JP2009155336A - Treating agent - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a treating agent comprising as an effective ingredient HMB (3-hydroxy-3-methylbutyric acid), which is a known compound exhibiting, for example, a blood cholesterol level-decreasing action, a nitrogen retention-improving action in human, and the like, for other diseases than the above. <P>SOLUTION: An anti-osteoporosis agent, anti-depression agent, anti-stress agent, antihypertensive agent, antidiabetic agent, antiallergic agent, anti-fatigue agent, skin care preparation for external use, hair-growing agent and hair-restoring agent, each comprising as an effective ingredient HMB (3-hydroxy-3-methylbutyric acid) or a salt thereof, are provided. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。   The present invention relates to a therapeutic agent useful for various diseases comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient.

ＨＭＢは、例えば、血中コレステロールを低下させる作用（特許文献１）、ヒトにおける窒素保持を改善する作用（特許文献２）等が知られている。
しかしながら、ＨＭＢまたはその塩が、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。 For example, HMB is known to have an effect of lowering blood cholesterol (Patent Document 1), an effect of improving nitrogen retention in humans (Patent Document 2), and the like.
However, there is no viewpoint that HMB or a salt thereof is effective with remarkable effects on various diseases applied in the present invention described below.

国際公開ＷＯ９４／０６４１７号パンフレットInternational Publication WO94 / 06417 Pamphlet 国際公開ＷＯ９４／１４４２９号パンフレットInternational publication WO94 / 14429 pamphlet

本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。   An object of the present invention is to provide various therapeutic agents that are effective with a particularly remarkable effect on various diseases applied in the present invention described below.

請求項１に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項２に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項３に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする血圧降下剤である。
請求項４に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗糖尿病剤である。
請求項５に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗アレルギー剤である。
請求項６に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を含有する抗疲労剤である。
請求項７に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を含有する皮膚外用剤である。
請求項８に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を含有する養毛・育毛剤である。 The invention according to claim 1 is an anti-osteoporosis agent containing HMB or a salt thereof as an active ingredient.
The invention according to claim 2 is an antidepressant / antistress agent comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient.
The invention according to claim 3 is an antihypertensive agent comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient.
The invention according to claim 4 is an antidiabetic agent comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient.
The invention according to claim 5 is an antiallergic agent containing HMB or a salt thereof as an active ingredient.
The invention according to claim 6 is an anti-fatigue agent containing HMB or a salt thereof.
The invention according to claim 7 is an external preparation for skin containing HMB or a salt thereof.
The invention according to claim 8 is a hair nourishing and hair restorer containing HMB or a salt thereof.

本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。   According to the present invention, there are provided various therapeutic agents that are particularly effective for various diseases applied in the present invention described below with remarkable effects.

以下、本発明をさらに詳しく説明する。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

ＨＭＢ（３−ヒドロキシ−３−メチル酪酸；ビス（３−ヒドロキシ−３−メチルブチレート）モノハイドレート）は、上記の特許文献１，２に記載されているように、広く知られている化合物である。
ＨＭＢの塩としては、特に制限されないが、薬学的に許容可能な塩が挙げられ、例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩等が挙げられる。
ＨＭＢまたはその塩は、公知の化学合成法により製造可能であり、また市販されているものを利用することもできる。 HMB (3-hydroxy-3-methylbutyric acid; bis (3-hydroxy-3-methylbutyrate) monohydrate) is a widely known compound as described in Patent Documents 1 and 2 above. It is.
Although it does not restrict | limit especially as a salt of HMB, A pharmaceutically acceptable salt is mentioned, For example, a sodium salt, a calcium salt, potassium salt etc. are mentioned.
HMB or a salt thereof can be produced by a known chemical synthesis method, or a commercially available product can be used.

ＨＭＢまたはその塩の投与量は、患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、成人１日１〜数回、１日あたり０．００１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜５００ｍｇ程度投与するのがよい。   The dose of HMB or a salt thereof varies depending on the age, weight, indication symptoms, etc. of the patient, but for example, adults 1 to several times a day, 0.001 mg to 1 g per day, preferably about 0.1 mg to 500 mg It is better to administer.

本発明の治療剤は、錠剤、ピル、カプセル、顆粒、粉末、散剤、液剤等の固形または溶液の形態（以下、製剤ともいう）に公知の方法により適宜調製することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。   The therapeutic agent of the present invention can be appropriately prepared by a known method in the form of a solid or solution (hereinafter, also referred to as a preparation) such as a tablet, pill, capsule, granule, powder, powder, or liquid. That is, the solid preparation or liquid preparation useful in the present invention is produced by using a well-known preparation method that has been well established. Examples of additives include excipients, pH adjusting agents, cooling agents, suspending agents, diluents, antifoaming agents, thickeners, solubilizers, disintegrating agents, binders, lubricants, antioxidants. Agents, coating agents, coloring agents, flavoring agents, surfactants, plasticizers or fragrances.

