JP2007532543A - Nutritional supplements and methods for processing them - Google Patents

Nutritional supplements and methods for processing them Download PDF

Info

Publication number
JP2007532543A
JP2007532543A JP2007507358A JP2007507358A JP2007532543A JP 2007532543 A JP2007532543 A JP 2007532543A JP 2007507358 A JP2007507358 A JP 2007507358A JP 2007507358 A JP2007507358 A JP 2007507358A JP 2007532543 A JP2007532543 A JP 2007532543A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
resveratrol
composition
biologically active
small molecule
encapsulated
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2007507358A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP4963670B2 (en
Inventor
ビル サルディ，
スタン ソロモンソン，
Original Assignee
レスベラトロル パートナーズ， エルエルシー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by レスベラトロル パートナーズ， エルエルシー filed Critical レスベラトロル パートナーズ， エルエルシー
Publication of JP2007532543A publication Critical patent/JP2007532543A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP4963670B2 publication Critical patent/JP4963670B2/en
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/70—Polygonaceae (Buckwheat family), e.g. spineflower or dock
    • A61K36/704—Polygonum, e.g. knotweed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/30—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/87—Vitaceae or Ampelidaceae (Vine or Grape family), e.g. wine grapes, muscadine or peppervine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4858—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

植物性低分子または合成低分子（例えば、レスベラトロルおよびケルセチン）を含有する組成物であって、その低分子が生物学的に活性な形態である組成物が提供される。この低分子は、天然の供給源（例えば、ブドウまたはオオイタドリ（植物の名称、イタドリ））に由来し得る。この組成物は、上記低分子の遺伝子制御された生物活性が維持されるように処理され得る。具体的には、カプセル化に対して未加工の物質は、カプセル化の前、およびその後に生物活性を示す必要があり、そして酸素を含まない（窒素）、微光環境において処理される必要がある。この組成物は、少なくとも１つの抗酸化安定剤としての金属キレート剤、抗酸化剤、および乳化剤を、さらに含有し得る。この組成物は、栄養補助サプリメントまたは薬物の生成に有用である。Compositions comprising plant or synthetic small molecules (eg, resveratrol and quercetin) are provided, wherein the small molecules are in a biologically active form. The small molecule may be derived from a natural source, such as grapes or a giant beetle (plant name, knotweed). The composition can be treated such that the small molecule's genetically controlled biological activity is maintained. Specifically, raw materials for encapsulation must exhibit biological activity before and after encapsulation, and must be processed in a low light environment that does not contain oxygen (nitrogen). is there. The composition may further contain at least one metal chelator as an antioxidant stabilizer, an antioxidant, and an emulsifier. This composition is useful for the production of nutritional supplements or drugs.

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、発明の名称「Ｄｉｅｔａｒｙ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｓａｍｅ」であり、２００３年１０月２３日に出願された米国仮特許出願番号６０／５９，９５５に基づく優先権を主張する。上記の仮特許出願の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。 (Cross-reference of related applications)
This application is entitled “Dietary Supplementation and Method of Processing Same” and claims priority from US Provisional Patent Application No. 60 / 59,955 filed on Oct. 23, 2003. The disclosure of the above provisional patent application is incorporated herein by reference in its entirety.

（発明の分野）
本発明は、生物学的に活性な低分子を含有するカプセル化された組成物および、生物活性を維持（特に、サーチュイン（Ｓｉｒｔｕｉｎ）１遺伝子を活性化（発現）または非活性化（サイレント）する能力を維持）するように組成物を処理する方法に関する。 (Field of Invention)
The present invention relates to an encapsulated composition containing a biologically active small molecule and to maintain biological activity, in particular to activate (express) or deactivate (silent) the Sirtuin 1 gene Relates to a method of treating the composition to maintain the ability).

レスベラトロルは、数種の植物によって傷害または真菌感染に応答して産生される、天然に存在するフェノール性殺真菌成分である。レスベラトロルは、環境的ストレス（例えば、不利な天候または昆虫、動物、もしくは病原性微生物（例えば、真菌）による攻撃）の期間の間に植物中で産生される化合物の群（フィトアレキシンと称される）の１種である。レスベラトロルは、ビニフェリンと称されるポリマーのファミリーの親分子である。その天然の供給源としては、マツの木、ユーカリ植物、タデ、ユリ科、タデ科、マメ科、クワ、ピーナッツ、ブルーベリー、クランベリー、およびマツの実（ｐｉｎｅ−ｋｅｒｎｅｌ）が挙げられる。その最も豊富な天然の供給源は、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｖｉｔｉｓ ｌａｂｒｕｓｃａ、およびＶｉｔｉｓ ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ（マスカット（ｍｕｓｃａｄｉｎｅ））であり、その全ては、ワインを作るのに使用されるブドウの品種である。   Resveratrol is a naturally occurring phenolic fungicidal component produced by several plants in response to injury or fungal infection. Resveratrol is a group of compounds (called phytoalexins) produced in plants during periods of environmental stress (eg adverse weather or attack by insects, animals, or pathogenic microorganisms (eg fungi)). 1). Resveratrol is the parent molecule of a family of polymers called biniferin. Its natural sources include pine trees, eucalyptus plants, pods, liliaceae, laceae, legumes, mulberry, peanuts, blueberries, cranberries, and pine-kernel. The most abundant natural sources are Vitis vinifera, Vitis labrusca, and Vitis rotundifolia (muscadine), all of which are grape varieties used to make wine.

レスベラトロル（Ｃ１４Ｈ１２Ｏ３）（いわゆる３，４’，５トリヒドロキシスチルベン）は、シス−立体異性形態およびトランス−立体異性形態にて天然に存在する。ブドウおよびワインにおいて、レスベラトロルは、主にそのトランス立体異性形態で存在する。ワインの製造プロセスの間に、発酵が行われる一方で、ブドウの種子および皮は、絞られた汁と接触したままである。発酵プロセスの間に生成されたエタノールは、上記皮および種子からレスベラトロルを自然のままに抽出し、そして濃縮する。ワインのレスベラトロルの含有量は、ブドウの種類だけでなく、ブドウの皮／種子が発酵プロセスの間に在る時間の長さ（すなわち、皮／種子がその果汁と接触したままである時間の量）に依存する。レスベラトロルの濃度は、白ワインより赤ワインにおいて著しく高い（約１０倍）。なぜならば、赤ワインの産生の間に皮／種子が、より長い時間、その果汁と接触したままであり、皮／種子からのレスベラトロルの量が増加するからである。赤ワインの代表的なボトル（７５０ｍｌ）において、レスベラトロルの総濃度は、０．６〜１５ｍｇ／ｌの範囲であり得る。一旦生成されると、レスベラトロルは、ワインの詰め込みおよび処理によってワイン内に保存される（すなわち、実質的に光を通さない気密ボトル中に保存される）。さらに、このボトル自体は、代表的には涼しい暗い環境（ｄａｒｋｅｎｅｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）（例えば、ワインセラー）に保存される。 Resveratrol (C 14 H 12 O 3 ) (so-called 3,4 ′, 5 trihydroxystilbene) occurs naturally in cis- and trans-stereoisomeric forms. In grapes and wine, resveratrol exists primarily in its trans stereoisomeric form. During the wine manufacturing process, fermentation takes place, while the grape seeds and skin remain in contact with the squeezed juice. The ethanol produced during the fermentation process naturally extracts and concentrates resveratrol from the skin and seed. The resveratrol content of wine is not only the type of grape, but also the length of time that the grape skin / seed remains during the fermentation process (ie the amount of time that the skin / seed remains in contact with its juice) ). The concentration of resveratrol is significantly higher (about 10 times) in red wine than in white wine. This is because during the production of red wine, the skin / seed remains in contact with its juice for a longer time, increasing the amount of resveratrol from the skin / seed. In a typical bottle of red wine (750 ml), the total concentration of resveratrol can range from 0.6 to 15 mg / l. Once produced, resveratrol is stored in wine by wine stuffing and processing (ie, stored in an airtight bottle that is substantially light-tight). Further, the bottle itself is typically stored in a darkened environment (eg, a wine cellar).

研究は、レスベラトロルが生物学的に活性であり、癌の予防、抗炎症特性、および心血管作用を含む数種の健康上の利益を提供することを示した。レスベラトロルは、中程度の抗酸化物質として機能し、数種の癌に関連するフリーラジカルの損傷を打ち消す。レスベラトロルはまた、転写因子ＮＦ−κＢを阻害し、ＮＦ−κＢは、細胞の生存、炎症および癌の増殖を担う遺伝子を刺激する。癌細胞に適用される場合、レスベラトロルは、腫瘍壊死因子−αに対して癌細胞を感作し、腫瘍壊死因子−αは、アポトーシス（細胞死）を引き起こす。疫学的研究、インビトロ研究および動物の研究はまた、高いレスベラトロル摂取量が、心血管疾患の発生率の減少（抗血小板作用および脂質低下作用を生じる）に関連することを示唆する。より最近の研究は、レスベラトロルが細胞の変性を遅らせることによって、酵母、蠕虫、およびマウスの寿命を増大させることを示唆する。３〜１５ミリグラムのレスベラトロル（コップで３〜５杯分の赤ワインに存在する量）は、上記の作用を生じるのに十分であると考えられることが示唆された。   Studies have shown that resveratrol is biologically active and provides several health benefits including cancer prevention, anti-inflammatory properties, and cardiovascular effects. Resveratrol functions as a moderate antioxidant and counteracts the free radical damage associated with several cancers. Resveratrol also inhibits the transcription factor NF-κB, which stimulates genes responsible for cell survival, inflammation and cancer growth. When applied to cancer cells, resveratrol sensitizes cancer cells to tumor necrosis factor-α, which causes apoptosis (cell death). Epidemiological studies, in vitro studies and animal studies also suggest that high resveratrol intake is associated with a reduced incidence of cardiovascular disease (resulting in antiplatelet and lipid lowering effects). More recent studies suggest that resveratrol increases the life span of yeast, helminths, and mice by delaying cell degeneration. 3-15 milligrams resveratrol (the amount present in 3-5 glasses of red wine) was suggested to be considered sufficient to produce the above effect.

しかし、上述の利益を提供するために、一旦生成されたレスベラトロルは、生物学的に活性なままでなければならない。レスベラトロルの生物活性を維持することは、困難である。レスベラトロルは、約１日の半減期を有し；したがって、周囲の環境に対して曝露すると、２日以内に完全に酸化する。一旦酸化されると、生物系に影響する能力は、消失する。   However, in order to provide the above-mentioned benefits, resveratrol once produced must remain biologically active. It is difficult to maintain the biological activity of resveratrol. Resveratrol has a half-life of about 1 day; therefore, it is fully oxidized within 2 days when exposed to the surrounding environment. Once oxidized, the ability to affect biological systems is lost.

