KR20140004897A - Cosmetic composition containing ginsenoside rd and ginsenoside f2 for improving skin wrinkle - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 진세노사이드 Rd와 F2를 유효성분으로 포함하는 주름 예방 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for preventing and improving wrinkles containing ginsenosides Rd and F2 as an active ingredient.
피부는 외부로부터 신체를 보호하는 것 이외에도 체온조절, 피지분비 및 모발생성 등의 항상성 유지에 필요한 기능을 하고 있다. 외부의 화학적, 물리적 자극, 스트레스 및 영양상태 등에 의해 피부의 기능이 불균형하게 되면 피부에 존재하는 세포의 활성이 저하되고, 피부의 구성 성분들이 본래의 안정한 구조를 유지하기 못하게 되어 주름이 생기게 된다. 피부진피를 구성하는 성분으로는 섬유아세포 및 내피세포 등의 세포들과 콜라겐, 엘라스틴 및 파이브로넥틴과 같은 ECM을 구성하는 물질들이 있다. 이들 ECM 구성물질들은 진피의 구조를 형성하고 안정화시키는데 이들이 비정상적으로 생성되거나 분해되면 이것은 피부 전체의 구조에 영향을 주어 피부에 주름이 생기고 피부탄력이 저하된다.In addition to protecting the body from the outside, the skin functions to maintain homeostasis such as body temperature control, sebum secretion, and hair generation. If the function of the skin is unbalanced due to external chemical, physical stimulation, stress and nutritional state, the activity of the cells existing in the skin is lowered, and the constituents of the skin can not maintain the original stable structure and wrinkles are formed. Components constituting the skin dermis include cells such as fibroblasts and endothelial cells, and materials constituting ECM such as collagen, elastin and fibronectin. These ECM constituents form and stabilize the structure of the dermis. When they are abnormally produced or degraded, it affects the structure of the entire skin, causing wrinkles on the skin and reducing skin elasticity.
피부노화 현상으로부터 피부 고유의 기능을 회복시키고 피부세포를 활성화시켜 피부 주름 생성을 억제하기 위한 많은 연구가 진행되었다. 특히 인삼성분을 이용한 화장료의 연구개발이 다수 이루어졌다. 피부에 대한 인삼의 효능이 일찍이 입증되어 화장료 조성물에 널리 사용되어 왔다. 이러한 인삼의 효능은 주로 인삼 사포닌이 관여하는데, 아글리콘에 결합되어 있는 당의 종류나 결합된 당류의 수 또는 결합위치에 따라 약리효능이 각각 다르다는 것이 이미 밝혀져 있다.Many studies have been carried out to restore the skin's inherent function from the skin aging phenomenon and to activate skin cells to suppress skin wrinkle formation. In particular, many researches and developments of cosmetic ingredients using ginseng ingredients have been made. The efficacy of ginseng on skin has been proven early and has been widely used in cosmetic compositions. The ginseng saponin is mainly involved in the efficacy of ginseng, and it has already been known that the pharmacological effects are different depending on the kind of sugar bound to the aglycon, the number of sugar chains bound to the aglycon, or the bonding position.
이 중에서 진세노사이드 Rd는 부신피질 호르몬 분비 촉진 작용, 코티코스테론 분비 촉진작용, mesenchyme 세포증식 억제(신장사구체 비대 억제작용) 등이 있는 성분으로 알려져 있으며, F2는 종양세포에 대한 증식억제, 종양세포나 세균에서 나타나는 다제내성을 반전시키는 효과등이 있는 성분으로 알려져 있다(한국생약학회지 28(1), 35, 성종환 등 1997년).Among them, ginsenoside Rd is known to be a component that promotes adrenocortical hormone secretion, promotes corticosterone secretion, inhibits mesenchyme cell proliferation (renal glomerular hypertrophy), F2 inhibits proliferation of tumor cells, And the effect of reversing the multidrug resistance in cells or bacteria (Korean Journal of Biomedical Sciences, 28 (1), 35, Sung Jong Hwan, 1997).
이러한 진세노사이드 Rd와 F2에 관한 연구는 아직 상대적으로 적은편이다. 진세노사이드 Rd와 F2는 화합물 K가 생성되기 전의 중간체 화합물이다. 따라서 이를 위한 중간체 사포닌을 이용한 화장품 제조에 관한 공지된 기술로는 대한민국 특허공보 등록번호 10-0997441에서는 진세노사이드 Rd의 제조방법과 주름개선용 화장료 조성물의 효과를 개시하고 있다.The research on these ginsenosides Rd and F2 is still relatively small. The ginsenosides Rd and F2 are intermediate compounds before the compound K is formed. Therefore, Korean Patent Publication No. 10-0997441 discloses a method for producing ginsenoside Rd and a cosmetic composition for improving wrinkles as a known technique for manufacturing cosmetics using intermediate saponin for this purpose.