また本発明の治療剤は、各種健康食品および機能性食品として摂取可能である。これらの例としては、各種のものをあげることができるが、健康食品および機能性食品の製造に関しては、通常用いられる、食品素材、食品添加物に加え、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、分散剤、保存剤、湿潤化剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化材、カプセル基剤等の補助剤を用いた飲食品製剤形態で利用することができる。該補助剤の具体的な例示をすれば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはその塩、アラビアガム、ポリエチレングルコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム、プルラン、カラギーナン、デキストリン、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、ステビア、合成甘味料、クエン酸、アスコルビン酸、酸味料、重曹、ショ糖エステル、植物硬化油脂、塩化カリウム、サフラワー油、ミツロウ、大豆レシチン、香料等が配合できる。このような健康食品、機能性食品の製造に関しては、医薬品製剤の参考書、例えば「日本薬局方解説書（製剤総則）」（廣川書店）等を参考にすることができる。   The therapeutic agent of the present invention can be taken as various health foods and functional foods. Examples of these include various products, but for the production of health foods and functional foods, in addition to commonly used food materials and food additives, excipients, extenders, binders, It can be used in the form of food and drink preparations using adjuvants such as disintegrants, lubricants, dispersants, preservatives, wetting agents, solubilizers, preservatives, stabilizers, capsule bases and the like. Specific examples of the adjuvant include lactose, fructose, glucose, starch, gelatin, magnesium carbonate, synthetic magnesium silicate, talc, magnesium stearate, calcium carbonate, methylcellulose, carboxymethylcellulose, or a salt thereof, gum arabic , Polyethylene glycol, syrup, petrolatum, glycerin, ethanol, propylene glycol, citric acid, sodium chloride, sodium sulfite, sodium phosphate, pullulan, carrageenan, dextrin, reduced palatinose, sorbitol, xylitol, stevia, synthetic sweetener, citric acid Ascorbic acid, acidulant, baking soda, sucrose ester, hardened vegetable oil, potassium chloride, safflower oil, beeswax, soybean lecithin, flavor, and the like can be blended. Regarding the production of such health foods and functional foods, reference books for pharmaceutical preparations such as “Japanese Pharmacopoeia Manual (General Rules for Preparations)” (Yodogawa Shoten) can be referred to.

上記以外にも本発明の治療剤は飲食品として摂取することができる。具体的には、納豆、厚揚げ、豆腐、こんにゃく、団子、漬物、佃煮、コロッケ、サンドイッチ、ピザ、ハンバーガー、餃子、シューマイ、サラダ等の各種総菜や、各種粉末（ビーフ、ポーク、チキン等畜産物、海老、帆立、蜆、昆布等水産物、野菜・果実類、植物、酵母、藻類等）や、プリン、クッキー、クラッカー、パン、ケーキ、チョコレート、ポテトチップス、ビスケット、ドーナツ、ゼリーなどの洋菓子、煎餅、羊羹、大福、おはぎ、その他の饅頭、カステラなどの和菓子、冷菓（飴等）、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば、きしめん等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、ハム、ソーセージ、ハンバーグ、コーンビーフ等の畜肉製品や、塩、胡椒、みそ、しょう油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、甘味料、辛味料等の調味類や、明石焼き、たこ焼き、もんじゃ焼き、お好み焼き、焼きそば、焼きうどん等の鉄板焼き食品や、チーズ、ハードタイプのヨーグルト等の乳製品や、油脂類・香料類（バニラ、柑橘類、かつお等）を粉末固形化したものや、粉末飲食品（インスタントコーヒー、インスタント紅茶、インスタントミルク、インスタントスープ、味噌汁等）等の各種食品が挙げることができるが、これらに特に制限されない。   In addition to the above, the therapeutic agent of the present invention can be taken as a food or drink. Specifically, natto, thick fried, tofu, konjac, dumplings, pickles, boiled, croquettes, sandwiches, pizzas, hamburgers, dumplings, shumai, salads, etc., various powders (beef, pork, chicken and other livestock products) Marine products such as shrimp, scallops, sea bream, kelp, vegetables / fruits, plants, yeast, algae, etc.), pudding, cookies, crackers, bread, cakes, chocolate, potato chips, biscuits, donuts, jellies and other confectionery, Japanese rice crackers such as rice crackers, sheep crab, daifuku, ohagi, other buns, Japanese confectionery such as castella, frozen confectionery (rice cake etc.), bread and confectionery such as chewing gum, noodles such as udon, buckwheat and kishimen, kamaboko, ham, fish sausage, etc. Fish paste products, meat products such as ham, sausage, hamburger, corn beef, salt, pepper, miso, soy sauce, sauce, dressy Seasonings such as gyu, mayonnaise, ketchup, sweeteners, spices, teppanyaki foods such as Akashi-yaki, takoyaki, monja-yaki, okonomiyaki, yakisoba, fried udon, dairy products such as cheese, hard-type yogurt, and fats and oils Various foods such as powdered solids of flavors and fragrances (vanilla, citrus fruits, bonito etc.) and powdered foods and drinks (instant coffee, instant tea, instant milk, instant soup, miso soup, etc.) These are not particularly limited.

