JP2009544313A - 網膜幹細胞由来の合成角膜 - Google Patents
網膜幹細胞由来の合成角膜 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009544313A JP2009544313A JP2009521731A JP2009521731A JP2009544313A JP 2009544313 A JP2009544313 A JP 2009544313A JP 2009521731 A JP2009521731 A JP 2009521731A JP 2009521731 A JP2009521731 A JP 2009521731A JP 2009544313 A JP2009544313 A JP 2009544313A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cornea
- cells
- cell
- human
- synthetic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/14—Eye parts, e.g. lenses, corneal implants; Implanting instruments specially adapted therefor; Artificial eyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/14—Eye parts, e.g. lenses, corneal implants; Implanting instruments specially adapted therefor; Artificial eyes
- A61F2/142—Cornea, e.g. artificial corneae, keratoprostheses or corneal implants for repair of defective corneal tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/0609—Oocytes, oogonia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0621—Eye cells, e.g. cornea, iris pigmented cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0623—Stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/44—Thiols, e.g. mercaptoethanol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/235—Leukemia inhibitory factor [LIF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1323—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/04—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from germ cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本発明は一般に、胚性幹細胞(ES)に関し、より具体的には合成角膜を得るための過程に関する。
ヒト胚性幹細胞(hES)は、数多くの細胞型に分化することができる多能性細胞である。免疫不全マウスに注射した場合、胚性幹細胞は、分化した腫瘍(奇形腫)を形成する。しかしながら、胚様体(EB)を形成するようにインビトロで誘導した胚性幹細胞は、ある成長条件下で、幾つかの組織の特徴を示す複数の細胞型に分化させやすい胚性幹細胞株の源を提供する。例えば、hESは、内胚葉、外胚葉、および中胚葉派生物に分化させられている。
本組成物、方法、および培養方法論を記載する前に、本発明は、記載した特定の組成物、方法、および実験条件に限定されるものではなく、そのようなものとして組成物、方法、および条件は様々に変わり得ることが理解されるべきである。本発明の範囲は付随する特許請求の範囲でのみ限定されると考えられるので、本明細書で用いる術語は特定の態様のみを記載する目的のためのものであり、かつ限定的であることが意図されないことも理解されるべきである。
ヒト単為発生胚性幹細胞の産生
材料および方法
ドナーは、金銭的な支払いを受けずに卵および(DNA解析用の)血液を自発的に供与した。ドナーは、包括的なインフォームドコンセント文書に署名し、供与された材料は全て研究用に用いられかつ生殖目的には用いられないことを通知された。卵巣刺激前に、卵母細胞ドナーは、ヒトの細胞、組織、ならびに細胞および組織に基づく産物に関するFDA適格性決定ガイドライン(食品医薬品局。(草案)2004年5月付けのGuidance for Industry: Eligibility Determination for Donors of Human Cells, Tissues, and Cellular and Tissue Based Products(HCT/P))およびロシア保健省の指令N 67(02.26.03)に従って適切性についての健康診断を受けた。それには、X線、血液、および尿の解析、ならびに肝機能検査が含まれた。ドナーは、梅毒、HIV、HBV、およびHCVについてもスクリーニングされた。
組成
塩化カルシウム
EDTA
グルコース
ヒト血清アルブミン
硫酸マグネシウム
ペニシリンG
塩化カリウム
リン酸二水素カリウム
重炭酸ナトリウム
塩化ナトリウム
乳酸ナトリウム
ピルビン酸ナトリウム
水
最初の4人のドナーから、活性化された卵母細胞をIVF培地中で、5% O2、5% CO2、および90% N2を含むガス環境で培養し、5日間にわたって続けた。表2は、活性化された卵母細胞の成熟の進行を示している。各々の卵母細胞を4ウェルプレート中に分離した。
*細胞は、初日はM1培地(MediCult)中で、2〜5日目はM2培地(Medicult)中で培養した。培地は毎日変えた。M1およびM2は、ヒト血清アルブミン、グルコース、および派生代謝物、生理学的塩、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、ビタミン、ヌクレオチド、重炭酸ナトリウム、ストレプトマイシン(40 mg/l)、ペニシリン(40,000 IU/l)、およびフェノールレッドを含む。
5人のドナー由来の卵母細胞について、MediCult培地の使用後に、減らした酸素下での培養を行ない、培養の5または6日目の23個の胚盤胞の産生を可能にした。胚盤胞のうちの11個は、目に見えるICMを有した(表3)。
1-2個の卵母細胞は活性化されなかった;2-1個の卵母細胞は活性化後に退化した;3-1個の卵母細胞は活性化されなかった;4-2個の卵母細胞は第I中期で、廃棄された。
