JP2008110926A - Water-dispersible nanoparticle - Google Patents

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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide safe nanoparticles comprising a biodegradable polymer, high in storage stability (dispersion stability and the stability of an antioxidant compound included therein) and high in transparency because of being small in particle size. <P>SOLUTION: The water-dispersible nanoparticles are composed of the antioxidant compound and the biodegradable polymer, and preferably also contain a stabilizer for the antioxidant compound. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

本発明は、水分散可能なナノ粒子に関する。より詳細には、本発明は、分散安定性および内包する抗酸化化合物の安定性に優れた水分散可能なナノ粒子に関する。   The present invention relates to water-dispersible nanoparticles. More specifically, the present invention relates to a water-dispersible nanoparticle excellent in dispersion stability and stability of an encapsulated antioxidant compound.

微粒子材料は、バイオテクノロジーにおいて幅広い利用が期待されている。特に近年、ナノテクノロジーの進展によって生み出されたナノ微粒子材料を食品、化粧品、医薬品等に応用することが活発に検討され、研究成果も数多く報告されるようになってきている。   Fine particle materials are expected to be widely used in biotechnology. In particular, in recent years, the application of nanoparticulate materials produced by the advancement of nanotechnology to foods, cosmetics, pharmaceuticals, etc. has been actively studied, and many research results have been reported.

例えば、化粧品においては、近年、より明確な肌効果が求められるようになってきており、ナノテクノロジーをはじめ様々な新しい技術を取り入れることにより、機能性・使用性の向上、他社品との差別化が計られている。肌は一般的に、角質層がバリアーとして存在するために薬物の皮膚への浸透性が低い。肌効果を十分に発揮させるためには、有効成分の皮膚透過性の改善が不可欠である。また、皮膚に対して高い有効性を持っていても、保存安定性が悪かったり、皮膚に刺激を起こしやすかったりするために製剤化が困難な成分も多い。これらを解決すべく、経皮吸収性の改善および保存安定性の向上、皮膚刺激性の低減など目的とした、様々な微粒子材料の開発が進められている。現在、超微細乳化やリポソームなど各種微粒子材料が研究されている（たとえば、非特許文献１）。   For example, in cosmetics, a clearer skin effect has been demanded in recent years. By incorporating various new technologies such as nanotechnology, functionality and usability can be improved and differentiated from other products. Is measured. Skin generally has low drug penetration into the skin due to the presence of the stratum corneum as a barrier. In order to fully exert the skin effect, it is essential to improve the skin permeability of the active ingredient. Moreover, even if it has high effectiveness with respect to the skin, there are many components that are difficult to formulate because of poor storage stability or easy irritation to the skin. In order to solve these problems, various fine particle materials have been developed for the purpose of improving transdermal absorbability, improving storage stability, and reducing skin irritation. Currently, various fine particle materials such as ultra-fine emulsification and liposome have been studied (for example, Non-Patent Document 1).

従来から、水性化粧品に油性成分を添加することは行われてきたが、油性成分は水に対して不溶性または難溶性のため、何らかの乳化手段を用いることで、油性成分をいわゆる乳化物として水性媒体中に混合することが一般的であった。乳化物は、その粒子径に依存して光を散乱するため、乳化物およびそれを添加した食品や化粧品に濁りを生じ、外観上好ましくない場合が有り、光散乱が非常に小さくなるまで乳化物の粒径を微細化する事が望まれていた。また、乳化物は一般に準安定状態であり、保存中に粒子径が大きくなり、長期保存をすると分離する事も大きな問題であった。飲料における油滴凝集物の器壁付着やネックリングは、こうした乳化物中の油滴分離現象の一つである。   Conventionally, an oily component has been added to an aqueous cosmetic, but since the oily component is insoluble or hardly soluble in water, the oily component can be converted into a so-called emulsion by using any emulsifying means. It was common to mix in. Since the emulsion scatters light depending on the particle size, the emulsion and foods and cosmetics to which the emulsion is added may become turbid and may be unfavorable in appearance. The emulsion until the light scattering becomes very small. It has been desired to reduce the particle size of the particles. In addition, the emulsion is generally in a metastable state, the particle size becomes large during storage, and it is a big problem to separate after long-term storage. Adhesion of the oil droplet aggregates in the beverage and neck ring are one of the oil droplet separation phenomena in such an emulsion.

ところで、カロテノイド（カロチノイドとも言う）類は油溶性天然色素で、緑黄色野菜や果物に含まれる色素成分の総称で、一般に抗酸化作用あり、代表的なものにベータカロチン、ルテイン、リコピン、アスタキサンチンなどがある。例えば、アスタキサンチン類（アスタキサンチンおよびそのエステル等も含む）は、自然界では動植物界に広く分布しており、主として養殖魚や養鶏の色揚げ剤として使用されている。アスタキチンサンは抗酸化作用の他にも、抗炎症作用（特許文献１）、皮膚老化防止作用（特許文献２）、美白作用（非特許文献２）を有することが知られている。このため、従来から、食品や化粧品の原材料及びそれらの加工品等への添加が検討・実施されているが、油溶性であるため添加使用するには、分散性の高い乳化組成物として添加が必要である。しかし、天然物由来のカロテノイドは、不安定な構造であり、また、乳化粒子の粒子径が満足できる範囲内で、分散性を比較的長期に高い状態で安定させることは困難であった。   By the way, carotenoids (also called carotenoids) are oil-soluble natural pigments, and are a general term for pigment components contained in green-yellow vegetables and fruits, and generally have an anti-oxidant effect. Typical examples include beta-carotene, lutein, lycopene, and astaxanthin. is there. For example, astaxanthins (including astaxanthin and esters thereof) are widely distributed in the animal and plant kingdoms in nature, and are mainly used as a color frying agent for farmed fish and chickens. Astaxanthin is known to have an anti-inflammatory action (Patent Document 1), an anti-skin aging action (Patent Document 2), and a whitening action (Non-Patent Document 2) in addition to the antioxidant action. For this reason, the addition to raw materials for foods and cosmetics and processed products thereof has been studied and implemented. However, since it is oil-soluble, it can be added as an emulsified composition with high dispersibility. is necessary. However, carotenoids derived from natural products have an unstable structure, and it has been difficult to stabilize the dispersibility in a high state for a relatively long period of time within a range in which the particle diameter of the emulsified particles can be satisfied.

カロテノイドに限らず、従来から、食品、化粧品、医薬品等の原材料及びそれらの加工品等における化合物の安定性は産業上重要な問題である。これらの化合物は、一般に紫外線、酸素、酵素、熱、水分、光等の原因により分解される。特に、抗酸化化合物は、原材料及びそれらの加工品等で使用する前に酸化分解されてしまうことが問題になっている。抗酸化化合物の安定化方法として、様々な手段が現在までに試みられている。特許文献３及び４には、カロテノイド系色素の分散安定性を検討した技術が記載されている。   Conventionally, not only carotenoids but also the stability of compounds in raw materials such as foods, cosmetics and pharmaceuticals and processed products thereof has been an important industrial issue. These compounds are generally decomposed by causes such as ultraviolet rays, oxygen, enzymes, heat, moisture and light. In particular, there is a problem that antioxidant compounds are oxidatively decomposed before being used in raw materials and processed products thereof. Various means have been attempted to date as a method for stabilizing antioxidant compounds. Patent Documents 3 and 4 describe techniques for examining the dispersion stability of carotenoid pigments.