栄養補助サプリメント（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）において使用される場合、未加工のレスベラトロルは、一般的に、植物の供給源（例えば、オオイタドリ（Ｇｉａｎｔ Ｋｎｏｔｗｅｅｄ））からのアルコール抽出物として生成され、次いでこれは、粉末に乾燥されるか、カプセル化されるか、または丸剤の形態にされ、次にこれは、気密包装中に密封される。未加工の物質としてのレスベラトロルは、一般的には有効な生物活性を示すが、レスベラトロル粉末が、カプセル化のプロセスにおいて混合（ｍｉｘ）および混合（ｂｌｅｎｄ）される場合、これは酸素に曝され、消費者に到達し得る前に、最終的に全てではないがある程度その生物活性を喪失する。結果として、レスベラトロル分子が、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、カプセル化後に存在することが確認され得るにもかかわらず、レスベラトロルは遺伝子制御された生物活性を示し得るか、または示し得ない。したがって、レスベラトロルがサプリメント中に存在し得るにもかかわらず、レスベラトロルは著しく生物活性を欠き得る。特に、レスベラトロルは、特定の抗酸化作用、エストロゲン様作用、コレステロール制御作用を示し得るが、レスベラトロルはそのゲノムに関する生物活性を失う。酵素的生物活性（例えば、ヒトの酵素を活性化および非活性化する能力）は、保存されたレスベラトロル分子（例えば、その分子がワイン中に存在するか、または研究用等級のレスベラトロルである場合）においてのみ実証された。したがって、安定化されたレスベラトロルを含み、それがその生物活性を保持し、そして特に酵素的生物活性を保持する栄養補助サプリメントを提供することが、望まれる。   When used in a dietary supplement, raw resveratrol is generally produced as an alcoholic extract from a plant source (eg, Giant Knotweed), which is then powdered Dried, encapsulated or in the form of pills, which are then sealed in hermetic packaging. Resveratrol as a raw material generally exhibits effective biological activity, but when resveratrol powder is mixed and blended in the encapsulation process, it is exposed to oxygen, Before it can reach the consumer, it eventually loses some, if not all, its biological activity. As a result, resveratrol may or may not exhibit gene-controlled biological activity, even though resveratrol molecules can be confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC) to be present after encapsulation. Thus, resveratrol can be significantly devoid of biological activity, even though resveratrol can be present in the supplement. In particular, resveratrol can exhibit specific antioxidant, estrogenic, and cholesterol-regulatory effects, but resveratrol loses biological activity with respect to its genome. Enzymatic biological activity (eg, the ability to activate and deactivate human enzymes) is a conserved resveratrol molecule (eg, if the molecule is present in wine or is research grade resveratrol) Only demonstrated in Accordingly, it would be desirable to provide a nutritional supplement that contains stabilized resveratrol, which retains its biological activity and in particular retains enzymatic biological activity.

（発明の目的および要旨）
したがって、上記に照らし、そして本発明が記載される場合に明らかとなる他の理由に関して、本発明の目的は、生物学的に活性なレスベラトロルを含有するカプセル化された組成物を提供し、そしてレスベラトロルが、消費者に摂取される場合に生物学的に活性なままであるように、この組成物をカプセル化する方法を提供することである。 (Object and summary of the invention)
Accordingly, in light of the above and for other reasons that will become apparent when the present invention is described, the object of the present invention is to provide an encapsulated composition containing biologically active resveratrol, and It is to provide a method of encapsulating this composition so that resveratrol remains biologically active when consumed by consumers.

酵素活性を刺激し得る植物性低分子ポリフェノールを、その酵素活性が保護されるようにカプセル化する方法を提供することは、本発明の別の目的である。   It is another object of the present invention to provide a method for encapsulating plant low molecular weight polyphenols that can stimulate enzyme activity such that the enzyme activity is protected.

ゲノムに関する作用（ヒトの酵素の活性化および／または非活性化が挙げられる）を有するカプセル化された組成物を提供することは、本発明のさらなる目的である。   It is a further object of the present invention to provide an encapsulated composition having an action on the genome, including activation and / or deactivation of human enzymes.

レスベラトロルの効力がカプセル化プロセスの間の酸素への曝露を防ぐことによって維持される、カプセル化されたレスベラトロル組成物を含有する栄養補助サプリメントを提供することは、本発明のなお別の目的である。   It is yet another object of the present invention to provide a nutritional supplement containing an encapsulated resveratrol composition in which the efficacy of resveratrol is maintained by preventing exposure to oxygen during the encapsulation process .

栄養補助サプリメントの成分を、そのサプリメントの処理工程および包装工程の間に金属誘導性の酸化から保護することは、本発明のよりさらなる目的である。   It is a still further object of the present invention to protect the nutritional supplement components from metal-induced oxidation during the supplement processing and packaging process.

一般的に、本発明の実施形態は、（１）植物の供給源または合成の供給源の、生物学的に活性な形態である低分子、ならびに（２）必要に応じて（ａ）乳化剤、（ｂ）抗酸化剤および（ｃ）キレート剤のうちの少なくとも１つを含有するカプセル化された組成物を提供する。この実施形態は、（１）植物の供給源に由来するか、または合成的に生成される生物学的に活性な低分子を含む物質を得る工程、および（２）実質的に酸素を含まない環境においてこの物質をカプセル化する工程を包含する、組成物をカプセル化する方法をさらに提供する。   In general, embodiments of the present invention comprise (1) a small molecule that is a biologically active form of a plant source or a synthetic source, and (2) optionally (a) an emulsifier, Provided is an encapsulated composition containing at least one of (b) an antioxidant and (c) a chelating agent. This embodiment comprises (1) obtaining a substance comprising a biologically active small molecule derived from a plant source or produced synthetically, and (2) substantially free of oxygen. There is further provided a method of encapsulating the composition comprising encapsulating the material in an environment.

本発明の上記およびよりさらなる目的、特徴、ならびに利点は、以下の本発明の特定の実施形態の詳細な説明を考慮することによって明らかとなる。   The above and further objects, features and advantages of the present invention will become apparent upon consideration of the following detailed description of specific embodiments of the present invention.

（詳細な説明）
本発明の１つの実施形態は、植物に由来するか、または合成的に生成される低分子を含有する組成物、および延長された期間、その生物活性を維持するようにこの組成物をカプセル化する方法に関する。植物の供給源または合成の供給源による生物学的に活性な低分子は、植物性低分子ポリフェノール（例えば、レスベラトロル、ケルセチン、フィセチン、ブテイン（ｂｕｔｅｉｎ）、ピセアトノール（ｐｉｃｅａｔｏｎｏｌ）、イソリキリチゲニン（ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ））を含み得、これらは、その小さいサイズおよび低分子量によって、細胞壁を通過し、細胞核に進入し、そして特定の遺伝子制御された機構を変化させ得る。好ましい植物性低分子ポリフェノールは、レスベラトロル（分子量２２８．２５）であり、これは、他のポリフェノールより良好にサーチュイン−１制御性の酵素活性を活性化することが示された。しかし、他の低分子は、利用され得る。レスベラトロルは、合成的に生成されても、植物材料（ブドウおよびタデが挙げられる）のような供給源から天然に得られてもよい。好ましくは、レスベラトロルとしては、トランス立体異性体の分子（すなわち、トランス−３，４’，５トリヒドロキシスチルベン）が挙げられ、これは、以下： (Detailed explanation)
One embodiment of the present invention encapsulates a composition containing a small molecule that is derived from a plant or that is synthetically produced and that maintains its biological activity for an extended period of time. On how to do. Biologically active small molecules from plant sources or synthetic sources include plant small molecule polyphenols (eg, resveratrol, quercetin, fisetin, butein, piceatonol, isoliquiritigenin). )), Which, by virtue of their small size and low molecular weight, can cross the cell wall, enter the cell nucleus, and alter certain gene-controlled mechanisms. A preferred plant low molecular weight polyphenol is resveratrol (molecular weight 228.25), which has been shown to activate sirtuin-1 regulated enzyme activity better than other polyphenols. However, other small molecules can be utilized. Resveratrol can be produced synthetically or naturally obtained from sources such as plant material, including grapes and seeds. Preferably, resveratrol includes a trans stereoisomer molecule (ie, trans-3,4 ′, 5 trihydroxystilbene), which includes the following:

Figure 2007532543
の化学構造を有する。時間の「延長された期間」の間に生物活性を維持するために、植物の供給源または合成の供給源の低分子は、好ましくはある期間生物学的に活性なままであり、その後分解プロセス（例えば、酸化）に起因して、その分子は自然に生物学的に不活性となる期間について、生物学的に活性なままである。例えば、レスベラトロルは、約１日の半減期を有し；したがって、レスベラトロルは、代表的に、周囲条件への曝露および栄養補助サプリメントの処理工程の間の２日以内に著しく生物活性を失う。
Figure 2007532543
 It has the chemical structure of In order to maintain biological activity during an “extended period” of time, the small molecule of the plant source or synthetic source preferably remains biologically active for a period of time, after which the degradation process Due to (eg, oxidation), the molecule remains biologically active for periods of natural biological inactivity. For example, resveratrol has a half-life of about one day; therefore resveratrol typically loses significant biological activity within two days between exposure to ambient conditions and the process of supplementing supplements.

本発明の別の実施形態は、以下を包含する、植物の供給源または合成の供給源の低分子をカプセル化する方法に関する：（１）植物の供給源または合成の供給源の低分子を含む物質を得る工程；（２）実質的に酸素を含まない環境においてこの物質をカプセル化する工程；ならびに（３）必要に応じて（ａ）キレート剤、（ｂ）抗酸化剤、および／または（ｃ）乳化剤をこの物質に添加する工程。   Another embodiment of the present invention relates to a method of encapsulating a plant source or a synthetic source small molecule comprising: (1) a plant source or a synthetic source small molecule comprising: Obtaining a substance; (2) encapsulating the substance in a substantially oxygen free environment; and (3) optionally (a) a chelating agent, (b) an antioxidant, and / or ( c) adding an emulsifier to this material.