免疫染色のために、フィーダー層上のhES細胞コロニーおよびphESC細胞をマイクロカバーガラス上に播種し、PBSで2回洗浄し、100% メタノールで5分間、-20℃で固定した。細胞をPBS + 0.05% Tween-20で2回洗浄し、PBS + 0.1% Triton X-100で10分間、室温で透過処理した。細胞洗浄後、30分間、室温(RT)でのブロッキング溶液(PBS + 0.05% Tween-20 + 4パーセントヤギ血清と3パーセントヒト臍帯血血清)とのインキュベーションによって非特異的結合をブロッキングした。モノクローナル抗体をブロッキング溶液中で希釈し、1時間、RTで用いた:ChemiconからのSSEA-1(MAB4301)(1:30)、SSEA-3(MAB4303)(1 :10)、SSEA-4(MAB4304)(1:50)、OCT-4(MAB4305)(1:30)、TRA-1-60(MAB4360)(1:50)、およびTRA-1-81(MAB4381)(1:50)。細胞を洗浄した後、二次抗体Alexa Fluor 546(オレンジ色の蛍光)および488(緑色蛍光)(Molecular Probes, Invitrogen)を 1:1000でPBS + 0.05% Tween-20中で希釈し、1時間、RTで適用した。細胞を洗浄し、PBS + 0.05% Tween-20中に0.1 μg/mlのDAPI(Sigma)で10分間RTで核を染色した。細胞を洗浄し、Mowiol(Calbiochem)を用いてスライド上に載せた。蛍光画像を蛍光顕微鏡で可視化した。
アルカリホスフォターゼおよびテロメラーゼ活性を、製造業者の仕様に従ってAPキットおよびTRAPEZEキット(Chemicon)を用いて行なった。
核型を解析するために、hES細胞を10 μg/ml デメコルシン(Sigma)で2時間処理し、0.05% トリプシン/EDTA(Invitrogen)を用いて採取し、700 x rpmで3分間遠心分離した。ペレットを5 mlの0.56% KClに再懸濁し、15分間RTでインキュベートした。繰り返しの遠心分離の後、上清を除去し、細胞を再懸濁し、5 mlの氷冷したメタノール/酢酸(3:1)の混合物で5分間、+4℃で固定した。細胞の固定を2回繰り返し、その後に細胞懸濁を顕微鏡スライド上に置き、プレラパートをGiemsa Modified Stain(Sigma)で染色した。このやり方で調製した細胞からの中期を標準的なGバンド法で解析した。5/1000の数量の中期スプレッド(metaphase spread)が明らかになり、63の中期を解析した。
hESおよびphESC細胞コロニーを機械的に塊に分け、85% Knockout DMEM、15% ヒト臍帯血血清、1 x MEM NEAA、1 mM Glutamax、0.055 mM β-メルカプトエタノール、ペニシリン-ストレプトマイシン(50 U/50 mg)、4 ng/ml hrbFGF(血清を除き、全てInvitrogenから)を含む培地中の1.5% アガロース(Sigma)でプレコーティングした24ウェルプレートのウェル中に置いた。ヒトEBを14日間懸濁培養で培養し、培養ディッシュの上に置き、生成物を生じさせるかまたは懸濁でさらに1週間培養した。
hESをマイトジェン、LIF、およびbFGFを含む成長培地中で(>40% コンフルエントのマイトマイシンC処理したヒト繊維芽細胞フィーダー層の上で)成長させた。コンフルエント近くで(すなわち、ESが明瞭なコロニー境界を失った時)、培養培地をマイトジェンの添加のない成長培地と交換する。その後、2〜3日毎に最低3週間、培地の50%をEB培地と交換した。この時、色素沈着した細胞は、培養において小さいボールまたは大きいドームおよび柱の中で発生する。
KO高グルコースDMEM
500 U/ml ストレプトマイシン
1% 非必須アミノ酸
2 mM Glutamax-I
0.1 mM β-メルカプトエタノール
8% 血清代替物
8% プラスモネート(Beyer, Res Triangle Park)
マイトジェン:
10 ng/ml LIF
5 ng/ml bFGF
KO高グルコースDMEM
500 U/ml ストレプトマイシン
1% 非必須アミノ酸
2 mM Glutamax-I
0.1 mM β-メルカプトエタノール
13% 血清代替物
中性緩衝ホルマリン(NBF)中で固定した後、標本(10 mmの明瞭で/白い半透明の組織半球)を70% エタノール中に置いた。半球を二等分し、一部を大体の描写のために調べ、一部を顕微鏡で調べた。
DynalからのDynabeads DNA Direct Blood(Invitrogen)でドナー血液、hES、phESC細胞、およびヒト新生児皮膚繊維芽細胞(NSF)からゲノムDNAを抽出した。HLAタイプ分けを、アレル特異的シークエンシングプライマーを用いたPCR(PCR-SSP, Protrans)によって製造業者の仕様に従って行なった。HLAクラスI遺伝子(HLA A*、B*、Cw*) を、A*01〜A*80, B*07〜B*83, Cw*01〜Cw*18領域を規定するPROTRANS HLA A* B* Cw*でタイプ分けした。HLAクラスII遺伝子(HLA DRB1*、DRB3*、DRB4*、DRB5*、DQA1*、DQB1*)を、DRB1*O1〜DRB1*16(DR1〜DR18)、DRB3*、DRB4*、DRB5*領域を規定するPROTRANS HLA DRB1*と、DQB1*02〜DQB1*06(DQ2〜DQ9)、DQA1*0101〜DQA1*0601領域を規定するPROTRANS HLA DQB1* DQA1*とで解析した。94℃で2分;94℃で10秒間、65℃で1分間を10サイクル;94℃で10秒間、61℃で50秒間、72℃で30秒間を20サイクルで:PCR増幅を達成した。増幅産物を2% アガロースゲルで検出した。
血液、卵丘細胞、phESC、およびNSFからフェノール/クロロホルム抽出法によってゲノムDNAを単離した。4人の白人対象から得られたこれらのDNA試料を、Affimetrix Mapping 5OK Hind 240 Array(Affimetrix GeneChip Mapping 10OKキットの一部)で遺伝子型決定した。当初、データセットは、57,244バイナリーSNPマーカーを含んだ。マーカーの数は、ゲノム試料と等量のものを同定しかつヘテロ接合性を検討するのに必要であると考えられるよりも多いので、22本の常染色体のうちの15本(第1番〜第15番染色体)を選んだ。無作為抽出の間にマーカーが選択されないか、または所与の染色体について1つのマーカーしか選ばれない可能性を減らすために、より短い第7番染色体を除外した。1,459個のマーカーをRelcheck(バージョン0.67,(著作権)2000 Karl W. Broman, Johns Hopkins University, Licensed under GNU General Public Licenseバージョン2(1991年6月))によって解析した。
全核酸を、Liら(J Biol Chem (2002) 277(16): 13518-13527)に記載されたように調製した。RNAおよびDNAを、Tri-reagent(Sigma)を用いるかまたはQiagen(Valencia, CA)からのRNA調製キットを用いて細胞から抽出した。
血液、hES細胞、およびNSFからフェノール/クロロホルム抽出によってゲノムDNAを単離し、HinfI制限酵素(Fermentas)で消化し、0.8% アガロースゲルに充填した。電気泳動後、変性したDNAを、サザンブロッティングによってナイロン膜(Hybond N, Amersham)に移し、32P-標識(CAC)した5つのオリゴヌクレオチドプローブとハイブリダイズさせた。Cronex 増感スクリーンを用いてX線フィルム(Kodak XAR)上で膜を感光させた後、mDataを解析した。