그러나 이러한 사포닌 함유한 화장료등은 단일 진세노사이드에 관한 것이다. 본 발명자들은 인삼 또는 홍삼에 함유된 진세노사이드 성분 중 진세노사이드 Rd와 F2의 혼합이 피부 주름을 예방 및 개선하는데 탁월한 효과가 있음을 발견하고, 이들을 최적의 비로 함유하고 있는 피부 주름개선용 화장료 조성물에 관한 본 발명을 완성하였다.However, such cosmetic compositions containing saponin are related to single ginsenosides. The present inventors have found that the mixing of ginsenosides Rd and F2 in the ginsenoside components contained in ginseng or red ginseng has an excellent effect in preventing and improving wrinkles of the skin, and finds that cosmetic compositions for improving skin wrinkles To complete the present invention.
본 발명의 목적은 진세노사이드 Rd와 F2를 유효성분으로 포함하고 있는 주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다. 특히, 엘라스타제(elastase)의 활성을 억제하고, MMP-1 생성을 억제하며 콜라겐의 생합성을 촉진함으로써 주름을 개선하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition for improving wrinkles containing ginsenosides Rd and F2 as an active ingredient. In particular, it is an object of the present invention to provide a cosmetic composition which suppresses the activity of elastase, suppresses MMP-1 production, promotes collagen biosynthesis, and thereby improves wrinkles.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따르면 진세노사이드 Rd 및 F2를 유효성분으로 함유하는 주름개선용 화장료 조성물이 제공된다. 이 경우 상기 진세노사이드 Rd 및 F2는 1:10~10:1의 중량비로 혼합되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 1:1~5:1의 중량비로 혼합되는 것이며, 가장 바람직하게는 3:1의 비율로 혼합되는 것이다. In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition for improving wrinkles containing ginsenosides Rd and F2 as active ingredients. In this case, the ginsenosides Rd and F2 are preferably mixed at a weight ratio of 1:10 to 10: 1, more preferably 1: 1 to 5: 1, most preferably 3: 1 < / RTI >
상기 조성물의 유효성분인 진세노사이드 Rd와 F2는 엘라스타제(elastase)의 활성을 억제하고, MMP-1 생성을 억제하며 콜라겐의 생합성을 촉진함으로써 주름을 개선한다. 상기 진세노사이드 혼합물은 파우더 형태나 나노캡슐화, 마이크로캡슐화 또는 나노좀화 되어 용액 형태의 원료로 적용될 수 있다. 상기 진세노사이드 Rd 및 F2 혼합물은 조성물 전 중량에 대해서 0.00001~50중량% 함유되는 것이 바람직하다.The active ingredients of the composition, ginsenosides Rd and F2, inhibit the activity of elastase, inhibit MMP-1 production, and promote collagen biosynthesis, thereby improving wrinkles. The ginsenoside mixture may be applied as a raw material in the form of a powder or nanoencapsulated, microencapsulated or nanosomes. The mixture of ginsenosides Rd and F2 is preferably contained in an amount of 0.00001 to 50% by weight based on the total weight of the composition.
또한, 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌져, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이새도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.The cosmetic composition containing ginsenosides Rd and F2 can be used as a skin lotion, a skin softener, a skin toner, an astringent, a lotion, a milk lotion, a moisturizing lotion, a nutrition lotion, a massage cream, The present invention can be applied to any one of the formulations selected from the group consisting of a pack, a soap, a shampoo, a cleansing foam, a cleansing lotion, a cleansing cream, a body lotion, a body cleanser, a latex, a press powder, a loose powder,
본 발명의 진세노사이드 Rd와 F2가 최적의 비로 이루어진 혼합물은 섬유아세포 증식 효과, 콜라겐 생합성 촉진 효과, 엘라스타제 활성저해 효과, 항산화 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 피부 주름 개선 및 예방 효과가 우수한 화장료로 유용하다.The mixture in which the ginsenosides Rd and F2 of the present invention are optimally mixed exhibits a fibroblast proliferation effect, a collagen biosynthesis promoting effect, an elastase activity inhibition effect, and an antioxidation effect. Accordingly, the cosmetic composition of the present invention is useful as a cosmetic composition having excellent wrinkle and prevention of skin wrinkles.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 진세노사이드 Rd 및 F2는 다음과 같이 제조할 수 있다. The ginsenosides Rd and F2 of the present invention can be prepared as follows.
