事実によって明らかとなっている（Ａｒｉｎｇｅｒ，Ｍ．ら）。酵素のＪＡＫファミリは、カルボキシ末端タンパク質チロシンキナーゼドメイン（ＪＨ１）と、ＪＨ１ドメインの活性を制御すると考えられている隣接キナーゼ様ドメイン（ＪＨ２）とを含む、いくつかのＪＡＫ相同（ＪＨ）ドメインを特徴としている（Ｈａｒｐｕｒ，Ａ．Ｇ．ら）。４種のＪＡＫアイソフォームは、あるサイトカイン受容体と特異的に結合されて、下流遺伝子のサブセットを活性化することによって、異なるシグナルを変換する。たとえばＪＡＫ２は、インターロイキン−３（Ｓｉｌｖｅｎｎｏｉｎｅｎ，Ｏ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ、１９９３．９０（１８）：ｐ．８４２９−３３）、エリスロポエチン（Ｗｉｔｔｈｕｈｎ，Ｂ．Ａ．ら、Ｃｅｌｌ、１９９３．７４（２）：ｐ．２２７−３６）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｓ．Ｅ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ、１９９４．９１（８）：ｐ．２９８５−８）、および成長ホルモン（Ａｒｇｅｔｓｉｎｇｅｒ，Ｌ．Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ、１９９３．７４（２）：ｐ．２３７−４４）に特異的なサイトカイン受容体と結合する。

酵素のＪＡＫファミリは、各種の血液および免疫障害の興味深い一連の標的となっている；ＪＡＫ２は特に、増殖に関与する下流エフェクタ遺伝子のその活性化のために、腫瘍性疾患、特に白血病およびリンパ腫（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）はもちろんのこと、固形腫瘍（非特許文献５）、ならびに他の骨髄増殖性疾患、たとえば真性多血球血症（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）の実現可能な標的として現在研究されている。ＪＡＫ２は、それがサイトカイン受容体へのリガンド結合をもはや必要とせず、代わりに構成的活性化の状態であるように、血液悪性腫瘍において変異することも公知である。これはＪＡＫ２遺伝子とＥＴＶ６、ＢＣＲまたはＰＣＭ１タンパク質をコードする遺伝子との間の転座によって起こることが可能であり（非特許文献１０；非特許文献１１）、慢性骨髄性白血病で見られるＢＣＲ−ＡＢＬタンパク質に類似した腫瘍形成融合タンパク質を生成する。ＪＡＫ２の過剰活性化も、ＪＡＫ２配列自体の突然変異によって起こることが可能である；たとえば、骨髄増殖性疾患の真性多血球血症は、アミノ酸６１７でバリン−フェニルアラニン置換を引き起こす点突然変異に関連している（ＪＡＫ２ Ｖ６１７Ｆ）（Ｗａｌｚ，Ｃ．ら）。腫瘍性および骨髄増殖性障害とのその関連性ならびに腫瘍性および骨髄増殖性障害における調節解除のため、ヒト悪性腫瘍の治療用の小分子ＪＡＫ２阻害物質は大いに興味深い。

多数のヒト悪性腫瘍におけるその関与に基づく、ＪＡＫ２キナーゼタンパク質が介在および／または関連する癌および他の状態の治療のための特異的および選択的阻害物質の設計への要求がある。本発明は、これらの要求を実現して、他の関連する利点を与える。

Ｂｅｎｅｋｌｉ，Ｍ．ら、Ｂｌｏｏｄ、２００３．１０１（８）：ｐ．２９４０−５４ Ｐｅｅｔｅｒｓ，Ｐ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７．９０（７）：ｐ．２５３５−４０ Ｒｅｉｔｅｒ，Ａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、２００５．６５（７）：ｐ．２６６２−７ Ｔａｋｅｍｏｔｏ，Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ、１９９７．９４（２５）：ｐ．１３８９７−９０２ Ｗａｌｚ，Ｃ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２００６．２８１（２６）：ｐ．１８１７７−８３ Ｂａｘｔｅｒ，Ｅ．Ｊ．ら、Ｌａｎｃｅｔ、２００５．３６５（９４６４）：ｐ．１０５４−６１ Ｊａｍｅｓ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２００５．４３４（７０３７）：ｐ．１１４４−８ Ｌｅｖｉｎｅ，Ｒ．Ｌ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２００５．７（４）：ｐ．３８７−９７ Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｋ．およびＲ．Ａ．Ｖａｎ Ｅｔｔｅｎ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２００５．７（４）：ｐ．２９１−３ Ｐｅｅｔｅｒｓ，Ｐ．ら；Ｒｅｉｔｅｒ，Ａ．ら；Ｇｒｉｅｓｉｎｇｅｒ，Ｆ．ら、Ｇｅｎｅｓ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ Ｃａｎｃｅｒ、２００５．４４（３）：ｐ．３２９−３３ Ｌａｃｒｏｎｉｑｕｅ，Ｖ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９７．２７８（５３４１）：ｐ．１３０９−１２

本発明は一般に、化合物（本明細書では、ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体とも呼ばれる）、および前記化合物を含む製薬組成物に関し、その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む化合物は次の一般構造（Ｉ）または（ＩＩ）：

を有し、Ｒ^１、Ｗ^１、Ｗ^２、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｙ^１、Ｙ^２およびＺは以下で定義する通りである。

これらの化合物は、広範囲の治療用途にわたって有用性を有し、ＪＡＫ２プロテインキナーゼが（少なくとも一部は）介在および／または関連する癌などの疾患を治療するために使用されることがある。したがって、本発明の一態様において、本明細書に記載する化合物は、その必要がある対象への投与のための製薬的に許容される組成物として調合される。

別の態様において、本発明は、癌などのＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在疾患を治療または予防する方法を提供し、方法は、このような治療が必要な患者に本明細書に記載する化合物または前記化合物を含む製薬的に許容される組成物の治療的有効量を投与するステップを含む。

別の態様は、生体サンプルにおけるＪＡＫ２プロテインキナーゼ活性を阻害することに関し、方法は、生体サンプルに本明細書に記載する化合物、または前記化合物を含む製薬的に許容される組成物を接触させるステップを含む。

別の態様は、患者のＪＡＫ２プロテインキナーゼ活性を阻害する方法に関し、方法は、患者に本明細書に記載する化合物または前記化合物を含む製薬的に許容される組成物を投与するステップを含む。

本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細な説明を参照すれば明らかになるであろう。そのために、ある特許および他の文書が本明細書で引用されて、本発明の各種の態様をより詳細に記述する。これらの文書はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される。

本発明の一般的な態様により、ＪＡＫ２プロテインキナーゼとして有用な化合物はもちろんのこと、それに関連する組成物および方法も提供される。その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む、本発明の化合物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）：

で示す構造を有し、式中：
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；
Ｗ^１およびＷ^２は独立して、直接結合、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ−であり；
Ｒ^１は、−Ｈ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＣＨＦ_２、−ＯＣＨ_３、−ＣＨ_３、−ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２またはハロゲンであり；
Ｘ^１およびＸ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＣＨＦ_２、−ＯＣＨ_３、−ＣＨ_３、−ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、ハロゲンまたは

であり、Ｑは、ＯまたはＮであり、Ｒは存在しないか、またはＲは−Ｃ_１−６アルキルである。ただし、Ｘ^１またはＸ^２の一方が

である；
Ｙ^１およびＹ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である。ただし、Ｙ^１およびＹ^２は、両方とも−Ｈというわけではない；
ｎは、１、２、または３である。

別途指摘しない限り、明細書および特許請求の範囲で使用した以下の用語は、下で議論する意味を有する：
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード、通例はフルオロまたはクロロを意味する。

「Ｃ_１−６アルキル」は、１〜６個の炭素原子の飽和直鎖または分枝、飽和または不飽和、環式または非環式炭化水素ラジカルを指し、これに対して「Ｃ_１−４アルキル」は同じ意味を有するが、１〜４個の炭素原子を含有する。飽和直鎖または分枝Ｃ_１−４アルキルおよびＣ_１−６アルキルの代表的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられ、Ｃ_１−６アルキルの場合には、さらにｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、および対応する分枝鎖が挙げられる。代表的な飽和環式シクロアルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、−ＣＨ_２シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられる。不飽和環式アルキルとしては、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどが挙げられる。不飽和アルキルは、隣接炭素原子間に少なくとも１個の２重または３重結合を含有する（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれる）。代表的な直鎖および分枝アルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニルなどが挙げられるが、代表的な直鎖および分枝アルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどが挙げられる。

上記の構造（Ｉ）および（ＩＩ）のさらに詳細な態様において、ＺはＣＨであり、その立体異性体および製薬的許容される塩を含む化合物は、下記の構造（ＩＩＩ）または（ＩＶ）：

によって表される。

上記の構造（Ｉ）および（ＩＩ）のさらに詳細な態様において、ＺはＮであり、その立体異性体および製薬的許容される塩を含む化合物は、下記の構造（Ｖ）または（ＶＩ）：

によって表される。

構造（ＩＩＩ）および（Ｖ）のさらに詳細な実施形態において、Ｘ^１はピペラジニルであり、Ｒはメチルであり、Ｗ^１およびＷ^２はどちらも直接結合であり、化合物は構造（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）によってそれぞれ表される：

構造（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）のさらに詳細な実施形態において、Ｘ^２は−Ｆであり、化合物は構造（ＩＸ）および（Ｘ）によってそれぞれ表される：

構造（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）の他のさらに詳細な実施形態において、Ｘ^２は−Ｈであり、化合物は構造（ＸＩ）および（ＸＩＩ）によってそれぞれ表される：

構造（ＩＩＩ）の他の詳細な実施形態において、Ｘ^２はピペラジニルであり、Ｒはメチルであり、Ｗ^２は−Ｏ（ＣＨ_２）_３−であり、Ｗ^１は直接結合であり、化合物は構造（ＸＩＩＩ）によって表される：

構造（ＸＩＩＩ）のさらなる詳細な実施形態において、Ｘ^１は−ＯＣＨ_３である。

構造（ＩＩＩ）の他の詳細な実施形態において、Ｘ^１はピペラジニルであり、Ｗ^１は−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｗ^２は直接結合であり、化合物は構造（ＸＩＶ）によって表される：

