JP2010143893A - ACTIVITY INHIBITOR OF SERINE PROTEASE HtrA1 AND/OR HtrA2 - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an activity inhibitor of serine protease HtrA1 and/or HtrA2. <P>SOLUTION: A plant belonging to the genus Betula of the family Betulaceae, a plant belonging to the genus Uncaria of the family Rubiaceae, an ingredient derived from a fermented tea leaf and/or theaflavins are used as the activity inhibitor of the serine protease HtrA1 and/or HtrA2, and the activity inhibitor is formulated with an external preparation. Thereby, prophylactic effects on skin roughening, alleviating effects on the skin roughening and/or ameliorating effects on skin roughening symptoms; prophylactic effects on pigmentation, alleviating effects on the pigmentation and/or ameliorating effects on the pigmentation; and prophylactic effects on wrinkle formation, alleviating effects on the wrinkle formation and/or ameliorating effects on wrinkles etc., can be provided. <P>COPYRIGHT: (C)2010,JPO&INPIT

Description

本発明は、セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤に関する。また、このセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤を皮膚外用剤中に配合することで、肌荒れ、色素沈着及び／又はしわ形成を抑制及び改善ならしめるものである。   The present invention relates to an activity inhibitor of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2. Further, by blending this serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitor into the external preparation for skin, rough skin, pigmentation and / or wrinkle formation can be suppressed and improved.

皮膚は、常に外界にさらされており、加齢とともにシワ、タルミ、くすみ、色素沈着などが生じる。その一因が、酸化的、心因性等のストレスにより誘起される炎症性因子の活性化によりもたらされるものであることが近年広く知られるようになった。例えば、老化、癌化、色素沈着、炎症等においては、その原因としてＩＬ−１α、ＰＧＥ２、ＴＮＦ−α等の炎症性因子やコラゲナーゼ等の細胞外マトリクス分解酵素が深く関与しており、これらの炎症性因子の放出を抑制する有効成分についての研究がおこなわれている。   The skin is constantly exposed to the outside world, and wrinkles, tarmi, dullness, pigmentation, etc. occur with aging. In recent years, it has become widely known that one of the causes is caused by activation of inflammatory factors induced by oxidative and psychogenic stresses. For example, in aging, canceration, pigmentation, inflammation, etc., inflammatory factors such as IL-1α, PGE2, and TNF-α and extracellular matrix degrading enzymes such as collagenase are deeply involved. Research has been conducted on active ingredients that suppress the release of inflammatory factors.

セリンプロテアーゼは、活性部位にセリン残基のあるプロテアーゼであり、代表的なものに、トリプシン、キモトリプシン、トロンビン、プラスミン、エステラーゼなどがある。高等動物の消化酵素の大部分がこれにあたるが、セリンプロテアーゼは消化器官以外に皮膚表皮細胞にも存在しており、皮膚の健康状態と密接に関係していることが知られている。   Serine protease is a protease having a serine residue in the active site, and representative ones include trypsin, chymotrypsin, thrombin, plasmin, esterase and the like. Most of the digestive enzymes in higher animals correspond to this, but serine protease is also present in skin epidermal cells in addition to the digestive tract, and is known to be closely related to the health condition of the skin.

例えば、皮膚角質層ではセリンプロテアーゼが細胞間接着蛋白質に作用し角層細胞の剥離に作用していること、また、セリンプロテアーゼの活性変化に起因する種々の皮膚疾患などが報告されていることから、セリンプロテアーゼの活性を適切に調整することが皮膚の健康を保ち、老化を防止するのに有効であるとされている。   For example, in the skin stratum corneum, it has been reported that serine proteases act on intercellular adhesion proteins and act on exfoliation of stratum corneum cells, and various skin diseases caused by serine protease activity changes have been reported. It is said that appropriately adjusting the activity of serine protease is effective in maintaining skin health and preventing aging.

近年の研究では、セリンプロテアーゼを皮膚角質層に供給して、異常角化や角層ターンオーバーの異常をコントロールすることができる不活性単体固定化セリンプロテアーゼ（特許文献１）、皮膚の老化防止効果を有するセリンプロテアーゼ阻害剤（トリプシン及びエラスターゼなど）として、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物（特許文献２）、セリンプロテアーゼの一つであるエラスターゼの過剰発現を抑制することで、エラスチンの変性や破壊を防止し、皮膚の老化を防止するセージ属およびクワ属エキス（特許文献３）、荒れ性等の改善・予防に優れた効果を有するセリンプロテアーゼ（特にはプラスミン等の繊維素溶解系に関わるもの）活性阻害剤としてバラ科植物、カロフィラム・ブラジリエンセ、ミルキア・スファエロカルパ及びヒプティス・クレナタ（特許文献４、５）などが報告されている。   In recent studies, serine protease is supplied to the skin stratum corneum to control abnormal keratinization and stratum corneum turnover abnormality. As a serine protease inhibitor (such as trypsin and elastase) having the above-mentioned properties, the hybrid cell extract of loofah and hamchael (Patent Document 2), and the overexpression of elastase, which is one of serine proteases, suppresses the degeneration and destruction of elastin. Sera and Mulberry extracts (Patent Document 3) that prevent skin aging and serine proteases that have an excellent effect in improving and preventing roughening (especially those related to fibrinolytic systems such as plasmin) As an activity inhibitor, Rosaceae, Calophyllam brazilianse, Mirkia Sphaeroca Etc. Pas and Hiputisu-Kurenata (Patent Documents 4 and 5) have been reported.

一方、本発明者らが着目したセリンプロテアーゼＨｔｒＡは、哺乳類に存在するタンパク質であって、これまでに４種、すなわちＨｔｒＡ１、ＨｔｒＡ２、ＨｔｒＡ３およびＨｔｒＡ４が知られている。その中でもＨｔｒＡ１及びＨｔｒＡ２は皮膚表皮組織においても発現が認められる。   On the other hand, the serine protease HtrA focused by the present inventors is a protein present in mammals, and four types, namely, HtrA1, HtrA2, HtrA3 and HtrA4 have been known so far. Among them, HtrA1 and HtrA2 are also expressed in skin epidermis tissues.

セリンプロテアーゼＨｔｒＡについては近年、その生理的活性を明らかにする研究が進められており、ＴＧＦ−βファミリータンパク質活性調節剤して肺繊維症や肝硬変などの疾患を防止するためのセリンプロテアーゼＨｔｒＡの利用（特許文献６）、セリンプロテアーゼＨｔｒＡ３を利用したアポトーシス誘導剤（特許文献７）などが報告されている他、皮膚に適用することに関する特定のプロテアーゼ（特許文献８）が報告されているのみで、植物由来成分を有効成分とするＨｔｒＡ１及びＨｔｒＡ２の活性阻害剤についての研究はこれまでにない。   In recent years, studies on serine protease HtrA have been conducted to clarify its physiological activity, and use of serine protease HtrA to prevent diseases such as pulmonary fibrosis and cirrhosis as a TGF-β family protein activity regulator. (Patent Document 6), an apoptosis inducer utilizing the serine protease HtrA3 (Patent Document 7) and the like, as well as a specific protease (Patent Document 8) related to application to the skin, have been reported, There has been no research on HtrA1 and HtrA2 activity inhibitors containing plant-derived components as active ingredients.

なお、今回本発明者らが着目した植物エキスについては、エラスターゼ阻害剤として紅茶エキス、アセンヤク抽出物、シラカバ抽出物を利用しているものはあるが（特許文献９、〜１１）、いずれもセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤ではない。
特開平０８−０３８１７５号公報 特開平１１−１２４３２５号公報 特開平１１−１４７８３４号公報 特開２０００−３２７５５５公報 特開２００１−２４０５５１公報 特開２００５−１５４３９９公報 特開２００４−２４８６６８公報 特表２００７−５２２１５０公報 特開２００６−１０４１１７公報 特開平１１−２６３７２０号公報 特開平１１−１７１７５８号公報 In addition, about the plant extract which the present inventors paid attention this time, although there exist what uses the black tea extract, asenyaku extract, and birch extract as an elastase inhibitor (patent documents 9, 11), all are serine. It is not an activity inhibitor of the proteases HtrA1 and / or HtrA2.
Japanese Patent Application Laid-Open No. 08-038175 JP-A-11-124325 JP-A-11-147834 JP 2000-327555 A JP 2001-240551 A JP 2005-154399 A JP 2004-248668 A Special table 2007-522150 gazette JP 2006-104117 A JP-A-11-263720 Japanese Patent Laid-Open No. 11-171758

本発明は、セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤を提供することにある。   The present invention is to provide an activity inhibitor of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2.