前述のように、食品や化粧品などに用いられる微粒子材料は乳化物に関するものが多い。これに対し、近年、医薬品では高分子ミセルへの注目が高まっている。高分子ミセルの特徴として、大きな薬物容量、高い水溶性、高い構造安定性、非蓄積性、機能分離性などが挙げられる。両親媒性高分子を用いてそのミセル構造に薬物を封入して血液中に投与する研究が行われており、臨床試験も行われている（例えば、非特許文献３）。   As described above, the fine particle materials used in foods and cosmetics are often related to emulsions. In contrast, in recent years, attention has been focused on polymer micelles in pharmaceuticals. Features of polymer micelles include large drug capacity, high water solubility, high structural stability, non-accumulation, and functional separation. Studies have been conducted in which drugs are encapsulated in micelle structures using amphiphilic polymers and administered into blood, and clinical trials have also been conducted (for example, Non-Patent Document 3).

乳化物は界面活性剤による静電相互作用を利用しているため、油滴分離現象のような安定性の問題がつきまとうのに対し、高分子ミセルは共有結合で構造形成していて安定性の点で有利である。また、通常用いられる合成界面活性剤に比べ、生分解性高分子、中でもタンパク質などの天然高分子を用いれば安全性が高い。さらに、高分子ミセルを微細化（ナノ粒子化）できれば、水分散時の充分な透明性が得られる。   Since emulsions use electrostatic interactions with surfactants, stability problems such as oil droplet separation are a problem, whereas polymer micelles are structured by covalent bonds and are stable. This is advantageous. Moreover, compared with the synthetic surfactant normally used, if biodegradable polymer, especially natural polymers, such as protein, are used, safety | security is high. Furthermore, if the polymer micelle can be made fine (nanoparticulate), sufficient transparency at the time of water dispersion can be obtained.

西田 光広、フレグランスジャーナル、11月、17（2005）Mitsuhiro Nishida, Fragrance Journal, November, 17 (2005) 日本香粧品科学会第１９回学術大会講演要旨集 Ｐ.６６,１９９４年Proceedings of the 19th Academic Conference of the Japan Cosmetic Science Society P.66, 1994 Y.Mizumura et al., Jap.J.Cancer Res., 93, 1237(2002)Y. Mizumura et al., Jap. J. Cancer Res., 93, 1237 (2002) 特開２００２−３０８７２８公報JP 2002-308728 A 特開２００４−２４４４２０公報JP 2004-244420 A 特開平９−３２８４１９号公報Japanese Patent Laid-Open No. 9-328419 特表２００５−５０６８４１号公報JP 2005-506841 gazette

本発明は、上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明は、保存安定性（分散安定性および内包する抗酸化化合物の安定性）に優れ、安全、且つ、粒子径が小さいことにより透明性が高い生分解性高分子からなるナノ粒子を提供することを提供することを解決すべき課題とした。   An object of the present invention is to solve the above-described problems of the prior art. That is, the present invention provides nanoparticles comprising a biodegradable polymer that is excellent in storage stability (dispersion stability and stability of the encapsulated antioxidant compound), is safe, and has high transparency due to its small particle size. Providing to provide was a problem to be solved.

本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、抗酸化化合物と生分解性高分子とを混合することによって、保存安定性（分散安定性および内包する抗酸化化合物の安定性）に優れた水分散可能なナノ粒子を調製できることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。   As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors have found that storage stability (dispersion stability and stability of the encapsulated antioxidant compound is improved by mixing the antioxidant compound and the biodegradable polymer. It has been found that water-dispersible nanoparticles with excellent properties can be prepared. The present invention has been completed based on these findings.

即ち、本発明によれば、抗酸化化合物、及び生分解性高分子から構成される水分散可能なナノ粒子が提供される。   That is, according to the present invention, there are provided water-dispersible nanoparticles composed of an antioxidant compound and a biodegradable polymer.

好ましくは、本発明のナノ粒子は、抗酸化化合物の安定化剤をさらに含む。
好ましくは、本発明のナノ粒子は、生分解性高分子の重量に対して、０.１〜１００重量％の抗酸化化合物を含有する。
好ましくは、平均粒子サイズは１０〜１０００ｎｍである。 Preferably, the nanoparticles of the present invention further comprise an antioxidant compound stabilizer.
Preferably, the nanoparticle of the present invention contains 0.1 to 100% by weight of an antioxidant compound based on the weight of the biodegradable polymer.
Preferably, the average particle size is 10 to 1000 nm.

好ましくは、生分解性高分子はタンパク質である。
好ましくは、タンパク質はコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である。 Preferably, the biodegradable polymer is a protein.
Preferably, the protein is at least one selected from the group consisting of collagen, gelatin, acid-treated gelatin, albumin, ovalbumin, ovalbumin, casein, transferrin, globulin, fibroin, fibrin, laminin, fibronectin, or vitronectin.

好ましくは、ナノ粒子の形成中および／又は形成後にタンパク質が架橋処理されている。
好ましくは、トランスグルタミナーゼを用いて架橋処理を行う。 Preferably, the protein is cross-linked during and / or after nanoparticle formation.
Preferably, a crosslinking treatment is performed using transglutaminase.

好ましくは、抗酸化化合物は油溶性成分である。
好ましくは、油溶性成分は、水に不溶又は水に難溶性の化粧品用成分、機能性食品用成分、又は医薬品成分である。
好ましくは、油溶性成分は一種以上のカロテノイド類を含む。
好ましくは、カロテノイド類はアスタキサンチンである。 Preferably, the antioxidant compound is an oil soluble component.
Preferably, the oil-soluble component is a cosmetic component, functional food component, or pharmaceutical component that is insoluble or sparingly soluble in water.
Preferably, the oil-soluble component includes one or more carotenoids.
Preferably, the carotenoid is astaxanthin.

本発明の別の側面によれば、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子が提供される。
（ａ）カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の抗酸化化合物を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を pH3.5〜7.5の酸性水性媒体に注入する工程： According to another aspect of the present invention, casein nanoparticles produced by the following steps (a) to (c) are provided.
(A) dissolving casein in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher;
(B) a step of adding at least one antioxidant compound to the solution obtained in step (a); and (c) a step of injecting the solution obtained in step (b) into an acidic aqueous medium having a pH of 3.5 to 7.5. :

本発明のさらに別の側面によれば、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子が提供される。
（ａ）カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の抗酸化化合物を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液のpH をpH3.5〜7.5まで下降させる工程： According to still another aspect of the present invention, casein nanoparticles produced by the following steps (a) to (c) are provided.
(A) dissolving casein in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher;
(B) adding at least one antioxidant compound to the solution obtained in step (a); and (c) lowering the pH of the solution obtained in step (b) to pH 3.5-7.5:

本発明のさらに別の側面によれば、上記した本発明のナノ粒子を含む薬物送達剤が提供される。
好ましくは、本発明の薬物送達剤は、経皮吸収剤、局所治療剤、経口治療剤、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、化粧品、機能性食品、又はサプリメントとして使用される。 According to still another aspect of the present invention, a drug delivery agent comprising the above-described nanoparticles of the present invention is provided.
Preferably, the drug delivery agent of the present invention is used as a transdermally absorbable agent, a topical therapeutic agent, an oral therapeutic agent, an intradermal injection, a subcutaneous injection, an intramuscular injection, an intravenous injection, a cosmetic, a functional food, or a supplement. The

本発明の水分散可能なナノ粒子は、タンパク質などの生分解性高分子から構成されるナノ粒子であり、乳化物よりも構造安定性が高い。また、本発明の水分散可能なナノ粒子は、化学架橋剤や合成界面活性剤を用いることなく製造できるため、安全性が高い。さらに、本発明の水分散可能なナノ粒子は、抗酸化化合物を安定に包含することができる。   The water-dispersible nanoparticle of the present invention is a nanoparticle composed of a biodegradable polymer such as protein, and has higher structural stability than an emulsion. Moreover, since the water-dispersible nanoparticle of this invention can be manufactured without using a chemical crosslinking agent or a synthetic surfactant, its safety is high. Furthermore, the water-dispersible nanoparticles of the present invention can stably contain an antioxidant compound.