構造（ＸＩＶ）のさらなる詳細な実施形態において、Ｘ^２は−Ｈであり、Ｒはメチルであるか、またはＲはシクロヘキシルである。

構造（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、および（ＸＩＶ）の詳細な実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２はハロゲンであり、さらに詳細にはＹ^１はクロロであり、Ｙ^２はフルオロである。

構造（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）の詳細な実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２は、−ＣＮおよびハロゲンであり、さらに詳細にはＹ^１は−ＣＮであり、Ｙ^２はフッ素である。

構造（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、および（ＸＩＶ）の詳細な実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２は、−Ｈおよび−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基であり、さらに詳細にはＹ^１は−ＣＨ_２ＣＮであり、Ｙ^２はＨである。

構造（ＩＩ）、（ＩＶ）および（ＶＩ）の詳細な実施形態において、Ｒ^１は−Ｆであり、 Ｒ^１は−ＣＦ_３である。

同じ分子式を有するが、その原子の性質または結合の順位あるいは空間におけるその原子の配置が異なる化合物は、「異性体」と呼ばれる。空間におけるその原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。相互の鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、重ね合わすことができない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物がたとえば不斉中心を有して、４個の異なる基に結合されているとき、１対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは、その不斉中心の絶対配置によって特徴付けることが可能であり、ＣａｈｎおよびＰｒｅｌｏｇのＲ−およびＳ−順位則（Ｃａｈｎ，Ｒ．，Ｉｎｇｏｌｄ，Ｃ．、およびＰｒｅｌｏｇ，Ｖ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．７８：４１３−４７、１９６６；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．５：３８５−４１５、５１１、１９６６）によって、または分子が偏光面を回転させる方法によって説明され、右旋性または左旋性（すなわち、それぞれ（＋）または（−）−異性体）と呼ばれる。キラル化合物は、個々のエナンチオマーまたはその混合物のどちらかとして存在する可能性がある。エナンチオマーを等しい割合で含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。

本発明の化合物は、１個以上の不斉中心を所有しうる；したがって、このような化合物は個別の（Ｒ）立体異性体または（Ｓ）立体異性体として、あるいはその混合物として生成されうる。別途指摘しない限り、明細書および特許請求の範囲における特定の化合物の説明またはネーミングは、両方の個々のエナンチオマーおよび混合物、そのラセミ体または非ラセミ体を含むものとする。立体化学の決定および立体異性体の分離の方法は、当分野で周知である（Ｃｈ．４ ｏｆ ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＯＲＧＡＮＩＣ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，４^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９９２の議論を参照）。

本発明の化合物は、互変異性および構造異性の現象を示すことがある。本発明は、ＪＡＫ２−２キナーゼ活性を調節する能力を持ついずれの互変異性または構造異性形およびその混合物も含み、いずれかの１つの互変異性または構造異性形に限定されない。

本発明の化合物は、ヒトなどの生物の体内で酵素によって代謝されて、プロテインキナーゼの活性を調節可能な代謝産物を産生することが考えられる。このような代謝産物は本発明の範囲内である。

本発明の化合物またはその製薬的に許容される塩は、ヒトを含む患者にそれ自体として投与することが可能であるか、あるいは上述の物質が適切な担体または（複数の）賦形剤と混合された製薬組成物として投与することが可能である。薬物の調合および投与の技法はたとえばＲＥＭＩＮＧＴＯＮ‘Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、イーストン、ペンシルベニア州、最新版で見ることができる。

「製薬組成物」は、本明細書に記載する化合物の１つ以上の混合物、またはその製薬的に許容される塩と、製薬的に許容される賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。製薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を促進することである。

「製薬的に許容される賦形剤」は、化合物の投与をさらに促進するために製薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種の糖およびデンプンの類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが挙げられる。

「製薬的に許容される塩」は、親化合物の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。このような塩としては：（１）親化合物の遊離塩基と、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸との、または酢酸、シュウ酸、（Ｄ）−または（Ｌ）−リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸との、好ましくは塩酸または（Ｌ）−リンゴ酸との反応によって得られる酸付加塩；あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、たとえばアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアルミニウムイオンで置換されるとき；あるいはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基を配位するときのどちらかで形成される塩が挙げられるであろう。

「治療的有効量」は、治療されている障害の症状の１つ以上をある程度まで軽減するであろう、投与されている化合物の量を指す。癌の治療に関連して、治療的有効量は、（１）腫瘍のサイズを縮小する；（２）腫瘍転移を抑制する；（３）腫瘍成長を抑制する；および／または（４）癌に関連する１つ以上の症状を軽減する効果を有する量を指す。
「ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在状態」または「疾患」という用語は、本明細書で使用するように、ＪＡＫ２プロテインキナーゼが役割を果たすことが公知である、いずれの疾患または他の有害な状態も意味する。「ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在状態」または「疾患」という用語は、以下でより詳細に議論されるような癌を含む、ＪＡＫ２プロテインキナーゼ阻害物質による治療によって緩和される疾患または状態も意味する。

本明細書で使用するように、「投与する」または「投与」は、プロテインキナーゼ関連疾患の予防または治療の目的のための、生物への本発明の化合物またはその製薬的に許容される塩の、あるいは本発明の化合物またはその製薬的に許容される塩を含有する製薬組成物の送達を指す。

適切な投与経路としては、限定されないが、経口、経直腸、経粘膜または腸投与あるいは筋肉内、皮下、髄内、くも膜下腔、直接脳室内、静脈内、硝子体内、腹腔内、鼻内、または眼内注射が挙げられる。ある実施形態において、投与経路は経口および静脈内である。

あるいは、化合物を全身方式でなく局所方式で、たとえばしばしばデポーまたは持続放出製剤での固形腫瘍中への化合物の直接注射によって投与することがある。

さらに化合物を標的化送達システムで、たとえば腫瘍特異的抗体によってコートしたリポソームで投与することがある。このようにして、リポソームは腫瘍に標的化されて、腫瘍によって選択的に摂取される可能性がある。

本発明の製薬組成物は、当分野で周知の工程によって、たとえば従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥工程によって製造されることがある。

本発明による使用のための製薬組成物は、賦形剤および製薬的に使用可能である調製物への活性化合物の処理を促進する助剤を含む、１つ以上の生理学的に許容される担体を使用する、いずれの従来方式によっても調合されるであろう。適正な調合は、選択された投与経路によって変わる。

注射の場合、本発明の化合物は、水性溶液中で、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩緩衝液などの生理学的に許容される緩衝液中で調合されることがある。経粘膜投与では、浸透されるバリアに適した浸透剤が調合に使用される。このような浸透剤は当分野で一般に公知である。

経口投与では、化合物は、活性化合物を当分野で周知の製薬的に許容される担体と組合せることによって調合可能である。このような担体は、患者による経口摂取のために、本発明の化合物が錠剤、丸剤、菱形錠、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリ剤、懸濁剤などとして調合されるようにする。経口使用のための製薬調合は、固体賦形剤を使用して、場合により得られた混合物を粉砕し、所望ならば、適切な助剤を添加した後に顆粒の混合物を処理して錠剤または糖衣錠コアを得て作製することができる。有用な賦形剤は特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの充填剤、たとえばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプンおよびジャガイモデンプンなどのセルロース調製物、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニル−ピロリドン（ＰＶＰ）などの他の物質である。所望ならば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸などの崩壊剤が添加されることもある。アルギン酸ナトリウムなどの塩も使用されることがある。

糖衣錠コアは、適切なコーティング剤が施されている。この目的で、場合によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または有機混合物を含有することがある濃縮糖溶液が使用されるであろう。識別のために、または活性化合物用量の各種の組合せを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠コーティング剤に染料または顔料が添加されることがある。

経口的に使用可能な製薬組成物としては、ゼラチンより成る押込み式カプセル剤はもちろんのこと、ゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤より成る軟質の密封カプセル剤も挙げられる。押込み式カプセル剤は、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、場合により安定剤と混合された活性成分を含有することができる。軟カプセル剤では、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解または懸濁されることがある。これらの調合物には、安定剤も添加されることがある。また使用されるであろう製薬組成物には、硬ゼラチンカプセルがある。カプセル剤または丸剤は、活性化合物を光から保護するために褐色ガラス瓶またはプラスチック瓶に包装されることがある。活性化合物カプセル剤調合物を含有する容器は、好ましくは制御された室温（１５〜３０℃）で貯蔵する。

吸入による投与の場合、本発明による使用のための化合物は、多くの既存の技法によりエアゾールスプレーの形で好都合に送達されることがある。たとえばエアゾールスプレーは、加圧パックまたはネブライザおよび適切な噴霧剤、たとえば限定されないが、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラ−フルオロエタンまたは二酸化炭素を利用することがある。加圧エアゾールの場合、投薬単位は、計量された量を送達するための弁を設けることによって制御されることがある。吸入器または吹入器で使用するための、化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末ベースとの粉末ミックスを含有する、たとえばゼラチンのカプセルまたはカートリッジを処方することができる。あるいは、化合物は噴霧剤を含まないエアゾール形で送達されることがある。

化合物は、たとえばボーラス注入または持続注入による非経口投与用に調合されることもある。注射用調合物は、添加された保存料を含む、たとえばアンプルまたは複数回用量容器での単位投薬形で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤または乳剤などの形を取ることが可能であり、懸濁化剤、安定剤および／または分散化剤などの調合材料を含有することができる。

非経口投与用の製薬組成物としては、活性化合物の、限定されないが、塩などの水溶形の水溶液が挙げられる。さらに、活性化合物の懸濁剤は親油性ビヒクルで調製されることがある。適切な親油性ビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルおよびトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームなどの物質が挙げられる。水性注射用懸濁剤は、懸濁剤の粘度を上昇させる物質、たとえばカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含有することがある。場合により、懸濁剤は、適切な安定剤および／または化合物の溶解性を上昇させて高度に濃縮された溶液が調製できるようにする薬剤も含有することがある。

あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル、たとえば滅菌性の、発熱物質を含まない水によって構成するための粉末形である場合もある。

化合物は、たとえばココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤ベースを使用して、坐剤または留置浣腸剤などの直腸組成物として調合されることもある。