3'アポリポタンパク質B超可変ミニサテライト座(3'ApoB VNTR)
染色***置:2p23-p23
GenBank座および座定義:APOB、(Ag(x)抗原を含む)アポリポタンパク質B非翻訳領域
反復配列5'-3':
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):450 + 10 + 2プライマー + 連結部
VNTRラダーサイズ範囲(Ludwig et al, 1989による、反復の数):30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52
その他の公知のアレル(反復の数):25、27、28、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、54、55
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):36/36
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、1分
伸長およびプライマー連結 60℃、2分
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:1p35-p36
GenBank座および座定義:ヒトD1S80およびMCT118遺伝子
反復配列5'-3':
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):387〜762
VNTRラダーサイズ範囲(反復の数):16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、34、35、36、37、40、41
その他の公知のアレル(反復の数):13、14、15、38、39、>41
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):18/29
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 60℃、30秒
伸長 72℃、45秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:6q21-q末端
GenBank座および座定義:NA
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):150〜162
STRラダーサイズ範囲(反復の数):12、13、15
その他の公知のアレル(反復の数):10、11、14、16、17
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):13/14
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、1分
伸長およびプライマー連結 60℃、2分
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:16q24-q末端
GenBank座および座定義:NA
反復配列5'-3':(AGAT)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):264〜304
STRラダーサイズ範囲(反復の数):5、8、9、10、11、12、13、14、15
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):11/12
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 64℃、30秒
伸長 72℃、30秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:7q11.21-22
GenBank座および座定義:NA
反復配列5'-3':(AGAT)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):215〜247
VNTRラダーサイズ範囲(反復の数):6、7、8、9、10、11、12、13、14
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):9/11
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 64℃、30秒
伸長 72℃、30秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:12p13.3-12p13.2
GenBank座および座定義:HUMvWFII、ヒトフォンヴィレブランド因子遺伝子
反復配列5'-3':(ATCT)n/(AGAT)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):154〜178
STRラダーサイズ範囲(反復の数): 9、11、12、13
その他の公知のアレル(反復の数):8、10、14、15
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):13/13
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、1分
伸長およびプライマー連結 60℃、2分
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:13q22-q31
GenBank座および座定義:NA
反復配列5'-3':(AGAT)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):165〜197
STRラダーサイズ範囲(反復の数): 8、9、10、11、12、13、14、15
その他の公知のアレル(反復の数):7
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):8/8
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 64℃、30秒
伸長 72℃、30秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:12p12p末端
GenBank座および座定義:HUMVWFA31、ヒトフォンヴィレブランド因子遺伝子
反復配列5'-3': (AGAT)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):139〜167
STRラダーサイズ範囲(反復の数): 14、16、17、18
その他の公知のアレル(反復の数):11、12、13、15、19、20、21
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):16/16
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、1分
伸長およびプライマー連結 60℃、2分
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:5q33.3-34
GenBank座および座定義:HUMCSF1PO、ヒトc-fms癌原遺伝子