건조된 인삼에 에탄올 등의 저급알코올을 가하여 추출온도 100℃에서 2시간 추출하고, 여과한 후 알코올을 증발하여 홍삼추출 엑기스를 얻었다. 홍삼추출 엑기스에 락토바실러스 펙티나아제를 가하여 20~60℃에서 1~72시간 반응시킨다. 반응시켜 얻어진 아글리콘(Aglycon)을 유기용매에 녹인 후, 감압증발기로 건조하여 진세노사이드 Rd 및 F2에 해당하는 파우더를 얻는다.The dried ginseng was added with a lower alcohol such as ethanol and extracted at an extraction temperature of 100 ° C for 2 hours. After filtration, alcohol was evaporated to obtain red ginseng extract. Lactobacillus pectinase is added to red ginseng extract and reacted at 20 to 60 ° C for 1 to 72 hours. Aglycon obtained by the reaction is dissolved in an organic solvent and then dried with a vacuum evaporator to obtain a powder corresponding to ginsenosides Rd and F2.
본 발명의 진세노사이드 Rd 및 F2를 혼합하는 바람직한 혼합비는 진세노사이드 Rd 및 F2가 1:10~10:1, 더욱 바람직하게는 1:1~5:1의 중량비로 혼합되는 것이며, 가장 바람직하게는 3:1의 비율로 혼합되는 것이다.A preferred mixing ratio of the ginsenosides Rd and F2 of the present invention is that the ginsenosides Rd and F2 are mixed in a weight ratio of 1:10 to 10: 1, more preferably 1: 1 to 5: 1, To be mixed at a ratio of 3: 1.
한편, 본 발명의 진세노사이드 혼합물의 제조에 있어서, 인삼의 효소반응으로부터 Rd와 F2가 혼합되어 있는 파우더를 얻을 수도 있고, 각각의 진세노사이드를 얻은 후 혼합할 수도 있다. 상기 진세노사이드 Rd 및 F2 혼합물은 조성물 전 중량에 대해서 0.00001~50중량% 함유되는 것이 바람직하다.On the other hand, in the production of the ginsenoside mixture of the present invention, a powder in which Rd and F2 are mixed can be obtained from an enzyme reaction of ginseng, or may be mixed after obtaining each ginsenoside. The mixture of ginsenosides Rd and F2 is preferably contained in an amount of 0.00001 to 50% by weight based on the total weight of the composition.
만약 상기 진세노사이드 Rd 및 F2가 파우더 형태 또는 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀등의 제형으로 용액 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액 또는 파우더의 양을 조절할 수 있을 것이다.If the ginsenosides Rd and F2 are present in powder form or in solution form in the form of nanocapsules, microcapsules, nanosomes, etc., those skilled in the art will control the amount of this solution or powder in the composition according to the invention within the above concentration range. Could be.
본 발명 진세노사이드 Rd와 F2를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.The present invention can be manufactured in the form of a general emulsified formulation and a solubilized formulation in the form of a cosmetic preparation comprising a cosmetic composition containing ginsenosides Rd and F2 as an active ingredient. Cosmetics of emulsified form include nutrition lotion, cream, essence, etc., and cosmetics of solubilized form have softening longevity. In addition to cosmetics containing the ginsenosides Rd and F2 of the present invention, they can also be prepared in the form of adjuvants which can be applied locally or systemically, which is conventionally used in the field of dermatology by containing a dermatologically acceptable medium or base .
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 진세노사이드 Rd 및 F2 혼합물에 추가로 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. In addition, the cosmetic composition of the present invention may further comprise, in addition to the mixture of ginsenosides Rd and F2, a fat substance, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, Surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, barrier agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, lipophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics Or any other ingredient conventionally used in cosmetics or dermatology. And the above ingredients may be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형으로 적용될 수 있다. The cosmetic composition of the present invention can be used as a skin lotion, a skin softener, a skin toner, an astringent, a lotion, a milk lotion, a moisturizing lotion, a nutrition lotion, a massage cream, a nutritive cream, a moisturizing cream, a hand cream, , Cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, press powder, loose powder, eye shadow and the like.
[실시예][Example]
이하, 본 발명을 하기 실시예 및 시험예에 의거하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on the following Examples and Test Examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.
제조예 1 : 진세노사드 Rd 제조Production Example 1: Production of Ginsenoside Rd
인삼을 정제수로 세척한 후 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 7~8배의 에탄올을 가한다. 100℃에서 2시간 환류시켜 끓인 다음 여과해서 추출액을 얻은 다음 에탄올을 증발하여 인삼엑기스를 얻었다. 인삼추출 엑기스를 수성용매에 용해시키고 미생물 유래의 락토바실러스 펙티나아제를 가하고 20 ~ 60℃에서 1~72시간 반응시킨 후 진세노사이드 Rd가 함유된 아글리콘(aglycon)을 얻었다. 이 아글리콘(aglycon)을 유기용매에 용해시킨 후, 감압증발기로 유기용매를 증발시킨 후 진세노사이드 Rd를 제조하였다.