上述した調合物に加えて、化合物はデポー調製物としても調合されることがある。このような長期作用調合物は、（たとえば皮下または筋肉内への）植え込みによって、または筋肉内注入によって投与することができる。本発明の化合物は、この投与経路のために、適切なポリマーまたは疎水性物質を用いて（たとえば薬理学的に許容される油を用いた乳剤で）、イオン交換樹脂を用いて、または限定されないが、難溶性塩などの難溶性誘導体として調合されることがある。

本発明の化合物の製薬的担体の非制限的な例は、ＶＰＤ共溶媒系などのベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマーおよび水相を含む共溶媒系である。ＶＰＤは、無水エタノール中で規定の体積とした、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００の溶液である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は、５％デキストロース水溶液で１：１に希釈したＶＰＤより成る。この共溶媒系は化合物を十分に溶解させ、それ自体は全身投与時に低い毒性を生じる。もちろん、このような溶媒系の割合は、その溶解性および毒性特徴を損なうことなく相当変化する可能性がある。さらに、共溶媒成分の同一性も変化することがある：たとえば、他の低毒性非極性界面活性剤は、ポリソルベート８０の代わりに使用されることがあり、ポリエチレングリコールの分画サイズは変化することがあり、他の生体適合性ポリマー、たとえばポリビニルピロリドンがポリエチレングリコールに代わることがあり、他の糖または多糖類がデキストロースに代わることがある。

あるいは、製薬化合物の他の送達系が利用される可能性がある。リポソームおよび乳剤は、疎水性薬の送達ビヒクルまたは担体の周知の例である。加えて、ジメチルスルホキシドなどのある有機溶媒も利用されることがあるが、より高い毒性と引き換えになることが多い。

さらに、化合物は、治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスなどの持続放出システムを使用して送達されることがある。各種の持続放出物質が確立されており、当業者に周知である。持続放出カプセル剤は、その化学的性質に応じて、化合物を数週間〜最大１００日間にわたって放出する。

本明細書の製薬組成物は、適切な固体またはゲル相担体あるいは賦形剤を含むことがある。このような担体または賦形剤の例としては、これに限定されるわけではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。

本発明のＪＡＫ２プロテインキナーゼ調節化合物の多くは生理学的に許容される塩として提供されることがあり、そこで化合物は負または正に帯電した種を形成する可能性がある。化合物が正に帯電した部分を形成する塩の例としては、限定されないが、塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、およびコハク酸塩が挙げられる。本発明の化合物が負に帯電した種を形成する塩としては、限定されないが、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が挙げられる。

本発明での使用に適切な製薬組成物としては、所期の目的、たとえばＪＡＫ２プロテインキナーゼ活性の調節ならびに／あるいはＪＡＫ２プロテインキナーゼ関連障害の治療または予防を達成するのに十分な量で活性成分が含有されている組成物が挙げられる。

さらに詳細には、治療的有効量とは、疾患の症状を予防、緩和または改善するのに、あるいは治療される対象の生存を延長するのに有効な化合物の量を意味する。治療的有効量の決定は、特に本明細書で提供する詳細な開示を考慮して、当業者の能力の十分な範囲内にある。本発明の方法で使用するいずれの化合物でも、治療的有効量または用量は、最初に細胞培養アッセイから概算することができる。次に、細胞培養で決定されたようなＩＣ_５０（すなわちプロテインキナーゼ活性の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するために、動物モデルで使用するための投薬量を調合することが可能である。このような情報は次に、ヒトでの有用な用量をより正確に決定するために使用できる。

本明細書で記載する化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物の標準製薬的手順によって、たとえば対象化合物のＩＣ_５０およびＬＤ_５０を決定することによって決定可能である。これらの細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータは、ヒトで使用するための一連の投薬量を調合するのに使用可能である。投薬量は、採用した投薬形および利用する投薬経路に応じて変化することがある。正確な調合、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して、個々の医師によって選択可能である。（たとえばＧＯＯＤＭＡＮ ＡＮＤ ＧＩＬＭＡＮ‘Ｓ ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈ．３，９^ｔｈ ｅｄ．，Ｅｄ．ｂｙ Ｈａｒｄｍａｎ，Ｊ．，ａｎｄ Ｌｉｍｂａｒｄ，Ｌ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ニューヨーク、１９９６，ｐ．４６を参照）。

投薬量および間隔は、ＪＡＫ２キナーゼ調節効果を維持するのに十分である活性種の血漿レベルを与えるために個別に調整される可能性がある。これらの血漿レベルは、最小有効濃度（ＭＥＣ）と呼ばれる。ＭＥＣは各化合物で変わるであろうが、インビトロデータから概算可能であり、たとえばキナーゼの５０〜９０％阻害を達成するのに必要な濃度は、本明細書に記載するアッセイを使用して確認されるであろう。ＭＥＣを達成するのに必要な投薬量は、個人の特徴および投与経路によって変わるであろう。ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用して血漿濃度を決定できる。

投薬間隔もＭＥＣ値を使用して決定可能である。化合物は、期間の１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％にわたって血漿レベルをＭＥＣより上に維持するレジメンを使用して投与されるべきである。

現在、本発明の化合物の治療的有効量は１日当り約２．５ｍｇ／ｍ^２〜１５００ｍｇ／ｍ^２におよぶ可能性がある。さらなる例証的な量は、０．２〜１０００ｍｇ／ｑｉｄ、２〜５００ｍｇ／ｑｉｄ、および２０〜２５０ｍｇ／ｑｉｄにおよぶ。

局所投与または選択的取込みの場合、薬物の有効局所濃度は血漿濃度と関連付けられないことがあり、正しい投薬量および間隔を決定するために、当分野で公知の他の手順が利用される可能性がある。

投与された組成物の量はもちろん、治療されている対象、病気の重症度、投与方式、処方医師の判断などによって変わるであろう。

組成物は所望ならば、活性成分を含有する１回以上の単位投薬形を含有することができる、ＦＤＡ承認キットなどのパックまたはディスペンサ器具で提供されることがある。パックはたとえば、金属またはプラスチックフォイル、たとえばプリスターパックを含むことがある。パックまたはディスペンサ器具には、投与の説明書が付属していることがある。パックまたはディスペンサには、医薬品の製造、使用または販売を規制する行政機関によって規定された形の、容器に対応した通知も添付されていることがあり、通知は組成物の、あるいはヒトまたは動物への投与の形の機関による承認を示すものである。このような通知はたとえば、米国食品医薬品局によって処方薬について承認されたラベリングであるか、または承認製品の挿入物であるだろう。適合性の製薬用担体と調合された本発明の化合物を含む組成物も、調製され、適切な容器に入れられ、表示された状態の治療に関してラベル貼付されることがある。

上述のように、本発明の化合物および組成物は、ＪＡＫ２プロテインキナーゼが介在する幅広い疾患および状態に有用性が見出されるであろう。このような疾患としては、一例として、そして限定されないが、血液癌（たとえば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ））、肺癌、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）、燕麦細胞癌、骨癌、膵癌、皮膚癌、***性皮膚線維肉腫、頭頸部癌、皮膚または眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肛門部の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、婦人科腫瘍（たとえば子宮肉腫、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌または外陰癌）、ホジキン病、肝細胞癌、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌（たとえば甲状腺、膵臓、副甲状腺または副腎の癌）、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、精巣癌、前立腺癌（特にホルモン抵抗性）、慢性または急性白血病、小児固形腫瘍、過好酸球増加症、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌（たとえば腎細胞癌、腎盂癌）、小児悪性腫瘍、中枢神経系の新生物（たとえば原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸索腫瘍、髄芽腫、脳幹グリオーマまたは下垂体腺腫）、バレット食道（前癌症候群）、腫瘍性皮膚疾患、乾癬、菌状息肉腫、および良性前立腺肥大などの癌、糖尿病、糖尿病網膜症、網膜虚血、および網膜血管新生などの糖尿病関連疾患、肝硬変、血管新生、アテローム性動脈硬化などの心血管疾患、自己免疫疾患などの免疫疾患および腎臓疾患が挙げられる。

本発明の化合物は、１種類以上の他の化学治療剤と組合せで使用することが可能である。本発明の化合物の投薬量は、何らかの薬物−薬物反応について調節されることがある。一実施形態において、化学療法剤は、***抑制剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞サイクル阻害薬、酵素、カンプトサール（イリノテカン）などのトポイソメラーゼ阻害薬、生物学的応答調節物質、抗ホルモン、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９およびＣＯＸ−２阻害薬などの血管新生阻害剤、抗アンドロゲン、白金配位錯体（シスプラチンなど）、ヒドロキシ尿素などの置換尿素；プロカルバジンなどのメチルヒドラジン誘導体；副腎皮質抑制剤、たとえばミトタン、アミノグルテチミド、副腎皮質ステロイド（たとえばプレドニゾン）、プロゲスチン（たとえばカプロン酸ヒドロキシプロゲステロン）、エストロゲン（たとえばジエチルスチルベストロール）などのホルモンおよびホルモン拮抗剤、タモキシフェンなどの抗エストロゲン、アンドロゲン、たとえばプロピオン酸テストステロン、およびアナストロゾールなどのアロマターゼ阻害剤、ならびにアロマシン（エキセメスタン）から成る群より選択される。

組合せて上記の方法が実施可能であるアルキル化剤の例としては、限定されないが、単独の、またはさらにロイコボリンと組合されたフルオロウラシル（５−ＦＵ）；ＵＦＴ、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビンなどの他のピリミジン類似物質、スルホン酸アルキル、たとえばブスルファン（慢性顆粒球性白血病の治療で使用される）、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、たとえばベンゾデパ、カルボコン、メツレデパおよびウレデパ；エチレンイミンおよびメチルメラミン、たとえばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロールメラミン；ならびにナイトロジェンマスタード、たとえばクロランブシル（慢性リンパ球性白血病、原発性マクログロブリン血症および非ホジキンリンパ腫の治療で使用される）、シクロホスファミド（ホジキン病、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療で使用される）、エストラムスチン、イホスファミド、ノベンブリチン、プレドニムスチンおよびウラシルマスタード（原発性血小板血症、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病および卵巣癌の治療で使用される）；ならびにトリアジン、たとえばダカルバジン（軟組織肉腫の治療で使用される）が挙げられる。

