JP2009513582A

JP2009513582A - ４−オキソ−１−（３置換フェニル）−１，４−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボキサミドホスホジエステラーゼ４阻害剤及びその製造方法

Info

Publication number: JP2009513582A
Application number: JP2008536891A
Authority: JP
Inventors: ドユブ，ダニエル; ギヤラン，ミシエル; ラコンブ，パトリツク
Original assignee: Merck Canada Inc
Current assignee: Merck Canada Inc
Priority date: 2005-10-27
Filing date: 2006-10-23
Publication date: 2009-04-02
Also published as: EP1951722A1; WO2007048225A1; TW200732334A; AU2006308454A1; US20080070940A1; PE20070710A1; CA2626928A1; US20070099951A1; AR057555A1; DOP2006000240A

Abstract

本発明は構造式（２２）：

の化合物、その結晶形態及び結晶性遊離酸、これらの化合物を含有する医薬組成物、並びにその製造方法に関する。これらの化合物はホスホジエステラーゼ４阻害剤であり、喘息及び炎症の治療に有用であり、更に認知力増進に有用である。

Description

本発明は構造式（２２）：

の化合物、構造式（２２）の結晶形態とその遊離酸、これらの化合物を含有する医薬組成物、並びにこれらの化合物の製造及び使用方法に関する。

ホルモンは細胞活性に様々な影響を与える化合物である。多くの点でホルモンは特定細胞応答及び活性を誘発するためのメッセンジャーとして作用する。しかし、ホルモンにより生じる多くの作用はホルモンのみの作用により生じるものではない。代わりに、ホルモンはまず受容体と結合することにより、第２の化合物の放出を誘発し、その後、第２の化合物が細胞活性に作用する。この場合、ホルモンを第１のメッセンジャーと言い、第２の化合物を第２のメッセンジャーと言う。環状アデノシン一リン酸（アデノシン３’，５’環状一リン酸、「ｃＡＭＰ」又は「環状ＡＭＰ」）はエピネフリン、グルカゴン、カルシトニン、コルチコトロフィン、リポトロピン、黄体形成ホルモン、ノルエピネフリン、副甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン及びバソプレッシン等のホルモンの第２のメッセンジャーと言われる。従って、ｃＡＭＰはホルモンに対する細胞応答を誘導する。環状ＡＭＰは各種神経伝達物質に対する細胞応答も誘導する。

ホスホジエステラーゼ（「ＰＤＥ」）は３’，５’環状ヌクレオチドを５’ヌクレオシド一リン酸に代謝させることにより、ｃＡＭＰの第２のメッセンジャー活性を終了させる酵素ファミリーである。特に、親和性の高いｃＡＭＰ特異的なＩＶ型ＰＤＥであるホスホジエステラーゼ４（「ＰＤＥ４」、あるいは「ＰＤＥ−ＩＶ」とも言う）は新規抗喘息及び抗炎症性化合物開発の可能性ある標的として注目されている。ＰＤＥ４は各々異なる遺伝子によりコードされる少なくとも４種のアイソザイムとして存在することが分かっている。４種の公知ＰＤＥ４遺伝子産物の各々がアレルギー及び／又は炎症応答に様々な役割を果たすと考えられている。従って、ＰＤＥ４、特に有害な応答を生じる特定ＰＤＥ４アイソフォームの阻害はアレルギー及び炎症症状に有益に作用すると考えられている。ＰＤＥ４活性を阻害する新規化合物及び組成物を提供できるならば望ましい。

ＰＤＥ４阻害剤の使用に伴う主な問題はＣ．Ｂｕｒｎｏｕｆら（「Ｂｕｒｎｏｕｆ」），Ａｎｎ．Ｒｅｐ．ＩｎＭｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３３：９１−１０９（１９９８）に記載されているような数種の候補化合物で観察されている嘔吐の副作用である。Ｂ．Ｈｕｇｈｅｓら，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１１８：１１８３−１１９１（１９９６）；Ｍ．Ｊ．Ｐｅｒｒｙら，ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２９：１１３−１３２（１９９８）；Ｓ．Ｂ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１：８２１−８３５（１９９８）；及びＢｕｒｎｏｕｆは各種化合物が示す望ましくない副作用の重篤度が大きく変動することを記載している。Ｍ．Ｄ．Ｈｏｕｓｌａｙら，Ａｄｖ．ＩｎＰｈａｒｍａｃｏｌ，４４：２２５−３４２（１９９８）及びＤ．Ｓｐｉｎａら，Ａｄｖ．ＩｎＰｈａｒｍａｃｏｌ，４４：３３−８９（１９９８）に記載されているように、治療薬としてのＰＤＥ４阻害剤は大きな関心を集め、広く研究されている。

国際特許公開ＷＯ９４２２８５２はＰＤＥ４阻害剤としてのキノリンについて記載している。国際特許公開ＷＯ９９０７７０４はＰＤＥ４阻害剤としての１−アリール−１，８−ナフチリジン−４−オン誘導体について記載している。

ＷＯ２００４／０４８３７４（公開日２００４年６月１０日）は式（２１）の化合物とその製造方法を開示している。

ＷＯ２００４／０４８３７７（公開日２００４年６月１０日）及びＵＳ６，９０９，００２（発行日２００５年６月２１日）はナフチリデンＰＤＥ４阻害剤の製造に有用な方法を開示している。

発明の要旨
本発明は構造式（２２）：

図面の簡単な説明
図１は、構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩の特徴的Ｘ線回折パターンを示す。
図２は、構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩の炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。
図３は、構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩のフッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。
図４は、構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩の典型的ラマンスペクトルを示す。
図５は、構造式（２１）の結晶性遊離酸の特徴的Ｘ線回折パターンを示す。
図６は、構造式（２１）の結晶性遊離酸の炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。
図７は、構造式（２１）の結晶性遊離酸のフッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。
図８は、構造式（２１）の結晶性遊離酸の典型的示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線を示す。

図１からの主要ピークは以下の通りである（波長ＣｕＫα）。

図５からの主要ピークは以下の通りである（波長ＣｕＫα）。

発明の詳細な説明
１側面では、本発明は式（２２）：

の化合物に関する。

別の側面では、構造式（２２）の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物が提供される。

この側面には、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、ロイコトリエン生合成阻害剤、Ｍ２／Ｍ３アンタゴニスト、コルチコステロイド、Ｈ１受容体アンタゴニスト又はβ２アドレナリン受容体アゴニストを更に含有する類の医薬組成物が含まれる。

この側面には、ＣＯＸ−２選択的阻害剤、スタチン又はＮＳＡＩＤを更に含有する別の類の医薬組成物が含まれる。

別の側面では、本発明は治療有効量又は予防有効量の構造式（２２）の化合物を投与する段階を含む喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肉芽腫、乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋及び脳の再潅流傷害、炎症性関節炎、骨粗鬆症、慢性糸球体腎炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、動物の慢性閉塞性肺疾患、尿崩症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、神経性炎症、疼痛、咳、関節リウマチ、強直性脊椎炎、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、胃酸分泌過多、細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性、変形性関節症、癌、悪液質、筋肉疲労、鬱病、記憶障害、単極性鬱病、炎症性要素を伴う急性及び慢性神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、脊髄損傷、頭部外傷、多発性硬化症、腫瘍増殖並びに正常組織の癌浸潤の治療又は予防方法に関する。

別の側面では、本発明は安全な認知力増進量の構造式（２２）の化合物を投与する段階を含む対象における認知力の増進方法に関する。

別の側面では、本発明は構造式（２２）の化合物の結晶形態に関する。

別の側面では、本発明は構造式（２１）：

の化合物の結晶形態に関する。

別の側面では、構造式（２１）又は（２２）の結晶性化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物が提供される。

別の側面では、本発明は治療有効量又は予防有効量の構造式（２１）又は（２２）の結晶性化合物を投与する段階を含む喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肉芽腫、乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋及び脳の再潅流傷害、炎症性関節炎、骨粗鬆症、慢性糸球体腎炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、動物の慢性閉塞性肺疾患、尿崩症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、神経性炎症、疼痛、咳、関節リウマチ、強直性脊椎炎、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、胃酸分泌過多、細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性、変形性関節症、癌、悪液質、筋肉疲労、鬱病、記憶障害、単極性鬱病、炎症性要素を伴う急性及び慢性神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、脊髄損傷、頭部外傷、多発性硬化症、腫瘍増殖並びに正常組織の癌浸潤の治療又は予防方法に関する。