上記で議論される通り、低分子を含む物質は、天然に由来しても合成的に生成されてもよい。さらに、上記物質は、生物学的に活性であるべきである。生物活性は、その低分子が、細胞壁を通過し、細胞核に侵入し、遺伝子制御された酵素（特に、サーチュイン１酵素）を有利に変化させる能力を含むことを意図される。好ましくは、この生物学的に活性な物質は、天然に得られる（すなわち、植物（またはその一部、例えば、その植物から得られる塊茎または果実（果肉および皮を含む））のような少なくとも１つの天然の供給源に由来する）。１つの好ましい供給源は、ブドウ（例えば、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｖｉｔｉｓ ｌａｂｒｕｓｃａ、およびＶｉｔｉｓ ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ）の種子および／または皮である。別の好ましい供給源は、イタドリ（オオイタドリ）であり、そして特に、１−ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ（オオイタドリの一種）である。天然の生成プロセスは、当該分野において一般的に公知であるプロセスを包含し、これらとしては、溶媒を使用して天然の供給源から低分子を抽出する抽出プロセスが挙げられる。上記溶媒としては、水性溶媒、有機溶媒、およびそれらの混合物が挙げられる。この溶媒としては、アルコール（例えば、エタノール）が挙げられ得るが、これに限定されない。具体的な例として、抽出された低分子物質としては、植物（またはその一部）の水性溶媒抽出物または有機溶媒抽出物、果汁（例えば、ブドウの汁）、および植物の汁または果汁から作られた発酵液（例えば、ワイン）、または上述のものの任意の混合物が挙げられる。抽出された物質としては、上記抽出プロセスの間に自然に除去される不活性な植物性物質がさらに挙げられ得る。抽出された物質は、（物理的および／または化学的に）処理されて上記溶媒を除去し、そして上記低分子の濃度が増加され得る。例えば、上記溶媒は、上記抽出物から（例えば、乾燥工程によって）除去され得、乾燥粉末を残す。   As discussed above, substances containing small molecules may be naturally derived or synthetically produced. Furthermore, the substance should be biologically active. Biological activity is intended to include the ability of the small molecule to cross the cell wall, enter the cell nucleus, and advantageously alter gene-regulated enzymes (particularly the sirtuin 1 enzyme). Preferably, the biologically active substance is at least one obtained in nature (ie, a plant (or part thereof, eg tuber or fruit obtained from the plant (including pulp and skin)). Derived from two natural sources). One preferred source is the seeds and / or skins of grapes (eg, Vitis vinifera, Vitis labrusca, and Vitis rotundifolia). Another preferred source is the Japanese knotweed (Panthus edulis), and in particular, 1-polygonum cuspidatum (a type of Prunus cuspidatum). Natural production processes include those processes generally known in the art, including extraction processes that use solvents to extract small molecules from natural sources. Examples of the solvent include an aqueous solvent, an organic solvent, and a mixture thereof. The solvent can include, but is not limited to, an alcohol (eg, ethanol). As specific examples, the extracted low molecular weight material may be an aqueous or organic solvent extract of a plant (or part thereof), fruit juice (eg, grape juice), and plant juice or fruit juice. Fermented liquor (eg wine) or any mixture of those mentioned above. The extracted material may further include inert plant materials that are naturally removed during the extraction process. The extracted material can be treated (physically and / or chemically) to remove the solvent and the concentration of the small molecules can be increased. For example, the solvent can be removed from the extract (eg, by a drying process), leaving a dry powder.

次いで低分子を含む得られた物質は、実質的に酸素を含まない環境においてカプセル化される。本明細書中で使用される場合、語句「実質的に酸素を含まない」は、１００万の酸素あたり約１００部未満の酸素を有する環境を含むことが意図される。理想的に、このカプセル化プロセスは、この低分子の抽出または生成の後、直ちに行われ、そして光、熱、および酸素への曝露から保護される。あるいは、低分子を含む物質は、カプセル化されるまで、実質的に酸素を含まない環境中に保存され得る。   The resulting material containing small molecules is then encapsulated in a substantially oxygen free environment. As used herein, the phrase “substantially free of oxygen” is intended to include environments having less than about 100 parts oxygen per million oxygen. Ideally, the encapsulation process takes place immediately after extraction or production of the small molecule and is protected from exposure to light, heat, and oxygen. Alternatively, a substance containing small molecules can be stored in a substantially oxygen free environment until encapsulated.

上記カプセル化プロセスは、以下の工程を包含する：（１）頭部分および胴体部分を含むカプセルを提供する工程；（２）生物学的に活性な低分子を含む物質でこの胴体部分を少なくとも部分的に満たす工程；（３）この頭部分を、これらの位置が少なくとも部分的に重なるようにこの胴体部分に対して軸方向に位置決めする工程；および（４）この重なる部分に沿って流体気密（空気および液体を通さない）シールを形成する工程。   The encapsulation process includes the following steps: (1) providing a capsule that includes a head portion and a body portion; (2) at least a portion of the body portion with a material that includes a biologically active small molecule. (3) positioning the head portion axially relative to the body portion such that their positions at least partially overlap; and (4) fluid tightness along the overlap portion ( Forming a seal that is impermeable to air and liquids.

上記カプセル部分を構成する物質は、特に限定されない。好ましくは、このカプセル部分は、低い酸素透過度を有する物質を含む。例えば、このカプセル部分は、（ＡＳＴＭ Ｄ３９８５によって測定した場合に）１００μｍについて約１６５ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過度を有し、より好ましくは１００μｍについて約４ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過度を有し、そして最も好ましくは１００μｍについて約１ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過度を有する物質を含むことが好ましい。このカプセル部分を構成する例示的な物質としては、摂取可能な物質（例えば、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはデンプン）が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な例として、この物質としては、１００μｍについて約３．５ｃｍ３／ｍ２／日の酸素透過度を有するゼラチンが挙げられ得る。得られるカプセルとしては、約０．０４ｃｍ３／カプセル／日（２７℃および５０％の相対湿度におけるＡＳＴＭ Ｄ３９８５）までの酸素透過度を有するハードゼラチンカプセルまたはソフトゼラチンカプセルが挙げられ得る。 The substance which comprises the said capsule part is not specifically limited. Preferably, the capsule portion includes a material having a low oxygen permeability. For example, the capsule portion has an oxygen permeability of less than about 165 cm 3 / m 2 / day for 100 μm (as measured by ASTM D3985), more preferably less than about 4 cm 3 / m 2 / day for 100 μm. It is preferred to include a material having oxygen permeability and most preferably having an oxygen permeability of less than about 1 cm 3 / m 2 / day for 100 μm. Exemplary materials that make up the capsule portion include, but are not limited to, ingestible materials (eg, gelatin, hydroxypropylmethylcellulose, or starch). As a specific example, this material may include gelatin having an oxygen permeability of about 3.5 cm 3 / m 2 / day for 100 μm. The resulting capsules may include hard gelatin capsules or soft gelatin capsules having an oxygen transmission rate of up to about 0.04 cm 3 / capsule / day (ASTM D3985 at 27 ° C. and 50% relative humidity).

さらに、不透明なカプセルが、非常に好ましい。これは、色素（例えば、二酸化チタン）をカプセル材料の処方に加えることによって達成され得る。二酸化チタンは、不活性であり、高い分子量を有し、このことは、摂取された場合に二酸化チタンが血液循環中に吸収されることを防ぐ。不透明なカプセルは、光による変性のプロセス（例えば、光酸化）によるレスベラトロル含有組成物の分解を防ぐために機能する。低い酸素透過性を有する市販の不透明なカプセルは、Ｃａｐｓｕｇｅｌ（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，ＳＣ−−ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍ）から入手可能であり、これは、Ｌｉｃａｐｓ（登録商標）の商品名で販売される。   Furthermore, opaque capsules are highly preferred. This can be accomplished by adding a dye (eg, titanium dioxide) to the capsule material formulation. Titanium dioxide is inert and has a high molecular weight, which prevents it from being absorbed into the blood circulation when ingested. Opaque capsules function to prevent degradation of the resveratrol-containing composition by a process of denaturation with light (eg, photooxidation). Commercially available opaque capsules with low oxygen permeability are available from Capsugel (Greenwood, SC--www.capsugel.com), which is sold under the trade name of Licaps®.

生物学的に活性な低分子物質を含有する組成物をカプセル化するのに使用されるシステムは、カプセル部分の周囲に流体気密（空気および液体を通さない）シールを形成しなければならない。特に好ましいカプセル化システムおよびカプセル化プロセスは、ＷＯ ０１／０８６３１Ａ１に開示され、これは、その全体が本明細書中に参考として援用される。このシステムおよび関連するプロセスにおいて、カプセルの頭部分およびカプセルの胴体部分は、充填チャンバー中におかれる。このカプセルの胴体部分は、望ましい投薬量の物質で満たされ、次いでカプセル部分は、頭部分が胴体部分に部分的に重なるように伸縮自在に連結される。溶媒を含む封着液体は、重なる部分（ｓｅｃｔｉｏｎ）の間に形成された隙間に塗布され、そして上記カプセルは、この溶媒を除去し、流体気密シールを形成するために乾燥される。   The system used to encapsulate the composition containing the biologically active small molecule material must form a fluid tight (air and liquid impermeable) seal around the capsule portion. A particularly preferred encapsulation system and encapsulation process is disclosed in WO 01/08631 A1, which is hereby incorporated by reference in its entirety. In this system and associated processes, the capsule head and capsule body portions are placed in a filling chamber. The body portion of the capsule is filled with a desired dosage of material, and then the capsule portion is telescopically connected such that the head portion partially overlaps the body portion. A sealing liquid containing a solvent is applied to the gap formed between the overlapping sections, and the capsule is dried to remove the solvent and form a fluid tight seal.

上記カプセル化プロセスが実質的に酸素を含まない環境中で起こることは、本発明にとって重要である。さらに、このカプセル化プロセスは暗に環境下（実質的に光が存在しない）で行われることが好ましい。上記で説明した通り、低分子（例えば、レスベラトロル）は、光および／または酸素に対する曝露（例えば、酸化プロセスに起因して）によってその生物活性を失う。したがって、この低分子を含有する組成物は、実質的に酸素を含まない環境を有する気密かつ暗い混合チャンバーおよび充填チャンバーを備えるシステムにおいて、混合および／またはカプセル化されるべきである。これは、酸素が除去される封入されたシステムを使用することによって達成され得る。酸素は、吸引を使用して除去されても、このシステム内の酸素を不活性気体で置換して除去されても、またはその組み合わせによって除去されてもよい。例えば、このシステムは、制御された窒素ブランケット（ｂｌａｎｋｅｔ）を使用して酸素がパージされ得る。さらに、このシステムは、カプセル化プロセスの間に窒素フラッシュ（ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｆｌｕｓｈ）を使用することによって、実質的に酸素を含まない環境が保たれる。窒素パージはまた、それぞれ個々のカプセルから酸素を除去するために使用され得る。具体的には、封着する前に、陽圧が、各カプセルに適用されて、窒素によってこのカプセル内に存在する任意の酸素を置換し得る。封着する際に、窒素の気泡は、このカプセル内に残存する。実質的に酸素を含まない環境および光が存在しない環境中でカプセルを充填し得る市販のカプセル化システムは、Ｃａｐｓｕｇｅｌ（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，ＳＣ−−ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍ）から入手可能であり、これは、商品名ＣＰＳ １０００ Ｃａｐｓｕｌｅ Ｆｉｌｌｉｎｇ Ｍａｃｈｉｎｅで販売される。   It is important to the present invention that the encapsulation process occurs in a substantially oxygen free environment. Furthermore, this encapsulation process is preferably performed in the dark (substantially no light). As explained above, small molecules (eg, resveratrol) lose their biological activity upon exposure to light and / or oxygen (eg, due to oxidation processes). Thus, the small molecule-containing composition should be mixed and / or encapsulated in a system comprising an airtight and dark mixing and filling chamber having a substantially oxygen free environment. This can be achieved by using an encapsulated system from which oxygen is removed. The oxygen may be removed using suction, removed by replacing the oxygen in the system with an inert gas, or a combination thereof. For example, the system can be purged of oxygen using a controlled nitrogen blanket. In addition, the system maintains a substantially oxygen free environment by using a nitrogen flush during the encapsulation process. A nitrogen purge can also be used to remove oxygen from each individual capsule. Specifically, prior to sealing, a positive pressure can be applied to each capsule to replace any oxygen present in the capsule with nitrogen. When sealing, nitrogen bubbles remain in the capsule. A commercial encapsulation system that can fill capsules in a substantially oxygen-free environment and in the absence of light is available from Capsugel (Greenwood, SC--www.capsugel.com), which is Sold under the trade name CPS 1000 Capsule Filling Machine.