組合せて上記の方法が実施可能である代謝拮抗化学療法剤の例としては、限定されないが、葉酸類似物質、たとえばメトトレキサート（急性リンパ球性白血病、絨毛癌、菌状息肉腫、乳癌、頭頸部癌および骨原性肉腫の治療で使用される）およびプテロプテリン；ならびに急性顆粒球性白血病、急性リンパ球性白血病および慢性顆粒球性白血病に治療で用途が見出されるメルカプトプリンおよびチオグアニンなどのプリン類似物質がある。

組合せて上記の方法が実施可能である天然物ベースの化学療法剤の例としては、限定されないが、ビンカアルカロイド、たとえばビンブラスチン（乳癌および精巣癌の治療で使用される）、ビンクリスチンおよびビンデシン；エピポドフィロトキシン、たとえばエトポシドおよびテニポシド（どちらも精巣癌およびカポジ肉腫の治療で有用である）；抗生化学療法剤、たとえばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン（胃癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、膀胱癌および膵癌を治療するために使用される）、ダクチノマイシン、テモゾロミド、プリカマイシン、ブレオマイシン（皮膚癌、食道癌および尿生殖路癌の治療で使用される）；およびＬ−アスパラギナーゼなどの酵素化学療法剤が挙げられる。

有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例としては、バイオックス、セレブレックス（セレコキシブ）、バルデコキシブ、パラコキシブ、ロフェコキシブ、およびＣｏｘ １８９が挙げられる。

有用なマトリクスメタロプロテイナーゼ阻害薬の例は、ＷＯ ９６／３３１７２（１９９６年１０月２４日に公開）、ＷＯ ９６／２７５８３（１９９６年３月７日公開）、欧州特許出願公開第９７３０４９７１．１号（１９９７年７月８日出願）、欧州特許出願公開第９９３０８６１７．２号（１９９９年１０月２９日出願）、ＷＯ ９８／０７６９７（１９９８年２月２６日公開）、ＷＯ ９８／０３５１６（１９９８年１月２９日公開）、ＷＯ ９８／３４９１８（１９９８年８月１３日公開）、ＷＯ ９８／３４９１５（１９９８年８月１３日公開）、ＷＯ ９８／３３７６８（１９９８年８月６日公開）、ＷＯ ９８／３０５６６（１９９８年７月１６日公開）、欧州特許第６０６，０４６号（１９９４年７月１３日公開）、欧州特許第９３１，７８８号（１９９９年７月２８日公開）、ＷＯ ９０／０５７１９（１９９０年５月３１日公開）、ＷＯ ９９／５２９１０（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ ９９／５２８８９（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ ９９／２９６６７（１９９９年６月１７日公開）、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＩＢ９８／０１１１３（１９９８年７月２１日出願）、欧州特許出願公開第９９３０２２３２．１号（１９９９年３月２５日出願）、英国特許第９９１２９６１．１号（１９９９年６月３日出願）、米国特許第５，８６３，９４９号（１９９９年１月２６日発行）、米国特許第５，８６１，５１０号（１９９９年１月１９日発行）、および欧州特許第７８０，３８６号（１９９７年６月２５日公開）に記載されており、そのすべては参照によりその全体が本明細書に援用されている。好ましいＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９阻害薬は、ＭＭＰ−１を阻害する活性がほとんどまたは全くない阻害薬である。残りのマトリクスメタロプロテイナーゼ（すなわちＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、およびＭＭＰ−１３）と比較して、ＭＭＰ−２および／またはＭＭＰ−９を選択的に阻害するものがより好ましい。

本発明で有用なＮＭＰ阻害剤の一部の具体的な例としては、ＡＧ−３３４０、ＲＯ ３２−３５５５、ＲＳ １３−０８３０、ならびに：３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロペンチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−エキソ−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；（２Ｒ，３Ｒ）１−［４−（２−クロロ−４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド；４−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロブチル）−アミノ］−プロピオン酸；４−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミド］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；（Ｒ）３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；（２Ｒ，３Ｒ）１−［４−（４−フルオロ−２−メチルベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−［［（４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル）−（１−ヒドロキシカルバモイル−１−メチル−エチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（４−ヒドロキシカルバモイル−テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−アミノ］−プロピオン酸；３−エキソ−３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−エンド−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；および（Ｒ）３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミドより選択される化合物；ならびにこれらの化合物の製薬的に許容される塩および溶媒和物である。

他の抗血管新生剤、他のＣＯＸ−ＩＩ阻害薬および他のＮＭＰ阻害薬も本発明で使用可能である。

本発明の化合物は、他のシグナル伝達阻害剤、たとえばＥＧＦＲ抗体、ＥＧＦ抗体、およびＥＧＦＲ阻害薬である分子などの、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）応答を阻害することができる薬剤；ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）阻害薬；ならびにハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）などの、ｅｒｂＢ２受容体に結合する有機分子または抗体などのｅｒｂＢ２受容体阻害薬と共に使用することが可能である。ＥＧＦＲ阻害薬はたとえばＷＯ ９５／１９９７０（１９９５年７月２７日公開）、ＷＯ ９８／１４４５１（１９９８年４月９日公開）、ＷＯ ９８／０２４３４（１９９８年１月２２日公開）、および米国特許第５，７４７，４９８号（１９９８年５月５日発行）に記載されており、このような物質は本明細書に記載されているように本発明で使用することが可能である。

ＥＧＦＲ阻害薬としては、これに限定されるわけではないが、モノクローナル抗体Ｃ２２５および抗ＥＧＦＲ ２２Ｍａｂ（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，ニューヨーク、ニューヨーク州）、化合物ＺＤ−１８３９（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＩＢＸ−１３８２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ．，アナンデール、ニュージャージー州）、ならびにＯＬＸ−１０３（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，ホワイトハウスステーション、ニュージャージー州）、ならびにＥＧＦ融合毒素（Ｓｅｒａｇｅｎ Ｉｎｃ．，ホプキントン、マサチューセッツ州）が挙げられる。

これらおよび他のＥＧＦＲ阻害剤が本発明で使用できる。ＶＥＧＦ阻害剤、たとえばＳＵ−５４１６およびＳＵ−６６６８（Ｓｕｇｅｎ Ｉｎｃ．，サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）も本発明の化合物と組合せることが可能である。ＶＥＧＦ阻害剤はたとえば、ＷＯ ０１／６０８１４ Ａ３（２００１年８月２３日公開）、ＷＯ ９９／２４４４０（１９９９年５月２０日公開）、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＩＢ９９／００７９７（１９９９年５月３日出願）、ＷＯ ９５／２１６１３（１９９５年８月１７日公開）、ＷＯ ９９／６１４２２（１９９９年１２月２日公開）、米国特許第５，８３４，５０４号（１９９８年１１月１０日発行）、ＷＯ ０１／６０８１４、ＷＯ ９８／５０３５６（１９９８年１１月１２日公開）、米国特許第５，８８３，１１３号（１９９９年３月１６日発行）、米国特許第５，８８６，０２０号（１９９９年３月２３日発行）、米国特許第５，７９２，７８３号（１９９８年８月１１日発行）、ＷＯ ９９／１０３４９（１９９９年３月４日公開）、ＷＯ ９７／３２８５６（１９９７年９月１２日公開）、ＷＯ ９７／２２５９６（１９９７年６月２６日公開）、ＷＯ ９８／５４０９３（１９９８年１２月３日公開）、ＷＯ ９８／０２４３８（１９９８年１月２２日）、ＷＯ ９９／１６７５５（１９９９年４月８日公開）、およびＷＯ ９８／０２４３７（１９９８年１月２２日公開）に記載されており、そのすべては参照によりその全体が本明細書に援用されている。本発明で有用なある具体的なＶＥＧＦ阻害剤の他の例は、ＩＭ８６２（Ｃｙｔｒａｎ Ｉｎｃ．，カークランド、ワシントン州）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．の抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体；およびリボザイム（ボールダー、コロラド州）およびカイロン（エメリビル、カリフォルニア州）からの合成リボザイムのアンギオザイムである。これらおよび他のＶＥＧＦ阻害剤は、本明細書に記載されているように本発明で使用することが可能である。ＧＷ−２８２９７４（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ ｐｌｃ）、ならびにモノクローナル抗体ＡＲ−２０９（Ａｒｏｎｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，ウッドランズ、テキサス州）および２Ｂ−１（カイロン）などのｐＥｒｂＢ２受容体阻害剤、たとえば参照によりその全体が本明細書にすべて援用されているＷＯ ９８／０２４３４（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ ９９／３５１４６（１９９９年７月１５日公開）、ＷＯ ９９／３５１３２（１９９９年７月１５日公開）、ＷＯ ９８／０２４３７（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ ９７／１３７６０（１９９７年４月１７日公開）、ＷＯ ９５／１９９７０（１９９５年７月２７日公開）、米国特許第５，５８７，４５８号（１９９６年１２月２４日発行）、および米国特許第５，８７７，３０５号（１９９９年３月２日発行）に示されているものはさらに、本発明の化合物と組合せることが可能である。本明細書で有用なｅｒｂＢ２受容体阻害剤も、参照により本明細書にその全体が援用されている米国特許第６，２８４，７６４号（２００１年９月４日発行）に記載されている。ＰＣＴ出願、米国特許および米国仮出願に記載されたｅｒｂＢ２受容体阻害剤化合物および物質はもちろんのこと、ｅｒｂＢ２受容体を阻害する他の化合物および物質も、本発明に従って本発明の化合物と共に使用可能である。

本発明の化合物は、これに限定されるわけではないが、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性リンパ球抗原４）などの抗腫瘍免疫応答を向上させることが可能な薬剤、およびＣＴＬＡ４を遮断する他の薬剤；ならびに他のファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤、たとえば米国特許第６，２５８，８２４ Ｂ１号の「背景技術」の部分に引用された参考文献に記載されているファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害薬などの抗増殖剤を含む、癌を治療するのに有用な他の薬剤と共に使用することも可能である。