別の側面では、本発明は安全な認知力増進量の構造式（２１）又は（２２）の結晶性化合物を投与する段階を含む対象における認知力の増進方法に関する。

別の側面では、本発明は構造式（２２）の化合物の結晶性塩と、検出可能な量の場合により結晶性の構造式（２１）の遊離酸を含有する組成物に関する。

この側面には、約５〜約１００重量％の前記場合により結晶性の遊離酸を含有する類の組成物が含まれる。

この側面には、約１０〜約１００重量％の前記場合により結晶性の遊離酸を含有する類の組成物が含まれる。

この側面には、約２５〜約１００重量％の前記場合により結晶性の遊離酸を含有する類の組成物が含まれる。

この側面には、約５０〜約１００重量％の前記場合により結晶性の遊離酸を含有する類の組成物が含まれる。

この側面には、約７５〜約１００重量％の前記場合により結晶性の遊離酸を含有する類の組成物が含まれる。

この側面には、実質的に全部が前記場合により結晶性の遊離酸から構成される類の組成物が含まれる。

１側面では、本発明は式（２０）、（２１）及び（２２）：

の化合物の製造方法として、
（ａ）式（５）：

の化合物を第１の溶媒中でピナコール：

と反応させ、式（１５）：

のエステルを得る段階と、
（ｂ）式（１５）のエステルを非プロトン性溶媒中でルイス酸及びシクロプロピルアミン：

と反応させた後に酸性水溶液で洗浄し、式（１６）：

の化合物を得る段階と、
（ｃ）パラジウム触媒とホスフィン配位子を第３の溶媒に懸濁した懸濁液中で式（１６）の化合物を式（３）：

の臭化アリールと反応させた後に水性緩衝液を加え、式（２０）：

の化合物を得る段階と、
（ｄ）式（２０）の化合物をＣ_１−６アルカノール溶媒中で強塩基と反応させ、式（２１）：

の化合物を得る段階と、
（ｅ）水とＣ_１−６アルカノール溶媒を含む溶媒中で式（２１）の化合物をナトリウム塩基と反応させ、式（２２）：

の化合物を得る段階を含む方法に関する。

段階（ａ）に関して、式（５）の化合物とピナコールのモル比は約０．５：１〜２：１であり、一般には約１：１であり、ピナコールを僅かに過剰とする。本明細書の趣旨では、第１の溶媒は共沸蒸留により水を除去することが可能な任意非反応性溶媒として定義される。第１の溶媒としてはトルエンやキシレン等の溶媒が挙げられる。反応段階（ａ）は６０〜１２０℃、一般には８０〜１１０℃の温度範囲で適切に実施することができ、実質的に完了するまで１〜６時間、一般には２〜４時間進行させる。

段階（ｂ）に関して、式（１５）の化合物とルイス酸のモル比は約０．５：１〜２：１であり、一般には約１：１であり、エステルを僅かに過剰とする。式（１５）の化合物とシクロプロピルアミンのモル比は約０．８：１〜１：６であり、一般には約１：３〜１：５である。本明細書の趣旨では、非プロトン性溶媒はジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を含むものとして定義される。この反応段階の趣旨では、ルイス酸はＭｇＣｌ_２とＺｎＣｌ_２を含むものとして定義される。反応段階（ｂ）は０〜６０℃、一般には１５〜５０℃の温度範囲で適切に実施することができ、実質的に完了するまで１〜６時間、一般には２〜４時間進行させる。

段階（ｃ）に関して、式（１６）の化合物と式（３）の化合物のモル比は約０．５：１〜２．０：１であり、一般には約１：１である。パラジウム触媒と式１６の化合物のモル比は約０．００１：１〜０．１：１であり、一般には０．０２：１〜０．０５：１である。水性緩衝液と式（１６）の化合物のモル比は２：１以上である。水性緩衝液としては炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウム等の緩衝液が挙げられる。ホスフィン配位子と式１６の化合物のモル比は約０．０５：１〜０．５：１であり、一般には０．１：１〜０．３：１である。本明細書の趣旨では、第３の溶媒はジメチルホルムアミド、プロパノール（ｎ−プロパノールを含む）及びこれらの溶媒の混合物を含むものとして定義される。ホスフィン配位子はＰ（ｔ−ブチル）_３、Ｐ（Ｃｙ）_３及びＰ（ｔ−ブチル）_２（ビフェニル）等のＰ（Ｃ_１−６アルキル）_３又は（フェニル）_３等のＰ（アリール）_３を含むものとして定義される。本明細書の趣旨では、パラジウム触媒としては、Ｆｕ触媒（即ちＰ（ｔ−ブチル）_３−Ｐｄ−Ｐ（ｔ−ブチル）_３）、［ＰｄＣｌ（アリル）］_２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３、及び［Ｐ（ｔ−ブチル）_３ＰｄＢｒ］_２（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｍａｔｔｈｅｙ触媒）が挙げられる。反応段階（ｃ）は０〜１００℃、一般には２０〜８５℃の温度範囲で適切に実施することができ、実質的に完了するまで進行させる。

段階（ｄ）に関して、式（２０）の化合物とＮａＳ_２Ｏ_５のモル比は約１：０．０５〜１：０．２であり、一般には約１：０．１である。式（２０）の化合物と強塩基のモル比は約１：２〜１：４であり、一般には１：３以上である。強塩基としては水素化ナトリウムが挙げられる。本明細書の趣旨では、Ｃ_１−６アルカノール溶媒はメタノール、エタノール、ｉ−プロパノール及びｎ−プロパノールを含むものとして定義される。反応段階（ｄ）は実質的に完了するまで０．５〜４時間、一般には１〜３時間進行させる。

段階（ｅ）に関して、式（２１）の化合物とナトリウム塩基のモル比は約０．５：１〜２．０：１．０５であり、一般には約１：１又はナトリウム塩基過剰である。本明細書の趣旨では、Ｃ_１−６アルカノール溶媒は段階（ｄ）で定義した通りである。本明細書の趣旨では、ナトリウム塩基は水酸化ナトリウムとナトリウムメトキシド等のナトリウムアルコキシドを含むものとして定義される。反応段階（ｅ）は０〜１００℃、一般には２０〜８０℃の温度範囲で適切に実施することができ、実質的に完了するまで進行させる。

この側面には、
非プロトン性溶媒がジメチルアセトアミド又はジメチルホルムアミドであり；
ルイス酸がＭｇＣｌ_２又はＺｎＣｌ_２であり；
パラジウム触媒がＰ（ｔ−ブチル）_３−Ｐｄ−Ｐ（ｔ−ブチル）_３、［ＰｄＣｌ（アリル）］_２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３又は［Ｐ（ｔ−ブチル）_３ＰｄＢｒ］_２であり；
ホスフィン配位子がＰ（ｔ−ブチル）_３、Ｐ（Ｃｙ）_３又はＰ（フェニル）_３であり；
第３の溶媒がジメチルホルムアミド又はプロパノール又はその混合物であり；
強塩基が水酸化ナトリウムであり；
ナトリウム塩基が水酸化ナトリウム又はナトリウムアルコキシドであり；
Ｃ_１−６アルカノール溶媒がメタノール、エタノール、ｉ−プロパノール又はｎ−プロパノールであり；
水性緩衝液が炭酸ナトリウムである類が含まれる。

別の側面では、本発明は式（３）：

の中間体化合物の製造方法として、
（ｆ）ＭＴＥＢ（メチルｔ−ブチルエーテル）中で酸素の不在下にトリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）−ベンゼン錯体を式（１０）：

のビスオキサゾリン配位子と反応させ、式（１０−Ｃｕ）：

をもつと考えられる銅（Ｉ）触媒を得る段階と、
（ｇ）ＭＴＥＢ中で式（１０−Ｃｕ）の銅（Ｉ）触媒の存在下に式（２）：

のビニルベンゼンをジアゾ酢酸エチルと反応させ、式（３）：

の化合物を生成する段階を含む方法を包含する。

段階（ｆ）に関して、式（１０）の配位子とトリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）−ベンゼン錯体のモル比は約０．５：１〜２．０：１であり、一般には約１：１〜１．５：１である。本明細書の趣旨では、溶媒はメチルｔ−ブチルエーテル、ＴＨＦ、ヘキサン類、ヘプタン及びトルエンを含むものとして定義される。反応段階（ｆ）は０〜５０℃、一般には１０〜３０℃の温度範囲で適切に実施することができ、実質的に完了するまで０．５〜２時間進行させる。

段階（ｇ）に関して、式（２）のビニルベンゼンとジアゾ酢酸エチルのモル比は約０．３：１〜２．０：１であり、一般には約１：２である。本明細書の趣旨では、溶媒はメチルｔ−ブチルエーテル、ＴＨＦ、ヘキサン類、ヘプタン及びトルエンを含むものとして定義される。反応段階（ｇ）は実質的に完了するまで進行させる。

別の側面では、本発明は式（２）：

の中間体化合物の製造方法として、
（ｈ）炭化水素溶媒中でホスフィン配位子とパラジウム触媒の存在下に式（１）：

の化合物を式：

の塩化ビニルマグネシウム及びＺｎＣｌ_２と反応させ、式（２）の化合物を得る段階を含む方法を包含する。

段階（ｈ）に関して、式（１）の化合物と塩化ビニルマグネシウムのモル比は約０．３：１〜３：１であり、一般には約１：２である。式（１）の化合物とＺｎＣｌ_２のモル比は約１：１である。本明細書の趣旨では、炭化水素溶媒はＴＨＦ、ペンタン類、ヘキサン類、ヘキサン及びトルエンを含むものとして定義される。本明細書の趣旨では、ホスフィン配位子はＰ（ｔ−ブチル）_３、Ｐ（Ｃｙ）_３、Ｐ（ｔ−ブチル）_２（ビフェニル）等のＰ（Ｃ_１−６アルキル）_３とＰ（フェニル）_３等のＰ（アリール）_３を含むものとして定義される。本明細書の趣旨では、パラジウム触媒としては、Ｆｕ触媒（即ちＰ（ｔ−ブチル）_３−Ｐｄ−Ｐ（ｔ−ブチル）_３）、［ＰｄＣｌ（アリル）］_２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３、及び［Ｐ（ｔ−ブチル）_３ＰｄＢｒ］_２（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｍａｔｔｈｅｙ触媒）が挙げられる。反応段階（ｈ）は実質的に完了するまで１〜１０時間、一般には２〜６時間進行させる。