以下、本発明の実施の形態についてさらに具体的に説明する。
本発明の水分散可能なナノ粒子は、抗酸化化合物、及び生分解性高分子から構成されることを特徴とする。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described more specifically.
The water-dispersible nanoparticles of the present invention are characterized by comprising an antioxidant compound and a biodegradable polymer.

本発明で用いる抗酸化化合物は、油溶性成分であることが好ましい。本発明で用いることができる抗酸化化合物の具体例としては、ビタミンA、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチニルアセテート、レチニルパルミテート、レチノイン酸トコフェリル、ビタミンＣおよびその誘導体、カイネチン、β−カロテン、アスタキサンチン、ルテイン、リコピン、トレチノイン、ビタミンＥ、α−リポ酸、コエンザイムＱ１０、ポリフェノール、ＳＯＤ、フィチン酸などが挙げられる。本発明のナノ粒子には、生分解性高分子の重量に対して、０.１〜１００重量％の抗酸化化合物が含有されることが好ましい。本発明においては、上記した抗酸化化合物として、水に不溶又は水に難溶性の化粧品用成分、機能性食品用成分、又は医薬品成分から選択することができる。本発明に用いられる抗酸化化合物は、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。   The antioxidant compound used in the present invention is preferably an oil-soluble component. Specific examples of antioxidant compounds that can be used in the present invention include vitamin A, retinoic acid, retinol, acetic acid retinol, retinol palmitate, retinyl acetate, retinyl palmitate, tocopheryl retinoic acid, vitamin C and its derivatives, Examples include kinetin, β-carotene, astaxanthin, lutein, lycopene, tretinoin, vitamin E, α-lipoic acid, coenzyme Q10, polyphenol, SOD, and phytic acid. The nanoparticles of the present invention preferably contain 0.1 to 100% by weight of an antioxidant compound based on the weight of the biodegradable polymer. In the present invention, the antioxidant compound can be selected from cosmetic ingredients, functional food ingredients, or pharmaceutical ingredients that are insoluble or sparingly soluble in water. The antioxidant compound used in the present invention may be used alone or in combination of two or more.

本発明において、抗酸化化合物は、生分解性高分子のナノ粒子の形成時に添加してもよいし、ナノ粒子の作成後に添加してもよい。   In the present invention, the antioxidant compound may be added when the biodegradable polymer nanoparticles are formed, or may be added after the nanoparticles are formed.

本発明のナノ粒子は、さらに抗酸化化合物の安定化剤を含んでいてもよい。抗酸化化合物の安定化剤の具体例としては、トコフェロール、アスコルビン酸、カイネチン、α−リポ酸、コエンザイムＱ１０、ポリフェノール、ＳＯＤ、フィチン酸、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）、２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール（ＢＨＴ）、ｔ−ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）などの酸化防止剤を挙げることができる。抗酸化化合物の安定化剤は、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。   The nanoparticles of the present invention may further contain an antioxidant compound stabilizer. Specific examples of stabilizers for antioxidant compounds include tocopherol, ascorbic acid, kinetin, α-lipoic acid, coenzyme Q10, polyphenol, SOD, phytic acid, nordihydroguaiaretic acid (NDGA), 2,6-di An antioxidant such as -t-butyl-4-methylphenol (BHT) and t-butylhydroxyanisole (BHA) can be mentioned. Antioxidant compound stabilizers may be used alone or in combination of two or more.

本発明のナノ粒子の平均粒子サイズは、通常は１〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０〜１０００ｎｍであり、より好ましくは３０〜５００ｎｍであり、特に好ましくは５０〜４００ｎｍである。   The average particle size of the nanoparticles of the present invention is usually 1 to 1000 nm, preferably 10 to 1000 nm, more preferably 30 to 500 nm, and particularly preferably 50 to 400 nm.

本発明で用いる生分解性高分子は、タンパク質でもよいし、又は生分解性の合成高分子でもよい。   The biodegradable polymer used in the present invention may be a protein or a biodegradable synthetic polymer.

本発明で用いるタンパク質の種類は特に限定されないが、リジン残基およびグルタミン残基を有するタンパクが好ましく、分子量１万から１００万程度のタンパク質を用いることが好ましい。タンパク質の由来は特に限定されないが、ヒト由来のタンパク質を用いることが好ましい。タンパク質として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。コラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種を使用することができる。また、タンパク質の由来は特に限定するものではなく、牛、豚、魚、および遺伝子組み換え体のいずれも用いることができる。遺伝子組み換えゼラチンとしては、例えばＥＵ1014176Ａ２号、米国特許6,992,172号に記載のものを用いることができるがこれらに限定されるものではない。その中で好ましいものは、カゼイン、酸処理ゼラチン、コラーゲン、又はアルブミンであり、最も好ましいものはカゼイン、又は酸処理ゼラチンである。本発明でカゼインを用いる場合、カゼインの由来は特に限定されず、乳由来であっても、豆由来であってもよく、α−カゼイン、β−カゼイン、γ−カゼイン、κ−カゼインおよびそれらの混合物を使用することができる。カゼインは、単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。   The type of protein used in the present invention is not particularly limited, but a protein having a lysine residue and a glutamine residue is preferable, and a protein having a molecular weight of about 10,000 to 1,000,000 is preferably used. The origin of the protein is not particularly limited, but it is preferable to use a human-derived protein. Specific examples are listed as proteins, but the present invention is not limited to these compounds. At least one selected from the group consisting of collagen, gelatin, acid-treated gelatin, albumin, ovalbumin, casein, transferrin, globulin, fibroin, fibrin, laminin, fibronectin, or vitronectin can be used. In addition, the origin of the protein is not particularly limited, and any of cows, pigs, fish, and gene recombinants can be used. As the genetically modified gelatin, for example, those described in EU1014176A2 and US Pat. No. 6,992,172 can be used, but are not limited thereto. Among them, casein, acid-treated gelatin, collagen, or albumin is preferable, and casein or acid-treated gelatin is most preferable. When casein is used in the present invention, the origin of casein is not particularly limited, and may be derived from milk or bean, α-casein, β-casein, γ-casein, κ-casein and theirs. Mixtures can be used. Casein can be used alone or in combination of two or more.

本発明に用いられるタンパク質は、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。また、生分解性の合成高分子としては、ポリ乳酸、乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）などを挙げることができる。   The proteins used in the present invention may be used alone or in combination of two or more. Examples of the biodegradable synthetic polymer include polylactic acid and lactic acid / glycolic acid copolymer (PLGA).

本発明では、ナノ粒子の形成中および／又は形成後にタンパク質を架橋処理することができる。上記した架橋処理は、酵素を用いて行うことができる。架橋処理のため用いられる酵素は、タンパクの架橋作用が知られているものであれば特に制限されず、その中で好ましいものはトランスグルタミナーゼである。   In the present invention, the protein can be crosslinked during and / or after the formation of the nanoparticles. The above crosslinking treatment can be performed using an enzyme. The enzyme used for the cross-linking treatment is not particularly limited as long as the cross-linking action of protein is known, and transglutaminase is preferable among them.