さらに本発明においては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、レシチン、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ギムネマ酸、大豆サポニン、人参サポニン等）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、などを併用することもできる。   Furthermore, in the present invention, for example, royal jelly, propolis, vitamins (A, C, D, E, K, folic acid, pantothenic acid, biotin, derivatives thereof, etc.), minerals (iron, magnesium, calcium, zinc, etc.), Selenium, lecithin, carotenoids (lycopene, astaxanthin, zeaxanthin, lutein, etc.), saponins (gymnemic acid, soybean saponin, ginseng saponins, etc.), fatty acids, proteins (collagen, elastin, etc.), oligosaccharides (isomalto-oligosaccharides, cyclic oligosaccharides, etc.) ), Phospholipids and derivatives thereof (phosphatidylcholine, sphingomyelin, ceramide, etc.), sulfur-containing compounds (eg, alliin, sepaene, taurine, glutathione, methylsulfonylmethane), sugar alcohols, lignans (sesamin, etc.), Contains animal and plant extracts Root vegetables (turmeric, ginger, etc.), may be used in combination and the like.

また、ＨＭＢまたはその塩を皮膚外用剤として用いる場合は、皮膚外用剤として通常使用される公知の材料、例えば色素、香料、防腐剤、界面活性剤、顔料、抗酸化剤、保湿剤、紫外線吸収剤などを適宜配合することができる。
本発明の皮膚外用剤は、クリーム、乳液、化粧水、パック等、公知の形態で使用され得る。ＨＭＢまたはその塩の配合割合はとくに制限されないが、皮膚外用剤中、例えば０．０００１質量％〜５質量％、好ましくは０．００１質量％〜１質量％である。 In addition, when HMB or a salt thereof is used as an external preparation for skin, known materials that are usually used as external preparations for skin, such as pigments, fragrances, preservatives, surfactants, pigments, antioxidants, moisturizers, UV absorbing agents An agent or the like can be appropriately blended.
The external preparation for skin of the present invention can be used in a known form such as cream, milky lotion, lotion, pack and the like. The mixing ratio of HMB or a salt thereof is not particularly limited, but is, for example, 0.0001% by mass to 5% by mass, and preferably 0.001% by mass to 1% by mass in the external preparation for skin.

以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明の治療剤は、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、血圧降下剤、抗糖尿病剤、抗アレルギー剤、抗疲労剤、皮膚外用剤、養毛・育毛剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further, this invention is not limited to these. The therapeutic agent of the present invention is extremely useful as an anti-osteoporosis agent, an antidepressant / anti-stress agent, an antihypertensive agent, an anti-diabetic agent, an anti-allergic agent, an anti-fatigue agent, an external preparation for skin, and a hair restorer / hair restorer. Hereinafter, the various medicinal effects will be described with examples.

実施例１（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、ＨＭＢが３０ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ³ ）を測定した。なお対照実験として、ＨＭＢを含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も行なった。その結果、比較例の骨密度が１．０１０ｍｇ／ｍｍ^３であったのに対し、実施例１の骨密度は１．０９５ｍｇ／ｍｍ^３であった。 Example 1 (Anti-osteoporosis effect)
Osteoporosis Improvement Effect Test SD rat (22 weeks old) Female ovaries were surgically removed to create osteoporosis model rats. Ovariectomized rats were divided into 6 groups of 7 animals, and a liquid in which physiological saline was dissolved was orally administered every other day (total 17 times) during the 35-day test period so that the HMB was 30 mg / kg. The feed was the solid feed CRF-1 for mice, rats and hamsters from Oriental Yeast Co., Ltd. There was no difference in food intake between groups during the study period. On the 35th day after the start of the test, the weight of the rat was measured, and then the femur was removed. The femur was used for analysis with the adhesive tissue and muscle removed. After measuring the volume of the femur, it was washed three times with ethanol, then washed three times with acetone, dried overnight, and then weighed to determine the dry weight of the femur. From the volume and dry weight, the bone density (dry weight g / volume mm ³ ) was measured. In addition, as a control experiment, an example (comparative example) in which the above experiment was repeated was performed except that physiological saline containing no HMB was administered to the rat. As a result, the bone density of the comparative example was 1.010 mg / mm ³ , whereas the bone density of Example 1 was 1.095 mg / mm ³ .