上記のプロセスは、生物学的に活性な低分子（例えば、レスベラトロル）の経口的に摂取可能な投薬量に適したカプセル化された組成物を生成する。生物学的に活性な低分子を含有する組成物は、１００重量％までの低分子物質を含有し得る。さらに、この組成物は、低分子の生物活性を安定化し、摂取におけるその生物学的な利用能を改善し、そして／またはその吸収および生物学的な障壁の通過を改善するために、添加剤を含み得る。例えば、この組成物は、（１）キレート剤、（２）抗酸化剤、および（３）乳化剤のうちの１つ以上を含有し得る。   The above process produces an encapsulated composition suitable for an orally ingestible dosage of a biologically active small molecule (eg, resveratrol). A composition containing a biologically active small molecule may contain up to 100% by weight of a small molecule substance. Further, the composition may be used to stabilize small molecule biological activity, improve its bioavailability in ingestion, and / or improve its absorption and passage through biological barriers. Can be included. For example, the composition may contain one or more of (1) a chelating agent, (2) an antioxidant, and (3) an emulsifier.

キレート剤（配位子）が添加され、金属誘導性の酸化を防止することによって低分子物質の生物活性をさらに保護し得る。鉄のような金属の存在下において、酸素は、フェノールによって過酸化水素に還元され得る。次に、過酸化水素は、レスベラトロルおよびケルセチンのような低分子を酸化し得る。金属（例えば、鉄）は、特別な酸素転移特性を有し、これは、過酸化水素と結合した場合、より反応性で破壊性の形態である鉄（すなわち、Ｆｅ３＋）を生じる。Ｆｅｎｔｏｎ反応において、第１鉄（Ｆｅ２＋）塩は、過酸化水素と反応して第２鉄（Ｆｅ３＋）塩および高い反応性のヒドロキシルラジカルを生じる。 Chelating agents (ligands) can be added to further protect the biological activity of low molecular weight materials by preventing metal-induced oxidation. In the presence of a metal such as iron, oxygen can be reduced to hydrogen peroxide by phenol. Hydrogen peroxide can then oxidize small molecules such as resveratrol and quercetin. Metals (eg, iron) have special oxygen transfer properties that when combined with hydrogen peroxide yield iron (ie, Fe 3+ ), which is a more reactive and destructive form. In the Fenton reaction, ferrous (Fe 2+ ) salts react with hydrogen peroxide to produce ferric (Fe 3+ ) salts and highly reactive hydroxyl radicals.

したがって、Ｆｅｎｔｏｎ反応を妨げることは、植物の供給源または合成の供給源に由来する低分子（例えば、レスベラトロルおよびケルセチン）の酸化を遮断し得ると考えられる。これは、キレート剤の使用によって達成され得る。例えば、ＮＤＧＡ（ノルジヒドログアヤレト酸：１，４−ビス［３，４−ジヒドロキシフェニル］２，３ジメチルブタン）のような金属配位子は、過酸化水素によるレスベラトロルの酸化に対抗するために機能する。部分的に、ＮＤＧＡは、鉄のより反応性の高い形態（Ｆｅ３＋）を、より反応性の低い形態（Ｆｅ２＋）に変換することによって機能する。Ｐｉｎｔｏら、「Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ Ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ」、Ｊ Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、５１（６）（２００３）、１６５３−１６５７（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。 Thus, it is believed that preventing the Fenton reaction may block the oxidation of small molecules (eg, resveratrol and quercetin) derived from plant sources or synthetic sources. This can be achieved by the use of chelating agents. For example, metal ligands such as NDGA (nordihydroguaiaretic acid: 1,4-bis [3,4-dihydroxyphenyl] 2,3dimethylbutane) counteract the oxidation of resveratrol by hydrogen peroxide. To work. In part, NDGA functions by converting the more reactive form of iron (Fe 3+ ) to the less reactive form (Fe 2+ ). Pinto et al., “Oxidation of Research Catalyzed by Soybean Lipoxygenase”, J Agric. Food Chem. 51 (6) (2003), 1653-1657, which is hereby incorporated by reference in its entirety.

フィチン酸（イノシトール六リン酸とも呼ばれる）は、鉄結合分子であり、これは、代表的にはＮＤＧＡの作用と同様の鉄誘導性の酸化を遮断する能力に起因して食品防腐剤として使用される。同様に、フィチン酸は、Ｆｅｎｔｏｎ反応の出現を妨げない場合、Ｆｅｎｔｏｎ反応の出現を最小化する金属配位子として機能する。Ｇｒａｆら、「Ｐｈｙｔｉｃ Ａｃｉｄ：Ａ Ｎａｔｕｒａｌ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９８７年８月、２６２：１１６４７−１１６５０（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。フィチン酸は、植物の供給源の穀物および種子の全体に由来する天然に得られた物質であり、この供給源としては、トウモロコシ、小麦、米、大豆、ゴマ、およびカラスムギが挙げられる。キレート剤の量は、上記組成物中の金属を十分に結合する限り、特に限定されない。例として、このキレート剤は、約０重量％〜約２５重量％の範囲、より好ましくは約５重量％〜約１５重量％の範囲、そして最も好ましくは約７重量％〜約１０重量％の範囲で存在し得る。   Phytic acid (also called inositol hexaphosphate) is an iron-binding molecule that is typically used as a food preservative due to its ability to block iron-induced oxidation similar to that of NDGA. The Similarly, phytic acid functions as a metal ligand that minimizes the appearance of the Fenton reaction if it does not interfere with the appearance of the Fenton reaction. Graf et al., “Physical Acid: A Natural Antioxidant”, J. Am. Biol. Chem. Aug. 1987, 262: 11647-11650, which is hereby incorporated by reference in its entirety. Phytic acid is a naturally derived substance derived from the whole plant source of grain and seeds, including corn, wheat, rice, soy, sesame, and oats. The amount of the chelating agent is not particularly limited as long as the metal in the composition is sufficiently bonded. By way of example, the chelating agent ranges from about 0% to about 25%, more preferably from about 5% to about 15%, and most preferably from about 7% to about 10% by weight. Can exist in

さらに、抗酸化剤が、上記組成物にさらなる生物活性を提供するだけでなく、酸化によって引き起こされるこの組成物の分解を防ぐために、この組成物に添加され得る。生物系において、酸化の通常のプロセス（電離放射線の小さな寄与を含む）は、反応性の高いフリーラジカルを生成する。これらは、他の分子と容易に反応し得、そして他の分子に損傷を与え得る。いくつかの場合において、身体は、このことを使用して感染に対抗する。他の場合において、その損傷は、身体自身の細胞におよび得る。したがって、抗酸化剤の存在は、フリーラジカルが低分子を損傷すること妨げ得る。例として、この組成物は、フラボノイドのようなフェノール性抗酸化物質を含有し得る。さらなる例としては、この組成物は、ケルセチンのようなフラバノール化合物を含有し得る。酸化防止特性を有することに加えて、ケルセチンは、レスベラトロルの酵素的生物活性と同様の生物活性（サーチュイン酵素の活性化が挙げられる）を示す、植物性低分子ポリフェノールである。ケルセチンはまた、一旦摂取されたレスベラトロルの硫酸化を妨げるように機能する。この組成物中の抗酸化剤の量は、特に限定されない。例としては、この抗酸化剤は、約０重量％〜約５０重量％の範囲、より好ましくは約１５重量％〜約３５重量％の範囲、そして最も好ましくは約２０重量％〜約３０重量％の範囲で存在し得る。   In addition, antioxidants can be added to the composition not only to provide additional biological activity to the composition, but also to prevent degradation of the composition caused by oxidation. In biological systems, the normal process of oxidation (including a small contribution of ionizing radiation) produces highly reactive free radicals. They can easily react with other molecules and damage other molecules. In some cases, the body uses this to combat infection. In other cases, the damage can extend to the body's own cells. Thus, the presence of antioxidants can prevent free radicals from damaging small molecules. As an example, the composition may contain a phenolic antioxidant such as a flavonoid. As a further example, the composition may contain a flavanol compound such as quercetin. In addition to having antioxidant properties, quercetin is a plant low molecular weight polyphenol that exhibits biological activity similar to that of resveratrol, including activation of sirtuin enzymes. Quercetin also functions to prevent sulfation of resveratrol once ingested. The amount of the antioxidant in this composition is not particularly limited. By way of example, the antioxidant is in the range of about 0% to about 50%, more preferably in the range of about 15% to about 35%, and most preferably from about 20% to about 30%. Can exist in the range of

乳化剤は、上記組成物に添加されて、この組成物の生物学的利用能を向上させ得る（すなわち、一旦摂取された上記低分子を吸収および利用する身体の能力を向上させる）。例として、この乳化剤は、レシチン（ホスファチジルコリン）のようなリン脂質を含み得る。この組成物中に存在する乳化剤の量は、好ましくは約０重量％〜５０重量％の範囲の量であり、より好ましくは１５重量％〜４５重量％の量であり、そして最も好ましくは約２５重量％〜約４０重量％の範囲の量である。   Emulsifiers can be added to the composition to improve the bioavailability of the composition (ie, improve the body's ability to absorb and utilize the small molecules once ingested). As an example, the emulsifier may comprise a phospholipid such as lecithin (phosphatidylcholine). The amount of emulsifier present in the composition is preferably in the range of about 0% to 50% by weight, more preferably in the amount of 15% to 45%, and most preferably about 25%. An amount ranging from weight percent to about 40 weight percent.