本発明者らは、セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２活性化と肌荒れ、色素沈着及び／又はしわ形成の関連性、及び、セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤について鋭意研究した結果、紅茶抽出物、アセンヤク抽出物、シラカバ抽出物及びテアフラビンはセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害作用が顕著に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive research on serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activation and the relationship between rough skin, pigmentation and / or wrinkle formation, and serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitors, It has been found that the product, Acacia yak extract, birch extract and theaflavin are remarkably excellent in the activity inhibiting action of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2, and the present invention has been completed.

即ち本発明は、カバノキ科カバノキ属に属する植物、アカネ科カギカズラ属に属する植物、発酵茶葉由来成分及び／又はテアフラビン類から選ばれる１種または２種以上を有効成分とするセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤である。   That is, the present invention relates to a serine protease HtrA1 and / or a serine protease HtrA1 and / or an active ingredient which is one or more selected from a plant belonging to the genus Birchaceae, a plant belonging to the genus Rubiaceae, a component derived from fermented tea leaves and / or theaflavins. It is an activity inhibitor of HtrA2.

本発明のセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤を配合することで、肌荒れ、色素沈着及び／又はしわ形成抑制及び改善効果を発揮する外用剤が得られる。   By blending the activity inhibitor of serine protease HtrA1 and / or HtrA2 of the present invention, an external preparation that exhibits an effect of suppressing and improving rough skin, pigmentation and / or wrinkle formation can be obtained.

以下、本発明の構成を更に詳細に説明する。   Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in more detail.

本発明に係わるセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤は、カバノキ科カバノキ属に属する植物、アカネ科カギカズラ属に属する植物、発酵茶葉由来成分及び／又はテアフラビン類から選ばれる１種または２種以上を有効成分とするものである。本発明に係わるセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤は、皮膚に適用することでその効果を発現することができる。   The serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitor according to the present invention is one or two selected from a plant belonging to the genus Birchaceae, a plant belonging to the genus Rubiaceae, a component derived from fermented tea leaves and / or theaflavins. The above is an active ingredient. The activity inhibitor of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2 according to the present invention can exert its effect when applied to the skin.

本発明に係わるカバノキ科植物カバノキ属植物は、北半球の温帯から亜寒帯に約６０種が分布している落葉の低木あるいは高木である。カバノキ科植物カバノキ属植物としてはダケカンバ（Betula ermanii）、ミズメ（Betula grossa）、ベツラレンタ（Betula lenta、北米東部に分布）、ウダイカンバ（Betula maximowcziana）、シラカバ（シラカンバともいう、Betula platyphylla Sukatchev var.japonica Hara）、ヨーロッパシラカバ（Betula alba L.）、ベツラペンデュラ（Betula pendula Roth、ヨーロッパからモンゴルにかけて分布）、等が挙げられ、これらの１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。本発明に係わるカバノキ科植物カバノキ属植物の種類は、特に限定されるものではないが、ヨーロッパシラカバ（Betula alba L.）及び／又はシラカバ（Betula platyphylla Sukatchev var.japonica Hara）が好ましい。カバノキ科植物カバノキ属植物の葉、芽、樹皮、樹液等には薬効があり、使用部位についても特に限定されるものではないが、ベチュラトリテルペノイド（ベツリン）、精油成分、タンニン等を含む樹皮が好ましい。   The birch plant of the birch family according to the present invention is a deciduous shrub or high tree in which about 60 species are distributed from the temperate zone to the subarctic zone of the northern hemisphere. Birch (Betula ermanii), mizume (Betula grossa), beetlerenta (Betula lenta, distributed in eastern North America), Ubikan (Betula maximowcziana), birch (also called birch), Betula platyphylla Sukp ), European birch (Betula alba L.), Betula pendula Roth (distributed from Europe to Mongolia), and the like, and one or more of these can be used in combination. The kind of the birch plant of the birch family plant according to the present invention is not particularly limited, but European birch (Betula alba L.) and / or birch (Betula platyphylla Sukatchev var. Japonica Hara) is preferable. Birch leaves, buds, bark, sap, etc. have medicinal effects, and the use site is not particularly limited, but bark containing betula triterpenoids (betulin), essential oil components, tannins, etc. is preferred .

本発明に係わるアカネ科カギカズラ属植物は、アジア、アフリカ、アメリカの熱帯、亜熱帯を中心に３４種類が知られる、木本性のつる植物である。アカネ科カギカズラ属植物としてはカギカズラ（Uncaria rhynchophylla）、トウカギカズラ（Uncaria sinensis）、ガンビールノキ（Uncaria gambir Roxburgh）等が挙げられ、これらの１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。本発明に係わるアカネ科カギカズラ属植物の種類は、特に限定されるものではないが、ガンビールノキが好ましい。使用部位についても特に限定されるものではないが、アセンヤク（阿仙薬）として知られるガンビールノキ（Uncaria gambir Roxburgh）の葉及び若枝から得られた成分が好ましい。アセンヤクは、従来、収斂性止瀉薬、整腸薬として瀉痢、便血、尿血、血痢など、また口腔清涼剤の原料などにも用いられている生薬で、カテキン、タンニンを豊富含んでいる。   The Rubiaceae genus genus plant according to the present invention is a woody vine with known 34 types mainly in the tropics and subtropics of Asia, Africa and America. Examples of the genus Rubiaceae include Uncaria rhynchophylla, Uncaria sinensis, Uncaria gambir Roxburgh, and the like, and one or more of these can be used in combination. The kind of the genus Rubiaceae belonging to the present invention is not particularly limited, but Gambir is preferable. The site of use is not particularly limited, but a component obtained from leaves and young branches of Uncaria gambir Roxburgh known as asenyaku (Asenyaku) is preferred. Asenyak is a herbal medicine that is conventionally used as an astringent antidiarrheal agent, diarrhea, fecal blood, urine blood, diarrhea as an intestinal agent, and a raw material for oral refreshing agents, and is rich in catechin and tannin.

本発明に係わる発酵茶葉は、ツバキ科ツバキ属植物であるチャ（Camellia sinensis (L.) O. Kuntze）を原料に製造される。製造方法等により大きく、不発酵茶（緑茶）、半発酵茶（ウーロン茶、プーアル茶）、発酵茶（紅茶）に分けることができる。本発明で用いる発酵茶としては、いずれも特に限定されるものではないが、ウーロン茶、プーアル茶、紅茶等が挙げられ、これらの１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。これらの発酵茶のうち、特に好ましいものとしては、紅茶が挙げられる。紅茶には、その発酵過程において、カテキン類が酸化して生成されるテアフラビンが豊富に含まれる。   The fermented tea leaves according to the present invention are produced from tea (Camellia sinensis (L.) O. Kuntze), which is a camellia family Camellia genus plant. Depending on the production method, etc., it can be divided into non-fermented tea (green tea), semi-fermented tea (oolong tea, puer tea), and fermented tea (black tea). Although all are not specifically limited as fermented tea used by this invention, Oolong tea, puer tea, black tea, etc. are mentioned, These can be used combining 1 type (s) or 2 or more types. Of these fermented teas, black tea is particularly preferable. Black tea is rich in theaflavins produced by oxidation of catechins during the fermentation process.

上記植物及び発酵茶を抽出物として利用する場合、抽出溶媒は特に限定されないが、上記植物及び発酵茶を溶媒、たとえば水、低級アルコール、含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ブタノール等の極性溶媒またはクロロホルム、酢酸エチル、各種エーテル等あるいはこれらの混合物の有機溶媒で抽出して得た抽出物をそのまま、あるいは濃縮して用いるか、抽出物を吸着法、たとえばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したり、ポーラスポリマーのカラムに吸着させた後、メタノールまたはエタノールで溶出し濃縮した抽出物も使用できる。また、分配法、たとえばブタノールで抽出した抽出物等も使用できる。なお市販品としては、例えば、カバノキ科カバノキ属植物成分としては、丸善製薬社のシラカバ抽出液（ヨーロッパシラカバ樹皮エキス）、やインデナ社のPhytelene of Birch-leaves EN 219（ヨーロッパシラカバ葉エキス）、一丸アルコス社のBitch Extrct（シラカンバ樹皮エキス）等を、アカネ科カギカズラ属植物としては、丸善製薬社のアセンヤク抽出液、Uncaria-Extract（トウカギカズラ）一丸ファルコス社のファルコレックス アセンヤク、発酵茶葉由来成分としては、丸善製薬社の紅茶抽出液、ウーロン茶抽出液、甜茶抽出液、一丸ファルコス社の紅茶リキッド、池田糖化工業社の紅茶抽出液、紅茶エキスパウダー、ウーロン茶抽出液、ウーロン茶エキスパウダー等があるのでこれを利用してもよく、これらの市販品を前記方法で処理したものを利用することもできる。   When using the plant and fermented tea as an extract, the extraction solvent is not particularly limited, but the plant and fermented tea are used as a solvent, for example, water, lower alcohol, hydrous lower alcohol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, butanol. Extracts obtained by extraction with organic solvents such as polar solvents such as chloroform, ethyl acetate, various ethers, etc., or mixtures thereof, are used as they are or concentrated, or the extract is adsorbed, for example using an ion exchange resin. It is also possible to use an extract obtained by removing impurities and adsorbing to a porous polymer column and then eluting with methanol or ethanol and concentrating. Also, a partitioning method, for example, an extract extracted with butanol can be used. In addition, as a commercial item, for example, the birch family birch genus plant component, Maruzen Pharmaceutical's birch extract (European birch bark extract), Indena's Phytelene of Birch-leaves EN 219 (European birch leaf extract), Ichimaru Arcos Bitch Extrct (between white birch bark extract), etc., as for the Rubiaceae genus genus, Azenyaku extract of Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd., Uncaria-Extract (Toukagikazura) Ichimaru Falcos Co., Ltd. , Maruzen Pharmaceutical's black tea extract, oolong tea extract, strawberry tea extract, Ichimaru Falcos black tea liquid, Ikeda saccharification industry black tea extract, black tea extract powder, oolong tea extract, oolong tea extract powder, etc. You may use, and use these commercial products processed by the above method You can also