Ginseng is washed with purified water and broken into small pieces, and then ethanol 7 to 8 times its dry weight is added thereto. The mixture was boiled under reflux at 100 ° C. for 2 hours, filtered to obtain an extract, and ethanol was evaporated to obtain a ginseng extract. Ginseng extract extract was dissolved in an aqueous solvent and lactobacillus pectinase derived from microorganism was added and reacted at 20 to 60 ° C. for 1 to 72 hours to obtain aglycon (aglycon) containing ginsenoside Rd. After dissolving aglycon in an organic solvent, the organic solvent was evaporated with a reduced pressure evaporator to prepare ginsenoside Rd.
제조예 2 : 진세노사드 F2 제조Production Example 2: Production of Ginsenoside F2
인삼을 정제수로 세척한 후 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 7~8배의 에탄올을 가한다. 100℃에서 2시간 환류시켜 끓인 다음 여과해서 추출액을 얻은 다음 에탄올을 증발하여 인삼엑기스를 얻었다. 인삼추출 엑기스를 수성용매에 용해시키고 미생물 유래의 락토바실러스 펙티나아제를 가하고 20 ~ 60℃에서 1~72시간 반응시킨 후 진세노사이드 F2가 함유된 아글리콘(aglycon)을 얻었다. 이 아글리콘(aglycon)을 유기용매에 용해시킨 후, 감압증발기로 유기용매를 증발시킨 후 진세노사이드 F2를 제조하였다.
Ginseng is washed with purified water and broken into small pieces, and then ethanol 7 to 8 times its dry weight is added thereto. The mixture was boiled under reflux at 100 ° C. for 2 hours, filtered to obtain an extract, and ethanol was evaporated to obtain a ginseng extract. The extract of ginseng extract was dissolved in an aqueous solvent, and lactobacillus pectinase derived from microorganism was added thereto. After reacting at 20 to 60 ° C for 1 to 72 hours, aglycon containing ginsenoside F2 was obtained. After dissolving the aglycon in an organic solvent, the organic solvent was evaporated with a reduced pressure evaporator to prepare ginsenoside F2.
상기 제조예 1과 2에서 제조한 진세노사이드 Rd와 F2, 그리고 이를 각각 1:10, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1로 혼합한 혼합물을 농도별로 디메틸설폭사이드에 희석하여 제조한 희석용액을 실험에 사용하였다.
The mixture of ginsenosides Rd and F2 prepared in Preparation Examples 1 and 2 and 1:10, 1: 1, 3: 1, 5: 1 and 10: 1, respectively, was diluted with dimethyl sulfoxide Was used for the experiment.
시험예 1 : 엘라스타제 제어 활성시험Test Example 1: Elastase control activity test
0.1 중량% Elastin-Congo red(Sigma, USA)가 포함된 2.5 중량% agar에 시험시료 및 엘라스테이즈 효소 용액(1,000 units/mL, Sigma, USA)을 혼합하고 상온에서 10분간 반응시킨 용액 10 ul 씩 주입 후 37℃에서 18시간 배양하였다. 배양 종료 후 엘라스테이즈의 활성에 의해 Elastin-Congo red agar 주변에 투명대가 형성되면 그 헤일로(halo)의 직경을 측정하여 엘라스테이즈 활성 저해 효과를 측정할 수 있다.10 ul of a solution prepared by mixing test sample and elastase enzyme solution (1,000 units / mL, Sigma, USA) with 2.5 wt% agar containing 0.1 wt% Elastin-Congo red (Sigma, USA) and reacting at room temperature for 10 minutes. After injection, the cells were incubated at 37 ° C. for 18 hours. After the incubation period, when the zona pellucida is formed around the Elastin-Congo red agar by the activity of the elastase, the effect of inhibiting the elastase activity may be measured by measuring the diameter of the halo.
엘라스틴을 포함하는 한천배지에 엘라스타제만을 적가하는 한편, 상기 진세노사이드 Rd와 F2 그리고 이들을 10:1, 1:1, 3:1, 5:1, 1:10 중량비로 혼합한 농도가 0.01, 0.05, 0.1 및 0.5%되는 용액을 시료로 하여 엘라스타제와 함께 적가하여 배지 상에 나타나는 헤일로(halo)의 직경을 측정하여 진세노사이드 Rd와 F2혼합의 엘라스타제 저해활성을 측정하였으며, 대조예로서 retinol crystal을 엘라스타제와 함께 적가하여 비교하였다.Elastase was added only to the agar medium containing elastin, and the concentrations of the above ginsenosides Rd and F2, and the concentrations thereof in the weight ratio of 10: 1, 1: 1, 3: 1, 5: , 0.05, 0.1 and 0.5% as a sample was added dropwise with the elastase to measure the diameter of the halo appearing on the medium to measure the elastase inhibitory activity of the mixture of ginsenoside Rd and F2, As a control, retinol crystals were added dropwise with elastase and compared.