実施例２（抗鬱・抗ストレス効果）
ＨＭＢの治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。 Example 2 (Antidepressant / Anti-stress effect)
The therapeutic effect of HMB was examined.
Evaluation of tranquilizing effect by forced mouse swimming test The therapeutic agent of the present invention was evaluated by the forced mouse swimming test developed by Porsolt in 1977. This is one of the most frequently used animal model experiments for depression. In this test, the mouse is forced to swim in a limited space to cause “immobility”. This immobility state is thought to reflect a kind of “despair state” in which stressed animals abandon their escape from water, and is associated with depression and stress in humans. In fact, antidepressants have been found to specifically reduce the duration of immobility in this situation, and this shortening has been found to have a significant correlation with clinical titer.

本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。 The test method is as follows.
Mice are forced to swim in a plastic cylinder containing 25 ° C. water to a depth of 15 cm. After forced swimming for 5 minutes, dry in a dryer at 30 ° C. for 15 minutes and return to the home cage. On the next day, the test sample is intraperitoneally administered to the mouse, one hour later, forced swimming for 5 minutes is imposed again, and the duration of the immobility that appears is measured using a stopwatch. A state in which the mouse floats on the water and is stationary is determined as an immobile state. For the duration of stationary state, a significant difference test is performed, and a statistically significant difference is tested. For the experiment, male ddY mice are used, and there are 6 mice per group. All tests are conducted between 1pm and 6pm. A test using imipramine, an antidepressant, as a positive control will also be conducted.

その結果、ＨＭＢのＣａ塩を３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７８．８±２．８秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２０９．０±３．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１８１．２±４．６秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。   As a result, the duration of immobility in mice administered with 30 mg / kg of HMB Ca salt was 178.8 ± 2.8 seconds. The control (saline only) was 209.0 ± 3.2 seconds. The duration of immobility in the positive control (30 mg / kg dose) mice was 181.2 ± 4.6 seconds. The duration of immobility in this example and the positive control is significantly different at a risk rate of 1%.

実施例３（血圧降下効果）
ＨＭＢカルシウム塩を一般市販飼料（船橋農場製、船橋SP）に添加し、脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット（SHR−SP）を用いて最高血圧値、体重の変化を比較した。対照区は、ＨＭＢカルシウム塩を添加しない一般試料を用いた。Ａ区を対照区、Ｂ区を本発明区とし、それぞれの飼料で５週齢の雄性SHR−SPを各区６匹ずつ７週間飼育し、12週齢に達した時の血圧値と体重の変化について調べた。表１に示すように血圧の変化においては、本発明区に有意な血圧上昇の抑制が認められた。なお、本発明区においては、ＨＭＢカルシウム塩の１日あたりの摂取量が、５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように飼料中のＨＭＢカルシウム塩の濃度を調整した。 Example 3 (blood pressure lowering effect)
HMB calcium salt was added to a general commercial feed (Funabashi Farm, Funabashi SP), and the changes in systolic blood pressure and body weight were compared using stroke-prone spontaneously hypertensive rats (SHR-SP). As a control group, a general sample to which no HMB calcium salt was added was used. The A group is the control group and the B group is the present invention group, and each group of 6-week-old male SHR-SPs is bred for 7 weeks, and changes in blood pressure and body weight when they reach 12 weeks of age. Investigated about. As shown in Table 1, in the change of blood pressure, significant suppression of blood pressure increase was observed in the present invention group. In the present invention, the concentration of HMB calcium salt in the feed was adjusted so that the daily intake of HMB calcium salt was 50 mg / kg body weight.