１種以上の添加物が存在する場合、低分子を含む物質の量は、好ましくは約１重量％〜約７０重量％の範囲であり、より好ましくは約５重量％〜約３０重量％の範囲であり、そして最も好ましくは約１０重量％〜約２０重量％の量である。特定の例としては、標準的な栄養補助カプセル（ｄｉｅｔａｒｙ ｃａｐｓｕｌｅ）において、経口的な消費に使用可能なレスベラトロルの量は、好ましくは約３ｍｇ〜約７０ｍｇの範囲である。上記添加剤は、このカプセルが封着される前に、いつでも低分子を含む物質と混合されてよい。例えば、低分子レスベラトロル物質を含む物質は、抽出され、乾燥され、添加剤と混合され得、次いでカプセル化され得る。あるいは、この添加剤は、低分子を含む物質が、カプセル内に収納される前、または収納された後に、このカプセル内に収納され得る。   When one or more additives are present, the amount of the substance containing small molecules is preferably in the range of about 1 wt% to about 70 wt%, more preferably in the range of about 5 wt% to about 30 wt%. And most preferably in an amount of about 10% to about 20% by weight. As a specific example, in a standard dietary capsule, the amount of resveratrol available for oral consumption is preferably in the range of about 3 mg to about 70 mg. The additive may be mixed with a substance containing small molecules at any time before the capsule is sealed. For example, materials including low molecular resveratrol materials can be extracted, dried, mixed with additives, and then encapsulated. Alternatively, the additive may be stored in the capsule before or after the substance containing the low molecule is stored in the capsule.

上記低分子を含む組成物が一旦カプセル化されると、得られたカプセルは、カプセルが破裂する事象において低分子の分解を防ぐために包装され得る。例えば、このカプセルは、気密区画を備えるブリスター包装中に個別に封入され得る。さらに、このカプセルが気密の真空包装容器（例えば、ボトル）中に、大まかに保存される場合、実質的に酸素を含まない環境は、酸素を吸収する小包を加えることによって、容器内に維持され得、この小胞は、ビン内を、１００万個あたり約１００部未満の遊離酸素の量に維持し得る。好ましくは、使用される任意の小包は、封着される前に窒素でフラッシュされる。   Once the composition comprising the small molecule is encapsulated, the resulting capsule can be packaged to prevent degradation of the small molecule in the event that the capsule ruptures. For example, the capsules can be individually encapsulated in a blister pack with a hermetic compartment. Furthermore, if the capsule is stored roughly in an airtight vacuum packaging container (eg, a bottle), a substantially oxygen free environment is maintained in the container by adding a packet that absorbs oxygen. In turn, the vesicles can maintain an amount of free oxygen below about 100 parts per million in the bottle. Preferably, any parcel used is flushed with nitrogen before being sealed.

本発明は、レスベラトロルのような植物性低分子ポリフェノールを含む組成物中に存在する成分の生物活性を、その成分の分解を防ぐことによって維持する、実用的であり経済的な方法を包含する。具体的には、本発明の組成物およびプロセスは、金属（すなわち、栄養補助サプリメントの処方に天然に見出される金属、またはハーブ抽出物の一部として微量に提供される金属、または処方機械、混合機械およびカプセル化機械の表面上の金属）を酸化することによって引き起こされる酸化を防ぐことによって、この組成物の生物活性を維持すると考えられ、この金属は、この組成物の酸化（損傷）の引き金となるか、またはその酸化を加速させ得、そしてこの成分の生物活性を破壊し得る。このことは、金属誘導性の酸化について問題となる成分をキレート剤の添加により安定化し、そして上記の通り、実質的に酸素を含まない環境における栄養補助サプリメントの取扱いおよびカプセル化を実施することによって、さらに達成される。   The present invention encompasses a practical and economical method of maintaining the biological activity of an ingredient present in a composition comprising a plant low molecular weight polyphenol, such as resveratrol, by preventing degradation of that ingredient. Specifically, the compositions and processes of the present invention can be applied to metals (ie metals found naturally in nutritional supplement formulations, or metals provided in trace amounts as part of herbal extracts, or formulation machines, It is believed to maintain the biological activity of the composition by preventing oxidation caused by oxidizing the metal on the surface of the machine and the encapsulation machine, which triggers oxidation (damage) of the composition Or it can accelerate its oxidation and destroy the biological activity of this component. This is achieved by stabilizing components that are problematic for metal-induced oxidation by the addition of chelating agents and, as described above, by handling and encapsulating the nutritional supplement in a substantially oxygen-free environment. Further achieved.

本発明のカプセル化された組成物中に存在する低分子は、この低分子の通常の寿命の後にかなりの時間、生物活性を維持する。例えば、周囲条件下において、レスベラトロルの半減期は、約１日である。しかし、栄養補助サプリメントの製造および流通において、代表的には、カプセル化後からその組成物が消費者に到達する前に数週間掛かる。本発明の実施形態は、消費者に到達する際に生物学的に活性なままである低分子を含む栄養補助サプリメントを生成する。特に、本発明は、酵素的生物活性を有し得るレスベラトロルを含む栄養補助サプリメントを生成する。好ましくは、この低分子は、カプセル化後、少なくとも約４ヶ月間、より好ましくはカプセル化後、少なくとも約８ヶ月間、そして最も好ましくは少なくとも約１年間またはいつまでも、生物学的に活性なままである。   Small molecules present in the encapsulated compositions of the present invention remain biologically active for a significant amount of time after the normal lifetime of the small molecule. For example, under ambient conditions, resveratrol has a half-life of about 1 day. However, in the production and distribution of nutritional supplements, it typically takes several weeks after encapsulation before the composition reaches the consumer. Embodiments of the present invention produce nutritional supplements that include small molecules that remain biologically active when reaching the consumer. In particular, the present invention produces a dietary supplement comprising resveratrol that may have enzymatic biological activity. Preferably, the small molecule remains biologically active for at least about 4 months after encapsulation, more preferably for at least about 8 months after encapsulation, and most preferably for at least about 1 year or indefinitely. is there.

植物の供給源に由来するか、または合成的に生成される生物学的に活性な低分子、および生物学的に活性な低分子を含む組成物は、種々の健康上の利益を提供する。例えば、生物学的に活性な低分子は、ヒトの「長寿遺伝子（ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ ｇｅｎｅ）」を活性化する酵素活性を有し得る。研究は、ほぼ全ての生物に共有される調節遺伝子のクラスを同定した。これらの遺伝子は、ストレス時期の間（例えば、乾燥または飢餓の間）の生存を向上させるフィードバックシステムとして機能する。一旦活性化されると、これらの長寿遺伝子は、細胞レベルでの防御的変化を誘導する（例えば、不利な環境に身体が適応するのを補助するために代謝を遅らせ、そして細胞の呼吸を増強する）。１つの特定のストレス（生物に提供されるカロリーの制限）は、サーチュイン（デアセチラーゼのファミリー）と称される酵素（またはタンパク質）を活性化することによって多くの種において寿命を延長させる。   Biologically active small molecules, derived from plant sources or produced synthetically, and compositions comprising biologically active small molecules provide various health benefits. For example, a biologically active small molecule can have enzymatic activity that activates a human “longevity gene”. Studies have identified a class of regulatory genes that are shared by almost all organisms. These genes function as a feedback system that improves survival during periods of stress (eg, during drought or starvation). Once activated, these longevity genes induce protective changes at the cellular level (eg slowing metabolism to help the body adapt to adverse environments and enhancing cellular respiration) To do). One particular stress (limitation of calories provided to an organism) extends life span in many species by activating enzymes (or proteins) called sirtuins (a family of deacetylases).

研究は、サーチュイン（サイレントインフォメーション調節酵素（Ｓｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｅｎｚｙｍｅ））が生物（例えば、酵母、回虫、およびショウジョウバエ）において老化の速度を制御するそれらの能力に起因して、長寿遺伝子として働くことを示した。具体的には、ヒトにおけるサーチュイン１と相同的である酵母細胞におけるＳＩＲ２（サイレントインフォメーション調節遺伝子２）が、生物学的なストレス下にある場合に活性化されることを示した。酵母において、老化は、ＳＩＲ２活性に直接関連する。ＳＩＲ２の過剰発現は、ＤＮＡの安定性を増加し、ｒＤＮＡの組換えのサイレンシングおよび抑制を増加し、細胞の修復を促し、そして母−娘細胞の伴複製の周期（ｌｉｆｅｓｐａｎ）を向上させる。   Studies have shown that sirtuins (Silent Information Regulatory Enzymes) act as longevity genes due to their ability to control the rate of senescence in organisms (eg, yeast, roundworm, and Drosophila) It was. Specifically, we have shown that SIR2 (silent information regulatory gene 2) in yeast cells that are homologous to sirtuin 1 in humans is activated when under biological stress. In yeast, senescence is directly related to SIR2 activity. Overexpression of SIR2 increases DNA stability, increases rDNA recombination silencing and repression, promotes cell repair, and improves mother-daughter cell life span.

７種のヒトサーチュインが存在し、これらは、サーチュイン１〜サーチュイン７と名付けられた。核にあるサーチュイン１（ＳＩＲＴ１）は、ＳＩＲ２に対して最も高い相同性を有するヒトサーチュインである。ヒトサーチュインは、細胞を保護し、そして細胞の生存を向上させる保護者酵素（ｇｕａｒｄｉａｎ ｅｎｚｙｍｅ）として働くようである。ＳＩＲＴ１は、例えば、腫瘍の増殖を抑制し、そして細胞死（アポトーシス）を起こさせることに通常関係するｐ５３酵素系を抑制することが示されている。腫瘍抑制遺伝子の活性を阻害することは、ＳＩＲＴ１の阻害が正常に早期老化およびアポトーシスの周期を防ぐことが認識されて初めて、直ちに有益であると見なされ得る。ｐ５３活性を抑制することによって、細胞のＤＮＡが損傷されるか、またはストレスを受ける場合にＳＩＲＴ１は、正常に誘導される早期老化およびアポトーシスの周期を防げ、したがって任意の損傷を修復し、そして必要のない細胞死を防ぐのに十分な時間を細胞に与える。   There are seven human sirtuins, these were named sirtuin 1 to sirtuin 7. Sirtuin 1 (SIRT1) in the nucleus is the human sirtuin with the highest homology to SIR2. Human sirtuins appear to act as guardian enzymes that protect cells and improve cell survival. SIRT1, for example, has been shown to inhibit the p53 enzyme system normally involved in inhibiting tumor growth and causing cell death (apoptosis). Inhibiting the activity of tumor suppressor genes can be considered immediately beneficial only when it is recognized that inhibition of SIRT1 normally prevents the premature aging and apoptosis cycle. By inhibiting p53 activity, SIRT1 prevents normally induced premature aging and apoptotic cycles when cellular DNA is damaged or stressed, thus repairing any damage and necessary Give the cells enough time to prevent cell death without.