トランスグルタミナーゼは、哺乳類由来のものであっても、微生物由来のものであってもよく、遺伝子組み換え体を用いることができる。具体的には、味の素（株）製アクティバシリーズ、試薬として発売されている哺乳類由来のトランスグルタミナーゼ、例えば、オリエンタル酵母工業（株）製、Upstate USA Inc.製、Biodesign International製などのモルモット肝臓由来トランスグルタミナーゼ、ヤギ由来トランスグルタミナーゼ、ウサギ由来トランスグルタミナーゼ、ヒト由来リコンビナントトランスグルタミナーゼなどが挙げられる。   Transglutaminase may be derived from a mammal or a microorganism, and a genetic recombinant can be used. Specifically, Activa series manufactured by Ajinomoto Co., Inc., mammal-derived transglutaminase released as a reagent, for example, guinea pig liver-derived trans from Oriental Yeast Co., Ltd., Upstate USA Inc., Biodesign International, etc. Examples include glutaminase, goat-derived transglutaminase, rabbit-derived transglutaminase, and human-derived recombinant transglutaminase.

本発明において架橋処理のために用いられる酵素の量は、タンパク質の種類に応じて適宜設定することが出来るが、標準的には、タンパク質の重量に対して、０.１〜１００重量％程度を添加することができ、好ましくは、１〜５０重量％程度を添加することができる。   The amount of the enzyme used for the crosslinking treatment in the present invention can be appropriately set according to the type of protein, but is typically about 0.1 to 100% by weight based on the weight of the protein. It can be added, and preferably about 1 to 50% by weight can be added.

酵素による架橋反応の時間は、タンパク質の種類、ナノ粒子サイズに応じて適宜設定することができるが、標準的には、１時間から７２時間反応することができ、好ましくは、２時間から２４時間反応することができる。   The time for the cross-linking reaction by the enzyme can be appropriately set according to the kind of protein and the size of the nanoparticle, but it can be reacted normally for 1 hour to 72 hours, preferably 2 hours to 24 hours. Can react.

酵素による架橋反応の温度は、タンパク質の種類、ナノ粒子サイズに応じて適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃で反応することができ、好ましくは、２５℃から６０℃で反応することができる。   The temperature of the cross-linking reaction by the enzyme can be appropriately set according to the type of protein and the size of the nanoparticle, but it can be reacted normally at 0 to 80 ° C., preferably 25 to 60 ° C. Can react at ℃.

本発明に用いられる酵素を単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。   The enzyme used for this invention can be used individually or in combination of 2 or more types.

本発明のナノ粒子は、特許文献特開平６−７９１６８号公報、又はC.Coester著、ジャーナル・ミクロカプスレーション、２０００年、１７巻、p.１８７−１９３に記載の方法に準じて作製することができるが、架橋方法としてグルタルアルデヒドの代わりに酵素を用いることが好ましい。   The nanoparticles of the present invention should be prepared according to the method described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 6-79168 or by C. Coester, Journal Microcapsulation, 2000, Vol. 17, p. 187-193. However, it is preferable to use an enzyme instead of glutaraldehyde as a crosslinking method.

また、本発明においては、酵素架橋処理を有機溶媒中で行うことが好ましい。ここで用いる有機溶媒としては、エタノール、イソプロパノール、アセトン、THFなどの水溶性有機溶媒が好ましい。   Moreover, in this invention, it is preferable to perform an enzyme crosslinking process in an organic solvent. The organic solvent used here is preferably a water-soluble organic solvent such as ethanol, isopropanol, acetone, or THF.

本発明の水分散可能なナノ粒子には、リン脂質、アニオン性多糖、カチオン性多糖、アニオン性タンパク質、又はカチオンタンパク質から選択される１種以上の成分を添加することもできる。   One or more components selected from phospholipids, anionic polysaccharides, cationic polysaccharides, anionic proteins, or cationic proteins can be added to the water-dispersible nanoparticles of the present invention.

本発明に用いることができるリン脂質として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。   Specific examples are listed as phospholipids that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Examples include phosphatidylcholine (lecithin), phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidylglycerol, diphosphatidylglycerol, sphingomyelin and the like.

本発明に用いることができるアニオン性多糖とはカルボキシル基、硫酸基又はリン酸基等の酸性極性基を有する多糖類である。以下に具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、アルギン酸、ペクチン、カラギーナン、フコイダン、アガロペクチン、ポルフィラン、カラヤガム、ジェランガム、キサンタンガム、ヒアルロン酸類等が挙げられる。   The anionic polysaccharide that can be used in the present invention is a polysaccharide having an acidic polar group such as a carboxyl group, a sulfate group, or a phosphate group. Specific examples are listed below, but the present invention is not limited to these compounds. Examples thereof include chondroitin sulfate, dextran sulfate, carboxymethyl cellulose, carboxymethyl dextran, alginic acid, pectin, carrageenan, fucoidan, agaropectin, porphyran, caraya gum, gellan gum, xanthan gum, and hyaluronic acid.

本発明に用いることができるカチオン性多糖とは、アミノ基等の塩基性極性基を有する多糖類である。以下に具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。キチン、キトサンなどのグルコサミンやガラクトサミンを構成単糖として含むものなどが挙げられる。   The cationic polysaccharide that can be used in the present invention is a polysaccharide having a basic polar group such as an amino group. Specific examples are listed below, but the present invention is not limited to these compounds. Examples thereof include glucosamine such as chitin and chitosan and galactosamine as a constituent monosaccharide.

本発明に用いることができるアニオン性タンパク質とは等電点が生理的ｐＨよりも塩基性側にあるタンパク質およびリポタンパク質である。具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、リゾチーム、チトクロムＣ、リボヌクレアーゼ、トリプシノーゲン、キモトリプシノーゲン、α−キモトリプシンなどが挙げられる。   Anionic proteins that can be used in the present invention are proteins and lipoproteins whose isoelectric point is more basic than physiological pH. Specific examples are listed, but the present invention is not limited to these compounds. Examples include polyglutamic acid, polyaspartic acid, lysozyme, cytochrome C, ribonuclease, trypsinogen, chymotrypsinogen, α-chymotrypsin and the like.

本発明に用いられるカチオンタンパク質とは等電点が生理的ｐＨよりも酸性側にあるタンパク質およびリポタンパク質である。具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ポリリジン、ポリアルギニン、ヒストン、プロタミン、オバルブミンなどが挙げられる。   The cationic proteins used in the present invention are proteins and lipoproteins whose isoelectric point is on the acidic side of physiological pH. Specific examples are listed, but the present invention is not limited to these compounds. Examples include polylysine, polyarginine, histone, protamine, and ovalbumin.