上記発酵茶葉には、茶ポリフェノールとして、テアフラビン類が含まれる。具体的には、テアフラビンモノガレートＡ、テアフラビンモノガレートＢ、テアフラビンジガレート、遊離型テアフラビンなどが含まれ、これらを単独もしくは組み合わせて用いることができる。また、上記の茶ポリフェノールは市販品として、商品名：ポリフェノン６０（三井農林株式会社製、茶ポリフェノール含量６０％以上）を利用することができるほか、例えば、特表２００４−５１３１７６号公報に記載の製造方法等により製造することができる。   The fermented tea leaves contain theaflavins as tea polyphenols. Specific examples include theaflavin monogallate A, theaflavin monogallate B, theaflavin digallate, free theaflavin, and the like, which can be used alone or in combination. In addition, as the above-mentioned tea polyphenol, commercial name: Polyphenon 60 (manufactured by Mitsui Norin Co., Ltd., tea polyphenol content of 60% or more) can be used, and for example, described in JP-T-2004-513176 It can be manufactured by a manufacturing method or the like.

上記セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤の外用剤への配合量は、用途、剤型、配合目的等によって異なり、特に限定されるものではないが、一般的には、セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤の原体として、外用剤中０．００１〜２０．０質量％が好ましく、より好ましくは０．０１〜１０．０質量％である。   The amount of the serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitor added to the external preparation varies depending on the use, dosage form, formulation purpose, etc., and is not particularly limited, but in general, serine protease HtrA1 and As an active ingredient of the activity inhibitor of HtrA2, 0.001 to 20.0% by mass in the external preparation is preferable, and 0.01 to 10.0% by mass is more preferable.

本発明の外用剤には上記セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤に対して、更に他の成分と組み合わせることにより、その効果を相乗的に高めることができる。上記セリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤と組み合わせて使用される他の成分は、抗酸化剤、細胞賦活剤から選ばれるものであるが、具体的な成分としては、例えば、それぞれ以下に示すものが挙げられる。ここで以下に記載する「誘導体」には形成可能な塩が含まれる。   The external preparation of the present invention can be synergistically enhanced by combining the serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitor with other components. The other components used in combination with the serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitor are selected from antioxidants and cell activators. Specific components include, for example, the following: What is shown. Here, the “derivatives” described below include salts that can be formed.

抗酸化剤としては、ビタミンＥおよびその誘導体（天然ビタミンＥ、ｄｌ−α（β、γ）−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェリル、ニコチン酸−ｄｌ−α−トコフェリル、リノール酸−ｄｌ−α−トコフェリル、レチノイン酸トコフェリル、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロリル等のトコフェロールおよびその誘導体、トコトリエノール等）、ビタミンＡおよびその誘導体（レチノール、パルミチン酸レチノール、リノール酸レチノール、酢酸レチノール、水添レチノール、レチナールおよびデヒドロレチナール等の誘導体）、カロチノイド（カロチン、リコピン、アスタキサンチン、ルテイン等）、ビタミンＢおよびその誘導体（チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩、チアミンリン酸塩、リボフラビン、酢酸リボフラビン、フラビンアデニンジヌクレオチド、塩酸ピリドキシン、ジオクタン酸ピリドキシン、ジパルミチン酸ピリドキシン、トリヘキシルデカン酸ピリドキシン、シアノコバラミン、葉酸類、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸類、コリン類等）、ビタミンＣおよびその誘導体（ジパルミチン酸アスコルビルやテトラヘキシルデカ
ン酸アスコルビル等のアスコルビン酸アルキルエステル、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸硫酸エステル、３−Ｏ−セチルアスコルビン酸等のアスコルビン酸アルキルエーテル等）、ビタミンＤおよびその誘導体（エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、ジヒドロキシスタナール等）、ビタミンＫ５、コエンザイムＱ１０、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、ノルジヒドログアヤレチン、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、チオジプロピオン酸ジラウリル、トリルビグアナイド、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム等のエリソルビン酸塩、ハイドロキノンおよびその誘導体、エラグ酸、ＳＯＤ、エルゴチオネイン、グルタチオン、チオタウリン、ヒポタウリン等の還元性基を有するアミノ酸、マンニトールオイゲノール、イソオイゲノール、カテキン、ケルセチン、リグナン、タンニン等のポリフェノール類、ルチンおよびその誘導体、サポニン、イチョウエキス、クスノハコケモモエキス、リンゴエキス、チャエキス、ブドウエキス、チョウジエキス、エイジツエキス、トマトエキス、シソエキス、ニンジンエキス、ハマメリスエキス、メヤシャジツエキス、メリッサエキス、ローズマリーエキス等の植物抽出物、海藻抽出物、あるいは植物油中に含まれる天然型の抗酸化剤又はそれらから誘導される抗酸化剤、例えばフラボノイド類を含む甘草エキス、ゴマ油、ブドウ種子油、棉実油由来のセサミン、エピセサミン等、またはそれらの混合物が挙げられる。 Antioxidants include vitamin E and its derivatives (natural vitamin E, dl-α (β, γ) -tocopherol, dl-α-tocopheryl acetate, nicotinic acid-dl-α-tocopheryl, linoleic acid-dl-α- Tocopheryl such as tocopheryl, retinoic acid tocopheryl, dl-α-tocopheryl succinate and derivatives thereof, tocotrienol and the like, vitamin A and derivatives thereof (retinol, retinol palmitate, retinol linoleate, retinol acetate, hydrogenated retinol, retinal and dehydro) Derivatives such as retinal), carotenoids (carotene, lycopene, astaxanthin, lutein, etc.), vitamin B and its derivatives (thiamine hydrochloride, thiamine sulfate, thiamine phosphate, riboflavin, riboflavin acetate, flavin adeni Dinucleotide, pyridoxine hydrochloride, pyridoxine dioctanoate, pyridoxine dipalmitate, pyridoxine trihexyldecanoate, cyanocobalamin, folic acid, nicotinic acid amide, nicotinic acid such as benzyl nicotinate, choline, etc.), vitamin C and its derivatives (dipalmitin) Ascorbic acid alkyl esters such as ascorbyl acid and tetrahexyldecanoic acid ascorbyl, ascorbic acid phosphoric acid ester, ascorbic acid sulfuric acid ester, ascorbic acid alkyl ethers such as 3-O-cetylascorbic acid, etc.), vitamin D and its derivatives (ergocalciferol) , Cholecalciferol, dihydroxystannal, etc.), vitamin K5, coenzyme Q10, butylhydroxyanisole, butylhydroxytoluene, nordihi Droguaiaretin, propyl gallate, sodium bisulfite, sodium sulfite, sodium pyrosulfite, dilauryl thiodipropionate, tolylbiguanide, erythorbates such as erythorbic acid, sodium erythorbate, hydroquinone and its derivatives, ellagic acid, SOD, ergothioneine, Amino acids having a reducing group such as glutathione, thiotaurine, hypotaurine, mannitol eugenol, isoeugenol, catechin, quercetin, lignan, tannin and other polyphenols, rutin and derivatives thereof, saponin, ginkgo biloba extract, swanberry extract, apple extract, Tea extract, grape extract, clove extract, ages extract, tomato extract, perilla extract, carrot extract, hamamelis extract, coconut Plant extracts such as Juttsu extract, Melissa extract, rosemary extract, seaweed extract, or natural antioxidants contained in vegetable oils or antioxidants derived therefrom, such as licorice extract containing flavonoids, sesame oil, Examples include grape seed oil, sesamin derived from nut oil, episesamin and the like, or mixtures thereof.