インビトロおよびインビボの両方における研究は、レスベラトロルのような低分子がＳＩＲ２を活性化し得ることを実証した。酵母において、レスベラトロルは、ｒＤＮＡの組換えを減少させ、そして寿命を延長させる。このことは、カロリー制限の間に起きる寿命の延長と同様である。さらに、レスベラトロルのような低分子は、ヒト細胞においてＳＩＲＴ１を活性化し、放射線照射によるストレスを受けた細胞の生存率を向上させることが示された。したがって、低分子の生物活性を維持することは、長寿遺伝子（すなわち、サーチュイン酵素ＳＩＲ２およびＳＩＲＴ１）を活性化するために、例えば、上記のプロセスを使用して生成およびカプセル化された組成物を含む、栄養補助サプリメント中に存在する投薬量を可能にする。ヒトにおいて、ＳＩＲＴ１酵素の活性化は、ヒト細胞の生存率を増加し、アポトーシスを抑制する。   Both in vitro and in vivo studies have demonstrated that small molecules such as resveratrol can activate SIR2. In yeast, resveratrol reduces rDNA recombination and extends life span. This is similar to the life extension that occurs during calorie restriction. Furthermore, small molecules such as resveratrol have been shown to activate SIRT1 in human cells and improve the survival rate of cells subjected to radiation-induced stress. Thus, maintaining the biological activity of small molecules includes compositions generated and encapsulated using, for example, the process described above to activate longevity genes (ie, sirtuin enzymes SIR2 and SIRT1) Allows the dosage present in the dietary supplement. In humans, activation of SIRT1 enzyme increases human cell viability and suppresses apoptosis.

低分子を含有するカプセル化された組成物は、栄養補助サプリメントの作製および処方による薬物適用に使用するのに適している。   Encapsulated compositions containing small molecules are suitable for use in making nutritional supplements and applying drugs by formulation.

レスベラトロルの形態の低分子を、ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａおよびｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍからのエタノール抽出によって得た。このエタノールは、除去され、そして得られた抽出物は、約２５％のｖｉｎｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ果皮のレスベラトロルおよび２５％のｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍのレスベラトロルを含有し、この残部は、非レスベラトロル（不活性な植物性物質）を含んだ。この抽出物中のレスベラトロルの生物活性を、ＳＩＲＴ１ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ／Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｋｉｔ ＡＫ−５５５（Ｂｉｏｍｏｌ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．；Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ；ｗｗｗ．ｂｉｏｍｏｌ．ｃｏｍから入手可能）を使用して確認した。この抽出物を、窒素環境中に維持し、そして約２５重量％のケルセチン；３３重量％のレシチン；および９％のフィチン酸（米ぬか抽出物の形態である）を含む混合物に添加した。この組成物の残部は、約３３重量％のレスベラトロル抽出物を含んだ。得られたスラリーを、カプセル充填装置中に配置した。個々の投薬量を、二酸化チタンによって着色したゼラチンカプセル（Ｃａｐｓｕｇｅｌ；Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ、ＳＣ；ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍから入手可能であるＬｉｃａｐｓ（登録商標）カプセル）中にカプセル化した。この投薬量を、絶えず窒素でフラッシュしたカプセル充填装置（Ｃａｐｓｕｇｅｌ；Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ、ＳＣ；ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍから入手可能であるＣａｐｓｕｇｅｌ ＣＦＳ １０００ Ｃａｐｓｕｌｅ Ｆｉｌｌｉｎｇ ａｎｄ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｍａｃｈｉｎｅ）を使用して、実質的に酸素を含まない環境においてカプセル化した。得られたカプセルのそれぞれは、少なくとも１５ｍｇのレスベラトロル、１００ｍｇのレシチン、７５ｍｇのケルセチン、および２５ｍｇのフィチン酸を含んだ。これらのカプセルサンプルを、周囲条件下で約８ヶ月間保存した。このサンプルを、各サンプルがサーチュイン酵素を活性化し得るか否か（特に、このサンプルがＳＩＲＴ１触媒活性を刺激したか否か）を決定することによって生物活性について試験した。このサンプルを、カプセル化後、４ヶ月および８ヶ月にて試験した。試験を、ＳＩＲＴ１ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ／Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｋｉｔ ＡＫ−５５５（Ｂｉｏｍｏｌ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．；Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ；ｗｗｗ．ｂｉｏｍｏｌ．ｃｏｍから入手可能である）を使用して行った。試験において、このサンプル中に含まれたレスベラトロルが、生物学的に活性であり、ＳＩＲＴ１活性を刺激し、レスベラトロルが存在しない場合と比較した酵素活性に対して約８倍までの刺激を生じることを決定した。同様に、ケルセチンの生物活性を試験し、そしてカプセル化されたケルセチンが、生物活性（すなわち、ケルセチンが存在しない場合と比較して、ＳＩＲＴ１活性を刺激する能力）を維持したことを決定した。   Small molecules in the form of resveratrol were obtained by ethanol extraction from vitis vinifera and polygonum cuspidatum. The ethanol is removed and the resulting extract contains about 25% resveratrol of vinis vinifera peel and 25% resveratrol of polygonum cuspidatum, the remainder being non-resveratrol (inactive plant material) Included. The biological activity of resveratrol in this extract was determined from SIRT1 Fluorescent Activity Assay / Drug Discovery Kit AK-555 (Biomol® Research Laboratories, Inc .; available from Plymouth Meeting, PA; w. And confirmed. This extract was maintained in a nitrogen environment and added to a mixture containing about 25% by weight quercetin; 33% by weight lecithin; and 9% phytic acid (in the form of rice bran extract). The remainder of the composition contained about 33% by weight resveratrol extract. The resulting slurry was placed in a capsule filling device. Individual dosages were encapsulated in gelatin capsules colored with titanium dioxide (Capsugel; Greenwood, SC; Licaps® capsules available from www.capsugel.com). This dosage is substantially oxygenated using a capsule filling device (Capsugel; Greenwood, SC; Capsugel CFS 1000 Capsule Filling and Sealing Machine, available from www.capsugel.com). Encapsulated in no environment. Each of the resulting capsules contained at least 15 mg resveratrol, 100 mg lecithin, 75 mg quercetin, and 25 mg phytic acid. These capsule samples were stored for about 8 months under ambient conditions. The samples were tested for biological activity by determining whether each sample could activate a sirtuin enzyme (especially whether this sample stimulated SIRT1 catalytic activity). This sample was tested at 4 and 8 months after encapsulation. The test was conducted using SIRT1 Fluorescent Activity Assay / Drug Discovery Kit AK-555 (available from Biomol® Research Laboratories, Inc .; Plymouth Meeting, PA; www.biomol.com). In testing, resveratrol contained in this sample is biologically active and stimulates SIRT1 activity, producing up to about 8 times stimulation of enzyme activity compared to the absence of resveratrol. Were determined. Similarly, the biological activity of quercetin was tested and it was determined that the encapsulated quercetin maintained biological activity (ie, the ability to stimulate SIRT1 activity compared to the absence of quercetin).

本発明は、最大の生物活性（サーチュイン酵素を活性化する能力を有することが挙げられる）を製造し、そして、植物性ポリフェノールおよび他の栄養補助サプリメント成分の構造的形態を、分解（例えば、酸化を介する）に対して保護する複数の方法からなり、これらの方法としては、未加工の物質の製造およびそのカプセル中への配置が挙げられるが、これらに限定されない。上記の方法は、研究用等級のレスベラトロルまたは封着されたワインボトル中に存在するようなレスベラトロルにおいて得られる特性と同様の特性を有する、濃縮されたレスベラトロルを含有するカプセル化された組成物を、経済的に生成する。本発明は、栄養補助サプリメントとして摂取され得るカプセル化された処方物を製造するのに有用である。   The present invention produces maximal biological activity, which may include the ability to activate sirtuin enzymes, and degrades structural forms of plant polyphenols and other nutritional supplement components (eg, oxidation) Which include, but are not limited to, the production of raw materials and their placement in capsules. The above method produces an encapsulated composition containing concentrated resveratrol having properties similar to those obtained in research grade resveratrol or resveratrol as present in sealed wine bottles. Generate economically. The present invention is useful for producing encapsulated formulations that can be taken as a dietary supplement.

本発明が詳細に、かつ本発明の特定の実施形態への参照と共に記載される一方で、種々の変更および改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われ得ることは、当業者に明らかとなる。例えば、上記カプセルは、任意の形状および大きさであり得、このカプセルから組成物を除去し得るように、破壊可能にされ得る。さらに、このカプセル材料は、低い酸素透過度を有する任意の物質を含み得る。さらに、低分子を含有する組成物は、乾燥粉末、液体懸濁物、ゲル、またはスラリーとして存在し得る。さらに、この処方物は、添加物が、低分子を含む物質の生物活性または生物学的利用能を低下させない限り、栄養補助サプリメントの処方に適した他の添加剤、充填剤などを含み得る。さらに、酵素活性（サーチュインの触媒活性を刺激することが挙げられる）を有し得る他の低分子ポリフェノールは、上記のプロセスを使用してカプセル化され得、この低分子ポリフェノールとしては、ケルセチン、フィセチン、ブテイン、ピセアトノールおよびイソリキリチゲニンが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、本発明が、添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内にある本発明の改変および変化物を網羅することを意図される。   While the invention has been described in detail and with reference to specific embodiments of the invention, it will be appreciated by those skilled in the art that various changes and modifications can be made without departing from the spirit and scope of the invention. Becomes clear. For example, the capsule can be of any shape and size and can be made breakable so that the composition can be removed from the capsule. In addition, the encapsulant material can include any material having a low oxygen permeability. In addition, compositions containing small molecules can exist as dry powders, liquid suspensions, gels, or slurries. In addition, the formulation may include other additives, fillers, and the like that are suitable for nutritional supplement formulations, as long as the additive does not reduce the bioactivity or bioavailability of the substance containing the small molecule. In addition, other low molecular weight polyphenols that may have enzymatic activity (including stimulating the catalytic activity of sirtuins) can be encapsulated using the above process, including low molecular weight polyphenols such as quercetin, fisetin , Butein, piceatonol, and isoliquiritigenin. Thus, it is intended that the present invention cover the modifications and variations of this invention that come within the scope of the appended claims and their equivalents.