상기 시험결과 하기의 표 1과 같은 결과를 얻었다.As a result of the test, the results shown in Table 1 were obtained.
농도
(%)sample
density
(%)
사이드 RdJinseno
Side Rd
사이드 F2Jinseno
Side F2
crystalRetinol
crystal
1.8
헤일로 직경(Halo diameter)이 클수록 엘라스틴의 분해가 많이 된 것인데, 상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 진세노사이드 Rd, F2 및 이들의 혼합을 처리했을 때 헤일로 직경(halo diameter)이 감소하는 것으로 우수한 엘라스타제 억제 효과를 나타냄을 알 수 있었고, 각각의 추출물을 처리한 경우에 비하여 진세노사이드 Rd와 F2의 혼합으로 처리하였을 때 상승적인 효과가 있음을 알 수 있었고, 1:1~5:1의 혼합비에서 더 우수한 효과를 나타내었으며, 그 중에서도 3:1의 혼합의 효과가 가장 우수한 것으로 나타났다.
The greater the Halo diameter, the greater the degradation of elastin. As can be seen in Table 1 above, halo diameters are reduced when treated with ginsenosides Rd, F2, and mixtures thereof And it was found that the effect of the mixture of ginsenosides Rd and F2 was synergistic when compared with the case of treatment with each of the extracts. It was found that 1: 1 ~ 5: 1 , And the effect of mixing 3: 1 was the best among them.
시험예 2: 콜라겐 생합성 촉진효과시험Test Example 2: Test for promoting collagen biosynthesis
섬유아세포를 10% FBS를 첨가한 IMDM 배지에 5×105의 세포농도로 접종하여 37℃, 5% CO2배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양하여 제조예 1 과 2에서 제조한 진세노사이드 Rd와 F2 그리고 이를 각각 1:10, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1로 혼합한 혼합물을 최종 농도가 50, 100, 500, 1000㎍/㎖가 되도록 디메틸설폭시드에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여 18시간 동안 동일 조건에서 배양 후 1시간 동안 UV를 조사시켜 세포에 스트레스를 주었다. 이후 Trizol reagent(invitrogen, USA)를 이용하여 섬유아세포를 회수하여 mRNA를 추출하여 일련의 과정을 거쳐 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA로부터 PROCOLLAGEN TYPEⅠ유전자 부위를 증폭시켜 전기영동을 통해 유전자 발현 양을 확인하였으며, 유전자 증폭은 thermal cycler (GenePro, Hangzhou bioer tech., CHINA)를 사용하여 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: AGC CAG CAG ATC GAG AAC AT, R: TCT TGT CCT TGG GGT TCT TG), taq polymerase를 혼합하고 증류수를 더하여 50 uL로 조정 후 95도 5분 1cycle/95도 1분/51도 2분/72도 1분 28 cycle 증폭, 72도에서 5분간 반응하는 조건으로 수행하였다. 생성된 procollagen의 발현율은 아래식에 따라 계산하였으며 대조구로는 시료를 처리하지 않고 UV를 조사하지 않은 정상 섬유아세포를 사용하였다.Fibroblasts were inoculated in IMDM medium with 10% FBS at a cell concentration of 5 × 10 5 and incubated in 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 24 hours. And cultured for 24 hours to obtain a mixture of ginsenosides Rd and F2 prepared in Preparation Examples 1 and 2 and 1:10, 1: 1, 3: 1, 5: 1 and 10: 1, respectively, 100, 500, and 1000 μg / ml, and the cells were incubated for 18 hours under the same conditions, and the cells were stressed by UV irradiation for 1 hour. Thereafter, the fibroblasts were recovered using Trizol reagent (invitrogen, USA), mRNA was extracted, and cDNA was synthesized through a series of processes. The amount of gene expression was confirmed by electrophoresis by amplifying the PROCOLLAGEN TYPE I gene region from the synthesized cDNA, and gene amplification was performed using thermal cycler (GenePro, Hangzhou bioer tech., CHINA) using 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: AGC CAG CAG ATC GAG AAC AT, R: TCT TGT CCT TGG GGT TCT TG), mixed with taq polymerase and adjusted to 50 uL with distilled water 95 ° 5 min 1 cycle / 95 ° 1 min / 51 ° 2 cycles / 72 degrees 1 minutes 28 cycles amplification, was carried out under the conditions of reacting for 5 minutes at 72 degrees. The expression rate of the produced procollagen was calculated according to the following equation. As a control, normal fibroblasts without treatment of the sample and UV irradiation were used.
procollagen 발현율(%) = B/A × 100(%)
Procollagen Expression (%) = B / A × 100 (%)
A: 상기 대조군에서의 procollagen 발현 량A: amount of procollagen expression in the control group
B: 시료 처리 및 UV조사 섬유아세포의 procollagen 발현 량
B: Procollagen Expression Levels of Sample Treatment and UV Irradiated Fibroblasts
상기 시험결과 하기의 표 2와 같은 결과를 얻었다.As a result of the test, the results shown in Table 2 were obtained.