反復配列5'-3':(AGAT)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):295〜327
STRラダーサイズ範囲(反復の数): 7、8、9、10、11、12、13、14、15
その他の公知のアレル(反復の数):6
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):9/10
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 64℃、30秒
伸長 72℃、30秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:2p25.1-p末端
GenBank座および座定義:HUMTPOX、ヒト甲状腺ペルオキシダーゼ遺伝子
反復配列5'-3':(AATG)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):224〜252
STRラダーサイズ範囲(反復の数):6、7、8、9、10、11、12、13
その他の公知のアレル(反復の数):なし
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):8/9
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 64℃、30秒
伸長 72℃、30秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
染色***置:5q33.3-34
GenBank座および座定義:HUMTHO1、ヒトチロシンヒドロキシラーゼ遺伝子
反復配列5'-3':(AATG)n
アレルのラダーサイズ範囲(塩基):179〜203
STRラダーサイズ範囲(反復の数):5、6、7、8、9、10、11
その他の公知のアレル(反復の数):9.3
Promega K562 DNA(登録商標)アレルサイズ(反復の数):9.3/9.3
PCRプロトコル:
サーマルサイクラー:DNA Technology社, Russia
最初のインキュベーション: 95℃、2分
30サイクルの循環:
変性 94℃、45秒
プライマー連結 64℃、30秒
伸長 72℃、30秒
延長工程: 72℃、5分
保留工程: 4℃、無制限の時間
本方法由来のhES細胞は、胚性幹細胞に典型的である多くの特色:細胞質脂肪体、小さい細胞質/核比、および明瞭に識別できる核小体を示す。hES細胞コロニーは、インビトロ受精後に得られるヒト胚性幹細胞について先に報告された形態と類似の形態を示す。細胞は、アルカリホスファターゼ(図1A)、オクタマー結合転写因子4 mRNA(Oct-4)(図1B)、時期特異的胚抗原1(SSEA-1)(図1C)、時期特異的胚抗原3(SSEA-3)(図1D)、時期特異的胚抗原4(SSEA-4)(図1E)、腫瘍拒絶抗原1-60(TRA-1-60)(図1F)、腫瘍拒絶抗原1-81(TRA-1-81)(図1G)について免疫反応が陽性であり、かつ時期特異的胚抗原1(SSEA-1)(図1C)について陰性である(マウス胚性幹細胞では陽性であるが、ヒトでは陽性ではない)。テロメラーゼ活性は多くの場合、複製の不死性と関連付けられ、生殖細胞、癌細胞、および幹細胞を含む、種々の幹細胞で典型的に発現されているが、大部分の体細胞型では存在しない。本方法によって3か月後にインビトロ増殖で調製された細胞は、それらの未分化形態を維持し、高レベルのテロメラーゼ活性を示した(図2A)。細胞の多能性を、インビトロで胚様体形成によって検討し(図2B、2C)、Gバンド法による核型分析により、細胞が正常なヒトの46XX核型を有することが示されている(図2D)。
データベースS1 phESCおよび関連ドナー由来のDNA試料を同定する
DNA試料を以下のように番号付けした:1-ヒト新生児皮膚繊維芽細胞;2-phESC-7株ドナー;3-phESC-7株;4-phESC-1株;5-phESC-1株;6-phESC-3株;7-phESC-4株;8-phESC-5株;9-phESC-6株;1O-phESC-6株ドナー;11-phESC-3〜phESC-5株ドナー;および12-phESC-1株ドナー。
成長中の合成角膜を、記載したような培地に半球を完全に浸すことによって培養した。全体的な目視による半球の検査により、それらが比較的透明な組織の球であり、かつ直径1 cm超まで成長していることが示されている(図8)。
Claims (36)
- 単離された網膜幹細胞由来の合成角膜。
- 網膜幹細胞を、単為生殖的に活性化したヒト卵母細胞から分化させた、請求項1記載の単離された角膜。
- 最終分化している、請求項1記載の単離された角膜。
- 上皮細胞を含む、請求項1記載の単離された角膜。
- 間質細胞を含む、請求項4記載の単離された角膜。
- 光位相速度を変化させる能力を有する、請求項1記載の単離された角膜。
- 約5 mm〜11.5 mmの横径を有する、請求項1記載の単離された角膜。
- 中心で約0.5 mm〜0.6 mmおよび周辺部で約0.6 mm〜0.8 mmの厚さを有する、請求項1記載の単離された角膜。
- ATCCアクセッション番号___として寄託されている、請求項1記載の単離された角膜。
- 卵母細胞ドナーと組織適合性である、請求項2記載の単離された角膜。
- 同質性ミトコンドリアDNA(mtDNA)を含む、請求項2記載の単離された角膜。
- ヒトに移植可能である、請求項10記載の角膜。
- (a)(i)卵母細胞をイオノフォアと高いO2圧で接触させることと(ii)卵母細胞をセリン-スレオチンキナーゼ阻害剤と低いO2圧で接触させることとを含む、ヒト卵母細胞を単為生殖的に活性化させる工程;
(b)工程(a)の活性化された卵母細胞を低いO2圧で胚盤胞形成まで培養する工程;
(c)胚盤胞をフィーダー細胞の層に移し、かつ移した胚盤胞を高いO2圧下で培養する工程;
(d)工程(c)の胚盤胞の栄養外胚葉から内部細胞塊(ICM)を機械的に単離する工程;
(e)工程(d)のICMの細胞をヒトフィーダー細胞の層上で高いO2圧下で培養する工程であって、網膜幹細胞が培養中にヒト胚性幹細胞マーカー(hES)およびニューロン特異的マーカーによって同定され、かつ同定された網膜幹細胞がその後単離される、工程;
(f)工程(e)の単離された幹細胞を、血清代替物(M/SR)と、プラスモネート(plasmonate)と、DNA合成阻害剤で処理した繊維芽細胞フィーダー層で上gp130/STAT経路および/またはMAPキナーゼ経路を活性化する少なくとも1つのマイトジェンとを含む培地中で培養する工程;
(g)工程(f)のマイトジェン処理した細胞を、プラスモネートを含むM/SR(M/SRP)中で、マイトジェンを添加せずに、コンフルエンス近くまで培養する工程であって、コンフルエント近くの細胞が色素沈着およびドーム形の外観を生じるまでM/SRPの1/2容量がM/SRと周期的に交換される、工程;ならびに
(h)M/SR中の工程(g)の色素沈着した細胞をゼラチンコーティングした基材に移す工程であって、合成角膜が発生するまでM/SRの1/2容量がM/SRと周期的に交換される、工程
を含む、合成角膜を産生する方法。 - 角膜が3-D足場の非存在下で発生する、請求項13記載の方法。
- マイトジェンが、白血病阻害因子(LIF)、bFGF、およびそれらの組み合わせより選択される、請求項13記載の方法。
- DNA合成阻害剤がアルキル化剤である、請求項13記載の方法。