この側面には、
炭化水素溶媒がペンタン又はヘキサンであり；
ホスフィン配位子がＰ（ｔ−ブチル）_３、Ｐ（Ｃｙ）_３、Ｐ（ｔ−ブチル）_２（ビフェニル）又はＰ（フェニル）_３であり；
パラジウム触媒がＰ（ｔ−ブチル）_３−Ｐｄ−Ｐ（ｔ−ブチル）_３、［ＰｄＣｌ（アリル）］_２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３又は［Ｐ（ｔ−ブチル）_３ＰｄＢｒ］_２である類が含まれる。

別の側面では、式（３）：

の純度を増加させる方法として、そのシス対応部分、式（３−ｃｉｓ）の化合物、並びに式（１１）及び（１２）：

の化合物を除去することにより純度を増加させる方法が提供され、本方法は、
（ｉ）Ｃ_１−６アルカノール中で前記化合物を水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤と反応させ、式（１１）及び（１２）の化合物を式（１１ａ）：

の化合物に還元し、
式（１１ａ）の化合物と３−ｃｉｓを除去する段階と、
（ｊ）段階（ｉ）の生成物をＬｉＯＨで加水分解し、式（３）の化合物を式（１３）：

の化合物又はそのＬｉ塩に変換し、式（１１ａ）の化合物をその二酸又はリチウム塩に変換する段階と、
（ｋ）ＭＴＢＥ、ヘプタン及び／又はその混合物等の有機溶媒で抽出することによりｃｉｓ−３を除去する段階と、
（ｌ）メタノール、水又はその混合物等の適切な結晶化溶媒から結晶化させることにより式１３の化合物を精製する段階と、
（ｍ）式１３の化合物をエタノール及び塩化チオニルと反応させ、式（３）の化合物を形成する段階を含む。

式（２１）及び（２２）の化合物は有用なホスホジエステラーゼ４阻害剤であり、哺乳動物における例えば喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肉芽腫、乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋及び脳の再潅流傷害、炎症性関節炎、骨粗鬆症、慢性糸球体腎炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、動物の慢性閉塞性肺疾患、尿崩症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、神経性炎症、疼痛、咳、関節リウマチ、強直性脊椎炎、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、胃酸分泌過多、細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性、変形性関節症、癌、悪液質、筋肉疲労、鬱病、記憶障害、単極性鬱病、炎症性要素を伴う急性及び慢性神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、脊髄損傷、頭部外傷、多発性硬化症、腫瘍増殖並びに正常組織の癌浸潤の治療に有用である。

本発明の医薬組成物は活性成分としての式（２１）又は（２２）により表される化合物と、医薬的に許容可能なキャリヤーと、場合により他の治療成分又はアジュバントを含有する。このような他の治療成分としては、例えばｉ）ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、ｉｉ）ロイコトリエン生合成阻害剤、ｉｉｉ）コルチコステロイド、ｉｖ）Ｈ１受容体アンタゴニスト、ｖ）β２アドレナリン受容体アゴニスト、ｖｉ）ＣＯＸ−２選択的阻害剤、ｖｉｉ）スタチン類、ｖｉｉｉ）非ステロイド性抗炎症薬（「ＮＳＡＩＤ」）、及びｉｘ）Ｍ２／Ｍ３アンタゴニストが挙げられる。組成物としては経口、直腸、局所及び非経口（皮下、筋肉内及び静脈内を含む）投与に適した組成物が挙げられるが、任意所与患者に最適な経路は特定宿主、及び活性成分が投与される症状の種類と重篤度により異なる。医薬組成物は単位用量形態にすると適切であると思われ、製薬分野で周知の任意方法により製造することができる。

局所用には、式Ｉの化合物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー、溶液又は懸濁液を利用することができる。本発明の趣旨では、マウスウォッシュと嗽薬も局所用の範囲に含む。

ｉ）肺疾患（例えば喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、咳、動物の慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、及び小児呼吸窮迫症候群）、ｉｉ）胃腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、及び胃酸分泌過多）、ｉｉｉ）感染症（例えば細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、及び敗血症性ショック）、ｉｖ）神経疾患（例えば脊髄損傷、頭部外傷、神経性炎症、疼痛、及び脳の再潅流傷害）、ｖ）炎症性疾患（例えば乾癬性関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変形性関節症、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性）、ｖｉ）アレルギー性疾患（例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及び好酸球性肉芽腫）、ｖｉｉ）精神疾患（例えば鬱病、記憶障害及び単極性鬱病）、ｖｉｉｉ）神経変性疾患（例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、急性及び慢性多発性硬化症）、ｉｘ）皮膚疾患（例えば乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、並びに蕁麻疹）、ｘ）腫瘍疾患（例えば癌、腫瘍増殖及び正常組織の癌浸潤）、ｘｉ）代謝疾患（例えば尿崩症）、ｘｉｉ）骨疾患（例えば骨粗鬆症）、ｘｉｉｉ）心臓血管疾患（例えば動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、心筋の再潅流傷害）、及びｘｉｖ）他の疾患（例えば慢性糸球体腎炎、春季カタル、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、並びに悪液質）等のＰＤＥ４阻害剤に応答性の症状の治療には、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇ体重／日（又は約０．０５ｍｇ〜約７ｇ／患者／日）の用量レベルが有用である。例えば、炎症は化合物約０．００５ｍｇ〜１０又は２５又は５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、あるいは約０．２５ｍｇ〜約２．５ｇ／患者／日を投与することにより有効に治療することができる。更に、当然のことながら、本発明のＰＤＥ４阻害性化合物は上記症状を予防するために予防薬として有効な用量レベルで投与することができる。

単一用量形態を製造するためにキャリヤー材料と配合することができる活性成分の量は治療する宿主と特定投与方法により異なる。例えば、ヒト経口投与用製剤は合計組成物の約５〜約９５％の範囲の妥当且つ適切な量のキャリヤー材料と活性剤約０．２５ｍｇ〜約５ｇを配合すると適切であると思われる。単位用量形態は一般に活性成分約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、一般には０．０１ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．２５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ又は１０００ｍｇを含有する。

しかし、当然のことながら、任意特定患者の特定用量レベルは年齢、体重、一般健康状態、性別、食事、投与時間、投与方法、***速度、薬剤併用及び治療する特定疾患の重篤度等の種々の因子により異なる。

実際には、本発明の式Ｉにより表される化合物又はその医薬的に許容可能な塩を活性成分として慣用医薬配合技術により医薬キャリヤーと混和することができる。キャリヤーは例えば経口又は非経口（静脈内を含む）等の投与に所望される製剤形態に応じて多様な形態をとることができる。従って、本発明の医薬組成物は規定量の活性成分を各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤等の経口投与に適した分離単位形態とすることができる。更に、組成物は散剤、顆粒剤、溶液剤、水性液体懸濁液剤、非水性液剤、水中油エマルション又は油中水液エマルションとすることができる。上記一般剤形に加え、式Ｉにより表される化合物又はその医薬的に許容可能な塩は制御放出手段及び／又は送達装置により投与することもできる。組成物は任意製薬法により製造することができる。一般に、このような方法は１種以上の必要成分を構成するキャリヤーと活性成分を配合する段階を含む。一般に、組成物は活性成分を液体キャリヤー又は微粉状固体キャリヤー又はその両者と均一混和することにより製造される。その後、製剤を所望形態に適切に成形することができる。

従って、本発明の医薬組成物は医薬的に許容可能なキャリヤーと式Ｉの化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含有することができる。式Ｉの化合物又はその医薬的に許容可能な塩を医薬組成物で１種以上の他の治療活性化合物と併用してもよい。

使用する医薬キャリヤーは例えば固体、液体又は気体とすることができる。固体キャリヤーの例としては乳糖、石膏、蔗糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアガム、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸が挙げられる。液体キャリヤーの例としては糖蜜、落花生油、オリーブ油及び水が挙げられる。気体キャリヤーの例としては二酸化炭素と窒素が挙げられる。

経口剤形用組成物を製造するには、適当な任意医薬媒体を使用することができる。例えば、水、グリコール、油類、アルコール類、香味剤、防腐剤、着色剤等を使用して懸濁液剤、エリキシル剤及び溶液剤等の経口液体製剤を形成することができ、澱粉、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のキャリヤーを使用して散剤、カプセル剤及び錠剤等の経口固体製剤を形成することができる。投与し易いという理由から錠剤とカプセル剤が好ましい経口用量単位であるので、固体医薬キャリヤーを利用する。場合により、標準水性又は非水性技術により錠剤に被覆してもよい。

