JP2010508283A - リン酸塩吸収の低減方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
本出願は、2006年10月25日に出願された米国仮出願番号60/862,876の優先権を主張し、参照することによってその全体を本明細書に組み込む。
適用なし。
動物:単冠白色レグホーンの産卵性雌鳥を使用して抗体を産生した(ペプチド抗原あたり3羽の雌鳥)。ヒト腸Npt2Bペプチド抗原の各々(配列に関しては下の表1、共輸送体タンパク質に関する位置に関しては図1を参照)を、標準グルタルアルデヒド法を用いて、ウシガンマグロブリンにペプチドをコンジュゲート(結合)することで調製した。
表1:卵抗体を産生するために使用したペプチドのアミノ酸配列。アミノ配列は、動物種の腸Npt2Bの予測される保存領域に基づいている。対象となる領域は、細胞外ループ1−3の親水性表面を含む。
1ECL=細胞外ループ。腸Npt2Bに対する8つのトランスメンブランドメイン(D)と4つの細胞外ループ(ECL)がある。「Near D」は、ドメインに最も近接していることを意味する。T=Topであり、示されるドメイン間で、等間隔である。図1参照。
種々のNpt2Bペプチドを用いた抗ヒト腸Npt2B抗体の産生は、上記実験例1に記載した。精製したIgY抗体のかわりに、抗体を含む乾燥した卵黄を、この実験例で示される摂食研究で直接使用した。
表2:体重増加、血漿リン濃度および排出リンに関して腸Npt2Bのペプチドを選択するための卵抗体供給効果(1g/kg食餌)1。
11日齢の単冠白色レグホーンの雄の雛、5羽からなる2つの囲いに、コントロール用卵黄粉末(アジュバントのみを注射した雌鳥からの1g/kgの乾燥卵黄の食餌)、または、示されたペプチド抗原で免役した雌鳥の卵黄粉末(1g/kgの食餌)とともに、十分な養分(UW−標準的な食用雛の開始食)を与えた。雛を3週間成長させ、この期間の体重増加(開始時の体重を引く)を測定した。21日齢で、全ての雛からサンプルを採血し、プラズマ(血漿)を採取して、リンを分析した。実験の最後の3日間にかけて全ての***物を、雌鳥の下にある肥料用便器(manure pan)から回収し、リンの総量を分析した。
2増加±標準誤差=開始時の体重を引いた21日目の体重。
3血漿リン±標準誤差
42つの囲いを採取し、分析した。生の値(乾燥した状態での%)および平均値を示した。
6*、5**、7***は、コントロールに対して、p<0.05**、p<0.07*、p<0.1***を示す。
5p<0.05;6p<0.07;7p<0.1;8p=0.07;9p=0.13および10p=0.16
ペプチド16を用いた抗ヒト腸Npt2B抗体の産生は、上記実験例1に示している。精製したIgY抗体のかわりに、抗体を含む乾燥卵黄粉末を、この実験例に示される食餌実験で直接使用した。
表3 体重増加、血漿リン濃度および骨灰に関して、腸Npt2Bのペプチド16に対する卵抗体(1g/kg食餌)を与えた効果
*ペプチド16に対する抗体を与えたブロイラは、アジュバントコントロール抗体卵黄粉末を与えたブロイラと比べて、14日目の体重増加が減少した(p=0.0003)。
**ペプチド16の抗体を与えたブロイラは、アジュバントコントロール抗体卵黄粉末を与えたブロイラと比べて、骨塩含有量が減少した(p=0.02)。
抗体調製:単冠白色レグホーンの産卵雌鳥を抗体産生に使用した(ペプチド抗原あたり3羽の雌鳥)。ニワトリ腸アルカリホスファターゼを、Worthingtonから購入した。各雌鳥のワクチンを調製するために0.5mgのニワトリ腸アルカリホスファターゼを、0.5mlPBSの終濃度に希釈し、0.5mlのフロイント完全アジュバント(最初の注射)または不完全アジュバント(追加免疫ワクチン)と混合し、氷水の上にドリップするとき、ビーズを保持することができる油中水型乳化剤を形成した。雌鳥の4つの部位(両脚および両胸)に、0.25mlのワクチンエマルジョンを筋肉内注射した。不完全アジュバントの追加免疫注射は、7日後であった。
表4:活性ビタミンD1の存在下での抗腸アルカリホスファターゼ(IAP)を与えたニワトリの血漿リン
11日齢のレグホーン雛(n=6)に、1α−ヒドロキシビタミンD3(活性ビタミンD、20μg/kg食餌)のみを、または、1α−ヒドロキシビタミンD3と、ニワトリ腸アルカリホスファターゼに対する卵抗体(1g/kgの乾燥卵黄抗体粉末の食餌)を加え、フィチン酸リンを含んだPi欠乏食餌を与えた。血漿リンを食餌を与えてから10日後に測定した。
2活性ビタミンD食餌(1α−ヒドロキシビタミンD3)のニワトリは、Pi欠損食餌(p=0.0004)に関するニワトリに対して、血漿リンを上昇させる。
**ニワトリ腸アルカリホスファターゼに対する抗体を追加したビタミンD食餌(1α−ヒドロキシビタミンD3)を与えられた雛は、p<0.05で、活性ビタミンDのみの処置に対して、血漿リンが減少した。
この実験例に使用される動物モデルは、アデニン誘導***ラットモデルである。(例えば、Yokazawa et al.,Nephron 1986,44:230−234;Katsumata et al.,Kid Intl 2003,64:441−450;および、Levi R et al.,J Am Soc Nephrol 2006,17:107−112参照。各々は、参照することで本明細書に組み込む。)
5/6腎摘出に関して(例えば、Cozzolino M et al.,Kidney Int.2003,64:1653−61)、左側腎動脈のいくつかの分岐を縛り、右側の腎臓を摘出した。5/6腎摘出したラット(例えば、雄のSprague Dawleryラット、約175−250g、1群あたり最大10ラット)に高リン酸塩食餌(例えば、0.9%リン酸塩)を与える。これらのラットは、手術後数週間で(4乃至8週間)***になり、腎不全、高リン血症および活性ビタミンD3(1α−ヒドロキシビタミンD3および1α,25−ジヒドロキシビタミンD3)不足を発症する。実験例1に記載された抗腸Nptt2B抗体など、抗腸Npt2B抗体の量を増やした高リン酸塩食餌を与えた上記5/6腎摘出ラットの毎日の経口投与処置によって、上記ラットにおいて、投与量に応じて、血清リン酸塩濃度が低減した。実験例1に記載された抗体など、抗体を、手術後最初の数週間内、および、その後に与える場合、これらの抗体は、上記ラットの高リン酸塩血漿の発症を予防または遅延する。
Claims (33)
- 高リン血症を発症する危険性のある、または、発症したヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収を低減する方法において、当該方法が、