上記の方法は放射線療法と組合せて実施することも可能であり、放射線療法と組合される本発明の化合物の量は、上記の疾患を治療するのに有効である。

放射線療法を投与する技法は当分野で公知であり、これらの技法は本明細書に記載する併用療法で使用することが可能である。本併用療法での本発明の化合物の投与は、本明細書に記載するように決定することが可能である。

本発明は、以下の非制限的な実施例を考慮するとさらに理解されるであろう。

（実施例１）
計算に基づくリードの同定
テンプレートとしてのＰａｎ−Ｊａｎｕｓキナーゼ阻害剤（ＰＤＢ ＩＤ：２Ｂ７Ａ）との複合体におけるＪＡＫ２キナーゼの結晶構造に基づいて、仮想スクリーニング計算を実施した。約２００種の所内の、ならびに仮想ライブラリからの約２３０万種の重点化されたおよび／または多様な薬物様化合物のコンピュータスクリーニングによって、Ｏｔａｖａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ｗｗｗ．Ｏｔａｖａｃｈｅｍｉｃａｌｓ．ｃｏｍ）より購入したライブラリから候補化合物を選択した。所内からは３つの化合物が低分子量範囲で活性であることが見出され（＜４２ｎＭ〜１．２５μＭ）、Ｏｔａｖａ化合物の１つが直接ＪＡＫ２キナーゼ結合アッセイで＜１０μＭ活性であることが見いだされた。特異的ＪＡＫ２キナーゼ活性に重要な分子量領域の同定で最も活性な化合物が、ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体に属することが見出された。下の表１に示すように、このようなスクリーニングから選択された化合物は、結合様式、ＱｉｋＰｒｏｐ（溶解性、浸透性）Ｌｉｐｉｎｓｋｉ様基準および所望のファルマコフォア基の存在に基づいてフィルタリングした。

（実施例２）
ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体の一般的合成
本発明の化合物は、次の一般的な反応スキームによってと同様に、通常の合成手順を使用して当業者によって作製されるであろう。

一般反応スキーム：

簡潔には、２，４−ジクロロピリミジン（１）を適切に置換されたアニリン（２）と反応させて、中間体（３）を得る。次に中間体（３）をさらに適切に置換されたアミン（４）と反応させて、構造（Ｉ）の化合物を得る。あるいは、中間体（３）を適切に置換されたアミン（５）とさらに反応させて、構造（ＩＩ）の化合物を得る。特に記載がなければ、すべての溶媒および試薬はＡｌｄｒｉｃｈまたはＶＷＲ ｃｈｅｍｉｃａｌｓから入手可能であり、供給されたまま使用されるか、または必要に応じて標準の実験室的方法によって精製されることがある。

（実施例３）
ピリミジン−２，４−ジアミン誘導体の合成
Ａ．２−クロロ−４−置換ピリミジン（３）を調製するための一般手順

イソプロパノール（ＩＰＡ）３０ｍＬ中に２，４−ジクロロピリミジン（１）（１０ｍｍｏｌ）、アニリン（２）（１０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１．５ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物を一晩還流させた。溶媒を除去して、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎシステム（１０％〜７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）を使用して残渣を精製し、所望の２−クロロ−４−置換ピリミジン（３）を得た。

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）

２−プロパノール（２０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（１）（１ｇ、６．７１ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、３−クロロ−４−フルオロアニリン（６）（０．９７７ｇ、６．７１ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３．４７ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）の反応混合物を１８時間還流させた。溶媒を蒸発させて、７０％ヘキサン〜純ジクロロメタン（ＤＣＭ）および２０％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（４０ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐ Ｆｌａｓｈカラム、ランタイム５０分間）によって精製し、化合物（７）（０．８ｇ）を得た。（ＴＬＣ，Ｒｆ＝０．６，ＥｔＯＡｃ）。白色固体、収率４６．２％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１０．１８（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２５８．０（１００％），２５９．９（７８％），２６１．９（１８％）。

５−（２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）−２−フルオロベンゾニトリル（９）

２−プロパノール（５０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（１）（１ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）、５−アミノ−２−フルオロベンゾニトリル（８）（０．９１４ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ １ｍＬの反応混合物を一晩還流させた。溶媒を蒸発させて、粗物質をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇ、ＤＣＭ約１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製し、化合物（９）３１８ｍｇ（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．１、６％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。白色固体、収率１９％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．１５（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝９．２３Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２４８．９（１００％），２５０．９（３３％）。

２−（３−アミノフェニル）アセトニトリル（１１）

３−ニトロフェニルアセトニトリル（１０）を濃ＨＣｌ（１５ｍｌ）およびエタノール（１５ｍｌ）の混合物に溶解させた。ＳｎＣｌ_２二水和物のエタノール（２５ｍｌ）による溶液を氷冷しながら徐々に滴下して、混合物を室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）Ｒｆ＝０．１によって８０％完了が示された。溶媒を蒸発させた後に、残渣をＮａＯＨで処理してｐＨ９とした。ＥｔＯＡｃによる抽出およびｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇ、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １０％〜５０％、７０分間）によって、化合物（１１）１．１８２ｇを黄色油として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ，ＣＤＣｌ_３）７．１２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｍ，３Ｈ），３．７２（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），３．６４（ｓ，２Ｈ）。

２−（３−（２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（１２）

２−プロパノール（４０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（１）（１．１２７ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）、２−（３−アミノフェニルアセトニトリル（１１）（１ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）１５ｍｍｏｌの反応混合物を２日間還流させた。溶媒を蒸発させて、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇ、２回、ＣＨＣｌ_３）によって精製し、化合物（１２）９３２ｍｇを薄緑色結晶として得た。収量：５０％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．１６（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｍ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ）。

Ｂ．２，４−二置換ピリミジン（Ｉ）を調製する一般手順

イソプロパノール７ｍＬ中の２−クロロ−４−置換ピリミジン（３）（０．２５ｍｍｏｌ）、アミン（４）またはアミン（５）（Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｂｉｏｎｅｔ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ｂｌｏｃｋｓ、英国）（０．２５ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．５ｍｍｏｌ）の反応混合物を一晩還流させた。反応混合物が室温まで冷却された後に、ＮａＯＨ（０．６ｍｍｏｌ）を添加した。溶媒を除去して、残渣をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（４ｇ、ＤＣＭ約２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製し、下に示すように構造（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を得た。

Ｎ４−（３−クロロフェニル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−１）

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロフェニル）ピリミジン−４−アミン（１３）（１００ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液に４−（トリフルオロメチル）アニリン（１４）（６７．１ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）を添加し、続いて触媒トリフルオロ酢酸を添加して、還流温度にて一晩撹拌した。溶媒を蒸発させて、ＤＣＭおよび５％ ＭｅＯＨ溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐ Ｆｌａｓｈカラム、１８ｍｌ／分のフローでランタイム５０分間）によって残渣を精製し、化合物１−１（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．４、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．０８（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．８（ｓ，２Ｈ），３．３９（ｍ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．１８Ｈｚ，１Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ） ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３６５．０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−フルオロフェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−２）

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液に４−フルオロアニリン（１５）（２５．８ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を添加し、続いて触媒トリフルオロ酢酸を添加して、還流温度にて一晩撹拌した。反応混合物にトリエチルアミンを添加し、続いて１時間撹拌すると、ＴＬＣによって反応完了が示された。溶媒を蒸発させて、ヘキサン７０％およびＤＣＭ溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐ Ｆｌａｓｈカラム、１８ｍｌ／分のフローでランタイム５０分間）によって残渣を精製し、化合物１−２（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．３５、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．０１（ｍ，２Ｈ），７．６４（ｍ，２Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝８．２３Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｍ，２Ｈ），６．２２（ｍ，１Ｈ），ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３３．０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−モルホリノフェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−３）

２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液に４−モルホリノアニリン（１６）（４１．４ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を添加し、続いて触媒トリフルオロ酢酸を添加して、還流温度にて一晩撹拌した。ＤＣＭ中１０％ ＭｅＯＨの溶媒系を使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐ Ｆｌａｓｈカラム、２６ｍＬ／分のフローでランタイム４０分間）によって粗残渣を精製して、化合物１−３（ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．４５、１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を得た。ＨＰＬＣ＝９４％。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．０３（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．５４Ｈｚ，２Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ，２Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｍ，４Ｈ），３．１０（ｓ，４Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４００．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−４）

１−ブタノール中の２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）ピリミジン−４−アミン（７）（１００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（１７）（７４．１ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ、Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国より購入）、ＤＩＰＥＡ（２ｍＬ、１１．４８ｍｍｏｌ）、およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を一晩還流させた。ＴＬＣ（６％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１００％ ＥｔＯＡｃ）によって、リンモリブデン酸染色で紫色である化合物１−４ ７ｍｇを得た。収量：４８％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）９．４５（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｍ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｍ，３Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．１０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｍ，４Ｈ），２．４３（ｍ，４Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４１３．３（１００％），４１５．２（３３％）。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−メトキシ−３−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−５）

ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍＬ）中の２−メトキシ−５−ニトロフェノール（１８）（２ｇ、１１．８２ｍｍｏｌ）、３−クロロフェニルブロミド（２．２３４ｇ、２３．６５ｍｍｏｌ）の混合物にＫ_２ＣＯ_３（３．２７ｇ）を添加して、得られた反応混合物を８０℃まで３時間加熱した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）によって反応が完了したことが示された。反応混合物を次に水（１５０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）で分配した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３で洗浄して、次にＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過した。溶液を濃縮して、１９を薄黄色固体（３．９ｇ）として得た。１９（１．５ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）に１，４−ジオキサン２０ｍＬおよびヨウ化ナトリウム（１．３７３ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）中のＮ−メチルピペラジンを添加して、得られた反応混合物を１００℃まで３０時間加熱した。オレンジ色混合物を濃縮して、１，４−ジオキサンを処理し、次に酢酸エチル５０ｍＬで希釈した。０．５時間撹拌した後、濾過して、塩を除去した。有機層をＮａＯＨ溶液（２０ｍＬ）および水（３×２０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ_４での乾燥および濃縮によって、化合物２０をオレンジ色油（１．００ｇ）として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．９０（ｄｄ，Ｊ１＝２．３Ｈｚ，Ｊ２＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），２．５８（ｍ，１０Ｈ），２．４３（ｂｒ−ｓ，３Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ）。