本発明の組成物を含有する錠剤は場合により１種以上の補助成分又はアジュバントを加えて圧縮又は成形により製造することができる。圧縮錠は散剤や顆粒剤等のさらさらした形態の活性成分を場合により結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤又は分散剤と混合し、適当な機械で圧縮することにより製造することができる。成形錠は不活性液体希釈剤で湿潤させた粉末化合物の混合物を適当な機械で成形することにより製造することができる。錠剤は１錠当たり活性成分約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇを含有することが好ましく、各カシェ剤又はカプセル剤は活性成分約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇを含有することが好ましい。

非経口投与に適した本発明の医薬組成物は活性化合物の水溶液又は水性懸濁液として製造することができる。例えば、ヒドロキシプロピルセルロース等の適当な界面活性剤を加えることができる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びその油中混合物で分散液剤を製造することもできる。更に、微生物の有害な増殖を防ぐために防腐剤を加えてもよい。

注射用に適した本発明の医薬組成物としては滅菌水溶液又は分散液が挙げられる。更に、組成物は前記滅菌注射溶液又は分散液の即席調製用滅菌粉末の形態でもよい。いずれの場合も、最終注射剤形態は無菌でなければならず、注射針を通過し易いように十分流動性でなければならない。医薬組成物は製造及び貯蔵条件下で安定でなければならないので、細菌や真菌等の微生物の汚染作用から保護することが好ましい。キャリヤーは例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、シクロデキストリン、植物油及び適当なその混合物を含む溶媒又は分散媒とすることができる。

本発明の医薬組成物は例えばエアゾール、クリーム、軟膏、ローション、散布剤等の局所用に適した形態とすることができる。更に、組成物は経皮装置で使用するのに適した形態とすることができる。これらの製剤は本発明の式Ｉにより表される化合物又はその医薬的に許容可能な塩を使用して慣用加工法により製造することができる。１例として、クリーム又は軟膏は親水性材料と水を化合物約５重量％〜約１０重量％と混合して所望コンシステンシーをもつクリーム又は軟膏とすることにより製造される。

本発明の医薬組成物はキャリヤーを固体とする直腸投与に適した形態とすることができる。混合物は単位用量座剤を形成することが好ましい。適切なキャリヤーとしてはカカオバターや当分野で一般に使用されている他の材料が挙げられる。座剤はまず組成物を軟化又は溶融キャリヤーと混合した後に冷却し、型で成形することにより適切に形成することができる。

上記キャリヤー成分に加え、上記医薬製剤は希釈剤、緩衝液、香味剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤、防腐剤（酸化防止剤を含む）等の１種以上の他のキャリヤー成分を適宜添加することができる。更に、製剤を所期レシピエントの血液と等張にするように他のアジュバントを添加することができる。式Ｉにより表される化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含有する組成物は粉末又は濃厚液形態で製造してもよい。

本発明の化合物及び医薬組成物はＰＤＥ４阻害剤としての生物活性を示すことが判明した。従って、本発明の別の側面は有効量の本発明の化合物の投与による哺乳動物における以下の疾患の治療、例えばｉ）肺疾患（例えば喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、咳、動物の慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、及び小児呼吸窮迫症候群）、ｉｉ）胃腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、及び胃酸分泌過多）、ｉｉｉ）感染症（例えば細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、及び敗血症性ショック）、ｉｖ）神経疾患（例えば脊髄損傷、頭部外傷、神経性炎症、疼痛、及び脳の再潅流傷害）、ｖ）炎症性疾患（例えば乾癬性関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変形性関節症、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性）、ｖｉ）アレルギー性疾患（例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及び好酸球性肉芽腫）、ｖｉｉ）精神疾患（例えば鬱病、記憶障害及び単極性鬱病）、ｖｉｉｉ）神経変性疾患（例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、急性及び慢性多発性硬化症）、ｉｘ）皮膚疾患（例えば乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、並びに蕁麻疹）、ｘ）腫瘍疾患（例えば癌、腫瘍増殖及び正常組織の癌浸潤）、ｘｉ）代謝疾患（例えば尿崩症）、ｘｉｉ）骨疾患（例えば骨粗鬆症）、ｘｉｉｉ）心臓血管疾患（例えば動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、心筋の再潅流傷害）、及びｘｉｖ）他の疾患（例えば慢性糸球体腎炎、春季カタル、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、並びに悪液質）、即ちＰＤＥ４アイソザイムの阻害により改善することができ、その結果としてｃＡＭＰ値が上昇する疾患の治療である。「哺乳動物」なる用語はヒトと他の動物（例えばイヌ、ネコ、ウマ、ブタ及びウシ）を意味する。従って、当然のことながらヒト以外の哺乳動物の治療はヒト疾患である上記例に相関する臨床疾患の治療である。

更に、上述のように、本発明の化合物は他の治療化合物と併用することができる。特に、本発明のＰＤＥ４阻害性化合物はｉ）ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、ｉｉ）ロイコトリエン生合成阻害剤、ｉｉｉ）ＣＯＸ−２選択的阻害剤、ｉｖ）スタチン類、ｖ）ＮＳＡＩＤ、ｖｉ）Ｍ２／Ｍ３アンタゴニスト、ｖｉｉ）コルチコステロイド、ｖｉｉｉ）Ｈ１（ヒスタミン）受容体アンタゴニスト及びｉｘ）β２アドレナリン受容体アゴニストと有利に併用することができる。

従って、例えば、肺疾患（例えば喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、咳、動物の慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、及び小児呼吸窮迫症候群）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

胃腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、及び胃酸分泌過多）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

感染症（例えば細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、及び敗血症性ショック）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

神経疾患（例えば脊髄損傷、頭部外傷、神経性炎症、疼痛、及び脳の再潅流傷害）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

炎症性疾患（例えば乾癬性関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変形性関節症、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

アレルギー性疾患（例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及び好酸球性肉芽腫）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

精神疾患（例えば鬱病、記憶障害及び単極性鬱病）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

神経変性疾患（例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、急性及び慢性多発性硬化症）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

皮膚疾患（例えば乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、並びに蕁麻疹）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

腫瘍疾患（例えば癌、腫瘍増殖及び正常組織の癌浸潤）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

代謝疾患（例えば尿崩症）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

骨疾患（例えば骨粗鬆症）、心臓血管疾患（例えば動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、心筋の再潅流傷害）、及び他の疾患（例えば慢性糸球体腎炎、春季カタル、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、並びに悪液質）は本願の化合物又はその医薬的に許容可能な塩の活性成分０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は５００ｍｇを各々含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤を１日１回、２回又は３回投与することにより適切に治療することができる。

認知力増進（例えば記憶力、学習力、記憶保持力、回想力、認識力及び判断力増進）には、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日又は約０．００５ｍｇ〜約２．５ｇ／患者／日の用量レベルが有用である。あるいは、化合物約０．００１ｍｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、又は約０．０５ｍｇ〜約５００ｍｇ／患者／日の用量レベルが有用である。

単一用量形態を製造するためにキャリヤー材料と配合することができる活性成分の量は治療する宿主と特定投与方法により異なる。例えば、ヒト経口投与用製剤は活性剤約０．００５ｍｇ〜約２．５ｇを妥当且つ適切な量のキャリヤー材料と配合すると適切であると思われる。単位用量形態は一般に活性成分約０．００５ｍｇ〜約１０００ｍｇを含有し、一般には０．００５、０．０１ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．２５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ又は１０００ｍｇを含有し、１日１回、２回又は３回投与する。

生物活性を立証するアッセイ
ヒト全血におけるＬＰＳ及びＦＭＬＰ誘導性ＴＮＦ−α及びＬＴＢ_４アッセイ
全血はＰＤＥ４選択的阻害剤等の抗炎症性化合物の生化学的効力の試験に適切な蛋白及び細胞含量の高い培地を提供する。正常非刺激ヒト血液は検出可能な濃度のＴＮＦ−α及びＬＴＢ_４を含有していない。ＬＰＳで刺激すると、活性化された単球は８時間までＴＮＦ−αを発現及び分泌し、血漿濃度は２４時間安定に維持される。公開された研究報告によると、ＰＤＥ４阻害及び／又はアデニル酸シクラーゼ活性亢進により細胞内ｃＡＭＰが上昇することによるＴＮＦ−αの阻害は転写レベルで生じることが分かっている。ＬＴＢ_４合成も細胞内ｃＡＭＰ値に感受性であり、ＰＤＥ４選択的阻害剤により完全に阻害することができる。全血の２４時間ＬＰＳ刺激中にＬＴＢ_４は殆ど産生されないので、活性化好中球によるＬＴＢ_４合成には更にＬＰＳ刺激を加えた後にヒト全血をｆＭＬＰで攻撃することが必要である。従って、同一血液サンプルを使用することにより、全血中のＰＤＥ４活性の２種の代理マーカーに及ぼす化合物の効力を以下の手順により評価することが可能である。

健康な（男女）ヒトボランティアから静脈穿刺により新鮮血液をヘパリン管に採血した。これらの対象は外観上炎症症状がなく、採血前少なくとも４日間ＮＳＡＩＤの投与を停止した。５００μＬ血液アリコートをビヒクル（ＤＭＳＯ）２μＬ又は各種濃度の試験化合物２μＬと共に１５分間３７℃でプレインキュベートした。その後、ブランクとしてビヒクル（ＰＢＳ）１０μＬ又はＬＰＳ（終濃度１μｇ／ｍＬ，大腸菌由来＃Ｌ−２６３０（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ），血清型０１１１：Ｂ４；（ＰＢＳ中）０．１％ｗ／ｖＢＳＡで希釈）１０μＬを加えた。２４時間３７℃でインキュベーション後、更にＰＢＳ（ブランク）１０μＬ又はＬＰＳ（終濃度１μｇ／ｍＬ）１０μＬを血液に加え、３０分間３７℃でインキュベートした。次に、血液をＰＢＳ（ブランク）１０μＬ又はｆＭＬＰ（終濃度１μＭ，＃Ｆ−３５０６（Ｓｉｇｍａ）；（ＰＢＳ中）１％ｗ／ｖＢＳＡで希釈）１０μＬで１５分間３７℃にて攻撃した。血液サンプルを１５００×ｇで１０分間４℃にて遠心し、血漿を得た。５０μＬ血漿アリコートを蛋白沈殿のためにメタノール２００μＬと混合し、上記のように遠心した。酵素イムノアッセイキット（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，ＡｎｎＡｒｂｏｒ，ＭＩ製品＃５２０１１１）を製造業者の手順に従って使用して上清のＬＴＢ_４をアッセイした。ＥＬＩＳＡキット（ＣｉｓｔｒｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＰｉｎｅＢｒｏｏｋ，ＮＪ）を製造業者の手順に従って使用して（ＰＢＳで）希釈した血漿中のＴＮＦ−αをアッセイした。

インビボ抗アレルギー活性
感作モルモットによる抗原吸入により誘導したＩｇＥによるアレルギー性肺炎症に及ぼす効果について本発明の化合物を試験した。抗原を水酸化アルミニウム及び百日咳ワクチンと共に腹腔内注射することにより、シクロホスファミドによる軽度免疫抑制条件下にまずモルモットをオボアルブミン感作した。２週間後と４週間後にブースター用量の抗原を投与した。６週目に抗ヒスタミン剤（メピラミン）の腹腔内投与下に動物をエアゾール化オボアルブミンで攻撃した。更に４８時間後に、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を実施し、ＢＡＬ液中の好酸球及び他の白血球数を計数した。更に、炎症性損傷の組織学的試験のために肺を摘出した。抗原攻撃後４８時間３回まで実施例の化合物を投与（０．００１〜１０ｇ／ｋｇｉ．ｐ．又はｐ．ｏ．）すると、好酸球増加症及び他の炎症性白血球の蓄積は有意に低減する。

ＳＰＡに基づくＰＤＥ活性アッセイプロトコール
ＩＶ型ｃＡＭＰ特異的ホスホジエステラーゼによるｃＡＭＰからＡＭＰへの加水分解を阻害する化合物を９６ウェルプレートフォーマットで以下のようにスクリーニングした。

３０℃の９６ウェルプレートに試験化合物（ＤＭＳＯ２μＬに溶解）と、［２，８−^３Ｈ］アデノシン３’，５’−環状リン酸（ｃＡＭＰ，１００ｎＭ〜５０μＭ）、１０ｍＭＭｇＣｌ_２、１ｍＭＥＤＴＡ，５０ｍＭＴｒｉｓ，ｐＨ７．５を含有する基質緩衝液１８８ｍＬを加えた。１０ｍＬのヒト組換えＰＤＥ４を加えることにより反応を開始した（１０分で〜１０％生成物が形成されるように量を調節した。）。１０分後にＰＤＥ−ＳＰＡビーズ（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）１ｍｇを加えることにより反応を停止した。生成した生成物ＡＭＰをＷａｌｌａｃＭｉｃｒｏｂｅｔａ（登録商標）９６ウェルプレートカウンター（ＥＧ＆ＧＷａｌｌａｃＣｏ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で定量した。酵素の不在下のシグナルをバックグラウンドとして定義した。酵素とＤＭＳＯの存在下で検出されたシグナルからバックグラウンドを差し引いた値を１００％活性として定義した。相応に阻害百分率を計算した。１０点滴定からの標準４パラメーター／多重結合部位方程式を使用して非直線回帰フィットによりＩＣ_５０値を近似した。

以下に開示する実施例のＩＣ_５０値はバキュロウイルス／Ｓｆ−９発現システムから生産されたヒト組換えホスホジエステラーゼＩＶｂ（ｍｅｔ−２４８）の精製ＧＳＴ融合蛋白を使用して１００ｎＭｃＡＭＰで決定した。

１．実験セクション
３．１．スチレン化合物２の製造

７２Ｌ容丸底フラスコに塩化亜鉛ＴＨＦ溶液（０．５Ｍ，３３．２Ｌ，１６．６２ｍｏｌ）を加えた。溶液を−５℃まで冷却し、温度を２０℃未満に維持しながら塩化ビニルマグネシウムＴＨＦ溶液（１．６Ｍ，２０．８０Ｌ，３３．２４ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。トリフェニルホスフィン（１４９．５ｇ，０．５７０ｍｏｌ）を加えた後、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_２Ｃｌ_２（２００ｇ，０．２８５ｍｏｌ）を加えた。混合物を１０分間撹拌し、１−ブロモ−３−フルオロ−４−ヨードベンゼンを加えた。ＨＰＬＣにより反応が完了したと判断されるまで反応混合物を周囲温度で４〜６時間撹拌した。

塩化亜鉛及び塩化ビニルマグネシウムＴＨＦ溶液の混合は発熱性であった。添加速度と冷却浴温度を調整することにより温度を制御した。

ヨウ化アリール（１）の添加後のカップリング反応はやや発熱性であった。冷却浴の不在下では温度は約１時間で１１℃から３７℃まで上昇した後、低下した。

２００Ｌエキストラクターで予め冷却（０℃）しておいたペンタン（２０Ｌ）、水（１２Ｌ）及び濃ＨＣｌ（１．０Ｌ）の混合物に反応混合物を注いでクエンチした。２層を分離した。有機層をペンタン（２０Ｌ）で希釈し、水洗（１６Ｌ）し、減圧濃縮した。

化合物２は非常に揮発性であり、ロータリーエバポレーターで濃縮中に〜２０％が失われた。濃縮前の生成物のアッセイによると、８０〜８５％の生成物収率が得られた。

生成物を更に以下のように精製した。残渣をペンタン（１０Ｌ）に取った。得られた懸濁液を濾過した。固形分をペンタン（１．０Ｌ）で洗浄した。濾液と洗浄液を合わせて濃縮した。粗油状物を０．１〜０．２ｍｍＨｇで真空蒸留により精製した。

精製物は淡黄色であり、０．１〜０．２ｍｍＨｇで沸点４５〜５０℃であった。蒸留回収率は〜９５％であった。生成物は９３〜９５重量％であった。蒸留釜内の残渣は蒸留後に液体であったが、冷却すると固化した。

１．２．臭化シクロプロピルアリール３の製造
１．２．１．シクロプロパン化

窒素雰囲気下で５Ｌ容丸底フラスコにトリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）−ベンゼン錯体（３９．０ｇ，０．０７７５ｍｏｌ）を仕込んだ。フラスコに脱気ＭＴＢＥ（０．７７５Ｌ）を仕込み、１５℃まで冷却した。ビスオキサゾリン配位子（４９．７ｇ，０．１６３ｍｏｌ）の脱気ＭＴＢＥ（２．３３Ｌ）溶液をカニューレで加えた。得られた懸濁液を１５〜２５℃で１時間撹拌した後、３０分間放置した。上清をインラインフィルターで濾過し、濃緑色触媒溶液を得た。

トリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）−ベンゼン錯体と得られる銅錯体は酸素感受性であるため、窒素雰囲気下で操作すべきである。

Ｃｕ（Ｉ）触媒はｉｎｓｉｔｕ製造してもよい。その場合には、４−ブロモ−２−フルオロ−１−ビニルベンゼンをトリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）とビスオキサゾリン配位子のＭＴＢＥ懸濁液に加え、透明な濃緑色溶液を得る。反応は著しく迅速に進行するが、選択性（ｄｅ及びｅｅ）はやや低下する。

機械的撹拌機、熱電対、窒素導入管及び投入用漏斗を取付けた７２Ｌ容丸底フラスコに４−ブロモ−２−フルオロ−１−ビニルベンゼン（２．００ｋｇアッセイ重量，９．９５ｍｏｌ）を仕込んだ。フラスコを排気し、窒素を３回充填した。０〜５℃（ドライアイス−アセトン浴）まで冷却後、上記のように調製した銅（Ｉ）錯体溶液を加えた。ジアゾ酢酸エチル（３８．７ｇ，８８％）の脱気ＭＴＢＥ（０．３０Ｌ）溶液を５分間加え、得られた混合物を１０分間熟成させ、ＧＣによりアッセイした。

ジアゾ酢酸エチルの蓄積は避けるべきである。生成物の形成が確認されるまで、残りのジアゾ酢酸エチルを添加してはならない。変換を開始するために反応混合物を加熱する（２０〜３０℃）ことが必要な場合もある。

内部温度を−２〜１３℃に維持しながら脱気ＭＴＢＥ（１４．６３Ｌ）中の残りのジアゾ酢酸エチル（１．９０ｋｇ，８８％）を７時間かけてゆっくりと加えた。添加の完了後、混合物を０〜５℃で２時間撹拌した。

ジアゾ酢酸エチルの添加は非常に発熱性であり、多量の窒素ガスが発生する。ジアゾ酢酸エチルが蓄積しないように反応の進行をチェックする必要がある。ジアゾ酢酸エチルの添加中にガス発生又は発熱が停止する場合には、反応を再開するために反応混合物を加熱（２０〜３０℃）することが必要な場合もある。ビニルベンゼンの完全な消費後、ジアゾ酢酸エチルは自己反応してマレイン酸ジエチルとフマル酸ジエチルを生じ、窒素ガスと熱を発生する。

ビニルベンゼンを完全に変換させるにはジアゾ酢酸エチルを僅かに過剰（１．５モル当量）にすれば十分である。しかし、分取実験室合成では、相当部分のビニルベンゼンが残留していた。従って、完全な変換を得るために追加量のジアゾ酢酸エチルを加えた。

内部温度を０〜１４℃に維持しながらジアゾ酢酸エチル（５１９ｇ）の脱気ＭＴＢＥ（３．６Ｌ）溶液を９０分間加えた。得られた混合物を０〜５℃で１時間撹拌し、１５℃まで昇温した。

ＮａＢＨ_４（１０５．２ｇ，２．７８ｍｏｌ，二量体に対して約０．６モル当量）の無水エタノール（５．１２Ｌ）溶液を反応溶液に加え、得られた混合物を１３〜２０℃（２０〜２５℃）で３．５時間撹拌した。

ＮａＢＨ_４還元はやや発熱性であり、バッチを冷却するために氷水浴を使用してもよい。ＮａＢＨ_４の量はシクロプロパン化で生じた二量体の量に基づいて計算した。二量体を還元すると琥珀酸ジエチルが得られ、ＧＣにより確認された。

反応混合物を６℃まで冷却し、バッチ温度を６℃未満に維持しながら２ＭＨＣｌ水溶液（６．１１Ｌ）を加えることによりクエンチした。得られた混合物を濾過し、１７℃まで昇温した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３．３３Ｌ）で洗浄した。化学収量は２４１８．９ｇ（８５％）であった。

１．２．２．加水分解

機械的撹拌機、熱電対、窒素導入管及び投入用漏斗を取付けた７２Ｌ容丸底フラスコにトランスエチルエステル（２．４２ｋｇアッセイ，シクロプロパン化からの粗溶液）を仕込んだ。溶液をＭｅＯＨ（１３．８Ｌ）で希釈し、フラスコを１０分間窒素パージした。ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（５９０ｇ，１３．８ｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（６．９０Ｌ）溶液をゆっくりと加えた。添加中に反応混合物の温度は１３℃から２３℃まで上昇した。追加量（２２７ｇ）のＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏを加え、得られた混合物を３８〜４０℃まで４．５時間加熱した。

出発時のエチルエステルをメタノールで加溶媒分解することによりまず対応するメチルエステルに変換した後に、カルボン酸に変換した。

トランスエステルはシスエステルよりも塩基性メタノール又はＮａＯＨに対する反応性が高い。生成物（カルボン酸）のジアステレオマー過剰率は出発材料よりも著しく高くすべきである。シス酸レベルがトランス酸よりも迅速に増加し始めるまで撹拌を続けた。生成物の最終ジアステレオマー過剰率は一般に９７％（ｄｅ）であった。

反応混合物を２０℃まで冷却し、エキストラクターシリンダーに移し、撹拌下にＨ_２Ｏ（２８．７Ｌ）とヘプタン（５．４２Ｌ）で希釈した。水層を分離し、インランイフィルターで濾過し、ヘプタン（９．８８Ｌ）で洗浄した。ヘキサン（９．８８Ｌ）とＭＴＢＥ（１３．１Ｌ）を加え、得られた混合物を０〜１０℃まで冷却した。撹拌下に温度を１０℃未満に維持しながらＨＣｌ水溶液（１０．７Ｌ，２Ｍ）を加え、混合物を撹拌下に１７℃まで昇温した。収量は２０５２．６ｇ（９４％）であった。

溶媒を蒸発させ、得られた固形分を減圧乾燥した。乾燥した固形分をＭｅＯＨ（５．３１Ｌ）に溶かした。バッチ温度を２３℃未満に維持しながらＨ_２Ｏ（２．９２Ｌ）をゆっくりと加えた。カルボン酸（４０ｇ）のＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（１００ｍＬ／５５ｍＬ）スラリーを種結晶として加えた。得られた混合物を２３℃で１０分間撹拌した。バッチ温度を２４℃未満に維持しながらＨ_２Ｏ（１５．５Ｌ）を８０分間加え、スラリーを２２〜２４℃で２時間撹拌した。固形分を濾取し、Ｈ_２Ｏ（１０．７Ｌ）で洗浄し、窒素流下に乾燥し、カルボン酸を淡黄色固体（２０１９ｇアッセイ重量）として得た。

１．２．３．エステル化

撹拌機と温度プローブを取付けた２２Ｌ容丸底フラスコで４℃のアリールボロン酸１３（２．１９ｋｇ）のエタノール（９．０Ｌ）溶液に撹拌下に塩化チオニル（０．６４Ｌ）を滴下漏斗で１時間加えた。添加の完了後、溶液を１時間１１℃で撹拌した後、４０〜４５℃で２時間撹拌した。溶液を２０℃まで冷却し、トルエン（９．０Ｌ）を加えた。撹拌機と温度プローブを取付けた１００Ｌ容ジャケット付きシリンダーに水（１２Ｌ）と炭酸ナトリウム一水和物（１．９２ｋｇ）を仕込んだ。炭酸ナトリウム溶液を１０℃まで冷却し、２０分間１５〜２０℃で撹拌下に真空ラインを通して反応バッチを１００Ｌ容シリンダーに移した。２相を分離し、水相をトルエン（５．０Ｌ）で逆抽出した。有機相を合わせて濃縮した。得られた溶液を次段階反応で直接使用した処、アッセイ収率は９５％であった。

３．３．アミドボロン酸の製造
３．３．１．ボロン酸ピナコールエステルの製造

５０Ｌ容フラスコで周囲温度のボロン酸５（３．０１ｋｇ）のトルエン（３０．０Ｌ）懸濁液に撹拌下にピナコール（０．８３ｋｇ）を粉末用漏斗で加えた。漏斗に残分が残っている場合にはトルエン（０．５Ｌ）を使用してリンスした。混合物を還流温度に３時間加熱すると、この間に水は共沸蒸留により除去された（ディーン・スタークトラップで集めた）。

初期還流温度は８３．５℃であり、３時間で１０６℃まで上昇した。得られた溶液を一晩放冷すると、この間に生成物は結晶化した。

酸２２は０．２ＬＣＡＰ未満である。スペクトルにおけるＢ−ＯＨの^１ＨＮＭＲ消滅。

反応混合物を〜１２Ｌまで減圧濃縮し、ヘキサン（２４Ｌ）を加えた。懸濁液を周囲温度で２時間撹拌した。生成物を濾過により単離し、フィルターケーキをヘキサン（２×４Ｌ）で洗浄した。生成物をフィルター上で一晩乾燥し、トレーに載せた真空オーブンに移し、窒素流下に３５℃で乾燥し、９５．２％収率で生成物（２．５５ｋｇ，９８．０重量％）を得た。濾液中の生成物損失率は３．２％であった。

１．３．２．アミド化

撹拌機と温度プローブを取付けた２２Ｌ容丸底フラスコでピナコールエステル１５（２．９０ｋｇ）のＤＭＡｃ（１０Ｌ）懸濁液に撹拌下にＭｇＣｌ_２（０．５７ｋｇ）を一度に加えた。バッチの温度は２４℃から３８℃まで上昇した。懸濁液を脱気（３×窒素／真空パージ）し、シクロプロピルアミン（２．４Ｌ）を５分間加えた。バッチの温度は４４．５℃まで上昇し、溶液が得られた。溶液を４０〜４５℃で３時間撹拌した。

撹拌機と温度プローブを取付けた１００Ｌ容ジャケット付きシリンダーに２．５ＮＨＣｌ（５５Ｌ）を仕込んだ。バッチを減圧下に１５〜１８℃で１時間かけて１００Ｌ容シリンダーに移した。トランスファーラインをＤＭＡｃ（０．８Ｌ）でリンスし、水（４Ｌ）を加えた。懸濁液を１５℃で２時間撹拌した。生成物を濾過により単離し、減圧乾燥した。

濾過は非常に時間がかかったので、バッチを２個のフィルターポットに分けた。バッチを水洗した。

乾燥工程は非常に時間がかかったが、生成物は水を含有しているので鈴木カップリングで使用することができる。この段階の単離収率は〜９３％であった。

３．４．鈴木カップリング

機械的撹拌機、Ｎ_２導入管付き冷却器、熱電対及びストッパーを取付けた１００Ｌ容四つ口フラスコをＮ_２パージし、ＤＭＦ（８Ｌ）とｎＰｒＯＨ（８Ｌ）を仕込んだ後、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（１４．９ｇ）とＰＰｈ_３（５２．２ｇ）を仕込んだ。固形分をＤＭＦ（４Ｌ）とｎＰｒＯＨ（４Ｌ）で洗浄した。

Ｐｄ（ＯＡｃ）_２が壁に付着すると反応中に黒変するので、固形分はフラスコから入念に洗浄する。

混合物を１５分間１８〜２３℃で撹拌した。フラスコにボロン酸（１．６８ｋｇ）と臭化アリール（１．４０ｋｇ）を加えた後、ＤＭＦ（２．７Ｌ）、ｎＰｒＯＨ（２．７Ｌ）、及びＮａ_２ＣＯ_３・Ｈ_２Ｏ（１．４４ｋｇ）の２ＭＨ_２Ｏ（溶液５．７９Ｌとするために十分な量）溶液を加えた。蒸気釜を使用して反応混合物を７０℃まで加熱した。

４時間後に、ＨＰＬＣは０．３Ａ％臭化アリールを示した。加熱を停止し、混合物を静かに撹拌しながら２２℃まで２時間かけてゆっくりと冷却した。水（１４．７Ｌ）を３０分間加え、混合物を０〜５℃まで（１時間）冷却した。スラリーを濾過し、ケーキを冷１：１：２ＤＭＦ／ｎＰｒＯＨ／Ｈ_２Ｏ（１０Ｌ）とＨ_２Ｏ（３０Ｌ）で順次洗浄した。ケーキを減圧下にＮ_２スイープで乾燥し、淡黄色固体１．６１ｋｇを得た。

生成物は９３．０重量％、９６．２Ａ％（８９．７％収率）であった。パラジウム濃度は９８０ｐｐｍであった。濾液と１回目の洗浄液のＨＰＬＣは２８ｇ，１．７％を示した。

１．５．加水分解とＰｄ除去

機械的撹拌機、熱電対、窒素導入管及び還流冷却器を取付けた７２Ｌ容丸底フラスコに鈴木生成物（２．６３ｋｇアッセイ，Ｐｄ＝２９９ｐｐｍ）、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_５（９７．７ｇ）及びＭｅＯＨ（２６．２Ｌ）を仕込んだ。ＮａＯＨ水溶液（１５．４Ｌ）を加え、混合物を２時間加熱還流した。

鈴木生成物が完全に消費された後に、反応混合物を２０℃まで冷却し、この温度で３〜１２時間エージングさせた。得られた曇った溶液をセライトパッド（２．０ｋｇ）で濾過し、残留パラジウム及び不純物を除去した。セライトケーキをＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（２／１，１４．０Ｌ）でリンスした。

濾過により、相当量の二量体副生物（２４）とパラジウムが除去される。上清中の二量体生成物の量が満足なレベルに低下するまで２０℃でエージングを続ける必要がある。反応混合物の小部分をシリンジフィルターで濾過し、濃度をアッセイした。

濾過は非常に時間がかかった。加水分解中又は室温エージング中に炭素又は他の樹脂を添加すると、Ｐｄの濾過及び除去を助長できると思われ、今後、更に検討したい。

式（２１）の化合物のナトリウム塩は結晶性化合物であり、濾過中に沈殿すると思われる。従って、生成物を濾液から完全に溶出させるようにセライトケーキをＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏで十分にリンスする必要がある。

濾液と洗浄液を合わせた。

この時点のアッセイは２．４３ｋｇ遊離酸（９８％収率）を示した。

溶液を合わせ、温度を２０〜２５℃に維持しながらＴＨＦ（２０．６Ｌ）と１ＭＨＣｌ水溶液（１６．９Ｌ）の混合物に２時間かけてゆっくりと加えた。得られたスラリーを２２〜２４℃で１時間エージングさせた。固形分を濾取し、Ｈ_２Ｏ（１２．０Ｌ）で洗浄し、部分乾燥し、湿潤ケーキ（４．６ｋｇ）を得た。

Ｎ_２／真空下のフィルターポットの乾燥は非常に時間がかかった。将来的には高温オーブン乾燥を検討すべきである。

湿潤ケーキは５１．４重量％であった。アッセイ重量：２．３６ｋｇ（９５．２％総収率）。

Ｐｄ濃度は５６ｐｐｍ（乾燥重量に基づく）であった。工程を繰返すと、濃度は１９ｐｐｍまで低下した。工程を３回繰返す場合には、メタノール中でＮａＯＨの存在下に加熱中に５重量％活性炭を加えた。生成物のＰｄ濃度は６ｐｐｍであった。安定したＰｄ除去工程を得るためには更に検討が必要である。

１．５．ナトリウム塩の形成

機械的撹拌機、熱電対及び窒素導入管を取付けた１００Ｌ容丸底フラスコに酸（２．６３ｋｇ，８２．６重量％）、ＭｅＯＨ（４．８８Ｌ）及びＨ_２Ｏ（４．２４Ｌ）を仕込んだ。ＮａＯＨ水溶液（４７１ｍＬ，１０．０Ｎ）を加え、固形分がほぼ溶けるまで混合物を４０℃まで加熱した。２−ＰｒＯＨ（５２．１Ｌ）を加え、混合物を２６℃まで放冷し、２２〜２６℃でエージングさせた。

ナトリウム塩が油状物として生成しないように、２−ＰｒＯＨはゆっくりと加えることが好ましい。分取実験室製造中に、少量の生成物が油状物となった。従って、混合物を〜７０℃に〜２時間加熱し、油状物を結晶固体に変換した後に２２℃まで冷却した。２２℃でエージング後の上清中の生成物濃度は一般に〜２ｍｇ／ｍＬであった。結晶化は時間がかかり、一般に完了するまでに３時間を要した。

固形分を濾取し、１：１０Ｈ_２Ｏ／ＩＰＡ（５．５Ｌ）、１：１５Ｈ_２Ｏ／ＩＰＡ（５．０Ｌ）及びＩＰＡ（５．０Ｌ×２）で洗浄し、窒素流下に乾燥し、オフホワイト固体２．０２ｋｇを得た。

生成物は４ｐｐｍＰｄであった。濾液及び洗浄液中の生成物損失量は夫々１２７ｇ及び２９ｇであった。

塩の特性決定実験
粉末Ｘ線回折
Ｘ線回折パターンは発生器出力４０ｋＶ及び５０ｍＡ、２θ＝２〜４０°でＰａｎａｌｙｔｉｃａｌＸ’ＰｅｒｔＰｒｏとＣｕＬＦＦ源（ＣｕＫ−α−波長＝１．５４１８７）を併用して測定した。

１３ＣＳＳＮＭＲ
固体炭素１３ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ４ｍｍＨ／Ｘ／ＹＣＰＭＡＳプローブを使用してＢｒｕｋｅｒＤＳＸ５００ＷＢＮＭＲシステムで取得した。炭素１３ＮＭＲスペクトルはプロトン／炭素１３交差分極マジック角回転を可変振幅交差分極、全側波帯抑圧及び１００ｋＨｚのＳＰＩＮＡＬデカップリングと併用した。サンプルを１０．０ｋＨｚで回転させ、パルス繰返し時間５秒で１０２４回積算を行った。ＦＴを実施する前にスペクトルに１０Ｈｚの線幅拡大を適用した。グリシンのカルボニル炭素（１７６．０３ｐｐｍ）を二次基準として使用してＴＭＳスケールで化学シフトを報告する。

１９ＦＳＳＮＭＲ
固体フッ素１９ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ４ｍｍＨ／Ｆ／ＸＣＰＭＡＳプローブを使用してＢｒｕｋｅｒＤＳＸ５００ＷＢＮＭＲシステムで取得した。フッ素１９ＮＭＲスペクトルはプロトン／フッ素１９交差分極マジック角回転を可変振幅交差分極及び６２．５ｋＨｚのＴＰＰＭデカップリングと併用した。サンプルを１５．０ｋＨｚで回転させ、パルス繰返し時間５秒で２５６回積算を行った。ＦＴを実施する前にスペクトルに１０Ｈｚの線幅拡大を適用した。化学シフト−１２２ｐｐｍを割り当てた外部二次基準としてポリ（テトラフルオロエチレン）（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標））を使用して化学シフトを報告する。

ラマン分光分析
データはＢｒｕｋｅｒＲＦＳ１００／Ｓラマン分光計を使用して取得した。２５０ｍＷレーザー強度でサンプルを解析し、分解能４ｃｍ^−１で６４回積算した。サンプルは直径２ｍｍの金属サンプルホルダーで最低４回測定し、平均した。硫黄（ＡｎａｃｈｅｍｉａＡＣ−８７３４）を使用してピーク位置を確認した。スペクトルは比較のために該当領域内で正規化した。

考察
概要
式（２２）のＰＤＥ４阻害剤とその製造方法を開示する。反応段階の１つは２を立体選択的にシクロプロパン化し、３を得る段階である。所望立体異性体に優れたジアステレオ選択性（９３：７）とエナンチオ選択性（＞９８％ｅｅ）が得られた。スチレン誘導体（２）の製造方法として非低温反応が発見された。４からボロン酸部分（５）を合成するための改良方法を開示する。ボロン酸５を対応するアミド６に変換した後、シクロプロピル化合物３とカップリングした。加水分解後、カップリング生成物を式（２１）の化合物（遊離酸）に変換した。式（２１）の化合物の優れた塩（ナトリウム塩）が同定された。結晶性ナトリウム塩をＸＲＰＤ、ＤＳＣ及びＴＧＡにより特性決定した。