前記対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の、配列番号1のIgY抗腸ナトリウム・リン酸共輸送体タイプ2B(Npt2B)抗体を、前記対象に経口投与するステップを具えることを特徴とする方法。 - 前記対象がヒト対象であることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記対象が腎臓病を患っていることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記腎臓病が、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性腎尿細管壊死、腎臓機能を低下させる感染症および尿管閉塞から選択されることを特徴とする請求項3に記載の方法。
- 前記対象がビタミンD化合物を摂取していることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記抗体を鳥類の卵から得ることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記抗体をリン酸塩結合剤とともに投与することを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 抗腸Npt2B抗体が投与された後、前記血清リン酸塩濃度を測定するステップと、前記濃度を抗腸Npt2B抗体が投与される前の濃度と比較するステップと、を更に具えることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 高リン血症を発症する危険性のある、または、発症したヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収を低減する方法において、当該方法が、
前記対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の、配列番号1のアミノ酸234−362内のエピトープに結合する抗腸ナトリウム・リン酸共輸送体タイプ2B(Npt2B)抗体を、対象に経口投与するステップを具えることを特徴とする方法。 - 前記抗腸Npt2B抗体が、配列番号1のアミノ酸245−340内のエピトープに結合することを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記抗腸Npt2B抗体が、配列番号1のアミノ酸252−330内のエピトープに結合することを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記対象がヒト対象であることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記対象が腎臓病を患っていることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記腎臓病が、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性腎尿細管壊死、腎機能を低下させる感染症、尿管閉塞から選択されることを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 前記対象がビタミンD化合物を摂取していることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記抗体がIgY抗体であることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記抗体がリン酸塩結合剤とともに投与されることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 抗腸Npt2B抗体が投与された後、前記血清リン酸塩濃度を測定するステップと、前記濃度を、前記抗腸Npt2B抗体が投与される前の濃度と比較するステップと、を更に具えることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 高リン血症を発症する危険性のある、または、発症したヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収を低減する方法において、当該方法が、
前記対象の血清リン酸塩濃度を低下または維持するのに有効な量の、配列番号1のアミノ酸429−485内のエピトープに結合する抗腸ナトリウム・リン酸共輸送体タイプ2B(Npt2B)抗体を、前記対象に経口投与するステップを具えることを特徴とする方法。 - 前記抗腸Npt2B抗体が、配列番号1のアミノ酸445−480内のエピトープに結合することを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記抗腸Npt2B抗体が、配列番号1のアミノ酸455−474内のエピトープに結合することを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記対象がヒト対象であることを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記対象が腎臓病を患っていることを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記腎臓病が、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性腎尿細管壊死、腎機能を低下させる感染症および尿管閉塞から選択されることを特徴とする請求項23に記載の方法。
- 前記対象が、ビタミンD化合物を摂取していることを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記抗体がIgY抗体であることを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記抗体がリン酸塩結合剤とともに投与されることを特徴とする請求項19に記載の方法。
- 前記抗腸Npt2B抗体が投与された後、前記血清リン酸塩濃度を測定するステップと、前記濃度を、前記抗腸Npt2B抗体が投与される前の濃度と比較するステップと、を更に具えることを特徴とする請求項19に記載の方法。
- ヒトのビタミンD治療の副作用を低減する方法において、当該方法が、
(a)ビタミンD化合物、および、(b)ビタミンD治療によって誘発される高リン血症を低減するのに有効な量の、配列番号1のNpt2Bに結合する抗腸ナトリウム・リン酸共輸送体タイプ2B(Npt2B)抗体を、対象に経口投与するステップを具えることを特徴とする方法。 - 前記対象が腎臓病を患っていることを特徴とする請求項29に記載の方法。
- 前記ヒトがビタミンD不足であることを特徴とする請求項29に記載の方法。
- 前記抗体がリン酸塩結合剤とともに投与されることを特徴とする請求項29に記載の方法。
- 前記抗腸Npt2B抗体が投与された後の血清リン酸塩濃度を測定するステップと、前記濃度を前記抗腸Npt2B抗体が投与される前の濃度と比較するステップと、を更に具えることを特徴とする請求項29に記載の方法。
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