- DNA合成阻害剤がマイトマイシンCである、請求項16記載の方法。
- フィーダー細胞がヒトである、請求項13記載の方法。
- hESマーカーが、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-91、OCT-4、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項13記載の方法。
- ニューロン特異的マーカーが、ニューロフィラメント68、NCAM、βIII-チューブリン、GFAP、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項13記載の方法。
- 請求項13記載の方法によって得られる網膜幹細胞由来の合成角膜。
- 対象の角膜を合成角膜と交換する工程を含む、それを必要とする対象を処置する方法。
- 対象が損傷した角膜を有する、請求項22記載の方法。
- 対象が角膜に影響を及ぼす疾患を有する、請求項22記載の方法。
- 疾患が、角膜炎、角膜潰瘍、角膜剥離、雪盲、弧眼(arc eye)、タイゲソン表層性点状角膜症、フックス変性症、円錐角膜、乾性角結膜炎、角膜感染、および角膜変性症からなる群より選択される、請求項24記載の方法。
- (a)網膜幹細胞由来の合成角膜を作用物質と接触させる工程;および
(b)角膜に対する変化を作用物質の存在下および非存在下で観察する工程
を含む、目の角膜に影響を及ぼす作用物質を同定する方法であって、
角膜に対する変化が、角膜に影響を及ぼす作用物質を示す、方法。 - 作用物質が角膜に対する治療効果を有する、請求項26記載の方法。
- 作用物質が角膜に対する有害効果を有する、請求項26記載の方法。
- 角膜に対する変化が、遺伝子発現の変調、タンパク質発現の変調、混濁の変化、可塑性の変化、硬度の変化、光位相速度の変化、および形状の変化からなる群より選択される、請求項26記載の方法。
- 作用物質が環境化学物質である、請求項28記載の方法。
- 作用物質が薬物である、請求項27記載の方法。
- 薬物が局所薬物である、請求項31記載の方法。
- (a)目から角膜を外科的に切除する工程;
(b)除去した角膜の領域に合成角膜を挿入する工程;および
(c)合成角膜を切除の下にある組織と繋ぎ合わせて合成角膜を目に固定する工程
を含む、請求項1記載の合成角膜と目の角膜の交換のための方法。 - 角膜の外面の一部を分離し、それによって前面および後面を有する角膜弁と成形された前面を有する角膜床とを形成させる工程;
前面および後面を有する合成角膜を角膜床の上に移植する工程;ならびに
分離された角膜の部分を交換する工程
をさらに含む、請求項33記載の方法。 - (a)請求項1記載の合成角膜を含む細胞の少なくとも一部を、作用物質をコードする核酸ビヒクルで、形質転換する工程;
(b)核酸によってコードされる作用物質を発現する、工程(a)の合成角膜を含む細胞の集団を同定する工程;および
(c)工程(b)の合成角膜の形質転換された細胞と、対象の角膜細胞を交換する工程
を含む、対象の目に有効量の作用物質を送達する方法であって、交換した細胞が作用物質を対象の目に送達する、方法。 - 交換する工程が、対象の角膜を工程(b)の合成角膜と交換することを含む、請求項35記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US83319406P | 2006-07-24 | 2006-07-24 | |
US60/833,194 | 2006-07-24 | ||
PCT/US2006/041134 WO2008013557A1 (en) | 2006-07-24 | 2006-10-19 | Synthetic cornea from retinal stem cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009544313A true JP2009544313A (ja) | 2009-12-17 |
JP2009544313A5 JP2009544313A5 (ja) | 2010-02-18 |
Family
ID=37508234
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009521731A Pending JP2009544313A (ja) | 2006-07-24 | 2006-10-19 | 網膜幹細胞由来の合成角膜 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20080124276A1 (ja) |
EP (2) | EP2484308A1 (ja) |
JP (1) | JP2009544313A (ja) |
KR (1) | KR101335884B1 (ja) |
CN (1) | CN101511307A (ja) |
AU (1) | AU2006346492A1 (ja) |
CA (1) | CA2658813A1 (ja) |
GB (2) | GB2480931A (ja) |
IL (1) | IL196688A (ja) |
WO (1) | WO2008013557A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014050356A (ja) * | 2012-09-07 | 2014-03-20 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 幹細胞から外胚葉系細胞への分化誘導剤 |
KR20160040288A (ko) * | 2013-08-06 | 2016-04-12 | 고쿠리쓰 겐큐 가이하쓰 호징 리가가쿠 겐큐소 | 전안부 조직의 제조 방법 |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8109997B2 (en) * | 2009-01-18 | 2012-02-07 | Eyeon Medical Ltd. | Hydrophobic pseudo-endothelial implants for treating corneal edema |
WO2010099310A1 (en) * | 2009-02-26 | 2010-09-02 | Wake Forest University Health Sciences | Endothelial scaffolds |
WO2012112620A1 (en) * | 2011-02-14 | 2012-08-23 | International Stem Cell Corporation | Methods and compositions of producing patient-specific multipotent neuronal stem cells |
LT2773633T (lt) * | 2011-11-02 | 2017-11-10 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Heterocikliniai junginiai, vaistai, turintys minėtus junginius, jų panaudojimas ir jų gavimo būdai |
KR102149010B1 (ko) | 2013-02-15 | 2020-08-27 | 의료법인 성광의료재단 | 체세포 핵 이식을 이용하는 단위생식 줄기세포 및 환자-특이적 인간 배아줄기세포의 제조 |