本発明によれば、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子が提供される。
（ａ）カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の抗酸化化合物を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を pH3.5〜7.5の酸性水性媒体に注入する工程： According to the present invention, casein nanoparticles produced by the following steps (a) to (c) are provided.
(A) dissolving casein in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher;
(B) a step of adding at least one antioxidant compound to the solution obtained in step (a); and (c) a step of injecting the solution obtained in step (b) into an acidic aqueous medium having a pH of 3.5 to 7.5. :

さらに本発明によれば、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子が提供される。
（ａ）カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の抗酸化化合物を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液のpH をpH3.5〜7.5まで下降させる工程： Furthermore, according to this invention, the casein nanoparticle produced by the following process (a) to (c) is provided.
(A) dissolving casein in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher;
(B) adding at least one antioxidant compound to the solution obtained in step (a); and (c) lowering the pH of the solution obtained in step (b) to pH 3.5-7.5:

本発明においては、カゼインを塩基性条件にすることで、ミセル構造を壊し水に溶解させ、ナノ粒子を形成しながら再び不溶化させることにより、所望のサイズのカゼインナノ粒子を作製できる。また、疎水性の活性物質とカゼイン疎水性部分の相互作用を利用して、カゼインナノ粒子内に活性物質を内包できる。さらに、これらの粒子は水溶液中で安定に存在することが見出された。   In the present invention, casein nanoparticles of a desired size can be produced by making the casein basic conditions, breaking the micelle structure, dissolving in water, and insolubilizing again while forming the nanoparticles. Further, the active substance can be encapsulated in the casein nanoparticles by utilizing the interaction between the hydrophobic active substance and the casein hydrophobic portion. Furthermore, it was found that these particles exist stably in an aqueous solution.

本発明のカゼインナノ粒子の作製方法は、カゼインを塩基性水性媒体液に溶解し、塩基性水性媒体中に注入する方法と、カゼインを塩基性水性媒体液に溶解し、攪拌しながら、pHを下降させる方法が挙げられる。   The method for producing casein nanoparticles of the present invention includes a method of dissolving casein in a basic aqueous medium solution and injecting the casein into a basic aqueous medium solution, and dissolving casein in a basic aqueous medium solution and stirring the pH. A method of lowering is mentioned.

カゼインを塩基性水性媒体液に溶解し、塩基性水性媒体中に注入する方法としては、シリンジによるのが簡便で好ましいが、注入速度、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。一般的には、注入速度は、1mL/minから100mL/minで注入することができる。塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃から７０℃にすることができる。水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃から６０℃ですることができる。攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、100rpmから3000rpmにすることができ、好ましくは、200rpmから2000rpmである。   As a method of dissolving casein in a basic aqueous medium liquid and injecting it into the basic aqueous medium, it is convenient and preferable to use a syringe. However, as long as the method satisfies the injection speed, solubility, temperature, and stirring state, it is particularly preferable. Not limited. In general, the injection rate can be from 1 mL / min to 100 mL / min. The temperature of the basic aqueous medium can be appropriately set, but can be normally 0 ° C. to 80 ° C., and preferably 25 ° C. to 70 ° C. Although the temperature of an aqueous medium can be set suitably, it can be normally 0 to 80 degreeC, Preferably it can be 25 to 60 degreeC. The stirring speed can be set as appropriate, but it can be normally set to 100 rpm to 3000 rpm, and preferably 200 rpm to 2000 rpm.

カゼインを塩基性水性媒体液に溶解し、攪拌しながら、pHを下降させる方法としては、酸を滴下するのが簡便で好ましいが、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃から７０℃にすることができる。攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、100rpmから3000rpmにすることができ、好ましくは、200rpmから2000rpmである。   As a method of lowering the pH while dissolving casein in a basic aqueous medium solution and stirring, it is simple and preferable to add an acid, but it is particularly limited as long as the method satisfies the solubility, temperature, and stirring state. do not do. The temperature of the basic aqueous medium can be appropriately set, but can be normally 0 ° C. to 80 ° C., and preferably 25 ° C. to 70 ° C. The stirring speed can be set as appropriate, but it can be normally set to 100 rpm to 3000 rpm, and preferably 200 rpm to 2000 rpm.

本発明に用いる水性媒体は、有機酸または塩基、無機酸または無機塩基の水溶液、又は緩衝液を用いることができる。   As the aqueous medium used in the present invention, an organic acid or base, an aqueous solution of an inorganic acid or inorganic base, or a buffer solution can be used.

具体的には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸またはフタル酸、トリフルオロ酢酸、モルホリノエタンスルホン酸、2-〔4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル〕エタンスルホン酸のような有機酸；トリス（ヒドロキシメチル）、アミノメタン、アンモニアのような有機塩基；塩酸、過塩素酸、炭酸のような無機酸；燐酸ナトリウム、燐酸カリウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウムのような無機塩基を用いた水溶液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。   Specifically, citric acid, ascorbic acid, gluconic acid, carboxylic acid, tartaric acid, succinic acid, acetic acid or phthalic acid, trifluoroacetic acid, morpholinoethanesulfonic acid, 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1- Piperazinyl] organic acids such as ethanesulfonic acid; organic bases such as tris (hydroxymethyl), aminomethane, ammonia; inorganic acids such as hydrochloric acid, perchloric acid, carbonic acid; sodium phosphate, potassium phosphate, calcium hydroxide, Although the aqueous solution using inorganic bases, such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, and magnesium hydroxide, is mentioned, It is not limited to these.

本発明に用いる水性媒体の濃度は、約10mMから約１Mが好ましい。より好ましくは、約20mMから約200mMである。   The concentration of the aqueous medium used in the present invention is preferably about 10 mM to about 1M. More preferably, it is about 20 mM to about 200 mM.

本発明に用いる塩基性水性媒体のpHは、８以上が好ましく、８から１２が好ましい。より好ましくはpH１０〜１２である。pH８より低いpHではカゼインが溶解しないが、pHが高すぎると加水分解の懸念や取り扱い上の危険性があるため、上述の範囲が好ましい。   The pH of the basic aqueous medium used in the present invention is preferably 8 or more, and preferably 8 to 12. More preferably, the pH is 10-12. Casein does not dissolve at a pH lower than pH 8, but if the pH is too high, there is a concern about hydrolysis or a handling risk, so the above range is preferable.

本発明において、カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる温度は、０〜80℃が好ましく、10〜60℃が好ましい。より好ましくは、20〜40℃である。   In the present invention, the temperature at which casein is dissolved in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher is preferably from 0 to 80 ° C, more preferably from 10 to 60 ° C. More preferably, it is 20-40 degreeC.

本発明に用いる酸性水性媒体のpHは、好ましいpHは3.5〜7.5である。より好ましくはpHは４〜6である。前述の範囲外では、7.5より高いpHでは粒子が溶解してしまい、3以下では粒子サイズが大きくなる傾向が見られる。   The pH of the acidic aqueous medium used in the present invention is preferably 3.5 to 7.5. More preferably, the pH is 4-6. Outside the above range, the particles are dissolved at a pH higher than 7.5, and the particle size tends to be larger at 3 or less.

本発明のナノ粒子は、抗酸化化合物を含むが、抗酸化化合物が活性成分である場合は、そのような活性成分を含む本発明のナノ粒子は、疾患部位に投与して用いることができる。即ち、本発明のナノ粒子は、薬物送達剤として有用である。   The nanoparticles of the present invention contain an antioxidant compound. When the antioxidant compound is an active ingredient, the nanoparticles of the present invention containing such an active ingredient can be administered to a disease site. That is, the nanoparticle of the present invention is useful as a drug delivery agent.

本発明のナノ粒子の投与方法として好ましいものは、経皮・経粘膜吸収、血管・体腔内・リンパへの注射が挙げられる。より好ましくは経皮・経粘膜吸収が挙げられる。   Preferable methods for administering the nanoparticles of the present invention include transcutaneous / transmucosal absorption and injection into blood vessels / intracavities / lymph. More preferred is transdermal and transmucosal absorption.

本発明においては、薬物送達剤の使用は特に限定することはないが、経皮吸収剤、局所治療剤、経口治療剤、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、化粧品、機能性食品、又はサプリメントなどが挙げられる。   In the present invention, use of the drug delivery agent is not particularly limited, but transdermal absorption agent, topical therapeutic agent, oral therapeutic agent, intradermal injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intravenous injection, cosmetics, function Sex foods or supplements are listed.

