JP2010217102A - 試薬保持容器および検体検出装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】試薬保持容器32a、32cは、内面に凹部を有し、少なくともこの凹部に試薬が乾燥保持される。検体検出装置は、検査器を装着可能な検査部24、およびこの検査部を通って延び検体を流す微小流路28を有する送液カセット20と、送液カセットに接続され、微小流路に連通する試薬保持容器と、を備えている。
【選択図】 図8
Description
図1、図2、図3は、第1の実施形態に係る試薬保持容器を示している。図1および図2に示すように、試薬保持容器10は、下端10aが閉塞し、上端部10bが開口した円筒形状に形成され、その中途部に、伸縮可能な蛇腹構造部12を有している。試薬保持容器10は、一般的な蛇腹付きストローなどの一部と類似した構造を有している。保持容器10の下端10aには、板状の把持部14が容器と一体に形成され、保持容器の下端10aから保持容器の軸方向、すなわち、伸縮方向、に沿って延出している。
まず、基材22の検査部24を覆うように、例えば、DNAチップ40を基材22の下面側に装着し、保持する。DNAチップには、所望の核酸プローブが形成されている。このような送液カセット20を駆動機構30上に載置し、複数の保持容器32a〜32dの把持部14を対応するプランジャ34a〜34dのチャック37により把持する。抽出試薬保持容器32aは伸張した状態に維持され、他の容器は、収縮した状態としておく。
増幅試薬保持容器32c内には増幅反応用のプライマーセット、酵素、バッファが予め乾燥保持されており、送液されたサンプルと混合される。次いで、加熱機構によってサンプルを加熱し、核酸増幅反応を行う。核酸増幅反応は、特に限定されないが、PCR、LAMP、SMAP法などである。
以下に、上記実施形態の送液カセットを用いた核酸検出の使用例を具体的に説明する。
1.検体検出装置の準備
1−1.試薬保持容器の準備
以下、5つの試薬保持容器にそれぞれ試薬を注入した。
1)抽出試薬保持容器:抽出用バッファ
2)増幅試薬保持容器:マウス2C39増幅用LAMPプライマー(配列A〜D)、酵素、増幅用バッファ
3)ハイブリダイゼーション試薬保持容器:SSC
4)洗浄試薬保持容器:SSC
5)検出試薬保持容器:ヘキスト33258
次に、上記1)、2)、3)については、真空乾燥処理を行い、容器の蛇腹構造部に試薬を乾燥固定させた。
電流検出式の核酸検出用チップ上の各電極に、以下に示す3種類の核酸検出用プローブ(配列E〜G)を固定化した。
1)マウス2C39検出用(配列E)
2)マウス2C29検出用(配列F)
3)マウスNAT1検出用(配列G)
1−3.核酸検出用デバイスの組立
送液カセット20に対し、図3に示すように、上記5つの試薬保持容器、廃液容器、核酸検出用チップを装着した。
まず、粗抽出済みのマウス2C39配列を持つサンプルをサンプル注入口21から注入し、抽出試薬保持容器32a内で抽出用バッファと混合させたのち、95℃で5分保持することで抽出反応を行った。抽出済みサンプルを増幅試薬保持容器32cに送液し、増幅試薬と混合した後、63℃で40分保持することで増幅反応を行った。
各電極から得られた電流値を図9に示す。2C39検出用のプローブが固定化された電極からは、他の電極と比較して有意に大きな電流値が得られていることから、サンプル中の2C39配列が以下の通りに検出されたことがわかった。
B:GGAAAAACTAAATGAGAATGTCAAGGAGAAAAAACATTCTTGACTTC
C:TTCAGGCTCACCTTGTGA
D:CTGTGGCAATAAAGCACC
E:CTCCCCATGATTGCAGGTGA
F:GTCCAGAGATTCATCGACCTCCTC
G:CAGGTGACCATCAGTGACAGG
上記のように構成された検体検出装置によれば、試薬保持容器をマイクロポンプとして用いることができ、流路内の空気の膨張、収縮に影響されることなく、微小量の検査液体を安定して送液することができる。マイクロポンプの収縮量により送液量を決めることができ、正確な量の液体を安定して送ることが可能となる。
検出装置の各構成部材の形状、寸法、材質等は、前述した実施形態に限定されることなく、必要に応じて、変更可能である。
20…送液カセット、22…基材、24…検査部、28…微小流路、
21…注入口、28a…流入口、28b…流出口、32a…抽出試薬保持容器、
32b…廃液容器、32c…増幅試薬保持容器、
32d…ハイブリタイゼーション試薬保持容器、30…駆動機構、32…ベース、
34a、34b、34c、34d…プランジャ
Claims (9)
- 内面に凹部を有し、少なくとも前記凹部に試薬が乾燥保持される試薬保持容器。
- 伸縮可能な蛇腹構造部を含み、前記蛇腹構造部に試薬が乾燥保持される請求項1に記載の試薬保持容器。
- 閉塞した一端と開口した他端とを有する筒状に形成され、前記蛇腹構造部が前記一端と他端との間に設けられている請求項1又は2に記載の試薬保持容器。
- 耐ガンマ線添加剤を含有する材料で形成されている請求項1に記載の試薬保持容器。
- 120℃までの耐熱性を有する請求項1記載の試薬保持容器。
- 遮光率90%以上の材質で形成されている請求項1に記載の試薬保持容器。
- 検査器を装着可能な検査部、およびこの検査部を通って延び検体を流す微小流路を有する送液カセットと、
前記送液カセットに接続され、前記微小流路に連通する請求項1ないし6のいずれか1項に記載の試薬保持容器と、
を備える検体検出装置。 - 前記試薬保持容器を伸縮させ、液体を前記試薬保持容器内と前記微小流路との間で押し出しあるいは引き込みする駆動機構を備えている請求項7に記載の検体検出装置。
- 前記送液カセットは、前記駆動機構に対して、取り外し自在に接続されている請求項8に記載の検体検出装置。
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