これらの抗酸化剤のうち、特に好ましいものとしては、ビタミンＥおよびその誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体が挙げられる。   Among these antioxidants, vitamin E and its derivatives, vitamin C and its derivatives are particularly preferable.

細胞賦活剤としては、前記のビタミンＡおよびその誘導体、前記のカロチノイド、前記のビタミンＢおよびその誘導体、前記のビタミンＣおよびその誘導体、前記のビタミンＥおよびその誘導体、ピロリドンカルボン酸、クエン酸、グリコール酸、酒石酸、乳酸等のα−ヒドロキシ酸、β−乳酸、サリチル酸等のβ−ヒドロキシ酸、α−又はγ−リノレン酸、サイクリックＡＭＰ、トウモロコシ種子エキス、エルゴチオネイン、ヒドロキシプロリンなどのアミノ酸、イチョウエキス、スギナエキス、ツボクサエキス、ダイズ発酵エキス、トマトエキス、トウキンセンカエキス、ニンジンエキス、ホップエキス、マツエキス、レモンエキス、ローズマリーエキス等の植物抽出物、海藻抽出物、酵母エキス等、またはそれらの混合物が挙げられる。   Cell activators include the above-mentioned vitamin A and derivatives thereof, the above carotenoids, the above vitamin B and derivatives thereof, the above vitamin C and derivatives thereof, the above vitamin E and derivatives thereof, pyrrolidone carboxylic acid, citric acid, glycol Α-hydroxy acids such as acid, tartaric acid and lactic acid, β-hydroxy acids such as β-lactic acid and salicylic acid, α- or γ-linolenic acid, cyclic AMP, corn seed extract, amino acids such as ergothioneine and hydroxyproline, ginkgo biloba extract , Horsetail extract, Japanese boxweed extract, Fermented soybean extract, Tomato extract, Tomato extract, Carrot extract, Hop extract, Pine extract, Lemon extract, Rosemary extract and other plant extracts, seaweed extract, yeast extract, etc., or mixtures thereof Is mentioned.

これらの細胞賦活剤のうち、特に好ましいものとしては、ビタミンＡおよびその誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体、ビタミンＢおよびその誘導体、クエン酸、リンゴ酸、ピロリドンカルボン酸、酵母エキスが挙げられる。   Among these cell activators, particularly preferred are vitamin A and its derivatives, vitamin C and its derivatives, vitamin B and its derivatives, citric acid, malic acid, pyrrolidone carboxylic acid, and yeast extract.

本発明のセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤と、外用剤への抗酸化剤及び／又は細胞賦活剤の配合比は、その種類により相違するが、一般的には、その配合比が質量基準で１００：１〜１：１００であることが好ましく、１０：１〜１：１０がより好ましい。この範囲であると、より優れたセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害効果が発現し、かつ、優れた肌荒れ予防及び／又は肌荒れ緩和効果、色素沈着予防及び／又は色素沈着緩和効果を発揮することができる。   The compounding ratio of the serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitor of the present invention and the antioxidant and / or cell activator to the external preparation differs depending on the type, but in general, the compounding ratio is The mass ratio is preferably 100: 1 to 1: 100, and more preferably 10: 1 to 1:10. Within this range, a more excellent serine protease HtrA1 and / or HtrA2 activity inhibitory effect is exhibited, and an excellent rough skin prevention and / or rough skin alleviation effect, pigmentation prevention and / or pigmentation alleviation effect is exhibited. be able to.

本発明の外用剤にはＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤とともに、既存のＰＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤、抗炎症剤、肌荒れ予防／改善剤、色素沈着予防／改善剤を配合することができる。これらの成分を併用することは、本効果の相乗効果をもたらし、本効果を損なうものではない。   In the external preparation of the present invention, an active inhibitor of PHtrA1 and / or HtrA2, an anti-inflammatory agent, a rough skin preventing / improving agent, and a pigmentation preventing / improving agent are added together with an activity inhibitor of HtrA1 and / or HtrA2. Can do. The combined use of these components brings about a synergistic effect of this effect and does not impair this effect.

既存のセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害としては、ｕｃｆ−１０１のようなプロテアーゼ阻害剤や、ＣＲＥＢＬ１（cAMP responsive element binding protein-like １）、ＡＴＦ６（activating transcription factor 6）、ＨＮＦ−４α（hepatocyte nuclear factor 4α）、ＳＨＣ３（src homology 2 domain containing transforming protein C3）等が挙げられる。   Inhibition of the activity of existing serine proteases HtrA1 and / or HtrA2 includes protease inhibitors such as ucf-101, CREBL1 (cAMP responsive element binding protein-like 1), ATF6 (activating transcription factor 6), HNF-4α ( hepatocyte nuclear factor 4α), SHC3 (src homology 2 domain containing transforming protein C3), and the like.

既存の抗炎症剤としては、ステロイド系抗炎症剤（ヒドロコルチゾンなど)、非ステロイド系抗炎症剤（アスピリンなど）、消炎酵素剤（キモトリプシン）、ε−アミノカプロン酸及びその誘導体、アラントイン、塩化リゾチーム、グアイアズレン、グリチルレチン酸やグリチルリチン酸及びそれらの誘導体、コンドロイチン硫酸及びその誘導体、コンフリー、各種ポリフェノールなど、また、甘草エキス、アルニカエキス、オトギリソウエキス、カモミラエキス、ティーツリーオイル、シコンエキス、シソエキス、シラカバエキス、ソウハクヒエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、ニワトコエキス、モモ葉エキス、ヨモギエキスなどの植物エキス等が挙げられる。   Existing anti-inflammatory agents include steroidal anti-inflammatory agents (such as hydrocortisone), non-steroidal anti-inflammatory agents (such as aspirin), anti-inflammatory enzyme agents (chymotrypsin), ε-aminocaproic acid and its derivatives, allantoin, lysozyme chloride, guaiazulene Glycyrrhetinic acid, glycyrrhizic acid and their derivatives, chondroitin sulfate and its derivatives, comfrey, various polyphenols, licorice extract, arnica extract, hypericum extract, chamomile extract, tea tree oil, lion extract, perilla extract, birch extract Examples include plant extracts such as extract, toki extract, citrus extract, elderberry extract, peach leaf extract and mugwort extract.

既存の肌荒れ予防／改善剤としては、保湿剤、細胞間脂質及びその類似体、ビタミン類などが挙げられる。保湿剤としては、グリセリン、ブチレングリコール、ポリエチレングリコールなどの多価アルコール、トレハロース類、混合異性化糖、プルラン、マルトースなどの糖類、ヒアルロン酸ナトリウム、コラーゲン、エラスチン、コンドロイチン硫酸ナトリウムなどの生態高分子、アミノ酸、乳酸ナトリウム、尿素、ベタイン、カモミラエキスなどの各種植物・海藻エキス等が、細胞間脂質及びその類似体としては、スフィンゴ脂質、セラミド、擬似セラミド、コレステロール及びその誘導体、リン脂質及びそれらの誘導体が、ビタミン類としては、ビタミンＡ群、ビタミンＤ群、ビタミンＥ群、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ビタミンＣ群、ニコチン酸アミド、ビタミンＢ６群及びそれらの誘導体が、トラネキサム酸及びその誘導体、カルニチン及びその誘導体などが挙げられる。   Examples of existing rough skin prevention / amelioration agents include moisturizers, intercellular lipids and analogs thereof, vitamins and the like. Examples of moisturizers include polyhydric alcohols such as glycerin, butylene glycol and polyethylene glycol, trehaloses, sugars such as mixed isomerized sugar, pullulan and maltose, biopolymers such as sodium hyaluronate, collagen, elastin and sodium chondroitin sulfate, Various plant and seaweed extracts such as amino acids, sodium lactate, urea, betaine, chamomile extract, etc., as intercellular lipids and their analogs, sphingolipids, ceramides, pseudoceramides, cholesterol and their derivatives, phospholipids and their derivatives However, as vitamins, vitamin A group, vitamin D group, vitamin E group, calcium pantothenate, biotin, vitamin C group, nicotinamide, vitamin B6 group and derivatives thereof are tranexamic acid and derivatives thereof, potassium Such Nichin and derivatives thereof.