実施例４（抗糖尿病効果）
６週齢の雄性ＳＤ系ラット（１群６匹）の尾静脈にストレプトゾトシンを１回投与することにより糖尿病を惹起した。
ＨＭＢの投与量を３０ｍｇ／ｋｇとし、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与の１時間前に経口投与し、その翌日より１日１回１３日間連続経口投与した。最終投与の翌日に５０％グルコース水溶液（１０ｍｌ／ｋｇ）を経口投与し、経時的に血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を測定（ｏ−トルイジン・ホウ酸）した。 Example 4 (anti-diabetic effect)
Diabetes was induced by administering streptozotocin once to the tail vein of 6-week-old male SD rats (6 rats per group).
The dose of HMB was 30 mg / kg, and it was orally administered 1 hour before the administration of streptozotocin (STZ), and was orally administered once a day for 13 days from the next day. The day after the final administration, 50% glucose aqueous solution (10 ml / kg) was orally administered, and blood glucose level (mg / dl) was measured over time (o-toluidine / boric acid).

なお、正常対照群としてＳＴＺを投与せずに滅菌水のみを投与した群、病態対照群としてＳＴＺを投与して滅菌水を投与した群、および陽性対照群としてＳＴＺを投与してニコチン酸アミド（５０ｍｇ／ｋｇ）を投与した群を設けた。ニコチン酸アミドはＳＴＺ糖尿病モデルに対して有効であることが報告されている（新薬開発のための動物利用集成，４１９−４２２頁，Ｒ＆Ｄプランニング，１９８５年）。   In addition, as a normal control group, a group in which only sterile water was administered without administering STZ, a group in which STZ was administered and sterilized water was administered as a disease state control group, and STZ was administered as a positive control group and nicotinamide ( 50 mg / kg) was provided. Nicotinamide has been reported to be effective against STZ diabetes models (Animal utilization for new drug development, 419-422, R & D planning, 1985).

糖尿病は糖代謝能力が低下し高血糖を呈する疾患である。本実施例においてはグルコース投与１時間後に血糖値のピークを認めるが、病態対照群では最高血糖値が３３８ｍｇ／ｄｌであり、正常対照群では最高血糖値は１６５ｍｇ／ｄｌであった。病態対照群の最高血糖値は正常対照群のそれと比較して約２倍を示し、病態対照群では糖代謝能力の低下が認められた。   Diabetes is a disease in which the ability to metabolize glucose is reduced and hyperglycemia occurs. In this example, a peak of blood glucose level was observed 1 hour after glucose administration, but the maximum blood glucose level was 338 mg / dl in the pathological control group, and the maximum blood glucose level was 165 mg / dl in the normal control group. The maximum blood glucose level of the pathological condition control group was about twice that of the normal control group, and a decrease in glucose metabolism ability was observed in the pathological condition control group.

ＨＭＢの活性は、式１により病態対照群の血糖値に対する抑制率（％）を算出した。   For the activity of HMB, the inhibition rate (%) with respect to the blood glucose level of the pathological condition control group was calculated by Formula 1.

（式１）
抑制率（％）＝〔１−（ＨＭＢ投与群または陽性対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）／（病態対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）〕×１００ (Formula 1)
Inhibition rate (%) = [1- (high blood sugar level of HMB administration group or positive control group−high blood sugar level of normal control group) / (high blood sugar level of disease state control group−high blood sugar level of normal control group)] × 100

その結果、ＨＭＢ投与群の抑制率は５８．２％であった。陽性対照群の抑制率は４３．０％であった。したがって、ＨＭＢ投与群は、病態対照群に比較して、優れた血糖値の低下が認められ、糖代謝能力が改善されていた。   As a result, the suppression rate of the HMB administration group was 58.2%. The suppression rate of the positive control group was 43.0%. Therefore, in the HMB administration group, an excellent decrease in blood glucose level was observed and the glucose metabolism ability was improved as compared with the pathological condition control group.

実施例５（抗アレルギー効果）
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共にＨＭＢカルシウム塩を５００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。 Example 5 (anti-allergic effect)
20 patients (10 males and 10 females 20 to 22 years old) with food allergen positive chronic urticaria by the RAST method were administered with 500 mg of HMB calcium salt for one month with one meal. The results are shown in Table 2 below.

実施例６
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共にＨＭＢを５００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表３に示す。 Example 6
20 patients with atopic dermatitis by RAST method (10 males and 10 females aged 20-22 years) were administered 500 mg of HMB with one meal for 1 month. The results are shown in Table 3 below.