Claims (28)

組成物をカプセル化するプロセスであって、以下：
（ａ）生物学的に活性な低分子を含む物質を得る工程；および
（ｂ）実質的に酸素を含まない環境において生物学的に活性な低分子をカプセル化する工程、
を包含する、プロセス。 A process for encapsulating a composition comprising:
(A) obtaining a substance comprising a biologically active small molecule; and (b) encapsulating the biologically active small molecule in a substantially oxygen free environment;
Including the process. 前記生物学的に活性な低分子が、レスベラトロルを含む、請求項１に記載のプロセス。 The process of claim 1, wherein the biologically active small molecule comprises resveratrol. 請求項２に記載のプロセスであって、（ｃ）キレート剤、抗酸化剤、および乳化剤のうちの少なくとも１つと前記レスベラトロルとを混合する工程をさらに包含する、プロセス。 3. The process of claim 2, further comprising (c) mixing the resveratrol with at least one of a chelating agent, an antioxidant, and an emulsifier. 請求項２に記載のプロセスであって、ここで工程（ａ）が、以下：
（ａ．１）前記レスベラトロルを抽出するために溶媒を使用する工程であって、ここで該溶媒としては、水性溶媒、有機溶媒、およびそれらの混合物が挙げられる、工程、
を包含する、プロセス。 3. A process according to claim 2, wherein step (a) comprises:
(A.1) using a solvent to extract the resveratrol, wherein the solvent includes an aqueous solvent, an organic solvent, and mixtures thereof,
Including the process. 請求項２に記載のプロセスであって、ここで工程（ｂ）が、以下：
（ｂ．１）気密充填チャンバー中に頭部分および胴体部分を備えるカプセルを受容させる工程；
（ｂ．２）生物学的に活性なレスベラトロルを含有する組成物で該胴体部分を少なくとも部分的に満たす工程；
（ｂ．３）該頭部分を、該頭部分の位置が少なくとも部分的に重なるように該胴体部分に対して位置決めする工程；および
（ｂ．４）該重なる部分に沿って流体気密シールを形成する工程、
を包含する、プロセス。 3. A process according to claim 2, wherein step (b) comprises the following:
(B.1) receiving a capsule comprising a head portion and a torso portion in an airtight filling chamber;
(B.2) at least partially filling the torso portion with a composition containing biologically active resveratrol;
(B.3) positioning the head portion relative to the body portion such that the position of the head portion at least partially overlaps; and (b.4) forming a fluid tight seal along the overlapping portions. The process of
Including the process. 前記カプセル部分が、１００μｍについて約１６５ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過度（ＡＳＴＭ Ｄ３９８５で測定した場合）を有する物質を含む、請求項５に記載のプロセス。 6. The process of claim 5, wherein the capsule portion comprises a material having an oxygen transmission rate (as measured by ASTM D3985) of less than about 165 cm < 3 > / m < 2 > / day for 100 [mu] m. 前記カプセル部分が、１００μｍについて約４ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過度（ＡＳＴＭ Ｄ３９８５で測定した場合）を有する物質を含む、請求項５に記載のプロセス。 6. The process of claim 5, wherein the capsule portion comprises a material having an oxygen permeability (as measured by ASTM D3985) of less than about 4 cm < 3 > / m < 2 > / day for 100 [mu] m. 前記カプセル部分が、１００μｍについて約１ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過度（ＡＳＴＭ Ｄ３９８５で測定した場合）を有する物質を含む、請求項５に記載のプロセス。 6. The process of claim 5, wherein the capsule portion comprises a material having an oxygen permeability (as measured by ASTM D3985) of less than about 1 cm < 3 > / m < 2 > / day for 100 [mu] m. 前記カプセル部分が、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびデンプンのうちの少なくとも１つを含有する、請求項５に記載のプロセス。 6. The process of claim 5, wherein the capsule portion contains at least one of gelatin, hydroxypropyl methylcellulose, and starch. 請求項５に記載のプロセスであって、ここで工程（ｂ）が、以下：
（ｂ．５）前記実質的に酸素を含まない環境を形成するために、前記充填チャンバー内に窒素ブランケットを形成する工程、
をさらに包含する、プロセス。 The process according to claim 5, wherein step (b) comprises:
(B.5) forming a nitrogen blanket in the filling chamber to form the substantially oxygen free environment;
Further encompassing the process. 請求項４に記載のプロセスであって、ここで工程（ｂ）が、以下：
（ｂ．６）前記封着する工程の前に、前記カプセル内に窒素の気泡を形成する工程、
をさらに包含する、プロセス。 5. A process according to claim 4, wherein step (b) comprises:
(B.6) a step of forming nitrogen bubbles in the capsule before the sealing step;
Further encompassing the process. 請求項２に記載のプロセスであって、ここで工程（ａ）が、以下：
（ａ．１）Ｖｉｎｉｓ ＶｉｎｉｆｅｒａおよびＰｏｌｙｇｏｎｕｍからなる群より選択される天然の供給源から前記レスベラトロルを得る工程、
をさらに包含する、プロセス。 3. A process according to claim 2, wherein step (a) comprises:
(A.1) obtaining said resveratrol from a natural source selected from the group consisting of Vinis Vinifera and Polygonum;
Further encompassing the process. 生物学的に活性な低分子、キレート剤、抗酸化剤、および乳化剤を含有するカプセル化された組成物であって、ここで該低分子が、実質的に酸素を含まない環境においてカプセル化される、組成物。 An encapsulated composition comprising a biologically active small molecule, a chelating agent, an antioxidant, and an emulsifier, wherein the small molecule is encapsulated in a substantially oxygen free environment. The composition. 前記生物学的に活性な低分子が、レスベラトロルを含む、請求項１３に記載のカプセル化された組成物。 14. The encapsulated composition of claim 13, wherein the biologically active small molecule comprises resveratrol. 請求項１４に記載のカプセル化された組成物であって、以下：
前記キレート剤が、約５重量％〜約１５重量％の量で存在し、
前記抗酸化剤が、約１５重量％〜約３５重量％の量で存在し、
前記乳化剤が、約１５重量％〜約４５重量％の量で存在し、そして
前記レスベラトロルが、約５重量％〜約３０重量％の量で存在する、組成物。 15. An encapsulated composition according to claim 14, wherein:
The chelating agent is present in an amount of about 5 wt% to about 15 wt%;
The antioxidant is present in an amount of from about 15% to about 35% by weight;
The composition wherein the emulsifier is present in an amount from about 15 wt% to about 45 wt% and the resveratrol is present in an amount from about 5 wt% to about 30 wt%. 請求項１４に記載のカプセル化された組成物であって、以下：
前記キレート剤が、約７重量％〜約１０重量％の量で存在し、
前記抗酸化剤が、約２０重量％〜約３０重量％の量で存在し、
前記乳化剤が、約２５重量％〜約４０重量％の量で存在し、そして
前記レスベラトロルが、約１０重量％〜約２０重量％の量で存在する、組成物。 15. An encapsulated composition according to claim 14, wherein:
The chelating agent is present in an amount of about 7 wt% to about 10 wt%;
The antioxidant is present in an amount of from about 20% to about 30% by weight;
The composition wherein the emulsifier is present in an amount from about 25% to about 40% by weight and the resveratrol is present in an amount from about 10% to about 20% by weight. 前記キレート剤が、レスベラトロルの金属誘導性の酸化を遮断し得る化合物を含む、請求項１４に記載のカプセル化された組成物。 The encapsulated composition of claim 14, wherein the chelator comprises a compound capable of blocking the metal-induced oxidation of resveratrol. 前記キレート剤が、フィチン酸およびＮＤＧＡのうちの少なくとも１つを含む、請求項１７に記載のカプセル化された組成物。 The encapsulated composition of claim 17, wherein the chelator comprises at least one of phytic acid and NDGA. 前記抗酸化剤が、フェノール性抗酸化剤を含む、請求項１４に記載のカプセル化された組成物。 The encapsulated composition of claim 14, wherein the antioxidant comprises a phenolic antioxidant. 前記フェノール性抗酸化剤が、ケルセチンを含む、請求項１９に記載のカプセル化された組成物。 20. The encapsulated composition of claim 19, wherein the phenolic antioxidant comprises quercetin. 前記乳化剤が、レシチン（ホスファチジルコリン）を含む、請求項１４に記載のカプセル化された組成物。 The encapsulated composition of claim 14, wherein the emulsifier comprises lecithin (phosphatidylcholine). 前記レスベラトロルが、天然の供給源に由来する、請求項１４に記載のカプセル化された組成物。 The encapsulated composition of claim 14, wherein the resveratrol is derived from a natural source. 前記生物活性が、サーチュイン１酵素の活性化を含む、請求項１４に記載のカプセル化された組成物。 The encapsulated composition of claim 14, wherein the biological activity comprises activation of a sirtuin 1 enzyme. 栄養補助サプリメントであって、以下
（ａ）生物学的に活性なレスベラトロル物質を得るプロセス；
（ｂ）実質的に酸素を含まない環境を備える充填チャンバー中に頭部分および胴体部分を備えるカプセルを受容させるプロセス；
（ｃ）該生物学的に活性なレスベラトロル物質で該胴体部分を少なくとも部分的に満たすプロセス；
（ｄ）該頭部分を、該頭部分の位置が少なくとも部分的に重なるように該胴体部分に対して位置決めするプロセス；および
（ｅ）該重なる部分に沿って流体気密シールを形成するプロセス、
によって生成される、栄養補助サプリメント。 A nutritional supplement comprising: (a) a process for obtaining a biologically active resveratrol substance;
(B) receiving a capsule comprising a head portion and a torso portion in a filling chamber comprising a substantially oxygen free environment;
(C) a process of at least partially filling the torso portion with the biologically active resveratrol material;
(D) positioning the head portion relative to the body portion such that the position of the head portion at least partially overlaps; and (e) forming a fluid tight seal along the overlapping portions;
A nutritional supplement produced by. 生物学的に活性な形態のレスベラトロルを含有するカプセル化された組成物を含む栄養補助サプリメントであって、ここで該レスベラトロルが、カプセル化後に少なくとも４ヶ月間、生物活性を維持する、栄養補助サプリメント。 A nutritional supplement comprising an encapsulated composition containing a biologically active form of resveratrol, wherein the resveratrol maintains biological activity for at least 4 months after encapsulation . 前記生物活性が、サーチュイン１酵素活性を刺激することを含む、請求項２５に記載の栄養補助サプリメント。 26. The nutritional supplement of claim 25, wherein the biological activity comprises stimulating sirtuin 1 enzyme activity. 生物学的に活性な低分子、ならびにキレート剤、抗酸化剤、および乳化剤のうちの少なくとも１つを含有するカプセル化された組成物であって、ここで該低分子が、細胞壁を通過し、細胞核に進入し、そして該核内にある遺伝子制御された酵素を変化させ得る、組成物。 An encapsulated composition comprising a biologically active small molecule and at least one of a chelating agent, an antioxidant, and an emulsifier, wherein the small molecule passes through the cell wall; A composition capable of entering a cell nucleus and altering a gene-regulated enzyme within the nucleus. 前記遺伝子制御された酵素が、サーチュイン１酵素である、請求項２７に記載のカプセル化された組成物。 28. The encapsulated composition of claim 27, wherein the gene regulated enzyme is a sirtuin 1 enzyme.
JP2007507358A 2004-04-07 2005-03-28 Nutritional supplements and methods for processing them Expired - Fee Related JP4963670B2 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US55995504P 2004-04-07 2004-04-07
US60/559,955 2004-04-07
PCT/US2005/010466 WO2005099761A1 (en) 2004-04-07 2005-03-28 Dietary supplement and method of processing same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2007532543A true JP2007532543A (en) 2007-11-15
JP4963670B2 JP4963670B2 (en) 2012-06-27