既存の色素沈着予防／改善剤としては、前記のビタミンＣ及びその誘導体、アルキルグリセリルエーテル、アルブチン、イオウ、エラグ酸、カモミラエキス、コウジ酸、プラセンタエキス、ルシノール、リノール酸及びリノレン酸およびそれらの誘導体、亜鉛グリシン錯体、ニコチン酸アミド、トラネキサム酸およびその誘導体、ビタミンＥフェルラ酸エステルなどが挙げられる。   Examples of existing pigmentation prevention / amelioration agents include vitamin C and derivatives thereof, alkyl glyceryl ether, arbutin, sulfur, ellagic acid, chamomile extract, kojic acid, placenta extract, lucinol, linoleic acid and linolenic acid and their derivatives. Zinc glycine complex, nicotinamide, tranexamic acid and its derivatives, vitamin E ferulic acid ester and the like.

本発明の外用剤には、本発明の効果を損なわない範囲で化粧品、医薬部外品等に配合される成分として流動パラフィンなどの炭化水素、植物油脂、ロウ類、合成エステル油、シリコーン系の油相成分、フッ素系の油相成分、高級アルコール類、脂肪酸類、増粘剤、紫外線吸収剤、粉体、顔料、色材、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、多価アルコール、糖、高分子化合物、生理活性成分、経皮吸収促進剤、溶媒、酸化防止剤、香料、防腐剤等を配合することができる。   In the external preparation of the present invention, hydrocarbons such as liquid paraffin, vegetable oils and fats, waxes, synthetic ester oils, silicone-based components as ingredients to be blended in cosmetics, quasi-drugs and the like as long as the effects of the present invention are not impaired. Oil phase components, fluorinated oil phase components, higher alcohols, fatty acids, thickeners, UV absorbers, powders, pigments, coloring materials, anionic surfactants, cationic surfactants, nonionic A surfactant, an amphoteric surfactant, a polyhydric alcohol, a sugar, a polymer compound, a physiologically active ingredient, a transdermal absorption accelerator, a solvent, an antioxidant, a fragrance, an antiseptic, and the like can be blended.

本発明に係る化粧料の剤型は任意であり、化粧水、ローション、乳液、クリーム、パック、軟膏、分散液、固形物、ムース等の任意の剤型をとることができる。また、用途としては、化粧料の外、皮膚外用剤、医薬用軟膏等に好適に使用できる。   The dosage form of the cosmetic according to the present invention is arbitrary, and can take any dosage form such as lotion, lotion, emulsion, cream, pack, ointment, dispersion, solid, mousse and the like. Moreover, as a use, it can use suitably for cosmetics, a skin external preparation, a pharmaceutical ointment, etc.

なお、本発明者らはすでに、紫外線照射によるＨｔｒＡ１及びＨｔｒＡ２の炎症性因子に及ぼす作用について、それらの阻害剤であるｕｃｆ−１０１を作成した上で、検討したところ、紫外線によって誘導される炎症性因子群の産生を顕著に抑制することを確認している。つまりＨｔｒＡ１及びＨｔｒＡ２の活性化と表皮組織の炎症惹起の間には関連性があることが示唆されている。（The SID 67^th Annual Meeting、poster 032, 2006、The SID 68^th Annual Meeting、poster 820, 2007）
従って、本発明に係わるカバノキ科カバノキ属に属する植物、アカネ科カギカズラ属に属する植物、発酵茶葉由来成分及び／又はテアフラビン類を有効成分とするセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤を利用することで、紫外線誘導インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）及び／又は紫外線誘導プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ_２）などの炎症性因子産生を抑制することができる。さらに、カバノキ科カバノキ属、アカネ科カギカズラ属に属する植物、発酵茶葉由来成分及び／又はテアフラビン類を有効成分とするセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤を含む外用剤は、肌荒れ予防、肌荒れ緩和及び／又は肌荒れ症状改善効果、色素沈着予防、色素沈着緩和及び／又は色素沈着改善効果、しわ形成予防、しわ形成緩和及び／又はしわ改善効果を発揮する。 In addition, the present inventors have already examined the effect of ultraviolet irradiation on the inflammatory factors of HtrA1 and HtrA2 after preparing ucf-101, an inhibitor thereof, and found that inflammatory properties induced by ultraviolet rays. It has been confirmed that the production of factor groups is remarkably suppressed. That is, it has been suggested that there is a relationship between the activation of HtrA1 and HtrA2 and the induction of inflammation in the epidermal tissue. (The SID 67 ^th Annual Meeting, poster 032, 2006, The SID 68 ^th Annual Meeting, poster 820, 2007)
Therefore, the activity inhibitor of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2 comprising as an active ingredient a plant belonging to the genus Birchaceae, a plant belonging to the genus Rubiaceae, a component derived from fermented tea leaves and / or theaflavins according to the present invention is used. Thus, production of inflammatory factors such as UV-induced interleukin-1α (IL-1α) and / or UV-induced prostaglandin E2 (PGE ₂ ) can be suppressed. Furthermore, an external preparation containing an activity inhibitor of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2 containing a plant belonging to the genus Birchaceae, the plant belonging to the genus Rubiaceae, the component derived from fermented tea leaves and / or theaflavins as an active ingredient is prevention of rough skin, rough skin. It exhibits relief and / or rough skin symptom improvement effect, pigmentation prevention, pigmentation alleviation and / or pigmentation improvement effect, wrinkle formation prevention, wrinkle formation relaxation and / or wrinkle improvement effect.

以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲がこれらに限定されるものではない。   EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples, but the technical scope of the present invention is not limited to these examples.

［実施例１］
ＨｔｒＡ１およびＨｔｒＡ2活性阻害作用を有する植物抽出物のスクリーニング
１．試験の概容
ＨｔｒＡ１1およびＨｔｒＡ１2活性阻害作用を有する植物抽出物をスクリーニングした。 [Example 1]
Screening of plant extracts having inhibitory action on HtrA1 and HtrA2 activity Outline of Test Plant extracts having an inhibitory action on HtrA11 and HtrA12 activity were screened.

２．実験方法
２−１．蛍光基質（Ｄ−ｃａｓｅｉｎ−ＦＩＴＣ）を用いた活性測定法（一次スクリーニング）
９６ｗｅｌｌプレートに、終濃度７５０ｎｇのＨｔｒＡ１およびＨｔｒＡ２、表１に示す各植物抽出物およびｂｕｆｆｅｒを添加した。氷上にて１０分間インキュベート後、終濃度２．５μｇのＤ−ｃａｓｅｉｎ−ＦＩＴＣを添加し、３７℃にて反応を開始した。反応開始後、５分間隔にて最大３０分後までのＦＩＴＣ蛍光強度変化を蛍光プレートリーダーにて測定した。なお、各植物抽出物のうち、溶液タイプの植物抽出物は、凍結乾燥で得た固形分を用いて評価した。 2. Experimental method 2-1. Activity measurement method using fluorescent substrate (D-casein-FITC) (primary screening)
To 96-well plates, HtrA1 and HtrA2 having a final concentration of 750 ng, each plant extract and buffer shown in Table 1 were added. After incubation on ice for 10 minutes, a final concentration of 2.5 μg of D-casein-FITC was added, and the reaction was started at 37 ° C. The change in FITC fluorescence intensity was measured with a fluorescent plate reader at intervals of 5 minutes up to 30 minutes after the start of the reaction. In addition, the solution type plant extract was evaluated using the solid content obtained by freeze-drying among each plant extract.

２−２．電気泳動法を用いた活性測定法（二次スクリーニング）
１．５ｍＬエッペンドルフチューブに、終濃度５００ｎｇのＨｔｒＡ１及びＨｔｒＡ２、各植物抽出物およびbufferを添加した。氷上にて１０分間インキュベート後、終濃度４μｇのβ−ｃａｓｅｉｎを添加し、３７℃にて反応を開始した。３０分反応後、直ちに氷上にて急冷して反応を停止させた。停止後の反応液に対しＳＤＳサンプルｂｕｆｆｅｒを添加し、１００℃にて５分間ボイルした。反応液全量を１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにて展開し、クマシーブリリアントブルー染色にてβ−ｃａｓｅｉｎの分解程度を分子量比較にて検出した。なお、各植物抽出物のうち、溶液タイプの植物抽出物は、凍結乾燥で得た固形分を用いて評価した。 2-2. Activity measurement method using electrophoresis (secondary screening)
To a 1.5 mL Eppendorf tube, a final concentration of 500 ng of HtrA1 and HtrA2, each plant extract and buffer was added. After incubation on ice for 10 minutes, a final concentration of 4 μg of β-casein was added, and the reaction was started at 37 ° C. After the reaction for 30 minutes, the reaction was immediately stopped by quenching on ice. An SDS sample buffer was added to the reaction solution after stopping, and boiled at 100 ° C. for 5 minutes. The total amount of the reaction solution was developed with 12% SDS-PAGE, and the degradation degree of β-casein was detected by Coomassie Brilliant Blue staining by molecular weight comparison. In addition, the solution type plant extract was evaluated using the solid content obtained by freeze-drying among each plant extract.

３．結果
二次スクリーニングの電気泳動法の結果を図１に示した。ＨｔｒＡ１およびＨｔｒＡ２添加によるβ−ｃａｓｅｉｎの減少およびβ−ｃａｓｅｉｎ分解物の増加が認められたのに対し、紅茶抽出物、アセンヤク抽出物、ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物およびテアフラビン添加によるβ−ｃａｓｅｉｎの分解抑制およびβ−ｃａｓｅｉｎ分解物の生成抑制が認められた。特に、ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物およびテアフラビンではβ−ｃａｓｅｉｎ分解物の生成がほとんど確認されなかったことから、その作用が顕著であることが示された。ウーロン茶エキスについてもわずかながらＨｔｒＡ１およびＨｔｒＡ２添加によるβ−ｃａｓｅｉｎの減少およびβ−ｃａｓｅｉｎ分解物の増加が認められた。 3. Results The results of the secondary screening electrophoresis are shown in FIG. Decrease in β-casein and increase in β-casein degradation products by addition of HtrA1 and HtrA2 were observed, whereas degradation of β-casein by addition of black tea extract, Acacia yak extract, European birch bark extract and theaflavin and The production | generation suppression of (beta) -casein degradation product was recognized. In particular, the production of β-casein degradation products was hardly confirmed in the European birch bark extract and theaflavin, indicating that the action is remarkable. As for the oolong tea extract, a slight decrease in β-casein and an increase in β-casein degradation products were observed due to the addition of HtrA1 and HtrA2.

［実施例２］
各植物抽出物の炎症性因子の産生抑制作用
１．試験の概容
炎症性因子の過剰放出は、シワ形成の要因の一つであることが広く知られている。そこで、ＵＶＢによって産生が増加する代表的な炎症性サイトカインであるＩＬ−１αおよびＰＧＥ_２に対する、ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物およびテアフラビンの抑制作用を評価した。 [Example 2]
Inhibitory action of each plant extract on the production of inflammatory factors Outline of the test
It is widely known that excessive release of inflammatory factors is one of the factors of wrinkle formation. Therefore, for the IL-l [alpha] and PGE ₂ which is a typical inflammatory cytokine production is increased by UVB, it was evaluated inhibitory effect of European birch bark extract and theaflavins.

２．実験方法
正常ヒト表皮細胞（クラボウ）はＫＧ２培地（クラボウ）を用いて４８穴マイクロプレートに４．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度にて播種した。２４時間培養後、各試験試料を含有するＫＢ２培地（クラボウ）にて２時間培養した。過剰な試験試料をＨａｎｋ‘ｓ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｃａ^２＋， Ｍｇ^２＋無含有；ＨＢＳ（−））にて洗浄した後、再度同ｂｕｆｆｅｒに置換し、東芝ＦＬ−ＳＥランプを光源とするＵＶＢを所定エネルギーにて細胞に照射した。コントロール細胞はアルミ箔にてカバーしＵＶＢを遮蔽した。照射後、再度試験試料を含有するＫＢ２培地に交換し、細胞を２４時間培養した。 2. Experimental Method Normal human epidermal cells (Kurabo) were seeded at a cell density of 4.0 × 10 ⁴ cells / well in a 48-well microplate using KG2 medium (Kurabo). After culturing for 24 hours, the cells were cultured for 2 hours in KB2 medium (Kurabo) containing each test sample. After the excess test sample was washed with Hank's buffered solution (Ca ²⁺ , Mg ²⁺ not contained; HBS (−)), it was replaced with the same buffer again, and UVB using a Toshiba FL-SE lamp as a light source had a predetermined energy The cells were irradiated with Control cells were covered with aluminum foil and shielded from UVB. After irradiation, the medium was again replaced with KB2 medium containing the test sample, and the cells were cultured for 24 hours.

培地中に放出されたＩＬ−１αおよびＰＧＥ_２は、それぞれHuman IL-1α Quantikine^(R) ELISA kit（R&D systems）及びProstaglandine E₂ Express EIA kit（Cayman Chemical Company）用いて、添付のプロトコールに準拠して定量を実施した。また、同時に測定したタンパク量によって、ＩＬ−１αおよびＰＧＥ_２定量値を除することにより単位タンパク量あたりのＩＬ−１αおよびＰＧＥ_２産生量を算出した。 IL-l [alpha] and PGE ₂ released into the culture medium, respectively, using ^{Human IL-1α Quantikine (R)} ELISA kit (R & D systems) and _{Prostaglandine E 2 Express EIA kit (Cayman} Chemical Company), conforming to the attached protocol Quantification was performed. In addition, the IL-1α and PGE ₂ production amounts per unit protein amount were calculated by dividing the IL-1α and PGE ₂ quantitative values by the simultaneously measured protein amounts.

３．結果
結果を表２に示した。紅茶抽出物、アセンヤク抽出物、ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物およびテアフラビン添加による、ＩＬ−１αおよびＰＧＥ_２の産生増加抑制が認められた。また、ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物およびテアフラビンによる作用が特に顕著であった。 3. Results The results are shown in Table 2. Suppression of increased production of IL-1α and PGE ₂ was observed by the addition of black tea extract, Acacia yak extract, European birch bark extract and theaflavin. The action of European birch bark extract and theaflavin was particularly remarkable.

［実施例３］
各植物抽出物配合製剤のシワ、荒れ肌改善作用および色素沈着抑制作用
１．試験の概容
特に作用が強かったヨーロッパシラカバ樹皮抽出物およびテアフラビンを配合した製剤のシワ改善作用、荒れ肌改善作用および色素沈着抑制作用を評価した。 [Example 3]
Wrinkles, rough skin improving action and pigmentation inhibiting action of each plant extract formulation Outline of the test The wrinkle improving action, rough skin improving action and pigmentation inhibiting action of the preparation containing European birch bark extract and theaflavin, which were particularly effective, were evaluated.

２．実験方法
２−１．被験者
各製剤につき、一群健常人男性３０名。 2. Experimental method 2-1. Subjects: 30 healthy males per group for each formulation.

２−２．製剤使用方法および試験期間
各被験者は、プラセボ製剤および各植物抽出物１％を配合した試験製剤を、朝夕１日２回ずつ顔面頬および色素沈着誘導部位に使用した。頬における試験期間は８週間とし、使用前、４週間後および８週間後において各測定を実施した。一方、紫外線による色素沈着誘導部位における試験期間は３週間とし、使用前（色素沈着誘導前）、１週間、２週間および３週間後においてＬ＊値を測定した。 2-2. Formulation Usage Method and Test Period Each subject used a placebo formulation and a test formulation containing 1% of each plant extract twice a day in the morning and evening for the facial cheek and pigmentation induction site. The test period on the cheek was 8 weeks, and each measurement was performed before use, after 4 weeks and after 8 weeks. On the other hand, the test period at the site of pigmentation induction by ultraviolet rays was 3 weeks, and L * values were measured before use (before pigmentation induction), 1 week, 2 weeks and 3 weeks.

２−３．測定環境
各測定は、室温２１℃±２℃、相対湿度５０〜６０％に保たれた部屋にて実施した。被験者はあらかじめ所定の洗顔料にて洗顔したのちタオルにて水分を払拭し、測定室にて１５分間馴化した後、各測定を実施した。 2-3. Measurement environment Each measurement was carried out in a room kept at a room temperature of 21 ° C. ± 2 ° C. and a relative humidity of 50 to 60%. The subject washed the face with a predetermined face wash, then wiped off the moisture with a towel, acclimated for 15 minutes in the measurement room, and then performed each measurement.

２−４．レプリカによるシワ解析
レプリカは、ＳＩＬＦＬＯ（White:Davis Healthcare Services社）を用いて右目尻部から採取した。採取したレプリカは所定の方法によって固定平坦化し、斜光投影法によりシワ由来の陰影を抽出した。得られた陰影画像より、画像解析ソフトを用いてシワ面積率を求めた。シワ面積率の変化は０週目を１００%とした相対値で示した。 2-4. Wrinkle analysis using replicas Replicas were collected from the right eye corner using SILFLO (White: Davis Healthcare Services). The collected replica was fixed and flattened by a predetermined method, and a wrinkle-derived shadow was extracted by an oblique projection method. The wrinkle area ratio was obtained from the obtained shadow image using image analysis software. The change in the wrinkle area ratio is shown as a relative value with the 0th week as 100%.