농도
(㎍/㎖)sample
density
(占 퐂 / ml)
사이드 RdJinseno
Side Rd
사이드 F2Jinseno
Side F2
상기 표 2의 결과에서 보는 바와 같이, 진세노사이드 Rd와 F2를 단독으로 적용한 경우보다 진세노사이드 Rd와 F2를 혼합해 적용한 시료가 피부 주름에 관련 있는 콜라겐 생합성 촉진효과가 더 높았으며, 보다 우수한 시너지 효과를 보여주었다. 또한 1:1~5:1의 혼합비에서 더 우수한 효과를 나타내었으며, 혼합비 3:1은 대조군 TGF-β과도 유사한 경향의 우수한 효과를 보여주었다.
As shown in the results of Table 2 above, a sample mixed with ginsenoside Rd and F2 was more effective in promoting collagen biosynthesis associated with skin wrinkles than when the ginsenosides Rd and F2 were applied alone, Synergy effect. In addition, the effect of 1: 1 ~ 5: 1 was better, and the mixing ratio of 3: 1 was similar to that of control TGF-β.
시험예 3: MMP-1 생성 억제 효과Test Example 3: Inhibitory effect on MMP-1 production
인간 정상 피부세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc. 덴마크)에 각 웰 당 1st 106세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1과 2에서 제조한 진세노사이드 Rd와 F2, 그리고 이를 각각 1:10, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1 로 혼합한 혼합물을 최종 농도가 50, 100, 500, 1000㎍/㎖가 되도록 디메틸설폭시드에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가한 후 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(㎍/㎖)을 측정하고, 하기식에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다. 이때, MMP-1 생성 억제율의 양성 대조군으로 TGF-β(10㎎/㎖, Roche, 미합중국)을 사용하였다.
Human normal skin cells, fibroblasts (Korean Cell Line Bank, Korea), were inoculated into 48-well microplates (Nunc, Denmark) to be 10 < 6 > cells per well and cultured in DMEM medium (Sigma, For 24 hours, and then mixed with the ginsenosides Rd and F2 prepared in Preparation Examples 1 and 2, and 1:10, 1: 1, 3: 1, 5: 1 and 10: 1 respectively The diluted solution was diluted with dimethyl sulfoxide to a final concentration of 50, 100, 500 or 1000 μg / ml, and then cultured in serum-free DMEM medium for 48 hours. After the incubation, the supernatant of each well was collected and the amount (쨉 g / ml) of the newly synthesized MMP-1 was measured using an MMP-1 assay kit (Amersham, USA) And the results are shown in Table 3 below. At this time, TGF-β (10 mg / ml, Roche, United States) was used as a positive control of MMP-1 production inhibition rate.
MMP-1 생성억제율(%)=(1-실험군의 MMP-1의 양/대조군의 MMP-1의 양)×100
(%) = (1- amount of MMP-1 in the test group / amount of MMP-1 in the control group) 占 100
농도
(㎍/㎖)sample
density
(占 퐂 / ml)
사이드 RdJinseno
Side Rd
사이드 F2Jinseno
Side F2
TGF-beta
상기 표 3의 결과에서 보는 바와 같이, 진세노사이드 Rd와 F2를 단독으로 적용한 경우보다 진세노사이드 Rd와 F2를 혼합해 적용한 시료가 MMP-1 생성 억제율 효과가 더 높았다. 1:1~5:1의 혼합비에서 더 우수한 효과를 나타내었으며, 특히 혼합비 3:1은 보다 우수한 시너지 효과로 대조군 TGF-β 보다도 우수한 경향의 효과를 보여주었다.
As shown in the above Table 3, the effect of inhibiting the production of MMP-1 was higher in the case of the mixture of ginsenoside Rd and F2 than when the ginsenosides Rd and F2 were applied alone. 1: 1 to 5: 1. In particular, the mixing ratio of 3: 1 showed better synergistic effect than the control TGF-β.