Family

ID=35149781

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2007507358A Expired - Fee Related JP4963670B2 (en) 2004-04-07 2005-03-28 Nutritional supplements and methods for processing them

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP1735004A4 (en)
JP (1) JP4963670B2 (en)
KR (1) KR101213141B1 (en)
CN (1) CN1956733B (en)
WO (1) WO2005099761A1 (en)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009528028A (en) * 2006-02-24 2009-08-06 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． Use of resveratrol and its derivatives to promote health status in mammals
JP2011529690A (en) * 2008-07-31 2011-12-15 シャクリー コーポレーション Muscadine composition having improved antioxidant activity
JP2013051917A (en) * 2011-09-05 2013-03-21 Yamada Bee Farm Corp Trans-resveratrol containing composition
JP2014224050A (en) * 2013-05-14 2014-12-04 森永製菓株式会社 Piceatannol solution, and method of stabilizing piceatannol solution
JP2014224049A (en) * 2013-05-14 2014-12-04 森永製菓株式会社 Method of stabilizing stilbene included in plant extract or its solution, and plant extract containing stilbene or its solution
JP2016519708A (en) * 2013-04-10 2016-07-07 ミメディクス グループ インコーポレイテッド NDGA polymer and metal complex thereof
JP2016530217A (en) * 2013-05-28 2016-09-29 ミメディクス グループ インコーポレイテッド Polymer-chelator complex

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006269459B2 (en) * 2005-07-07 2013-02-07 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Methods and related compositions for treating or preventing obesity, insulin resistance disorders, and mitochondrial-associated disorders
DE202007019029U1 (en) * 2007-03-09 2010-04-15 Wilhelm, Hermann-Josef Basic material from a plant
WO2009039195A1 (en) * 2007-09-20 2009-03-26 Resveratrol Partners, Llc Resveratrol-containing compositions for modulating gene product concentration or activity
WO2009082459A2 (en) * 2007-12-24 2009-07-02 Natrol, Inc. Anti-aging composition containing resveratrol and method of administration
DE102008035285A1 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Hermann-Josef Wilhelm Extraction of active substances from group of anthraquinone and phenols and/or polyphenols from a plant, where new plant variety Igniscum (CPVO 2007/0149) or Candy (CPVO 2007/1958) registered to variety protection is requisitioned as plant
CN103623135B (en) 2008-07-31 2015-12-09 嘉康利公司 The preparation method of Vitis rotundifolia pomace extract
US9132162B2 (en) 2008-07-31 2015-09-15 Shaklee Corporation Muscadine compositions with anti-oxidant activity
US9173916B2 (en) 2008-07-31 2015-11-03 Shaklee Corporation Method of preparing a muscadine pomace extract
TWI484918B (en) * 2008-07-31 2015-05-21 Shaklee Corp Method of preparing a muscadine pomace extract
DE102008037337A1 (en) * 2008-08-11 2010-02-25 Hermann-Josef Wilhelm Process for the preparation of active substances, in particular phenols from a plant
WO2013074948A1 (en) 2011-11-16 2013-05-23 Resveratrol Partners, Llc Compositions containing resveratrol and nucleotides
CA3031093A1 (en) 2016-07-19 2018-01-25 Shaklee Corporation Muscadine topical composition with low content of condensed tannin molecules
KR101990060B1 (en) 2017-07-21 2019-09-30 주식회사 송이산업 Method for preparation of resveratrol nano-capsue and the nano-capsule therefrom

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01157911A (en) * 1987-12-11 1989-06-21 Fuso Yakuhin Kogyo Kk Light shielding capsule pharmaceutical
WO1999002158A1 (en) * 1997-07-11 1999-01-21 Toray Industries, Inc. Stable medicinal compositions containing 4,5-epoxymorphinane derivatives
US6190716B1 (en) * 1999-02-17 2001-02-20 Scott O. Galbreath, Jr. Method for preparing a grape derived product
JP2001506579A (en) * 1996-09-20 2001-05-22 ザ・ハワード・ファウンデイション Supplement containing flavonols
JP2001519791A (en) * 1997-04-08 2001-10-23 デーアール． ヴィルマー シュヴァーベ ゲーエムベーハー ウント コー． Stable extract of Hypericum perforatum, its preparation method and its pharmaceutical composition
WO2003013566A1 (en) * 2001-08-03 2003-02-20 Shaklee Corporation High molecular weight, lipophilic, orally ingestible bioactive agents in formulations having improved bioavailability
JP2003119127A (en) * 2001-10-10 2003-04-23 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Stable preparation of reduced coenzyme q
JP2003517831A (en) * 1999-12-22 2003-06-03 バルケム コーポレイション Sensitive substance encapsulation

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4963385A (en) * 1989-06-02 1990-10-16 Nabisco Brands, Inc. Stabilized emulsions containing highly unsaturated oils
US6184248B1 (en) * 1996-09-05 2001-02-06 Robert K. K. Lee Compositions and methods for treatment of neurological disorders and neurodegenerative diseases
US20030133945A1 (en) * 2002-01-11 2003-07-17 Farley Michael Donald Natural food supplement
EP1499303A4 (en) * 2002-04-10 2007-07-25 Fred H Miller Multi-phase, multi-compartment capsular system
CA2499423A1 (en) * 2002-09-04 2004-03-18 Niraj Vasisht Microencapsulation of oxygen or water sensitive materials
EP1633208A1 (en) * 2003-05-27 2006-03-15 DSM IP Assets B.V. Novel nutraceutical compositions and use thereof

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01157911A (en) * 1987-12-11 1989-06-21 Fuso Yakuhin Kogyo Kk Light shielding capsule pharmaceutical
JP2001506579A (en) * 1996-09-20 2001-05-22 ザ・ハワード・ファウンデイション Supplement containing flavonols
JP2001519791A (en) * 1997-04-08 2001-10-23 デーアール． ヴィルマー シュヴァーベ ゲーエムベーハー ウント コー． Stable extract of Hypericum perforatum, its preparation method and its pharmaceutical composition
WO1999002158A1 (en) * 1997-07-11 1999-01-21 Toray Industries, Inc. Stable medicinal compositions containing 4,5-epoxymorphinane derivatives
US6190716B1 (en) * 1999-02-17 2001-02-20 Scott O. Galbreath, Jr. Method for preparing a grape derived product
JP2003517831A (en) * 1999-12-22 2003-06-03 バルケム コーポレイション Sensitive substance encapsulation
WO2003013566A1 (en) * 2001-08-03 2003-02-20 Shaklee Corporation High molecular weight, lipophilic, orally ingestible bioactive agents in formulations having improved bioavailability
JP2003119127A (en) * 2001-10-10 2003-04-23 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Stable preparation of reduced coenzyme q

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009528028A (en) * 2006-02-24 2009-08-06 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． Use of resveratrol and its derivatives to promote health status in mammals
JP2011529690A (en) * 2008-07-31 2011-12-15 シャクリー コーポレーション Muscadine composition having improved antioxidant activity
JP2014205679A (en) * 2008-07-31 2014-10-30 シャクリー コーポレーション Muscadine compositions having improved antioxidant activity
JP2013051917A (en) * 2011-09-05 2013-03-21 Yamada Bee Farm Corp Trans-resveratrol containing composition
JP2016519708A (en) * 2013-04-10 2016-07-07 ミメディクス グループ インコーポレイテッド NDGA polymer and metal complex thereof
JP2014224050A (en) * 2013-05-14 2014-12-04 森永製菓株式会社 Piceatannol solution, and method of stabilizing piceatannol solution
JP2014224049A (en) * 2013-05-14 2014-12-04 森永製菓株式会社 Method of stabilizing stilbene included in plant extract or its solution, and plant extract containing stilbene or its solution
JP2016530217A (en) * 2013-05-28 2016-09-29 ミメディクス グループ インコーポレイテッド Polymer-chelator complex

Also Published As

Publication number Publication date
KR101213141B1 (en) 2012-12-17
EP1735004A1 (en) 2006-12-27
EP1735004A4 (en) 2011-11-09
WO2005099761A1 (en) 2005-10-27
CN1956733A (en) 2007-05-02
JP4963670B2 (en) 2012-06-27
CN1956733B (en) 2012-10-10
KR20070041427A (en) 2007-04-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4963670B2 (en) Nutritional supplements and methods for processing them
US20050158376A1 (en) Dietary supplement and method of processing same
Martinez-Medina et al. Bio-funcional components in mushrooms, a health opportunity: Ergothionine and huitlacohe as recent trends
Rupasinghe et al. The potential health benefits of haskap (Lonicera caerulea L.): Role of cyanidin-3-O-glucoside
Murcia et al. Antioxidant activity of edible fungi (truffles and mushrooms): losses during industrial processing
Muthukumaran et al. Protective effect of quercetin on nicotine-induced prooxidant and antioxidant imbalance and DNA damage in Wistar rats
Shabir et al. Promising bioactive properties of quercetin for potential food applications and health benefits: A review
KR101563528B1 (en) All natural multivitamin and multimineral dietary supplement formulations for enhanced absorption and biological utilization
Que et al. In vitro and vivo antioxidant activities of daylily flowers and the involvement of phenolic compounds
CN110946996A (en) Composition comprising glucoraphanin and use thereof
Saada et al. Grape seed extract Vitis vinifera protects against radiation‐induced oxidative damage and metabolic disorders in rats
JP2008535787A (en) Methods and compositions for modified release of nutritional supplements
Pannangrong et al. Purple rice berry is neuroprotective and enhances cognition in a rat model of Alzheimer's disease
Targhi et al. Radio protective effect of black mulberry extract on radiation-induced damage in bone marrow cells and liver in the rat
CN108208417A (en) Pet anti-oxidant nutritional agents and preparation method thereof
Mirunalini et al. Antioxidant potential and current cultivation aspects of an edible milky mushroom-Calocybe indica
Adetuyi et al. Banana peel as a source of nutraceuticals
Guo et al. Antioxidant and antidiabetic activities of Ulmus davidiana extracts
Abdelaleem et al. Modulatory role of selenium nanoparticles and grape seed extract mixture on oxidative stress biomarkers in diabetic irradiated rats
JP2006298887A (en) Active oxygen-removing agent, skin elasticity-retaining agent, anti-oxidizing action auxiliary
Sen et al. Antioxidant supplements: friend or foe?
Mandal et al. Targeting Oxidative Stress in Cancer: Opportunity for Natural and Synthetic Compounds, and Cancer Stem Cell Therapy
Olimova et al. BIOLOGICAL ACTIVITIES OF QUERCETIN AND DIHYDROQUERCETIN FLAVONOIDS
Muztaba et al. CoQ10: A miraculous and clinically vital coenzyme for normal body functions, prevention and treatment of diseases
Sudjaroen Plant-derived phenolic antioxidants and cancer prevention

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20080324

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20110609

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20110908

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20120323

A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20120326

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150406

Year of fee payment: 3

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees