JP2009153444A - 発光基質水溶液およびその製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ルシフェラーゼの発光基質を有機溶媒に溶解した発光基質溶液と、有機溶媒を含有する水溶液とを混合する。
【選択図】なし
Description
S.Bhaumikら、Proc.Natl.Acad.Sci.(2002)99、377−382 Venisnik K.M. Mol. Imaging(2007)9、267−277
(1)ルシフェラーゼの発光基質を有機溶媒に溶解した発光基質溶液と、有機溶媒を含有する水溶液とを混合することにより得られる発光基質水溶液。
(2)ルシフェラーゼの発光基質が、セレンテラジン、ホタルルシフェリン、ウミホタルルシフェリン、渦鞭毛ルシフェリン、オキアミルシフェリン、およびそれらの誘導体から選ばれた1種以上である、前記第1項に記載の発光基質水溶液。
(3)有機溶媒が、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メタノール、およびエタノールから選ばれた1種以上である、前記第1項に記載の発光基質水溶液。
(4)水溶液が、生理食塩水または塩化ナトリウムを含有するリン酸緩衝液である、前記第1項に記載の発光基質水溶液。
(5)有機溶媒を含有する水溶液における、有機溶媒の濃度が、有機溶媒含有水溶液に対して3〜15重量%の範囲である、前記第1項に記載の発光基質水溶液。
(6)ルシフェラーゼの発光基質を有機溶媒に溶解した発光基質溶液と、有機溶媒を含有する水溶液とを混合することを特徴とする発光基質水溶液の製造方法。
(7)ルシフェラーゼの発光基質が、セレンテラジン、ホタルルシフェリン、ウミホタルルシフェリン、渦鞭毛ルシフェリン、オキアミルシフェリン、およびそれらの誘導体から選ばれた1種以上である、前記第6項に記載の発光基質水溶液の製造方法。
(8)有機溶媒が、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メタノール、およびエタノールから選ばれた1種以上である、前記第6項に記載の発光基質水溶液の製造方法。
(9)水溶液が、生理食塩水または塩化ナトリウムを含有するリン酸緩衝液である、前記第6項に記載の発光基質水溶液の製造方法。
(10)有機溶媒を含有する水溶液における、有機溶媒の濃度が、有機溶媒含有水溶液に対して3〜15重量%の範囲である、前記第6項に記載の発光基質水溶液の製造方法。
(11)レポーターアッセイ法において、ルシフェラーゼを生産する生物を発光させるにあたり、前記第1項〜第5項の何れか1項に記載の発光基質水溶液を用いることを特徴とする、レポーターアッセイ法。
(12)ルシフェラーゼの発光基質、有機溶媒、および有機溶媒を含有する水溶液から構成される発光基質水溶液キット。
本発明に用いられる発光基質は、ルシフェラーゼの発光基質であれば特に限定されるものではない。具体的には、セレンテラジン、ホタルルシフェリン、ウミホタルルシフェリン、渦鞭毛ルシフェリン、オキアミルシフェリン、およびそれらの誘導体などが挙げられる。本発明においては、それらから選ばれた1種を用いても良く、2種以上を使用しても良い。本発明においては、セレンテラジンが好ましく用いられる。
なお、本発明においては、水溶液が単なる水である場合であっても、本発明の効果が得られる。この単なる水は、Caイオンを含まないか、含んでいたとしてもCaの含有量は本発明の効果を損なわない程度の微量であることが好ましい。
本発明の発光基質水溶液(以下「第3溶液」と言うことがある)の製造方法は、ルシフェラーゼの発光基質を有機溶媒に溶解した発光基質溶液(以下「第1溶液」と言うことがある)と、有機溶媒を含有する水溶液(以下「第2溶液」と言うことがある)とを混合することを特徴とする。
第1溶液における発光基質の濃度は、発光基質の溶解度を満たすものであれば特に限定されない。第1溶液の調製の際、多量の有機溶媒で発光基質を溶解すると、第3溶液に含まれる有機溶媒の最終濃度が高まる。第3溶液が生体試料内に注入されるような場合、有機溶媒濃度が低い方が、生体試料が受ける有機溶媒の影響が少ない傾向にある。このような点を考慮すると、第1溶液における当該発光基質の濃度は、1〜8mg/mlの範囲であることが好ましく、より好ましくは2〜6mg/mlの範囲である。