本発明においては、薬物送達剤には添加物を含むことができる。添加物としては特に限定することはないが、保湿剤、柔軟剤、経皮吸収促進剤、無痛化剤、防腐剤、色素剤、増粘剤、香料、又はpH調整剤などが挙げられる。   In the present invention, the drug delivery agent can include additives. Although it does not specifically limit as an additive, A moisturizer, a softener, a transdermal absorption promoter, a soothing agent, an antiseptic | preservative, a coloring agent, a thickener, a fragrance | flavor, or a pH adjuster etc. are mentioned.

本発明で用いることができる保湿剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。カンテン、ジグリセリン、ジステアリルジモニウムヘクトライト、ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、へキシレングリコール、ヨクイニンエキス、ワセリン、尿素、ヒアルロン酸、セラミド、リピジュア、イソフラボン、アミノ酸、コラーゲン、ムコ多糖、フコダイン、ラクトフェリン、ソルビトール、キチン・キトサン、リンゴ酸、グルクロン酸、プラセンタエキス、海藻エキス、ボタンピエキス、アマチャエキス、オトギリソウエキス、コレウスエキス、マサキ抽出物、コウカエキス、マイカイ花エキス、チョレイエキス、サンザシエキス、ローズマリーエキス、デュークエキス、カミツレエキス、オドリコソウエキス、レイシエキス、セイヨウノコギリソウエキス、アロエエキス、マロニエエキス、アスナロエキズ、ヒバマタエキス、オスモインエキス、オーツ麦エキス、チューベロースポリサッカライド、冬虫夏草エキス、大麦エキス、オレンジ抽出物、ジオウエキス、サンショウエキス、ヨクイニンエキスなどが挙げられる。   Specific examples are listed as humectants that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Kantene, Diglycerin, Distearyldimonium hectorite, Butylene glycol, Polyethylene glycol, Propylene glycol, Hexylene glycol, Yokuinin extract, Vaseline, Urea, Hyaluronic acid, Ceramide, Lipidure, Isoflavone, Amino acid, Collagen, Mucopolysaccharide, Fucodyne Lactoferrin, sorbitol, chitin / chitosan, malic acid, glucuronic acid, placenta extract, seaweed extract, button pi extract, achacha extract, hypericum extract, coleus extract, masaki extract, koka extract, maikai flower extract, chorei extract, hawthorn extract, rose Marie extract, Duke extract, chamomile extract, nettle extract, litchi extract, yarrow extract, aloe extract, maroni extract Asunaroekizu, Fucus extract, Osmo-in extract, oat extract, tuberosa polysaccharide, Cordyceps extract, barley extract, orange extract, Rehmannia glutinosa, pepper extract, such as Yokuininekisu and the like.

本発明で用いることができる柔軟剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。グリセリン、ミネラルオイル、エモリエント成分（例えば、イソステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸ポリグリセリル、イソノナン酸イソトリデシル、イソノナン酸オクチル、オレイン酸、オレイン酸グリセリル、カカオ脂、コレステロール、混合脂肪酸トリグリセリド、コハク酸ジオクチル、酢酸ステアリン酸スクロース、シクロペンタシロキサン、ジステアリン酸スクロース、パルミチン酸オクチル、ヒドロキシステアリン酸オクチル、ベヘン酸アラキル、ポリベヘン酸スクロース、ポリメチルシルセスキオキサン、ミリスチルアルコール、ミリスチン酸セチル、ミリスチン酸ミリスチル、ラウリン酸ヘキシルなど）が挙げられる。   Specific examples are listed as softening agents that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Glycerin, mineral oil, emollient ingredients (for example, isopropyl isostearate, polyglyceryl isostearate, isotridecyl isononanoate, octyl isononanoate, oleic acid, glyceryl oleate, cocoa butter, cholesterol, mixed fatty acid triglycerides, dioctyl succinate, sucrose acetate stearate , Cyclopentasiloxane, sucrose distearate, octyl palmitate, octyl hydroxystearate, aralkyl behenate, sucrose polybehenate, polymethylsilsesquioxane, myristyl alcohol, cetyl myristate, myristyl myristate, hexyl laurate) Can be mentioned.

本発明で用いることができる経皮吸収促進剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。エタノール、ミリスチン酸イソプロピル、クエン酸、スクワラン、オレイン酸、メントール、N-メチル-2-ピロリドン、アジピン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジイソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸イソプロピル、オレイン酸オクチルドデシル、イソステアリルアルコール、2-オクチルドデカノール、尿素、植物油、動物油が挙げられる。   Specific examples are listed as transdermal absorption enhancers that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Ethanol, isopropyl myristate, citric acid, squalane, oleic acid, menthol, N-methyl-2-pyrrolidone, diethyl adipate, diisopropyl adipate, diethyl sebacate, diisopropyl sebacate, isopropyl palmitate, isopropyl oleate, oleic acid Examples include octyldodecyl, isostearyl alcohol, 2-octyldodecanol, urea, vegetable oil, and animal oil.

本発明で用いることができる無痛化剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ベンジルアルコール、塩酸プロカイン、塩酸キシロカイン、 クロロブタノールなどが挙げられる。   Specific examples are listed as soothing agents that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Examples include benzyl alcohol, procaine hydrochloride, xylocaine hydrochloride, and chlorobutanol.

本発明で用いることができる防腐剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸ナトリウム、ソルビン酸、デヒドロ酢酸ナトリウム、過酸化水素、ギ酸、ギ酸エチル、ジ亜塩素酸ナトリウム、プロピオン酸、プロピオン酸ナトリウム、プロピオン酸カルシウム、ペクチン分解物、ポリリジン、フェノール、イソプロピルメチルフェノール、オルトフェニルフェノール、フェノキシエタノール、レゾルシン、チモール、チラム、ティートリー油が挙げられる。   Specific examples are listed as preservatives that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Benzoic acid, sodium benzoate, paraben, ethyl paraben, methyl paraben, propyl paraben, butyl paraben, potassium sorbate, sodium sorbate, sorbic acid, sodium dehydroacetate, hydrogen peroxide, formic acid, ethyl formate, sodium dichlorite, Examples include propionic acid, sodium propionate, calcium propionate, pectin degradation products, polylysine, phenol, isopropylmethylphenol, orthophenylphenol, phenoxyethanol, resorcin, thymol, thiram, and tea tree oil.

本発明で用いることができる色素剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。オキアミ色素、オレンジ色素、カカオ色素、カオリン、カルミン類、グンジョウ、コチニール色素、酸化クロム、酸化鉄、二酸化チタン、タール色素、クロロフィルなどが挙げられる。   Specific examples are listed as coloring agents that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Examples include krill pigment, orange pigment, cacao pigment, kaolin, carmine, gunjo, cochineal pigment, chromium oxide, iron oxide, titanium dioxide, tar pigment, chlorophyll and the like.

本発明で用いることができる増粘剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。クインスシード、カラギーナン、アラビアガム、カラヤガム、キサンタンガム、ジェランガム、タマリンドガム、ローカストビーンガム、トラガントガム、ペクチン、デンプン、シクロデキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウムなどが挙げられる。   Specific examples are listed as thickeners that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Quince seed, carrageenan, gum arabic, caraya gum, xanthan gum, gellan gum, tamarind gum, locust bean gum, tragacanth gum, pectin, starch, cyclodextrin, methylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, sodium alginate, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, Examples include sodium polyacrylate.