시험예 4: 세포독성시험Test Example 4: Cytotoxicity test
섬유아세포를 10% FBS를 첨가한 IMDM 배지에 5×105의 세포농도로 접종하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 제조예 1과 2에서 제조한 진세노사이드 Rd와 F2, 그리고 이를 각각 1:10, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1 로 혼합한 혼합물을 최종 농도가 50, 100, 500, 1000㎍/㎖가 되도록 디메틸설폭시드에 희석하여 제조한 희석용액을 처리하여 24시간 배양한 후에 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium boromide, Sigma, U.S.A.)용액을 각 well에 100㎕씩 첨가한 후(3㎎/㎖) 4시간 동안 더 배양하였다. 이후 상층액을 제거하고, 150㎕의 디메틸설폭시드를 첨가한 후, 30분간 shaking하여 생성된 formazan을 녹여 multimicroplate reader(Molecular device Spectra max190)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율은 아래의 식에 따라 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 4에 나타내었다.
Fibroblasts were inoculated into IMDM medium supplemented with 10% FBS at a cell concentration of 5 × 10 5 cells and cultured at 37 ° C. in 5% CO 2 And cultured in an incubator for 24 hours. After the culture, the medium was removed and the mixture of ginsenosides Rd and F2 prepared in Preparation Examples 1 and 2 and 1:10, 1: 1, 3: 1, 5: 1 and 10: 1, respectively, Was diluted with dimethyl sulfoxide to a concentration of 50, 100, 500 and 1000 μg / ml, and the diluted solution was cultured for 24 hours. MTT (3- [4,5-dimethylthiazol-2yl] -2,5-diphenyltetrazolium boromide, Sigma, USA) was added to each well (100 μl / well) (3 mg / ml) for further 4 hours. After removing the supernatant, 150 μl of dimethylsulfoxide was added, and the resulting formazan was shaken by shaking for 30 minutes. Absorption was measured at 540 nm using a multimicroplate reader (Molecular device Spectra max 190). Cell viability was calculated according to the following equation and the results are shown in Table 4 below.
세포 생존율(%)=시료첨가군의 흡광도 / 대조군의 흡광도 × 100
Cell viability (%) = absorbance of the sample addition group / absorbance of the control group × 100
(㎍/㎖)Sample concentration
(占 퐂 / ml)
사이드 RdJinseno
Side Rd
사이드 F2Jinseno
Side F2
상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 진세노사이드 Rd, F2 그리고 진세노사이드 Rd와 F2를 혼합해 적용한 시료 모두 1000㎍/㎖ 농도에서 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다.
As shown in the results of Table 4, it was confirmed that the samples which were mixed with ginsenosides Rd, F2 and ginsenosides Rd and F2 were not cytotoxic at a concentration of 1000 μg / ml.
실시예 1 : 크림 제조Example 1: Cream production
본 발명의 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 화장료의 피부 주름 개선효과와 피부안전성에 대한 임상시험을 위해 하기 표 5의 조성에 따라 크림을 제조하였다.
Creams were prepared according to the composition of Table 5 below for the clinical test of skin wrinkle improving effect and skin safety of cosmetic compositions containing ginsenosides Rd and F2 of the present invention.
비교예 1, 2 : 크림 제조Comparative Examples 1 and 2: Cream production
하기의 표 5의 조성과 같이 진세노사이드 Rd만을 함유하거나 정제수로 대체한 크림을 제조하여 비교예로 하였다.
A cream containing only ginsenoside Rd or replaced with purified water as shown in the composition of Table 5 below was prepared and used as a comparative example.
시험예 5: 피부주름 개선 효과Test Example 5: Effect of improving skin wrinkles
본 발명의 진세노사이드 Rd와 F2를 함유하는 화장료 조성물의 피부주름 개선 효과를 건강한 35세에서 50세의 여성 60명을 대상으로 측정하였다. 먼저, 세 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예 1을, B 그룹에는 비교예 1을, C 그룹에는 비교예 2의 제형을 안면부에 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 3개월간 도포하였다. 3개월 후 주름의 개선 정도를 피험자의 설문 및 주름의 영상 분석을 통해 평가하였다.
The skin wrinkle improvement effect of the cosmetic composition containing the ginsenosides Rd and F2 of the present invention was measured in 60 healthy women aged 35 to 50 years. First, it was divided into three groups, Example 1 in Group A, Comparative Example 1 in Group B, and Comparative Example 2 in Group C were applied twice a day (morning and evening) on the face for three months. After 3 months, the improvement of wrinkles was evaluated by image analysis of questionnaires and wrinkles.
피험자의 설문은 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 중등도의 개선, 상당한 개선의 4단계로 판단하였으며 결과를 하기의 표 6에 나타내었다.The subjects' questionnaires were judged to be four stages of no improvement, slight improvement, moderate improvement, and considerable improvement as compared with before use. The results are shown in Table 6 below.