化合物２０は、Ｐａｒｒ震盪器内のイソプロパノール中１０％ Ｐｄ／Ｃの存在下で水素添加を５時間受けさせた。ＴＬＣ（１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。セライトによる濾過および濃縮によって、化合物２１（１ｇ）を褐色油として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）６．６８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２０（ｄｄ，Ｊ１＝２．４Ｈｚ，Ｊ２＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｂｒ−ｍ，１０Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｍ，２Ｈ）。

ＴＦＡ（１ｍＬ）および２−プロパノール（１０ｍＬ）中に２１（１００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）および７（１０８ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物を一晩還流させた。ＴＬＣ（６％ ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって７の完全消費が示された。反応混合物を濃縮して、ＭｅＯＨ中に再溶解させた。ＮａＯＨ添加によってＴＦＡを反応停止させた。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−５ ２１９ｍｇを褐色泡として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）９．４９（ｓ，１Ｈ），９．０１（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｍ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｓ，８Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），１．８３（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ，５０１．２（１００％），５０３．３（３３％）。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−６）

２−プロパノール（１０ｍＬ）中の７（１００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）および５−アミノ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（２２）（６２．８ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）の混合物にＴＥＡを添加して、反応混合物を２４時間還流させた。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．３）によって反応完了が示された。混合物を濃縮してイソプロパノールを除去して、メタノールに再溶解させた。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。さらなる濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １５％〜９０％、５０分間）によって、化合物１−６ １０６ｍｇを固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，３Ｈ），６．４９（ｓ，１Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ，３８４．０（１００％），３８６．０（３３％）
２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−７）

化合物１２（１００ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）および１７（７８ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ、Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）を２−プロパノール１０ｍＬに溶解させて、ＴＥＡ（１ｍＬ）を添加した。得られた反応物を一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加すると、白色沈殿が生成した。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（０〜２５％ ＮｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−７（１８６ｍｇ）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲによって、おそらく多少のアニリンが内部にあることが示された。収量：１１４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８８（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．８６Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｍ，３Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．２７（ｍ，４Ｈ），２．９６（ｍ，４Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ，４００．１（１００％）。

２−（３−（２−（４−メトキシ−３−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−８）

２−プロパノール（１０ｍＬ）中の１２（１００ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）および２１（１１４ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）の混合物にＴＦＡを添加して、これを一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。ＮａＯＨの添加によって白色沈殿が生じた。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（０〜２５％ ＮｅＯＨ：ＤＣＭ）によって化合物１−８（２３６ｍｇ）を固体泡として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：７．９０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｍ，３Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），２．７１（ｂｒ−ｍ，２Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ，４８８．２（１００％）。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−９）

２−プロパノール（７ｍＬ）中の７（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）および１４（３７．５ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の混合物にＴＦＡを添加して、これを一晩還流させた。ＴＬＣ（６％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１５）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。粗生成物の濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、０〜１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、５０分間）によって、化合物１−９（７０ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄｄ，Ｊ_１＝２．７Ｈｚ，Ｊ_２＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ，３８３．１（１００％），３８５．１（３３％）。

２−フルオロ−５−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）ベンゾニトリル（化合物１−１０）

化合物９（６０ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）および１７（４６．２ｍｇ、０．４２１ｍｍｏｌ、Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）を２−プロパノール１０ｍＬに溶解させて、触媒ＴＥＡを添加した。得られた混合物を一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ順相ＲｅｄｉＳｅｐ Ｆｌａｓｈカラム、２６ｍＬ／分のフローでランタイム４０分間、０〜２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、化合物１−１０（８２ｍｇ、８４％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．３５（ｍ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｍ，４Ｈ），２．７０（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４０４．１（Ｍ＋Ｈ）
２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１１）

２−プロパノール（７ｍＬ）中の１２（６０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）および３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（２３）（５１．３ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫより購入）の混合物および触媒ＴＦＡを一晩還流させた。ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．２）によって反応完了が示された。ＮａＯＨの添加によって白色沈殿が生じた。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、０〜２０％ ＮｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１１（１１５ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ_１＝２．４Ｈｚ，Ｊ_２＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｍ，２Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．１６（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．９２（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４１８．１（Ｍ＋Ｈ）。

２−（３−（２−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１２）

２−プロパノール（７ｍＬ）中の１２（６０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）および６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−アミン（２４）（４７．１ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、Ｂｉｏｎｅｔ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋｓ、ＵＫより購入）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加してＴＦＡを中和した。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、０〜２０％ ＮｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１２（９７ｍｇ）を固体として得た。収量：９８％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．３５（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄｄ，Ｊ_１＝２．７Ｈｚ，Ｊ_２＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．５ＨＺ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．６１（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．８７（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ）
Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−１３）

２−プロパノール（７ｍＬ）中の７（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）および２４（４４．７ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって反応完了が示された。ＮａＯＨを添加して、混合物を濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製を実施し（４ｇ、１００％ ＤＣＭ約２５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）、化合物１−１３（８６．７ｍｇ）を白色固体として得た。収率：９０％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．２３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ１＝９．２Ｈｚ，Ｊ２＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．９０（ｍ，４Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４１４．１（Ｍ＋Ｈ）。

Ｎ４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−イル）フェニル）ピリミジン−２，４−ジアミン（化合物１−１４）

２−プロパノール（７ｍＬ）中の７（６０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）および２３（４４．７ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた後に、ＴＬＣ（２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．１）によって反応完了が示された。室温での３日間の後、多少の白色固体（１０３ｍｇ）が形成された。濾過および^１Ｈ ＮＭＲによって、生成物がＴＦＡ塩であることが示された。ＮａＯＨを添加して、混合物を濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（４ｇ、ＤＣＭ約２５％ ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１−１４（８８．８ｍｇ）を白色固体として得た。収率は８９％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９０（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｍ，２Ｈ），７，２７（ｄｄ，Ｊ１＝９．６Ｈｚ，Ｊ２＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．７５（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３１．０（Ｍ＋Ｈ）。

（４−（４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（化合物１−１５）

４−ニトロベンゾイルクロライド（２５）（１ｇ、５．３９ｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（５０ｍＬ）溶液を１−メチルピペラジン（２６）によって１０℃にて１０分間処理した。反応混合物をさらに１時間撹拌して、続いてＴＥＡ（１．４９ｍＬ、２当量）を添加して、さらに３０分間撹拌した。反応混合物を氷冷水（１５０ｍＬ）で処理して、ＥｔＯＡｃ（４×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させて、濃縮し、（４−メチルピペラジン−１−イル）（４−ニトロフェニル）メタノン２７ １．１ｇ（収率８２％）を黄色固体として得た。ＴＬＣ：１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ，Ｒｆ＝０．６．^１ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．２８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），３．４６（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２５０．０（Ｍ＋Ｈ）
エタノール２０ｍＬ中に（４−メチルピペラジン−１−イル）（４−ニトロフェニル）メタノン（２７）（２００ｍｇ、０．８０２ｍｍｏｌ）および１０％ Ｐｄ／Ｃ（６０ｍｇ）を含有する混合物をＨ_２（６０ｐｓｉ）下で４時間震盪した。反応完了および濾過の後に、濃縮により２８（８３．８ｍｇ、収率４８％）を薄黄色油として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ，ＣＤ３ＯＤ）７．１９（ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），６．６８（ｄｄ，Ｊ１＝２．７Ｈｚ，Ｊ２＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４４（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２２０．０（Ｍ＋Ｈ）。

２−プロパノール（５ｍＬ）中の７（５０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）および２８（３３ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを１５０℃にて１時間マイクロ波処理した。ＴＬＣによって反応完了が示された。ＨＰＬＣは考えられる主な新しいスポットを示した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１５ ３２ｍｇを半固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９８（ｄ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｍ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．５４，２Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ，Ｊ２＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４８（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４４１．２（Ｍ＋Ｈ）。

２−（３−（２−（４−（４−シクロヘキシルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１６）

２−プロパノール（５ｍＬ）中の１２（５０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、（４−アミノフェニル）（４−シクロヘキシルピペラジノメタノン（２９）（５８．７ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＮａＯＨを添加すると、ＴＬＣ（１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって多少の開始物質とさらなる新しいスポットが示された。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１６（９５ｍｇ）を褐色固体として得た。^１ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｍ，３Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，３Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２４（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．６９９ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．７５（ｂｒ−ｓ，４Ｈ），２．４８（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），１．９５（ｂｒ−ｓ，２Ｈ），１．８３（ｂｒ−ｓ，２Ｈ），１．６５（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．２９（ｂｒ−ｓ，４Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９６．１（Ｍ＋Ｈ）。

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１７）

２−プロパノール（５ｍＬ）中の１２（５０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）および２８（４４．８ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを２４時間還流させた。ＮａＯＨを添加すると、ＴＬＣ（１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって多少の開始物質とさらなる新しい化合物スポットが示された。濃縮およびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、ＤＣＭ約１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって化合物１−１７（５２ｍｇ）を黄色固体として得た。^１ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）９．５３（ｓ，１Ｈ），９．４０（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｍ，３Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｂｒ−ｍ，４Ｈ），２．４２（ｂｒ−ｍ，４Ｈ），２．２８（ｂｒ−ｓ，３Ｈ）ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２８．２（Ｍ＋Ｈ）。

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル（化合物１−１８）

２−プロパノール（５ｍＬ）中の１２（５０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）および４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）アニリン（２９）（４６．６ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）の混合物および触媒ＴＦＡを１３０℃にて２．５時間マイクロ波処理した。ＴＬＣによって新たなスポットの存在が確認された。反応混合物はＮａＯＨの添加によって反応停止させ、濃縮して、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ精製（４ｇ、Ｃ−１８、５％〜１００％水／ＣＨ_３ＣＮ）によって精製し、画分をＨＰＬＣによって確認した。純画分を合せ、濃縮して、化合物１−１８ ４．５ｍｇを薄白色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ−（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３−ＣＤ_３ＯＤ）７．６２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｓ，２Ｈ），７．０２（ｍ，２Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｓ，１Ｈ），３．３５（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｓ，２Ｈ），２．６１（ｓ，４Ｈ），２．２９（ｓ，４Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６８．３６（Ｍ＋Ｈ）。