実施例７（抗疲労効果）
ＳＴＤ ＤＤＹ 雄性マウス（５週齢：各群ｎ＝３〜４）に対し、ＨＭＢを経口摂取させた。摂取量は、３０ｍｇ／ｋｇ体重である。摂取は、純水にＨＭＢを溶解させた溶液を用いて行なった。なお、コントロール群のマウスには、純水のみを摂取させて試験を行った。 Example 7 (Anti-fatigue effect)
STD DDY male mice (5 weeks old: each group n = 3 to 4) were orally ingested with HMB. The intake is 30 mg / kg body weight. Ingestion was performed using a solution in which HMB was dissolved in pure water. In addition, the test group mice were fed with pure water only.

摂取から３０分後に、マウスを深さ８０センチの水槽に入れて、無動に至るまでの時間を計測した。各試験群のマウス（各群ｎ＝３〜４）の無動に至るまでの時間の平均値として、コントロール群は約１１２秒であったのに対し、ＨＭＢ投与群は、約２５６秒であった。
以上から、ＨＭＢに高い抗疲労効果が確認された。 Thirty minutes after the ingestion, the mouse was placed in an 80 cm deep water tank, and the time until immobility was measured. The average value of the time required until the mice of each test group (n = 3 to 4) reached immobility was about 112 seconds for the control group, and about 256 seconds for the HMB administration group. It was.
From the above, a high anti-fatigue effect was confirmed for HMB.

実施例８（メラニン抑制効果）
メラニンを生成する細胞として、マウス由来の培養B16メラノーマ細胞を用いてウシ胎児血清を終濃度10%になるように添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を3×10³cell/mlの濃度で6ウェルプレートの各ウェルに6ml播種し、5日間ＣＯ_２インキュベーター内で培養後、ＨＭＢのＣａ塩を添加した培地に交換し、さらに3日間同条件で培養する。細胞を洗浄後、細胞をスクレーパー処理により剥がし、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）により可溶化して475nm、260nmの吸光度を測定し、S₄₇₅、S₂₆₀とする。メラニン抑制率は被検試料を添加しない培地で培養した細胞の475nm、260nmにおける吸光度をC₄₇₅、C₂₆₀として式１により計算した。ポジティブコントロールとしてコウジ酸（Kojic acid）を用いた。 Example 8 (melanin inhibitory effect)
As a melanin-producing cell, a mouse-derived cultured B16 melanoma cell is used and cultured in an Eagle's MEM medium supplemented with fetal bovine serum to a final concentration of 10%, and the cell is cultured at a concentration of 3 × 10 ³ cells / ml. Inoculate 6 ml in each well of a 6-well plate, and after culturing in a CO ₂ incubator for 5 days, replace with a medium supplemented with HMB Ca salt, and further culture under the same conditions for 3 days. After washing the cells, the cells are peeled off by a scraper treatment, solubilized with sodium dodecyl sulfate (SDS), and the absorbance at 475 nm and 260 nm is measured to obtain S ₄₇₅ and S ₂₆₀ . The melanin inhibition rate was calculated by Equation 1 with the absorbance at 475 nm and 260 nm of cells cultured in a medium not added with the test sample as C ₄₇₅ and C ₂₆₀ . As a positive control, kojic acid was used.

その結果、ポジティブコントロール（培地中にコウジ酸３ｍＭ添加）のメラニン抑制率は約５６％であり、ＨＭＢのＣａ塩を添加した被験試料（培地中にＨＭＢのＣａ塩を５００μｇ／ｍｌ添加）のメラニン抑制率は約５８％であった。   As a result, the melanin inhibition rate of the positive control (addition of 3 mM kojic acid in the medium) was about 56%, and the melanin of the test sample (added 500 μg / ml of HMB Ca salt in the medium) added with Ca salt of HMB. The inhibition rate was about 58%.

実施例９（シワ形成抑制効果）
５匹ずつ２群のヘアレスマウスの背部に、ＵＶＢ（長波長紫外線）を１０週間照射してシワ形成モデルを作製した。その後、このシワ形成モデルの１群にはＨＭＢを０．５質量％の割合で１０％エタノール水溶液に溶解した液体を（実施例１）、もう１群には１０％エタノール水溶液のみを（比較例）、シワが形成された背部に１日１回、週に５日の割合で４週間塗布し続けた。４週間の塗布期間終了後、各モデルの背部からレプリカを採取し、得られたレプリカのそれぞれについて、次の基準に従ってシワスコアを付した。
（シワスコア基準）
０：方向性のある構造は認められない。
１：繊維状の細い構造が方向性をもって認められる。
２：方向性をもった繊維状の細い構造とともに太い棒状の構造が認められる。
３：方向性をもった太い棒状の構造が認められる。 Example 9 (wrinkle formation inhibitory effect)
A wrinkle formation model was prepared by irradiating UVB (long wavelength ultraviolet rays) for 10 weeks on the back of two groups of hairless mice, each of 5 mice. After that, one group of this wrinkle formation model contains a liquid obtained by dissolving HMB in a 10% ethanol aqueous solution at a ratio of 0.5% by mass (Example 1), and the other group contains only a 10% ethanol aqueous solution (Comparative Example). ), And continued to be applied once a day on the back where wrinkles were formed at a rate of 5 days per week for 4 weeks. After the application period of 4 weeks, replicas were collected from the back of each model, and wrinkle scores were assigned to each of the obtained replicas according to the following criteria.
(Wrinkle score standard)
0: Directional structure is not recognized.
1: A fibrous thin structure is recognized with directionality.
2: A thick rod-like structure is recognized together with a fibrous thin structure having directionality.
3: A thick rod-like structure with directionality is observed.