２−５．荒れ肌改善作用評価
被験部位の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）はサイクロン水分蒸散計ＡＳ−ＣＴ１（有限会社アサヒバイオメッド）を用いて測定した。ＴＥＷＬの変化は、０週目を１００%とした相対値で示した。 2-5. Evaluation of rough skin improvement effect Transcutaneous moisture transpiration (TEWL) at the test site was measured using a cyclone moisture transpiration meter AS-CT1 (Asahi Biomed Co., Ltd.). The change in TEWL was expressed as a relative value with the 0th week as 100%.

２−６．色素沈着抑制作用評価
上腕内測部に対してソーラーシミュレーター（Multiport Solar UV Simulator Model 601, Solar Light Co., Inc.）を用いて１．５ＭＥＤの紫外線を曝露し、色素沈着を誘導した。色素沈着の色調は測色計（Color Reader CR-13, ミノルタ社）を用いた。色素沈着の程度はＬ＊値を用い、紫外線非照射部位のＬ＊値より紫外線照射部位におけるＬ＊値を引いたΔＬ＊値にて評価した。 2-6. Evaluation of Pigmentation Inhibitory Action In the upper arm measurement section, 1.5 MED ultraviolet rays were exposed using a solar simulator (Multiport Solar UV Simulator Model 601, Solar Light Co., Inc.) to induce pigmentation. A colorimeter (Color Reader CR-13, Minolta) was used for the color tone of the pigmentation. The degree of pigmentation was evaluated using the L * value, and the ΔL * value obtained by subtracting the L * value at the ultraviolet irradiation site from the L * value at the non-ultraviolet irradiation site.

３．結果
３−１．シワ改善作用
結果を表３に示した。プラセボ使用群と比較して、シラカバ抽出物およびテアフラビン各１％配合製剤使用群におけるシワ面積率の減少が認められた。 3. Result 3-1. Table 3 shows the results of the wrinkle improving effect. Compared with the placebo use group, the reduction | decrease of the wrinkle area rate in the birch extract and 1% each combination preparation use group of the birch extract and theaflavin was recognized.

３−２．荒れ肌改善作用
結果を表４に示した。プラセボ使用群と比較して、シラカバ抽出物およびテアフラビン各１％配合製剤使用群におけるＴＥＷＬの抑制が認められた。 3-2. Table 4 shows the results of the rough skin improving action. Compared with the placebo use group, suppression of TEWL was observed in the birch extract and theaflavin 1% combination preparation use groups.

３−３．色素沈着抑制作用
結果を表５に示した。プラセボ使用群と比較して、シラカバ抽出物およびテアフラビン各１％配合製剤使用群におけるΔL*値の減少が認められた。 3-3. The results of the pigmentation inhibitory action are shown in Table 5. Compared with the placebo group, a decrease in ΔL * value was observed in the group using 1% each of birch extract and theaflavin.

以下に、本発明のセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤を配合した皮膚外用剤の応用例を示す。配合量は質量％である。実施例４〜１３は、いずれも肌荒れ予防、肌荒れ緩和及び／又は肌荒れ症状改善効果、色素沈着予防、色素沈着緩和及び／又は色素沈着改善効果、しわ形成予防、しわ形成緩和及び／又はしわ改善効果が認められた。   Below, the application example of the skin external preparation which mix | blended the activity inhibitor of serine protease HtrA1 and / or HtrA2 of this invention is shown. A compounding quantity is the mass%. Examples 4 to 13 all have rough skin prevention, rough skin alleviation and / or rough skin symptom improvement effect, pigmentation prevention, pigmentation relaxation and / or pigmentation improvement effect, wrinkle formation prevention, wrinkle formation alleviation and / or wrinkle improvement effect. Was recognized.

［実施例４］
美容液
質量％
ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物 ０．１
スクワラン １．０
べヘニルアルコール ４．０
ワセリン ３．０
流動パラフィン １５．０
モノラウリン酸デカグリセリル １．０
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
３．０
キサンタンガム ０．１
１，３−ブチレングリコール １０．０
防腐剤 適量
香料 適量
精製水 残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製法の常法に従い調製した。 [Example 4]
Serum
mass%
European birch bark extract 0.1
Squalane 1.0
Behenyl alcohol 4.0
Vaseline 3.0
Liquid paraffin 15.0
Decaglyceryl monolaurate 1.0
Monostearic acid POE (20) sorbitan
3.0
Xanthan gum 0.1
1,3-butylene glycol 10.0
Preservative Appropriate amount Fragrance Appropriate amount Purified water Remainder (Preparation method)
The oil-in-water emulsion composition was prepared according to a conventional method.

［実施例５］
化粧水
質量％
シラカンバ樹皮抽出物 １．０
アセンヤク抽出物 １．０
ε−アミノカプロン酸 ０．１
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム
０．１
カモミラエキス ０．１
コンドルスクリスプスエキス ０．１
シソエキス ０．１
スクワラン ０．２
モノラウリン酸デカグリセリル ２．０
ヒアルロン酸ナトリウム ０．２
１，３−ブチレングリコール ３．０
エチルアルコール １０．０
防腐剤 適量
香料 適量
精製水 残部
（調製方法）
全ての成分を５０℃で均一になるまで混合し、調製した。 [Example 5]
Lotion
mass%
Birch bark extract 1.0
Asenyaku extract 1.0
ε-aminocaproic acid 0.1
L-ascorbic acid-2-magnesium phosphate
0.1
Chamomile extract 0.1
Condor crisp extract 0.1
Perilla extract 0.1
Squalane 0.2
Decaglyceryl monolaurate 2.0
Sodium hyaluronate 0.2
1,3-butylene glycol 3.0
Ethyl alcohol 10.0
Preservative Appropriate amount Fragrance Appropriate amount Purified water Remainder (Preparation method)
All ingredients were mixed and prepared at 50 ° C. until uniform.

［実施例６］
クリーム２（エモリエントタイプ）
質量％
紅茶抽出物 ０．０５
ｕｃｆ−１０１ ０．０００１
テトラヘキシルデカン酸アスコルビル １．０
トリヘキシルデカン酸ピリドキシン ０．５
ｄｌ−α−トコフェロール ０．２
パルミチン酸レチノール ０．１
水添レチノール ０．１
スクワラン １０．０
ミリスチン酸イソセチル ６．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル ３．０
マカデミアナッツ油 １．０
ジメチルポリシロキサン ０．２
セタノール ５．０
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル １．０
テトラオレイン酸ＰＯＥ（４０）ソルビット
０．５
モノステアリン酸グリセリル １．０
水素添加大豆レシチン ０．２
１，３−ブチレングリコール ５．０
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．４
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。 [Example 6]
Cream 2 (emollient type)
mass%
Black tea extract 0.05
ucf-101 0.0001
Ascorbyl tetrahexyldecanoate 1.0
Trihexyldecanoic acid pyridoxine 0.5
dl-α-tocopherol 0.2
Retinol palmitate 0.1
Hydrogenated retinol 0.1
Squalane 10.0
Isocetyl myristate 6.0
Glyceryl tri-2-ethylhexanoate 3.0
Macadamia nut oil 1.0
Dimethylpolysiloxane 0.2
Cetanol 5.0
POE (20) cetyl ether 1.0
Tetraoleic acid POE (40) Sorbit
0.5
Glyceryl monostearate 1.0
Hydrogenated soybean lecithin 0.2
1,3-butylene glycol 5.0
Xanthan gum 0.1
Sodium hyaluronate 0.01
Citric acid 0.1
Sodium citrate 0.4
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
It was prepared according to a conventional method for producing an oil-in-water emulsion composition.

［実施例７］
美容オイル
（処方） 質量％
テアフラビン ０．００１
ミリスチン酸イソセチル １０．０
ホホバ油 ５．０
ブドウ種子油 １．０
天然ビタミンＥ ０．１
リノール酸レチノール ０．１
油溶性甘草エキス ０．１
スクワラン 残部
（調製方法）
全ての成分を５０℃で均一になるまで混合し、調製した。 [Example 7]
Beauty oil (prescription)
Theaflavin 0.001
Isocetyl myristate 10.0
Jojoba oil 5.0
Grape seed oil 1.0
Natural vitamin E 0.1
Retinol linoleate 0.1
Oil-soluble licorice extract 0.1
The remaining squalane (preparation method)
All ingredients were mixed and prepared at 50 ° C. until uniform.