本発明で用いることができる香料として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ジャコウ、アカシア油、アニス油、イランイラン油、シナモン油、ジャスミン油、スウィートオレンジ油、スペアミント油、ゼラニウム油、タイム油、ネロリ油、ハッカ油、ヒノキ油、フェンネル油、ペパーミント油、ベルガモット油、ライム油、ラベンダー油、レモン油、レモングラス油、ローズ油、ローズウッド油、アニスアルデヒド、ゲラニオール、シトラール、シベトン、ムスコン、リモネン、バニリンなどが挙げられる。   Specific examples are listed as perfumes that can be used in the present invention, but the present invention is not limited to these compounds. Musk, Acacia Oil, Anise Oil, Ylang Ylang Oil, Cinnamon Oil, Jasmine Oil, Sweet Orange Oil, Spearmint Oil, Geranium Oil, Thyme Oil, Neroli Oil, Meat Oil, Cypress Oil, Fennel Oil, Peppermint Oil, Bergamot Oil, Lime And oil, lavender oil, lemon oil, lemongrass oil, rose oil, rosewood oil, anisaldehyde, geraniol, citral, cybeton, muscone, limonene, vanillin and the like.

本発明で用いることができるpH調整剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リン酸、コハク酸が挙げられる。   Specific examples of the pH adjusting agent that can be used in the present invention are listed, but the present invention is not limited to these compounds. Examples include sodium citrate, sodium acetate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, phosphoric acid, and succinic acid.

本発明のナノ粒子の投与量は、活性成分の種類及び使用量、患者の体重、疾患の状態などに応じて適宜設定することができるが、一般的には、１回の投与につき、１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ程度を投与することができ、好ましくは、２０μｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ程度を投与することができる。また、経皮・経粘膜で使用する場合は、１μｇ〜５０ｍｇ／ｃｍ2程度を投与することができ、好ましくは２．５μｇ〜１０ｍｇ／ｃｍ2程度を投与することができる。
以下の実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。 The dosage of the nanoparticles of the present invention can be appropriately set according to the type and amount of the active ingredient, the weight of the patient, the state of the disease, etc., but in general, 10 μg to About 100 mg / kg can be administered, and preferably about 20 μg to 50 mg / kg can be administered. When used transdermally or transmucosally, about 1 μg to 50 mg / cm 2 can be administered, and preferably about 2.5 μg to 10 mg / cm 2 can be administered.
The following examples further illustrate the present invention, but the scope of the present invention is not limited to these examples.

実施例１：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１５ｍｇをpH９リン酸バッファー１．５ｍLに溶解させる。アスタキサンチン（和光純薬製）９ｍｇをエタノール1mLに溶解させる。この２種の溶液を混合し、エタノールを蒸発させた後、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、pH5のリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、カゼインナノ粒子が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、２７４nmであった。 Example 1:
15 mg of casein (milk-derived, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is dissolved in 1.5 mL of pH 9 phosphate buffer. 9 mg of astaxanthin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) is dissolved in 1 mL of ethanol. After mixing these two solutions and evaporating ethanol, 1 mL was injected into 10 mL of phosphate buffered water at pH 5 using a microsyringe under the external stirring conditions of 40 ° C. and 800 rpm. Particles were obtained. The average particle size of the above particles was 274 nm as measured using a light scattering photometer and a Microtrack manufactured by Nikiso Corporation.

実施例２：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１５ｍｇをpH９リン酸バッファー１．５ｍLに溶解させる。アスタキサンチン（和光純薬製）９ｍｇおよびトコフェノール２．７５mgをエタノール１mLに溶解させる。この２種の溶液を混合し、エタノールを蒸発させた後、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、pH5のリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、カゼインナノ粒子が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、２９３nmであった。 Example 2:
15 mg of casein (milk-derived, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is dissolved in 1.5 mL of pH 9 phosphate buffer. 9 mg of astaxanthin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and 2.75 mg of tocophenol are dissolved in 1 mL of ethanol. After mixing these two solutions and evaporating ethanol, 1 mL was injected into 10 mL of phosphate buffered water at pH 5 using a microsyringe under the external stirring conditions of 40 ° C. and 800 rpm. Particles were obtained. The average particle diameter of the above particles was 293 nm as measured using a light scattering photometer and a Microtrack manufactured by Nikiso Corporation.

実施例３：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１５ｍｇをpH９リン酸バッファー１．５ｍLに溶解させる。アスタキサンチン（和光純薬製）９ｍｇおよびトコフェノール２．７５mgをエタノール１mLに溶解させる。この２種の溶液を混合し、エタノールを蒸発させた後、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、pH5のリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、カゼインナノ粒子が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、２９３nmであった。この分散液にアスコルビン酸１００mgを添加した。 Example 3:
15 mg of casein (milk-derived, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is dissolved in 1.5 mL of pH 9 phosphate buffer. 9 mg of astaxanthin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and 2.75 mg of tocophenol are dissolved in 1 mL of ethanol. After mixing these two solutions and evaporating ethanol, 1 mL was injected into 10 mL of phosphate buffered water at pH 5 using a microsyringe under the external stirring conditions of 40 ° C. and 800 rpm. Particles were obtained. The average particle diameter of the above particles was 293 nm as measured using a light scattering photometer and a Microtrack manufactured by Nikiso Corporation. 100 mg of ascorbic acid was added to this dispersion.

実施例４：
ＰＬＧＡ（乳由来・和光純薬製）１５ｍｇ、アスタキサンチン（和光純薬製）９ｍｇおよびトコフェノール１．８mgをアセトン１．５ｍLに溶解させる。この溶液を、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、水１０ｍL中に注入したところ、ＰＬＧＡナノ粒子が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、５２nmであった。ロータリーエバポレーターを用いてアセトンを蒸発させた後、液量が１１ｍLになるように水を加えた。この分散液にアスコルビン酸１００mgを添加した。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、５２nmであった。 Example 4:
PLGA (milk-derived Wako Pure Chemical) 15 mg, astaxanthin (Wako Pure Chemical) 9 mg and tocophenol 1.8 mg are dissolved in acetone 1.5 mL. When 1 mL of this solution was injected into 10 mL of water using a microsyringe under the external stirring conditions of 40 ° C. and 800 rpm, PLGA nanoparticles were obtained. The average particle size of the above particles was 52 nm as measured using a light scattering photometer and a Microtrack manufactured by Nikiso Corporation. Acetone was evaporated using a rotary evaporator, and then water was added so that the liquid volume became 11 mL. 100 mg of ascorbic acid was added to this dispersion. The average particle size of the above particles was 52 nm as measured using a light scattering photometer and a Microtrack manufactured by Nikiso Corporation.