本発明の発光基質水溶液の用途は特に限定されるものではないが、本発明の発光基質水溶液は、発光基質濃度が高く、ルシフェラーゼの発光に用いた場合には、高い発光強度と長い発光時間を実現させることが可能であることから、レポーターアッセイ法に好適に使用することができる。
20μlのジメチルスルホキシド(DMSO、和光純薬社製)に、100μgのセレンテラジン(チッソ社製)を加えて溶解した。このセレンテラジンのDMSO溶液を、10μlのDMSOを加えた137mM NaCl、2.7mM KCl含有10mMリン酸緩衝液(シグマ社製)280μlに加え、発光基質水溶液を調整した。この発光基質水溶液のセレンテラジンの溶解性等を表1に示した。
20μlのジメチルスルホキシド(DMSO、和光純薬社製)に、100μgのセレンテラジン(チッソ社製)を加えて溶解した。このセレンテラジンのDMSO溶液を、10μlのDMSOを含有する生理食塩水(大塚製薬製)280μlに加え、この発光基質水溶液のセレンテラジンの溶解性等を表1に示した。
70μlのメタノール(和光純薬社製)に、200μgのセレンテラジン(チッソ社製)を加えて溶解した。このセレンテラジンのメタノール溶液を、70μlのメタノールを含有する生理食塩水(大塚製薬製)630μlに加え、発光基質水溶液を調整した。この発光基質水溶液のセレンテラジンの溶解性等を表1に示した。
30μlのジメチルスルホキシド(DMSO、和光純薬社製)に、100μgのセレンテラジン(チッソ社製)を加えて溶解した。このセレンテラジンのDMSO溶液を、137mM NaCl、2.7mM KCl含有10mMリン酸緩衝液(シグマ社製)270μlに加え、発光基質水溶液を調整した。この発光基質水溶液のセレンテラジンの溶解性等を表1に示した。
140μlのメタノール(和光純薬社製)に、200μgのセレンテラジン(チッソ社製)を加えて溶解した。このセレンテラジンのメタノール溶液を、生理食塩水(大塚製薬製)560μlに加え、発光基質水溶液を調整した。この発光基質水溶液のセレンテラジンの溶解性等を表1に示した。
Claims (12)
- ルシフェラーゼの発光基質を有機溶媒に溶解した発光基質溶液と、有機溶媒を含有する水溶液とを混合することにより得られる発光基質水溶液。
- ルシフェラーゼの発光基質が、セレンテラジン、ホタルルシフェリン、ウミホタルルシフェリン、渦鞭毛ルシフェリン、オキアミルシフェリン、およびそれらの誘導体から選ばれた1種以上である、請求項1に記載の発光基質水溶液。
- 有機溶媒が、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メタノール、およびエタノールから選ばれた1種以上である、請求項1に記載の発光基質水溶液。
- 水溶液が、生理食塩水または塩化ナトリウムを含有するリン酸緩衝液である、請求項1に記載の発光基質水溶液。
- 有機溶媒を含有する水溶液における、有機溶媒の濃度が、有機溶媒含有水溶液に対して3〜15重量%の範囲である、請求項1に記載の発光基質水溶液。
- ルシフェラーゼの発光基質を有機溶媒に溶解した発光基質溶液と、有機溶媒を含有する水溶液とを混合することを特徴とする発光基質水溶液の製造方法。
- ルシフェラーゼの発光基質が、セレンテラジン、ホタルルシフェリン、ウミホタルルシフェリン、渦鞭毛ルシフェリン、オキアミルシフェリン、およびそれらの誘導体から選ばれた1種以上である、請求項6に記載の発光基質水溶液の製造方法。
- 有機溶媒が、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メタノール、およびエタノールから選ばれた1種以上である、請求項6に記載の発光基質水溶液の製造方法。
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- 有機溶媒を含有する水溶液における、有機溶媒の濃度が、有機溶媒含有水溶液に対して3〜15重量%の範囲である、請求項6に記載の発光基質水溶液の製造方法。
- レポーターアッセイ法において、ルシフェラーゼを生産する生物を発光させるにあたり、請求項1〜5の何れか1項に記載の発光基質水溶液を用いることを特徴とする、レポーターアッセイ法。
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