SG11201610857TA (en) * | 2014-06-27 | 2017-01-27 | Univ California | Cultured mammalian limbal stem cells, methods for generating the same, and uses thereof |
CN105031668B (zh) * | 2015-09-09 | 2018-03-16 | 北京大学第一医院 | 一种实现活体兔角膜扩张模型的装置及其构建方法 |
US11535824B2 (en) | 2015-10-29 | 2022-12-27 | Sung Kwang Medical Foundation | Nuclear transfer |
CH711966A2 (it) * | 2015-12-23 | 2017-06-30 | Pinelli Roberto | Cellule staminali retinali. |
EP3337526B1 (en) * | 2016-01-08 | 2020-11-04 | Acro Biomedical Company. Ltd. | Acellular corneas, methods of producing the same and uses thereof |
GB201610854D0 (en) | 2016-06-21 | 2016-08-03 | Entpr Therapeutics Ltd | Compounds |
WO2018143312A1 (ja) * | 2017-01-31 | 2018-08-09 | 国立大学法人大阪大学 | 多能性幹細胞の分化制御方法 |
CN110592014A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-12-20 | 广东美赛尔细胞生物科技有限公司 | 一种在nk细胞治疗中免辐照体外体内持续去除饲养细胞的方法 |
WO2021041991A1 (en) * | 2019-08-29 | 2021-03-04 | Diomics Corporation | Hydrophilic biopolymer medicament delivery mechanism |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05329200A (ja) * | 1992-05-28 | 1993-12-14 | Kyocera Corp | 人工角膜とその製造方法 |
US6117675A (en) * | 1996-09-25 | 2000-09-12 | Hsc Research And Development Limited Partnership | Retinal stem cells |
JP2002320666A (ja) * | 2000-09-26 | 2002-11-05 | Sanyo Chem Ind Ltd | 人工角膜の製造方法 |
JP2004528148A (ja) * | 2001-06-13 | 2004-09-16 | ザ ライオンズ アイ インスティチュート オブ ウェスターン オーストラリア インコーポレイテッド | 改善された人工角膜移植物 |
WO2005075002A1 (ja) * | 2004-02-04 | 2005-08-18 | National Institute For Materials Science | 医療用材料及びその製造方法 |
JP2009512450A (ja) * | 2005-10-21 | 2009-03-26 | インターナショナル ステム セル コーポレイション | ヒト胚性幹細胞を作製するためのヒト卵母細胞の単為生殖的活性化 |
Family Cites Families (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5589376A (en) * | 1992-07-27 | 1996-12-31 | California Institute Of Technology | Mammalian neural crest stem cells |
US5453357A (en) | 1992-10-08 | 1995-09-26 | Vanderbilt University | Pluripotential embryonic stem cells and methods of making same |
US5449620A (en) * | 1994-01-25 | 1995-09-12 | Thomas Jefferson University | Apparatus and method for culturing embryonic stem cells |
US5843780A (en) * | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5945577A (en) | 1997-01-10 | 1999-08-31 | University Of Massachusetts As Represented By Its Amherst Campus | Cloning using donor nuclei from proliferating somatic cells |
US6642433B1 (en) | 1997-05-15 | 2003-11-04 | Trillium Therapeutics Inc. | Fgl-2 knockout mice |
US5968829A (en) * | 1997-09-05 | 1999-10-19 | Cytotherapeutics, Inc. | Human CNS neural stem cells |
CA2227827A1 (en) * | 1998-01-23 | 1999-07-23 | Unknown | In vitro artificial cornea and sclera |
US6287857B1 (en) * | 1998-02-09 | 2001-09-11 | Genzyme Corporation | Nucleic acid delivery vehicles |
US6238922B1 (en) * | 1999-02-26 | 2001-05-29 | Stemcells, Inc. | Use of collagenase in the preparation of neural stem cell cultures |
WO2001030978A1 (en) * | 1999-10-28 | 2001-05-03 | University Of Massachusetts | Gynogenetic or androgenetic production of pluripotent cells and cell lines, and use thereof to produce differentiated cells and tissues |
DE60142553D1 (de) * | 2000-02-11 | 2010-08-26 | Children S Hospital Of Orange | Isolierung und transplantation von retinalen stammzellen |