주름의 영상분석에 의한 평가는 실험이 시작되기 전 눈 밑의 레플리카를 채취하고 실험이 종료된 직후의 레플리카를 눈 밑의 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 주름의 2차원적 분석으로 주름의 밀도를 측정하였다. 영상분석에 의한 주름 밀도의 측정 결과는 사용 전과 비교한 주름 밀도에 대한 감소율로 하기의 표 7에 나타내었다.
Image analysis of wrinkles was performed by taking a replica of the eye under the eye before the experiment was started, and replicas immediately after the experiment was completed at the same area under the eye. Was measured. The measurement results of wrinkle density by image analysis are shown in Table 7 below as a reduction rate for wrinkle density compared to before use.
상기 표 6 및 7로부터, 진세노사이드 Rd와 F2의 혼합으로 함유한 실시예 1의 피부주름 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있었다.
From Tables 6 and 7, it was found that the effect of improving the skin wrinkles of Example 1 contained in the mixture of ginsenosides Rd and F2 was excellent.
시험예 6: 제형의 안정성 실험Test Example 6: Stability test of formulation
본 발명의 화장료 조성물의 제형의 안정성 시험을 위하여, 상기 실시예와 비교예를 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비료 측정하여 그 결과를 하기 표 8에 기재하였다. 이때 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.
For the stability test of the formulation of the cosmetic composition of the present invention, the above Examples and Comparative Examples were stored in an opaque glass container in a thermostat kept constant at 45 캜 for 12 weeks, and kept at 4 캜 for a completely shielded After storage for 12 weeks in an opaque glazed container in a refrigerator, the degree of discoloration, separation, and separation were measured, and the results are shown in Table 8 below. At this time, the product discoloration, odor, and separation were evaluated by classifying into the following six grades.
0:변화없음 1:극히 조금 분리(변색, 변취)0: No change 1: Very little separation (color change, odor)
2:조금 분리(변색, 변취) 3:조금 심하게 분리(변색, 변취)2: little separation (discoloration, discoloration) 3: slight separation (discoloration, discoloration)
4:심하게 분리(변색, 변취) 5:극히 심하게 분리(변색, 변취)
4: Severe separation (discoloration, odor) 5: Extremely severe separation (discoloration, odor)
상기 표 8 로부터 알 수 있는 바와 같이, 실시예와 비교예는 45℃와 4℃에서 변색이나 변취, 분리 현상이 거의 없이 안정하였고, 진세노사이드 Rd 및 F2가 제형 내에서 안정한 상태로 존재함을 나타낸다.
As can be seen from the above Table 8, the examples and the comparative examples were stable at almost 45 ° C and 4 ° C without discoloration, separation and separation phenomenon, and showed that ginsenosides Rd and F2 existed in a stable state in the formulation .
본 발명의 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 화장료 조성물은 하기의 여러 제형으로 제조될 수 있다.
The cosmetic composition containing the ginsenosides Rd and F2 of the present invention can be prepared by the following various formulations.
실시예 2: 유연 화장수 Example 2: Flexible lotion
하기 표 9에 기재된 조성으로 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 유연 화장수를 통상의 방법으로 제조하였다.Flexible lotions containing ginsenosides Rd and F2 in the compositions listed in Table 9 below were prepared in a conventional manner.
실시예 3: 영양 화장수(밀크로션)Example 3: Nutritional lotion (milk lotion)
하기 표 10에 기재된 조성으로 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 영양 화장수를 통상의 방법으로 제조하였다.A nutritional lotion containing ginsenosides Rd and F2 in the composition shown in Table 10 below was prepared by a conventional method.
실시예 4: 에멀젼 베이스 Example 4: Emulsion base
하기 표 11에 기재된 조성으로 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 에멀젼 베이스를 통상의 방법으로 제조하였다.Emulsion bases containing ginsenosides Rd and F2 in the compositions shown in Table 11 below were prepared in a conventional manner.
실시예 5: 맛사지 크림Example 5: Massage cream
하기 표 12에 기재된 조성으로 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 맛사지 크림을 통상의 방법으로 제조하였다.Massage creams containing ginsenosides Rd and F2 in the compositions listed in Table 12 below were prepared in a conventional manner.
실시예 6:팩Example 6:
하기 표 13에 기재된 조성으로 진세노사이드 Rd 및 F2를 함유하는 팩을 통상의 방법으로 제조하였다.A pack containing the ginsenosides Rd and F2 in the compositions shown in Table 13 below was prepared in a conventional manner.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정하여 진다고 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the technical scope of the present invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (7)
The composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the composition is a skin lotion, a skin softener, a skin toner, an astringent, a lotion, a milk lotion, a moisturizing lotion, a nourishing lotion, a massage cream, a nourishing cream, a moisturizing cream, a hand cream Wrinkle improvement, characterized in that consisting of any one selected from the group consisting of essence, pack, soap, shampoo, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, press powder, loose powder and eye shadow Cosmetic composition for.
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