［実施例８］
スキンローション
（処方） 質量％
トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル
０．１
ＰＯＰ（４）ＰＯＥ（２０）セチルエーテル
０．６
プロピレングリコール １０．０
紅茶抽出物 ０．５
ウーロン茶抽出物 ０．５
プーアル茶抽出物 ０．５
カギカズラ抽出物 ０．５
グリチルレチン酸ジカリウム ０．２
ギガルチナステラータエキス ０．２
ブドウエキス ０．００１
エルゴチオネイン ０．００１
乳酸、グルコース、クエン酸、リンゴ酸、
チャエキスの混合物 ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。 [Example 8]
Skin lotion (prescription)
Tri (caprylic acid / capric acid) glyceryl
0.1
POP (4) POE (20) cetyl ether
0.6
Propylene glycol 10.0
Black tea extract 0.5
Oolong tea extract 0.5
Puer tea extract 0.5
Keystone extract 0.5
Dipotassium glycyrrhetinate 0.2
Gigalchinasterata extract 0.2
Grape extract 0.001
Ergothioneine 0.001
Lactic acid, glucose, citric acid, malic acid,
Cha extract mixture 0.3
Sodium hyaluronate 0.1
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
It was prepared according to a conventional method for producing an oil-in-water emulsion composition.

［実施例９］
乳液
（処方） 質量％
ｄ−δ−トコフェロール ０．１
油溶性トマトエキス（リコピン１％含有） ０．０１
スクワラン ５．０
２−エチルヘキサン酸セチル ５．０
ジメチルポリシロキサン ０．５
パルミチン酸セチル ０．５
ベヘニルアルコール １．５
ステアリン酸 ０．５
セラミド２ ０．１
キミルアルコール ０．１
親油型モノステアリン酸グリセリル
１．０
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
１．０
テトラオレイン酸ＰＯＥ（４０）ソルビタン
１．５
プロピレングリコール ７．０
ベツラペンデュラ抽出液 ５．０
塩酸グルコサミン、海藻エキス、酵母エキス
および尿素の混合物 ０．３
キサンタンガム ０．１
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。 [Example 9]
Emulsion (prescription) mass%
d-δ-tocopherol 0.1
Oil-soluble tomato extract (containing 1% lycopene) 0.01
Squalane 5.0
Cetyl 2-ethylhexanoate 5.0
Dimethylpolysiloxane 0.5
Cetyl palmitate 0.5
Behenyl alcohol 1.5
Stearic acid 0.5
Ceramide 2 0.1
Kimyl alcohol 0.1
Lipophilic glyceryl monostearate
1.0
Monostearic acid POE (20) sorbitan
1.0
Tetraoleic acid POE (40) sorbitan
1.5
Propylene glycol 7.0
Betula Pendula Extract 5.0
Mixture of glucosamine hydrochloride, seaweed extract, yeast extract and urea 0.3
Xanthan gum 0.1
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
It was prepared according to a conventional method for producing an oil-in-water emulsion composition.

［実施例１０］
クリーム３（油中水型エモリエントタイプ）
（処方） 質量％
アセンヤク抽出物 １．０
ε−アミノカプロン酸セチル ０．１
亜鉛グリシン錯体 ０．１
ジメチコンコポリオール ０．５
デカメチルシクロペンタシロキサン ５．０
トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル
１５．０
ミツロウ ２．０
ペンタヒドロキシ酸デカグリセリル ２．０
イソステアリン酸 １．０
グリセリン ４．５
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
油中水型乳化組成物の乳化法の常法に従い、乳化組成物を調製した。 [Example 10]
Cream 3 (water-in-oil emollient type)
(Prescription) Mass%
Asenyaku extract 1.0
cetyl ε-aminocaproate 0.1
Zinc glycine complex 0.1
Dimethicone copolyol 0.5
Decamethylcyclopentasiloxane 5.0
Tri (Capryl / Capric Acid) Glyceryl
15.0
Beeswax 2.0
Decaglyceryl pentahydroxy acid 2.0
Isostearic acid 1.0
Glycerin 4.5
Sodium hyaluronate 0.01
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
An emulsified composition was prepared according to a conventional method for emulsifying water-in-oil emulsified compositions.

［実施例１１］
サンスクリーンクリーム
（処方） 質量％
ヨーロッパシラカバ葉抽出物 ０．５
ヨーロッパシラカバ樹皮抽出物 ０．５
トウカギカズラ抽出物 ０．５
流動パラフィン ７．０
デカメチルシクロペンタシロキサン ３．０
セチルアルコール ４．０
縮合リシノール酸ヘキサグリセリル ０．５
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル １．０
パラメトキシ桂皮酸オクチル ７．０
酸化チタン ３．０
セチル硫酸ナトリウム １．０
ステアロイルメチルタウリンナトリウム ０．３
１，３−ブチレングリコール ５．０
キサンタンガム ０．３
ピロリドンカルボン酸ナトリウム ０．１
ツボクサエキス ０．１
スギナエキス ０．１
ローズマリーエキス ０．１
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
粉体相を油相中に添加した後、油中水型乳化組成物の乳化法の常法に従い、乳化組成物を調製した。 [Example 11]
Sunscreen cream (prescription)
European birch leaf extract 0.5
European birch bark extract 0.5
Capsicum extract 0.5
Liquid paraffin 7.0
Decamethylcyclopentasiloxane 3.0
Cetyl alcohol 4.0
Condensed ricinoleic acid hexaglyceryl 0.5
POE (20) cetyl ether 1.0
Octyl paramethoxycinnamate 7.0
Titanium oxide 3.0
Sodium cetyl sulfate 1.0
Stearoyl methyl taurine sodium 0.3
1,3-butylene glycol 5.0
Xanthan gum 0.3
Sodium pyrrolidonecarboxylate 0.1
Camellia extract 0.1
Horsetail extract 0.1
Rosemary extract 0.1
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
After the powder phase was added to the oil phase, an emulsion composition was prepared according to a conventional method for emulsifying water-in-oil emulsion compositions.

［実施例１２］
外用剤（軟膏製剤）
（処方） 質量％
シラカンバ樹皮抽出物 １０．０
ＰＯＥ（３０）セチルエーテル ２．０
モノステアリン酸グリセリル １０．０
流動パラフィン １０．０
白色ワセリン ５．０
セタノール ６．０
プロピレングリコール １０．０
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
軟膏組成物の製造方法の常法に従い、乳化組成物を調製した。 [Example 12]
External preparation (ointment formulation)
(Prescription) Mass%
Birch bark extract 10.0
POE (30) cetyl ether 2.0
Glyceryl monostearate 10.0
Liquid paraffin 10.0
White petrolatum 5.0
Cetanol 6.0
Propylene glycol 10.0
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
An emulsified composition was prepared according to a conventional method for producing an ointment composition.

［実施例１３］
外用剤（乳剤）
（処方） 質量％
ＧＰＩカリウム塩 １５．０
白色ワセリン ４１．０
マイクロクリスタリンワックス ３．０
ラノリン １０．０
モノオレイン酸ソルビタン ４．７５
モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン ０．２５
防腐剤 適量
精製水 残部
（調製方法）
乳剤組成物の製造方法の常法に従い、乳化組成物を調製した。 [Example 13]
External preparation (emulsion)
(Prescription) Mass%
GPI potassium salt 15.0
White petrolatum 41.0
Microcrystalline wax 3.0
Lanolin 10.0
Sorbitan monooleate 4.75
Monooleic acid POE (20) sorbitan 0.25
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
An emulsion composition was prepared according to a conventional method for producing an emulsion composition.

電気泳動法を用いた活性測定法（二次スクリーニング）の結果を示す図である。It is a figure which shows the result of the activity measuring method (secondary screening) using the electrophoresis method.

Claims (3)

カバノキ科カバノキ属に属する植物、アカネ科カギカズラ属に属する植物、発酵茶葉由来成分及び／又はテアフラビン類から選ばれる１種または２種以上を有効成分とするセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤。 An activity inhibitor of serine proteases HtrA1 and / or HtrA2 containing as an active ingredient one or more selected from plants belonging to the genus Birchaceae, plants belonging to the genus Caenaceae, fermented tea leaf-derived components and / or theaflavins . 前記カバノキ科カバノキ属に属する植物がヨーロッパシラカバ及び／又はシラカバであり、アカネ科カギカズラ属に属する植物がガンビールノキであり、発酵茶葉が紅茶であることを特徴とする請求項１に記載のセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤。 The serine protease HtrA1 according to claim 1, wherein the plant belonging to the genus Birchaceae is European birch and / or birch, the plant belonging to the genus Rubiaceae is Gambirium, and the fermented tea leaf is black tea. And / or an activity inhibitor of HtrA2. 更に、抗酸化剤、細胞賦活剤よりなる群から選択された薬効剤の少なくとも１種を含有することを特徴とする請求項１又は２のいずれか一項に記載のセリンプロテアーゼＨｔｒＡ１及び／又はＨｔｒＡ２の活性阻害剤。 The serine protease HtrA1 and / or HtrA2 according to any one of claims 1 and 2, further comprising at least one medicinal agent selected from the group consisting of an antioxidant and a cell activator. Activity inhibitors.