US20020039788A1 (en) * | 2000-02-29 | 2002-04-04 | Isseroff Roslyn R. | Corneal epithelial graft composites |
KR20030032966A (ko) * | 2000-06-15 | 2003-04-26 | 다나베 세이야꾸 가부시키가이샤 | 원숭이 유래 배아 줄기 세포 |
US6814755B2 (en) * | 2000-06-16 | 2004-11-09 | Corneal Industrie | Synthetic cornea |
US20050182488A1 (en) * | 2001-04-27 | 2005-08-18 | Peyman Gholam A. | Implant and method for altering the refractive properties of the eye |
US6887706B2 (en) | 2001-10-03 | 2005-05-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of in vitro differentiation of transplantable neural precursor cells from primate embryonic stem cells |
US20030232430A1 (en) * | 2001-11-26 | 2003-12-18 | Advanced Cell Technology | Methods for making and using reprogrammed human somatic cell nuclei and autologous and isogenic human stem cells |
US20030215942A1 (en) | 2002-02-14 | 2003-11-20 | Stemcyte, Inc. | Undesignated allogeneic stem cell bank |
CA2505592A1 (en) * | 2002-05-23 | 2003-12-04 | Advanced Cell Technology, Inc. | Generation of histocompatible tissues using nuclear transplantation |
US20040091936A1 (en) * | 2002-05-24 | 2004-05-13 | Michael West | Bank of stem cells for producing cells for transplantation having HLA antigens matching those of transplant recipients, and methods for making and using such a stem cell bank |
AU2003276137A1 (en) * | 2002-06-18 | 2003-12-31 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Artificial cornea |
WO2004111213A1 (ja) * | 2003-06-11 | 2004-12-23 | Japan Science And Technology Agency | 虹彩組織由来の神経幹細胞から網膜神経細胞を生産する方法、および、その方法により得られる網膜神経細胞 |
US8703121B2 (en) * | 2003-06-27 | 2014-04-22 | DePuy Synthes Products, LLC | Postpartum-derived cells for use in treatment of disease of the heart and circulatory system |
DE602004019660D1 (de) * | 2003-08-05 | 2009-04-09 | Univ Tokyo Agriculture Educational Corp | Verfahren zur herstellung eines eies mit kerntransplantation, parthenogener embryonen und parthenogener säugetiere |
WO2006020859A2 (en) * | 2004-08-13 | 2006-02-23 | Ottawa Health Research Institute | Vision enhancing ophthalmic devices and related methods and compositions |
-
2006
- 2006-10-19 AU AU2006346492A patent/AU2006346492A1/en not_active Abandoned
- 2006-10-19 CA CA002658813A patent/CA2658813A1/en not_active Abandoned
- 2006-10-19 EP EP12153451A patent/EP2484308A1/en not_active Withdrawn
- 2006-10-19 JP JP2009521731A patent/JP2009544313A/ja active Pending
- 2006-10-19 EP EP06836439.7A patent/EP2049043B1/en not_active Not-in-force
- 2006-10-19 WO PCT/US2006/041134 patent/WO2008013557A1/en active Application Filing
- 2006-10-19 KR KR1020097003839A patent/KR101335884B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2006-10-19 CN CNA2006800559211A patent/CN101511307A/zh active Pending
- 2006-10-19 US US11/584,412 patent/US20080124276A1/en not_active Abandoned
- 2006-10-23 GB GB1111329A patent/GB2480931A/en not_active Withdrawn
- 2006-10-23 GB GB0621069.4A patent/GB2440333B/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-01-22 IL IL196688A patent/IL196688A/en not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-09-15 US US15/266,989 patent/US20170065642A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05329200A (ja) * | 1992-05-28 | 1993-12-14 | Kyocera Corp | 人工角膜とその製造方法 |