上記シワスコアを用いた評価は、レプリカ上の方向性をもった線状の構造をシワとして定義して評価したものである。したがって、上記シワスコア基準に従えば、スコアが高いほどシワ形成が進んだ皮膚状態と評価される。上記で得られたシワスコアについて各群の平均値を算出したところ、実施例９は０、比較例は１．０であった。両群のシワスコアについて、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定により有意差検定を行ったところ、実施例９のシワスコアは、比較例のシワスコアに比べ、危険率０．０５以下で有意に小さかった。   The evaluation using the wrinkle score is an evaluation by defining a linear structure with directionality on a replica as a wrinkle. Therefore, according to the wrinkle score standard, the higher the score, the better the skin state where wrinkle formation has progressed. When the average value of each group was computed about the wrinkle score obtained above, Example 9 was 0 and the comparative example was 1.0. When the wrinkle score of both groups was subjected to a significant difference test by Mann-Whitney test, the wrinkle score of Example 9 was significantly smaller than the wrinkle score of the comparative example at a risk rate of 0.05 or less.

実施例１０
ＨＭＢのＮａ塩を含有する下記組成のクリームを常法により調製した。
ＨＭＢのＮａ塩 １０重量部
グリセロールソルビタン脂肪酸エステル ６０重量部
微結晶性ワックス １０重量部
オリーブオイル ３０重量部
流動パラフィン １８０重量部
ステアリン酸マグネシウム １０重量部
プロピレングリコール ３７重量部
硫酸マグネシウム ７重量部
精製水 ６５５重量部 Example 10
A cream having the following composition containing Na salt of HMB was prepared by a conventional method.
Na salt of HMB 10 parts by weight Glycerol sorbitan fatty acid ester 60 parts by weight Microcrystalline wax 10 parts by weight Olive oil 30 parts by weight Liquid paraffin 180 parts by weight Magnesium stearate 10 parts by weight Propylene glycol 37 parts by weight Magnesium sulfate 7 parts by weight Purified water 655 Parts by weight

実施例１１
上記実施例１０のクリームについて、シワ形成抑制効果をしらべた。即ち、シワに悩むパネラーを用いて、１日朝・晩２回、毎日１カ月間、上記実施例１０のクリームを顔面右側に塗布し、左側に対する右側のシワの改善を、＋＋：非常に改善、＋：明らかに改善、±：僅かに改善、−：改善せずの基準で評価した。その結果、パネラー全員とも、非常に改善、の評価であった。 Example 11
About the cream of the said Example 10, the wrinkle formation inhibitory effect was investigated. That is, using a paneler worried about wrinkles, the cream of Example 10 was applied to the right side of the face twice a day in the morning and evening for 1 month every day, and the improvement of the right side wrinkles with respect to the left side was improved. +: Obviously improved, ±: Slightly improved,-: Evaluation was made based on no improvement. As a result, all the panelists evaluated it as very improved.