実施例５；
酸処理ゼラチン（乳由来・和光純薬製）１５ｍｇ、トランスグルタミナーゼ製剤（味の素（株）製アクティバTG-S）を７．５ｍｇを水１．５ｍLに溶解させる。この溶液を混合し、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、エタノール１０ｍL中に注入したところ、ゼラチンナノ粒子が得られた。得られた分散液を外設５５℃で５時間静置することで、架橋されたゼラチンナノ粒子が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計（大塚電子（株）製ＤＬＳ−７０００）を用い測定したところ、７６nmであった。上記の分散液に、アスタキサンチン（和光純薬製）６ｍｇおよびトコフェノール１．８mgを溶解させた後、水５ｍLを加えてロータリーエバポレーターを用いてエタノールを蒸発させた。液量が１１ｍLになるように水を加えた。この分散液にアスコルビン酸１００mgを添加した。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、３５９nmであった。 Example 5;
15 mg of acid-treated gelatin (milk-derived, manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and 7.5 mg of transglutaminase preparation (Activa TG-S, manufactured by Ajinomoto Co., Inc.) are dissolved in 1.5 mL of water. When this solution was mixed and 1 mL was injected into 10 mL of ethanol using a microsyringe under the external stirring conditions of 40 ° C. and 800 rpm, gelatin nanoparticles were obtained. The obtained dispersion was allowed to stand at an external temperature of 55 ° C. for 5 hours to obtain crosslinked gelatin nanoparticles. The average particle size of the particles was 76 nm as measured using a light scattering photometer (DLS-7000, manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd.). 6 mg of astaxanthin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 1.8 mg of tocophenol were dissolved in the above dispersion, 5 mL of water was added, and ethanol was evaporated using a rotary evaporator. Water was added so that the liquid volume was 11 mL. 100 mg of ascorbic acid was added to this dispersion. The average particle size of the above particles was 359 nm as measured using a light scattering photometer and a Microtrack manufactured by Nikiso Corporation.

実施例６：
実施例１、２、３で作製したカゼインナノ粒子を50℃の高温槽中に静置し、１０日間の経時安定性試験を行った。比較例１としてアスタキサンチンオリーブオイル乳化物を用いた。アスタキサンチン量は吸収スペクトル（Abs.500nm）から算出した（図１）。 Example 6:
The casein nanoparticles prepared in Examples 1, 2, and 3 were allowed to stand in a high-temperature bath at 50 ° C., and a 10-day stability test was performed. As Comparative Example 1, an astaxanthin olive oil emulsion was used. The amount of astaxanthin was calculated from the absorption spectrum (Abs. 500 nm) (FIG. 1).

オリーブオイル乳化物との比較から、カゼインナノ粒子の方が安定性が高いことが分かる。さらに、酸化防止剤（抗酸化化合物の安定化剤）との組み合わせにより、市販の乳化物よりも高い安定性を示した。   Comparison with olive oil emulsion shows that the casein nanoparticles are more stable. Furthermore, the combination with an antioxidant (antioxidant compound stabilizer) showed higher stability than commercially available emulsions.

実施例７：
実施例３、４、５で作製したアスタキサンチンを内包したナノ粒子を50℃の高温槽中に静置し、７日間の経時安定性試験を行った。アスタキサンチン量は吸収スペクトル（Abs.500nm）から算出した。結果を図２に示す。 Example 7:
The nanoparticles encapsulating astaxanthin prepared in Examples 3, 4, and 5 were left in a high-temperature bath at 50 ° C., and a 7-day stability test was performed. The amount of astaxanthin was calculated from the absorption spectrum (Abs. 500 nm). The results are shown in FIG.

図２の結果から分かるように、カゼイン、ゼラチン、PLGAを比較したところ、何れの系においても、８０％以上の残存率を示し、抗酸化化合物の安定性が向上した。   As can be seen from the results in FIG. 2, when casein, gelatin, and PLGA were compared, the residual ratio was 80% or more in any system, and the stability of the antioxidant compound was improved.

図１は、実施例１から３のナノ粒子と比較例の乳化物におけるアスタキサンチンの熱安定性試験の結果を示す。FIG. 1 shows the results of the thermal stability test of astaxanthin in the nanoparticles of Examples 1 to 3 and the emulsion of the comparative example. 図２は、実施例３から５のナノ粒子におけるアスタキサンチンの熱安定性試験の結果を示す。FIG. 2 shows the results of a thermal stability test of astaxanthin on the nanoparticles of Examples 3 to 5.

Claims (16)

抗酸化化合物、及び生分解性高分子から構成される水分散可能なナノ粒子。 Water dispersible nanoparticles composed of an antioxidant compound and a biodegradable polymer. 抗酸化化合物の安定化剤をさらに含む、請求項１に記載のナノ粒子。 The nanoparticle of claim 1, further comprising an antioxidant compound stabilizer. 生分解性高分子の重量に対して、０.１〜１００重量％の抗酸化化合物を含有する、請求項１又は２に記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to claim 1 or 2, comprising 0.1 to 100% by weight of an antioxidant compound based on the weight of the biodegradable polymer. 平均粒子サイズが１０〜１０００ｎｍである、請求項１から３の何れかに記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to any one of claims 1 to 3, wherein the average particle size is 10 to 1000 nm. 生分解性高分子がタンパク質である、請求項１から４の何れかに記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to any one of claims 1 to 4, wherein the biodegradable polymer is a protein. タンパク質がコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項５に記載のナノ粒子。 6. The nano of claim 5, wherein the protein is at least one selected from the group consisting of collagen, gelatin, acid-treated gelatin, albumin, ovalbumin, ovalbumin, casein, transferrin, globulin, fibroin, fibrin, laminin, fibronectin, or vitronectin. particle. ナノ粒子の形成中および／又は形成後にタンパク質が架橋処理されている、請求項５又は６に記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to claim 5 or 6, wherein the protein is crosslinked during and / or after the formation of the nanoparticle. トランスグルタミナーゼを用いて架橋処理を行う、請求項７に記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to claim 7, wherein a crosslinking treatment is performed using transglutaminase. 抗酸化化合物が油溶性成分である、請求項１から８の何れかに記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to any one of claims 1 to 8, wherein the antioxidant compound is an oil-soluble component. 油溶性成分が、水に不溶又は水に難溶性の化粧品用成分、機能性食品用成分、又は医薬品成分である、請求項９に記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to claim 9, wherein the oil-soluble component is a cosmetic component, a functional food component, or a pharmaceutical component that is insoluble or hardly soluble in water. 油溶性成分が一種以上のカロテノイド類を含む、請求項９又は１０に記載のナノ粒子。 11. Nanoparticles according to claim 9 or 10, wherein the oil-soluble component comprises one or more carotenoids. カロテノイド類がアスタキサンチンである、請求項１１に記載のナノ粒子。 The nanoparticle according to claim 11, wherein the carotenoid is astaxanthin. 下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子。
（ａ）カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の抗酸化化合物を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を pH3.5〜7.5の酸性水性媒体に注入する工程： Casein nanoparticles prepared by the following steps (a) to (c).
(A) dissolving casein in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher;
(B) a step of adding at least one antioxidant compound to the solution obtained in step (a); and (c) a step of injecting the solution obtained in step (b) into an acidic aqueous medium having a pH of 3.5 to 7.5. : 下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子。
（ａ）カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の抗酸化化合物を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液のpH をpH3.5〜7.5まで下降させる工程： Casein nanoparticles prepared by the following steps (a) to (c).
(A) dissolving casein in a basic aqueous medium having a pH of 8 or higher;
(B) adding at least one antioxidant compound to the solution obtained in step (a); and (c) lowering the pH of the solution obtained in step (b) to pH 3.5-7.5: 請求項１から１４の何れかに記載のナノ粒子を含む、薬物送達剤。 A drug delivery agent comprising the nanoparticle according to claim 1. 経皮吸収剤、局所治療剤、経口治療剤、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、化粧品、機能性食品、又はサプリメントとして使用される、請求項１５に記載の薬物送達剤。 The drug delivery agent according to claim 15, which is used as a transdermal absorption agent, a topical therapeutic agent, an oral therapeutic agent, an intradermal injection, a subcutaneous injection, an intramuscular injection, an intravenous injection, a cosmetic product, a functional food, or a supplement. .
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