US6117675A (en) * | 1996-09-25 | 2000-09-12 | Hsc Research And Development Limited Partnership | Retinal stem cells |
JP2002320666A (ja) * | 2000-09-26 | 2002-11-05 | Sanyo Chem Ind Ltd | 人工角膜の製造方法 |
JP2004528148A (ja) * | 2001-06-13 | 2004-09-16 | ザ ライオンズ アイ インスティチュート オブ ウェスターン オーストラリア インコーポレイテッド | 改善された人工角膜移植物 |
WO2005075002A1 (ja) * | 2004-02-04 | 2005-08-18 | National Institute For Materials Science | 医療用材料及びその製造方法 |
JP2009512450A (ja) * | 2005-10-21 | 2009-03-26 | インターナショナル ステム セル コーポレイション | ヒト胚性幹細胞を作製するためのヒト卵母細胞の単為生殖的活性化 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014050356A (ja) * | 2012-09-07 | 2014-03-20 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 幹細胞から外胚葉系細胞への分化誘導剤 |
KR20160040288A (ko) * | 2013-08-06 | 2016-04-12 | 고쿠리쓰 겐큐 가이하쓰 호징 리가가쿠 겐큐소 | 전안부 조직의 제조 방법 |
KR102297580B1 (ko) | 2013-08-06 | 2021-09-03 | 고쿠리쓰 겐큐 가이하쓰 호징 리가가쿠 겐큐소 | 전안부 조직의 제조 방법 |
US11274277B2 (en) | 2013-08-06 | 2022-03-15 | Riken | Method for producing anterior eye segment tissue |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2049043A4 (en) | 2009-11-04 |
GB0621069D0 (en) | 2006-11-29 |
EP2049043B1 (en) | 2018-10-10 |
IL196688A0 (en) | 2009-11-18 |
CA2658813A1 (en) | 2008-01-31 |
IL196688A (en) | 2016-06-30 |
GB2440333A (en) | 2008-01-30 |
GB2480931A (en) | 2011-12-07 |
US20170065642A1 (en) | 2017-03-09 |
GB201111329D0 (en) | 2011-08-17 |
EP2484308A1 (en) | 2012-08-08 |
WO2008013557A1 (en) | 2008-01-31 |
AU2006346492A1 (en) | 2008-01-31 |
US20080124276A1 (en) | 2008-05-29 |
GB2440333B (en) | 2015-11-04 |
KR20090042816A (ko) | 2009-04-30 |
EP2049043A1 (en) | 2009-04-22 |
KR101335884B1 (ko) | 2013-12-12 |
CN101511307A (zh) | 2009-08-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2049043B1 (en) | Synthetic cornea from retinal stem cells | |
US20220265728A1 (en) | Parthenogenic activation of human oocytes for the production of human embryonic stem cells | |
US9920299B2 (en) | Patient-specific stem cell lines derived from human parthenogenetic blastocysts | |
AU2016200394B2 (en) | Synthetic cornea from retinal stem cells | |
AU2016203682A1 (en) | Parthenogenic activation of human oocytes for the production of human embryonic stem cells | |
AU2012216371A1 (en) | Synthetic cornea from retinal stem cells | |
AU2014240375B2 (en) | Patient-specific stem cell lines derived from human parthenogenetic blastocysts | |
AU2013205483B2 (en) | Parthenogenic activation of human oocytes for the production of human embryonic stem cells | |
Class et al. | Patent application title: PARTHENOGENIC ACTIVATION OF HUMAN OOCYTES FOR THE PRODUCTION OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS Inventors: Elena S. Revazova (Pacific Palisades, CA, US) Marina V. Pryzhkova (Moscow, RU) Leonid N. Kuzmichev (Moscow, RU) Jeffrey D. Janus (Frederick, MD, US) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091019 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091019 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091224 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120418 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120717 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120724 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121017 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20121112 |