実施例１２（養毛・育毛効果）
特許第４０４１４５１号公報に記載の実験手順に従い、ＨＭＢの効果を検証した。
（１）マウスによる試験
Ｃ３Ｈマウス（８週齢、オス、平均体重３５ｇ）の背部皮膚（２ｃｍ×４ｃｍ）を電気バリカン及びシェーバーで刈り、翌日より実施例の各試料を被験部皮膚に朝夕２回、一匹当り０．２ｍＬを二週間連用塗布した。一試料に対して動物一群１０匹使用した。塗布開始２２日目に各試料の被験部皮膚をビデオカメラに撮影し、画像解析装置にて毛刈り部及び発毛部の面積を測定した。養毛効果の判定は、下記に示す発毛率（％）を算出し、実施例の各群の発毛率平均値を求めて比較を行った。
発毛率（％）＝（発毛部の面積）／（毛刈り部の面積）×１００ Example 12 (Hair restoration / hair growth effect)
The effect of HMB was verified according to the experimental procedure described in Japanese Patent No. 4041451.
(1) Tests with mice The back skin (2 cm x 4 cm) of C3H mice (8 weeks old, male, average body weight 35 g) was cut with an electric clipper and shaver, and each sample of the examples was applied to the test subject skin twice a day in the morning and evening. Then, 0.2 mL per animal was applied continuously for 2 weeks. A group of 10 animals was used for one sample. On the 22nd day from the start of application, the skin of the test area of each sample was photographed with a video camera, and the areas of the hair cutting part and the hair growth part were measured with an image analyzer. The determination of the hair nourishing effect was carried out by calculating the hair growth rate (%) shown below, and calculating the average hair growth rate of each group in the examples for comparison.
Hair growth rate (%) = (Area of hair growth part) / (Area of hair cutting part) × 100

（２）ヒトによる試験
男性型脱毛症患者である被験者１０名の耳上５ｃｍの位置にて、頭髪を左右２ヶ所直径５ｍｍの円形状に剃毛し、実施例の各試料を左側の頭髪全体に毎日朝夕２回、約３ｍＬ塗布し、右側は何も塗布せずに、左右の比較を行った。毛成長速度の効果の判定は、試験開始後１ヶ月目に、左右の剃毛した部位の被験部毛髪２０本を抜毛し、下記式で求めた値で毛成長速度を評価した。
毛成長速度＝（左側毛髪２０本の長さの平均）÷（右側毛髪２０本の長さの平均） (2) Human test At 10 cm above the ears of 10 subjects with male pattern baldness, the hair was shaved into a circular shape with a diameter of 5 mm at two locations on the left and right, and each sample of the example was placed on the entire left hair. About 3 mL was applied twice a day in the morning and evening, and the right and left sides were compared without applying anything on the right side. In the determination of the effect of the hair growth rate, the hair growth rate was evaluated with the value obtained by the following formula after removing 20 test part hairs at the left and right shaved sites 1 month after the start of the test.
Hair growth rate = (average length of 20 left hairs) ÷ (average length of 20 right hairs)

また、育毛効果、痒み防止効果、脱毛効果、ふけ防止効果の判定は、試験開始後３ヶ月目に各項に対し、右側の何も塗布していない被試部位と比較して、「産毛が剛毛化した或いは産毛が増加した」、「痒みをそれほど感じない」、「抜け毛が少なくなった」、「ふけが少なくなった」と回答した人数で示した。   In addition, the hair growth effect, the itch prevention effect, the hair loss effect, and the anti-dandruff effect were determined for each item 3 months after the start of the test, compared to the test site where nothing was applied on the right side. It was shown by the number of respondents who responded that they became bristle or increased their vellus hair, “doesn't feel itchy much”, “has lost hair loss”, and “had less dandruff”.

表６に示す処方の養毛・育毛剤を常法に従って作成し、前記の諸試験を実施して評価を行った。なお、ＨＭＢの試料中の濃度は、表６に示されるとおりである。その結果を併せて表６に示す。   A hair nourishing and hair restorer with the formulation shown in Table 6 was prepared according to a conventional method, and the above tests were conducted for evaluation. The concentration of HMB in the sample is as shown in Table 6. The results are also shown in Table 6.

なお本発明品の養毛・育毛剤の長期間の使用中及び使用後においても、皮膚の状態に特に異常は認められなかった。   It should be noted that no abnormalities were observed in the skin condition even during and after the long-term use of the hair nourishing / hair-growing agent of the present invention.

Claims (8)

ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗骨粗鬆症剤   Anti-osteoporosis agent containing HMB or a salt thereof as an active ingredient ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤。   An antidepressant / antistress agent comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient. ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする血圧降下剤。   An antihypertensive agent comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient. ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗糖尿病剤。   An antidiabetic agent comprising HMB or a salt thereof as an active ingredient. ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗アレルギー剤。   An antiallergic agent containing HMB or a salt thereof as an active ingredient. ＨＭＢまたはその塩を含有する抗疲労剤。   An anti-fatigue agent containing HMB or a salt thereof. ＨＭＢまたはその塩を含有する皮膚外用剤。   An external preparation for skin containing HMB or a salt thereof. ＨＭＢまたはその塩を含有する養毛・育毛剤。   A hair nourishing and hair restorer containing HMB or a salt thereof.