（実施例４）
代表的な化合物の塩形
化合物１−１１および１−１８の代表的な塩形（すなわちＨＣｌ、硫酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩形）を以下の手順に従って調製して、下の表２に示した。

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルジヒドロクロライド（化合物１−１１ ２ＨＣｌ）
化合物１−１１（２．０６ｇ）を２−プロパノール１２５ｍＬに懸濁させた。濃ＨＣｌ（２．４７ｍＬ、６当量）を添加した。透明溶液が得られるまで混合物を加熱した。溶液を室温に冷却してから、溶液を−２０℃の冷凍庫に移した。３日後、アルゴン下での濾過およびエーテルでの洗浄により、化合物１−１１のビス−ＨＣｌ塩を黄色粉末１．８２３ｇとして得た、収率７０％。

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル硫酸塩（化合物１−１１硫酸塩）
化合物１−１１ ３５０ｍｇをアセトン３５ｍＬに溶解させて、Ｈ_２ＳＯ_４ ０．１２２ｍＬ（２．５当量）を添加した。沈殿がすぐに形成された。混合物を室温にて一晩貯蔵した。濾過によって黄色吸湿性粉末３９４ｍｇを得た。固体をエタノール中に１時間懸濁させて、濾過により白色粉末３５０ｍｇを得た、収率６８％（吸湿性ではない）。^１Ｈ−ＮＭＲ ３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．９４（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｍ，３Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝１２．４５Ｈｚ，４Ｈ），３．４２（ｍ，４Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），^１９Ｆ−ＮＭＲ（３００Ｍｈｚ，ＣＤ_３ＯＤ）−１８６．９９Ｈｚ．元素分析、計算値：Ｃ，４５．０２；Ｈ，４．６０；Ｎ，１５．９８；Ｓ，１０．４５，実測値：Ｃ，４５．６８；Ｈ，４．３０；Ｎ，１５．９６；Ｓ，９．３９。

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルメタンスルホナート（化合物１−１１メシル酸塩）
化合物１−１１（４００ｍｇ）のＩＰＡ ４０ｍＬ溶液にメチルスルホン酸（０．１８６ｍＬ、３当量）を添加した。透明溶液が徐々に濁り、混合物を−２０℃で貯蔵した。残渣をＮ_２下で濾過して、真空下で乾燥させ、白色粉末４００ｍｇを得た、収率６８％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８３（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｍ，３Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝１１．２３Ｈｚ，４Ｈ），３．３７（ｍ，４Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，３Ｈ），２．７１（ｓ，６Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ ４９．２５，Ｈ ５．２９，Ｎ １６．０８，Ｓ １０．５２，実測値：Ｃ ４８．７５，Ｈ ５．５０，Ｎ １５．１３，Ｓ １０．５１。

２−（３−（２−（３−フルオロ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルベンゼンスルホナート（化合物１−１１ベシル酸塩）
化合物１−１１（４００ｍｇ）のエタノール３０ｍＬ溶液にベンゼンスルホン酸（４５５ｍｇ、３当量）を添加した。透明溶液が形成された後に、白色沈殿がすぐに現れた。残渣をＮ_２下で一晩濾過して、真空下で乾燥させ、白色固体５２０ｍｇを得た、収率７４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ−ＣＤＣｌ_３）７．９３（ｍ，３Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），７．４９Ｍ，５Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝９．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３９（ｓ，４Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ ５７．２８，Ｈ ４．９４，Ｎ １３．３６，Ｓ ８．７４，実測値：Ｃ ５７．０６，Ｈ ４．８６，Ｎ １３．２０，Ｓ ８．６６。

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルヒドロクロライド（化合物１−１８ ＨＣｌ）
化合物１−１８（５００ｍｇ）は、ＩＰＡ ４０ｍＬに完全に溶解するのが困難であった。しかしＨＣｌ（０．４４６ｍＬ、５当量）の添加および加熱の後に、透明黄色溶液を得た。溶液を室温まで冷却して、−２０℃の冷凍庫に２日間移した。濾過および真空下での乾燥によって、粉末５７０ｍｇを得た、収率８４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８７（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，２Ｈ），７．６０（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｍ，３Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｍ，４Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．３５Ｈｚ，６Ｈ，ＩＰＡ）．元素分析、計算値：Ｃ，５３．１７；Ｈ，６．０６；Ｎ，１５．５０；Ｃｌ，１１．２１，実測値：Ｃ，５３．２７；Ｈ，６．３７；Ｎ，１４．８４；Ｃｌ，１０．８１。

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリル硫酸塩（化合物１−１８硫酸塩）
化合物１−１８（４００ｍｇ）のＩＰＡ ５０ｍＬ溶液にＨ_２ＳＯ_４（０．１３７ｍＬ、３当量）を添加した。沈殿がすぐに形成された。Ｎ_２下での週末にわたっての濾過によって、黄色粉末４０７ｍｇを得た、収率６８％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８９（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６０（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，４Ｈ），３，２１（ｓ，３Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ，４４．１５；Ｈ，４．６５；Ｎ，１４．１３；Ｓ，９．２４，実測値：Ｃ，４４．２０；Ｈ，４．６５；Ｎ，１３．９８；Ｓ，９．１６。

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルメタンスルホナート（化合物１−１８メシル酸塩）
化合物１−１８（４００ｍｇ）のアセトン２０ｍＬ溶液（ほぼ透明）にメチルスルホン酸（０．１３９ｍＬ、２．５当量）を添加した。溶液は濁った。混合物を週末にわたって−２０℃で貯蔵した。アセトンを注ぎ出した。固体を洗浄して、真空下で乾燥させ、黄色粉末４２９ｍｇを得た、収率７４％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，４Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．７２（ｓ，６Ｈ）．元素分析、計算値：Ｃ，４６．０８；Ｈ，５．０６；Ｎ，１４．４７；Ｓ，９．４６，実測値：Ｃ，４６．０８；Ｈ，４．９３； Ｎ，１４．１６；Ｓ，１０．２５。

２−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）フェニル）アセトニトリルベンゼンスルホナート（化合物１−１８ベシル酸塩）
化合物１−１８（４００ｍｇ）のＩＰＡ ３０ｍＬ高温懸濁液にベンゼンスルホン酸（４０６ｍｇ、３当量）を添加した。これを室温で冷却して、−２０℃で一晩貯蔵した。Ｎ_２下での濾過によって、黄色粉末５１６ｍｇを得た、収率７２％。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）７．８１（ｍ，７Ｈ），７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４３（ｍ，７Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｄ，２Ｈ），３．２３（ｍ，５Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ）， ^１９Ｆ−ＮＭＲ（３００Ｍｚ，ＣＤ_３ＯＤ）−１２６．５８．元素分析、計算値：Ｃ，５１．６０；Ｈ，５．０５；Ｎ，１１．７０；Ｓ，７．６５，実測値：Ｃ，５１．５７；Ｈ，４．９６；Ｎ，１０．９８；Ｓ，７．６１。

（実施例５）
代表的な化合物の活性
Ａ．ＪＡＫ２キナーゼ阻害アッセイ
ＪＡＫ２キナーゼ活性を決定することができる１つの例証的な方式は、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，マディソン、ウィスコンシン州）などの、インビトロＪＡＫ２キナーゼ反応後に溶液中に残存するＡＴＰの量を定量することによる。キナーゼ反応後に溶液中に残存するＡＴＰの量は、ルシフェラーゼがルシフェリンを触媒してオキシルシフェリンおよび光子１個とするための基質として作用する。それゆえＬｕｍｉｎｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐ．，ミルフォード、マサチューセッツ州）によって読取られた発光シグナルは、キナーゼ反応後に存在するＡＴＰの量と相関し、キナーゼ活性の量と逆相関している。本アッセイは、ＪＡＫ２キナーゼに対するキナーゼ阻害薬のＩＣ_５０値を決定するのに十分である。これらのアッセイは、白色平底９６ウェルプレートにて体積５０ｕｌで２回分準備する。阻害薬を１×キナーゼ緩衝液、６ｕＭ ＡＴＰ、６２．５ｕＭ ＪＡＫ２特異的基質、活性ＪＡＫ２酵素３０ｎｇ、および水の溶液に、マイクロモル〜ナノモル濃度におよぶ連続希釈で添加する。本溶液を３０℃にて３６０ｒｐｍで２時間インキュベートする。インキュベート後、キナーゼ−Ｇｌｏ試薬５０ｕｌをすべての正および負の対照ウェルを含む各ウェルに添加して、室温で１５分間インキュベートした。プレートを次にＬｕｍｉｎｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ装置によって読取り、結果をＡｓｃｅｎｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン２．６によって表示する。次に試験した各阻害薬についてＩＣ_５０値を計算することができる。

化合物は放射アッセイ；すなわちＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（登録商標）およびＩＣ５０Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（登録商標）アッセイサービス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｕｐｓｔａｔｅ、ダンディー、英国）を使用して試験されることもある。簡潔には、放射性標識ＡＴＰの存在下で組換えＪＡＫ２酵素に対して、化合物を単一の濃度（シングルポイント・スクリーニングの場合）またはいくつかの濃度（ＩＣ_５０決定の場合）で試験される。

ＪＡＫ２ Ｖ６１７Ｆ変異アイソフォームは最近、腫瘍性形質転換におけるその役割で注目されるようになってきた。それゆえ化合物は、ＪＡＫ２の野生種およびＶ６１７Ｆ変異アイソフォームの両方を含む、ＳｅｌｅｃｔＳｃｒｅｅｎ（登録商標）アッセイサービス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，カールスバッド、カリフォルニア州）を使用して試験されることもある。これらの酵素は、タンパク質のＪＨ１およびＪＨ２相同領域を両方含み、アミノ酸６１７のみにて異なる。

Ｂ．細胞ベースＪＡＫ２キナーゼ阻害薬アッセイ
細胞培養ベースアッセイを使用して、本発明の化合物が癌細胞増殖および／生存などの１つ以上の細胞活性を阻害する能力を判定することができる。多くの癌細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）および他の供給元から得ることができる。簡潔には、細胞を９６ウェル組織培養処理した不透明白色プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ、ヴァンター、フィンランド）に、適切な増殖培地（ＡＴＣＣが決定）１００ｕｌ中の、細胞増殖の速度に応じた１ウェル当り６００〜１４０００の細胞を播種する。細胞を次に適切な濃度の薬物に曝露させて、その存在下で９６時間増殖させる。この後に、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．、マディソン、ウィスコンシン州）１００ｕｌを各ウェルに添加する。プレートを次に室温にて２分間震盪して細胞を溶解させ、室温にて１０分間インキュベートして発光シグナルを安定させた。ＰｒｏｍｅｇａのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイ試薬と同様に、この試薬はルシフェラーゼ酵素およびその基質ルシフェリンの両方を含有している。ルシフェラーゼは、細胞溶解物中でＡＴＰにより活性化されて、光を生成する反応であるルシフェリンのオキシルシフェリンへの変換を触媒する。生成される光の量は細胞溶解物中のＡＴＰの量に比例し、ＡＴＰの量自体は細胞数に比例して、細胞増殖の指標を与える。

細胞培養物中でのＪＡＫ２酵素の特異的阻害を検出するために、ウェスタンブロットアッセイが実施されることもある。このために、潜在的なＪＡＫ２阻害薬によって処理された細胞は、タンパク質の単離および貯蔵に特異的な緩衝液（１％ Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．４、１：１００ プロテアーゼ阻害薬カクテルＩＩＩ［Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ／ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ］、１：１００ ホスファターゼ阻害薬カクテル１［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州］、１：１００ ホスファターゼ阻害薬カクテル２［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州］）によって溶解される。これらの溶解物中のタンパク質の独活を次に、ＢＣＡプロテインアッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して定量する。タンパク質の既知量、たとえば５０ｕｇを１０％ ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに添加して、還元性、変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥに触れさせる。電気泳動させたタンパク質をニトロセルロース膜に移し、次にＳＴＡＴ５、ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ ６９４）、ＳＴＡＴ３、およびｐＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ ７０５）に対する抗体でプローブする。ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ３はそれぞれチロシン６９４およびチロシン７０５においてＪＡＫ２の基質であるため、処理細胞内のこれらの部位におけるホスホリル化の量を測定することによって、ＪＡＫ２阻害薬の有効性を評価する手段が与えられる。

Ｃ．ＪＡＫ２キナーゼ特異的活性データ
化合物番号１−４、１−７、１−１１および１−１７をＪＡＫ２阻害薬として３００ｎＭ〜１０ｎＭの希釈範囲でスクリーニングして、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイを使用して生存パーセントを決定した。これらの化合物はそれぞれ阻害薬濃度に対する生存％値を与え、そこからＩＣ_５０値を計算した。これらの化合物は多くの癌細胞株で１０ｎＭ未満のＩＣ_５０値を生じた。

ＪＡＫ２キナーゼに対するＩＣ_５０値（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイを使用する）を化合物番号化合物番号１−４、１−７、１−１１および１−１７で測定した。これらの化合物はそれぞれ１ｕＭ未満のＩＣ_５０値を有することがわかった。

ＩＣ_５０Ｐｒｏｆｉｌｅ（登録商標）データは化合物番号１−４、１−７、１−１１および１−１７で１ｕＭ未満のＩＣ_５０値を示したが、野生種（ＪＡＫ２ ＷＴ）およびミュータントＪＡＫ２キナーゼ（ＪＡＫ２ Ｖ６１７Ｆ）に対してＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＳｅｌｅｃｔＳｃｒｅｅｎ（登録商標）を使用してスクリーニングした化合物からのデータもこれら４種類の化合物について１μＭ未満のＩＣ_５０値を示した。

（実施例６）
代表的な化合物がＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５を調節する
Ａ．化合物１−４がＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５ホスホリル化を阻害する
本例では、化合物１−４がＡＧＳ胃癌細胞株でのＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５のＪＡＫ２依存性ホスホリル化を低下させることが示される。簡潔には、ＡＧＳ細胞を２５ｃｍ^２組織培養フラスコに播種して、各種濃度の化合物１−４の存在下で２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、細胞を溶解して、全タンパク質を単離および定量した。全タンパク質５０μｇを電気泳動させて、ニトロセルロース膜に移し、その時点でＳＴＡＴ３−ホスホ−Ｙ７０５およびＳＴＡＴ５−ホスホ−Ｙ６９４に対する抗体を使用してウェスタンブロット分析を実施した。全ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５との比較も行った。これらの処理細胞中のＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５ホスホリル化の量を定量するために濃度分析を実施した。ホスホ−ＳＴＡＴ３およびホスホＳＴＡＴ５を全ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５と比較して、未処置対照に対するＳＴＡＴホスホリル化の割合を決定した。低マイクロモル濃度（５〜１０ｕＭ）の化合物番号１によって処置した細胞は、ＳＡＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５ホスホリル化レベルの低下を示した。

Ｂ．化合物１−４はＳＴＡＴ３活性を低下させる
ＳＴＡＴ３がＪＡＫ２によってホスホリル化されるときに、ＳＴＡＴ３はホモダイマーを形成して、核に転位されて、細胞増殖に関与するいくつかの標的遺伝子の転写を生じさせる。ＡＧＳ胃癌細胞を９６ウェルプレートに播種して、化合物１−４ ５μＭの存在下で１、５、または２４時間インキュベートした。インキュベート後、ＳＴＡＴ３ ＨｉｔＫｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して細胞を染色し、ＡｒｒａｙＳｃａｎ ＶＴｉハイコンテントスクリーニング装置（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）でＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ＢｉｏＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを使用して検出した。核は青色に偽染色され（Ｈｏｅｃｈｓｔ）、ＳＴＡＴ３は緑色に偽染色された（ＦＩＴＣ）。

未処置細胞では、ＳＴＡＴ３は核内にかなりの程度で見出され、ＳＴＡＴ３がホスホリル化され、活性であり、転写を誘発することが示された。しかし、化合物１−４によって処置された細胞では、ＳＴＡＴ３染色は核外部に限定され、ＳＴＡＴ３がホスホリル化されず、不活性であり、ＪＡＫ２の阻害薬から予想された効果であることが示された。核ＳＴＡＴ３は、未処置サンプルの核ＳＴＡＴ３レベルと比較すると、化合物１−４での処理の２４時間後に５０％を超えて減少した。

Ｃ．化合物１−４および１−７がＪａｋ２を発現する細胞（Ｖ６１７Ｆ）でのＳＴＡＴ５ホスホリル化を減少させる
本実施例において、化合物１−４、１−７、１−１１および１−１７は、ＪＡＫ２のＶ６１７Ｆミュータントを発現する細胞におけるＳＴＡＴ５のＪＡＫ２依存性ホスホリル化を低減することが示されている。簡潔には、ＨＥＬ細胞を２５ｃｍ^２組織培養フラスコに播種して、各種濃度の化合物１または２の各種濃度の存在下で２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、細胞を溶解して、全タンパク質を単離および定量した。全タンパク質５０μｇを電気泳動して、ニトロセルロース膜に移し、その時点でＳＴＡＴ５−ホスホ−Ｙ６９４に対する抗体を使用してウェスタンブロット分析を実施した。全ＳＴＡＴ５に対する比較を行った。これらの処理細胞中のＳＴＡＴ５ホスホリル化の量を定量するために濃度分析を実施した。このアッセイから、ＥＣ_５０値は、化合物１−４では２９９ｎＭ、化合物１−７では４ｎＭ、化合物１−１１では６５．８ｎＭ、化合物１−１７では２６６ｎＭであると決定された。

本明細書で引用したおよび／または出願データシートに挙げた上記の米国特許、米国特許出願公報、米国特許出願、米国以外の外国特許、米国以外の外国特許出願、および非特許文献はすべて、その全体が参照により本明細書に援用されている。

上記より、本発明の具体的な実施形態が例証の目的で本明細書で説明されてきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく各種の変更形態が行われうることが認識されるであろう。したがって本発明は、添付請求項によるところを除いて限定されない。

Claims (19)

1. その立体異性体および製薬的に許容される塩を含む、次の式（Ｉ）：
   

   

   を有する化合物
   （式中：
   Ｚは、ＣＨまたはＮであり；
   Ｗ^１およびＷ^２は独立して、直接結合、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ−であり；
   Ｘ^１およびＸ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＯＣＨＦ_２、−ＯＣＨ_３、−ＣＨ_３、−ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＮＨ_２、ハロゲンまたは
   

   

   であり、Ｑは、ＯまたはＮであり、Ｒは存在しないか、またはＲは−Ｃ_１−６アルキルであり、ただし、Ｘ^１またはＸ^２の一方が
   

   

   であり、Ｙ^１およびＹ^２は独立して、−Ｈ、−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基であり、ただし、Ｙ^１およびＹ^２は、両方とも−Ｈというわけではなく；
   ｎは、１、２、または３である）。
2. ＺがＣＨである、請求項１の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
3. Ｘ^２がハロゲンである、請求項２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
4. Ｙ^２が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項３の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
5. Ｙ^１が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項３の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
6. Ｘ^２が−Ｈである、請求項２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
7. Ｙ^１が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項６の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
8. Ｙ^２が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項６の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
9. 

   より選択される請求項２に記載の化合物、あるいはその立体異性体、またはその製薬的に許容される塩。
10. 

    より選択される請求項２に記載の化合物、あるいはその立体異性体、またはその製薬的に許容される塩。
11. ＺがＮである、請求項１の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
12. Ｘ^２が−Ｈである、請求項１１の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
13. Ｙ^２が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項１２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
14. Ｙ^１が−ＣＮ、ハロゲンまたは−ＣＮで置換されたＣ_１−４アルキル基である、請求項１２の化合物、あるいはその立体異性体、または製薬的に許容される塩。
15. 

    より選択される請求項１１に記載の化合物、あるいはその立体異性体、またはその製薬的に許容される塩。
16. 製薬的に許容される賦形剤と組合せて請求項１の化合物を含む組成物。
17. 請求項１６に記載の組成物の治療的有効量をその必要がある対象に投与するステップを含む、ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在疾患を治療する方法。
18. ＪＡＫ２プロテインキナーゼ介在疾患が癌である、請求項１７に記載の方法。
19. 癌が結腸癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、膵癌、白血病またはリンパ腫である、請求項１７に記載の方法。