所見
２．１．化合物３のシクロプロパン化と精製
銅（Ｉ）トリフラートとキラル配位子１０から製造したＣｕ触媒を使用するこの合成には改良型エバンスシクロプロパン化プロトコールを使用した。他の配位子とＲｈ触媒も試したが、いずれもジアステレオ選択性が低かった。反応からの主要な副生物はシス異性体、ジアゾ酢酸エチルの二量化からの１１及び１２であった。溶媒はエナンチオ選択性、ジアステレオ選択性及び二量体不純物の形成に重大な役割を果たす。表１に示すように、ＴＨＦ（４５％）を除き、配位性溶媒と非配位性溶媒を含む各種溶媒で良〜優の変換率（７４〜９８％）が得られた。ジアステレオ選択性は８０：２０（ｔｒａｎｓ：ｃｉｓ，１，２−ジクロロエタン）〜９３：７（ｔｒａｎｓ：ｃｉｓ，ＭＴＢＥ）であり、ｅｅは８５％（１，２−ジクロロエタン）〜９９％（ＭＴＢＥを含む多くの溶媒）であった。ＭＴＢＥで最良の結果が得られたので、最初のＧＭＰ試験に溶媒として使用した。ＭＴＢＥ中で触媒を製造した場合には、相当量の沈殿が形成された。初期試験では、シクロプロパン化前にこの沈殿を濾去した。しかし、変換率とジアゾ酢酸エチル蓄積度はバッチ毎に異なっていた。濾過せずに触媒をｉｎｓｉｔｕ生成することにより状況は著しく改善された。固体触媒はスチレン添加後に完全に溶解し、ジアゾ酢酸エチル添加前に透明な溶液が得られた。同様のジアステレオ選択性とエナンチオ選択性が得られた。分取実験室ではシクロプロパン化反応を２個のバッチで実施した。第１のバッチは固体触媒を除去する方法を使用し、２．４ｋｇ（アッセイ重量，ＮａＢＨ_４処理後収率８５％，下記参照）の３が得られ、トランス／シス比９２：８、トランスのｅｅ９８．８％であった。ジアゾ酢酸エチル２．０当量を使用した場合に反応の変換率は９５％に止まった。第２のバッチは固体を除去せずに触媒をｉｎｓｉｔｕ生成する方法を使用した。ジアゾ酢酸エチル１．５当量を使用した場合に完全な変換が認められた。この場合も、２．４ｋｇ（アッセイ重量，ＮａＢＨ_４処理後収率８５％）の３が得られ、トランス／シス比８８：１２、トランスのｅｅ９８．９％であった。

２．２．アミド化
ナフチリドンボロン酸５は高濃度（１０〜２０重量％）の残留水を含有していた。４０〜５０℃のＤＭＦ又はＤＭＡｃ中で５をシクロプロピルアミンにより直接シクロプロピルアミド化するのは問題があることが分かり、多量の酸２２（スキーム３）が形成された。ボロン酸を直接乾燥すると、ボロン酸無水物形成の問題が生じた。更に、ボロン酸５及び１６の相対不溶性により、アッセイ目的用の純粋なサンプルを得ることは難しくなった。ディーン・スタークトラップを使用して水を除去しながらトルエン還流下に５からピナコールエステル１５を形成した後に貧溶媒としてヘキサンを加えると、９５％を上回る単離収率で１５が得られた。４０〜５０℃のＤＭＦ又はＤＭＡｃ中でＭｇＣｌ_２の存在下に１５をシクロプロピルアミンで処理すると、希ＨＣｌでクエンチ後に９０〜９５％単離収率で１６が得られた。酸不純物２２は一般に＜２％に抑えられた。フェノール２１の形成を０．５Ａ％未満まで下げるためには、シクロプロピルアミンの添加前に１５とＭｇＣｌ_２のスラリーを脱気することが必要であった。

式１６の化合物は約９４％収率で得られた。

他の変形又は変更も当業者に自明であり、本発明の範囲と教示に含まれる。本発明は特許請求の範囲の記載以外に限定されない。

構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩の特徴的Ｘ線回折パターンを示す。構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩の炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩のフッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。構造式（２２）の結晶性ナトリウム塩の典型的ラマンスペクトルを示す。構造式（２１）の結晶性遊離酸の特徴的Ｘ線回折パターンを示す。構造式（２１）の結晶性遊離酸の炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。構造式（２１）の結晶性遊離酸のフッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを示す。構造式（２１）の結晶性遊離酸の典型的示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線を示す。

Claims

式（２２）：

の化合物。
請求項１に記載の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、ロイコトリエン生合成阻害剤、Ｍ２／Ｍ３アンタゴニスト、コルチコステロイド、Ｈ１受容体アンタゴニスト又はβ２アドレナリン受容体アゴニストを更に含有する請求項２に記載の医薬組成物。
ＣＯＸ−２選択的阻害剤、スタチン又はＮＳＡＩＤを更に含有する請求項２に記載の医薬組成物。
治療有効量又は予防有効量の請求項１に記載の化合物を投与する段階を含む、喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肉芽腫、乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋及び脳の再潅流傷害、炎症性関節炎、骨粗鬆症、慢性糸球体腎炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、動物の慢性閉塞性肺疾患、尿崩症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、神経性炎症、疼痛、咳、関節リウマチ、強直性脊椎炎、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、胃酸分泌過多、細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性、変形性関節症、癌、悪液質、筋肉疲労、鬱病、記憶障害、単極性鬱病、炎症性要素を伴う急性及び慢性神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、脊髄損傷、頭部外傷、多発性硬化症、腫瘍増殖並びに正常組織の癌浸潤の治療又は予防方法。
安全な認知力増進量の請求項１に記載の化合物を投与する段階を含む対象における認知力の増進方法。
請求項１に記載の結晶性化合物。
構造式（２１）：

の化合物の結晶形態。
請求項７又は請求項８に記載の構造式（２１）又は（２２）の結晶性化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、ロイコトリエン生合成阻害剤、Ｍ２／Ｍ３アンタゴニスト、コルチコステロイド、Ｈ１受容体アンタゴニスト又はβ２アドレナリン受容体アゴニストを更に含有する請求項９に記載の医薬組成物。
ＣＯＸ−２選択的阻害剤、スタチン又はＮＳＡＩＤを更に含有する請求項９に記載の医薬組成物。
治療有効量又は予防有効量の請求項７又は請求項８に記載の構造式（２１）又は（２２）の結晶性化合物を投与する段階を含む、喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肉芽腫、乾癬及び他の良性又は悪性増殖性皮膚疾患、内毒素性ショック（及びウマの蹄葉炎や疝痛等の関連症状）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋及び脳の再潅流傷害、炎症性関節炎、骨粗鬆症、慢性糸球体腎炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、成人呼吸窮迫症候群、小児呼吸窮迫症候群、動物の慢性閉塞性肺疾患、尿崩症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、神経性炎症、疼痛、咳、関節リウマチ、強直性脊椎炎、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、胃酸分泌過多、細菌性、真菌性又はウイルス性敗血症又は敗血症性ショック、炎症及びサイトカインによる慢性組織変性、変形性関節症、癌、悪液質、筋肉疲労、鬱病、記憶障害、単極性鬱病、炎症性要素を伴う急性及び慢性神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、脊髄損傷、頭部外傷、多発性硬化症、腫瘍増殖並びに正常組織の癌浸潤の治療又は予防方法。
安全な認知力増進量の請求項７又は請求項８に記載の構造式（２１）又は（２２）の結晶性化合物を投与する段階を含む対象における認知力の増進方法。
１０．０５、５．１６、８．７６オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
３．８３、４．１１、５．９５オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
１７．６７、５．５７、４．９０オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
１０．０５オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
図１の粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
１６９．１、１２０．８及び４６．５ｐｐｍにシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
１５９．０、１５０．９及び４０．７ｐｐｍにシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
図２の固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
−１２６．８ｐｐｍにシグナルを示す固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
図３の固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
波数１６２５、１６０９、１６００（ｃｍ^−１）でラマンスペクトルから得られる吸収バンドを更に特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
波数７２３（ｃｍ^−１）でラマンスペクトルから得られる吸収バンドを更に特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
波数１２９４、１２８１、１０００（ｃｍ^−１）でラマンスペクトルから得られる吸収バンドを更に特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
図４に示すラマンスペクトルを更に特徴とする請求項１に記載の構造式（２２）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
１６．３７、５．７９、４．８５オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
１３．８１、８．５１、１４．４９オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
１２．６３、１０．７８、９．２１オングストロームの格子面間隔ｄに対応する粉末Ｘ線回折パターンから得られる回折ピークを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
図５の粉末Ｘ線回折パターンを更に特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
２３．２、１２８．３及び１４８．６ｐｐｍにシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
７．４、１８１．６及び１２０．９ｐｐｍにシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
１７９．２、１６３．７及び１１０．４ｐｐｍにシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
図６の固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
−１１９．４及び−１０８．９ｐｐｍにシグナルを示す固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
図７の固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルを特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
２５８℃での溶融開始を特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。
図８のＤＳＣ曲線を特徴とする請求項８に記載の構造式（２１）の化合物の結晶性遊離酸。